JP4969920B2 - カルシウム測定試薬及び測定方法 - Google Patents
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基R1がヌクレオシド残基である場合、nの数は2以上であり、好ましくは3である。
ナフタレンジスルホン酸系キレート発色剤としてアルセナゾ−IIIを用いる場合、アルセナゾ−IIIの濃度は、カルシウムとの反応時の濃度として、好ましくは0.005〜1mmol/Lであり、より好ましくは0.01〜0.5mmol/Lである。
例えば、一般式(I)で表される化合物又はその塩としてATPを用いる場合には、カルシウムとナフタレンジスルホン酸系キレート発色剤との反応時の濃度として、好ましくは0.001%〜1.0%であり、より好ましくは0.01%〜0.5%である。
例えば、一般式(I)で表される化合物又はその塩としてピロリン酸を用いる場合には、カルシウムとナフタレンジスルホン酸系キレート発色剤との反応時の濃度として、好ましくは0.005%〜1.0%であり、より好ましくは0.01%〜0.5%である。
例えば、一般式(I)で表される化合物又はその塩としてトリポリリン酸を用いる場合には、カルシウムとナフタレンジスルホン酸系キレート発色剤との反応時の濃度として、好ましくは0.0005%〜1.0%であり、より好ましくは0.002%〜0.5%である。
例えば、一般式(I)で表される化合物又はその塩としてポリリン酸を用いる場合には、カルシウムとナフタレンジスルホン酸系キレート発色剤との反応時の濃度として、好ましくは0.0005%〜1.0%であり、より好ましくは0.001%〜0.5%である。
本実施例では、キレート発色剤としてクロロホスホナゾ−IIIを使用し、一般式(I)で表される化合物として、ADP、ATP、ピロリン酸、トリポリリン酸、ポリリン酸(n=4〜11)を下記試薬中に添加し、下記試料に含有されるカルシウム又はマグネシウムをそれぞれ測定した。なお、比較例として、カルシウムを測定する場合に一般的なキレート剤として使用されている8−ヒドロキシキノリンの効果も検討した。
カルシウム10mg/dLを含む試料(カルシウム濃度として10mg/dLとなるように、塩化カルシウム2水和物を蒸留水に溶解して調製した試料。以下、「Ca STD」と称する)
マグネシウム3mg/dLを含む試料(マグネシウム濃度として3mg/dLとなるように、塩化マグネシウム6水和物を蒸留水に溶解して調製した試料。以下、「Mg STD」と称する)
試薬
グッド緩衝液ACES(株式会社 同仁化学研究所) 50mmol/L,pH6.5
クロロホスホナゾ−III(Na塩;株式会社 同仁化学研究所) 20μmol/L
ADP濃度
[% (×1/1000)] 10 20 50 100 200 500
Ca STD 4346 4459 4118 3985 3585 2695
Mg STD 636 498 260 128 69 10
ATP濃度
[% (×1/1000)] 10 20 50 100 200 500
Ca STD 4198 3991 3492 2805 2007 1062
Mg STD 192 83 0 -31 -39 -28
ピロリン酸濃度
[% (×1/1000)] 10 20 50 100 200 500
Ca STD 4389 4332 4042 3278 2580 1518
Mg STD 335 158 48 2 -21 -16
トリポリリン酸濃度
[% (×1/1000)] 1 2 5 10 20 50 100 200 500
Ca STD 4414 4414 4315 4039 3673 2731 1738 1096 524
Mg STD 537 304 123 2 -7 -35 -65 -64 -32
ポリリン酸濃度
[% (×1/1000)] 1 2 5 10 20 50 100 200 500
Ca STD 4435 4496 4365 4063 3640 2790 1749 1089 503
Mg STD 521 294 116 24 -7 -47 -23 -43 -27
8−ヒドロキシキノリン濃度
[% (×1/1000)] 10 20
Ca STD 3901 3791
Mg STD 344 314
本実施例の条件下においてATPを用いる場合、その好適濃度は、好ましくは0.01〜1.0%であり、より好ましくは0.05〜0.5%であった。
本実施例の条件下においてピロリン酸を用いる場合、その好適濃度は、好ましくは0.01〜1.0%であり、より好ましくは0.05〜0.5%であった。
本実施例の条件下においてトリポリリン酸を用いる場合、その好適濃度は、好ましくは0.002〜1.0%であり、より好ましくは0.005〜0.5%であった。
本実施例の条件下においてポリリン酸を用いる場合、その好適濃度は、好ましくは0.002〜1.0%であり、より好ましくは0.005〜0.5%であった。
試薬として下記試薬を用いること以外は、実施例1の操作を繰り返した。
試薬
グッド緩衝液EPPS(株式会社 同仁化学研究所) 50mmol/L,pH8.0
アルセナゾ−III(酸型;株式会社 同仁化学研究所) 20μmol/L
ADP濃度
[% (×1/1000)] 10 20 50 100 200 500
Ca STD 4514 4240 3530 2703 1844 831
Mg STD 213 138 68 37 17 0
ATP濃度
[% (×1/1000)] 10 20 50 100 200 500
Ca STD 2555 1683 793 395 194 77
Mg STD 35 7 0 -6 -1 -2
ピロリン酸濃度
[% (×1/1000)] 10 20 50 100 200 500
Ca STD 2206 1194 412 190 89 29
Mg STD 36 -1 -4 -10 -10 -5
トリポリリン酸濃度
[% (×1/1000)]
0.1 0.2 0.5 1 2 5 10 20 50 100 200 500
Ca STD 3806 3651 3509 3072 2285 995 736 284 120 45 17 8
Mg STD 250 264 300 237 105 20 -2 -3 2 -3 -9 -2
ポリリン酸濃度
[% (×1/1000)] 0.1 0.2 0.5 1 2 5 10
Ca STD 3692 3490 2818 1888 998 366 179
Mg STD 284 306 176 68 15 3 -1
8−ヒドロキシキノリン濃度
[% (×1/1000)] 10 20 50 100
Ca STD 5083 5067 5068 4788
Mg STD 349 314 230 121
本実施例の条件下においてATPを用いる場合、その好適濃度は、好ましくは0.005〜0.1%であり、より好ましくは0.01〜0.05%であった。
本実施例の条件下においてピロリン酸を用いる場合、その好適濃度は、好ましくは0.005〜0.1%であり、より好ましくは0.01〜0.05%であった。
本実施例の条件下においてトリポリリン酸を用いる場合、その好適濃度は、好ましくは0.0005〜0.1%であり、より好ましくは0.01〜0.05%であった。
本実施例の条件下においてポリリン酸を用いる場合、その好適濃度は、好ましくは0.0005〜0.002%であり、より好ましくは0.001〜0.005%であった。
一般式(I)で表される化合物としてADPを用いること、そして、試薬として下記試薬を用いること以外は、実施例1の操作を繰り返した。
試薬
2−アミノエタノール 1.5mol/L
ほう酸 0.1mmol/L
pH11.0
o−CPC(株式会社 同仁化学研究所) 0.1mmol/L
ADP濃度
[% (×1/1000)] 10 20 50 100 200 500
Ca STD 4538 4508 4383 4230 3970 3620
Mg STD 588 570 579 571 563 583
一般式(I)で表される各化合物の濃度を、ATPで0.05%、ピロリン酸で0.1%、トリポリリン酸で0.01%、ポリリン酸で0.01%、8−ヒドロキシキノリンで0.1%としたこと、そして、試薬のpHを5段階(pH5.5、pH6.0、pH6.5、pH7.0、pH7.5)としたことを除き、実施例1の操作を繰り返した。
ATP、ピロリン酸、トリポリリン酸、ポリリン酸を添加した場合、pH5.5〜pH7.5のいずれのpHでも、マグネシウムの反応を抑え、かつカルシウムを測定することができることが判明した。また、これらの化合物を添加しなかったり、従来、一般的にマグネシウムのキレート剤として使用されている8−ヒドロキシキノリンを用いてもマグネシウムの反応を完全に抑えることができないことが確認された。
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