JP5589103B2 - 二価金属イオン含有の体外診断用試薬組成物および二価金属イオン由来金属化合物の沈殿防止方法 - Google Patents
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Description
[1]少なくとも検体と試薬と洗浄液とを注入及び排出する分析装置に適用する二価金属イオンを含有する体外診断用試薬組成物であって、前記二価金属イオンがマグネシウムイオン又はカルシウムイオンであり、更にCH(OH)CH(OH)COOH基を有する化合物又はその塩を含有する、前記体外診断用試薬組成物。
[2]トリグリセライド、グルコース、ヘモグロビンA1c、クレアチンキナーゼ(CK)活性、CK−MB活性、HDL−コレステロール、ヘモグロビンA1c、又はアミラーゼ活性を測定することのできる、[1]の体外診断用試薬組成物。
[3]少なくとも検体と二価金属イオン含有試薬と洗浄液とを注入及び排出する分析装置に適用して、前記二価金属イオンからアルカリ性条件下で形成される金属化合物の沈殿を防止する方法であって、前記二価金属イオンがマグネシウムイオン又はカルシウムイオンであり、前記二価金属イオンに対して、CH(OH)CH(OH)COOH基を有する化合物又はその塩を作用させることを特徴とする、前記沈殿防止方法。
[4]前記試薬が、トリグリセライド、グルコース、ヘモグロビンA1c、クレアチンキナーゼ(CK)活性、CK−MB活性、HDL−コレステロール、ヘモグロビンA1c、又はアミラーゼ活性を測定することのできる体外診断用試薬組成物である、[3]の方法。
前記沈殿防止用組成物の好ましい態様によれば、トリグリセライド、グルコース、ヘモグロビンA1c、クレアチンキナーゼ(CK)活性、CK−MB活性、HDL−コレステロール、ヘモグロビンA1c、又はアミラーゼ活性を測定することのできる体外診断用試薬組成物であるか、あるいは、分析装置の洗浄液であることができる。
前記の二価の金属としては、カルシウム、マグネシウム等があげられるが、これらの中でも特にマグネシウムが好ましい。
R−CH(OH)CH(OH)COOH (I)
[式中、基Rは、
で表される化合物であることができる。基Rとしては、例えば、−H、−OH、−CH2(OH)、−CH(OH)CH2(OH)、−CH(OH)CH(OH)CH2(OH)、−COOH、−CH(OH)COOH、−CH(OH)CH(OH)COOH、−CH(OH)CH(OH)CH(OH)COOH、−CHO、−CH(OH)CHO、−CH(OH)CH(OH)CHO、−CH(OH)CH(OH)CH(OH)CHO等が挙げられるが、これに限定されるものではない。
100mmol/Lの塩化マグネシウム6水和物50μL、表1に示した化合物の100mmol/L水溶液(pH7.0に調整)100μL、蒸留水250μLを混合した後、4N NaOH 100μLを加え、混合攪拌した。攪拌30分後に沈殿の有無を肉眼で確認した。比較例として、R−CH(OH)CH(OH)COOH類似化合物、特開平10−62416号公報で用いられているジヒドロキシベンゼン化合物である1,2−ジヒドロキシ−3,5−ベンゼンジスルホン酸2ナトリウム[別名:タイロン(Tiron)]を用いた。
結果を表1に示す。CH(OH)CH(OH)COOH基を持つ化合物以外は沈殿を生じた。また、今回の条件下ではジヒドロキシベンゼン化合物であるタイロンでも沈殿を生じた。
(1)試薬調製
以下の組成で、トリグリセライド測定用試薬を調製した。
・第一試薬
《基本組成》
グッド緩衝液(pH6.8) 20mmol/L
塩化マグネシウム6水和物 15mmol/L
アデノシン5’−3リン酸ナトリウム(ATP−Na) 5mmol/L
N−エチル−N−スルホプロピル−m−トルイジン(ESPT)1mmol/L
グリセロールキナーゼ 1.1KU/L
グリセロール−3−リン酸オキシダーゼ 12.5KU/L
ペルオキシダーゼ 4MU/L
第一試薬(a):上記基本組成からなるもの(対照)。
第一試薬(b):上記基本組成に酒石酸ナトリウムカリウム4水和物(25mmol/L)を添加したもの(実施例)。
第一試薬(c):上記基本組成にグルコン酸ナトリウム(25mmol/L)を添加したもの(実施例)。
第一試薬(d):上記基本組成にタイロン(25mmol/L)を添加したもの(比較例)。
・第二試薬
《組成》
グッド緩衝液(pH6.4) 20mmol/L
塩化マグネシウム6水和物 15mmol/L
4−アミノアンチピリン 1.2mmol/L
リポプロテインリパーゼ 1000KU/L
ペルオキシダーゼ 1MU/L
前記(1)で調製した第一試薬(a)、(b)、(c)、(d)と第二試薬を測定に用いた。検体としてはコントロール血清を使用した。測定操作は、検体2μLに第一試薬200μLを加え、37℃で4分間加温した後、主波長600nm、副波長700nmで吸光度を測定した。更に、37℃で1分間加温後、第二試薬100μLを加え、37℃で4分間保温した後に、主波長600nm、副波長700nmで吸光度を測定し、吸光度変化量を求めた。
沈殿防止剤無添加に対する吸光度変化量の割合を表2に示す。ジヒドロキシベンゼン化合物であるタイロンを添加したものでは、無添加の場合に比べ吸光度変化量の減少が認められたが、酒石酸ナトリウムカリウム、グルコン酸ナトリウムを添加したものでは反応に影響なかった。
前記(1)で調製した第一試薬(a)、(b)、(c)、(d)各200μLと、第二試薬100μLとを混合した後、4N NaOH 100μLを加え、混合攪拌した。攪拌30分後に沈殿の有無を肉眼で確認した。
結果を表3に示す。酒石酸ナトリウムカリウム、グルコン酸ナトリウムを添加したものでは沈殿は生じていなかった。
(1)試薬調製
以下の組成で、グルコース測定用試薬を調製した。
・第一試薬
《基本組成》
トリス緩衝液(pH9.0) 50mmol/L
塩化カリウム 30mmol/L
塩化マグネシウム6水和物 15mmol/L
エチレンジアミン4酢酸(EDTA) 2.5mmol/L
ATP−Na 2.5mmol/L
グルコキナーゼ 1000U/L
グルコース−6−リン酸デヒドロゲナーゼ 1000U/L
第一試薬(a):上記基本組成からなるもの(対照)。
第一試薬(b):上記基本組成に酒石酸ナトリウムカリウム4水和物(15mmol/L)を添加したもの(実施例)。
第一試薬(c):上記基本組成にグルコン酸ナトリウム(15mmol/L)を添加したもの(実施例)。
第一試薬(d):上記基本組成にタイロン(15mmol/L)を添加したもの(比較例)。
・第二試薬
《組成》
酢酸緩衝液(pH4.0) 120mmol/L
EDTA 2.5mmol/L
酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADP)2.5mmol/L
前記(1)で調製した第一試薬(a)、(b)、(c)、(d)と第二試薬を測定に用いた。検体としてはコントロール血清を使用した。測定操作は、検体2μLに第一試薬240μLを加え、37℃で4分間加温した後、主波長340nm、副波長405nmで吸光度を測定した。更に、37℃で1分間加温後、第二試薬60μLを加え、37℃で4分間保温した後に、主波長340nm、副波長405nmで吸光度を測定し、吸光度変化量を求めた。
沈殿防止剤無添加に対する吸光度変化量の割合を表4に示す。ジヒドロキシベンゼン化合物であるタイロンを添加したものでは、無添加の場合に比べ吸光度変化量の増加が認められたが、酒石酸ナトリウムカリウム、グルコン酸ナトリウムを添加したものでは反応に影響なかった。
前記(1)で調製した第一試薬(a)、(b)、(c)、(d)各240μLと、第二試薬60μLとを混合した後、4N NaOH 100μLを加え、混合攪拌した。攪拌30分後に沈殿の有無を肉眼で確認した。
結果を表5に示す。酒石酸ナトリウムカリウム、グルコン酸ナトリウムを添加したものでは沈殿は生じていなかった。
(1)試薬調製
以下の組成で、クレアチンキナーゼ活性測定用試薬を調製した。
・第一試薬
《基本組成》
イミダゾール酢酸緩衝液(pH6.6) 100mmol/L
EDTA 1.25mmol/L
酢酸マグネシウム4水和物 15mmol/L
N−アセチルシステイン(NAC) 30mmol/L
アデノシン5’−2リン酸(ADP) 2.5mmol/L
アデノシン5’−1リン酸(AMP) 12.5mmol/L
ジアデノシン−5リン酸(AP5A) 25μmol/L
D−グルコース 25mmol/L
NADP 6mmol/L
グルコキナーゼ 4000U/L
グルコース−6−リン酸デヒドロゲナーゼ 1000U/L
第一試薬(a):上記基本組成からなるもの(対照)。
第一試薬(b):上記基本組成に酒石酸ナトリウムカリウム4水和物(15mmol/L)を添加したもの(実施例)。
第一試薬(c):上記基本組成にグルコン酸ナトリウム(15mmol/L)を添加したもの(実施例)。
第一試薬(d):上記基本組成にタイロン(15mmol/L)を添加したもの(比較例)。
・第二試薬
《基本組成》
Tris緩衝液(pH8.5) 20mmol/L
クレアチンリン酸 15mmol/L
酢酸マグネシウム4水和物 10mmol/L
第二試薬(a):上記基本組成からなるもの(対照)。
第二試薬(b):上記基本組成に酒石酸ナトリウムカリウム4水和物(10mmol/L)を添加したもの(実施例)。
第二試薬(c):上記基本組成にグルコン酸ナトリウム(10mmol/L)を添加したもの(実施例)。
第二試薬(d):上記基本組成にタイロン(10mmol/L)を添加したもの(比較例)。
前記(1)で調製した第一試薬(a)、(b)、(c)、(d)と第二試薬(a)、(b)、(c)、(d)を測定に用いた。検体としてはコントロール血清を使用した。測定操作は、検体4μLに第一試薬160μLを加え、37℃で3分間加温した後、37℃で2分間加温しながら、主波長340nm、副波長405nmで吸光度変化量を測定した。第二試薬40μLを加え、37℃で2分間保温した後に、37℃で3分間加温しながら、主波長340nm、副波長405nmで吸光度変化量を測定した。
沈殿防止剤無添加に対する吸光度変化量の割合を表6に示す。ジヒドロキシベンゼン化合物であるタイロンを添加したものでは無添加の場合に比べ吸光度変化量の減少が認められたが、酒石酸ナトリウムカリウム、グルコン酸ナトリウムを添加したものでは反応に影響なかった。
前記(1)で調製した第一試薬(a)、(b)、(c)、(d)各160μLと、第二試薬(a)、(b)、(c)、(d)40μLとを混合した後、4N NaOH 100μLを加え、混合攪拌した。攪拌30分後に沈殿の有無を肉眼で確認した。
結果を表7に示す。酒石酸ナトリウムカリウム、グルコン酸ナトリウムを添加したものでは沈殿は生じていなかった。
Claims (2)
- トリグリセライド、グルコース、ヘモグロビンA1c、クレアチンキナーゼ(CK)活性、CK−MB活性、HDL−コレステロール、ヘモグロビンA1c、又はアミラーゼ活性を測定することができ、少なくとも検体と試薬と洗浄液とを注入及び排出する分析装置に適用する二価金属イオンを含有する体外診断用試薬組成物であって、前記二価金属イオンがマグネシウムイオン又はカルシウムイオンであり、更にCH(OH)CH(OH)COOH基を有する化合物又はその塩を含有する、前記体外診断用試薬組成物。
- 少なくとも検体と二価金属イオン含有試薬と洗浄液とを注入及び排出する分析装置に適用して、前記二価金属イオンからアルカリ性条件下で形成される金属化合物の沈殿を防止する方法であって、前記試薬が、トリグリセライド、グルコース、ヘモグロビンA1c、クレアチンキナーゼ(CK)活性、CK−MB活性、HDL−コレステロール、ヘモグロビンA1c、又はアミラーゼ活性を測定することのできる体外診断用試薬組成物であり、前記二価金属イオンがマグネシウムイオン又はカルシウムイオンであり、前記二価金属イオンに対して、CH(OH)CH(OH)COOH基を有する化合物又はその塩を作用させることを特徴とする、前記沈殿防止方法。
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