CN102608280B - 直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂及其制法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂，该稳定剂是由50-90％的络合掩蔽剂、5-25％的表面活性剂和5-25％的高分子化合物经过研磨混匀后得到的，所述的络合掩蔽剂为二价金属盐。本发明的稳定剂能使反应终点时亚铁氰化钾络合物不会继续增多，不会有深黄色的亚铁氰化钾络合物地持续生成而影响反应终点的判断，使反应终点的判定更加准确；另外，本发明的稳定剂能使反应液在沸腾状态下产生覆盖均匀的气泡，反应体系在0.5-1秒钟内迅速混匀，滴定结果重现性、精密度非常好。经精密度和准确度实验结果对比表明，加入本发明的稳定剂和未加入的两种结果精密度有显著性差异，准确度没有显著性差异，说明本发明有显著提高直接滴定法精密度的作用。

Description

直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂及其制法

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及食品中总糖、还原糖的检测，特别涉及直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂及其制备方法与应用。

背景技术

食品中的总糖、还原糖测定方法中属于滴定方法中的一种，目前常用的有直接滴定法(又称亚铁氰化钾滴定法)。

直接滴定法是在沸腾条件下进行滴定，原理是葡萄糖和氢氧化铜在沸腾条件下经氧化还原反应生成氧化亚铜沉淀，氧化亚铜和反应体系中亚铁氰化钾生成配位化合物，滴定终点时过量的葡萄糖和指示剂次亚甲基蓝发生氧化还原反应，滴定终点的颜色是次亚甲基蓝由蓝色变成无色，滴定体系溶液显现黄色的亚铁氰化钾颜色。

直接滴定法的检测条件比较苛刻，要求滴定速度为每2秒1滴即0.025毫升/秒，在检测过程中不能振摇试剂瓶；由于反应溶液的混合过程完全靠沸腾后产生的气泡使反应液均匀，造成滴定液在反应液中不能快速、均匀的扩散，导致滴定反应不能瞬间完成，出现1-5秒钟反应液混匀时间，造成滴定平行操作时无法在同一条件下判断滴定终点，而使滴定结果的平行性差。而且此法的终点颜色对检测结果也有一定的影响，其终点颜色是指示剂次亚甲基蓝由蓝色变成无色，但反应滴定体系溶液的中的亚铁氰化钾络合物会随着加热反应时间的延长而增加，造成在反应终点时1-2秒内迅速变成深黄色，从而影响终点的准确判断。由于以上两种原因，检测总糖的工作人员在实际工作中的操作会受到很大的影响，结果准确性和稳定性都有一定偏差。

发明内容

针对目前采用直接滴定法测定总糖、还原糖含量时滴定终点难以准确判定及反应均匀度差的问题，本发明的首要目的在于提供一种稳定剂，该稳定剂能使体系在滴定终点时达到反应液之间快速均匀，反应终点颜色始终保持无色状态，便于确认终点，减少滴定误差。

本发明的另一目的在于提供上述稳定剂的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述稳定剂的用途。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂，由以下质量百分比的成分制备得到：

络合掩蔽剂：50-90％

表面活性剂：5-25％

高分子化合物：5-25％；

所述的络合掩蔽剂为二价金属盐，优选钙盐或镁盐，特别优选碳酸钙、氯化钙、氢氧化钙、氧化钙、硫酸钙，氯化镁、碳酸镁、硫酸镁或氢氧化镁中的一种；

所述的表面活性剂为水溶性表面活性剂，优选牛胆酸盐、吐温-80或普朗尼克中的一种；

所述的高分子化合物为蛋白胨或牛肉膏。

上述直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂，其制备方法包括以下步骤：将络合掩蔽剂、表面活性剂与高分子化合物混合研磨均匀后，即得到直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂；所得到的稳定剂为粉末状或混悬物(表面活性剂有液体形式的，和粉末混合后形成混悬物)。

上述的稳定剂可用于直接滴定法测定总糖、还原糖含量；

上述的稳定剂用于直接滴定法测定总糖、还原糖含量时配制成质量体积比为0.5-1％的水溶液使用，优选配制成质量体积比为0.5％的水溶液使用；

上述的稳定剂用于直接滴定法测定总糖、还原糖含量时是在滴定前加入，具体包括以下步骤：

将费林甲液、费林乙液、水与试样混合，加入稳定剂水溶剂，将混合溶液加热至沸腾并保持沸腾，逐滴滴入葡萄糖或其它还原糖标准溶液，直至混合溶液蓝色刚好褪去则为滴定终点，记录消耗葡萄糖或其它还原糖标准溶液的总体积，计算，得出试样中总糖或还原糖含量。

本发明的机理是：稳定剂中含有络合掩蔽剂，因此在反应终点时亚铁氰化钾络合物不会继续增多以致终点颜色由蓝色褪去显深黄，影响滴定终点的判断，而是终点的颜色始终保持无色，使得终点判定非常容易，即指示剂蓝色褪去呈无色。加入表面活性剂和高分子化合物可以降低反应体系的表面活性，可以使反应液在沸腾状态下产生覆盖均匀的气泡，反应体系在0.5-1秒钟内迅速混匀，滴定结果重现性、精密度非常好，能够满足检测标准对检测结果苛刻的精密度要求。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

1、本发明的稳定剂能使反应终点时亚铁氰化钾络合物不会继续增多，不会有深黄色的亚铁氰化钾络合物地持续生成而影响反应终点的判断，反应终点的颜色始终保持无色，使反应终点的判定更加准确。

2、本发明的稳定剂能使反应液在沸腾状态下产生覆盖均匀的气泡，反应体系在0.5-1秒钟内迅速混匀，滴定结果重现性、精密度非常好，能满足检测标准精密度的要求。

3、经精密度和准确度实验结果对比表明，加入本发明的稳定剂和未加入的两种结果精密度有显著性差异，准确度没有显著性差异，说明本发明有显著提高直接滴定法精密度的作用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂，其制备方法包括以下步骤：

称取1.0g蛋白胨、4.6g碳酸钙和1.0g牛胆酸盐置于研钵中，充分研磨混匀后得到直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂粉末。

实施例2

直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂，其制备方法包括以下步骤：

称取1.15g牛肉膏、2.3g氯化钙和1.15g普朗尼克置于研钵中，充分研磨混匀后得到直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂粉末。

实施例3

直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂，其制备方法包括以下步骤：

称取0.23g蛋白胨、4.1g硫酸镁和0.23g吐温80置于研钵中，充分研磨混匀后得到直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂混悬物。

实施例4

费林试剂标定精密度比对实验

(1)各种试剂的配制：

稳定剂：称取0.50g实施例1制备得到的稳定剂粉末，溶于100ml水中，加热搅拌混匀，得到直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂液体；

费林甲液：称取硫酸铜15.0及次甲基蓝0.05g，加水溶解并定容至1000mL；

费林乙液：称取酒石酸钾钠50g、氢氧化钠54g、亚铁氰化钾4g，加水溶解并定容至1000mL；

葡萄糖、其它还原糖标准溶液：称取1g(精确至0.0001g)经过98℃～105℃干燥至恒重的葡萄糖、其它还原糖，加水溶解后加5mL盐酸，并以水稀释定容至1000mL。

(2)不加稳定剂的试验方法：吸取5.0mL费林甲液和5.0mL费林乙液，置于100mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠两粒，从滴定管加约9mL葡萄糖或其他还原糖标准溶液，控制在2min内加热至沸腾，趁热以1滴/2秒的速度滴加葡萄糖或其他还原糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖或其它还原糖标准溶液的总体积，平行操作34次。

(3)加稳定剂的试验方法：吸取5.0mL费林甲液和5.0mL费林乙液，置于100mL锥形瓶中，加水10mL，加入0.1mL步骤(1)的稳定剂液体，以下操作同步骤(2)，平行操作34次。结果见表1。

(4)对未添加和添加稳定剂的实验结果进行数理统计分析，采用F-方差检验评价二者结果的精密度。结果见表2。

表1 费林试剂标定消耗葡萄糖标准溶液的体积结果(n＝34)

表2未添加/添加稳定剂的数据F-方差检验的结果

(用excel2003版本计算)

	未加稳定剂组	加入稳定剂组
			平均值(mL)	10.452	10.376
方差	0.000867	0.000307
			观测值	33	33
df	32	32
			F	2.819
P(F＜＝f)单尾	0.00220
			F单尾临界	1.804

对表2的说明：1、结果的精密度用方差表示，从表中看加入稳定剂结果的方差比未加稳定剂结果的方差小；2、表中F＝2.819，其数值大于F单尾临界值1.804，说明未加入稳定剂的结果精密度与加入稳定剂结果的精密度有显著性差异。

实施例5

葡萄酒中总糖测定精密度比对实验

(1)各种试剂的配制

稳定剂：称取0.50g实施例1制备得到的稳定剂粉末，溶于100ml水中，加热搅拌混匀，得到直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂液体；

费林甲液：称取硫酸铜15.0及次甲基蓝0.05g，加水溶解并定容至1000mL；

费林乙液：称取酒石酸钾钠50g、氢氧化钠54g、亚铁氰化钾4g，加水溶解并定容至1000mL；

葡萄糖、其它还原糖标准溶液：称取1g(精确至0.0001g)经过98℃～105℃干燥至恒重的葡萄糖、其它还原糖，加水溶解后加5mL盐酸，并以水稀释定容至1000mL。

(2)样品前处理

精密吸取葡萄酒样品25mL于100mL容量瓶中，加5mL 5mol/L的盐酸溶液，摇匀。于68℃水浴上水解15min，取出，冷却后，用200g/L的氢氧化钠溶液调至中性，加水定容至刻度，摇匀。

(3)不加稳定剂的测定方法

(3.1)标定费林溶液

操作步骤同实施例4步骤(2)。

(3.2)试样溶液的预测定

吸取5.0mL费林甲液及5.0mL费林乙液，置于100mL锥形瓶中，直接加入5mL步骤(2)的样品溶液，加入玻璃珠两粒，控制在2min内加热至沸，保持沸腾并以先快后慢的速度从滴定管中滴加葡萄糖或其他还原糖标准溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以1滴/2秒的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗的葡萄糖或其他还原糖标准溶液体积，该体积与步骤(3.1)标定时消耗的还原糖标准溶液体积之差相当于5mL样品溶液中所含还原糖的量。

(3.3)试样溶液测定

吸取5.0mL费林甲液及5.0mL费林乙液，置于100mL锥形瓶中，加入玻璃珠两粒，直接加入5mL样品溶液，加入玻璃珠两粒，从滴定管中加比步骤3.2预测体积少1mL的葡萄糖或其他还原糖标准溶液至锥形瓶中，控制在2min内加热至沸腾，保持沸腾并以1滴/2秒的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖或其它还原糖标准溶液的总体积，平行操作7次，取其平均值，计算，得出试样中总糖含量。

试样中总糖含量按式(1)计算：

$X=\frac{(V_0-V)\×c\×n}{5}\×1000\·\·\·\left(1\right)$

式中：

X——试样中总糖的含量，单位为克每升(g/L)；

V₀——费林标定时，消耗的标准葡萄糖溶液的体积，单位为毫升(mL)；

V——试样测定时，消耗的标准葡萄糖溶液的体积，单位为毫升(mL)；

C——葡萄糖标准溶液的浓度，单位为克每毫升(g/mL)；

n——试样的稀释倍数。

(4)加稳定剂的测定方法

(4.1)标定费林溶液

操作步骤同实施例4步骤(2)。

(4.2)试样溶液的预测定

吸取5.0mL费林甲液及5.0mL费林乙液，置于100mL锥形瓶中，直接加入5mL步骤(2)的样品溶液和0.1mL步骤(1)配制的稳定剂液体，余下操作同步骤(3.2)。

(4.3)试样溶液测定

吸取5.0mL费林甲液及5.0mL费林乙液，置于100mL锥形瓶中，加入玻璃珠两粒，直接加入5mL样品溶液和0.1mL步骤(1)配制的稳定剂液体，余下操作同步骤(3.3)。

(5)对未添加和添加稳定剂的实验结果进行数理统计分析，采用F-方差检验评价二者结果的精密度。结果见表3和表4。

表3葡萄酒中总糖测定结果(n＝7)

表4未添加组/添加稳定剂组的数据F-方差检验的结果

(用excel2003版本计算)

	未加稳定剂组	加入稳定剂组
			平均(g/L)	3.094	3.264
方差	0.000680	0.000121
			观测值	7	7
df	6	6
			F	5.631
P(F＜＝f)单尾	0.0270
			F单尾临界	4.284

对表4的说明：1、结果的精密度用方差表示，从表中看加入稳定剂结果的方差比未加稳定剂结果的方差小；2、表中F＝5.631，其数值大于F单尾临界值4.284，说明未加入稳定剂的结果精密度与加入稳定剂结果的精密度有显著性差异。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂，其特征在于：是由以下质量百分比的成分制备得到：

络合掩蔽剂：  50-90%

表面活性剂：  5-25%

高分子化合物：5-25%；

所述的络合掩蔽剂为碳酸钙、氯化钙或硫酸镁中的一种；

所述的表面活性剂为牛胆酸盐、吐温-80或普朗尼克中的一种；

所述的高分子化合物为蛋白胨或牛肉膏。

2.权利要求1所述的直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将络合掩蔽剂、表面活性剂与高分子化合物混合研磨均匀后，即得到直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂；所得到的稳定剂为粉末状或混悬物。

3.权利要求1所述的直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂在直接滴定法测定总糖、还原糖含量中的应用。

4.根据权利要求3所述的直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂在直接滴定法测定总糖、还原糖含量中的应用，其特征在于：所述的直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂配制成质量体积比为0.5-1%的水溶液使用。

5.根据权利要求3所述的直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂在直接滴定法测定总糖、还原糖含量中的应用，其特征在于：所述的直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂配制成质量体积比为0.5%的水溶液使用。

6.根据权利要求4所述的直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂在直接滴定法测定总糖、还原糖含量中的应用，其特征在于包括以下步骤：

将费林甲液、费林乙液、水与试样混合，加入稳定剂水溶剂，将混合溶液加热至沸腾并保持沸腾，逐滴滴入葡萄糖或其它还原糖标准溶液，直至混合溶液蓝色刚好褪去则为滴定终点，记录消耗葡萄糖或其它还原糖标准溶液的总体积，计算，得出试样中总糖或还原糖含量。