JP4826293B2 - 総蛋白質の定量方法およびそれに用いる総蛋白質定量用キット - Google Patents
総蛋白質の定量方法およびそれに用いる総蛋白質定量用キット Download PDFInfo
- Publication number
- JP4826293B2 JP4826293B2 JP2006063530A JP2006063530A JP4826293B2 JP 4826293 B2 JP4826293 B2 JP 4826293B2 JP 2006063530 A JP2006063530 A JP 2006063530A JP 2006063530 A JP2006063530 A JP 2006063530A JP 4826293 B2 JP4826293 B2 JP 4826293B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- total protein
- reagent
- dextran
- sample
- protein quantification
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 40
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 37
- 238000011002 quantification Methods 0.000 title claims description 20
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 46
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 25
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims description 21
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 claims description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 4
- 235000013681 dietary sucrose Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 4
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 claims description 4
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 claims 2
- 229940074410 trehalose Drugs 0.000 claims 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 27
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 26
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 19
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 16
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 8
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 8
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001450 Alpha-Cyclodextrin Polymers 0.000 description 3
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N alpha-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N 0.000 description 3
- 229940043377 alpha-cyclodextrin Drugs 0.000 description 3
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 3
- GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N gamma-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N 0.000 description 3
- 229940080345 gamma-cyclodextrin Drugs 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 3-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCC(CO)(CO)NCC(O)CS(O)(=O)=O RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700016232 Arg(2)-Sar(4)- dermorphin (1-4) Proteins 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PJWWRFATQTVXHA-UHFFFAOYSA-N Cyclohexylaminopropanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCNC1CCCCC1 PJWWRFATQTVXHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCS(O)(=O)=O JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 2
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-CBPJZXOFSA-N 2-amino-2-deoxy-D-mannopyranose Chemical compound N[C@@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-CBPJZXOFSA-N 0.000 description 1
- SNKZJIOFVMKAOJ-UHFFFAOYSA-N 3-Aminopropanesulfonate Chemical compound NCCCS(O)(=O)=O SNKZJIOFVMKAOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000027932 Collagen disease Diseases 0.000 description 1
- 108010001682 Dextranase Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020740 Hyperproteinaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 150000007514 bases Chemical class 0.000 description 1
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 1
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 description 1
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- XTVVROIMIGLXTD-UHFFFAOYSA-N copper(II) nitrate Chemical compound [Cu+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O XTVVROIMIGLXTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N ethanesulfonic acid Chemical compound CCS(O)(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000003058 plasma substitute Substances 0.000 description 1
- VZOPRCCTKLAGPN-UHFFFAOYSA-L potassium;sodium;2,3-dihydroxybutanedioate;tetrahydrate Chemical compound O.O.O.O.[Na+].[K+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O VZOPRCCTKLAGPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
そのような蛋白質の定量としては、ビウレット法、Lowry 法、Bicinchonianate 法(BCA法)、Bradford 法等の呈色反応による定量方法が知られている。臨床検査の分野においては、総蛋白質の定量法として、ビウレット法は、発色感度が蛋白質の種類に関係なく一定であること、繁用の自動分析装置への適応が可能であることから、最も用いられている。
デキストランの影響回避のため、デキストラナーゼを含む第 1 試薬とビウレット試薬を含む第 2 試薬からなる 2 試薬法を用いた総蛋白質測定試薬も開発されている(特許文献1)。この方法は、1つの測定項目を一回で測定できるという長所がある。しかし、酵素は、通常、高価であるため試薬コストが高くなったり、また、安定性を確保しにくい場合もあったり、ロット間で反応性が異なるという場合もある。
従って、本発明は、2 以上のアルコール性水酸基を有するアミン、二糖およびシクロデキストリン類からなる群から選ばれるアルコール類を用いることを特徴とする検体中の総蛋白質の定量方法に関する。
更に本発明は、2 以上のアルコール性水酸基を有するアミン、二糖およびシクロデキストリン類からなる群から選ばれるアルコール類を含む総蛋白質定量用キットに関する。
本発明では、検体中の総蛋白質量を定量する際に、デキストランなどの干渉物質の影響を回避するために、2 以上のアルコール性水酸基を有するアミン、二糖およびシクロデキストリン類からなる群から選ばれるアルコール類を用いる。なかでも、2 以上のアルコール性水酸基を有するアミンが、緩衝作用も有するので好ましい。
本発明においては、2 以上のアルコール性水酸基を有するアミンとしては、分子中に 2 以上のアルコール性水酸基を有するトリス系緩衝剤、分子中に 2 以上のアルコール性水酸基を有する GOOD’S 緩衝剤、分子中に 2 以上のアルコール性水酸基を有するアミノ糖などを例示できる。本発明において、トリス系緩衝剤とは、カルボン酸またはスルホン酸等の有機酸のユニットを有せずアルコール性水酸基を有する有機アミンであって、水に溶かしたとき緩衝作用を持つ緩衝剤をいう。2 以上のアルコール性水酸基を有するトリス系緩衝剤としては、例えば、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(Tris)、トリス(ヒドロキシエチル)アミン、ビス(ヒドロキシエチル)アミン、1,1−ビス(ヒドロキシメチル)−2−ヒドロキシエチルアミン、ビス(2−ヒドロキシエチル)イミノトリス(ヒドロキシメチル)メタン(Bis-Tris)、それらの酸付加塩(例えば、塩酸塩など)等を例示できる。
本発明においてアミノ糖とは、糖の水酸基の一部がアミノ基に置換された構造を有する化合物であり、例えば、グルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミンなどを例示できる。
本発明において二糖とは、CnH2nOn(nは5または6である)の分子式で表される単糖の 2 分子が、グリコシド結合により結合して 1 分子となったものをいう。そのような二糖としては、例えば、サッカロース、トレハロース、ラクトースを例示できる。
本発明において、シクロデキストリン類としては、例えば、α―シクロデキストリン、β―シクロデキストリン、γ―シクロデキストリンを例示できる。
本発明の方法により検体中の総蛋白質を定量するには、2 以上のアルコール性水酸基を有するアミン、二糖およびシクロデキストリン類からなる群から選ばれるアルコール類を含む総蛋白質定量用キットを用いて実施できる。2 試薬系ビウレット法を用いる場合、そのキットとしては、総蛋白質定量用キットであって、かつ、2 以上のアルコール性水酸基を有するアミン、二糖およびシクロデキストリン類からなる群より選ばれるアルコール類を含む第 1 試薬とビウレット試薬を含む第 2 試薬とから構成される総蛋白質定量用キットを用いることが好ましい。
この場合、そのキットに用いる第 1 試薬と第 2 試薬としては、第 1 試薬に 2 以上のアルコール性水酸基を有するアミン、二糖およびシクロデキストリン類からなる群から選ばれるアルコール類を含ませること以外は、従来知られている2 試薬系ビウレット法に用いるキットをそのまま使用することができる。例えば、第 1 試薬に 2 以上のアルコール性水酸基を有するアミン、二糖およびシクロデキストリン類からなる群から選ばれるアルコール類を含む緩衝液を使用し、第 2 試薬にビウレット反応に必要な銅イオンを含む成分を含んだ液を用いることができる。本発明を 2 試薬系で実施するときには、デキストランの影響回避のためのアルコール類は、第 1 試薬中、好ましくは 10〜2000 mM 程度、さらに好ましくは 50〜1000 mM 存在させると良い。
第1試薬の pH は、総蛋白質定量のため第 2 試薬と混合した際にその反応液が、アルカリ性になれば特に限定されないが、pH3〜13 であることが好ましい。
第2試薬としては、硫酸銅、EDTA 銅、硝酸銅などの銅 (II)イオンを含む化合物と、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムなどの塩基性化合物を含むもので通常、2 試薬系ビウレット試薬の第2試薬に用いるものであれば特に限定しない。
第 2 試薬に含まれる各成分濃度は、ビウレット反応に必要な濃度の1〜5 倍、好ましくは 1.5〜3 倍であるが、第 1 試薬と第 2 試薬との添加量の比によって適宜、各成分濃度を変えることができる。なお、1倍濃度のビウレット試薬の処方の1例を表1に示す。
実施例1〜4
2 以上のアルコール性水酸基を有するアミンを用いた総蛋白質の測定
2 以上のアルコール性水酸基を有するアミンを用いて、デキストランを含む血清中の総蛋白質をビウレット法により測定し、それら緩衝剤のデキストランの影響回避の効果を検討した。
検体として、分子量約 40,000 のデキストランを 10% となるよう精製水に溶解したものと正常ヒト血清とを 1 対 1 で混合(デキストラン濃度5%相当)したものと、生理食塩水と正常ヒト血清とを 1 対 1 で混合(デキストラン濃度0%相当)したものの 2 種類を用いた。
第 1 試薬は、2 以上のアルコール性水酸基を有するアミンとして、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン、ビス(2−ヒドロキシエチル)イミノトリス(ヒドロキシメチル)メタン(Bis-Tris)等のトリス系緩衝剤、N,N−ビス(2−ヒドロキシエチル)グリシン(Bicine)、2−ヒドロキシーN−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPSO)等の GOOD’S 緩衝剤を、各々 100mM となるように精製水に溶解したものを用いた。また、比較の緩衝剤として、酢酸ナトリウム 100mM(比較例1)または2−[4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジニル]エタンスルホン酸(HEPES)(比較例2)、ピペラジン−1,4−ビス(2−エタンスルホン酸)(PIPES)(比較例3)、N−シクロヘキシル−3−アミノプロパンスルホン酸(CAPS)(比較例4)等の 2 以上のアルコール性水酸基を有しない GOOD’S 緩衝剤を用いた。
第 2 試薬は臨床検査法提要等で示される公知のビウレット法試薬を以下のような組成で調製した。
硫酸銅(II)五水和物 24 mM
(+)−酒石酸ナトリウムカリウム四水和物 84 mM
ヨウ化カリウム 60 mM
水酸化ナトリウム 1500 mM
測定は日立7180形自動分析装置を用いて行った。検体 3μL に第 1 試薬 120μL を加え 37℃にて 5 分間加温後に、第 2 試薬 120μL を加えさらに 5 分間反応させ、自動分析装置の 2 ポイントエンド法により主波長 546 nm、副波長 700 nm での第 2 試薬添加前後の液量補正した吸光度の差を測定した。生理食塩水(0g/dL)と標準液(6.5g/dL)を用いて作成した検量線から各検体の吸光度を濃度に換算した。結果を表2に示す。
二糖を用いた総蛋白質の測定
二糖を用いて、デキストランを含む血清中の総蛋白質をビウレット法により測定し、それらの効果を検討した。
第 1 試薬は、二糖としてサッカロース、トレハロース、ラクトース各々を 10%(292mM)となるように生理食塩水に溶解したものを用いた。また、比較例5として、グルコースを 10%となるように生理食塩水に溶解したもの、および比較例6として無添加の生理食塩水を比較例とした。検体、第 2 試薬、測定は上記の実施例1〜4と同様に行った。結果を表3に示す。
シクロデキストリン類を用いた総蛋白質の測定
シクロデキストリン類を用いて、デキストランを含む血清中の総蛋白質をビウレット法により測定し、シクロデキストリン類の効果を検討した。
第 1 試薬は、シクロデキストリン類としてα―シクロデキストリン、γ―シクロデキストリンを各々を 5%となるように生理食塩水に溶解したものを用いた。また、生理食塩水を用いた場合を比較例7とした。検体、第 2 試薬、測定は上記の実施例1〜4と同様に行った。結果を表4に示す。
Claims (2)
- 検体と、検体中のデキストランの影響を回避するためのサッカロース、トレハロース、ラクトースまたはシクロデキストリン類を含む第1試薬とを、混和させ、次いで、ビウレット試薬を含む第2試薬を添加してビウレット反応させて、検体中のデキストランの影響を回避して検体中の総蛋白質を定量することを特徴とする検体中の総蛋白質の定量方法。
- 検体中のデキストランの影響を回避するためのサッカロース、トレハロース、ラクトースまたはシクロデキストリン類を含む第1試薬と、ビウレット試薬を含む第2試薬とから構成され、ビウレット反応により検体中のデキストランの影響を回避して検体中の総蛋白質を定量するための総蛋白質定量用キット。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006063530A JP4826293B2 (ja) | 2006-03-09 | 2006-03-09 | 総蛋白質の定量方法およびそれに用いる総蛋白質定量用キット |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006063530A JP4826293B2 (ja) | 2006-03-09 | 2006-03-09 | 総蛋白質の定量方法およびそれに用いる総蛋白質定量用キット |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2007240337A JP2007240337A (ja) | 2007-09-20 |
JP4826293B2 true JP4826293B2 (ja) | 2011-11-30 |
Family
ID=38586023
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006063530A Expired - Fee Related JP4826293B2 (ja) | 2006-03-09 | 2006-03-09 | 総蛋白質の定量方法およびそれに用いる総蛋白質定量用キット |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4826293B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB2437545B (en) | 2006-04-28 | 2011-07-06 | Novexin Ltd | Dextrin-containing reagents for detecting and quantifying proteins |
CN106442352A (zh) * | 2016-09-24 | 2017-02-22 | 济南中安生物技术服务有限公司 | 一种抗干扰能力强的血清总蛋白检测试剂盒 |
JP2020115112A (ja) * | 2019-01-18 | 2020-07-30 | 株式会社シノテスト | 試料中の総タンパク質測定試薬及びその安定化方法 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4183116B2 (ja) * | 2002-06-18 | 2008-11-19 | 旭化成ファーマ株式会社 | 糖化タンパク質測定用検量物質および標準測定法 |
JP3965433B2 (ja) * | 2003-02-04 | 2007-08-29 | 株式会社シノテスト | 試料中の総蛋白質測定試薬及び測定方法 |
JP4448685B2 (ja) * | 2003-11-27 | 2010-04-14 | 株式会社カイノス | 総蛋白質定量方法および試薬 |
-
2006
- 2006-03-09 JP JP2006063530A patent/JP4826293B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2007240337A (ja) | 2007-09-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11808777B2 (en) | Method of analyzing diluted biological sample component | |
CN106053839A (zh) | 一种测定结合珠蛋白的试剂盒及其制备方法 | |
CN102253041B (zh) | 一种检测肌酐的试剂盒 | |
JP4826293B2 (ja) | 総蛋白質の定量方法およびそれに用いる総蛋白質定量用キット | |
CN103048282A (zh) | 一种胆红素的检测方法及检测试剂盒 | |
JPWO2006054519A1 (ja) | リポ蛋白中成分の分別定量用標準品 | |
CN101226152A (zh) | 一种血清总铁结合力的自动分析法及液体稳定试剂 | |
CN115436542A (zh) | 一种鉴别猪肠粘膜肝素中羊来源肝素掺杂比例的方法 | |
JP7210899B2 (ja) | 精製された4-アミノアンチピリンの製造方法及び生成された4-アミノアンチピリン | |
CN112710854B (zh) | 一种抗干扰、稳定的血清总胆红素(酶法)测定试剂盒及其制备方法和应用 | |
JP7310282B2 (ja) | 生体成分測定試薬キットの感度低下抑制方法 | |
CN113607842A (zh) | 一种乳酸左氧氟沙星中乳酸的鉴别与含量测定方法 | |
EP3279660B1 (en) | Preservative solution for heme protein, and method for stabilizing heme protein | |
JP6970122B2 (ja) | ポリペプチド上の総カルボニル化レベルを判定するためのアッセイ | |
CN112114127A (zh) | 一种甘胆酸均相酶免疫测定试剂盒及其制备方法和应用 | |
JP4448685B2 (ja) | 総蛋白質定量方法および試薬 | |
DK169415B1 (da) | Fremgangsmåde og reagens til kvantitativ fotometrisk bestemmelse af fosfor i legemsvæsker | |
CN107976537B (zh) | 一种用于前白蛋白测定试剂盒的稳定剂及其制备方法 | |
JP5808616B2 (ja) | 干渉物質の影響を抑制する方法 | |
JP2000166595A (ja) | 抱合型ビリルビン測定用試薬 | |
CN110687306B (zh) | 一种直接机上溶血酶法双试剂糖化血红蛋白检测试剂盒 | |
JP7276328B2 (ja) | 生体成分測定試薬キットの感度低下抑制方法 | |
JP3733704B2 (ja) | 直接型ビリルビンの測定方法及び測定用キット | |
CN105424626A (zh) | 一种亚铁氧化酶诊断试剂盒 | |
RU2268476C2 (ru) | Способ количественного определения белка в биологических жидкостях |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20081212 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20101014 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20101019 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101130 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20110215 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110408 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20110427 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110623 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110729 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110816 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110829 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140922 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Ref document number: 4826293 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140922 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |