JP4546029B2 - 植物における対象とする核酸配列の増幅及び発現に用いる方法及びベクター - Google Patents
植物における対象とする核酸配列の増幅及び発現に用いる方法及びベクター Download PDFInfo
- Publication number
- JP4546029B2 JP4546029B2 JP2002585649A JP2002585649A JP4546029B2 JP 4546029 B2 JP4546029 B2 JP 4546029B2 JP 2002585649 A JP2002585649 A JP 2002585649A JP 2002585649 A JP2002585649 A JP 2002585649A JP 4546029 B2 JP4546029 B2 JP 4546029B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- plant
- expression
- vector
- cell
- replicon
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/40011—Tymoviridae
- C12N2770/40022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
(a)前記処理のため相互に構造的に関連しており、
(b)相互に機能的に異なっていて、
(c)前記増幅及び/又は発現を可能にする、
少なくとも2つのレプリコンを与えることを特徴とする方法を提供する。
環状dsDNAウイルス:科:Caulimoviridae、属:Badnavirus、代表種:ツユクサ黄色斑紋ウイルス、属:Caulimovirus、代表種:カリフラワーモザイクウイルス、属:「SbCMV様ウイルス」、代表種:ダイズ退緑斑紋ウイルス、属:「CsVMV様ウイルス」、代表種:キャッサバ葉脈ウイルス、属:「RTBV様ウイルス」、代表種:イネツングロ病ウイルス、属:「ペチュニア葉脈透化様ウイルス」、代表種:ペチュニア葉脈透化ウイルス;
環状ssDNAウイルス:科:ジェミニウイルス(Geminiviridae)、属:Mastrevirus(ジェミニウイルスサブグループI)、代表種:トウモロコシ条斑ウイルス、属:Curtovirus(ジェミニウイルスサブグループII)、代表種:ビートカーリートップウイルス、属:Begomovirus(ジェミニウイルスサブグループIII)、代表種:マメゴールデンモザイクウイルス;
ssRNAウイルス:科:Bromoviridae、属:Alfamovirus、代表種:アルファルファマメゴールデンモザイクウイルス、属:llarvirus、代表種:タバコ条斑ウイルス、属:Bromovirus、代表種:スズメノチャヒキモザイクウイルス、属:Cucumovirus、代表種:キュウリモザイクウイルス;
科:Closteroviridae、属:Closterovirus、代表種:ビート黄化ウイルス、属:Crinivirus、代表種:レタス感染黄化ウイルス、科:Comoviridae、属:Comovirus、代表種:ササゲモザイクウイルス、属:Fabavirus、代表種:ソラマメウイルトウイルス1、属:Nepovirus、代表種:タバコ輪点ウイルス;
科:Potyviridae、属:Potyvirus、代表種:ジャガイモウイルスY、属:Rymovirus、代表種:ライグラスモザイクウイルス、属:Bymovirus、代表種:オオムギ黄化モザイクウイルス;
科:Sequiviridae、属:Sequivirus、代表種:パースニップ斑紋ウイルス、属:Waikavirus、代表種:イネわい化ウイルス、科:Tombusviridae、属:Carmovirus、代表種:カーネーション斑紋ウイルス、属:Dianthovirus、代表種:カーネーション輪点ウイルス、属:Machlomovirus、代表種:トウモロコシ退緑斑紋ウイルス、属:Necrovirus、代表種:タバコえそウイルス、属:Tombusvirus、代表種:トマトブッシースタントウイルス、属未指定のssRNAウイルス、属:Capillovirus、代表種:ステムグルービングウイルス、
属:Carlavirus、代表種:カーネーション潜在ウイルス、属:Enamovirus、代表種:カーネーション隆起成長モザイクウイルス、
属:Furovirus、土壌コムギモザイクウイルス、属:Hordeivirus、代表種:オオムギ斑葉モザイクウイルス、属:Idaeovirus、代表種:ラズベリーブッシー萎縮ウイルス;
属:Luteovirus、代表種:オオムギ黄萎ウイルス、属:Marafivirus、代表種:トウモロコシラヤドフィノ(rayado fino)ウイルス、属:Potexvirus、代表種:ジャガイモウイルスX;属:Sobemovirus、代表種:インゲンマメ南部モザイクウイルス、属:Tenuivirus、代表種:イネ縞葉枯ウイルス、
属:Tobamovirus、代表種:タバコモザイクウイルス、
属:Tobravirus、代表種:タバコ茎えそウイルス、
属:Trichovirus、代表種:リンゴクロロティックリーフスポットウイルス;属:Tymovirus、代表種:カブラ黄化モザイクウイルス;属:Umbravirus、代表種:ニンジン斑紋ウイルス、
ネガティブssRNAウイルス:目:Mononegavirales、科:Rhabdoviridae、属:Cytorhabdovirus、代表種:レタスnecrotic yellowウイルス、属:Nucleorhabdovirus、代表種:ジャガイモ黄化えそウイルス、
ネガティブssRNAウイルス:科:Bunyaviridae、属:Tospovirus、代表種:トマト黄化えそウイルス;
dsRNAウイルス:科:Partitiviridae、属:Alphacryptovirus、代表種:シロクローバ潜伏ウイルス1、属:Betacryptovirus、代表種:シロクローバ潜伏ウイルス2、科:Reoviridae、属:Fijivirus、代表種:フィジー病ウイルス、属:Phytoreovirus、代表種:創傷腫瘍ウイルス、属:Oryzavirus、代表種:イネラッギドスタントウイルス;
ゲノム:dsDNA、種:キュウリ葉脈黄化ウイルス、ゲノム:dsRNA、種:タバコスタントウイルス、
ゲノム:ssDNA、種:ニンニクウイルスA、B、C、D、種:ブドウのつる斑紋ウイルス、種:トウモロコシ白線モザイクウイルス、種:オリーブ潜在ウイルス2、種:ウルミアメロンウイルス、種:ゼラニウム輪紋ウイルス;
サテライト及びウイロイド:サテライト:ssRNAサテライトウイルス:サブグループ2サテライトウイルス、代表種:タバコえそサテライト、
サテライトRNA、サブグループ2B型mRNAサテライト、サブグループ3C型線状RNAサテライト、サブグループ4D型環状RNAサテライト、
ウイロイド、代表種:ジャガイモ紡・型塊茎(spindle tuber)ウイロイド。
35−PVX起源の2つのベクターを構成した。プラスミドPVX−201をクローニングの基本構成体として用いた(チャップマン エスら(Chapman S et al.)、Plant J 1992年7月、第2巻4号、549〜57ページ)。このプラスミドは、35Sプロモーター及びnosターミネーターに融合させたジャガイモウイルスX(PVX)ゲノムの全長cDNA(遺伝子バンク受入れ番号NC 001455、AF172259)を含む。CPサブゲノムプロモーター領域が重複しており、いくつかのクローニング部位がPVX−201における重複した領域の間に挿入されている(図3を参照)。
互いにアニーリングした後、対応するオリゴヌクレオチドが以下の2本鎖DNA断片を形成する。
D1及びD2の場合、5’突出端がCIaI/SaII制限DNAに付着する。断片A1及び断片A2は、HindIII−NcoI部位に連結反応させることができる。
Biolistic PDS−1000/He粒子送達系(バイオラド(Bio−Rad))を用いて微粒子銃を実施した。マクロキャリア発射点から停止スクリーンまでの距離を15mm、停止スクリーンから標的組織までの距離を60mmとして、別個のN.benthamiana葉に63.3kg/cm2(900psi)で衝撃を与えた。破裂板とマクロキャリアの発射点との間の距離は12mmであった。浸透前処理の4時間後に細胞をボンバードした。
プラスミドを大腸菌株DH10B及びJM109に導入して形質転換し、できるだけ多量の調整物をLB培地中で増殖させ、キアゲン(Qiagen)キットを用いてDNAを精製した。
5〜7週齢のNicotiana benthamiana植物の十分に発育した葉に機械的創傷形成によりプラスミドDNAを接種した。この目的のために、10〜50μgのDNAを3×GKP緩衝液(50mMグリシン、30mM K2HPO4、3%セライト、3%ベントナイト)と混合し、葉の上側に緩やかにこすりつけた。
十分に発育したN.benthamiana葉にプラスミドpIC3242及びpIC3258で衝撃を与えた。これらのプラスミド(完全なもの及びスプライシングしたもの)(図2を参照)のそれぞれから2種のRNA転写物を合成することが可能であると予想された。
pIC1321からのアクチン2プロモーター−LoxP−Cre Orf−Nosターミネーター断片をNot1ブラント−SacI断片としてバイナリーベクターpBIN19のSmaI及びSacI部位にサブクローンし、構成体pIC1593(図14)を得た。
a)システムの一般的説明
記述するシステムは、以下のLoxP組換え部位を運ぶ2つのコアタイプのCrTMV起源ベクターからなっている(図8)。
i)ベクタータイプ:ポリメラーゼ−MP−LoxP:ベクターはCrTMVのRdRP、及びウイルスを細胞から細胞へと移動させるが、植物体全体に移動させない移動タンパク質(MP)をコードする。ウイルス転写は、Arabidopsis−Actin2プロモーターにより制御されている。
ii)ベクタータイプ:LoxP−対象とする遺伝子−3’NTR−nos−ターミネーター(図8a〜cを参照):このクラスのベクターはリポーター遺伝子(sGFP又はGUS)及び調節エレメントをコードする(nos:ノパリンシンターゼターミネーター、3’NTR:CrTMVの非翻訳領域、シュードノット及びtRNA様構造)。コートタンパク質(CP、図8bを参照)の発現はベクターが宿主植物全体に広がることを可能にする。
iii)ベクタータイプ:ポリメラーゼ−MP−attP:i)を参照、attP−組換え部位を含む。
iiii)ベクタータイプ:attB−対象とする遺伝子−3’NTR−nos−ターミネーター(図15a〜cを参照):ii)を参照、attB−組換え部位を含む。
A.ベクタータイプポリメラーゼ−MP−LoxPのクローニング(図9)
MPのEcoRI−XhoIの断片をプラスミドpIC3312から取り(図5)、反対の配向の2つのLoxP部位を運ぶプラスミドpIC1212にクローンした。プラスミドpIC3342のMP遺伝子は、自然停止の前に25AAを導入された終止コドンを含む。得られた産物pIC3431において、MP遺伝子の一部を含む断片がLoxP部位の次に位置している。両エレメントは、EcoRI−SacI制限により分離される。SacI制限部位を平滑化した後、断片を、MP遺伝子における単一EcoRI制限部位を含むプラスミドpIC3301のベクター含有部分にクローンした。NotI(平滑化した)を第2の制限部位として選択した。得られる連結反応産物(pIC3461)においては、CP遺伝子、IRES配列、sGFPの遺伝子及びpIC3301の3’非翻訳領域がLoxPによって置換されている(図9)。
a)構成体LoxP−sGFP−3’NTR−nos(図8a)
Ωリーダー配列に隣接するLoxP部位を運ぶXhoI−NcoI断片をベクターpIC2744から取った。配列をリポーター遺伝子に隣接させるために、断片を、sGFPの遺伝子及び3’NTR配列に隣接する適切な制限部位を含むプラスミドpIC1721にクローンした。IRES配列を断片で置換することにより、プラスミドpIC3421が得られる。nosターミネーター配列を加えるために、プラスミドpIC3421をKpnI及びNotIで切断した。断片を、プラスミドpIC3232のベクター含有部分に導入して、最終構成体pIC3441を得ることができた(図10及び8aを参照)。
上述のプラスミドpIC3342及びpIC1212を開始ベクターとして用いた。CP及びsGFPの遺伝子を含むpIC3342のPstI−SacI断片をpIC1212にクローンした。その結果、LoxP部位が、産物pIC3451におけるCP及びsGFPに隣接して位置している。nosターミネーター配列を加えるために、a)の場合と同様なアプローチを用いた。すなわち、pIC3451のEcoRI−NotI断片をpIC3232のベクター含有部分に導入して、プラスミドpIC3491を得た(図11を参照)。
プラスミドpIC751は、pIC1721に類似しており、sGFPの代わりにGUSリポーター遺伝子を運ぶ。NcoI及びNotIで切断することにより、GUS遺伝子及び3’非翻訳領域をpIC3441に直接クローンして、最終構成体pIC3521を得ることができる(図12)。
別個のN.benthamiana葉に、pIC3441(LoxP−GFP、図10)、pIC3461(アクチン2プロモーター−CrTMV RdRp−MP−LoxP、図9)及びpIC2721(hbtプロモーターの制御下のCre−レコンビナーゼ)の3種のプラスミド混合物で粒子衝撃を加えた。衝撃の38時間後にGFP蛍光がいくつかの多細胞座に検出された。蛍光及び感染領域の大きさの著しい増加が翌日認められた(湿潤ろ紙上25℃でインキュベートした衝撃済みの葉)。pIC3461を用いず、pIC3441とpIC2721で衝撃を加えた対照葉では、GFP蛍光は検出されなかった。
別個のN.benthamianaに、以下のいくつかのプラスミドの混合物で粒子衝撃を加えた。
a)pIC3441(LoxP−GFP、図10)、pIC3461(アクチン2プロモーター−CrTMV RdRp−MP−LoxP、図9)及びpIC2721(hbtプロモーターの制御下のCre−レコンビナーゼ)、pIC3521(LoxP−GUS、図12)。
b)pIC3441(LoxP−GFP、図10)、pIC3461(アクチン2プロモーター−CrTMV RdRp−MP−LoxP、図9)及びpIC2721(hbtプロモーターの制御下のCre−レコンビナーゼ)、pIC3491(LoxP−CP、図11)。
CrTMVウイルスに基づくスプライシング可能なプロベクターは、PVX起源のものと比べて確かな利点を有する。図4に示すシステムは、感染した葉において十分に機能できるウイルスのリポーター遺伝子発現システムを創製することを可能にする。PVXと異なり、CrTMVのコートタンパク質はウイルスの細胞間移動に必要でなく、したがって、スプライシングは感染した葉におけるウイルスの広がりに影響を及ぼさない。
CrTMVのクローン化cDNA及び以下のプライマーを用いてPCR断片を得た。
MPERI+(EcoRI部位を含むMPの中間領域に対応する−CrTMVゲノムにおける位置5455):GTGGTTGACGAATTCGTC
MP−(下流ClaI及びXhoI部位を含む人工ターミネーターを導入する自然終止コドンの上流のMP17aaのC末端と相補的。また、このプライマーは、MPにおけるアミノ酸の変化を伴わない、CP遺伝子の自然の開始を除くCP ATGのACGへの点突然変異も含む):GGTCTCGAGTTATCGATTATTCGGG−TTTGTAATGTTGTAAGACGTTTTCTTCTTTC
CP+(ATGの上流に導入されたXhoI及びPstIを含むCP遺伝子の始まりに対応する):TAACTCGAGACCTGCAGCATGTCTTACAACATTACAAACC−CGAATCAG
CP−(CP遺伝子におけるNcoI部位を除去するための単一ヌクレオチド置換を導入するCPのC末端と相補的。また、このプライマーはCP遺伝子の下流にHindIII及びNcoIも導入する):CTACTCCATGGTCAAGCTTAAGTAGC−AGCAGCAGTAGTCCACGGCACC
供与及び受容スプライス部位を含む実施例1で述べたdsDNA断片を、供与スプライス部位の場合にはClaI及びXhoIを、受容スプライス部位の場合にはHindIII及びNcoIを用いて、pIC3312にクローンした(図6を参照)。得られたプラスミドをpIC3378(供与部位)及びpIC3382(受容部位)と名付けた。
別個のN.benthamiana葉に、pIC3393及びpIC3401で粒子衝撃を加えた。pIC3393の場合、衝撃の48時間後にGFP蛍光がいくつかの多細胞座に検出された。対照構成体pIC3401で衝撃を加えた葉では、GFP蛍光は認められなかった。
a)システムの一般的説明
記述するシステムは、以下のattB又はattP組換え部位を運ぶ2つのコアタイプのCrTMV起源ベクターからなっている(図15)。
i)ベクタータイプ:ポリメラーゼ−MP−attP:ベクターはCrTMVのRdRp、及びウイルスを細胞から細胞へと移動させるが、植物体全体に移動させない移動タンパク質(MP)をコードする。ウイルス転写は、Arabidopsis−Actin2プロモーターにより制御されている。
ii)ベクタータイプ:attB−対象とする遺伝子−3’NTR−nos−ターミネーター(図15a〜b):このクラスのベクターはレポーター遺伝子(sGFP又はGUS)及び調節要素をコードする(nos:ノパリンシンターゼターミネーター、3’NTR:CrTMVの非翻訳領域、シュードノット及びtRNA様構造)。
iii)ベクタータイプ:attB−ユビキチン−対象とする遺伝子−3’NTR−nos−ターミネーター(図15c):植物から分離することができる定義されているタンパク質を得るために、ユビキチン切断シグナル配列をattB組換え部位と下流に位置する対象とする遺伝子(例えば、GFP、インターフェロンa2B、インスリン又はソマトトロピン)との間に導入した。このシステムを用いて、プロリンを除くあらゆるアミノ酸を合成されるアミノ酸の最初のアミノ酸として選択することが可能である。
A)ベクタータイプ:ポリメラーゼ−MP−attPのクローニング(図16)
KpnI−XhoI断片をプラスミドpIC3461から取った(図16)。XhoI制限部位を平滑化した後、断片を、直進配向の2つのattB部位、左右のT−DNAボーダー(LB及びRB)及び植物形質転換のマーカーとしてのカナマイシン発現カセットを運ぶバイナリーベクターpIC3994にクローンした。Cre/Loxシステムからの類似のクローンと同様に、得られたプラスミドpIC4851は、自然停止の前に25AAを導入された終止コドンを含むMPを運ぶ。
a)構成体attB−sGFP−3’NTR−nos
プライマーの組合せA)
attB Xho(+):ATCACTCGAGCTCGAAGCCGCGGTGCGGGT:attBの5’部分と相補的で、5’末端におけるXhoI制限部位を運ぶ。
attB Ω(−):GGTAATTGTTGTAAAAATACGATGGGTGAAGGTGGAGTACG:プライマーの3’部分はattB配列の3’領域に対応し、5’部分はΩ要素の5’部分と相補性を有する20ヌクレオチドを含む。
attB Ω(+):CGTACTCCACCTCACCCATCGTATTTTTACAACAATTACC:プライマーの3’部分はΩ配列の5’領域に対応し、5’部分はattB要素の5’部分と相補性を有する20ヌクレオチドを含む。
Ω NcoI(−):CATGCCATGGGTAATTGTAAATAGTAATTGTAATGTT:Ωの3’部分に相同的で、5’末端におけるNcoI制限部位を運ぶ。
ユビキチン配列とインターフェロンα2Bとの融合体をattB−3’−プロベクターにクローンするために、両配列を融合体として合成し、pUC19にクローンした(プラスミドpUC5760を得る)。ベクターをNcoI及びPstIで消化し、プラスミドpICH5781の対応する制限部位に連結させた。得られたプラスミドpICH5951は、attB組換え部位、ユビキチン−インターフェロン融合、3’非翻訳領域、nosプロモーター及びカナマイシン発現カセットを含む。前記の全配列にはT−DNAボーダー(LB及びRB、図19を参照)が両端に隣接する。
ポリメラーゼ−MPを運ぶLoxPプロベクターをバイナリーベクターにクローンするために、KpnI/XhoI及びXhoI/HindIII断片をともに、HindIII及びKpnIで消化したベクターpICBV10に連結させた。得られたプラスミドpICH4371は、アグロバクテリウムに安定に形質転換させることが可能である(図21)。
E)と同様のクローニング戦略を用いて、LoxPリポーター遺伝子ベクターをバイナリーベクターにクローンした。プラスミドpICH3441を酵素KpnI及びHindIIIで消化した。得られた断片をpICBV10の対応する側に挿入して、バイナリープラスミドpICH4461を得た(図22を参照)。
Cre/Lox及びインテグラーゼ/attシステムのすべてのプロベクターを、アグロバクテリアに安定に形質転換させることができるバイナリーベクターにクローンした。したがって、記述した技術の代わりのDNA送達法が利用可能である。
構成体pICH4371及びpICH4461を浸透させた、形質転換したタバコ植物(形質転換した構成体:pICH1754、Nicotiana tabacum種)の葉は、浸透16日後に完全な植物について顕微鏡を用いずにUV光のもとで観察することができた強いGFP発現の成長しつつあるセクターを示した。同じアグロバクテリア懸濁液混合物を浸透させた野生型の葉ではGFP発現は見られなかった。
プロモーターと下流にある遺伝子との間のatt及びLoxP組換え部位の存在は、翻訳の効率を制限する。したがって、ほとんどの場合、プロベクターシステムにおける適切なレベルのリポーター遺伝子発現を達成するために翻訳促進要素を使用する必要がある。attB組換え部位とGFPとの間のそれぞれウイルスIRES配列IRESmp75(U1)又はIRESmp75(cr)のクローニングは、明らかにリポーター遺伝子の発現を増大させる。翻訳エンハンサーを運ばないGFP含有プロベクターを浸透させた植物は10日後に検出可能なGFP発現をほとんど示さないのに対して、前記IRES配列の使用により、5日後に顕微鏡を用いずにUV光のもとで検出することができるGFPの発現がもたらされた。IRESmp75に基づく翻訳エンハンサー活性によりもたらされる対象とする遺伝子の発現のレベルは、「オメガ」翻訳エンハンサーによりもたらされる発現のレベルと同等又は高い。
Claims (24)
- 植物、植物組織、植物細胞又は細胞培養において、対象とする1つ又は複数の核酸配列の増幅及び/又は発現をもたらす方法であって、植物細胞に、前記細胞内で少なくとも2つのベクター前駆体間の部位特異的な組換えを受けるように設計されている少なくとも2つのベクター前駆体を供給し、前記部位特異的な組換えにより前記植物細胞が前記増幅及び/又は発現を可能にする少なくとも1つのレプリコンを与えることを特徴とする、当該ベクター前駆体が植物ウイルス起源である上記方法。
- 植物細胞へのベクター前駆体の前記供給を、ウイルストランスフェクション、アグロバクテリウム媒介送達、非生物学的送達、若しくは1つのベクター前駆体又は複数のベクター前駆体を形成するために植物核DNA中にあらかじめ組み込んだベクター前駆体の前駆体DNAの変換によって行う請求項1に記載の方法。
- 前記ベクター前駆体がDNAウイルス起源のものである請求項1〜2のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ベクター前駆体がRNAウイルス起源のものである請求項1〜2のいずれか一項に記載の方法。
- 前記部位特異的組換えが、一次ベクター前駆体(A)と少なくとも2つの二次ベクター前駆体の組(B1、B2、...、Bn)[nは2以上の整数]との部位特異的組換えによるAB1、AB2、...、ABn型又はB1A、B2A、...、BnA型の少なくとも2つのレプリコンの組の生成を含む請求項1に記載の方法。
- 前記植物細胞が野生型である請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 植物細胞内の前記スプライシング又は部位特異的組換えに必要な機能を与えるために、前記植物細胞を遺伝子操作された請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- レプリコン複製、ウイルス粒子集合、感染力、宿主による発現抑制の抑制、逆転写、宿主染色体への組込み、前記レプリコンの細胞間又は長距離移動若しくは組換え又はスプライシングに必要な1つ又は複数の機能をトランスで(in trans)与えるように、前記植物細胞を遺伝子操作された請求項7記載の方法。
- 前記植物細胞の前記遺伝子操作を、一時的発現、ウイルス又はアグロバクテリウム媒介トランスフェクション又は前記植物細胞の核若しくは細胞小器官のゲノムへの安定な組込みにより行う請求項7又は8に記載の方法。
- 少なくとも2つのベクター前駆体分子の前記組換えが、レプリコン内の発現可能な遺伝子のin vivo集合をもたらし、それにより、プロモーター、転写エンハンサー、ターミネーター、対象とするタンパク質のコーディング部分、シグナル又は輸送又は膜輸送ペプチドのような異なる機能遺伝子モジュールの結合をもたらし、前記異なる機能遺伝子モジュールが最初に2つ又は複数の前記前駆体分子上にある請求項1に記載の方法。
- 対象とする2つ又は複数の核酸配列の増幅及び/又は発現をもたらす請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記方法が、1つの生化学的経路又はカスケードの同義遺伝子の増幅及び/又は発現をもたらす請求項11記載の方法。
- 1つ又は複数の前記レプリコンが、ウイルス粒子集合、感染力、遺伝子発現抑制の抑制、逆転写、宿主染色体への組込み、細胞間移動又は長距離移動等の付加的なウイルス能力を保持している請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記レプリコンのうちの1つが、他の1つのレプリコン又は複数のレプリコンの複製に必要な条件をトランスで与える野生型ウイルスである請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記レプリコンのうちの1つが、他の1つのレプリコン又は複数のレプリコンの複製に必要な機能をトランスで与えるヘルパー型ウイルスである請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記レプリコンの1つが、他の1つのレプリコン又は複数のレプリコンの複製、逆転写、宿主染色体への組込みに必要な機能をトランスで与える野生型のレトロウイルス又はレトロトランスポゾンである請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記レプリコンの少なくとも2つが相互に機能的に協同している請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記レプリコンの少なくとも1つがさらに、前記レプリコンを複製するのに必要な産物の発現をもたらす請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記レプリコンの少なくとも1つがさらに、細胞間、長距離又は植物間移動、遺伝子発現抑制の抑制、逆転写、宿主染色体への組込みに必要な産物の発現をもたらす請求項1〜18のいずれか一項に記載の方法。
- 前記レプリコンの1つが、対象とするタンパク質をコードする異種核酸配列に作動可能なように連結された翻訳エンハンサーとしてのIRESmp75を含む請求項1〜19のいずれか一項に記載の方法。
- 植物細胞に、前記細胞内でスプライシング又は部位特異的組換えを受けるように設計されている少なくとも2つのベクター前駆体を供給する請求項1〜20のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1〜21のいずれか一項に記載の対象とする1つ又は複数の核酸配列の増幅及び/又は発現を含む、生化学的産物を生産する方法。
- 生化学的産物がタンパク質である請求項22記載の方法。
- 請求項1〜21のいずれか一項に記載の対象とする1つ又は複数の核酸配列の増幅及び/又は発現を含む、遺伝子の機能を確定する方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE10121283A DE10121283B4 (de) | 2001-04-30 | 2001-04-30 | Verfahren und Vektoren zur Amplifikation oder Expression von gewünschten Nucleinsäuresequenzen in Pflanzen |
PCT/EP2002/003476 WO2002088369A1 (en) | 2001-04-30 | 2002-03-27 | Processes and vectors for amplification or expression of nucleic acid sequences of interest in plants |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2004531260A JP2004531260A (ja) | 2004-10-14 |
JP4546029B2 true JP4546029B2 (ja) | 2010-09-15 |
Family
ID=7683343
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002585649A Expired - Lifetime JP4546029B2 (ja) | 2001-04-30 | 2002-03-27 | 植物における対象とする核酸配列の増幅及び発現に用いる方法及びベクター |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7667092B2 (ja) |
EP (1) | EP1385968B1 (ja) |
JP (1) | JP4546029B2 (ja) |
AT (1) | ATE449181T1 (ja) |
AU (1) | AU2002302475B2 (ja) |
CA (1) | CA2439199C (ja) |
DE (2) | DE10121283B4 (ja) |
DK (1) | DK1385968T3 (ja) |
ES (1) | ES2335272T3 (ja) |
MX (1) | MXPA03008667A (ja) |
WO (1) | WO2002088369A1 (ja) |
Families Citing this family (47)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10049587A1 (de) * | 2000-10-06 | 2002-05-02 | Icon Genetics Ag | Vektorsystem für Pflanzen |
DE10061150A1 (de) | 2000-12-08 | 2002-06-13 | Icon Genetics Ag | Verfahren und Vektoren zur Erzeugung von transgenen Pflanzen |
DE10102389A1 (de) | 2001-01-19 | 2002-08-01 | Icon Genetics Ag | Verfahren und Vektoren zur Plastidentransformation höherer Pflanzen |
DE10114209A1 (de) | 2001-03-23 | 2002-12-05 | Icon Genetics Ag | Ortsgerichtete Transformation durch Verwendung von Amplifikationsvektoren |
DE10115507A1 (de) | 2001-03-29 | 2002-10-10 | Icon Genetics Ag | Verfahren zur Kodierung von Information in Nukleinsäuren eines genetisch veränderten Organismus |
DE10121283B4 (de) | 2001-04-30 | 2011-08-11 | Icon Genetics GmbH, 80333 | Verfahren und Vektoren zur Amplifikation oder Expression von gewünschten Nucleinsäuresequenzen in Pflanzen |
DE10132780A1 (de) | 2001-07-06 | 2003-01-16 | Icon Genetics Ag | Plastidäre Genexpression über autonom replizierende Vektoren |
DE10143238A1 (de) * | 2001-09-04 | 2003-03-20 | Icon Genetics Ag | Identifizierung eukaryotischer interner Ribosomen-Eingangsstellen (IRES)-Elemente |
DE10143237A1 (de) * | 2001-09-04 | 2003-03-20 | Icon Genetics Ag | Herstellung künstlicher interner ribosomaler Eingangsstellenelemente (Ires-Elemente) |
DE10143205A1 (de) * | 2001-09-04 | 2003-03-20 | Icon Genetics Ag | Verfahren zur Proteinproduktion in Pflanzen |
DE10254166A1 (de) * | 2002-11-20 | 2004-06-03 | Icon Genetics Ag | Verfahren zur Kontrolle eines zellulären Prozesses in Pflanzen |
DE10254165A1 (de) * | 2002-11-20 | 2004-06-03 | Icon Genetics Ag | Verfahren zur Kontrolle eines zellulären Prozesses in einem multizellulären Organismus |
DE10254167A1 (de) | 2002-11-20 | 2004-06-09 | Icon Genetics Ag | Verfahren zur Kontrolle von zellulären Prozessen in Pflanzen |
ES2322809T3 (es) | 2003-01-31 | 2009-06-29 | Icon Genetics Gmbh | Metodo de transformacion de plantas con ensamblaje in vivo de un tratamiento. |
DE10303937A1 (de) | 2003-01-31 | 2004-08-12 | Icon Genetics Ag | Pflanzentransformation mit Assemblierung einer gewünschten Sequenz in Vivo |
KR101454842B1 (ko) * | 2003-03-20 | 2014-11-04 | 알파벡스, 인크. | 개선된 알파바이러스 레플리콘 및 헬퍼 구축물 |
DE10325814A1 (de) | 2003-06-06 | 2004-12-23 | Icon Genetics Ag | Sichere Erzeugung eines gewünschten Produkts in hybriden Samen |
DK1682667T3 (da) | 2003-11-10 | 2010-08-23 | Icon Genetics Gmbh | RNA-virus afledt plantekspressionssystem |
MXPA06003715A (es) | 2003-11-10 | 2006-06-23 | Icon Genetics Ag | Sistema de expresion de planta derivado de virus de arn. |
EP1564295A1 (en) * | 2004-01-23 | 2005-08-17 | Icon Genetics AG | RNA virus-derived plant expression system |
EP1616959A1 (en) | 2004-07-07 | 2006-01-18 | Icon Genetics AG | Biological safe transient protein expression in plants |
EP1686176A1 (en) | 2005-01-28 | 2006-08-02 | Icon Genetics AG | Production of antibodies in plants with plus-sense single-stranded viral RNA vectors |
US7592505B2 (en) * | 2005-12-30 | 2009-09-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | UDP-xylose synthases (UXS) polynucleotides, polypeptides, and uses thereof |
EP2010210A4 (en) | 2006-04-21 | 2010-07-21 | Dow Agrosciences Llc | VACCINE AGAINST BIRD FLUID AND METHOD OF APPLICATION THEREFOR |
US8624080B2 (en) * | 2006-05-29 | 2014-01-07 | Icon Genetics Gmbh | Plant virus-based inducible expression system |
EP1897953A1 (en) | 2006-09-06 | 2008-03-12 | Icon Genetics GmbH | Potexvirus-derived replicon |
EP2183368B1 (en) | 2007-06-21 | 2016-08-10 | Alphavax, Inc. | Promoterless cassettes for expression of alphavirus structural proteins |
EP2100961A1 (en) | 2008-03-04 | 2009-09-16 | Icon Genetics GmbH | Method of protease production in plants |
EP2443234B1 (en) | 2009-06-15 | 2018-08-15 | Icon Genetics GmbH | Nicotiana benthamiana plants deficient in xylosyltransferase activity |
EP2418283A1 (en) | 2010-08-07 | 2012-02-15 | Nomad Bioscience GmbH | Process of transfecting plants |
US9181532B2 (en) | 2011-07-29 | 2015-11-10 | Icon Genetics Gmbh | Production of galactosylated N-glycans in plants |
AU2012320847B2 (en) | 2011-10-04 | 2018-03-08 | Icon Genetics Gmbh | Nicotiana benthamiana plants deficient in fucosyltransferase activity |
EP2584042A1 (en) | 2011-10-17 | 2013-04-24 | Nomad Bioscience GmbH | Production, storage and use of cell wall-degrading enzymes |
US9694068B2 (en) | 2012-03-22 | 2017-07-04 | Pharma Green Llc | Methods and compositions to produce vaccines against smallpox in plants |
US9913890B2 (en) | 2012-06-22 | 2018-03-13 | Pharma Green Llc | Methods and compositions for emergency post-infection treatment of anthrax |
EP2647715A1 (en) | 2012-04-03 | 2013-10-09 | Nomad Bioscience GmbH | Agrobacterium for transient transfection of whole plants |
JP6453315B2 (ja) | 2013-05-23 | 2019-01-16 | ノマド・バイオサイエンス・ゲーエムベーハー | 植物に非生物的ストレス抵抗性をもたらす方法 |
EP3097783B1 (en) | 2015-05-26 | 2019-11-13 | Nomad Bioscience GmbH | Colicin m for the control of ehec |
EP3372091A1 (en) | 2017-03-07 | 2018-09-12 | Nomad Bioscience GmbH | Method of reducing contamination of an object with clostridium |
EP3378485A1 (en) | 2017-03-24 | 2018-09-26 | Nomad Bioscience GmbH | Bacteriocins for control of salmonella enterica |
ES2962273T3 (es) | 2017-06-02 | 2024-03-18 | Fraunhofer Ges Forschung | Procedimiento para la transformación automatizada de un paquete de células vegetales |
EP3456829A1 (en) | 2017-09-18 | 2019-03-20 | Nomad Bioscience GmbH | Method of improving potexviral vector stability |
JP2021514391A (ja) | 2018-02-15 | 2021-06-10 | アイコン ジェネティクス ゲーエムベーハー | ノロウイルスに対する免疫応答を生成するための免疫原性組成物及びワクチン |
CA3133030A1 (en) | 2019-03-12 | 2020-09-17 | Icon Genetics Gmbh | Norovirus-like particles with improved stability |
US20220227818A1 (en) | 2019-06-06 | 2022-07-21 | Nomad Bioscience Gmbh | Klebicins for the control of klebsilella |
US20230270145A1 (en) | 2020-07-16 | 2023-08-31 | Nomad Bioscience Gmbh | Products for oral consumption with reduced sugar content |
EP4248987A1 (en) | 2022-03-21 | 2023-09-27 | Nomad Bioscience GmbH | Chimeric bacteriocins and method for the control of pseudomonas |
Family Cites Families (57)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5466788A (en) * | 1985-03-07 | 1995-11-14 | Mycogen Plant Science, Inc. | Subgenomic promoter |
WO1987000551A1 (en) | 1985-07-16 | 1987-01-29 | The Salk Institute For Biological Studies | Genetic alteration of plants with retroviruses |
US6147278A (en) | 1985-10-25 | 2000-11-14 | Monsanto Company | Plant vectors |
GB8626878D0 (en) | 1986-11-11 | 1986-12-10 | Ici Plc | Dna |
US5811653A (en) * | 1992-12-30 | 1998-09-22 | Biosource Technologies, Inc. | Viral amplification of recombinant messenger RNA in transgenic plants |
US5316931A (en) * | 1988-02-26 | 1994-05-31 | Biosource Genetics Corp. | Plant viral vectors having heterologous subgenomic promoters for systemic expression of foreign genes |
US5922602A (en) | 1988-02-26 | 1999-07-13 | Biosource Technologies, Inc. | Cytoplasmic inhibition of gene expression |
US6174700B1 (en) | 1988-07-08 | 2001-01-16 | University Of British Columbia | Purification of a polypeptide compound having a polysaccharide binding domain by affinity phase separation |
FR2649518B1 (fr) | 1989-07-07 | 1991-10-18 | Bioprobe Systems Sa | Procede et dispositif de marquage crypte de haute securite pour la protection d'objets de valeur |
US5464764A (en) | 1989-08-22 | 1995-11-07 | University Of Utah Research Foundation | Positive-negative selection methods and vectors |
US5658772A (en) * | 1989-12-22 | 1997-08-19 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Site-specific recombination of DNA in plant cells |
US5877402A (en) | 1990-05-01 | 1999-03-02 | Rutgers, The State University Of New Jersey | DNA constructs and methods for stably transforming plastids of multicellular plants and expressing recombinant proteins therein |
US5474925A (en) | 1991-12-19 | 1995-12-12 | Agracetus, Inc. | Immobilized proteins in cotton fiber |
US5496934A (en) | 1993-04-14 | 1996-03-05 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Nucleic acids encoding a cellulose binding domain |
US5576198A (en) | 1993-12-14 | 1996-11-19 | Calgene, Inc. | Controlled expression of transgenic constructs in plant plastids |
US5723765A (en) | 1994-08-01 | 1998-03-03 | Delta And Pine Land Co. | Control of plant gene expression |
US5633447A (en) * | 1994-08-25 | 1997-05-27 | Mycogen Plant Science, Inc. | Plant tissue comprising a subgenomic promoter |
CA2206486A1 (en) | 1994-12-08 | 1996-06-13 | Peter Alestrom | Chemical labelling of objects |
US5801030A (en) * | 1995-09-01 | 1998-09-01 | Genvec, Inc. | Methods and vectors for site-specific recombination |
US6037525A (en) | 1996-08-01 | 2000-03-14 | North Carolina State University | Method for reducing expression variability of transgenes in plant cells |
CA2264489A1 (en) | 1996-09-09 | 1998-03-12 | Loyola University Of Chicago | Plant retroviral polynucleotides and methods for use thereof |
US5939541A (en) | 1997-03-28 | 1999-08-17 | University Of South Carolina | Method for enhancing expression of a foreign or endogenous gene product in plants |
FI972293A (fi) | 1997-05-30 | 1998-12-01 | Joseph Atabekov | Useamman kuin yhden geenin yhteisekspressiomenetelmät |
CA2306053C (en) * | 1997-11-18 | 2003-01-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Mobilization of viral genomes from t-dna using site-specific recombination systems |
ATE401410T1 (de) * | 1997-11-18 | 2008-08-15 | Pioneer Hi Bred Int | Zusammensetzungen und verfahren für die genetische modifizierung von pflanzen |
CA2318662A1 (en) | 1998-01-16 | 1999-07-22 | Biosource Technologies, Inc. | Method of determining the function of nucleotide sequences and the proteins they encode by transfecting the same into a host |
WO2000017365A2 (en) * | 1998-09-23 | 2000-03-30 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Binary viral expression system in plants |
GB9821303D0 (en) | 1998-10-01 | 1998-11-25 | Novartis Ag | Organic compounds |
WO2000068391A1 (en) | 1998-10-23 | 2000-11-16 | University Of British Columbia | Expression of a mannan binding domain to alter plant morphology |
CA2352464A1 (en) | 1998-11-25 | 2000-06-08 | Calgene Llc | Methods for transforming plastids |
JP2003518915A (ja) * | 1999-03-05 | 2003-06-17 | メルク アンド カンパニー インコーポレイテッド | アデノウイルスベクターを構築する増強された系 |
EP1045037A1 (en) | 1999-04-12 | 2000-10-18 | Discovery Biotech., Inc. | Plant cell identification system |
ATE347617T1 (de) | 1999-05-06 | 2006-12-15 | Sinai School Medicine | Steganographie auf dna basis |
ATE385172T1 (de) | 1999-05-17 | 2008-02-15 | Icon Genetics Inc | Schnelles, von der varietät unabhängiges pflanzentransformationsverfahren |
US6331416B1 (en) | 1999-06-10 | 2001-12-18 | Cbd Technologies Ltd. | Process of expressing and isolating recombinant proteins and recombinant protein products from plants, plant derived tissues or cultured plant cells |
CA2375831A1 (en) | 1999-06-24 | 2000-12-28 | Metabolix, Inc. | Plant multi-gene expression constructs |
EP1200557B1 (en) | 1999-08-05 | 2006-04-26 | Icon Genetics, Inc. | Method of making plant artificial chromosomes |
AU3120601A (en) | 2000-01-28 | 2001-08-07 | Scripps Research Inst | Methods of identifying synthetic transcriptional and translational regulatory elements, and compositions relating to same |
WO2001059138A2 (en) | 2000-02-10 | 2001-08-16 | Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw | Plant internal ribosome entry segment |
US20030188337A1 (en) * | 2000-04-20 | 2003-10-02 | Anil Day | Transgenic plants |
WO2001081605A2 (en) * | 2000-04-26 | 2001-11-01 | Monsanto Technology Llc | Method for the transformation of plant cell plastids |
GB0019745D0 (en) | 2000-08-10 | 2000-09-27 | Univ Surrey | Gene expression element |
DE10049587A1 (de) | 2000-10-06 | 2002-05-02 | Icon Genetics Ag | Vektorsystem für Pflanzen |
DE10061150A1 (de) | 2000-12-08 | 2002-06-13 | Icon Genetics Ag | Verfahren und Vektoren zur Erzeugung von transgenen Pflanzen |
DE10101276A1 (de) | 2001-01-12 | 2002-07-18 | Icon Genetics Ag | Verfahren und Vektoren zur Transformation von Plastiden |
DE10102389A1 (de) | 2001-01-19 | 2002-08-01 | Icon Genetics Ag | Verfahren und Vektoren zur Plastidentransformation höherer Pflanzen |
DE10109354A1 (de) | 2001-02-27 | 2002-09-05 | Icon Genetics Ag | Rekombinante virale Schaltersysteme |
DE10114209A1 (de) | 2001-03-23 | 2002-12-05 | Icon Genetics Ag | Ortsgerichtete Transformation durch Verwendung von Amplifikationsvektoren |
DE10115507A1 (de) | 2001-03-29 | 2002-10-10 | Icon Genetics Ag | Verfahren zur Kodierung von Information in Nukleinsäuren eines genetisch veränderten Organismus |
DE10121283B4 (de) | 2001-04-30 | 2011-08-11 | Icon Genetics GmbH, 80333 | Verfahren und Vektoren zur Amplifikation oder Expression von gewünschten Nucleinsäuresequenzen in Pflanzen |
DE10129010A1 (de) | 2001-06-13 | 2002-12-19 | Icon Genetics Ag | Verfahren und Vektoren zur Erzeugung von transgenen Pflanzen |
DE10131680A1 (de) | 2001-06-29 | 2003-01-23 | Voith Paper Patent Gmbh | Auftragsvorrichtung |
DE10131690A1 (de) | 2001-06-29 | 2003-01-16 | Icon Genetics Ag | Verfahren zum kontrollierten Umordnen von Chromosomenfragmenten für die Pflanzenzucht |
DE10132780A1 (de) | 2001-07-06 | 2003-01-16 | Icon Genetics Ag | Plastidäre Genexpression über autonom replizierende Vektoren |
DE10143237A1 (de) | 2001-09-04 | 2003-03-20 | Icon Genetics Ag | Herstellung künstlicher interner ribosomaler Eingangsstellenelemente (Ires-Elemente) |
DE10143205A1 (de) | 2001-09-04 | 2003-03-20 | Icon Genetics Ag | Verfahren zur Proteinproduktion in Pflanzen |
DE10143238A1 (de) | 2001-09-04 | 2003-03-20 | Icon Genetics Ag | Identifizierung eukaryotischer interner Ribosomen-Eingangsstellen (IRES)-Elemente |
-
2001
- 2001-04-30 DE DE10121283A patent/DE10121283B4/de not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-03-27 DK DK02730072T patent/DK1385968T3/da active
- 2002-03-27 JP JP2002585649A patent/JP4546029B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-03-27 ES ES02730072T patent/ES2335272T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-03-27 WO PCT/EP2002/003476 patent/WO2002088369A1/en active Application Filing
- 2002-03-27 DE DE60234437T patent/DE60234437D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-03-27 EP EP02730072A patent/EP1385968B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-03-27 AU AU2002302475A patent/AU2002302475B2/en not_active Expired
- 2002-03-27 CA CA2439199A patent/CA2439199C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-03-27 MX MXPA03008667A patent/MXPA03008667A/es active IP Right Grant
- 2002-03-27 AT AT02730072T patent/ATE449181T1/de active
- 2002-03-27 US US10/476,299 patent/US7667092B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2335272T3 (es) | 2010-03-24 |
DE60234437D1 (de) | 2009-12-31 |
ATE449181T1 (de) | 2009-12-15 |
US7667092B2 (en) | 2010-02-23 |
AU2002302475B2 (en) | 2007-11-01 |
EP1385968B1 (en) | 2009-11-18 |
WO2002088369A1 (en) | 2002-11-07 |
JP2004531260A (ja) | 2004-10-14 |
DE10121283B4 (de) | 2011-08-11 |
CA2439199C (en) | 2014-10-07 |
US20040255347A1 (en) | 2004-12-16 |
CA2439199A1 (en) | 2002-11-07 |
EP1385968A1 (en) | 2004-02-04 |
DE10121283A1 (de) | 2002-10-31 |
MXPA03008667A (es) | 2004-10-15 |
DK1385968T3 (da) | 2010-01-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4546029B2 (ja) | 植物における対象とする核酸配列の増幅及び発現に用いる方法及びベクター | |
AU2002302475A1 (en) | Processes and vectors for amplification or expression of nucleic acid sequences of interest in plants | |
JP4560266B2 (ja) | 植物における遺伝子発現を調節するための組換えウイルススイッチ | |
EP2240589B1 (en) | Protein expression systems | |
JP5172828B2 (ja) | 植物ウイルスに基づいた誘導性発現システム | |
US8597950B2 (en) | Two-component RNA virus-derived plant expression system | |
JP5015012B2 (ja) | 植物におけるヘテロ‐オリゴマータンパク質の産生 | |
AU2002235918A1 (en) | Recombinant viral switches for the control of gene expression in plants | |
EP1115870A2 (en) | Binary viral expression system in plants | |
JP2004510438A (ja) | 植物用ベクター系 | |
AU2002214003A1 (en) | Virus-based amplification vector for plants | |
WO2006012906A1 (en) | Rna virus-derived plant expression system | |
Bashir | Recent developments in design and application of plant virus-based gene vectors | |
AU1441000A (en) | Binary viral expression system in plants |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050128 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080620 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20080902 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080910 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20091120 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100323 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20100602 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100622 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100701 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130709 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4546029 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |