JP4486684B2 - 多重アレイの多重特異的な電気化学発光試験 - Google Patents
多重アレイの多重特異的な電気化学発光試験 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4486684B2 JP4486684B2 JP2008026822A JP2008026822A JP4486684B2 JP 4486684 B2 JP4486684 B2 JP 4486684B2 JP 2008026822 A JP2008026822 A JP 2008026822A JP 2008026822 A JP2008026822 A JP 2008026822A JP 4486684 B2 JP4486684 B2 JP 4486684B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- binding
- electrode
- ecl
- measurement
- reagent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/66—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light electrically excited, e.g. electroluminescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54373—Apparatus specially adapted for solid-phase testing involving physiochemical end-point determination, e.g. wave-guides, FETS, gratings
- G01N33/5438—Electrodes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y15/00—Nanotechnology for interacting, sensing or actuating, e.g. quantum dots as markers in protein assays or molecular motors
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y30/00—Nanotechnology for materials or surface science, e.g. nanocomposites
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/808—Optical sensing apparatus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/968—High energy substrates, e.g. fluorescent, chemiluminescent, radioactive
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/805—Optical property
Description
本発明は、電気化学発光(electrochemiluminescence)に基づく試験のためのパターン付けした多重アレイの多重特異的な表面(PMAMS)、さらにはPMAMSの製造法と使用法を提供する。
2.1.診断用測定法
迅速で感度の高い診断技術に対する強い経済的なニーズが存在する。診断技術は、医療、研究、農業、獣医学、および工業市場などの種々の経済的市場において重要である。感度、必要時間、使用の簡便さ、頑丈さ、またはコストを改良すれば、これまでいずれの技術でも市場ニーズに応えることのできなかった、全く新規な診断市場を開発することができるであろう。高感度を有する診断技術もあるが、市場ニーズに応えるには高価過ぎる。また他の技術は、費用効果が高くても、種々の市場にとって頑丈さが足りない。これらの品質を組合せることのできる新規な診断技術は、診断薬事業において顕著な進歩であり好機である。
電気化学発光(「ECL」)は、電気的に励起した分子種が、光子を放射する現象である(例えば、リーランド(Leland)とパウエル(Powell)、1990,J.Electrochem.Soc.137(10):3127−3131を参照のこと)。ECLが誘導される分子種はECL標識物と呼ばれ、本明細書においてはTAGとも呼ぶ。一般に使用されるECL標識は、例えば金属がRu含有およびOs含有有機金属化合物[例えば、バード(Bard)ら(米国特許第5,238,808号)により開示されている、Ru(2,2’−ビピリジン)3 2+残基(「Rubpy」とも呼ばれる)]を含む第VIII族の貴金属由来の有機金属化合物を含む。「TAG1」および「Rubpy」はまた、Ru(2,2’−ビピリジン)3 2+残基の誘導体を意味する。ECLに基づく検出系の基本は、光子を放射させるためにECL標識物を励起させる電位が必要なことである。ある電位波形が、電極表面(典型的には金属表面)と対電極にわたるECL測定溶液に適用される(例えば、米国特許第5,068,088号、5,093,268号、5,061,445号、5,238,808号、5,147,806号、5,247,243号、5,296,191号、5,310,687号、5,221,605号を参照のこと)。ECLは、作用電極から受けた電気エネルギーにより開始される一連の化学反応の結果として、励起状態に上げられる。TAGのECLを上げる分子(例えば、シュウ酸塩またはより好ましくはトリプロピルアミン)が、有利に提供される(例えば、米国特許第5,310,678号を参照)。
ECL標識物により発生する光は、診断法におけるレポーターシグナルとして使用することができる(バード(Bard)ら、米国特許第5,221,605号)。例えばあるECL標識物は、抗体または核酸プローブのような結合物質に共有結合することができる。このECL標識/結合物質複合体は、種々の物質の測定のために使用することができる(バード(Bard)ら、米国特許第5,238,808号)。測定法におけるECLの使用は、例えばナイト(Knight)ら、1994,Analyst,119:879−890の総説にまとめられている。簡単に説明すると、ECL法は、比較的低濃度で試料中に存在する目的のアナライトを試料の容量中で検出する方法として使用される。
従って本発明の目的は、ECL測定を行うための新規で費用効果が高くかつ処分可能な電極を提供することである。
本発明は、支持体に固定化されている1つまたはそれ以上の結合ドメインからなるECL反応および測定を行うためのカセットに関する。この支持体は、電気化学発光を発生させるための電極として作用する。あるいは1つまたはそれ以上の電極が追加の支持体の上にあり、この電極は、ECLを発生するように第1の支持体に近付けてもよい。このカセットは、1つまたはそれ以上の電極または1つまたはそれ以上の電極/対電極対を有しても良い。このカセットはまた、第1の支持体に近接して配置されてその間に試料含有手段を提供することができるように、および/または電極として機能するように、第2の支持体を含んでもよい。結合ドメインは、支持体表面状にパターン付けされて、目的のアナライトまたは試薬を結合するように作成される。
従って本発明は、広い意味で、複数の電気化学発光測定を実施するためのカセットを含む。このカセットは、1つまたはそれ以上の目的のアナライトと特異的に結合することができる複数の結合ドメインを、その上に有する支持体より形成される。結合ドメインは、支持体上に、パターン付けされた、多重アレイの多重特異的な表面(「PMAMS」)として作成される。PMAMSは、例えば、実施できる測定の密度の大きな上昇、および迅速にまたは同時に複数の異なる測定を実施することを可能にしたことにより、既知のECL測定法からの有意な改良を提供する。
本発明をさらに理解するために、支持体上の結合ドメインの作成をさらに詳細に説明する。複数のアナライトに特異的な、表面上の結合ドメインのパターン付けされたアレイは、本明細書ではパターン付けした多重アレイの多重特異的な表面またはPMAMSと呼ばれる。PMAMSは、例えば、自己組立単層(「SAM」)のパターン付けにより、支持体上に作成される(ファーガソン(Ferguson)ら,1993,Macromolecules 26(22):5870−5875;プライム(Prime)ら,1991,Science 252:1164−1167;ライビニス(Laibinis)ら,1989,Science 245:845−847;クマール(Kumar)ら,1984,Langmuir 10(5):1498−1511;バイン(Bain)ら,1989,Angew.Chem.101:522−528)。表面パターン付け法はまた、物理的エッチング(例えば、ミクロ機械加工)(アボット(Abbott)ら,1992,Science 257:1380−1382;アボット,1994,Chem.Mater.6(5):596−602)、ミクロ石版術(microlithography)(ライビニス(Laibinis)ら,1989,Science 245:845−847)、光活性化化学の使用による表面への化学基の結合(サンドバーグ(Sundberg)ら,1995,J.Am.Chem.Soc.117(49):12050−12057)、および微小型押し法(micro-stamping techniques)(クマール(Kumar)ら,1994,Langmuir 10(5):1498−1511;クマールら,1993,Appl.Phys.Lett.63(14):2002−2004)の使用を含む。その他の表面パターン付け法は、流体または粒子の空間的に制御された分散のための方法(例えば、マイクロペン沈積(micropen deposition)(例えば、X−Y平行移動を使用する表面上に送達するための微量流体ガイドを使用して))、毛細管充填(キム(Kim)ら,1995,Nature 376:581)、インクジェット法(Ink-Jet technology)、またはシリンジディスペンサーを含む。これらの方法の組合せを使用して複雑な表面パターンを提供することができる。図5Aにおいて、異なる結合特異性が、単一の支持体上に存在してもよいことを示す、単に説明目的で幾何学図形602として表される形非依存性結合ドメインを有する支持体600が示される。結合ドメイン間の表面604は、結合試薬の沈積物を閉じこめて結合ドメインを形成するために、疎水性であるか、あるいは親水性であってよい。結合ドメインおよび/または結合ドメイン間の表面は、非特異的結合に対して交互に感受性であるか耐性であり、および/またはこれらは共有または非共有相互作用により結合試薬の付加に対して交互に感受性または耐性でもよい。疎水性相互作用による非特異的結合が、表面に結合化学種を結合させる所望の付加方法でない場合、偶発的な非特異的結合が起こるのを防止するために、洗浄剤を添加してもよい。
本発明の結合ドメインは、少なくとも1つの目的のアナライト(リガンド)に特異的に結合する結合試薬を含有するように作成される。別々の結合ドメイン内の結合試薬は、結合ドメインが目的の結合特異性を有するように選択される。結合試薬は、目的のアナライトを特異的に結合することができるか、またはできることが推定されることが当該分野で公知の任意の分子の中から選択することができる。目的のアナライトは、下記セクション5.10の「実施することができるECL測定法」に記載されるものの中から選択することができる。すなわち、結合試薬は、受容体、受容体のリガンド、抗体またはその結合部分(例えば、Fab、(Fab)’2)、タンパク質またはその断片、核酸、オリゴヌクレオチド、糖タンパク質、多糖、抗原、エピトープ、細胞および細胞成分、細胞内粒子、炭水化物残基、酵素、酵素基質、レクチン、プロテインA、プロテインG、有機化合物、有機金属化合物、ウイルス、プリオン、ウイロイド、脂質、脂肪酸、リポ多糖、ペプチド、細胞内代謝物、ホルモン、薬剤、トランキライザー、バルビツール酸、アルカロイド、ステロイド、ビタミン、アミノ酸、糖類、非生物学的ポリマー、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、ポリマー樹脂のような有機結合化合物、リポタンパク質、サイトカイン、リンホカイン、ホルモン、合成ポリマー、有機および無機分子などを含むが、これらに限定されない。核酸とオリゴヌクレオチドは、DNA、RNAおよび/またはオリゴヌクレオチド類似体を意味し、これらには、修飾塩基または修飾糖を含有するオリゴヌクレオチド、ホスホジエステル結合以外の基本骨格化学種を含有するオリゴヌクレオチド(例えば、ピー・イー・ニールセン(Nielsen, P.E.)(1995)Annu Rev.Biophys.Biomcl.Street.24 167−183を参照のこと)、および/または他の分子への結合(共有または非共有)を形成するのに使用することができる化学基を提示するように合成または修飾されているオリゴヌクレオチドを含むが、これらに限定されない(ここで、我々は核酸またはオリゴ(ヌクレオチド)を2つまたはそれ以上の核酸塩基および/または核酸塩基の誘導体を含有するとして定義している)。
ECLセルの電極および対電極にかけられる電位波形(電位/時間の変化)は、ECL反応を引き起こすのに十分なものである必要がある。この電位波形は通常、第1の電位で開始して、着実に第2の電位に移行し、第1の電位を通過して第3の電位に移行し、再度第1の電位に戻す、一定の掃引電位の形である。例えば、波形は、−0.5〜0.5ボルトの範囲の第1の電位で開始し、1〜2.5ボルトに上げて、第1の電位を通過して、0.0〜−1ボルトの範囲の第3の電位に移行してもよい。別の例として、より単純な波形で、電位を0.0〜+3.5〜0.0に変更することができる。電位波形は、線形傾斜路、階段関数、および/またはその他の関数を組み込むことができる。電位波形は、電位が1つの電位に固定されて留まる時間を組み込むことができる。適用される電位は、1つまたはそれ以上の参照電極に対して制御されるか、または参照電極を使用しなくてもよい。さらに、負電位を使用することができる。従って、本発明のカセットからのECL発光を誘導するために使用される電位は、ECLラベルに対する最適なECLシグナル強度と特異性、および測定媒体について、容易に選択されるであろう。
複数の電極/対電極の対をアドレスするために多くの方法を使用することができる。このような方法のいくつかを図14〜18に例示する。これらの図面に例として4つの電極/対電極の対101、102、103、104、および典型的にはディジタルコンピュータであり、かつ検出手段により検出されるECLを処理するために使用されるのと同じコンピュータである波形発生器が示される。
引き起こされたECL発光により生成される光は、本発明の装置に隣接して置かれる適切な光検出器により検出される。光検出器は、例えば、フィルム、光電子増倍管、フォトダイオード、アバランシェフォトダイオード、電荷結合素子(「CCD」)あるいは他の光検出器またはカメラであってよい。光検出器は、順に発光を検出するための単一の検出器であっても、または放出光の単一または多数の波長での同時放出を検出し空間的に解像するために複数の検出器であってもよい。放出され検出される光は、可視光であっても、または赤外線または紫外線のような非可視光として放出されてもよい。検出器は、静置型であってもまたは移動可能であってもよい。放出される光または他の放射線は、カセットの結合表面の上、またはこれに隣接して位置する、レンズ、鏡および光ファイバーのガイドまたは光コンジット(単一の、多数の、固定の、または移動可能な)により、検出器に導くことができるか、あるいは検出器は光を直接受けることができる。さらに、支持体、PMAMSおよび電極表面自体を利用して、光の伝搬をガイドするか、または可能にすることができる。
所定の結合ドメインから発生するシグナルは、ある範囲の値を有しており、これらの値は、「アナログ」シグナルを提供する定量測定と相関している。別の方法において、各ドメインから、アナライトが存在するかまたは存在しないかのいずれかを示す「ディジタル」シグナルが得られる。
電極は、大体0.001〜10mmの幅または直径であってよい。電極対の好適な範囲では、0.01〜1mmの大きさ(幅または直径または電極対の形状に依存して最も広い寸法)である。
カセットは、本発明の1つまたはそれ以上の支持体を含有する。カセットは、複数の結合ドメインおよび1つまたはそれ以上の作用電極を含有してもよい。
1つの実施態様において、支持体上のPMAMS、およびこれを含有するカセットは、PMAMS結合ドメイン上に1つまたはそれ以上の試験試料を適用するための手段、および複数のECL反応を開始させるための手段を含有する装置中に挿入されるように設計される。このような装置は、支持体またはカセットに基づいて複数のECL測定を行うために、本発明により適切に変更された従来型の装置から得ることができる。本発明は、上述のセクションに記載されたPMAMSの各具体的な実施態様を使用して、ECL測定を行うために適合させた種々の装置を提供する。ECL反応を行うための装置は、ゾスキ(Zoski)ら(米国特許第5,061,445号)により開示されている。必要とされる変更は、支持体および/またはカセットの操作、多数の試料送達、電圧波形の供給源による多数の電極のアドレス呼び出しおよび多数のECLシグナルの獲得および処理のための手段を含む。
本発明で使用されるECL標識物は、当該分野で公知のECL標識物から選択される(前記セクション2.2、および米国特許第5,310,687号を参照)。ECL標識物は例えば、金属含有有機化合物からなり、ここで金属は、ルテニウム、オスミウム、レニウム、イリジウム、ロジウム、白金、パラジウム、モリブデン、テクネチウムおよびタングステンよりなる群から選択される。ECL TAG試薬を調製するのに適した結合化学は公知であり、例えばバード(Bard)ら(米国特許第5,310,687号および第5,221,605号)により開示されている。結合試薬へのECL標識物の結合手段は、共有結合および/または非共有結合でもよい。ECL標識物は結合試薬に非共有結合(例えば、疎水性作用またはイオン性相互作用)をしてもよい。非共有結合の他の例では、ECL標識物が(共有結合または非共有結合で)複合体に結合し、次にこれが非共有結合で結合試薬に結合する。より具体的な例は、Ru(bpy)3がリンカーを介してNi(II)−トリニトリロ三酢酸錯体に共有結合することであろう。この分子は、複数のヒスチジンを含有するペプチド配列などの結合試薬に結合する。他の受容体リガンド対は、当該分野で公知であり、同様に使用することができる(サセンフェルト(Sassenfeld)、1990、TIBTECH 8:88−93)。さらに、分岐ネットワーク(例えば、炭化水素リンカーを介して)として構成されている複数の有機金属化合物(例えば、Ru−含有)を含有するECL標識物が使用できる。ECLが可能な複数の有機金属化合物残基を含有するこのような分岐ネットワークは、ECL標識される分子上で1回または複数の位置で結合してもよい。別の実施態様において、化合物は、ポリマー鎖の長さに沿う複数の位置で結合する有機金属基を有する線状ポリマーである(例えば、線状、分岐または環状ポリマー)。
ECLベースの前記方法は、他の測定法とともに使用することができる(例えば、触媒反応や他の化学反応が起きるドメインとして)。本発明の別々の結合ドメインは、他の測定法(例えば、電解質測定のような臨床化学的化学物質測定法、臨床酵素測定、血液タンパク質測定、グルコース、尿およびクレアチニン測定など)で使用することができる。ECL測定法と組合せるかまたは本発明のPMAMSとともに単独で使用される他の測定法には、化学発光ベースの標識、蛍光ベースの測定法、酵素結合測定系、電気化学測定法(例えば、ヒックマン(Hickman)ら、1991、Science 252:688−691を参照)、および/または共鳴検出(例えば、表面プラズモンおよび音響法)測定系がある。
本発明はまた、平面パネルディスプレーに使用される単離された電気化学的ピクセルの製造を提供する。電気的にアドレスされた時に隣接ピクセルに対して限定された作用(すなわち、限定クロストーク)を有するピクセルを作成するために、エレクトロクロミックおよび電気化学発光ベースの平面パネルディスプレーで使用するために、リトグラフ法が提唱されている(米国特許第5,189,549号を参照)。そのようなクロストークを減少させるためのリトグラフ法の限界は、電解質材料が、露光された時に導電率を変化することができなければならないことである。光誘導性の導電率調節が可能な材料を使用することなく、ピクセル間のクロストークを低下させ、こうして広範囲の異なる溶液、ゲルまたはフィルムの使用を可能にすることが、本発明の特徴である。
本発明のPMAMSはまた、ECLと組合せずに化学反応を行うのに使用できる。例えば、前記セクション5.11に記載した方法および非ECL測定法が利用できる。
(c)結合ドメインに結合した目的のアナライトの存在を測定する、ことからなる。
(b)試料の液滴上に反応媒体の液滴をのせ、そして
(c)結合ドメインに結合した目的のアナライトの存在を測定する、ことからなる。
本発明は、複合体が形成される電気化学発光結合測定法の実施方法を含む。この複合体は少なくとも、粒子と電気化学発光が可能な標識化合物とを含む。複合体はまた、ヤング・エィチ・ジェイ(Yang H.J.)ら、BioTechnology,12,(1994),193−194に記載のECL測定法で使用されるリガンドも含む。本方法は、(a)複合体を形成する工程と;(b)濾過して多孔性導電性電極上に複合体を採取する工程と;(c)電極に電位を加えることにより発光するように、採取した複合体中の標識化合物を誘導する工程と;そして、(d)電極から放出された発光を検出する工程とを、含む。
本発明は、電極の表面上に直接形成されるPMAMSを含有するカセットを包含する。カセットは、支持体材料上の薄い金属フィルムを含む作用電極を含有する。複数の結合ドメイン(すなわち、PMAMS)が、金属フィルムの表面上に存在する。カセットはまた、電極の表面に流体試料と試薬を導入するための手段、および作用電極でのECLの電気化学的励起を可能にする電極を含む。作用電極での電気化学電位のより良好な制御のために、参照電極もまた含まれる。ECL測定を実施するための装置は、ハウジング、カセット中の電極への電気的接続、波形発生器またはポテンショスタットからなるカセット、PMAMSから放出されたECLをイメージングするためのCCDカメラ、および波形発生器を制御しカメラが受けた画像を解析するためのマイクロコンピューターを含むカセットを含む。
図37は、マトリックス3703の中および/またはその上の結合ドメイン3702が表面3701に提示されるカセットを示す。結合ドメイン上の結合反応の完了後、結合ドメインが作用電極のすぐ近傍にくるように、作用電極3704と対電極3705を支持する第2の表面3700を位置させる。結合ドメインに結合したECL標識物からの発光は、片面または両方の表面から検出される。我々は、このECLの配置を「2表面」ECL測定法と呼ぶ。
本発明の好適な実施態様において、電極は、多数の炭素小繊維をその中に分散して含有するポリマーの複合体である。好ましくは複合体は多孔性である。
本発明の電極は、複数の炭素小繊維のマットを含有してもよい。このようなマットは、電気化学発光測定法で使用するための電極としてよく機能することがわかっている。
電気化学発光測定法中の電気化学発光分子種に由来する2つまたはそれ以上のシグナルが、電気化学発光が起きる電気化学電位が異なる少なくとも2つのゾーンを有する電極で測定を行うことにより、分離できることも現在発見されている。この方法により、バックグランド電気化学発光からシグナルを分離することができ、従って測定法の性能が有意に改善される。
結合反応が試薬の間で起こる多くの診断システムにおいて、試薬の混合を改善すると、反応の速度を上昇させることができる。遅い混合速度が、しばしば診断試験の完了までの進行速度を最終的に制限する。試薬の間の結合反応が起こる診断測定法の例は、免疫測定法、DNA−プローブ測定法、臨床化学試験、受容体−リガンド結合測定法などを含む。結合速度論の遅い速度は、溶液中の試薬と固体上に存在する試薬の間の結合反応を使用する測定法を行う上で、特に制限的な制約をかけている。音波処理は、溶液中の試薬の混合、および固体の表面またはその付近に位置する試薬への溶液中の試薬の大量輸送を改善する。実験により、測定試薬の音波処理が、固相支持体を使用する結合測定を行うのに必要な時間を劇的に短縮させることを証明されている。音波処理は、約100Hzと10MHzの間の振動数を有する振動を包含するものと定義される。音波処理の振動数(fs)は、下記の範囲に細分することができる:低振動数音波処理(100Hz≦fs5KHz)、超音波処理(5KHz≦fs1MHz)、および極超音波処理(1MHz≦fs<10MHz)。振動の振幅は、以下の範囲に細分することができる:低振幅音波処理(<1μm)、中振幅音波処理(1〜10μm)および高振幅音波処理(>10μ)。
これらの例において使用した全ての炭素小繊維は、ハイパーイオンカタリシス社(Hyperion Catalysis Incorporated)、ロット番号166−39−1から得られたCC小繊維である。これらの小繊維は、直径約3.5nm〜70nmの範囲であり、長さは直径の10倍以上であり、炭素原子の多層の外側領域と別個の内部コア領域を含んでいた。
厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、角アレイパターンで公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184(ポリ(ジメチルシロキサン);ダウコーニグ(Dow Corning)から入手できる)と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)184を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール性溶液(1〜10mM)中の親水性OHが末端にあるアルカンチオール、SH(CH2)11−(OCH2CH2)6OHに暴露して「墨入れ」を行い、整列した金表面にロボットでピンレジスター接触させ、除去する。基板を、疎水性CH3が末端にあるアルカンチオール、SH(CH2)10−CH3(エタノール中1〜10mM)の溶液で数秒間(例えば、2〜10秒間)洗浄する(クマール(Kumar)ら、前述、およびプライム(Prime)ら、Science 252:1164−7)。得られる表面を次に、窒素流中で静かに乾燥させる。親水性溶液を含有する毛細管アレイを次に、整列した表面にロボットでピンレジスター接触させ毛細管をSH(CH2)11−(OCH2CH2)6OHドメインで整列させる。毛細管アレイ中の各毛細管は、目的のアナライトに特異的で、アミド結合を介して親水性ドメイン上の反応性OH基に共有結合することができるモノクローナル抗体(MAB)を含有する。
厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、角アレイパターンで公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)184を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール性溶液(1〜10mM)中の親水性OHが末端にあるアルカンチオール、SH(CH2)11−(OCH2CH2)6OHに暴露して「墨入れ」を行い、整列した金表面にロボットでピンレジスター接触させ、除去する。次に基板を、疎水性CH3が末端にあるアルカンチオール、SH(CH2)10−CH3(エタノール中1〜10mM)の溶液で数秒間(例えば、2〜10秒間)洗浄する(クマール(Kumar)ら、前述、およびプライム(Prime)ら、Science 252:1164−7)。得られる表面を次に、窒素流中で静かに乾燥させる。親水性溶液を含有する毛細管アレイを次に、整列した表面にロボットでピンレジスター接触させ毛細管をSH(CH2)11−(OCH2CH2)6OHドメインで整列させる。毛細管アレイ中の各毛細管は、目的のアナライトに特異的で、アミド結合を介して親水性ドメイン上の反応性OH基に共有結合することができる抗体または修飾核酸を含有する。
きれいな金表面を、エタノール性溶液(1〜10mM)中の親水性OHが末端にあるアルカンチオール、SH(CH2)11−(OCH2CH2)6OHに暴露させる(プライム(Prime )ら、Science 252:1164−7)。先が細くとがった器具を線状に並べたものを、並べた金表面とロボットで光学レジスター接触させ、線状アレイを使用して、表面のX方向とY方向にエッチングして、SH(CH2)11−(OCH2CH2)6OHドメインの二次元の格子アレイを作成する。次に基板を、疎水性SH(CH2)11−(OCH2CH2)6CH3(エタノール中1〜10mM)の溶液で数秒間(例えば、2〜10秒間)洗浄する。得られる表面を次に、窒素流中で静かに乾燥させる。親水性溶液を含有する毛細管アレイを次に、整列した表面にロボットでピンレジスター接触させ毛細管をSH(CH2)11−(OCH2CH2)6OHドメインで整列させる。毛細管アレイ中の各毛細管は、目的のアナライトに特異的で、親水性ドメイン上の反応性OH基に共有結合することができる抗体または核酸を含有する。
パターン付けされた多重特異的アレイの一次抗体を表面に結合して含有する実質的に透明の、透明PMAMS表面を前述のように作成する。支持体、電極アッセイ、モノログ(monologues)表面の使用が透明であるとして選択される。次にPMAMS表面を、測定すべき目的のアナライトを含有することが疑われる溶液試料に暴露する。次に試料を洗浄して、抗体の結合したアナライトを表面に残す。次にPMAMS表面を、表面に結合したアナライトに特異的な第2ECL標識抗体を含有する溶液に暴露する。次にこの溶液をPMAMS表面から洗浄して、アナライトが存在するドメインに結合したECL標識第2抗体を残す。
パターン付けされた多重特異的アレイの第1抗体を表面に結合して含有する、透明PMAMS表面を前述のように作成する。次にPMAMS表面を、測定すべき目的のアナライトを含有することが疑われる溶液試料に暴露する。次に試料を洗浄して、抗体の結合したアナライトを表面に残す。
パターン付けされた多重特異的アレイの1本鎖核酸プローブを表面に結合して含有する、透明PMAMS表面を前述のように作成する。プローブは、目的の核酸アナライトの5’領域に相補的である。次にPMAMS表面を、測定すべき目的のハイブリダイズ可能な核酸アナライトを含有することが疑われる溶液試料に暴露する(試料は、あらかじめ変性させておく、すなわち、目的のアナライトを1本鎖にしておく)。次に試料を洗浄して、ハイブリダイズしたアナライトを表面に残す。次にPMAMS表面を、表面に結合した核酸アナライトの3’末端に特異的な第2ECL標識核酸プローブを含有する溶液に暴露する。次にこの溶液をPMAMS表面から洗浄して、アナライトが存在するドメインに結合したECL標識核酸プローブを表面に残す。
目的のアナライトに特異的な、パターン付けされた多重特異的アレイの一次抗体を表面に結合して含有する、透明PMAMS表面を前述のように作成する。次にPMAMS表面を、目的のアナライトを含有することが疑われる試料と、抗体への結合に関して目的のアナライトと競合する既知のECL標識分子を含有する試料の混合物である溶液試料に暴露する。試料を洗浄して、抗体の結合したアナライトおよび/または標識した競合的結合物を表面に結合して残す。
パターン付けされた多重特異的アレイの第1抗体を表面に結合して含有する、透明PMAMS表面を前述のように作成する。次にPMAMS表面を、測定すべき目的のアナライトを含有することが疑われる溶液試料に暴露する。次に試料を洗浄して、抗体の結合したアナライトを表面に残す。
厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、角アレイパターンで公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184(ポリ(ジメチルシロキサン);ダウコーニグ(Dow Corning)から入手できる)と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)184を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール性溶液(1〜10mM)中の親水性OHが末端にあるアルカンチオール、SH(CH2)11OHに暴露して「墨入れ」を行い、整列した金表面にロボットでピンレジスター接触させ、除去する。次に基板を、疎水性CH3が末端にあるアルカンチオール、SH(CH2)10CH3(エタノール中1〜10mM)の溶液で数秒間(例えば、2〜10秒間)洗浄する(クマール(Kumar)ら、前述)。次に得られる表面を、窒素流中で静かに乾燥させる。次に親水性溶液を含有する毛細管アレイを、整列した表面にロボットでピンレジスター接触させ毛細管をSH(CH2)11OHドメインで整列させて、特異的抗体を各ドメインに入れる。毛細管アレイ中の各毛細管は、目的のアナライトに特異的で、親水性ドメイン上の反応性OH基に共有結合することができるモノクローナル抗体(MAB)を含有する。
厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、角アレイパターンで公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)184を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール性溶液(1〜10mM)中の親水性OHが末端にあるアルカンチオール、SH(CH2)11OHに暴露して「墨入れ」を行い、整列した金表面にロボットでピンレジスター接触させ、除去する。次に基板を、疎水性CH3が末端にあるアルカンチオール、SH(CH2)10CH3(エタノール中1〜10mM)の溶液で数秒間(例えば、2〜10秒間)洗浄する(クマール(Kumar)ら、前述)。次に得られる表面を、窒素流中で静かに乾燥させる。次に親水性溶液を含有する毛細管アレイを、整列した表面にロボットでピンレジスター接触させ毛細管をSH(CH2)11OHドメインで整列させて、特異的抗体を各ドメインに入れる。毛細管アレイ中の各毛細管は、目的のアナライトに特異的で、アミド結合を介して親水性ドメイン上の反応性OH基に共有結合することができるモノクローナル抗体または修飾核酸を含有する。
厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、角アレイパターンで公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)184を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、メルカプトウンデカノールと12−メルカプト(8−ビオチンアミド−3,6−ジオキサオクチル)ドデカンアミドの混合物(ここで、ビオチン化チオールのモル分率は0.1である)に暴露して「墨入れ」を行う(スピンケ(Spinke)ら、1993、ラングミュア(Langmuir)9:1821−5およびスピンケ(Spinke)ら、1993、J.Chem.Phys.99(9):7012−9を参照)。次に基板を、疎水性CH3が末端にあるアルカンチオール、SH(CH2)10CH3アルカンチオール(エタノール中1〜10mM)の溶液で数秒間(例えば、2〜10秒間)洗浄する(クマール(Kumar)ら、前述)。次に得られる表面を、窒素流中で静かに乾燥させる。次に各毛細管中にストレプトアビジンの溶液を含有する毛細管アレイを、整列した表面にロボットでピンレジスター接触させる。毛細管アレイ中の各毛細管を整列させて、ビオチン化ドメインと接触させ、毛細管アレイを除去し、表面を洗浄する。次に複数のビオチン化抗体とビオチン化核酸溶液を含有する第2の毛細管アレイを、整列した表面にロボットでピンレジスター接触させて、各ドメイン上に特異的抗体と核酸を入れる。
ケイ素表面上の金の上の交互にあわさった作用電極/対電極対の電極アレイを、当該分野で公知の方法により作成する(例えば、クマール(Kumar)ら、前述、を参照)。この例では、電極アレイと別々の結合ドメインアレイは、支持体の同じ表面に存在する。厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、作用電極のパターンで公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184(ポリ(ジメチルシロキサン)(PDMS);ダウコーニグ(Dow Corning)から入手できる)と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)184を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール性溶液(1〜10mM)中の親水性OHが末端にあるアルカンチオール、SH(CH2)11−(OCH2CH2)6OHに暴露して「墨入れ」を行い、電極アレイ表面上の整列した作用電極にロボットでピンレジスター接触させ、除去する。次に親水性溶液を含有する毛細管アレイを、電極アレイ表面上のSH(CH2)11−(OCH2CH2)6OHドメインを有する毛細管を整列させて、ロボットでピンレジスター接触させて、特異的抗体を各ドメインに入れる。毛細管アレイ中の各毛細管は、目的のアナライトに特異的で、アミド結合を介して親水性ドメイン上の反応性OH基に共有結合することができるモノクローナル抗体を含有する。
6.12に記載の支持体(前述)を作成する。それぞれが作用電極/対電極の範囲を限定する環としてパターン付けしたフォトレジストマスターから、前述のようにPDMS型押しを作成する。電極アレイ表面を、分析される試料に暴露し、ECL標識第2抗体の混合物で洗浄し、次にトリプロピルアミンを含有する測定緩衝液溶液で洗浄する。次にPDMS型押しを整列させ、レジスター接触させてPDMS型押しの管を整列させ、各電極対の上の測定緩衝液の各容量成分を限定および規定する。電極対に過電位をかけて、表面から単層を放出させて、作用電極をECL標識第2抗体に暴露する。次に透明PDMSから放出される光を光電増幅管で読み、シグナルをマイクロプロセッサーに送り、ここでシグナルを所望の読み出し型に変換する。
ケイ素支持体上の金の上の交互にあわさった電極の間の、結合ドメインを有する交互にあわさった作用および対金電極対の電極アレイを、当該分野で公知の方法により作成する(例えば、クマール(Kumar)ら、前述、を参照)。この例では、電極アレイと別々の結合ドメインアレイは、支持体の同じ表面に存在する。厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、交互にあわさった電極対の間の結合ドメインのパターンで公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184(ポリ(ジメチルシロキサン)(PDMS);ダウコーニグ(Dow Corning)から入手できる)と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)184を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール性溶液(1〜10mM)中の親水性OHが末端にあるアルカンチオール、SH(CH2)11−(OCH2CH2)6OHに暴露して「墨入れ」を行い、電極アレイ表面上の整列した金結合ドメインにロボットでピンレジスター接触させ、除去する。次に親水性溶液を含有する毛細管アレイを、電極アレイ表面上のSH(CH2)11−(OCH2CH2)6OHドメインを有する毛細管を整列させて、ロボットでピンレジスター接触させて、特異的抗体を各ドメインに入れる。毛細管アレイ中の各毛細管は、目的のアナライトに特異的で、アミド結合を介して親水性ドメイン上の反応性OH基に共有結合することができる抗体を含有する。
前記6.14に記載の支持体表面を記載した方法(前述)により作成する。作成された表面を、分析される試料に暴露し、ECL標識第2抗体の混合物で洗浄し、次にトリプロピルアミンを含有する測定緩衝液で洗浄する。電極アレイを、電位波形発生器に接続し、作用電極/対電極対に電位をかける。次に放出される光を光電子増倍管で読み、シグナルをマイクロプロセッサーに送り、ここでシグナルを所望の読み出し型に変換する。
厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、角アレイパターンで公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)184を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール性溶液(1〜10mM)中の親水性OHが末端にあるアルカンチオール、SH(CH2)11−(OCH2CH2)6OHに暴露して「墨入れ」を行い、金表面上の整列したパターン付け対電極と角結合ドメインにロボットでピンレジスター接触させ、除去する。パターン付けした金表面は、結合ドメインを限定するアドレスが可能な環対電極から構成される。各単層結合ドメインについて、各金対電極と各金表面の間に間隙すなわち分離スペースが存在する。次に結合試薬溶液を含有する毛細管アレイを、SH(CH2)11−(OCH2CH2)6OHドメインを有する毛細管を示す表面を、ロボットでピンレジスター接触させて、特異的抗体または核酸を各ドメインに入れる。毛細管アレイ中の各毛細管は、目的のアナライトに特異的で、親水性ドメイン上の反応性OH基に共有結合することができる抗体または核酸を含有する。
例6.16に記載した支持体表面を分析すべき試料溶液に暴露させる。次に支持体表面を洗浄し、異なる特異性を有する複数のECL標識MABまたはECL標識核酸を含有する溶液に暴露し、次にトリプロピルアミンを含有する測定緩衝液で洗浄する。セクション6.16に記載のように支持体上の別々の結合ドメイン/対電極領域に対応するアレイ中に各作用電極を有する透明なアドレスが可能な作用電極アレイを作成する。2つの支持体を測定緩衝液で濡らし、ロボットでレジスターで整列したコンフォーマル接触を行う。電極アレイを、電位波形発生器に接続して、作用電極/対電極対に電位をかけ、2つの支持体の間に電界を発生させる。次に透明の作用電極から放出される光をCCDで読み、シグナルをマイクロプロセッサーに送り、ここでシグナルを所望の読み出し型に変換する。
0.1%w/wCC小繊維/脱イオン水を混合して、1mg/ml溶液を有するCC小繊維の水性スラリーを作成した。スラリー中に400ワットの音波ホーンを10分〜1時間沈めて、CC小繊維をスラリーに分散させた(大きなミクロンサイズの凝集物は、小さな凝集物または個別の線維に分散される)。分散の程度は、光学顕微鏡で追跡した。
0.1%w/wCC小繊維/脱イオン水を混合して、1mg小繊維/ml溶液を有するCC小繊維の水性スラリーを調製した。スラリー中に400ワットの音波ホーンを10分〜1時間沈めて、CC小繊維をスラリーに分散させた(大きなミクロンサイズの凝集物は、小さな凝集物または個別の線維に分散される)。分散の程度は、光学顕微鏡で追跡した。
COOHで誘導体化した小繊維(ハイペリオンキャタリスト社(Hyperion Catalysts Inc.)から提供された)を、絶えず攪拌しながらジオキサン水溶液に〜10mg/mlで懸濁した。20倍モル過剰のN−ヒドロキシスクシンイミドを加え、溶解させた。次に、20倍モル過剰のエチル−ジアミノ−プロピル−カルボジイミド(EDAC)を加え、混合物を室温で2時間攪拌した。
炭素小繊維をNHS−エステルで官能基化して、例6.20に記載のように作成した。
0.5M K2SO4中の6mM Fe3+/2+(CN)6のサイクリックボルタングラムを測定した。図30Aにおいて、CC(分散した)の未処理の小繊維マットのCVは、10、25および50mV/秒での測定値は0.10mA/cmであった。例6.18に記載のようにマットを作成した。図30Bにおいて、金箔電極について測定したCVは、10、25および50mV/秒で0.05mA/cmであった。すべての電位は、Ag/AgClに対する電位である。
同じ面積(0.20cm2)であるが異なる厚さの小繊維マットについて、0.5M K2SO4中の6mM Fe3+/2+(CN)6のサイクリックボルタングラムを測定した。陽極ピーク電流(図31)は、24μm〜425μmの範囲内でマットの厚さの増加とともに増加した。各厚さについての陽極ピーク電流もまた、走査速度の増加とともに増加した(10mV/秒〜150mV/秒の範囲)。厚さの関数としての陽極ピーク電流の増加速度もまた、厚さとともに増加した。厚さ24μmの小繊維マットは、金箔電極と同等の挙動を示した。
炭素小繊維(CC)へのタンパク質の非特異結合を以下のように測定した:(i)Ru(bipy)32+(「TAG1」)標識タンパク質の溶液を、平衡に達するまで既知量の炭素小繊維に暴露した;(ii)標識タンパク質/小繊維溶液を遠心分離し、上清を採取し、そして(iii)上清中に残存している標識タンパク質の量を電気化学発光(ECL)を用いて測定した。
例6.2.4に記載の方法を使用して、小繊維へのタンパク質結合に及ぼす界面活性剤の影響を調べた。誘導体化TAG1/小繊維混合物に結合した抗CEAにトリトンX−100を加え、溶液を20分間インキュベートし、管を遠心分離し、オリゲン(ORIGEN)測定緩衝液で5倍希釈した上清のアリコートをECLで分析した。結果を下記表と図33に示す。
例6.18のように作成した小繊維マットを、図34に示す「小繊維セル」固定具の作用電極ホルダー3401の取り付け部3403に取り付けた。ホルダー3401を、電気化学的セル区画3400の底にはめた。3M Ag/AgCl参照電極(サイプラス(Cyprus)#EE008)を、参照セルホール3402を介して電気化学的セル区画に取り付けた。セルに測定緩衝液(イゲン(IGEN)#402−005−01、ロット番号#5298)を充填し、PMTホルダー3404に取り付けた。イージーアンドジー(EG&G)、パークモデル175ユニバーサルプログラマーとイージーアンドジー(EG&G)、モデル175ポテンショスタット/ガルバノスタットを使用して、100mV/秒で電位を0V〜+3Vで掃引した。パシフィックインストルメンツ(Pacific INstruments)モデル126光度計により900Vの電位をかけたハママツ(Hamamatsu)R5600U−01により測定した。HEMスナップマスター(HEM Snap-Master)により駆動したCIO−DAS−1601A/Dボードにより、アナログデータをデジタル化した。小繊維セルの水分を切り、瞬間的に1000pMのTAG1(イゲン(IGEN)#402−004−C,ロット#4297)で洗浄し、1000pMのTAG1を充填した。測定緩衝液のように電位を掃引した。図35は、測定緩衝液3501と1000pMTAG1 3502についてのECLトレース(24.0±0.2Cで測定した)を示す。暗補正ECLピーク面積は、測定緩衝液については22.10nAで、1000pM TAG1については46.40nAであった。
例6.18に記載の方法で未処理のcc−分散小繊維から0.0035インチの厚さの小繊維マットを作成した。次に乾燥したマットを3mmの円盤にパンチし、支持体の上にのせた。この実験で使用した支持体は、スクリーン印刷した導電性金インクによりパターン付けした0.030インチのポリエステルシートから作成した。この導電性金インクは対電極、参照電極を形成し、作用電極および他の電極の導線を提供した。炭素含有導電性両面テープ(アドヒーシブズリサーチ(Adheseves Research))を使用して、各パターン付け支持体に2つのマット円盤を取り付けた。取り付け後、誘導体化TAG1に結合した脱イオン水中10μg/mlの抗TSH抗体水溶液(Ru−THSモノ1:2 26JUN95、イゲン(IGEN))0.5μl、または脱イオン水中10μg/mlのTAG1誘導体化しない抗TSH捕捉抗体抗体水溶液を(THSポリ26JUN95、イゲン(IGEN))円盤にスポットし、乾燥させた。乾燥後、マットをイゲン(IGEN)測定緩衝液に浸した。支持体上の浸したマットを、イゲン(IGEN)オリゲン(ORIGEN)1.5ベースの装置に入れ、0〜4500mVまで500mV/秒の走査速度を用いて、ECLを読んだ。図43は、マット4301を含有するTAG1−抗体からと、マット4302を含有するTAG1化していない捕捉抗体からのピークECLシグナルを比較する。
前述のように抗AFP捕捉抗体をフィルター上に固定化した。抗AFP小繊維を脱イオン水(dI)で洗浄し、1mg/mlの濃度で再懸濁した。例6.18に記載のように真空濾過を使用して4層の小繊維マットを作成した。未処理CC分散小繊維3mgに2mgの抗AFP小繊維を加え、混合物をdI中で総量20mlに希釈した。希釈した混合物を0.45μmナイロンフィルターで濾過した。次にこの最初のマット層の後に、それぞれ5mgの未処理CC分散小繊維で構成される2つのコア層が続く。次にマットのコアに、最初の層と同じ混合フィルター層をのせた。こうして、上部と下部に〜40%抗AFP小繊維と、コア内に〜100%未処理小繊維のマットが得られた。この混合マットを真空下で空気乾燥し、3mmの円盤にパンチした。次にこれらの円盤を、例6.27に記載のように支持体にのせた。乾燥し支持体にのせた抗AFPマットを、AFPカリブレーターA、C、およびF(イゲン社(IGEN,Inc.))に浸し、実験台で室温で15分間インキュベートした。インキュベーション後、支持した電極をdI流で10秒間洗浄し、次にけばのないワイプでブロットして乾燥した。次に小繊維マットを、誘導体化TAG1イゲン社(IGEN, Inc.))で標識した抗体に血液グルタチオン−S−トランスフェラーゼ抗AFPに浸し、実験台で室温で15分間インキュベートした。インキュベーション後、支持した電極をdI流で洗浄し、ワイプで乾燥した。次に、小繊維マットをイゲン(IGEN)測定緩衝液に浸し、例6.27に記載のように読んだ。
アクリルアミド、ビス−アクリルアミド、およびN−アクリロイル−N’−ビオチニル−3,6−ジオキサオクタン−1,9−ジアミン(ビオチンはトリ(エチレングリコール)リンカーを介してアクリルアミド残基に結合している)を、公知の方法(過硫酸アンモニアとTEMEDで開始する)を用いて、共有結合したビオチンを含有する架橋ポリアクリルアミドゲルを調製した。この実験で、3つのモノマー種の濃度は、それぞれ2.6M、0.065M、および0.023Mであった(アクリルアミドとビス−アクリルアミドのこれらの濃度により、孔径がほとんどのタンパク質より小さいゲルが得られることが報告されている)。約0.7mmの距離で離して固定した2つのガラスプレートの間にモノマーを含有する溶液の重合により、同じ厚さのスラブゲルが生成した。重合反応終了後、ゲルをPBSに浸して4回交換して、取り込まれていないビオチンを洗い流した。PBS中50μg/mlの濃度のタンパク質を含有する溶液中でゲルを20分間浸すことにより、誘導体化TAG1で標識されたアビジン(ここで、アビジンは、NSBの低い修飾アビジンであるNeutroAvidinを意味し、この実験に使用した)が、ゲルの表面に結合した。ゲルをECL測定緩衝液(200mMリン酸ナトリウム、100mMトリプロピルアミン、0.02%(w/v)ツイーン20、pH7.2)に浸して4回交換して、過剰のTAG1標識アビジンを洗い流した。図39に示すように、ゲル(3900)を、ガラス支持体(3903)にパターン付けした金の作用電極(3901)と対電極(3902)に接触させた。2つの電極の間で500mV/秒の速度で0.0〜3.0Vまでそして0.0Vまでもどる電位勾配をつけて、ECL光シグナルを得て、これをゲルの上に置いたPMT(3904)で測定した(図40)。ビオチン含有アクリルアミド誘導体を含まないで調製したゲルは、ECLシグナルを示さなかった(図41)。ビオチン含有ポリマーについて得られるこのシグナルは、ゲルの表面にほぼ完全に近いタンパク質の単層が存在することを示した。
例6.29のように、共有結合したビオチンを含有する架橋ポリアクリルアミドゲルを調製した。ストレプトアビジンをゲルの表面に吸着させて、ビオチン標識分子種を捕捉することができる結合ドメインを形成させる。表面を、トリプロピルアミン、未知濃度のアナライト、アナライトに対するビオチン標識抗体、およびアナライトに対する異なるECL TAG1標識抗体を含有する溶液で処理する。アナライトが存在すると、アナライトと2つの抗体の複合体が形成され、これは次に、ストレプトアビジン表面に捕捉される。表面に存在する第2抗体に結合したECL標識物を、例6.29に記載のように測定する。
厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、アレイ中に並んだ環状のへこみのパターンが得られるように、公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール中の水酸基末端チオール、HS−(CH2)11−(OCH2CH2)6−OH(1〜10mM)に暴露して、整列した金の基板と接触させ、除去する。次に基板を、チオールHS−(CH2)10−CH3(エタノール中1〜10mM)の溶液で数秒間洗浄する。次に得られる表面を、エタノールで洗浄し、窒素流中で乾燥させる。ジオキサン中に塩化アクロイルとトリエチルアミンを含有する溶液で表面を処理すると、ヒドロキシル末端ドメインがアクリル酸基で官能基化される。次にアクリルアミド、ビス−アクリルアミド、N−アクリロイルスクシンイミド、アゾ−ビス−シアノバレリン酸、およびアミノ基を提示する抗体の混合物を含有する毛細管アレイを、整列した表面に接触させ、毛細管をアクリル酸が末端にあるドメインで整列させて、特異的抗体を含有するプレポリマー溶液を各ドメインに入れる。毛細管アレイ中の各毛細管は、目的のアナライトに特異的な抗体を含有する。パターン付けしたプレポリマーの液滴を紫外線に暴露すると、表面上でそれぞれ結合ドメインを示す基板上の架橋ゲルが生成する。トリプロピルアミンとECL−TAG1標識第2抗体を含有する緩衝溶液中の、ゲル表面上の1つまたはそれ以上の結合ドメインで結合することができるアナライトの混合物で基板を処理して、測定を行う。次に金電極(4232)上のポリアクリルアミド液滴(4203)上の結合ドメイン(4200、4201、4202)を、図42A−Bに記載のように、ITO作用電極(4204)に接近させる。各結合ドメインから放出される光をCCDカメラ(4205)で定量し、試料溶液に含有させた内部標準の結合ドメインと比較する。
厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、アレイ中に並んだ環状のへこみのパターンが得られるように、公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール中の水酸基末端チオール、HS−(CH2)11−(OCH2CH2)6−OH(1〜10mM)に暴露して、整列した金の基板と接触させ、除去する。次に基板を、チオールHS−(CH2)10−CH3(エタノール中1〜10mM)の溶液で数秒間洗浄する。次に得られる表面を、エタノールで洗浄し、窒素流中で乾燥させる。ジオキサン中に塩化アクリロイルとトリエチルアミンを含有する溶液で表面を処理すると、ヒドロキシル末端ドメインがアクリル酸基で官能基化される。次にアクリルアミド、ビス−アクリルアミド、N−アクリロイルスクシンイミド、アゾ−ビス−シアノバレリン酸、および抗体の混合物を含有する毛細管アレイを、整列した表面に接触させ、毛細管をアクリル酸が末端にあるドメインで整列させて、特異的抗体を含有するプレポリマー溶液を各ドメインに入れる。毛細管アレイ中の各毛細管は、目的のアナライトに特異的な抗体を含有する。パターン付けしたプレポリマーの液滴を紫外線に暴露すると、表面上でそれぞれ結合ドメインを示す基板上の架橋ゲルが生成する。トリプロピルアミンとアナライトのECL−TAG1標識類似体を含有する緩衝溶液中の、ゲル表面上の1つまたはそれ以上の結合ドメインで結合することができるアナライトの混合物で基板を処理して、測定を行う(すなわち、結合ドメインに対して、ECL−TAG1で標識したアナライトおよび標識していないアナライトの競合を起こさせる)。次に金電極(4232)上のポリアクリルアミド液滴(4203)上の結合ドメイン(4200、4201、4202)を、図42に記載のように、ITO作用電極(4204)に接近させる。各結合ドメインから放出される光をCCDカメラ(4205)で定量し、試料溶液に含有させた内部標準の結合ドメインと比較する。
厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、アレイ中に並んだ環状のへこみのパターンが得られるように、公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール中の水酸基末端チオール、HS−(CH2)11−(OCH2CH2)6−OH(1〜10mM)に暴露して、整列した金基板と接触させ、除去する。次に基板を、チオールHS−(CH2)10−CH3(エタノール中1〜10mM)の溶液で数秒間洗浄する。次に得られる表面を、エタノールで洗浄し、窒素流中で乾燥させる。ジオキサン中に塩化アクリロイルとトリエチルアミンを含有する溶液で表面を処理すると、ヒドロキシル末端ドメインがアクリル酸基で官能基化される。次にアクリルアミド、ビス−アクリルアミド、N−アクリロイルスクシンイミド、アゾ−ビス−シアノバレリン酸、および細胞表面に対する抗体の混合物を含有する毛細管アレイを、整列した表面に接触させ、毛細管をアクリル酸が末端にあるドメインで整列させて、プレポリマー溶液を各ドメインに入れる。パターン付けしたプレポリマーの液滴を紫外線に暴露すると、表面上でそれぞれ結合ドメインを示す基板上の架橋ゲルが生成する。結合ドメインをまず細胞の懸濁物で処理して、次にトリプロピルアミンとECL−TAG1標識第2抗体および/またはアナライトに特異的な他の結合試薬を含有する緩衝溶液中の、ゲル表面に結合した1つまたはそれ以上のセルに結合することができる結合試薬の混合物で基板を処理して、測定を行う。次に金電極(4232)上のポリアクリルアミド液滴(4203)上の結合ドメイン(4200、4201、4202)を、図42に記載のように、ITO作用電極(4204)に接近させる。各結合ドメインから放出される光をCCDカメラ(4205)で定量し、試料溶液に含有させた内部標準の結合ドメインと比較する。
厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、アレイ中に並んだ環状のへこみのパターンが得られるように、公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール中の水酸基末端チオール、HS−(CH2)11−(OCH2CH2)6−OH(1〜10mM)に暴露して、整列した金の基板と接触させ、除去する。次に基板を、チオールHS−(CH2)10−CH3(エタノール中1〜10mM)の溶液で数秒間洗浄する。次に得られる表面を、エタノールで洗浄し、窒素流中で乾燥させる。ジオキサン中に塩化アクリロイルとトリエチルアミンを含有する溶液で表面を処理すると、ヒドロキシル末端ドメインがアクリル酸基で官能基化される。次にアクリルアミド、ビス−アクリルアミド、N−アクリロイルスクシンイミド、アゾ−ビス−シアノバレリン酸、および細胞の混合物を含有する毛細管アレイを、整列した表面に接触させ、毛細管をアクリル酸が末端にあるドメインで整列させて、各細胞型を含有するプレポリマー溶液を各ドメインに入れる。毛細管アレイ中の各毛細管は、異なるアナライトに結合する異なる表面構造を有する細胞を含有する。パターン付けしたプレポリマーの液滴を紫外線に暴露すると、表面上でそれぞれ結合ドメインを示す基板上の架橋ゲルが生成する。トリプロピルアミンとECL−TAG標識抗体および/またはアナライトに特異的な他の結合試薬を含有する緩衝溶液中の、ゲル表面上の1つまたはそれ以上の結合ドメインで結合することができるアナライトの混合物を含有する試料でゲルを処理して、測定を行う。次に金電極(4232)上のポリアクリルアミド液滴(4203)上の結合ドメイン(4200、4201、4202)を、図42に記載のように、ITO作用電極(4204)に接近させる。各結合ドメインから放出される光をCCDカメラ(4205)で定量し、試料溶液に含有させた内部標準の結合ドメインと比較する。
厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、アレイ中に並んだ環状のへこみのパターンが得られるように、公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール中の水酸基末端チオール、HS−(CH2)11−(OCH2CH2)6−OH(1〜10mM)に暴露して、整列した金の基板と接触させ、除去する。次に基板を、チオールHS−(CH2)10−CH3(エタノール中1〜10mM)の溶液で数秒間洗浄する。次に得られる表面を、エタノールで洗浄し、窒素流中で乾燥させる。ジオキサン中に塩化アクリロイルとトリエチルアミンを含有する溶液で表面を処理すると、ヒドロキシル末端ドメインがアクリル酸基で官能基化される。次にアクリルアミド、ビス−アクリルアミド、N−アクリロイルスクシンイミド、アゾ−ビス−シアノバレリン酸、およびアミノ酸で官能基化した核酸プローブの混合物を含有する毛細管アレイを、整列した表面に接触させ、毛細管をアクリル酸が末端にあるドメインで整列させて、特異的プローブを含有するプレポリマー溶液を各ドメインに入れる。毛細管アレイ中の各毛細管は、目的の核酸配列に特異的なプローブを含有する。パターン付けしたプレポリマーの液滴を紫外線に暴露すると、表面上でそれぞれ結合ドメインを示す基板上の架橋ゲルが生成する。トリプロピルアミンと表面への結合について目的のアナライトと競合することができるECL−TAG1標識配列を含有する緩衝溶液中の、ゲル表面上の1つまたはそれ以上の結合ドメインで結合することができる配列を含有する試料混合物で基板を処理して、測定を行う。次に金電極(4232)上のポリアクリルアミド液滴(4203)上の結合ドメイン(4200、4201、4202)を、図42に記載のように、ITO作用電極(4204)に接近させる。各結合ドメインから放出される光をCCDカメラ(4205)で定量し、試料溶液に含有させた内部標準の結合ドメインと比較する。
厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、アレイ中に並んだ環状のへこみのパターンが得られるように、公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール中の水酸基末端チオール、HS−(CH2)11−(OCH2CH2)6−OH(1〜10mM)に暴露して、整列した金の基板と接触させ、除去する。次に基板を、チオールHS−(CH2)10−CH3(エタノール中1〜10mM)の溶液で数秒間洗浄する。次に得られる表面を、エタノールで洗浄し、窒素流中で乾燥させる。ジオキサン中に塩化アクリロイルとトリエチルアミンを含有する溶液で表面を処理すると、ヒドロキシル末端ドメインがアクリル酸基で官能基化される。次にアクリルアミド、ビス−アクリルアミド、N−アクリロイルスクシンイミド、アゾ−ビス−シアノバレリン酸、およびアミノ基で官能基化した核酸プローブの混合物を含有する毛細管アレイを、整列した表面に接触させ、毛細管をアクリル酸が末端にあるドメインで整列させて、特異的プローブを含有するプレポリマー溶液を各ドメインに入れる。毛細管アレイ中の各毛細管は、目的の核酸配列に特異的なプローブを含有する。パターン付けしたプレポリマーの液滴を紫外線に暴露すると、表面上でそれぞれ結合ドメインを示す基板上の架橋ゲルが生成する。トリプロピルアミンと表面結合プローブに相補的でない配列でアナライトに結合することができるECL−TAG1標識配列を含有する緩衝溶液中の、ゲル表面上の1つまたはそれ以上の結合ドメインで結合することができる配列を含有する試料混合物で基板を処理して、測定を行う。次に金電極(4232)上のポリアクリルアミド液滴(4203)上の結合ドメイン(4200、4201、4202)を、図42に記載のように、ITO作用電極(4204)に接近させる。各結合ドメインから放出される光をCCDカメラ(4205)で定量し、試料溶液に含有させた内部標準の結合ドメインと比較する。
厚さ1〜2ミクロンの感光および現像したフォトレジストマスターを、アレイ中に並んだ環状のへこみのパターンが得られるように、公知の方法に従って作成する。シルガード(SYLGARD)シリコーンエラストマー184と対応するシルガード(SYLGARD)184硬化剤の10:1混合物をマスターの上に注ぎ、硬化させる。重合したシルガード(SYLGARD)を注意深くシリコンマスターから除去する。得られる弾性型押しは、エタノール中の水酸基末端チオール、HS−(CH2)11−(OCH2CH2)6−OH(1〜10mM)に暴露して、整列した金の基板と接触させ、除去する。次に基板を、チオールHS−(CH2)10−CH3(エタノール中1〜10mM)の溶液で数秒間洗浄する。次に得られる表面を、エタノールで洗浄し、窒素流中で乾燥させる。ジオキサン中に塩化アクリロイルとトリエチルアミンを含有する溶液で表面を処理すると、ヒドロキシル末端ドメインがアクリル酸基で官能基化される。次にアクリルアミド、ビス−アクリルアミド、N−アクリロイルスクシンイミド、アゾ−ビス−シアノバレリン酸、および例6.31〜6.36に記載の任意の結合試薬の混合物を含有する毛細管アレイを、整列した表面に接触させ、毛細管をアクリル酸が末端にあるドメインで整列させて、特異的プローブを含有するプレポリマー溶液を各ドメインに入れる。毛細管アレイ中の各毛細管は、目的のアナライトに特異的な結合ドメインを含有する。パターン付けしたプレポリマーの液滴を紫外線に暴露すると、表面上でそれぞれ結合ドメインを示す基板上の架橋ゲルが生成する。トリプロピルアミンと結合ドメインへの結合についてアナライトと競合するアナライトのECL−TAG1標識類似体および/または目的のアナライトに対するECL−TAG1標識第2結合試薬を含有する緩衝溶液中の、ゲル表面上の1つまたはそれ以上の結合ドメインで結合することができるアナライトを含有する試料混合物で基板を処理して、測定を行う。次に金電極(4232)上のポリアクリルアミド液滴(4203)上の結合ドメイン(4200、4201、4202)を、図42に記載のように、ITO作用電極(4204)に接近させる。各結合ドメインから放出される光をCCDカメラ(4205)で定量し、試料溶液に含有させた内部標準の結合ドメインと比較する。
多結晶性金電極(バイオ−アナリティカルサービシーズ(Bio-Analytical Services)から購入、2mm2)を、0.5μmと0.03μmのアルミナスラリーで連続して手で磨き、次に1:3 H2O2/H2SO4で化学的エッチングし、そしてAg/AgClに対して−0.2V〜1.7Vの間で希硫酸中で電気化学的サイクリングできれいにした。次にきれいな電極を、エタノールに溶解したオクチルチオール(C8SH)の希薄溶液に一晩浸した。C8SH修飾電極を、リン酸緩衝化生理食塩水(PBS、0.15M NaCl/0.1M NaPi、pH7.2)に溶解した20μlのTAG1標識ウシ血清アルブミン(BSA)で覆い、10分間インキュベーション後表面を同じ緩衝液で充分洗浄した。
電極修飾とタンパク質吸着を、前述のように行った。ECL実験では、電位を0.0vと1.5Vの間で走査し、対応する光の強度を記録した。図45Aに示すように、同じサイクルの前進と後退走査の間では、異なるサイクルの間と同様に、ECLの喪失があった。1.5Vで酸化した後のフェリシアン化物中のチオール/Auのサイクリックボルタングラムは、多量のファラデー電流を示し、1.5Vでのチオール単層の少なくとも部分的な脱着を示した(図45B)。
これらの実験では、電極修飾とタンパク質吸着を例6.38に記載のように行った。ECLを測定するために、電極電位を2.0Vまでそして逆方向に0.0Vまで走査した。前進走査で強い光が観察された(例6.38の可逆性条件下で観察されたものより強い光)が、図46Aに示すように逆走査でバックグランドまで低下した。2.0Vで酸化した後のフェリシアン化物中の修飾電極のサイクリックボルタングラムは、チオール単層のほとんどが脱着していることを示した(図46B)。
この例では、前立腺特異抗原(PSA)に対する抗体が、PSAの免疫測定法で使用するためのパターン付け金電極上に固定化される。
12nmの粒度と175〜220m2/gの反応性表面積を有するヒュームドシリカであるアエロシル−200(デグッサ社(Degussa Corporation)、アクロン、オハイオ州、米国)は、NHSエステル基を導入するために化学修飾した。この修飾は3工程を含む:i)3−アミノプロピルトリメトキシシランとの反応により粒子の表面にアミノ基を導入した。アエロシル−200(155.5mg)は、5mlのトルエン中で3−アミノプロピルトリメトキシシラン(513mg)と合わせて、1時間還流した。シリカ粒子は4mlのトルエンで2回、4mlのメタノールで3回および4mlのジクロロメタンで3回洗浄した。各洗浄は、懸濁液の遠心分離と、これに続く新鮮溶媒へのペレットの再懸濁からなっていた;ii)アミノ基を無水コハク酸と反応させて、カルボン酸基を表面に導入した。55.2mgの洗浄した粒子を3mlの無水DMFに再懸濁した。無水コハク酸(102mg)とトリエチルアミン(0.025ml)を加えて、懸濁液を16時間撹拌した。さらに無水コハク酸(50mg)を加えて、反応をさらに3時間進行させた。粒子をDMFで2回、メタノールで1回、およびジクロロメタンで2回洗浄して、過剰の試薬を除去した;そしてiii)表面上のカルボン酸基を、N−ヒドロキシスクシンイミド(NHS)およびエチル−3−ジアミノプロピルカルボジイミド(EDC)との反応により、NHSエステルとして活性化した。粒子(25.1mg)を3mlの塩化メチレンに再懸濁した。NHS(64mg)とEDC(110mg)を加えて、次にこの懸濁液を3時間撹拌した。次に粒子をジクロロメタンで3回洗浄して、真空下で乾燥した。
プローブソニケーター(ブランソン・ウルトラソニック社(Branson Ultrasonic Corp.)、ダンベリー、コネチカット州、米国)を用いて、CC小繊維の懸濁液(0.2%トリトンX−100水溶液中0.1mg/ml)を15分間超音波処理して、小繊維インクを形成した。穏やかに吸引して懸濁液をステンレス製濾紙の円盤(GA−4、バエカルトファイバーテクノロジーズ(Baekart Fibre Technologies))上の直径1/8”の円形領域上に濾過した。この方法により形成されるマットの厚さは、約1μm/mlの加えた小繊維インクであった。
AFP測定は以下の工程を使用して行った:i)懸濁液中のビーズの表面でのサンドイッチ免疫複合体の形成;ii)ステンレス製濾紙上に支持した小繊維マットへのビーズの濾過;およびiii)酸化電位に対して小繊維電極を走査することによる、免疫複合体中のTAG1標識抗体からのECLの検出。本測定は、AFP測定キット(ベーリンガー−マンハイム(Boehringer-Mannheim))を使用して行った。この測定キットは、エレクシス・システム(Elecsys System)(ベーリンガー−マンハイム)(磁界の適用により白金電極上に磁性ビーズを捕捉するシステム)を使用するECLに基づく測定法のために設計されている。測定キットは、以下のストック溶液を含有した:ストレプトアビジンで被覆した磁性ビーズ(M−280、ダイナル社(Dynal Inc.))を含有する懸濁液、ビオチン標識捕捉抗体(R−1)、TAG1標識二次抗体(R−2)、および血清を模倣するように設計したマトリックスに溶解したAFPを含有する一連の較正物質。
ストレプトアビジンで被覆したシリカ粒子(アエロシル−200、例6.42に記載したように調製)を、AFP測定キットと共に供給される磁性ビーズの代わりに使用した他は、例6.44に記載したようにAFP測定を行った。本測定法用の検量線を求めるために、ストレプトアビジンで被覆したアエロシル−200のストック懸濁液(0.001mgの粒子を含有する0.010ml)をプラスチック管中でR−1(0.017ml)、R−2(0.017ml)、およびAFP較正物質(0.010ml)を含有するストック溶液と合わせた。この管をボルテックス混合し、次に室温で30分間穏やかに振盪した。次に穏やかに吸引して例6.43に記載したように形成した小繊維マット(マット厚さ=40mm)上に懸濁液を濾過した。マットをECL測定緩衝液(イゲン社(IGEN, Inc.))で洗浄した。次に例6.26に記載したようにECLを測定した。各較正物質は三重測定で測定した。図49は、AFPの濃度の関数としてバックグラウンド補正したECLシグナルを示す。
この例では、ビーズに取り込まれた蛍光染料が、ビーズベースのECL測定法における内部標準として使用できることを示す実験を記載する。3つの型の蛍光ビーズをポリサイエンシーズ社(Polysciences Inc.)から購入した。ビーズは、取り込まれた染料の励起および発光波長が異なっていた:i)カタログ#17685(lex=273nm、lex=340nm)。ii)カタログ#19392(lex=530nm、l=590nm)。iii)カタログ#17797(lex=641nm、lem=740nm)。小繊維マットは、例6.43に記載したように調製した。蛍光ビーズ(0.010mg)は、穏やかに吸引してマットに濾過した。マットをECL測定緩衝液(イゲン社(IGEN, Inc.))で洗浄して、例6.26に記載したようにECLを測定した。各ビーズは三重測定で試験した。3つ全てのビーズがこれらの条件下でECLを放出した。ポリサイエンス(Polyscience)カタログ#17685、19392、および17797ビーズについて測定した平均積分ECLシグナルは、それぞれ0.7nA・s、6.0nA・s、および2.3nA・sであった。
この例では、免疫測定法に使用するために、アルファ−フェトプロテイン(AFP)に対する抗体を金電極上に固定化する。
この例で使用されるオリゴヌクレオチドは以下のように定義される:
SC1.2:5’ca gtt gtg tgc cac cta caa 3’C6ジスルフィドモディファイアー
SC2.3:5’ ttg tag gtg gca cac aac tg 3’C3アミノモディファイアー
SC4.1:5’TAG1−gaa−aat−gtg−ctg−acc−gga−cat−gaa−aat−gag 3’
オリゴヌクレオチドはオリゴエトセトラ社(Oligos Etc. Inc.)から購入した。SC2.3は、NHSエステルを与えるTAG1の誘導体(NHS−TAG、イゲン社(IGEN, Inc.))と反応させてTAG1で標識した。0.100mlのPBS(pH7.4)中のSC2.3(130nmol)を、TAG−NHS−エステルの0.5mgバイアル中の0.400mlのDMSOと合わせた。この溶液を混合して暗所で室温で一晩インキュベートした。一晩のインキュベーション後、標識反応物を1.380mlの脱イオン水で希釈した。5Mの塩化ナトリウムを含有する水溶液(0.120ml)を加え、次に0.120mlの無水エタノールを加えた。次にこの溶液を−70℃で少なくとも1時間インキュベートして、生成物を沈殿させた。標識オリゴヌクレオチドを5000×gで10℃で10分間遠心分離した。生じたペレットを0.25mlの70%(v/v)エタノール水溶液で2回洗浄した。洗浄したペレットを真空下で乾燥して、暗所で−20℃で保存した。SC4.1オリゴヌクレオチドの製造業者は、TAG1のホスホラミジト誘導体との反応により、オリゴヌクレオチド合成中にTAG1でプローブを標識した(イゲン社(IGEN, Inc.))。
小繊維とポリマーとを配合して、配合した材料をシートに圧縮成形して複合電極を調製した。小繊維は、180摂氏度の温度と100r.p.m.の速度で二軸スクリュー計量ヘッドを有するブラベンダー・プラスチコーダー(Brabender Plasticorder)を使用して、EVA中に配合した。9.45グラムの小繊維は、25.55グラムのEVA(クオンタム化学(Quantum Chemical)、ミクロテン(Microthene)、FS−532)とドライブレンドした。ブレンドした材料は、1分間で混合ヘッドに加えて、材料を融解させた。混合をさらに5分間続けて、次に複合体を混合ヘッドから取り出して冷却した。電極として使用される複合体のシートを調製するために、2グラム片の配合材料を組み立てて、2枚の磨きステンレス製の板(三重めっきしたフェロタイプ板、テストライト社(Testrite Company))の間にサンドイッチにして、この組立品を液圧プレス(カーバー(Carver))で180摂氏度に設定した熱板の間に入れた。材料が加熱されるのを待って、複合体を10000ポンドの全圧で平らなシートにプレスした。次にプレスから組立品を取り出し、室温まで冷却した。組立品を分離して、20ミルの公称厚さの平らな円盤を取り出した。
炭素小繊維(27重量%)とビニル酢酸エチルとの複合体(小繊維−EVA)と、炭素小繊維とポリエチレンとの複合体(小繊維−PE)を使用した。複合体は、約1mm厚さの3”円盤として入手した。小繊維−EVAと小繊維−PE複合体の両方とも、室温で1時間、クロム酸を含有する溶液(CrO3、H2OおよびH2SO4、(29/42/29;w/w/w))に円盤を浮かべることにより酸化した。クロム酸溶液との反応後、酸化された複合体を脱イオン水で4〜5回洗浄して、脱イオン水に少なくとも5分間浸漬して空気中で1時間乾燥した。
EVAと炭素小繊維の複合体(3”直径の平らな円盤の形態の)は、1:1比の硫酸と硝酸の混合液(12ml)で3時間処理した。処理した複合体は水で洗浄した。水(150ml)と水酸化アンモニウム(30%、150ml)の混合液中の処理した複合体に、亜ジチオン酸ナトリウム(10グラム)を加えた。反応混合液を2時間還流した。この複合体を水で充分に洗浄した。
複合体の表面および表面近くのアセテート基の加水分解により、小繊維−EVA複合体上のヒドロキシル基を露出させた。複合材料(EVA中27重量%のCC小繊維)の円盤(直径3”、厚さ0.01”)を100mlのNaOHの2M溶液に室温で17〜20時間浸漬した。この処理により、複合体の両側のヒドロキシル基が露出する。複合体を水とメタノールで洗浄して、次に空気中で乾燥させた。
EVA−小繊維複合体は、例6.50に記載したように、または酸素プラズマへの暴露により酸化した。酸化した3”円盤複合体は、真空ポンプ下で1時間乾燥して、0.1M EDC(1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド)と0.1M N−ヒドロキシスクシンイミドを含有する25mlのジクロロメタンに一晩(振盪しながら)浸漬した。NHS活性化複合体はジクロロメタン、メタノール、脱イオン水およびメタノールで洗浄して、次に室温で乾燥させた。
硝酸と硫酸の混合液で(例6.51のように)処理したEVA−小繊維複合体の3”直径の円盤は、15mlのリン酸ナトリウム緩衝液(0.1M、pH7.5)に入れた。スルホスクシンイミジジル−4−(N−マレイミドメチル)−シクロヘキサン−1−カルボキシレート(スルホ−SMCC、10mg)を加えて、反応混合液を室温で3時間インキュベートした。反応を停止させ、複合体はリン酸ナトリウム緩衝液で洗浄した。0.1Mリン酸ナトリウム、20mM EDTA、pH7.5(300ml)中のストレプトアビジン(4.5mg)の溶液に、トラウト試薬(Traut's reagent)(19.8ml、2.8mg/ml)を加えた。反応混合液を室温で1時間30分間インキュベートした。このスルフヒドリル標識ストレプトアビジンは、PD−10(ファルマシア(Pharmacia))使い捨てサイズ排除カラム(3.5ml画分で集めた)を使用して精製した。SMCC処理複合体(1インチ、EVA CC複合体のニトロ化/還元により得られた)をスルフヒドリル標識ストレプトアビジンを含有する溶液(3.5ml)に入れて、振盪しながら4℃で一晩インキュベートした。生じたストレプトアビジンで被覆した複合体は、1%トリトンX−100を含有する0.1Mリン酸ナトリウム、pH7.5中で振盪して洗浄(5×20分)した。
表面および表面近くにヒドロキシル基を示す小繊維−EVA複合体にストレプトアビジンを固定化した。カルボニルジイミダゾール(CDI)によるヒドロキシル基の活性化によりタンパク質を固定化した。(例6.52に記載した手順により)NaOHで処理してヒドロキシル基を露出させた小繊維−EVA複合電極を真空下で乾燥した。乾燥複合体は、乾燥ガラスジャーの中の50mlの無水塩化メチレンに浸漬した。この溶液に100mg(0.6mmol)の1,1’−カルボニルジイミダゾール(CDI)を加えて、ジャーを室温で1時間穏やかに振動させた。次に複合体を塩化メチレンとメタノールで洗浄し、次に空気中で乾燥させた。CDI活性化複合体は3/16”の円盤に(穴あけ器を使用して)切り出した(総計96個)。各円盤を96ウェルマイクロタイタープレートのウェルの底に入れた。ストレプトアビジン(0.2M重炭酸ナトリウム中の100mlの0.1mg/ml溶液、pH8.5)を次に各ウェルに加えた。固定化は、4℃で18〜20時間進行させた。100mlずつの50mMリン酸ナトリウム、pH7.5に浸漬して円盤を3回洗浄して、使用するまで100mlの50mMリン酸ナトリウム(pH7.2)中で保存した。
(例6.53に記載したように調製した)ストレプトアビジンを固定化したEVA−小繊維複合電極を使用して、AFP測定を行った。測定は、測定の前に1% BSA溶液(0.1Mリン酸ナトリウム中の1% BSAおよび0.3%ツイーン20、pH=6.8)でプレブロックして、0.1Mリン酸ナトリウム中の0.3%ツイーン20、pH6.8で濯いだ96ウェルプレート中で行った。3/16”の直径の48個の円盤を3”直径のEVA−SA複合体から打ち抜いて、処理した表面を有する96ウェルプレートに入れた。50マイクロリットルのビオチン化AFP抗体を、複合体を含むウェルに加えた。次にプレートを室温で30分間振盪した。複合体を0.1mlのPBS−1で2回すすぎ、室温で0.05mlの較正物質と0.05mlのTAG1標識抗体の混合物と共に1時間振盪した。反応の終わりに、複合体を0.150mlのECL測定緩衝液で濯いで、ECLを測定するまでタンパク質緩衝液(3% BSA、3%ツイーン20、25mM塩化ナトリウムおよび0.1Mリン酸ナトリウム、pH=7.3)中に保存した。我々は0.56〜7950 IU/mlの範囲の8種のAFP較正物質を使用した。各較正物質は、6回反復で測定した。図53に結果を示す。
測定は、EVA−小繊維複合体(例6.55に記載したように調製)の3/16”直径のストレプトアビジンで被覆した円盤を使用して行った。測定試薬は、TSH測定キット(イゲン社(IGEN, Inc.))の一部であり、そしてそれぞれ緩衝液(TSH測定希釈液)に溶解したビオチン標識抗TSH抗体とTAG1標識抗TSH抗体を含んでいた。円盤は、96ウェルマイクロタイタープレートの個々のウェルに入れた。ビオチン標識抗体(0.05mg、0.012mg/ml)を各ウェルに加えて、37℃で30分間プレートを穏やかに振盪した。TSH測定希釈液で円盤を洗浄後、TAG1標識抗体(0.025ml、600ng/ml)と種々の量のTSHを含有する溶液を加えて、37℃でプレートをさらに60分間振盪した。円盤は、TSH測定希釈液で洗浄して、ECLによる分析まで、同希釈液中に保存した。
この例では、DNA配列の測定を記載する。本測定は、ストレプトアビジンで被覆した複合電極上のサンドイッチ複合体の形成を伴い、この電極は、ビオチン標識捕捉プローブ(SC5)、アナライト(SC3.1)およびTAG1標識プローブ(SC4.1)を含む。SC3.1とSC4.1は、例6.48に記載されている。SC5は、オリゴエトセトラ社(Oligos Etc. Inc.)から購入し、そして配列5’−ca gtt gtg tgc cac cta caa gca tta cgg act agt cat ggt tca cag agg−3’−ビオチンを有する。酸化小繊維−EVA複合体は、例6.53に記載したようにEDCとNHSで活性化した。プラスチックのブロックにあけられた穴に対してOリングで円盤を密閉して、複合体の3/8”円盤の上にウェルを画定した。Oリングは、ウェルに入っている溶液と接触している複合体の面積(0.25cm2)を画定した。ストレプトアビジンは、0.05mlのストレプトアビジンの0.5mg/ml溶液(PBS中)を各ウェルに加えることにより、円盤上に固定化した。装置を振盪しながら反応は室温で3時間進行させた。円盤は、PBSで2回、0.10%(w/v)トリトンX−100を含有するPBSで1回およびPBSでさらに2回洗浄した。
複合電極の表面から突き出る小繊維の量は、二重層静電容量の測定から推定することができる。電極は、直径0.25インチの複合体の円盤を打ち抜いて、電気塗料で銅線を取り付けて1つの表面に電気的に接触させて調製した。任意のむき出しの銅線はエポキシ中に密閉した。電極を使用して、−0.2V対Ag/AgClと+0.8V対Ag/AgClの間のいくつかの電位の走査速度(例えば、5、10および25mV/秒)で、アルゴンをパージした0.5M K2SO4中のサイクリックボルタングラム(cyclic voltammograms)を記録した。二重層荷電電流Idlは、サイクリックボルタングラムの広く平らな領域、典型的には+0.25V対Ag/AgClで測定した。走査速度に対するIdlでのプロットの傾きは、二重層静電容量Cdlとしてとられる。10μF/cm2の小繊維表面積の平均値、および200M2/グラムの小繊維表面積を使用して、電解質に露出される小繊維の量を推定することができる。
N−ヒドロキシスクシンイミド(NHS)(0.35g)と1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC)(0.60mg)を、25mlのジオキサン中に220mgのカルボキシル化小繊維(ハイパーイオン触媒社(Hyperion Catalysts Inc.))を含有する懸濁液に加えて、この混合物を音波処理(ソニファイアー(Sonifier)250、ブランソン・ウルトラソニックス(Branson Ultrasonics))して、室温で一晩撹拌した。反応は、焼結ガラスロートで小繊維からの反応物の真空濾過により停止させた。小繊維をジオキサン(3×15ml)およびメタノール(充分に)で洗浄し、次に真空下で乾燥して、220mgのNHSエステル活性化小繊維を得た。
NHSエステル修飾小繊維(2.1mg、例6.60に記載したように調製)を、400μl PBS−1緩衝液(0.1Mリン酸ナトリウム、0.15M塩化ナトリウム、pH=7.8)中で最も低い出力設定で5分間音波処理(ソニファイアー(Sonifier)250、ブランソン・ウルトラソニックス(Branson Ultrasonics))した。ストレプトアビジンの溶液(150μl PBS−1中2.4mg)を分散小繊維懸濁液と混合して、混合物(650μl)を室温で3時間穏やかに振盪した。小繊維は、多数回サイクルの反復遠心分離、および以下の緩衝液(1%トリトンX−100を含有する0.1Mリン酸ナトリウム(1回)、PBS−1(2回)、0.1%トリトンX−100を含有する0.1Mリン酸ナトリウム(1回)、およびPBS−1(4回))を連続して使用する再懸濁により洗浄した。ストレプトアビジン添加小繊維をPBS−1中で4℃で保存した。
CC小繊維のストック懸濁液(水中1mg/ml)をトリトンX−100の水溶液(0.2%(w/v))に希釈して、CC小繊維を0.1mg/mlの濃度で含有する水性懸濁液を調製した。30%のデューティサイクルを使用し、かつ出力制御を3の値に設定して5分間音波処理して、プローブソニケーター(ソニファイアー(Sonifier)250、ブランソン・ウルトラソニックス(Branson Ultrasonics))でCC小繊維を微細に分散した。次に4mlの懸濁液をトリトンX−100の水溶液で40mlの容量まで希釈して、音波処理した懸濁液の0.01mlの濃度までさらに希釈した。
例6.61に記載したように、分散したCC炭素小繊維上にストレプトアビジンを共有結合で固定化した。全部で100μgの小繊維を、BSA 1mg/ml(w/v)の濃度で含有する溶液に懸濁して、小繊維の占有されていない部位をブロックした。次にブロックした小繊維を遠心分離して1mlの脱イオン水に再懸濁した。5分間音波処理(ソニファイアー250、ブランソン・ウルトラソニックス)して、この懸濁液を再分散した。
例6.61に記載したように、ストレプトアビジンで被覆した(かつBSAでブロックした)小繊維の懸濁液を調製した。懸濁液をECL測定緩衝液(イゲン社)に希釈して、7mg/mlの小繊維のストック懸濁液を得た。溶液を氷水浴に入れて(ストレプトアビジンの変性を防ぐため)、20%のデューティサイクルを使用し、かつ出力制御を1.5の値に設定して、5分間音波処理(ソニファイアー250、ブランソン・ウルトラソニックス)して小繊維を再分散した。
ワットマン(Whatman)のナイロン膜フィルター(0.45μm孔径)は、バルザースMED010ミニデポジションシステム(Balzers MED 010 Minideposition System)を使用してスパッタリングした金で被覆した。沈積は、アルゴンプラズマ(5×10−2mbarの圧力で)と100mAの放電電流を使用して行った。
例6.61に記載したように、ストレプトアビジンで被覆した(かつBSAでブロックした)小繊維の懸濁液を調製した。懸濁液をECL測定緩衝液(イゲン社)に希釈して、28mg/mlの小繊維の濃度のストック懸濁液を得た。溶液を氷水浴に入れて(ストレプトアビジンの変性を防ぐため)、20%のデューティサイクルを使用し、かつ出力制御を1.5に設定して、5分間音波処理(ソニファイアー250、ブランソン・ウルトラソニックス)して小繊維を再分散した。
2つの複合電極上でAFP測定法を開発した。27重量%のCC小繊維を含有するエチレン酢酸ビニル(EVA)コポリマーから両方の電極を調製した。1つの電極(「加水分解EVA」電極)は、水酸化カリウムで処理し、CDIで活性化し、そしてストレプトアビジンに暴露した(例6.55のように)。もう一方の電極(「クロム酸EVA」電極)は、クロム酸で処理し、NHSとEDCで処理してストレプトアビジンに暴露した(例6.53のように)。
我々は、270グラムのカーボンナノチューブ(HCIフィブリルズ(HCI Fibrils)、CC等級)と730グラムのエチル酢酸ビニル(EVA、クオンタム・ミクロテン(Quantum Microthene)FE530)をヘンシェル・ラブ(Henschel lab)ミキサー中で2分間混合した。ナノチューブ−EVA混合物は、密閉ホッパーに真空移送し、180℃でバス(Buss)PR46ニーダーで配合して、バス(Buss)クロスヘッドペレット製造機に供給した。ペレットはガラ(Gala)乾燥機で乾燥した。このプロセスにより、27重量%の小繊維を含有する複合体が得られた。
炭素小繊維とEVAの複合体(27重量%小繊維)を酸素(O2)ガスから生成したプラズマに暴露した。複合体を2000Wで10分間(20kW分)プラズマに暴露した。N−ヒドロキシスクシンイミド−エステル官能基(NHS−エステル)を導入するために、プラズマ処理した小繊維−EVA複合体(126cm2)を、無水塩化メチレン(50ml)中で室温で2時間、N−ヒドロキシスクシンイミド(700mg、アルドリッチ(Aldrich)13067−2から)および1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(1.6g、アルドリッチ(Aldrich)16146−2から)と反応させ、次にメタノールと水で濯いで、アルゴンガス流を吹きつけ乾燥した。NHS−エステル誘導体化複合体を、PBS−1緩衝液(0.1Mリン酸ナトリウム、0.15M塩化ナトリウム、pH=7.8、50ml)中で室温で4時間、ストレプトアビジン(5mg、ピアース(Pierce)21125から)と共にインキュベートした。次に複合体をPBS−1中の1%トリトンX−100で30分間振盪しながら洗浄し、PBS−1で30分間3回各回振盪しながら洗浄した。
炭素小繊維とEVAの複合体(123cm2)(27重量%小繊維)を最初に酸素(O2)ガスから生成したプラズマに暴露した。複合体は、2000Wで20分間(40kW分)プラズマに暴露した。次に複合体をアンモニア(NH3)ガスと窒素(N2)ガスの混合物(それぞれ4:1比のガス)から生成したプラズマに暴露した。複合体を、このプラズマに2000Wで60分間(120kW分)暴露した。マレイミド官能基を形成するために、プラズマ処理小繊維EVA複合体を、PBS−1(50ml)中で振盪しながら室温で3時間、スルホ−SMCC(Sulfo-SMCC)(35mg、ピアース(Pierce):22322から)と共にインキュベートした。次に複合体を水(10分振盪しながら60ml)で1回およびPBS−1で3回(各回10分振盪しながら60ml)洗浄した。
小繊維−EVA複合電極(例6.68に記載したように調製)を、アドバンスト・プラズマ・システムズ(Advanced Plasma Systems)シリーズCプラズマ反応器(1時間、2000W、300mtorr)中で水飽和アルゴンから生成したプラズマで処理した。複合体(〜80cm2)は、100mMリン酸中0.2mg/mlの濃度で抗AFPモノクローナル(ベーリンガー−マンハイム)を含有する20mlの溶液(pH7.5)に入れて、室温で2時間穏やかに撹拌しながらインキュベートした。複合体を100mMリン酸(pH7.5)で洗浄して、同じ溶液中で−4℃で保存した。放射性標識を使用して、円盤に吸着した抗体の量を求めると、2.9pmolであった。
27重量%の小繊維を含有する小繊維−EVA複合体のペレットを、追加のEVAと配合して、15重量%の小繊維を含有する小繊維−EVA複合体を製造した。この複合体を、例6.68に記載したものと類似した手順により押し出してシートにした。複合体をアルゴン/水プラズマで処理して、例6.71に記載したように抗AFP抗体で被覆した。放射性標識した抗体を使用する試験では、わずか15重量%の小繊維を含有するこれらの複合体が、27重量%の小繊維を含有する他の複合体(2.9pmol、例6.71を参照のこと)よりも多くの抗体(3.13pmol)を吸着することが示された。例6.71に記載したようにAFP測定において抗体で被覆した複合体を使用した。既知量のAFPを含有する試料について観察されたECLシグナルを図64に示す。わずか15重量%の小繊維を含有する複合体は、27重量%の小繊維を含有する複合体(図63、例6.71)よりもわずかに高いECLシグナルを与えた(図64)。
小繊維−EVA複合体(例6.68に記載したように調製)を、クロロホルム中に1mg/mlの濃度でオクタデシルアミンを含有する溶液中に2時間浸漬した。複合体を空気中で乾燥した(乾燥工程の間複合体のシートを平らに保つために端におもりを載せた)。次に複合体を、アドバンスト・プラズマ・システムズ(Advanced Plasma Systems)シリーズCプラズマ反応器(1時間、2000W、300mtorr)中で酸素プラズマで処理した。次に複合体を、5mMリン酸(pH7.5)中にアビジンを含有する溶液(1.25mg/ml)中に浸漬して、アビジンで被覆した。過剰のアビジンは、リン酸緩衝化生理食塩水で洗浄して除去した。125I標識ストレプトアビジンと、125Iおよびビオチン標識ウサギIgGを使用する放射性同位体実験により、我々は30〜43pmolのストレプトアビジンを固定化し、ストレプトアビジンが>2.2pmolのビオチン標識抗体を結合できたことを証明した。
小繊維−EVA複合体(例6.68に記載したように調製)は、アドバンスト・プラズマ・システムズ(Advanced Plasma Systems)シリーズCプラズマ反応器(1000W、3分、300mtorr)中でアルゴンプラズマで処理した。複合体を反応器から取り出して、直ぐに4%(w/v)のアクリル酸(蒸留)またはアリルアミンを含有する無酸素水溶液に入れた。複合体をこれらの溶液中で30℃で3時間インキュベートして、次に水で充分に洗浄して、空気中で乾燥した。例6.69に記載したものと類似した方法によりNHSエステルとしてカルボン酸基を活性化して、グラフトおよび/または重合したアクリル酸残基によりストレプトアビジンを固定化した。例6.70に記載したのもと類似した方法により、複合体上にマレイミド基を導入した後、グラフトおよび/または重合したアリルアミン残基によりチオール標識ストレプトアビジンを固定化した。我々は、これらの複合体はビオチン標識試薬に結合でき、ECL標識からECLを励起することができることを証明した。我々は、ビオチンとTAG1基で標識した過剰のウサギIgGで材料を処理した後、複合電極由来のECLを測定した。結合IgGからのECLを、複合電極をトリプロピルアミンを含有する溶液(測定緩衝液、イゲン)と接触させ、0.1V/sの走査速度で0V〜−0.8V〜2.3V(Ag/AgClに対して)まで複合電極の電位を走査して、生成した。アクリル酸とアリルアミンで処理した複合体により、それぞれ203nAsおよび123nAsの積分PMT電流が得られた。
プラズマを使用して、アビジンを複合材料の表面に融合させた。融合は、最初に小繊維−EVA複合体のブロック(例6.68)を0.5mg/mlのアビジン溶液に3時間浸漬して行った。60mlのPBS−1を3回取り替えて洗浄後、複合体を空気乾燥し、ストリップに切断して、ArまたはO2プラズマのいずれかで600ワットで5分間(3000W分)処理した。これらの実験は、シリーズBプラズマ反応器(エイピーエス・テクノロジーズ(APS Technologies)で行った。
ビオチンを担持するアクリルビーズ(125mg)(シグマ(Sigma)#B−3272、ロット#57F4034)を微細に粉砕した。この粉末を約20mlの脱イオン水に懸濁して、ボルテクサー(vortexer)で充分に混合した。懸濁液を取り出し、0.45ミクロンフィルター(ゲルマンサイエンシーズ(Gelman Sciences)#4598)により濾過した。濾過した懸濁液を小繊維−EVA複合体(27重量%の小繊維、例6.68を参照のこと)のいくつかの5/16”直径の円盤上で乾燥した。
小繊維−EVA複合体(例6.68に記載したように調製)は酸素プラズマ中で酸化して、ストレプトアビジンで被覆した(例6.69に記載したように)。複合電極を5/16”直径の円盤に切断して、この円盤を、円盤の一方の表面が溶液に接触して配置されたホルダーに入れた。円盤を、撹拌しながら1時間、ビオチン標識抗AFP抗体を含有する100μlの溶液(7.5μg/ml、ベーリンガー−マンハイム)で処理し、次にリン酸緩衝化生理食塩水で洗浄した。次に以下の溶液:TAG1標識抗AFP抗体(12μg/ml、ベーリンガー−マンハイム)、リン酸(200mM)、トリプロピルアミン(200mM)、ウシ胎児血清(2%)、ショ糖(2%)、クロロアセトアミド(0.1%)、およびトリトンX−100(0.02%)(pH7.6)の添加および凍結乾燥により、測定に必要な他の試薬を表面上で乾燥した。AFP測定は、95μlの試料を円盤の表面上の乾燥した試薬に加えて、振盪しながら1時間インキュベートして行った。ECLは、複合電極の上の溶液に対電極と参照電極を挿入して、4.8V/sの走査速度で対電極の電位を0V〜−0.8V〜2.3Vまで走査して、励起させた。図67は、既知量のAFPを含有する溶液について光電子増倍管で測定したECLシグナルを示す。
7.参考文献の引用
本発明は、本明細書に記載される具体的な実施態様によって範囲が限定されるものではない。実際に前記説明と添付図面から、当業者にとっては、本明細書に記載されるものに加えて本発明の種々の変形態様が明らかであろう。このような変形態様は、本請求の範囲に含むものと解釈される。種々の刊行物が本明細書に引用されており、これらの開示はその全体が参照により組み込まれる。
Claims (76)
- ポリマーマトリックスとその中に分散された多数の炭素粒子を含有する複合体を含む電気化学発光(ECL)測定電極であって、多数の結合ドメインを有するパターン付けされた多重アレイの多重特異的な表面(PMAMS)を含み、その各結合ドメインは多成分試料中の1つの目的のアナライトに対する結合試薬を含有し、第1の結合ドメインは多成分試料中の第1のアナライトに対する結合試薬を含み、第2の結合ドメインは多成分試料中の第2のアナライトに対する結合試薬を含み、
これらの結合試薬は当該電極に固定化され、および当該多数の炭素粒子は露出した炭素粒子を包含し、
当該複合体はプラズマエッチングされている、
測定電極。 - 炭素粒子は1〜30重量%の複合体を含む、請求の範囲第1項記載の測定電極。
- 結合試薬は電極に共有結合している、請求の範囲第1項または第2項に記載の測定電極。
- 結合試薬は電極に非共有結合している、請求の範囲第1項または第2項に記載の測定電極。
- 結合試薬は電極に直接固定化されている、請求の範囲第1項または第2項に記載の測定電極。
- 結合試薬は結合対を介して電極に間接的に固定化されている、請求の範囲第1項または第2項に記載の測定電極。
- 結合試薬は、抗体またはその断片、核酸、受容体または酵素である、請求の範囲第1項から第6項のいずれか一項に記載の測定電極。
- 炭素粒子は小繊維である、請求の範囲第1項から第7項のいずれか一項に記載の測定電極。
- 炭素粒子は、エッチングされ、または化学的に修飾されている、請求の範囲第1項から第8項のいずれか一項に記載の測定電極。
- 請求の範囲第1項から第9項のいずれか一項に記載の測定電極の製造方法であって、
(a)ポリマーマトリックスとその中に分散された多数の炭素粒子を含有する複合体をプラズマで処理する工程、および
(b)こうして処理した複合体上で、パターン付けされた多重アレイの多重特異的な表面(PMAMS)を形成する工程、
を含む、製造方法。 - 多数の炭素粒子は露出した炭素粒子を包含する、請求の範囲第10項記載の方法。
- プラズマは、O2、Ar、H2O、N2、NH3、CF4、SF6、C2F6、CHF3、CF2Cl2、CF3Br、CF3Clおよびこれらの組合せよりなる群から選択される原子または化合物を含有する、請求の範囲第10項記載の方法。
- 請求の範囲第1項から第9項のいずれか一項に記載の測定電極の製造方法であって、
(a)ポリマーマトリックスとその中に分散された多数の炭素粒子を含有する複合体をプラズマおよび化学試薬で処理する工程、および
(b)こうして処理した複合体上で、パターン付けされた多重アレイの多重特異的な表面(PMAMS)を形成する工程、
を含む、製造方法。 - 炭素粒子は小繊維である、請求の範囲第13項記載の方法。
- 化学試薬は酸化剤である、請求の範囲第13項記載の方法。
- アナライトの検出または定量のための電気化学発光測定を実施するための装置システムで使用されるカートリッジであって、1つまたはそれ以上の請求の範囲第1項記載の電極および測定試薬を含む、カートリッジ。
- 測定試薬は乾燥測定試薬を包含する、請求の範囲第16項記載のカートリッジ。
- 乾燥測定試薬は電気化学発光共作用物質(coreactant)である、請求の範囲第17項記載のカートリッジ。
- 乾燥測定試薬は電気化学発光残基を含有する、請求の範囲第17項記載のカートリッジ。
- 乾燥測定試薬は較正標準物質である、請求の範囲第17項記載のカートリッジ。
- カートリッジからの光を、測定での光を検出する光検出器へ通すための窓を包含する、請求の範囲第16項から第20項のいずれか一項に記載のカートリッジ。
- 対電極を包含する、請求の範囲第16項から第21項のいずれか一項に記載のカートリッジ。
- 参照電極を包含する、請求の範囲第16項から第22項のいずれか一項に記載のカートリッジ。
- 電気エネルギー源を包含する、請求の範囲第16項から第23項のいずれか一項に記載のカートリッジ。
- カートリッジに導入される流体試料を閉じこめるための手段を包含する、請求の範囲第16項から第24項のいずれか一項に記載のカートリッジ。
- アナライトの検出または定量のために電気化学発光測定を実施するための装置システムであって、
(a)1つまたはそれ以上の請求の範囲第1項から第9項のいずれか一項に記載の測定電極を包含するカートリッジ、および
(b)各結合ドメインからの光を選択的に検出または定量する光検出器、
を含む装置システム。 - 炭素粒子は小繊維である、請求の範囲第26項記載の装置システム。
- カートリッジの内容物を混合する手段を包含する、請求の範囲第26項または第27項に記載の装置システム。
- カートリッジは乾燥測定試薬を包含する、請求の範囲第26項から第28項のいずれか一項に記載の装置システム。
- 光検出器はCCDである、請求の範囲第26項から第29項のいずれか一項に記載の装置システム。
- 光検出器はフォトダイオードである、請求の範囲第26項から第29項のいずれか一項に記載の装置システム。
- カートリッジの温度を制御するための温度制御手段を包含する、請求の範囲第26項から第31項のいずれか一項に記載の装置システム。
- 露出した炭素粒子を有するポリマーマトリックスを含有する複合体を含む固相支持体であって、多数の結合ドメインを有するパターン付けされた多重アレイの多重特異的な表面(PMAMS)を含み、その各結合ドメインは、その上に沈着した多成分試料中の1つの目的のアナライトに対する結合試薬を含有し、第1の結合ドメインは多成分試料中の第1のアナライトに対する結合試薬を含み、第2の結合ドメインは多成分試料中の第2のアナライトに対する結合試薬を含み、当該複合体はプラズマエッチングされている、固相支持体。
- 炭素粒子は小繊維である、請求の範囲第33項記載の固相支持体。
- 生物学的分子は、抗体、核酸、酵素またはペプチドを含む、請求の範囲第33項または第34項に記載の固相支持体。
- 請求の範囲第1項から第9項のいずれか一項に記載の測定電極を使用する方法であって、
(a)2つまたはそれ以上のアナライトと電気化学発光標識物とを含む多成分試料を当該電極に接触させ、
(b)当該電極に電気化学エネルギーを負荷することによって電気化学発光標識物を発光するように誘導し、そして
(c)放出された発光を検出または測定する、
ことを含む、方法。 - 請求の範囲第16項から第25項のいずれか一項に記載のカートリッジを使用する方法であって、
(a)2つまたはそれ以上のアナライトと電気化学発光標識物とを含む多成分試料を当該電極に接触させ、
(b)当該電極に電気化学エネルギーを負荷することによって電気化学発光標識物を発光するように誘導し、そして
(c)放出された発光を検出または測定する、
ことを含む、方法。 - 請求の範囲第26項から第32項のいずれか一項に記載の装置システムを使用する方法であって、
(a)2つまたはそれ以上のアナライトと電気化学発光標識物とを含む多成分試料を当該電極に接触させ、
(b)当該電極に電気化学エネルギーを負荷することによって電気化学発光標識物を発光するように誘導し、そして
(c)放出された発光を検出または測定する、
ことを含む、方法。 - 基質層を含み、かつ複数の結合ドメインを有するパターン付けされた多重アレイの多重特異的な表面(PMAMS)をさらに含む第1の支持体を有する電気化学発光(ECL)測定カセットであって、その各結合ドメインは、1つまたはそれ以上の電極上にあるまたはそれに近接し、かつ当該第1の支持体上のまたはその中の凹部、くぼみまたは穴に位置し、そして当該凹部、くぼみまたは穴は少なくとも2つの別々の結合ドメインを含み、
当該1つまたはそれ以上の電極は、ポリマーマトリックスとその中に分散された多数の炭素粒子を含有する複合体を含み、各結合ドメインは多成分試料中の1つの目的のアナライトに対する結合試薬を含有し、第1の結合ドメインは多成分試料中の第1のアナライトに対する結合試薬を含み、第2の結合ドメインは多成分試料中の第2のアナライトに対する結合試薬を含み、
これらの結合試薬は当該電極に固定化され、および当該多数の炭素粒子は露出した炭素粒子を包含し、当該複合体はプラズマエッチングされている、測定カセット。 - その上に複数の作用電極、および少なくとも1つの測定セルを有する第1の支持体を含む電気化学発光(ECL)測定カセットであって、当該作用電極は、当該少なくとも1つの測定セル内にマスクによって画定される少なくとも2つの結合ドメインを有するパターン付けされた多重アレイの多重特異的な表面(PMAMS)を含み、
当該作用電極は、ポリマーマトリックスとその中に分散された多数の炭素粒子を含有する複合体を含み、各結合ドメインは多成分試料中の1つの目的のアナライトに対する結合試薬を含有し、第1の結合ドメインは多成分試料中の第1のアナライトに対する結合試薬を含み、第2の結合ドメインは多成分試料中の第2のアナライトに対する結合試薬を含み、
これらの結合試薬は当該電極に固定化され、および当該多数の炭素粒子は露出した炭素粒子を包含し、当該複合体はプラズマエッチングされている、測定カセット。 - 凹部、くぼみまたは穴を画定するマスクをさらに含む、請求の範囲第39項記載の測定カセット。
- 第1の支持体上に複数の結合ドメインを画定するマスクをさらに含む、請求の範囲第39項記載の測定カセット。
- マスクが疎水性であって結合ドメインが親水性であるか、またはその逆である、請求の範囲第41項または第42項に記載の測定カセット。
- 第1の支持体は、基質層に隣接する1つまたはそれ以上の接着層をさらに含む、請求の範囲第39項記載の測定カセット。
- 1つまたはそれ以上の試料および/または1つまたはそれ以上の試薬を結合ドメインに送達するためのチャネルをさらに含む、請求の範囲第39項から第44項のいずれか一項に記載の測定カセット。
- 第1の支持体に取り付けられた第2の支持体であって、その間に複数のウェルおよび/または複数の流体チャネルを提供する第2の支持体をさらに含む、請求の範囲第39項から第45項のいずれか一項に記載の測定カセット。
- 第2の支持体は、複数の開口部を有し、それによって、第1の支持体に取り付けられたときに複数のウェルを形成する、請求の範囲第46項記載の測定カセット。
- 光は、第1の支持体、第2の支持体またはその両方によって検出される、請求の範囲第46項記載の測定カセット。
- 少なくとも第1の支持体の一部が透明である、請求の範囲第39項または第40項に記載の測定カセット。
- 少なくとも第2の支持体の一部が透明である、請求の範囲第46項記載の測定カセット。
- 測定カセットは、ウェルを有するマルチウェルプレートである、請求の範囲第39項から第50項のいずれか一項に記載の測定カセット。
- 結合ドメインはウェルの底に近接する、請求の範囲第51項記載の測定カセット。
- 測定カセットは、96ウェルまたは386ウェルのプレートである、請求の範囲第51項または第52項に記載の測定カセット。
- 測定を実施するための試薬をさらに含む、請求の範囲第39項から第53項のいずれか一項に記載の測定カセット。
- 試薬は乾燥状態で保存される、請求の範囲第54項記載の測定カセット。
- 試薬は湿潤状態で保存される、請求の範囲第54項記載の測定カセット。
- 電気化学発光標識物をさらに含む、請求の範囲第39項から第56項のいずれか一項に記載の測定カセット。
- 金属は、ルテニウム、オスミウム、レニウム、イリジウム、ロジウム、白金、パラジウム、モリブデン、テクネチウムおよびタングステンよりなる群から選択される金属含有有機化合物からなる電気化学発光標識物をさらに含む、請求の範囲第39項から第56項のいずれか一項に記載の測定カセット。
- 電極は炭素からなる、請求の範囲第39項から第58項のいずれか一項に記載の測定カセット。
- 電極は粒状炭素、カーボンブラック、カーボンフェルト、ガラス状炭素、炭素繊維、炭素小繊維またはそれらの組合せからなる、請求の範囲第39項から第58項のいずれか一項に記載の測定カセット。
- 電極は複合材料からなる、請求の範囲第39項から第58項のいずれか一項に記載の測定カセット。
- 電極は、ポリマー性材料および炭素粒子を包含する複合材料からなる、請求の範囲第39項から第58項のいずれか一項に記載の測定カセット。
- 電極は、個々にアドレスが可能な電極を含む、請求の範囲第39項から第62項のいずれか一項に記載の測定カセット。
- 電極に電気的に接続された電気接点をさらに含む、請求の範囲第39項から第63項のいずれか一項に記載の測定カセット。
- 第1の1セットの電極に電気エネルギーを供給することができる第1の1セットの電気接点、および第2の1セットの電極に電気エネルギーを供給することができる第2の1セットの電気接点を含む、請求の範囲第64項記載の測定カセット。
- 電極は、0.001〜10mmの幅または直径である、請求の範囲第39項から第65項のいずれか一項に記載の測定カセット。
- 電気化学発光(ECL)測定を実施するための電気化学発光測定カセットであって、
(a)各電極は電気化学発光を誘導することができる複数の電極、
(b)マスクによって電極上に画定される複数の別々の結合ドメインを含む、パターン付けされた多重アレイの多重特異的な表面(PMAMS)であって、少なくとも1つの結合ドメインは、各当該複数の電極上に画定される、および
(c)多成分試料を当該複数の結合ドメインと接触させて入れておくための多成分試料容器、
を含み、
各結合ドメインは多成分試料中の1つの目的のアナライトに対する結合試薬を含み、第1の結合ドメインは多成分試料中の第1のアナライトに対する結合試薬を含み、第2の結合ドメインは多成分試料中の第2のアナライトに対する結合試薬を含み、当該複合体はプラズマエッチングされている、
測定カセット。 - 1つの結合ドメインは電極上に含有される、請求の範囲第67項記載の測定カセット。
- 2つまたはそれ以上の結合ドメインは電極上に含有される、請求の範囲第67項記載の測定カセット。
- 1つまたはそれ以上の容器中に、請求の範囲第39項から第69項のいずれか一項に記載の測定カセットおよび1つまたはそれ以上の試薬を含むキット。
- 光検出器および請求の範囲第39項から第69項のいずれか一項に記載の測定カセットを含む装置。
- 電極に電気エネルギーを供給することができる電気コネクターをさらに含む、請求の範囲第71項記載の装置。
- 第1の1セットの電極に電気エネルギーを供給することができる第1の1セットの電気コネクター、および第2の1セットの電極に電気エネルギーを供給することができる第2の1セットの電気コネクターをさらに含む、請求の範囲第71項記載の装置。
- 光検出器は、複数の結合ドメインから放出されたECLシグナルを走査することができる、請求の範囲第71項記載の装置。
- 複数のウェルからなるマルチウェルプレートであって、各ウェルは、その底の中心に置かれた請求の範囲第1項から第9項のいずれか一項に記載の測定電極の表面を有する、マルチウェルプレート。
- 電極表面は炭素をさらに含む、請求の範囲第75項記載のマルチウェルプレート。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/715,163 US6207369B1 (en) | 1995-03-10 | 1996-09-17 | Multi-array, multi-specific electrochemiluminescence testing |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP51498498A Division JP4491071B2 (ja) | 1996-09-17 | 1997-09-17 | 多重アレイの多重特異的な電気化学発光試験 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008170449A JP2008170449A (ja) | 2008-07-24 |
JP4486684B2 true JP4486684B2 (ja) | 2010-06-23 |
Family
ID=24872910
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP51498498A Expired - Lifetime JP4491071B2 (ja) | 1996-09-17 | 1997-09-17 | 多重アレイの多重特異的な電気化学発光試験 |
JP2008026822A Expired - Lifetime JP4486684B2 (ja) | 1996-09-17 | 2008-02-06 | 多重アレイの多重特異的な電気化学発光試験 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP51498498A Expired - Lifetime JP4491071B2 (ja) | 1996-09-17 | 1997-09-17 | 多重アレイの多重特異的な電気化学発光試験 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US6207369B1 (ja) |
EP (2) | EP0944820A4 (ja) |
JP (2) | JP4491071B2 (ja) |
KR (1) | KR100564269B1 (ja) |
AU (1) | AU743567B2 (ja) |
CA (1) | CA2265828A1 (ja) |
IL (1) | IL129022A (ja) |
TW (1) | TW541416B (ja) |
WO (1) | WO1998012539A1 (ja) |
ZA (1) | ZA978380B (ja) |
Families Citing this family (341)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5824473A (en) * | 1993-12-10 | 1998-10-20 | California Institute Of Technology | Nucleic acid mediated electron transfer |
US5620850A (en) * | 1994-09-26 | 1997-04-15 | President And Fellows Of Harvard College | Molecular recognition at surfaces derivatized with self-assembled monolayers |
US6673533B1 (en) * | 1995-03-10 | 2004-01-06 | Meso Scale Technologies, Llc. | Multi-array multi-specific electrochemiluminescence testing |
US6207369B1 (en) * | 1995-03-10 | 2001-03-27 | Meso Scale Technologies, Llc | Multi-array, multi-specific electrochemiluminescence testing |
US6319670B1 (en) * | 1995-05-09 | 2001-11-20 | Meso Scale Technology Llp | Methods and apparatus for improved luminescence assays using microparticles |
ES2288760T3 (es) | 1996-04-25 | 2008-01-16 | Bioarray Solutions Ltd. | Ensamblaje electrocinetico controlado por luz de particulas proximas a superficies. |
US7014992B1 (en) * | 1996-11-05 | 2006-03-21 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Conductive oligomers attached to electrodes and nucleoside analogs |
US7045285B1 (en) | 1996-11-05 | 2006-05-16 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Electronic transfer moieties attached to peptide nucleic acids |
US7381525B1 (en) | 1997-03-07 | 2008-06-03 | Clinical Micro Sensors, Inc. | AC/DC voltage apparatus for detection of nucleic acids |
US7160678B1 (en) | 1996-11-05 | 2007-01-09 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Compositions for the electronic detection of analytes utilizing monolayers |
US7393645B2 (en) * | 1996-11-05 | 2008-07-01 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Compositions for the electronic detection of analytes utilizing monolayers |
ES2544455T3 (es) * | 1997-02-28 | 2015-08-31 | Cepheid | Montaje para reacción química con intercambio de calor, ópticamente interrogada |
US6013459A (en) | 1997-06-12 | 2000-01-11 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Detection of analytes using reorganization energy |
NZ516848A (en) * | 1997-06-20 | 2004-03-26 | Ciphergen Biosystems Inc | Retentate chromatography apparatus with applications in biology and medicine |
DE69841614D1 (de) * | 1997-06-20 | 2010-05-27 | Univ New York | Elektrosprühen von lösungen zur massenherstellung von chips und molekülbibliotheken |
US6413783B1 (en) | 1997-09-18 | 2002-07-02 | Meso Scale Technologies, Llc | Assay sonication apparatus and methodology |
CA2319170A1 (en) | 1998-01-27 | 1999-07-29 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Amplification of nucleic acids with electronic detection |
US7282240B1 (en) * | 1998-04-21 | 2007-10-16 | President And Fellows Of Harvard College | Elastomeric mask and use in fabrication of devices |
CA2331189A1 (en) | 1998-05-06 | 1999-11-11 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Electronic methods for the detection of analytes utilizing monolayers |
US6200531B1 (en) * | 1998-05-11 | 2001-03-13 | Igen International, Inc. | Apparatus for carrying out electrochemiluminescence test measurements |
EP0962773A1 (en) * | 1998-06-03 | 1999-12-08 | Mark Howard Jones | Electrochemical based assay processes instrument and labels |
US6171802B1 (en) * | 1998-06-10 | 2001-01-09 | Kent State University | Detection and amplification of ligands |
AU4833899A (en) * | 1998-06-24 | 2000-01-10 | Therasense, Inc. | Multi-sensor array for electrochemical recognition of nucleotide sequences and methods |
WO2000001848A1 (fr) * | 1998-07-01 | 2000-01-13 | Hitachi, Ltd. | Appareil et methode de criblage de polynucleotide |
US20020119579A1 (en) * | 1998-07-14 | 2002-08-29 | Peter Wagner | Arrays devices and methods of use thereof |
US6908770B1 (en) * | 1998-07-16 | 2005-06-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Fluid based analysis of multiple analytes by a sensor array |
US6521182B1 (en) * | 1998-07-20 | 2003-02-18 | Lifescan, Inc. | Fluidic device for medical diagnostics |
US6830934B1 (en) * | 1999-06-15 | 2004-12-14 | Lifescan, Inc. | Microdroplet dispensing for a medical diagnostic device |
US6740518B1 (en) * | 1998-09-17 | 2004-05-25 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Signal detection techniques for the detection of analytes |
US6312896B1 (en) * | 1998-09-17 | 2001-11-06 | Igen Inaternational, Inc. | Assays for measuring nucleic acid binding proteins and enzyme activities |
US6326612B1 (en) * | 1998-10-13 | 2001-12-04 | Texas Instruments Incorporated | System and method for optical sensing utilizing a portable, detachable sensor cartridge |
US6541617B1 (en) | 1998-10-27 | 2003-04-01 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Detection of target analytes using particles and electrodes |
US6833267B1 (en) | 1998-12-30 | 2004-12-21 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Tissue collection devices containing biosensors |
CA2361013A1 (en) * | 1999-01-25 | 2000-07-27 | Minerva Biotechnologies Corporation | Rapid and sensitive detection of aberrant protein aggregation in neurodegenerative diseases |
EP1151139A2 (en) * | 1999-01-25 | 2001-11-07 | UT-Battelle, LLC | Multifunctional and multispectral biosensor devices and methods of use |
US6347708B1 (en) * | 1999-03-22 | 2002-02-19 | Cedarapids Inc. | Wheel case for a vibratory apparatus |
EP1039291A1 (en) * | 1999-03-26 | 2000-09-27 | Sony International (Europe) GmbH | Optochemical sensor and method for its construction |
US6942771B1 (en) * | 1999-04-21 | 2005-09-13 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Microfluidic systems in the electrochemical detection of target analytes |
US20020177135A1 (en) * | 1999-07-27 | 2002-11-28 | Doung Hau H. | Devices and methods for biochip multiplexing |
US7312087B2 (en) * | 2000-01-11 | 2007-12-25 | Clinical Micro Sensors, Inc. | Devices and methods for biochip multiplexing |
US20030073250A1 (en) * | 1999-05-21 | 2003-04-17 | Eric Henderson | Method and apparatus for solid state molecular analysis |
US7935481B1 (en) | 1999-07-26 | 2011-05-03 | Osmetech Technology Inc. | Sequence determination of nucleic acids using electronic detection |
WO2001009141A1 (fr) | 1999-07-29 | 2001-02-08 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Derives de biotine polymerisables, polymere de la biotine et polymere reagissant a la stimulation de l'avidine |
US6136268A (en) * | 1999-08-17 | 2000-10-24 | Orion Diagnostica | Method for luminescence measurements |
US6875619B2 (en) | 1999-11-12 | 2005-04-05 | Motorola, Inc. | Microfluidic devices comprising biochannels |
US6361958B1 (en) * | 1999-11-12 | 2002-03-26 | Motorola, Inc. | Biochannel assay for hybridization with biomaterial |
US6518024B2 (en) | 1999-12-13 | 2003-02-11 | Motorola, Inc. | Electrochemical detection of single base extension |
AU2907201A (en) * | 1999-12-09 | 2001-06-18 | Motorola, Inc. | Methods and compositions relating to electrical detection of nucleic acid reactions |
EP1247089B1 (en) * | 1999-12-15 | 2008-07-23 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Carbon nanotube devices |
US6676815B1 (en) * | 1999-12-30 | 2004-01-13 | Roche Diagnostics Corporation | Cell for electrochemical analysis of a sample |
DE10000629C5 (de) * | 2000-01-10 | 2010-06-02 | november Aktiengesellschaft, Gesellschaft für Molekulare Medizin | Verfahren zur Identifizierung einer auf einen festen Körper aufgebrachten Markierung |
DE60125713T2 (de) * | 2000-01-11 | 2007-11-08 | Clinical Micro Sensors, Inc., Pasadena | Patrone, die einen Biochip enthält |
US20030170659A1 (en) * | 2000-01-24 | 2003-09-11 | Ingeneus Corporation | Electrical treatment of binding media to encourage, discourage and/or study biopolymer binding |
US6982147B2 (en) * | 2000-01-24 | 2006-01-03 | Ingeneus Corporation | Apparatus for assaying biopolymer binding by means of multiple measurements under varied conditions |
US6824669B1 (en) | 2000-02-17 | 2004-11-30 | Motorola, Inc. | Protein and peptide sensors using electrical detection methods |
WO2001070389A2 (en) * | 2000-03-17 | 2001-09-27 | President And Fellows Of Harvard College | Cell patterning technique |
KR100792021B1 (ko) * | 2000-03-30 | 2008-01-04 | 가부시키가이샤 에바라 세이사꾸쇼 | 반응성 탐식자 칩 및 그 제조방법 |
US6602400B1 (en) | 2000-06-15 | 2003-08-05 | Motorola, Inc. | Method for enhanced bio-conjugation events |
US9709559B2 (en) | 2000-06-21 | 2017-07-18 | Bioarray Solutions, Ltd. | Multianalyte molecular analysis using application-specific random particle arrays |
EP1311839B1 (en) | 2000-06-21 | 2006-03-01 | Bioarray Solutions Ltd | Multianalyte molecular analysis using application-specific random particle arrays |
JP4282251B2 (ja) * | 2000-08-02 | 2009-06-17 | 富士フイルム株式会社 | 生化学解析用ユニットおよびそれを用いた生化学解析方法 |
NL1016030C1 (nl) * | 2000-08-28 | 2002-03-01 | Aquamarijn Holding B V | Sproei inrichting met een nozzleplaat, een nozzleplaat, alsmede werkwijzen ter vervaardiging en voor toepassing van een dergelijke nozzleplaat. |
US20020100582A1 (en) * | 2000-09-05 | 2002-08-01 | Oldenburg Kevin R. | Rapid thermal cycling device |
AU2001292959A1 (en) * | 2000-09-22 | 2002-04-02 | Clontech Laboratories, Inc. | Highly sensitive proteomic analysis methods and kits and systems for practicing the same |
EP1193056A1 (en) * | 2000-09-29 | 2002-04-03 | International Business Machines Corporation | Silicone elastomer stamp with hydrophilic surfaces and method of making same |
US20030045005A1 (en) * | 2000-10-17 | 2003-03-06 | Michael Seul | Light-controlled electrokinetic assembly of particles near surfaces |
US7033821B2 (en) * | 2000-11-08 | 2006-04-25 | Surface Logix, Inc. | Device for monitoring cell motility in real-time |
US6844184B2 (en) * | 2000-11-08 | 2005-01-18 | Surface Logix, Inc. | Device for arraying biomolecules and for monitoring cell motility in real-time |
US6864065B2 (en) * | 2000-11-08 | 2005-03-08 | Surface Logix, Inc. | Assays for monitoring cell motility in real-time |
US7033819B2 (en) | 2000-11-08 | 2006-04-25 | Surface Logix, Inc. | System for monitoring cell motility in real-time |
US6893851B2 (en) | 2000-11-08 | 2005-05-17 | Surface Logix, Inc. | Method for arraying biomolecules and for monitoring cell motility in real-time |
US7326563B2 (en) | 2000-11-08 | 2008-02-05 | Surface Logix, Inc. | Device and method for monitoring leukocyte migration |
US7374906B2 (en) | 2000-11-08 | 2008-05-20 | Surface Logix, Inc. | Biological assays using gradients formed in microfluidic systems |
US20040110301A1 (en) * | 2000-11-17 | 2004-06-10 | Neilson Andy C | Apparatus and methods for measuring reaction byproducts |
US20020132360A1 (en) * | 2000-11-17 | 2002-09-19 | Flir Systems Boston, Inc. | Apparatus and methods for infrared calorimetric measurements |
US6821787B2 (en) * | 2000-11-17 | 2004-11-23 | Thermogenic Imaging, Inc. | Apparatus and methods for infrared calorimetric measurements |
US20060207877A1 (en) * | 2001-01-30 | 2006-09-21 | Walter Schmidt | Microfluidic device with various surface properties fabricated in multilayer body by plasma etching |
WO2002061146A1 (en) * | 2001-02-01 | 2002-08-08 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Use of electrical fields to control interactions between proteins and nucleic acid constructions immobilized on solid supports |
US6862398B2 (en) * | 2001-03-30 | 2005-03-01 | Texas Instruments Incorporated | System for directed molecular interaction in surface plasmon resonance analysis |
AU2002312411A1 (en) * | 2001-06-07 | 2002-12-16 | Proligo Llc | Microcalorimetric detection of analytes and binding events |
US7341498B2 (en) * | 2001-06-14 | 2008-03-11 | Hyperion Catalysis International, Inc. | Method of irradiating field emission cathode having nanotubes |
US7262063B2 (en) | 2001-06-21 | 2007-08-28 | Bio Array Solutions, Ltd. | Directed assembly of functional heterostructures |
AU2016201009A1 (en) * | 2001-06-29 | 2016-03-03 | Meso Scale Technologies, Llc | Assay plates reader systems and methods for luminescence test measurements |
AU2020204526B2 (en) * | 2001-06-29 | 2022-04-07 | Meso Scale Technologies, Llc. | Assay plates reader systems and methods for luminescence test measurements |
EP2420824B1 (en) * | 2001-06-29 | 2018-11-28 | Meso Scale Technologies LLC | Multi-well plate having an array of wells and kit for use in the conduct of an ECL assay |
AU2012200643B2 (en) * | 2001-06-29 | 2014-12-04 | Meso Scale Technologies, Llc | Assay plates reader systems and methods for luminescence test measurements |
US6808939B2 (en) | 2001-06-29 | 2004-10-26 | Igen International, Inc. | ECL labels having improved non-specific binding properties, methods of using and kits containing the same |
EP2135943A1 (en) | 2001-07-30 | 2009-12-23 | Meso Scale Technologies, LLC. | Assay electrode having immobilized lipid/protein layers, methods of making the same and methods of using the same for luminescence test measurements |
EP1423505A2 (en) * | 2001-08-06 | 2004-06-02 | Vanderbilt University | Device and methods for monitoring the status of at least one cell |
AU2002341621A1 (en) * | 2001-09-10 | 2003-03-24 | Meso Scale Technologies, Llc | Methods, reagents, kits and apparatus for protein function analysis |
EP1436598B1 (en) | 2001-09-10 | 2013-11-27 | Meso Scale Technologies LLC | Assay buffer, compositions containing the same, and methods of using the same |
US20030099993A1 (en) * | 2001-10-04 | 2003-05-29 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Detection of DNA hybridization on surfaces |
KR20040068122A (ko) | 2001-10-15 | 2004-07-30 | 바이오어레이 솔루션스 리미티드 | 공동 검색과 효소-매개된 탐지에 의한 다형성 좌위의 다중분석 |
WO2003033539A1 (fr) * | 2001-10-16 | 2003-04-24 | Institut Molekulyarnoi Biologii Im. V.A. Engelgardta Rossiiskoi Akademii Nauk | Composition pour immobilisation par polymerisation de macromolecules biologiques et procede de fabrication correspondant |
US20030124717A1 (en) * | 2001-11-26 | 2003-07-03 | Yuji Awano | Method of manufacturing carbon cylindrical structures and biopolymer detection device |
DE10162188A1 (de) * | 2001-12-17 | 2003-06-18 | Sunyx Surface Nanotechnologies | Hydrophobe Oberfläche mit einer Vielzahl von Elektroden |
US7373968B2 (en) * | 2002-01-08 | 2008-05-20 | Kevin R. Oldenburg | Method and apparatus for manipulating an organic liquid sample |
WO2003065358A2 (en) * | 2002-01-28 | 2003-08-07 | Burstein Technologies, Inc. | Methods and apparatus for logical triggering of an optical bio-disc |
CA2471017A1 (en) * | 2002-01-31 | 2003-08-07 | Burstein Technologies, Inc. | Method for triggering through disc grooves and related optical analysis discs and system |
US7504364B2 (en) * | 2002-03-01 | 2009-03-17 | Receptors Llc | Methods of making arrays and artificial receptors |
DE10210051B4 (de) * | 2002-03-07 | 2005-10-13 | Siemens Ag | Vorrichtung zum elektrochemischen Nachweis einer Nukleotidsequenz, Analyse-Kassette für eine solche Vorrichtung und Verfahren zur Herstellung einer solchen Analyse-Kassette |
US20030203384A1 (en) * | 2002-03-08 | 2003-10-30 | Chafin David R. | Multiplex detection of biological materials in a sample |
WO2003079027A1 (en) | 2002-03-11 | 2003-09-25 | Meso Scale Technologies, Llc. | System and method for flexibly representing and processing assay plates |
US20030186245A1 (en) * | 2002-03-28 | 2003-10-02 | Roitman Daniel B. | Biomolecular sensors and detection methods utilizing photoinduced charge separation |
EP1495360B1 (en) * | 2002-04-15 | 2008-10-01 | LG Chem, Ltd. | Electropolymerization method for preparing nano-tube type conducting polymer using porous template and method for preparing electrochromic device |
US7206522B2 (en) * | 2002-04-24 | 2007-04-17 | Lucent Technologies Inc. | Dynamic measurement of and compensation for impairments to optical data communication pulses |
US7141369B2 (en) * | 2002-04-25 | 2006-11-28 | Semibio Technology, Inc. | Measuring cellular metabolism of immobilized cells |
US6741348B2 (en) | 2002-04-29 | 2004-05-25 | The Curators Of The University Of Missouri | Ultrasensitive spectrophotometer |
FR2839364B1 (fr) * | 2002-05-03 | 2004-12-24 | Commissariat Energie Atomique | Procede de detection d'une reconnaissance molecukaire par electrochimiluminescence |
KR100455293B1 (ko) * | 2002-05-15 | 2004-11-06 | 삼성전자주식회사 | 친수성 영역과 소수성 영역으로 구성되는 생물분자용어레이 판의 제조방법 |
US20050239193A1 (en) * | 2002-05-30 | 2005-10-27 | Bioforce Nanosciences, Inc. | Device and method of use for detection and characterization of microorganisms and microparticles |
AU2003259038A1 (en) * | 2002-06-19 | 2004-01-06 | Becton, Dickinson And Company | Microfabricated sensor arrays |
JP2005530183A (ja) * | 2002-06-20 | 2005-10-06 | バイオヴェリス コーポレイション | エレクトロケミルミネッセンス・フローセル及びフローセル部品 |
US20040077104A1 (en) * | 2002-07-09 | 2004-04-22 | Valentino Montegrande | Antigen detection device |
GB2391068A (en) * | 2002-07-18 | 2004-01-28 | Sensor Tech Ltd | A lateral flow through device comprising an electrochemical sesor |
KR100434690B1 (ko) * | 2002-07-19 | 2004-06-04 | 소광섭 | 생명체에 대한 자기장의 영향을 측정하는 장치 및 방법 |
US20040011650A1 (en) * | 2002-07-22 | 2004-01-22 | Frederic Zenhausern | Method and apparatus for manipulating polarizable analytes via dielectrophoresis |
DE10233303A1 (de) * | 2002-07-22 | 2004-02-12 | Micronas Holding Gmbh | Sensoroberfläche mit verbessertem Signal/Rausch-Verhältnis |
JP4729030B2 (ja) * | 2002-07-31 | 2011-07-20 | 株式会社東芝 | 塩基配列検出装置 |
CN101358945A (zh) * | 2002-07-31 | 2009-02-04 | 株式会社东芝 | 碱基序列检测装置及碱基序列自动解析装置 |
US7384742B2 (en) * | 2002-08-16 | 2008-06-10 | Decision Biomarkers, Inc. | Substrates for isolating reacting and microscopically analyzing materials |
US20060127946A1 (en) * | 2002-08-16 | 2006-06-15 | Montagu Jean I | Reading of fluorescent arrays |
WO2004017374A2 (en) * | 2002-08-16 | 2004-02-26 | Clinical Microarrays, Inc. | Reading of fluorescent arrays |
US20060057625A1 (en) * | 2002-09-16 | 2006-03-16 | Carlson Robert E | Scaffold-based artificial receptors and methods |
US20040137481A1 (en) * | 2002-09-16 | 2004-07-15 | Receptors Llc | Artificial receptor building blocks, components, and kits |
US7469076B2 (en) * | 2003-09-03 | 2008-12-23 | Receptors Llc | Sensors employing combinatorial artificial receptors |
US20050037381A1 (en) * | 2002-09-16 | 2005-02-17 | Receptors Llc | Artificial receptors, building blocks, and methods |
US20050037429A1 (en) * | 2003-03-28 | 2005-02-17 | Receptors Llc | Artificial receptors including reversibly immobilized building blocks and methods |
US20050136483A1 (en) * | 2003-09-03 | 2005-06-23 | Receptors Llc | Nanodevices employing combinatorial artificial receptors |
WO2004029221A2 (en) | 2002-09-27 | 2004-04-08 | The General Hospital Corporation | Microfluidic device for cell separation and uses thereof |
US20040108226A1 (en) * | 2002-10-28 | 2004-06-10 | Constantin Polychronakos | Continuous glucose quantification device and method |
AU2003290538A1 (en) | 2002-10-30 | 2004-06-07 | Meso Scale Technologies, Llc | Substrates of n-end rule ubiquitylation and methods for measuring the ubiquitylation of these substrates |
DE10251757B4 (de) * | 2002-11-05 | 2006-03-09 | Micronas Holding Gmbh | Vorrichtung zur Bestimmung der Konzentration von in einer zu untersuchenden Probe enthaltenen Liganden |
US20040086892A1 (en) * | 2002-11-06 | 2004-05-06 | Crothers Donald M. | Universal tag assay |
US7258978B2 (en) * | 2002-11-06 | 2007-08-21 | Geneohm Sciences | Electrochemical method to measure DNA attachment to an electrode surface in the presence of molecular oxygen |
JP2006506644A (ja) * | 2002-11-15 | 2006-02-23 | アプレラ コーポレイション | 核酸配列検出 |
WO2004047007A1 (en) | 2002-11-15 | 2004-06-03 | Bioarray Solutions, Ltd. | Analysis, secure access to, and transmission of array images |
EP2248912B8 (en) | 2002-11-26 | 2013-04-17 | University of Maryland, Baltimore County | High sensitivity assays for pathogen detection using metal-enhanced fluorescence |
KR100475312B1 (ko) * | 2002-12-10 | 2005-03-10 | 한국전자통신연구원 | Dna 감지체 및 이를 이용한 dna 감지방법 |
CA2511372C (en) * | 2002-12-26 | 2014-07-08 | Jeff D. Debad | Methods, compositions and kits for biomarker extraction |
WO2005016115A2 (en) * | 2003-01-23 | 2005-02-24 | Montana State University | Biosensors utilizing dendrimer-immobilized ligands and their use thereof |
US20060234209A1 (en) * | 2003-02-05 | 2006-10-19 | Walker Bruce D | Microchip-based system for hiv diagnostics |
US8920619B2 (en) * | 2003-03-19 | 2014-12-30 | Hach Company | Carbon nanotube sensor |
EP1613737A4 (en) * | 2003-03-28 | 2008-12-03 | Receptors Llc | ARTIFICIAL RECEPTORS COMPRISING REVERSIBLE IMMOBILIZED CONSTRUCTION BLOCKS AND METHODS |
US20050003396A1 (en) * | 2003-04-11 | 2005-01-06 | Mihrimah Ozkan | Biosensors having single reactant components immobilized over single electrodes and methods of making and using thereof |
US7623284B2 (en) * | 2003-04-15 | 2009-11-24 | Lg Chem, Ltd. | Electropolymerization method for preparing nano-tube type conducting polymer using porous template, method for preparing electrochromic device, and electrochromic device prepared therefrom |
DE10319155B4 (de) * | 2003-04-29 | 2008-02-14 | Bruker Daltonik Gmbh | Elektrisch auslesbare Bindungen von Analytmolekülen an immobilisierten Sondenmolekülen |
CA2524263A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-18 | Geneohm Sciences, Inc. | Electrochemical method to measure dna attachment to an electrode surface in the presence of molecular oxygen |
KR100563834B1 (ko) * | 2003-05-23 | 2006-03-28 | 주식회사 올메디쿠스 | 미세유체 채널이 집적화된 3차원 전극시스템 |
KR100547015B1 (ko) * | 2003-05-23 | 2006-01-26 | 주식회사 올메디쿠스 | 일정한 크기 이상의 분석물질을 정량 분석하기 위한바이오센서 및 그 제조방법 |
ITTO20030409A1 (it) * | 2003-06-03 | 2004-12-04 | Fiat Ricerche | Biosensore ottico. |
US20040248306A1 (en) * | 2003-06-09 | 2004-12-09 | Hernandez Juan J. | Microfluidic water analytical device |
JP3969361B2 (ja) * | 2003-07-07 | 2007-09-05 | 株式会社島津製作所 | 固定化された物質の定量方法 |
AU2004261558B2 (en) * | 2003-07-09 | 2010-04-22 | Hyperion Catalysis International, Inc. | Field emission devices made with laser and/or plasma treated carbon nanotube mats, films or inks |
WO2005010160A2 (en) * | 2003-07-17 | 2005-02-03 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Liquid crystals with reduced toxicity and applications thereof |
GB2404252B (en) * | 2003-07-24 | 2005-09-28 | Schlumberger Holdings | Apparatus and method for measuring concentrations of ions in downhole water |
US20050037508A1 (en) * | 2003-08-12 | 2005-02-17 | Juan Hernandez | Microfluidic titration apparatus |
US8114554B2 (en) * | 2003-09-16 | 2012-02-14 | The Gillette Company—South Boston | Enhanced fuel delivery for direct methanol fuel cells |
US8084166B2 (en) * | 2003-09-16 | 2011-12-27 | The Gillette Company | Enhanced fuel delivery for direct methanol fuel cells |
WO2005029705A2 (en) | 2003-09-18 | 2005-03-31 | Bioarray Solutions, Ltd. | Number coding for identification of subtypes of coded types of solid phase carriers |
NZ546072A (en) | 2003-09-22 | 2009-08-28 | Bioarray Solutions Ltd | Surface immobilized polyelectrolyte with multiple functional groups capable of covalently bonding to biomolecules |
CA2544041C (en) | 2003-10-28 | 2015-12-08 | Bioarray Solutions Ltd. | Optimization of gene expression analysis using immobilized capture probes |
US7049077B2 (en) | 2003-10-29 | 2006-05-23 | Bioarray Solutions Ltd. | Multiplexed nucleic acid analysis by fragmentation of double-stranded DNA |
US20070207055A1 (en) * | 2003-10-31 | 2007-09-06 | Commissariat A L'energie Atomique | Operating Device Comprising A Localized Zone For The Capture Of A Drop A Liquid Of Interest |
US7981362B2 (en) * | 2003-11-04 | 2011-07-19 | Meso Scale Technologies, Llc | Modular assay plates, reader systems and methods for test measurements |
US7341834B2 (en) * | 2003-12-15 | 2008-03-11 | Geneohn Sciences, Inc. | Multiplexed electrochemical detection system and method |
JP4238715B2 (ja) * | 2003-12-15 | 2009-03-18 | 富士ゼロックス株式会社 | 電気化学測定用電極 |
EP1694867B1 (en) * | 2003-12-15 | 2009-10-28 | Geneohm Sciences, Inc. | Carbon electrode surface for attachment of dna and protein molecules |
US7268881B2 (en) * | 2004-02-17 | 2007-09-11 | The Curators Of The University Of Missouri | Light scattering detector |
US8101431B2 (en) * | 2004-02-27 | 2012-01-24 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Integration of fluids and reagents into self-contained cartridges containing sensor elements and reagent delivery systems |
JP2005243499A (ja) * | 2004-02-27 | 2005-09-08 | Fujitsu Ltd | フラットディスプレイパネルの電極形成方法 |
SE0400783D0 (sv) * | 2004-03-24 | 2004-03-24 | Peter Aasberg | Mönstringsmetod för biosensorapplikationer |
US7815854B2 (en) * | 2004-04-30 | 2010-10-19 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Electroluminescent illumination source for optical detection systems |
US7796266B2 (en) * | 2004-04-30 | 2010-09-14 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Optical detection system using electromagnetic radiation to detect presence or quantity of analyte |
US20050244953A1 (en) * | 2004-04-30 | 2005-11-03 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Techniques for controlling the optical properties of assay devices |
WO2006041535A2 (en) * | 2004-05-05 | 2006-04-20 | California Institute Of Technology | Capillary lithography of nanofiber arrays |
US20060019273A1 (en) * | 2004-05-12 | 2006-01-26 | Connolly Dennis M | Detection card for analyzing a sample for a target nucleic acid molecule, and uses thereof |
US20050266398A1 (en) * | 2004-06-01 | 2005-12-01 | Peter Lea | Method and device for rapid detection and quantitation of macro and micro matrices |
JP3952042B2 (ja) * | 2004-06-07 | 2007-08-01 | ソニー株式会社 | 凹状部位を有する電極を備えるハイブリダイゼーション検出部と該検出部を備えるdnaチップ |
EP1771066A2 (en) * | 2004-07-13 | 2007-04-11 | Neose Technologies, Inc. | Branched peg remodeling and glycosylation of glucagon-like peptide-1 glp-1 |
CA2475191A1 (en) * | 2004-07-20 | 2006-01-20 | Biophys, Inc. | System and method for rapid reading of macro and micro matrices |
CA2475456A1 (en) | 2004-07-20 | 2006-01-20 | Biophys, Inc. | Method and device to optimize analyte and antibody substrate binding by least energy adsorption |
CA2475240A1 (en) * | 2004-07-20 | 2006-01-20 | Biophys, Inc. | Method and device to measure dynamic internal calibration true dose response curves |
US7848889B2 (en) | 2004-08-02 | 2010-12-07 | Bioarray Solutions, Ltd. | Automated analysis of multiplexed probe-target interaction patterns: pattern matching and allele identification |
US20060024204A1 (en) * | 2004-08-02 | 2006-02-02 | Oldenburg Kevin R | Well plate sealing apparatus and method |
US7238535B2 (en) * | 2004-09-01 | 2007-07-03 | World Properties, Inc. | Test cell for evaluating phosphor |
EP1789797A1 (en) * | 2004-09-03 | 2007-05-30 | Receptors LLC | Combinatorial artifical receptors including tether building blocks |
EP1789792A2 (en) * | 2004-09-11 | 2007-05-30 | Receptors LLC | Combinatorial artificial receptors including peptide building blocks |
US7615369B2 (en) * | 2004-09-22 | 2009-11-10 | The Regents Of The University Of Michigan | Reconfigurable protein patterning using electrowetting microelectrodes |
US20060091015A1 (en) * | 2004-11-01 | 2006-05-04 | Applera Corporation | Surface modification for non-specific adsorption of biological material |
US7785785B2 (en) | 2004-11-12 | 2010-08-31 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Charge perturbation detection system for DNA and other molecules |
JP2008521007A (ja) * | 2004-11-17 | 2008-06-19 | バイオヴェリス コーポレイション | 電気化学発光測定法 |
US20060134656A1 (en) * | 2004-12-16 | 2006-06-22 | Hamers Robert J | Reduction of non-specific adsorption of biological agents on surfaces |
US20070121113A1 (en) * | 2004-12-22 | 2007-05-31 | Cohen David S | Transmission-based optical detection systems |
EP1841757B1 (en) * | 2005-01-07 | 2010-06-30 | Pfizer Products Incorporated | Heteroaromatic quinoline compounds and their use as pde10 inhibitors |
US7903252B2 (en) * | 2005-01-13 | 2011-03-08 | The Curators Of The University Of Missouri | Noise cancellation in fourier transform spectrophotometry |
KR100682919B1 (ko) * | 2005-01-20 | 2007-02-15 | 삼성전자주식회사 | 미세 금속 박막 패턴 형성 방법, 이를 채용한 생체물질고정용 기판 및 바이오칩 |
CA2595452A1 (en) * | 2005-01-26 | 2006-08-03 | Rapid Laboratory Microsystems Inc. | Method, system and device for obtaining electrochemical measurements |
FI119894B (fi) | 2005-03-30 | 2009-04-30 | Labmaster Oy | Elektrokemiluminesenssiin perustuva analyysimenetelmä ja siinä käytettävä laite |
US20070196820A1 (en) | 2005-04-05 | 2007-08-23 | Ravi Kapur | Devices and methods for enrichment and alteration of cells and other particles |
JP4742650B2 (ja) * | 2005-04-08 | 2011-08-10 | 東レ株式会社 | カーボンナノチューブ組成物、バイオセンサーおよびそれらの製造方法 |
KR100967246B1 (ko) | 2005-05-20 | 2010-07-01 | 히다치 가세고교 가부시끼가이샤 | 생화학 물질의 분석 방법 |
US8377398B2 (en) | 2005-05-31 | 2013-02-19 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Methods and compositions related to determination and use of white blood cell counts |
US8486629B2 (en) | 2005-06-01 | 2013-07-16 | Bioarray Solutions, Ltd. | Creation of functionalized microparticle libraries by oligonucleotide ligation or elongation |
CA2609379C (en) * | 2005-06-03 | 2016-11-29 | Allen J. Bard | Electrochemistry and electrogenerated chemiluminescence with a single faradaic electrode |
WO2006132666A1 (en) | 2005-06-06 | 2006-12-14 | Decision Biomarkers, Inc. | Assays based on liquid flow over arrays |
AU2006261953B2 (en) * | 2005-06-24 | 2012-02-23 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Systems and methods including self-contained cartridges with detection systems and fluid delivery systems |
US8921102B2 (en) | 2005-07-29 | 2014-12-30 | Gpb Scientific, Llc | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
KR100849384B1 (ko) * | 2005-10-21 | 2008-07-31 | 한국생명공학연구원 | 나노갭 및 나노갭 센서의 제조방법 |
EP1951741A4 (en) * | 2005-10-27 | 2011-06-01 | Life Technologies Corp | SURFACE MODIFICATION IN A HANDLING ROOM |
US20070095667A1 (en) * | 2005-10-27 | 2007-05-03 | Applera Corporation | Optoelectronic Separation of Biomolecules |
WO2007111681A2 (en) * | 2005-10-31 | 2007-10-04 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Device and methods for liquid crystal-based bioagent detection |
US8409411B2 (en) * | 2005-12-02 | 2013-04-02 | State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of Portland State University | Nano-porous membrane based sensors |
KR100829574B1 (ko) * | 2006-01-03 | 2008-05-14 | 삼성전자주식회사 | 마이크로어레이용 기판, 그 마이크로어레이용 기판을이용하여 생분자를 분석하는 방법, 및 그 마이크로어레이용기판을 포함하는 랩온어칩 |
CN101755204A (zh) | 2006-03-09 | 2010-06-23 | 全技术联合公司 | 蒸发光散射检测器 |
DE102006017153B3 (de) * | 2006-04-04 | 2007-08-30 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Verfahren zur Herstellung von Oberflächenstrukturen und Element mit Oberflächenstruktur zur Verwendung für Biosensoren oder die Herstellung von Zellleitstrukturen |
US7923054B2 (en) | 2006-04-19 | 2011-04-12 | Gore Enterprise Holdings, Inc. | Functional porous substrates for attaching biomolecules |
US20080026373A1 (en) * | 2006-07-26 | 2008-01-31 | Rodionova Natalia A | Assays Based On Light Emission From Analyte Complexes Within A Cassette |
US8563297B2 (en) * | 2006-08-31 | 2013-10-22 | Technion Research & Development Foundation Limited | Controllable binding and dissociation of chemical entities and electrode devices therefore |
US8101403B2 (en) * | 2006-10-04 | 2012-01-24 | University Of Washington | Method and device for rapid parallel microfluidic molecular affinity assays |
US7999375B2 (en) * | 2006-10-11 | 2011-08-16 | Formfactor, Inc. | Electronic device with integrated micromechanical contacts and cooling system |
JP2008109864A (ja) * | 2006-10-30 | 2008-05-15 | Hitachi Ltd | 遺伝子配列解析システム |
KR100811199B1 (ko) * | 2006-11-13 | 2008-03-07 | 광주과학기술원 | 흐름장 흐름 분획 기법을 이용한 막 오염 예측/평가 방법 |
US8580194B2 (en) * | 2006-11-23 | 2013-11-12 | Asmag-Holding Gmbh | Device for optoelectronically characterizing samples |
US7861581B2 (en) * | 2006-12-01 | 2011-01-04 | Gamida For Life B.V. | Fluidic volume dispense verification tool |
CA2569971A1 (en) * | 2006-12-04 | 2008-06-04 | Umedik Inc. | Method for double-dip substrate spin optimization of coated micro array supports |
JP2008154493A (ja) * | 2006-12-22 | 2008-07-10 | Rohm Co Ltd | 分離精製方法とマイクロ流体回路 |
US7980000B2 (en) * | 2006-12-29 | 2011-07-19 | Applied Materials, Inc. | Vapor dryer having hydrophilic end effector |
CN101680865A (zh) * | 2007-02-07 | 2010-03-24 | 里泽尔诊断公司 | 使用电泳的快速均相免疫测定 |
US8753896B2 (en) * | 2007-04-05 | 2014-06-17 | Nalco Company | Method of monitoring a surfactant in a microelectronic process by fluorescence |
EP1986007A1 (en) * | 2007-04-27 | 2008-10-29 | Radiometer Medical ApS | A sensor assembly for body fluids |
ES2687620T3 (es) | 2007-05-04 | 2018-10-26 | Opko Diagnostics, Llc | Dispositivo y método para análisis en sistemas microfluídicos |
ATE519112T1 (de) * | 2007-05-08 | 2011-08-15 | Hoffmann La Roche | Verfahren zum nachweis spezifischer antikörper der immunglobulinklasse g |
JP4339375B2 (ja) * | 2007-05-21 | 2009-10-07 | 白鶴酒造株式会社 | 微生物センサーおよびその製造方法 |
WO2009009630A1 (en) * | 2007-07-11 | 2009-01-15 | Clemson University | Photoluminescent materials for multiphoton imaging |
AU2008276308A1 (en) * | 2007-07-13 | 2009-01-22 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method and apparatus using electric field for improved biological assays |
US20090111117A1 (en) * | 2007-10-26 | 2009-04-30 | University Of Washington | Device and method for detecting complex formation |
CN101842698B (zh) * | 2007-10-31 | 2016-06-15 | 爱科来株式会社 | 分析工具 |
TW200933146A (en) * | 2008-01-31 | 2009-08-01 | Nat Univ Tsing Hua | Bacterial sensor structure and manufacturing method thereoff |
WO2009105562A2 (en) * | 2008-02-19 | 2009-08-27 | The Johns Hopkins University | Protein microarrays for mass spectrometry and methods of use therefor |
EP2285491A1 (en) | 2008-04-25 | 2011-02-23 | Claros Diagnostics, Inc. | Flow control in microfluidic systems |
GB0809486D0 (en) * | 2008-05-23 | 2008-07-02 | Iti Scotland Ltd | Triple function elctrodes |
WO2009152321A1 (en) * | 2008-06-11 | 2009-12-17 | The Curators Of The University Of Missouri | Liquid chromatography detector and flow controller therefor |
JP5176235B2 (ja) * | 2008-07-03 | 2013-04-03 | 国立大学法人東北大学 | 電気化学測定装置 |
EP2331251A4 (en) * | 2008-08-13 | 2017-03-08 | Advanced Liquid Logic, Inc. | Methods, systems, and products for conducting droplet operations |
AU2009333489A1 (en) | 2008-12-30 | 2010-07-08 | Centocor Ortho Biotech Inc. | Serum markers predicting clinical response to anti-TNF antibodies in patients with ankylosing spondylitis |
GB2467338A (en) * | 2009-01-30 | 2010-08-04 | Sharp Kk | Electrical analyte sensor with optical output |
TR201815133T4 (tr) | 2009-02-02 | 2018-11-21 | Opko Diagnostics Llc | Mikrofilidik cihazlar ile ışık etkileşiminin kontrol edilmesi için yapılar. |
DE102009015114B4 (de) * | 2009-03-31 | 2014-05-22 | Siemens Aktiengesellschaft | Vorrichtung nach Art einer elektrochemischen Kamera sowie Verfahren zur Herstellung und Verwendung der Vorrichtung |
US20100261292A1 (en) | 2009-04-10 | 2010-10-14 | Meso Scale Technologies, Llc | Methods for Conducting Assays |
FR2946157B1 (fr) * | 2009-06-02 | 2015-03-27 | Commissariat Energie Atomique | Systeme d'imagerie a microlentilles et dispositif associe pour la detection d'un echantillon. |
CN102753977B (zh) * | 2009-07-27 | 2016-05-25 | 梅索磅秤技术有限公司 | 化验装置、耗材和方法 |
MX2012005951A (es) | 2009-11-24 | 2012-10-01 | Opko Diagnostics Llc | Mezclado y entrega de fluidos en sistemas microfluídicos. |
SG184065A1 (en) * | 2010-03-17 | 2012-10-30 | Agency Science Tech & Res | A process for making an array |
WO2011130629A1 (en) | 2010-04-16 | 2011-10-20 | Claros Diagnostics, Inc. | Systems and devices for analysis of samples |
US20110269648A1 (en) * | 2010-05-02 | 2011-11-03 | Schwartz Anne M | Electrochemical sensor system |
US20110312676A1 (en) * | 2010-06-17 | 2011-12-22 | Geneasys Pty Ltd | Loc device with integral driver for excitation of electrochemiluminescent luminophores |
WO2012051519A2 (en) | 2010-10-14 | 2012-04-19 | The Johns Hopkins University | Biomarkers of brain injury |
CA2814680C (en) | 2010-10-14 | 2021-11-16 | Meso Scale Technologies, Llc | Reagent storage in an assay device |
AU2011322704B2 (en) * | 2010-10-25 | 2014-12-11 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Use of signal enhancing compounds in electrochemiluminescence detection |
EP2481794B1 (en) * | 2010-11-29 | 2017-08-23 | Karlsruher Institut für Technologie | Patterned substrates for cell applications |
CA3177188A1 (en) | 2011-01-06 | 2012-07-12 | Meso Scale Technologies, Llc. | Assay cartridges for pcr analysis and methods of use thereof |
WO2012099364A2 (en) * | 2011-01-17 | 2012-07-26 | Lg Electronics Inc. | Kit for amplifying detected signal in immunosensor and method for detecting target antigen using the same |
JP2014518624A (ja) | 2011-05-12 | 2014-08-07 | ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー | ニューログラニン診断キットのためのアッセイ試薬 |
TWI426279B (zh) * | 2011-06-22 | 2014-02-11 | Air Force Inst Of Technology | 電氣線路狀態檢視方法及其檢視溶液 |
CN102445446B (zh) * | 2011-09-28 | 2015-09-02 | 沈阳美加生物医药有限公司 | 一种化学发光免疫检测方法及免疫检测装置 |
DK3467500T3 (da) | 2011-11-11 | 2021-08-16 | Eli N Glezer | Cobinder-understøttede assayfremgangsmåder |
ES2637799T3 (es) | 2011-11-15 | 2017-10-17 | Ashwin-Ushas Corporation, Inc. | Dispositivo electrocrómico con polímeros complementarios |
WO2013119845A1 (en) | 2012-02-07 | 2013-08-15 | Vibrant Holdings, Llc | Substrates, peptide arrays, and methods |
BR112014021776B1 (pt) | 2012-03-05 | 2022-08-09 | Opko Diagnostics, Llc | Sistema de ensaio e método para a determinação de uma probabilidade de um evento associado com o câncer da próstata |
CN102692409B (zh) * | 2012-06-25 | 2015-01-21 | 华东理工大学 | 一种检测手性氨基酸浓度的方法及其试剂盒 |
JP6309950B2 (ja) | 2012-07-18 | 2018-04-11 | コーニンクレッカ フィリップス エヌ ヴェKoninklijke Philips N.V. | 標的成分を持つ試料流体の処理 |
US10006909B2 (en) | 2012-09-28 | 2018-06-26 | Vibrant Holdings, Llc | Methods, systems, and arrays for biomolecular analysis |
JP2015531486A (ja) | 2012-09-28 | 2015-11-02 | ヴィブラント ホールディングス リミテッド ライアビリティ カンパニー | 生体分子解析のための方法、システム、およびアレイ |
US10286376B2 (en) | 2012-11-14 | 2019-05-14 | Vibrant Holdings, Llc | Substrates, systems, and methods for array synthesis and biomolecular analysis |
CA3170609A1 (en) * | 2013-01-03 | 2014-07-10 | Meso Scale Technologies, Llc | Assay panels for a multiplexed analysis of a set of cytokines |
AU2014203992B2 (en) * | 2013-01-04 | 2018-03-22 | Meso Scale Technologies, Llc. | Assay apparatuses, methods and reagents |
CA2923379C (en) * | 2013-02-15 | 2023-01-03 | Vibrant Holdings, Llc | Methods and compositions for amplified electrochemiluminescence detection |
IL297030B2 (en) | 2013-03-11 | 2024-03-01 | Cue Health Inc | A method for activating fluid flow within a microfluidic cartridge |
CA3153763A1 (en) | 2013-03-11 | 2014-10-09 | Meso Scale Technologies, Llc. | Improved methods for conducting multiplexed assays |
AU2014248759B2 (en) | 2013-03-13 | 2020-02-27 | Meso Scale Technologies, Llc. | Improved assay methods |
US10114015B2 (en) | 2013-03-13 | 2018-10-30 | Meso Scale Technologies, Llc. | Assay methods |
KR101455636B1 (ko) * | 2013-03-13 | 2014-10-30 | 한국표준과학연구원 | 유도초음파를 이용한 재료결함 검출방법 |
US9207515B2 (en) | 2013-03-15 | 2015-12-08 | Ashwin-Ushas Corporation, Inc. | Variable-emittance electrochromic devices and methods of preparing the same |
CN105209532B (zh) | 2013-03-15 | 2017-11-28 | 路博润先进材料公司 | 不含重金属的cpvc组合物 |
US10534003B2 (en) | 2013-07-17 | 2020-01-14 | The Johns Hopkins University | Multi-protein biomarker assay for brain injury detection and outcome |
WO2015054775A1 (en) * | 2013-10-17 | 2015-04-23 | Transfert Plus, S.E.C. | Electrodes, detectors, uses thereof and methods for fabrication thereof |
CN103674936B (zh) * | 2013-12-11 | 2016-05-04 | 常熟理工学院 | 一种基于电化学发光cod快速检测方法及装置 |
CA3229509A1 (en) | 2014-05-09 | 2015-11-12 | Meso Scale Technologies, Llc. | Graphene-modified electrodes |
USD745423S1 (en) | 2014-05-12 | 2015-12-15 | Cue Inc. | Automated analyzer test cartridge and sample collection device for analyte detection |
KR102497054B1 (ko) | 2014-05-15 | 2023-02-06 | 메소 스케일 테크놀러지즈, 엘엘시 | 개선된 분석 방법 |
BR112016029490B1 (pt) | 2014-06-18 | 2021-06-15 | Scandinavian Micro Biodevices Aps | Sistema de detecção microfluídica |
JP6823589B2 (ja) * | 2014-09-11 | 2021-02-03 | キュー ヘルス インコーポレイテッド | 被分析物の検出および定量のためのシステム |
US10222386B2 (en) | 2014-09-19 | 2019-03-05 | The Johns Hopkins University | Biomarkers of congnitive dysfunction |
GB201501705D0 (en) | 2015-02-02 | 2015-03-18 | Atlas Genetics Ltd | Instrument for performing a diagnostic test on a fluidic cartridge |
GB2531615B (en) | 2015-02-02 | 2017-11-22 | Atlas Genetics Ltd | Instrument for performing a diagnostic test on a fluidic cartridge |
WO2016134365A1 (en) | 2015-02-20 | 2016-08-25 | The Johns Hopkins University | Biomarkers of myocardial injury |
US20160310948A1 (en) * | 2015-04-24 | 2016-10-27 | Mesa Biotech, Inc. | Fluidic Test Cassette |
CN106198496B (zh) * | 2015-04-30 | 2019-05-03 | 邱一帆 | 一种高通量的电化学发光检测方法 |
CN117310193A (zh) | 2015-07-17 | 2023-12-29 | 克忧健康公司 | 用于增强检测和分析物定量的系统及方法 |
BR112018001956A2 (pt) | 2015-08-20 | 2018-09-11 | Hoffmann La Roche | ?método de medição de analitos e kit? |
US9632059B2 (en) | 2015-09-03 | 2017-04-25 | Ashwin-Ushas Corporation, Inc. | Potentiostat/galvanostat with digital interface |
US9482880B1 (en) | 2015-09-15 | 2016-11-01 | Ashwin-Ushas Corporation, Inc. | Electrochromic eyewear |
CA3005084A1 (en) | 2015-12-11 | 2017-06-15 | Opko Diagnostics, Llc | Fluidic systems involving incubation of samples and/or reagents |
EP3427057A1 (en) | 2016-03-07 | 2019-01-16 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Detection of anti-p53 antibodies |
EP3426398B1 (en) | 2016-03-11 | 2024-01-24 | Roche Diagnostics GmbH | Branched-chain amines in electrochemiluminescence detection |
CN105758849B (zh) * | 2016-03-16 | 2018-03-27 | 济南大学 | 一种基于二维复合材料构建的双功能已烯雌酚无酶传感器的制备方法及应用 |
JP6730721B2 (ja) * | 2016-05-27 | 2020-07-29 | 国立大学法人北海道大学 | 構造体および成膜方法 |
EP3374771A1 (en) | 2016-12-28 | 2018-09-19 | Neogen Corporation | Implement analyzing device and method for utilizing the same |
US11237161B2 (en) | 2017-01-25 | 2022-02-01 | Cue Health Inc. | Systems and methods for enhanced detection and quantification of analytes |
JP7068323B2 (ja) | 2017-02-02 | 2022-05-16 | エフ.ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | 少なくとも2種のペグ化された分析物特異的結合剤を使用する免疫アッセイ |
KR101863315B1 (ko) | 2017-02-24 | 2018-06-29 | 계명대학교 산학협력단 | 자동 주입형 진단 키트 장비 |
MX2019010854A (es) | 2017-03-13 | 2019-10-30 | Zoetis Services Llc | Sistema de prueba de flujo lateral. |
USD829337S1 (en) | 2017-04-17 | 2018-09-25 | Neogen Corporation | Assay reader |
US10538808B2 (en) | 2017-05-26 | 2020-01-21 | Vibrant Holdings, Llc | Photoactive compounds and methods for biomolecule detection and sequencing |
GB201709503D0 (en) * | 2017-06-15 | 2017-08-02 | Method and device for assay improvement | |
DE102017114537A1 (de) * | 2017-06-29 | 2019-01-03 | Endress+Hauser Conducta Gmbh+Co. Kg | Sensormembran, Sensorkappe und optischer Sensor |
US20210178353A1 (en) * | 2017-10-30 | 2021-06-17 | Corning Incorporated | Nucleic acid immobilization article and methods thereof |
EP4310184A3 (en) | 2018-02-23 | 2024-05-01 | Meso Scale Technologies, LLC. | Methods of screening antigen-binding molecules by normalizing for the concentration of antigen-binding molecule |
CN108389785B (zh) * | 2018-03-08 | 2020-05-08 | 京东方科技集团股份有限公司 | 一种转印基板、显示基板、显示面板及其制作方法 |
WO2019221954A1 (en) * | 2018-05-15 | 2019-11-21 | Redbud Labs | Systems and methods for nucleic acid purification using flow cells with actuated surface-attached structures |
BR112020024715A2 (pt) | 2018-06-04 | 2021-03-23 | Avon Products. Inc. | biomarcadores proteicos para identificar e tratar o envelhecimento da pele e afecções cutâneas |
KR102138005B1 (ko) | 2018-10-26 | 2020-07-28 | 계명대학교 산학협력단 | 3d 프린팅 기법을 이용한 박막 패턴 형성 방법 및 이를 이용한 바이오 진단 기구 제조 방법 |
EP3906412A1 (en) | 2019-01-03 | 2021-11-10 | Meso Scale Technologies, LLC | Compositions and methods for carrying out assay measurements |
WO2020180645A1 (en) | 2019-03-01 | 2020-09-10 | Meso Scale Technologies, Llc. | Electrochemiluminescent labeled probes for use in immunoassay methods, methods using such and kits comprising same |
US20220244171A1 (en) * | 2019-05-22 | 2022-08-04 | bioMérieux | Methods and systems for manufacturing a production assay reactor |
WO2020245377A1 (en) | 2019-06-07 | 2020-12-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Hybridizing all-lna oligonucleotides |
WO2021236584A1 (en) | 2020-05-19 | 2021-11-25 | Meso Scale Technologies, Llc. | Methods, compositions, and kits for nucleic acid detection |
JP2023532902A (ja) | 2020-07-01 | 2023-08-01 | メソ スケール テクノロジーズ エルエルシー | アッセイ測定のための組成物及び方法 |
WO2022040529A2 (en) | 2020-08-21 | 2022-02-24 | Meso Scale Technologies, Llc. | Auxiliary electrodes and methods for using and manufacturing the same |
CN114152604A (zh) * | 2020-09-07 | 2022-03-08 | 南京大学 | 一种用于细胞成像的无试剂电致化学发光检测方法 |
EP4244604A1 (en) * | 2020-11-11 | 2023-09-20 | Rhazes S.R.L. | Portable device for detecting and quantifying a concentration of a marker present in a sample of biological fluid |
EP4267961A1 (en) | 2020-12-22 | 2023-11-01 | F. Hoffmann-La Roche AG | Method for detecting an analyte of interest in a sample |
CN113017995B (zh) * | 2021-03-03 | 2022-01-04 | 杭州可靠护理用品股份有限公司 | 具有尿酸提示功能的成人纸尿裤 |
TWI823092B (zh) * | 2021-05-28 | 2023-11-21 | 王錦弘 | 聚合酶鏈反應裝置 |
CA3228270A1 (en) | 2021-08-13 | 2023-02-16 | Meso Scale Technologies, Llc. | Electrochemical cell devices and methods of manufacturing |
FR3130649A1 (fr) * | 2021-12-17 | 2023-06-23 | Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives | Membrane de collecte de particules aéroportées |
WO2023129884A1 (en) | 2021-12-30 | 2023-07-06 | Meso Scale Technologies, Llc. | Methods for electrochemiluminescence detection |
US20230213476A1 (en) | 2022-01-04 | 2023-07-06 | Meso Scale Technologies, Llc. | Electrochemical cell devices and methods of manufacturing |
EP4220165A1 (en) * | 2022-01-31 | 2023-08-02 | HES-SO Valais-Wallis | Method and device for the detection of traumatic brain injuries |
WO2023156510A1 (en) | 2022-02-18 | 2023-08-24 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for detecting an analyte of interest in a sample |
Family Cites Families (91)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4280815A (en) * | 1979-06-18 | 1981-07-28 | Technicon Instruments Corporation | Electrochemiluminescent immunoassay and apparatus therefor |
US4390405A (en) * | 1980-02-20 | 1983-06-28 | Curators Of The University Of Missouri | Oxygen electrode and method for preparation thereof |
JPS57132038A (en) * | 1981-02-10 | 1982-08-16 | Olympus Optical Co Ltd | Photometric device |
JPS57205970A (en) * | 1981-06-12 | 1982-12-17 | Ajinomoto Co Inc | Electrode employing fixed hemprotein |
GB8402058D0 (en) * | 1984-01-26 | 1984-02-29 | Serono Diagnostics Ltd | Methods of assay |
US5011771A (en) * | 1984-04-12 | 1991-04-30 | The General Hospital Corporation | Multiepitopic immunometric assay |
US4849330A (en) * | 1984-04-27 | 1989-07-18 | Molecular Devices Corporation | Photoresponsive redox detection and discrimination |
US4826759A (en) * | 1984-10-04 | 1989-05-02 | Bio-Metric Systems, Inc. | Field assay for ligands |
US5238808A (en) | 1984-10-31 | 1993-08-24 | Igen, Inc. | Luminescent metal chelate labels and means for detection |
US5221605A (en) | 1984-10-31 | 1993-06-22 | Igen, Inc. | Luminescent metal chelate labels and means for detection |
US5310687A (en) | 1984-10-31 | 1994-05-10 | Igen, Inc. | Luminescent metal chelate labels and means for detection |
US4663230A (en) | 1984-12-06 | 1987-05-05 | Hyperion Catalysis International, Inc. | Carbon fibrils, method for producing same and compositions containing same |
US5165909A (en) | 1984-12-06 | 1992-11-24 | Hyperion Catalysis Int'l., Inc. | Carbon fibrils and method for producing same |
US5171560A (en) | 1984-12-06 | 1992-12-15 | Hyperion Catalysis International | Carbon fibrils, method for producing same, and encapsulated catalyst |
US4652333A (en) | 1985-06-19 | 1987-03-24 | Honeywell Inc. | Etch process monitors for buried heterostructures |
US5030310A (en) * | 1985-06-28 | 1991-07-09 | Miles Inc. | Electrode for electrochemical sensors |
US5468606A (en) | 1989-09-18 | 1995-11-21 | Biostar, Inc. | Devices for detection of an analyte based upon light interference |
US5147806A (en) * | 1988-04-29 | 1992-09-15 | Igen, Inc. | Method and apparatus for conducting electrochemiluminescence measurements |
US5591581A (en) * | 1986-04-30 | 1997-01-07 | Igen, Inc. | Electrochemiluminescent rhenium moieties and methods for their use |
US5066372A (en) * | 1986-05-02 | 1991-11-19 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Unitary multiple electrode sensor |
US4720910A (en) * | 1987-06-16 | 1988-01-26 | Mhb Joint Venture | Method for preparing encapsulated cathode material |
JPS648350A (en) | 1987-06-29 | 1989-01-12 | Mitsubishi Electric Corp | Pressure take-out port in internal combustion engine |
GB8803000D0 (en) * | 1988-02-10 | 1988-03-09 | Ekins Roger Philip | Determination of ambient concentrations of several analytes |
US4891321A (en) | 1987-10-21 | 1990-01-02 | Hubscher Thomas T | Apparatus for performing determinations of immune reactants in biological fluids |
US5308754A (en) * | 1988-03-21 | 1994-05-03 | Kankare Jouko J | Electrogenerated luminescence in solution |
US5093268A (en) * | 1988-04-28 | 1992-03-03 | Igen, Inc. | Apparatus for conducting a plurality of simultaneous measurements of electrochemiluminescent phenomena |
US5002652A (en) * | 1988-06-10 | 1991-03-26 | Abbott Laboratories | Plasma polymerized polysiloxane membrane |
US5218312A (en) * | 1988-07-20 | 1993-06-08 | Ricardo Moro | Measurement apparatus for measuring a biological substance within a fluid substrate |
US5061445A (en) * | 1988-11-03 | 1991-10-29 | Igen, Inc. | Apparatus for conducting measurements of electrochemiluminescent phenomena |
ATE180057T1 (de) | 1988-11-03 | 1999-05-15 | Igen Int Inc | Elektrochemilumineszente testverfahren |
US5247243A (en) * | 1988-11-03 | 1993-09-21 | Igen, Inc. | Method and apparatus for conducting electrochemiluminescent measurements |
US5068088A (en) | 1988-11-03 | 1991-11-26 | Igen, Inc. | Method and apparatus for conducting electrochemiluminescent measurements |
US5296191A (en) | 1988-11-03 | 1994-03-22 | Igen, Inc. | Method and apparatus for conducting electrochemiluminescent measurements |
SE8804074D0 (sv) | 1988-11-10 | 1988-11-10 | Pharmacia Ab | Sensorenhet och dess anvaendning i biosensorsystem |
JP2863192B2 (ja) | 1989-04-19 | 1999-03-03 | ハイピリオン・カタリシス・インターナシヨナル・インコーポレイテツド | 熱可塑性エラストマー組成物 |
KR940000623B1 (ko) | 1989-05-15 | 1994-01-26 | 히페리온 카탈리시스 인터내셔날 | 마이크로 탄소섬유 산화처리방법 |
US5302349A (en) * | 1989-06-13 | 1994-04-12 | Diatron Corporation | Transient-state luminescence assay apparatus |
JP3029115B2 (ja) | 1989-07-21 | 2000-04-04 | ハイピリオン・カタリシス・インターナショナル・インコーポレイテッド | 導電性シート |
US5098771A (en) | 1989-07-27 | 1992-03-24 | Hyperion Catalysis International | Conductive coatings and inks |
US5110693A (en) | 1989-09-28 | 1992-05-05 | Hyperion Catalysis International | Electrochemical cell |
US5324457A (en) | 1989-10-02 | 1994-06-28 | Board Of Regents, The University Of Tx System | Devices and methods for generating electrogenerated chemiluminescence |
US5189549A (en) | 1990-02-26 | 1993-02-23 | Molecular Displays, Inc. | Electrochromic, electroluminescent and electrochemiluminescent displays |
GB2244135B (en) | 1990-05-04 | 1994-07-13 | Gen Electric Co Plc | Sensor devices |
US5527670A (en) * | 1990-09-12 | 1996-06-18 | Scientific Generics Limited | Electrochemical denaturation of double-stranded nucleic acid |
US5776672A (en) * | 1990-09-28 | 1998-07-07 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Gene detection method |
IL100867A (en) | 1991-02-06 | 1995-12-08 | Igen Inc | Method and device for improved luminescence testing |
JPH0534345A (ja) | 1991-02-19 | 1993-02-09 | Tdk Corp | 化学発光を利用する抗原・抗体の測定方法 |
ATE170981T1 (de) | 1991-03-28 | 1998-09-15 | Nippon Shoji Kk | Einfache analysenvorrichtung |
WO1992017606A1 (en) * | 1991-04-01 | 1992-10-15 | Brigham And Women's Hospital | Microassay system and neutrophil derived secretagogue |
US5220787A (en) * | 1991-04-29 | 1993-06-22 | Aerojet-General Corporation | Scramjet injector |
US5340716A (en) | 1991-06-20 | 1994-08-23 | Snytex (U.S.A.) Inc. | Assay method utilizing photoactivated chemiluminescent label |
US5187096A (en) * | 1991-08-08 | 1993-02-16 | Rensselaer Polytechnic Institute | Cell substrate electrical impedance sensor with multiple electrode array |
US5264103A (en) * | 1991-10-18 | 1993-11-23 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Biosensor and a method for measuring a concentration of a substrate in a sample |
US5460890A (en) * | 1991-10-30 | 1995-10-24 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Biaxially stretched isotropic polyimide film having specific properties |
US5605662A (en) * | 1993-11-01 | 1997-02-25 | Nanogen, Inc. | Active programmable electronic devices for molecular biological analysis and diagnostics |
US5632957A (en) * | 1993-11-01 | 1997-05-27 | Nanogen | Molecular biological diagnostic systems including electrodes |
IL103674A0 (en) * | 1991-11-19 | 1993-04-04 | Houston Advanced Res Center | Method and apparatus for molecule detection |
US5391272A (en) * | 1992-03-06 | 1995-02-21 | Andcare, Inc. | Electrochemical immunoassay methods |
US5389215A (en) * | 1992-11-05 | 1995-02-14 | Nippon Telegraph And Telephone Corporation | Electrochemical detection method and apparatus therefor |
US5547555A (en) * | 1993-02-22 | 1996-08-20 | Ohmicron Technology, Inc. | Electrochemical sensor cartridge |
US5441894A (en) * | 1993-04-30 | 1995-08-15 | Abbott Laboratories | Device containing a light absorbing element for automated chemiluminescent immunoassays |
US5466416A (en) * | 1993-05-14 | 1995-11-14 | Ghaed; Ali | Apparatus and methods for carrying out electrochemiluminescence test measurements |
US5541113A (en) * | 1993-09-22 | 1996-07-30 | Beckman Instruments, Inc. | Method for detecting an analyte using an electrochemical luminescent transition metal label |
US5643721A (en) * | 1994-02-09 | 1997-07-01 | Abbott Laboratories | Bioreagent immobilization medium |
EP0750680B1 (en) * | 1994-03-15 | 1999-01-13 | Scientific Generics Ltd | Electrochemical denaturation of double-stranded nucleic acid |
GB2289339B (en) * | 1994-05-12 | 1998-09-16 | Cambridge Life Sciences | Flow-through electrochemical biosensor |
US5429735A (en) * | 1994-06-27 | 1995-07-04 | Miles Inc. | Method of making and amperometric electrodes |
CA2198489A1 (en) | 1994-08-26 | 1996-03-07 | Igen International, Inc. | Biosensor for and method of electrogenerated chemiluminescent detection of nucleic acid adsorbed to a solid surface |
US5527710A (en) | 1994-12-02 | 1996-06-18 | Igen, Inc. | Rate measurements of biomolecular reactions using electrochemiluminescence |
US5866434A (en) * | 1994-12-08 | 1999-02-02 | Meso Scale Technology | Graphitic nanotubes in luminescence assays |
US6203814B1 (en) * | 1994-12-08 | 2001-03-20 | Hyperion Catalysis International, Inc. | Method of making functionalized nanotubes |
US6207369B1 (en) * | 1995-03-10 | 2001-03-27 | Meso Scale Technologies, Llc | Multi-array, multi-specific electrochemiluminescence testing |
CN1192097C (zh) * | 1995-03-10 | 2005-03-09 | 梅索磅秤技术有限公司 | 多阵列、多特异性的电化学发光检验 |
US6140045A (en) * | 1995-03-10 | 2000-10-31 | Meso Scale Technologies | Multi-array, multi-specific electrochemiluminescence testing |
US5560811A (en) * | 1995-03-21 | 1996-10-01 | Seurat Analytical Systems Incorporated | Capillary electrophoresis apparatus and method |
US6177183B1 (en) * | 1995-04-19 | 2001-01-23 | Capitol Specialty Plastics, Inc. | Monolithic composition having an activation material |
US5589136A (en) * | 1995-06-20 | 1996-12-31 | Regents Of The University Of California | Silicon-based sleeve devices for chemical reactions |
US5968745A (en) * | 1995-06-27 | 1999-10-19 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Polymer-electrodes for detecting nucleic acid hybridization and method of use thereof |
US6127127A (en) * | 1995-06-27 | 2000-10-03 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Monolayer and electrode for detecting a label-bearing target and method of use thereof |
DE19610354C1 (de) * | 1996-03-15 | 1997-11-20 | Innova Gmbh | Vorrichtung, Verfahren und Einrichtung zur Isolierung von Nukleinsäuren |
EP2295988A2 (en) * | 1996-12-31 | 2011-03-16 | High Throughput Genomics, Inc. | Multiplexed molecular analysis apparatus and its fabrication method |
US5972694A (en) * | 1997-02-11 | 1999-10-26 | Mathus; Gregory | Multi-well plate |
DE19725190A1 (de) * | 1997-06-14 | 1998-12-17 | Innova Gmbh | Vorrichtungen mit integrierten Elektroden aus elektrisch leitfähigen Kunststoffen |
US6258326B1 (en) * | 1997-09-20 | 2001-07-10 | Ljl Biosystems, Inc. | Sample holders with reference fiducials |
US6413783B1 (en) * | 1997-09-18 | 2002-07-02 | Meso Scale Technologies, Llc | Assay sonication apparatus and methodology |
US6486947B2 (en) * | 1998-07-22 | 2002-11-26 | Ljl Biosystems, Inc. | Devices and methods for sample analysis |
US6238869B1 (en) * | 1997-12-19 | 2001-05-29 | High Throughput Genomics, Inc. | High throughput assay system |
US7297312B2 (en) * | 1998-03-16 | 2007-11-20 | University Of Cincinnati | Simultaneous multianalyte electrochemical assay based on spatial resolution |
US6251685B1 (en) * | 1999-02-18 | 2001-06-26 | Agilent Technologies, Inc. | Readout method for molecular biological electronically addressable arrays |
US7527821B2 (en) * | 2000-05-02 | 2009-05-05 | Smiths Detection Inc. | Sensor fabricating method |
US6686193B2 (en) * | 2000-07-10 | 2004-02-03 | Vertex Pharmaceuticals, Inc. | High throughput method and system for screening candidate compounds for activity against target ion channels |
-
1996
- 1996-09-17 US US08/715,163 patent/US6207369B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-09-17 WO PCT/US1997/016942 patent/WO1998012539A1/en active IP Right Grant
- 1997-09-17 AU AU46495/97A patent/AU743567B2/en not_active Expired
- 1997-09-17 EP EP97945249A patent/EP0944820A4/en not_active Ceased
- 1997-09-17 JP JP51498498A patent/JP4491071B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-09-17 KR KR1019997002230A patent/KR100564269B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-09-17 CA CA002265828A patent/CA2265828A1/en not_active Abandoned
- 1997-09-17 EP EP10178528A patent/EP2284536A3/en not_active Withdrawn
- 1997-09-17 IL IL12902297A patent/IL129022A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-09-17 ZA ZA9708380A patent/ZA978380B/xx unknown
- 1997-10-17 TW TW086113584A patent/TW541416B/zh not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-01-29 US US09/771,796 patent/US20010021534A1/en not_active Abandoned
-
2005
- 2005-12-14 US US11/300,808 patent/US8541174B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-02-06 JP JP2008026822A patent/JP4486684B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU743567B2 (en) | 2002-01-31 |
EP2284536A2 (en) | 2011-02-16 |
EP0944820A4 (en) | 2000-04-26 |
IL129022A0 (en) | 2000-02-17 |
EP2284536A3 (en) | 2011-06-08 |
US20060172340A1 (en) | 2006-08-03 |
IL129022A (en) | 2003-02-12 |
US6207369B1 (en) | 2001-03-27 |
TW541416B (en) | 2003-07-11 |
WO1998012539A1 (en) | 1998-03-26 |
US8541174B2 (en) | 2013-09-24 |
ZA978380B (en) | 1998-04-17 |
US20010021534A1 (en) | 2001-09-13 |
EP0944820A1 (en) | 1999-09-29 |
CA2265828A1 (en) | 1998-03-26 |
JP2008170449A (ja) | 2008-07-24 |
JP4491071B2 (ja) | 2010-06-30 |
JP2001503856A (ja) | 2001-03-21 |
AU4649597A (en) | 1998-04-14 |
KR100564269B1 (ko) | 2006-03-27 |
KR20000036176A (ko) | 2000-06-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4486684B2 (ja) | 多重アレイの多重特異的な電気化学発光試験 | |
US7015046B2 (en) | Multi-array, multi-specific electrochemiluminescence testing | |
JP4754003B2 (ja) | 多重アレイの多重特異的な電気化学発光試験 | |
US6140045A (en) | Multi-array, multi-specific electrochemiluminescence testing | |
WO1996028538A9 (en) | Multi-array, multi-specific electrochemiluminescence testing | |
AU2005201886B2 (en) | Multi-array, multi-specific electrochemiluminescence testing | |
IL117422A (en) | Multi-array, multi-specific electrochemiluminescence testing |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080513 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20080513 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080704 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20081006 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20081009 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20081031 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20081106 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20081203 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20081208 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081226 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090428 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090728 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090731 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090828 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100305 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100326 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130402 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130402 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140402 Year of fee payment: 4 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |