JPH0534345A - 化学発光を利用する抗原・抗体の測定方法 - Google Patents
化学発光を利用する抗原・抗体の測定方法Info
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- JPH0534345A JPH0534345A JP3206336A JP20633691A JPH0534345A JP H0534345 A JPH0534345 A JP H0534345A JP 3206336 A JP3206336 A JP 3206336A JP 20633691 A JP20633691 A JP 20633691A JP H0534345 A JPH0534345 A JP H0534345A
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- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
Abstract
(57)【要約】
【目的】 抗原や抗体の濃度の変化に対する発光量の変
化率が大きいため、測定精度が高い抗原・抗体の測定方
法を提供する。 【構成】 液体試料中の抗原又は抗体を測定する方法で
あって、該抗原又は抗体と特異的に結合する抗体又は抗
原を固定化した不溶性担体粒子に化学発光性物質を標識
したものを液体試料に添加し、抗原抗体反応を起こさ
せ、次に、液体試料に電圧を印加して電気化学的発光を
起こさせ、発光量を測定することからなる、抗原または
抗体の測定方法。
化率が大きいため、測定精度が高い抗原・抗体の測定方
法を提供する。 【構成】 液体試料中の抗原又は抗体を測定する方法で
あって、該抗原又は抗体と特異的に結合する抗体又は抗
原を固定化した不溶性担体粒子に化学発光性物質を標識
したものを液体試料に添加し、抗原抗体反応を起こさ
せ、次に、液体試料に電圧を印加して電気化学的発光を
起こさせ、発光量を測定することからなる、抗原または
抗体の測定方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、化学発光を利用する抗
原又は抗体の測定方法に関する。
原又は抗体の測定方法に関する。
【０００２】
【従来技術】例えば、液体試料中の抗体の測定方法とし
て、対応する抗原に予めルミノール、ピレン等の化学発
光を行う物質を固定化しておき、この抗原を前記液体試
料に添加して抗体と反応させると反応後の抗原に固定化
されている化学発光性物質の電気化学的発光が抑制され
る。このことを利用して、その時の電気化学的発光量を
測定することにより液体試料中の抗体濃度を測定する方
法が知られている。
て、対応する抗原に予めルミノール、ピレン等の化学発
光を行う物質を固定化しておき、この抗原を前記液体試
料に添加して抗体と反応させると反応後の抗原に固定化
されている化学発光性物質の電気化学的発光が抑制され
る。このことを利用して、その時の電気化学的発光量を
測定することにより液体試料中の抗体濃度を測定する方
法が知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、上記の方法は
反応後の抗体濃度の変化に対する発光量の変化が少な
く、測定精度が低いという欠点がある。
反応後の抗体濃度の変化に対する発光量の変化が少な
く、測定精度が低いという欠点がある。
【０００４】そこで、本発明の課題は、抗原や抗体の濃
度の変化に対する発光量の変化率が大きいため、測定精
度が高い抗原・抗体の測定方法を提供することにある。
度の変化に対する発光量の変化率が大きいため、測定精
度が高い抗原・抗体の測定方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を達成するための手段】すなわち、本発明は、か
かる課題を達成するものとして、液体試料中の抗原又は
抗体を測定する方法であって、該抗原又は抗体と特異的
に結合する抗体又は抗原を固定化した不溶性担体粒子に
化学発光性物質を標識したものを液体試料に添加し、抗
原抗体反応を起こさせ、次に、液体試料に電圧を印加し
て電気化学的発光を起こさせ、発光量を測定することか
らなる、抗原又は抗体の測定方法を提供するものであ
る。
かる課題を達成するものとして、液体試料中の抗原又は
抗体を測定する方法であって、該抗原又は抗体と特異的
に結合する抗体又は抗原を固定化した不溶性担体粒子に
化学発光性物質を標識したものを液体試料に添加し、抗
原抗体反応を起こさせ、次に、液体試料に電圧を印加し
て電気化学的発光を起こさせ、発光量を測定することか
らなる、抗原又は抗体の測定方法を提供するものであ
る。
【０００６】不溶性担体粒子 本発明に用いられる不溶性担体粒子としては、水性媒体
中で安定な不溶性を示す固体粒子であれば特に制限なく
使用することができ、従来抗原抗体反応に使用される抗
原や抗体の担体として公知のものは特に制限無くいずれ
も使用することができる。該担体粒子として好適なもの
としては、例えばポリスチレン、スチレン−ブタジエン
共重合体、スチレン−メタクリル酸共重合体、ポリグリ
シジルメタクリレート、アクロレイン−エチレングリコ
ールジメタクリレート共重合体等の乳化重合により得ら
れる有機高分子ラテックスのような有機高分子物質の微
粒子；シリカ、シリカ−アルミナ、アルミナ等の無機酸
化物微粒子；並びにFe3 Ｏ4 , γ−Fe2 Ｏ3 , Co−γ−
Fe2 Ｏ3 , (NiCuZn)O・Fe2 Ｏ3 , (CuZn)O・Fe
2 Ｏ3 , (Mn・Zn)O・Fe2 Ｏ3 , (NiZn)O・Fe2 Ｏ3 ,
SrO・６Fe2 Ｏ3 , BaO・６Fe2 Ｏ3 , SiO2 で被覆し
たFe3 Ｏ4 （粒径約 200Å）[Enzyme Microb.Technol.,
vol.2, p.2〜10 (1980) 参照] 、各種の高分子材料
（ナイロン、ポリアクリルアミド、タンパク質等）とフ
ェライトとの複合微粒子、磁性金属微粒子等を挙げるこ
とができる。これらの不溶性担体粒子の粒径は、一般
に、 1.0μm 以下が好ましい。さらに、上に示した粒子
の内、磁気微粒子の場合は、粒径が50〜500 Åの範囲が
好ましく、それ以外の粒子の場合は、0.05〜0.4 μm 程
度が好ましい。
中で安定な不溶性を示す固体粒子であれば特に制限なく
使用することができ、従来抗原抗体反応に使用される抗
原や抗体の担体として公知のものは特に制限無くいずれ
も使用することができる。該担体粒子として好適なもの
としては、例えばポリスチレン、スチレン−ブタジエン
共重合体、スチレン−メタクリル酸共重合体、ポリグリ
シジルメタクリレート、アクロレイン−エチレングリコ
ールジメタクリレート共重合体等の乳化重合により得ら
れる有機高分子ラテックスのような有機高分子物質の微
粒子；シリカ、シリカ−アルミナ、アルミナ等の無機酸
化物微粒子；並びにFe3 Ｏ4 , γ−Fe2 Ｏ3 , Co−γ−
Fe2 Ｏ3 , (NiCuZn)O・Fe2 Ｏ3 , (CuZn)O・Fe
2 Ｏ3 , (Mn・Zn)O・Fe2 Ｏ3 , (NiZn)O・Fe2 Ｏ3 ,
SrO・６Fe2 Ｏ3 , BaO・６Fe2 Ｏ3 , SiO2 で被覆し
たFe3 Ｏ4 （粒径約 200Å）[Enzyme Microb.Technol.,
vol.2, p.2〜10 (1980) 参照] 、各種の高分子材料
（ナイロン、ポリアクリルアミド、タンパク質等）とフ
ェライトとの複合微粒子、磁性金属微粒子等を挙げるこ
とができる。これらの不溶性担体粒子の粒径は、一般
に、 1.0μm 以下が好ましい。さらに、上に示した粒子
の内、磁気微粒子の場合は、粒径が50〜500 Åの範囲が
好ましく、それ以外の粒子の場合は、0.05〜0.4 μm 程
度が好ましい。
【０００７】上記の材料及び粒径を有するものの中でも
特に好ましいものとして、 SiO2 で被覆した粒径約 200
ÅのFe3 Ｏ4 粒子、及び粒径 200〜300 Åのγ−Fe2 Ｏ
3 粒子を挙げることができる。さらに、このような好ま
しい磁気微粒子として、本発明者らが先に出願した、炭
素が共存する液相中で熱プラズマ法より製造される鉄を
主成分とし、Ni、Coを含有する微粒子（粒径約 300Å）
が挙げられ、これらの粒子は、例えば特願平02−170887
号に開示された方法により容易に製造することができ
る。
特に好ましいものとして、 SiO2 で被覆した粒径約 200
ÅのFe3 Ｏ4 粒子、及び粒径 200〜300 Åのγ−Fe2 Ｏ
3 粒子を挙げることができる。さらに、このような好ま
しい磁気微粒子として、本発明者らが先に出願した、炭
素が共存する液相中で熱プラズマ法より製造される鉄を
主成分とし、Ni、Coを含有する微粒子（粒径約 300Å）
が挙げられ、これらの粒子は、例えば特願平02−170887
号に開示された方法により容易に製造することができ
る。
【０００８】本発明の方法に用いられる抗原又は抗体を
固定化した磁気微粒子は、上記の不溶性担体粒子に所要
の抗原又は抗体を固定化することにより得られる。固定
化法は種々公知であり、物理吸着による方法と化学的共
有結合の形成による方法とがあるがいずれでもよい。一
般に、物理吸着能の高い蛋白例えば抗体や高分子量の蛋
白の固定には物理吸着が適し、物理吸着能の低いホルモ
ン類、ハプテン類の固定化には化学的共有結合の形成に
よる方法が適する。固定化する抗体又は抗原の性質等に
応じて固定化法を適宜選択すればよい。また、不溶性担
体粒子として、上記のうち無機系の酸化物粒子や磁気微
粒子を使用する場合には、通常行われるように、例え
ば、シランカップリング剤で処理したり、ブドウ状球菌
より得られるプロテインＡを被膜させたりすることによ
り、不溶性担体粒子に官能基を導入しておくのがよい。
固定化した磁気微粒子は、上記の不溶性担体粒子に所要
の抗原又は抗体を固定化することにより得られる。固定
化法は種々公知であり、物理吸着による方法と化学的共
有結合の形成による方法とがあるがいずれでもよい。一
般に、物理吸着能の高い蛋白例えば抗体や高分子量の蛋
白の固定には物理吸着が適し、物理吸着能の低いホルモ
ン類、ハプテン類の固定化には化学的共有結合の形成に
よる方法が適する。固定化する抗体又は抗原の性質等に
応じて固定化法を適宜選択すればよい。また、不溶性担
体粒子として、上記のうち無機系の酸化物粒子や磁気微
粒子を使用する場合には、通常行われるように、例え
ば、シランカップリング剤で処理したり、ブドウ状球菌
より得られるプロテインＡを被膜させたりすることによ
り、不溶性担体粒子に官能基を導入しておくのがよい。
【０００９】通常、分散媒には緩衝液を用い、必要に応
じて架橋剤を添加した上で不溶性担体粒子と抗原又は抗
体とを混合すればよい。このときに用いる分散媒は特に
限定されないが、不溶性担体粒子の保存中の安定性、凝
集反応時の反応の再現性からみて、例えばグリシン−水
酸化ナトリウム緩衝液、トリス塩酸緩衝液、塩化アンモ
ニウム−アンモニア緩衝液、リン酸緩衝液等の緩衝液が
好適に用いることができる。抗体又は抗原を固定化した
不溶性担体粒子の濃度は、特に限定されないが、一般に
抗原抗体反応時点で 0.005重量％以上が好ましい。
じて架橋剤を添加した上で不溶性担体粒子と抗原又は抗
体とを混合すればよい。このときに用いる分散媒は特に
限定されないが、不溶性担体粒子の保存中の安定性、凝
集反応時の反応の再現性からみて、例えばグリシン−水
酸化ナトリウム緩衝液、トリス塩酸緩衝液、塩化アンモ
ニウム−アンモニア緩衝液、リン酸緩衝液等の緩衝液が
好適に用いることができる。抗体又は抗原を固定化した
不溶性担体粒子の濃度は、特に限定されないが、一般に
抗原抗体反応時点で 0.005重量％以上が好ましい。
【００１０】磁気微粒子に固定される抗体又は抗原の種
類は、被測定対象である特定の抗原又は抗体に対して抗
体又は抗原の関係にあるものであり、液体試料中の抗原
又は抗体に応じて選択される。かかる抗原又は抗体の例
としては次のものを挙げることができる。
類は、被測定対象である特定の抗原又は抗体に対して抗
体又は抗原の関係にあるものであり、液体試料中の抗原
又は抗体に応じて選択される。かかる抗原又は抗体の例
としては次のものを挙げることができる。
【００１１】抗原類：IgG 、IgA 、IgM 、IgE 、アルブ
ミン、HCG 、AFP 、カルジオライピン抗原、血液型物
質、コンカナバリンＡ、DNT 、プロスタグランジン、CR
P 、HBs 、ヒト成長ホルモン、ステロイドホルモン、CE
A 、IgD 等。
ミン、HCG 、AFP 、カルジオライピン抗原、血液型物
質、コンカナバリンＡ、DNT 、プロスタグランジン、CR
P 、HBs 、ヒト成長ホルモン、ステロイドホルモン、CE
A 、IgD 等。
【００１２】抗体類：抗アルブミン抗体、抗HCG 抗体、
抗IgG 抗体、抗IgA 抗体、抗IgM 抗体、抗IgE 抗体、抗
IgD 抗体、抗AFP 抗体、抗DNT 抗体、抗プロスタグラン
ジン抗体、抗ヒト凝固ファクター抗体、抗CRP 抗体、抗
HBs 抗体、抗ヒト成長ホルモン抗体、抗ステロイドホル
モン抗体、及びこれらを含む血清、並びにモノクローナ
ル抗体。
抗IgG 抗体、抗IgA 抗体、抗IgM 抗体、抗IgE 抗体、抗
IgD 抗体、抗AFP 抗体、抗DNT 抗体、抗プロスタグラン
ジン抗体、抗ヒト凝固ファクター抗体、抗CRP 抗体、抗
HBs 抗体、抗ヒト成長ホルモン抗体、抗ステロイドホル
モン抗体、及びこれらを含む血清、並びにモノクローナ
ル抗体。
【００１３】化学発光性物質 標識として用いられる化学発光性物質は、この種の電気
化学的発光に使用されるものとして公知のものはいずれ
も使用することができ、例えばルミノール、ピレン、ル
シフェリン及びその誘導体等をあげることができる。化
学発光性物質は、磁気微粒子に標識されていてもよい
し、固定化された抗原又は抗体に標識されていてもよい
し、その双方に標識されていてもよい。
化学的発光に使用されるものとして公知のものはいずれ
も使用することができ、例えばルミノール、ピレン、ル
シフェリン及びその誘導体等をあげることができる。化
学発光性物質は、磁気微粒子に標識されていてもよい
し、固定化された抗原又は抗体に標識されていてもよい
し、その双方に標識されていてもよい。
【００１４】抗原抗体反応 本発明の方法を実施するには、測定対象である抗原又は
抗体を含む可能性のある液体試料に、上記の標識された
抗原又は抗体固定化磁気微粒子が一定量、通常0.01〜１
mg／mlの間で用いられ、好ましくは 0.1mg／ml程度添加
される。液体試料に抗原又は抗体が存在すると、その存
在量に応じて、標識された固定化抗体又は抗原が反応す
る。反応した標識された固定化抗体又は抗原は次の電圧
の印加による電気化学的発光に関与しにくくなる。電気
化学的発光への抑制は、従来の固定化を行わない場合に
比較して遙に強い。そのため、抗原抗体反応を起こした
標識された固定化抗体又は抗原のわずかの変化によって
発光量が大きく変化することになる。
抗体を含む可能性のある液体試料に、上記の標識された
抗原又は抗体固定化磁気微粒子が一定量、通常0.01〜１
mg／mlの間で用いられ、好ましくは 0.1mg／ml程度添加
される。液体試料に抗原又は抗体が存在すると、その存
在量に応じて、標識された固定化抗体又は抗原が反応す
る。反応した標識された固定化抗体又は抗原は次の電圧
の印加による電気化学的発光に関与しにくくなる。電気
化学的発光への抑制は、従来の固定化を行わない場合に
比較して遙に強い。そのため、抗原抗体反応を起こした
標識された固定化抗体又は抗原のわずかの変化によって
発光量が大きく変化することになる。
【００１５】標識された、固定化抗原又は抗体は、通
常、水性媒体に懸濁した状態で液体試料に添加される。
その添加方法は、特に限定されない。一定量の液体試料
に、一定濃度で不溶性担体粒子を含む懸濁液を添加して
もよいし、あるいはその逆でもよい。
常、水性媒体に懸濁した状態で液体試料に添加される。
その添加方法は、特に限定されない。一定量の液体試料
に、一定濃度で不溶性担体粒子を含む懸濁液を添加して
もよいし、あるいはその逆でもよい。
【００１６】抗原又は抗体固定化不溶性担体粒子として
抗原又は抗体を固定化した磁気微粒子を使用する場合に
は、例えば、特開昭63−90766号公報に開示の懸濁液、
即ち、抗原又は抗体が固定化されている粒径50〜500 Å
の磁気微粒子が、該磁気微粒子１mg当り５ml以上の、界
面活性剤濃度 0.1重量％以上の等張塩水溶液中に分散し
てなる懸濁液として予め調製しておき、液体試料に添加
することもできる。かかる懸濁液は、安定性が高く保存
性が良好であるので便利である。等張塩水溶液として
は、例えば、 0.9％NaCl溶液、0.025Mしょ糖水溶液を使
用することができ、また、これに添加する界面活性剤と
しては、Tween 80、−COOH、 COO- などの基を有する界
面活性剤等が挙げられる。等張塩水溶液中の界面活性剤
濃度は、 0.1重量％以上であることが必要で、好ましく
は、 0.1〜1.0 重量％である。
抗原又は抗体を固定化した磁気微粒子を使用する場合に
は、例えば、特開昭63−90766号公報に開示の懸濁液、
即ち、抗原又は抗体が固定化されている粒径50〜500 Å
の磁気微粒子が、該磁気微粒子１mg当り５ml以上の、界
面活性剤濃度 0.1重量％以上の等張塩水溶液中に分散し
てなる懸濁液として予め調製しておき、液体試料に添加
することもできる。かかる懸濁液は、安定性が高く保存
性が良好であるので便利である。等張塩水溶液として
は、例えば、 0.9％NaCl溶液、0.025Mしょ糖水溶液を使
用することができ、また、これに添加する界面活性剤と
しては、Tween 80、−COOH、 COO- などの基を有する界
面活性剤等が挙げられる。等張塩水溶液中の界面活性剤
濃度は、 0.1重量％以上であることが必要で、好ましく
は、 0.1〜1.0 重量％である。
【００１７】この方法において、液体試料に磁気微粒子
を分散させるには、例えば超音波を利用することができ
る。試料の懸濁液中への分散処理により液体試料中に存
在した抗体又は抗原は磁気微粒子上に固定化されている
抗原又は抗体に結合し、抗原−抗体−磁気微粒子からな
る複合体を生成する。この際、特開平02−281142号公報
に記載のように交番磁界を印加して抗原−抗体−磁気微
粒子からなる複合体を生成する方法、攪拌による方法等
種々可能であり特に限定されない。このようにして抗原
−抗体−磁気微粒子複合体が形成されると、磁気微粒子
に固定化していない場合に比較して、電気化学的発光を
させるために電位を印加した時に磁気微粒子の立体的障
害により電気化学的発光に関与しにくくなると推定され
る。この方法は、液体試料中の濃度10-11 〜10-6ｇ／ml
程度の抗原又は抗体の測定に適する。
を分散させるには、例えば超音波を利用することができ
る。試料の懸濁液中への分散処理により液体試料中に存
在した抗体又は抗原は磁気微粒子上に固定化されている
抗原又は抗体に結合し、抗原−抗体−磁気微粒子からな
る複合体を生成する。この際、特開平02−281142号公報
に記載のように交番磁界を印加して抗原−抗体−磁気微
粒子からなる複合体を生成する方法、攪拌による方法等
種々可能であり特に限定されない。このようにして抗原
−抗体−磁気微粒子複合体が形成されると、磁気微粒子
に固定化していない場合に比較して、電気化学的発光を
させるために電位を印加した時に磁気微粒子の立体的障
害により電気化学的発光に関与しにくくなると推定され
る。この方法は、液体試料中の濃度10-11 〜10-6ｇ／ml
程度の抗原又は抗体の測定に適する。
【００１８】
実施例１ (1) 粒径 120Åの磁気微粒子２mgをγ−アミノプロピル
エトキシシラン、グルタルアルデヒドの順に処理後、抗
ヒトIgG 抗体２mgを加え、共有結合により磁気微粒子に
抗体を固定化した。次に、この抗ヒトIgG 固定化磁気微
粒子にジアゾ化したルミノール１mgを反応させ、ルミノ
ールを標識した。
エトキシシラン、グルタルアルデヒドの順に処理後、抗
ヒトIgG 抗体２mgを加え、共有結合により磁気微粒子に
抗体を固定化した。次に、この抗ヒトIgG 固定化磁気微
粒子にジアゾ化したルミノール１mgを反応させ、ルミノ
ールを標識した。
【００１９】(2) ルミノールを標識した抗ヒトIgG 固定
化磁気微粒子を0.6wt%のTween80 を含むＰＢＳ（リン酸
生理緩衝液）、pH7.4 に 0.2mg／mlの磁気微粒子濃度と
なるように分散後、ヒトIgG 濃度がそれぞれ１×10-2ng
／ml、１×10-1ng／ml、１×100 ng／ml、１×101 ng／
ml、１×102 ng／ml及び１×103 ng／mlと既知である６
種類のヒトIgG 溶液を１：１の容量比で混合し、抗原抗
体反応を行わせた。反応は 200ガウス、パルス幅 0.5秒
の交番磁界を印加した状態で室温下で10分間行った。
化磁気微粒子を0.6wt%のTween80 を含むＰＢＳ（リン酸
生理緩衝液）、pH7.4 に 0.2mg／mlの磁気微粒子濃度と
なるように分散後、ヒトIgG 濃度がそれぞれ１×10-2ng
／ml、１×10-1ng／ml、１×100 ng／ml、１×101 ng／
ml、１×102 ng／ml及び１×103 ng／mlと既知である６
種類のヒトIgG 溶液を１：１の容量比で混合し、抗原抗
体反応を行わせた。反応は 200ガウス、パルス幅 0.5秒
の交番磁界を印加した状態で室温下で10分間行った。
【００２０】(3) 発光量の測定は反応液と10-3モル／リ
ットル過酸化水素を含むＰＢＳとを１：１の容量比で混
合し10分間室温放置後、 500μl を電気化学発光測定セ
ルに注入し、電位発生装置により参照電極の電位に対す
る作用電極の電位が1200mVになるように電圧を作用電極
に15秒間印加してルミノールを発光させ光学検出器に光
電子増倍管を用いたフォトンカウンティングシステムに
より測定した。
ットル過酸化水素を含むＰＢＳとを１：１の容量比で混
合し10分間室温放置後、 500μl を電気化学発光測定セ
ルに注入し、電位発生装置により参照電極の電位に対す
る作用電極の電位が1200mVになるように電圧を作用電極
に15秒間印加してルミノールを発光させ光学検出器に光
電子増倍管を用いたフォトンカウンティングシステムに
より測定した。
【００２１】得られた結果を図１に示す（測定データを
示すドットに付されたエラーバーは、15回測定を行った
際の測定値の分散範囲を示す）。得られた検量線はヒト
IgG溶液中のヒトIgG 濃度の変化に伴う発光量の変化率
が大きい。
示すドットに付されたエラーバーは、15回測定を行った
際の測定値の分散範囲を示す）。得られた検量線はヒト
IgG溶液中のヒトIgG 濃度の変化に伴う発光量の変化率
が大きい。
【００２２】比較例１ ルミノールをジアゾ化することにより標識したルミノー
ル標識抗ヒトIgG 抗体を50μｇ／mlの濃度で抗体を含む
ＰＢＳを調製した。この標識抗体溶液 500μlと１×10
-2mg／ml、１×10-1mg／ml、１×100 mg／ml、１×101
mg／ml及び１×102 mg／mlとそれぞれ既知の濃度の５種
類の抗原（ヒトIgG ）溶液 500μl を混合し、室温で３
時間ゆっくりと攪拌し抗原抗体反応を行った。この反応
液を10-3モル／リットル過酸化水素含有ＰＢＳとを１：
１の容量比で混合後10分間室温放置し、実施例１と同様
の方法で発光量の測定を行った。得られた結果を図１に
示す。
ル標識抗ヒトIgG 抗体を50μｇ／mlの濃度で抗体を含む
ＰＢＳを調製した。この標識抗体溶液 500μlと１×10
-2mg／ml、１×10-1mg／ml、１×100 mg／ml、１×101
mg／ml及び１×102 mg／mlとそれぞれ既知の濃度の５種
類の抗原（ヒトIgG ）溶液 500μl を混合し、室温で３
時間ゆっくりと攪拌し抗原抗体反応を行った。この反応
液を10-3モル／リットル過酸化水素含有ＰＢＳとを１：
１の容量比で混合後10分間室温放置し、実施例１と同様
の方法で発光量の測定を行った。得られた結果を図１に
示す。
【００２３】実施例２ 平均粒径 0.023umのポリスチレンラテックス粒子をトリ
ス−塩酸緩衝液（pH＝7.5 ）で希釈し、ラテックス濃度
が１重量％の懸濁液を調製する。次いで抗ヒトIgG をト
リス−塩酸緩衝液（pH＝7.5 ）で希釈し、蛋白濃度２mg
／mlの溶液を調製する。上記ラテックス懸濁液１mlに抗
ヒトIgG の溶液１mlを加え、37℃で２時間反応させる。
同様にして、この溶液にルミノール溶液（濃度 0.1mmol
／l ）を１ml加えて37℃で２時間反応させる。さらに牛
血清アルブミンを最終濃度で0.05％添加した後遠心分離
し、上清を除去した後沈澱をトリス−塩酸緩衝液（pH＝
7.5 ）を再分散し、ラテックス濃度を0.08重量％に調製
した。こうして、ルミノールで標識した抗ヒトIgG 固定
化ラテックスを得た。以下、実施例の(2) 、(3) と同様
にして測定を行った。得られた結果を図１に示す。
ス−塩酸緩衝液（pH＝7.5 ）で希釈し、ラテックス濃度
が１重量％の懸濁液を調製する。次いで抗ヒトIgG をト
リス−塩酸緩衝液（pH＝7.5 ）で希釈し、蛋白濃度２mg
／mlの溶液を調製する。上記ラテックス懸濁液１mlに抗
ヒトIgG の溶液１mlを加え、37℃で２時間反応させる。
同様にして、この溶液にルミノール溶液（濃度 0.1mmol
／l ）を１ml加えて37℃で２時間反応させる。さらに牛
血清アルブミンを最終濃度で0.05％添加した後遠心分離
し、上清を除去した後沈澱をトリス−塩酸緩衝液（pH＝
7.5 ）を再分散し、ラテックス濃度を0.08重量％に調製
した。こうして、ルミノールで標識した抗ヒトIgG 固定
化ラテックスを得た。以下、実施例の(2) 、(3) と同様
にして測定を行った。得られた結果を図１に示す。
【００２４】
【発明の効果】本発明の方法によれば、抗原や抗体の被
検体濃度の変化に対する発光量の変化率が大きいため、
測定誤差が極めて小さく、高精度で抗原又は抗体を定量
することができる。
検体濃度の変化に対する発光量の変化率が大きいため、
測定誤差が極めて小さく、高精度で抗原又は抗体を定量
することができる。
【図１】実施例１、比較例１及び実施例２において、化
学発光物質の発光量を測定したグラフである。
学発光物質の発光量を測定したグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 【請求項１】 液体試料中の抗原又は抗体を測定する方
法であって、 該抗原又は抗体と特異的に結合する抗体又は抗原を固定
化した不溶性担体粒子に化学発光性物質を標識したもの
を液体試料に添加し、抗原抗体反応を起こさせ、 次に、液体試料に電圧を印加して電気化学的発光を起こ
させ、発光量を測定することからなる、抗原又は抗体の
測定方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3206336A JPH0534345A (ja) | 1991-02-19 | 1991-07-23 | 化学発光を利用する抗原・抗体の測定方法 |
| EP92301295A EP0500305B1 (en) | 1991-02-19 | 1992-02-18 | Method of measuring immunoreactant using electro-chemiluminescence |
| DE69215925T DE69215925T2 (de) | 1991-02-19 | 1992-02-18 | Verfahren zur Messung von immunoreaktiven Substanzen mit Elektro-Chemilumineszenz |
| US07/836,740 US5240863A (en) | 1991-02-19 | 1992-02-19 | Method of measuring immunoreactant using electrochemiluminescence |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4605491 | 1991-02-19 | ||
| JP3-46054 | 1991-02-19 | ||
| JP3206336A JPH0534345A (ja) | 1991-02-19 | 1991-07-23 | 化学発光を利用する抗原・抗体の測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0534345A true JPH0534345A (ja) | 1993-02-09 |
Family
ID=26386168
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3206336A Pending JPH0534345A (ja) | 1991-02-19 | 1991-07-23 | 化学発光を利用する抗原・抗体の測定方法 |
Country Status (4)
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|---|---|
| US (1) | US5240863A (ja) |
| EP (1) | EP0500305B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0534345A (ja) |
| DE (1) | DE69215925T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106124753A (zh) * | 2016-07-08 | 2016-11-16 | 广州东林生物科技有限公司 | 电化学发光缓冲液及清洗液 |
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| GB9225354D0 (en) * | 1992-12-04 | 1993-01-27 | Univ Manchester | Immunoassay |
| US5993740A (en) * | 1995-01-20 | 1999-11-30 | Hitachi, Ltd. | Immunoassay method and analyzer using magnetic particles |
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| WO1996028538A1 (en) * | 1995-03-10 | 1996-09-19 | Meso Scale Technologies, Llc | Multi-array, multi-specific electrochemiluminescence testing |
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| GB0103765D0 (en) * | 2001-02-15 | 2001-04-04 | Affitech As | Assay |
| WO2003001889A2 (en) | 2001-06-29 | 2003-01-09 | Meso Scale Technologies, Llc. | Assay plates reader systems and methods for luminescence test measurements |
| JP4355214B2 (ja) | 2001-07-30 | 2009-10-28 | メソ スケイル テクノロジーズ，エルエルシー | 発光試験測定用の固定化された脂質／タンパク質層を有するアッセイ用電極、その作製法、及びその使用法 |
| EP1451348B1 (en) | 2001-09-10 | 2015-08-12 | Meso Scale Technologies, LLC | Methods, reagents, kits and apparatus for protein function analysis |
| CA2493905A1 (en) | 2002-06-20 | 2003-12-31 | Sudeep M. Kumar | Electrochemiluminescence flow cell and flow cell components |
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| EP4300100A2 (en) | 2010-10-14 | 2024-01-03 | Meso Scale Technologies, LLC | Reagent storage in an assay device |
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| DK2972353T3 (da) | 2013-03-11 | 2023-03-27 | Meso Scale Technologies Llc | Forbedrede fremgangsmåder til udførelse af multipleksanalyser |
| US10114015B2 (en) | 2013-03-13 | 2018-10-30 | Meso Scale Technologies, Llc. | Assay methods |
| JP6408552B2 (ja) | 2013-03-13 | 2018-10-17 | メソ スケール テクノロジーズ エルエルシー | 改善されたアッセイ方法 |
| US10202500B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-02-12 | Lubrizol Advanced Materials, Inc. | Heavy metal free CPVC compounds |
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| CN116113830A (zh) | 2020-07-01 | 2023-05-12 | 中尺度技术有限责任公司 | 用于测定测量的组合物和方法 |
| CA3193739A1 (en) | 2020-09-02 | 2022-03-10 | Meso Scale Technologies, Llc. | Kits for detecting one or more target analytes in a sample and methods of making and using the same |
| WO2022051481A2 (en) | 2020-09-04 | 2022-03-10 | Meso Scale Technologies, Llc. | Methods for isolating central nervous system surface marker displaying agents |
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1992
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- 1992-02-18 DE DE69215925T patent/DE69215925T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-02-19 US US07/836,740 patent/US5240863A/en not_active Expired - Lifetime
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