JP3753939B2 - Ｄｎａの特定塩基配列をアルキル化する化合物及びその合成法 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、遺伝子をアルキル化することができる化合物、その化合物を用いたアルキル化剤、そのアルキル化剤を用いて遺伝子の発現を制御する方法、及び、当該化合物を含有してなる医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
分子生物学の急速な進歩により、癌をはじめさまざまな疾病の原因がＤＮＡの変異であることが次つぎと明らかにされてきている。また、ヒューマンゲノムプロジェクトによりヒトＤＮＡの全塩基配列の決定も数年以内に完了するものとみられ、これら疾病の分子レベルの理解に基づいた治療法の出現がますます望まれてきている。しかし細胞の外から遺伝子の発現を制御する一般的な方法論が確立していないことが、このようなアプローチの実現の大きな壁になっている。最近、ディスタマイシンなどの抗生物質によるＤＮＡの分子認識をヒントとして、塩基配列特異的に結合する分子が設計され、遺伝子発現の制御が可能になってきた。
【０００３】
三日月型をしたディスタマイシン、ネトロプシンなどの抗生物質が、ＤＮＡのアデニン・チミン（Ａ・Ｔ）塩基対に富む配列のＡ−Ｔ間の水素結合のマイナーグループに結合することがＸ線結晶構造解析やＮＭＲにより明らかにされ、この認識を利用したさまざまな分子が合成されてきた。ピロール環をイミダゾールに変えることにより、グアニン・シトシン（Ｇ・Ｃ）塩基対を認識するように改変できることについては以前から予想されていたが（M.L,Kopka,C.Yoon,D.Goodsell,P.Pjura,R.E.Dickerson,Proc.Natl,Acad.Aci,USA,82,1376,(1985)) ; (J.W.Lown,K.Krowickl,U.G.Bhat,A.Skorobogaty,B.Ward,J.C.Dabrowiak,Biochemistry,25,7408(1986).)、実際にはそう単純ではなく、多くの混沌とした実験結果が得られていた。
【０００４】
Ｗｅｍｍｅｒらは、ディスタマイシンによるＤＮＡへの結合についてＮＭＲを用いて詳細に検討した。その結果、これまで１枚しか収容されないと考えられていたＤＮＡマイナーグループにディスタマイシンが２枚入りうることを示した（J.G.Pelton,D.E.Wemmer,Proc.Natl,Acad.Sci,USA,86,5723(1989).)。Ｄｅｒｖａｎらはこのような結合モードを考慮すると、いままでの混沌とした結果が説明できることに着目し、アンチパラレルに配向したメチルピロール（Ｐｙ）、メチルイミダゾール（Ｉｍ）ポリアミドのペアにより２本鎖ＤＮＡの塩基配列が認識できることを見いだした。
【０００５】
すなわち、Ｐｙ−ＩｍによりＣ−Ｇ塩基対が、Ｉｍ−ＰｙによりＧ−Ｃ塩基対が、Ｐｙ−ＰｙによりＡ−ＴまたはＴ−Ａ塩基対を認識するという一般則を導きだしたのである（S.White,E.E.Baird,P.B.Dervan,Chemistry&Biology,4,569(1997).)。ペアに共有結合を導入して、結合におけるエントロピー損失を防ぎ、より強い結合と認識能を得るためいろいろなヘアピンや環状のポリアミドが合成された。なかでもγリンカー(−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−）をもつヘアピンがすぐれた結合能と認識能をもつことが示され、そのＤＮＡとの複合体の構造も決定されている（R.P.L.de Clairac,B.H.Geierstanger,M.Marksich,P.B.Dervan,D.E.Wemmer,J.Am.Chem.Soc.,119,7909(1997).）。
【０００６】
また、ピロールイミダゾールのみでつくられるヘアピンポリアミドでは認識可能な配列は７塩基対が上限であるが（J.M.Turner,E.F.Baird,P.B.Dervan,ibid.,119,7636(1997).)、ホモダイマーを用いた系においてＡ・Ｔ配列を認識するβ−アラニン−ペアの導入で１１塩基対の認識も可能になっている（S.E.Swalley,E.E.Baird,D.B.Dervan,Chem.Enr.J,3,1600(1997)）。
【０００７】
さらに、Ｄｅｒｖａｎ、ＧｏｔｔｅｓｆｅｌｄらはＺｎフィンガータンパクであるＴＦＩＩＩＡの認識配列中の４番目のフィンガーの結合配列のマイナーグループに拮抗して結合するポリアミドを設計し５ＳＲＮＡの発現がｉｎ ｖｉｔｒｏの実験において選択的に制御されることを示した（J.M.Gottesfeld,L.Neely,J.W.Trauger,E.E.Baird,P.B.Dervan,Nature,387,202(1997).)。また、同時にｉｎ ｖｉｔｒｏの実験において、ポリアミドが核内に透過していることも示された。
【０００８】
近年、遺伝子の制御に関して、オリゴヌクレオチドやペプチド核酸（ＰＮＡ）などが注目されているが、細胞透過性が問題となっていることを考えると、これらメチルピロール-メチルイミダゾールポリアミドは遺伝子発現を制御する分子として、分子生物学の道具として、さらには医薬としても期待がもてる化合物であることが示されてきた。
【０００９】
従来のＰｙ−Ｉｍ系のポリアミドは、塩基対の水素結合のマイナーグループを認識するだけであり、遺伝子と共有結合するものではなかった。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、塩基対の水素結合のマイナーグループを認識すると共に、塩基と共有結合をし得る化合物を提供する。本発明の化合物は、特定の塩基配列を認識すると共に、隣接する塩基と共有結合により強固に結合し、当該塩基配列を有する遺伝子の発現を制御することができる。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明は、次式（Ｉ）
【００１２】
【化２】
【００１３】
（式中、Ｒは低級アシル基又はポリアミド基を示し、Ｘは窒素原子又はＣＨを示す。）
で表される化合物に関する。
【００１４】
また、本発明は、前記一般式（Ｉ）で表される化合物からなる遺伝子のアルキル化剤に関する。より詳細には、本発明のアルキル化剤は、遺伝子中の特異的な塩基配列、Ｗ−Ｗ−Ｖ（式中、ＶはＡ又はＧ、ＷはＡ若しくはＴ又はＵを示す。）又はＧ−Ｗ−Ｖ（式中、ＶはＡ又はＧ、ＷはＡ若しくはＴ又はＵを示す。）などの配列を認識して当該部分を選択的にアルキル化することができるものである。
【００１５】
さらに、本発明は、前記のアルキル化剤を用いて、遺伝子の特異的な塩基配列を包含する部分の発現を制御する方法に関する。
【００１６】
また、本発明は、前記一般式（Ｉ）で表される化合物を含有してなる、遺伝子により誘発され得る疾患を治療又は予防するための医薬組成物にも関する。
【００１７】
本発明の一般式（Ｉ）におけるＲの低級アシル基としては、カルボニル基の炭素原子を含めて炭素数１〜１２、好ましくは２〜６の低級アシル基であり、例えば、アセチル基、プロピオニル基、イソプロピオニル基、ブタノイル基などが挙げられるが、立体的に小さなもののほうが好ましい。
【００１８】
また、Ｒのポリアミド基としては、Ｎ−メチル−４−アミノ−２−カルボキシピロール（ＨＯ−Ｐｙ−Ｈ）、Ｎ−メチル−４−アミノ−２−カルボキシイミダゾール（ＨＯ−Ｉｍ−Ｈ）、Ｎ−メチル−４−アミノ−３−ヒドロキシ−２−カルボキシピロール（ＨＯ−Ｈｐ−Ｈ）、４−アミノ酪酸（ＨＯ−γ−Ｈ）（γ−リンカー用）などのアミノカルボン酸からなるポリアミドが挙げられる。これらのポリアミドのアミド基の窒素−水素結合の部位が、遺伝子の塩基を認識し、即ち、一般的にはＰｙ−ＩｍはＣ−Ｇ対を認識し、Ｉｍ−ＰｙはＧ−Ｃ対を認識し、Ｐｙ−ＰｙはＡ−Ｔ対又はＴ−Ａ対を認識することから、認識させたい塩基配列に応じて、前記ポリアミドを設計することができる。
【００１９】
Ｒにおけるポリアミドのアミド基は、遺伝子の塩基対の片側に対して５〜７個、好ましくは３個までのものが好ましく、それ以上のアミド基を有することもできるが、塩基配列に対する親和性の向上を期待することは難しい。好ましいポリアミド基としては、Ｎ−メチル−４−アセチルアミノ−イミダゾール−２−カルボニル基が挙げられる。
【００２０】
Ｒにおけるポリアミド基中のγ−アミノ酪酸部分は、γ−リンカーとして作用するものであり、この部分でポリアミド鎖がヘアピンカーブして、遺伝子の塩基対の対になっている塩基配列を認識することになる。
本発明の一般式（Ｉ）におけるＲのポリアミド基としては、次式
【化３】
【００２１】
で示されるものが好ましい。
【００２２】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物のアルキル化部分は、次式で示されるデュオカルマイシンＡ（DuocarmycinＡ）のアルキル化機構と同様な機構でアルキル化する。
【化４】
【００２３】
しかしながら、デュオカルマイシンＡのアルキル化はアデニン（Ａ）のプリン環でのみ生起するのに対して、本発明の化合物のアルキル化はアデニン（Ａ）又は（Ｇ）のいずれのプリン環においても生起する点で相違がある。
【００２４】
本発明の化合物のアミド結合に続くＰｙ−Ｐｙ−の部分は、遺伝子の塩基配列Ｗ−Ｗ（Ｗは、Ａ若しくはＴ又はＵを示す。）を認識配列とし、Ｉｍ−Ｐｙ−の部分は遺伝子の塩基配列のＧ−Ｗ（Ｗは、Ａ若しくはＴ又はＵを示す。）を認識配列としている。したがって、本発明の化合物は次式（II）又は（III）
Ｗ−Ｗ−Ｖ （II）
Ｇ−Ｗ−Ｖ （III）
（式中、ＶはＡ又はＧ、ＷはＡ若しくはＴ又はＵを示す。）
の塩基配列を認識し、塩基Ｖ（Ａ又はＧ）の部分で遺伝子と共有結合を形成するものである。
【００２５】
しかしながら、本発明のアルキル化剤はこれらの塩基配列に制限されるものではなく、前述したように標的とする塩基配列を必要に応じて設計することができる。
【００２６】
また、前述したＲの部分において、さらにポリアミド結合を延ばすことにより、認識できる塩基配列をさらに延ばすことができる。
【００２７】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、例えば、第１図（第１図は、Ｒがアセチル基の場合を示す。）に示す方法で製造することができる。本発明の化合物のアルキル化部分は、デュオカルマイシンＢ２（Ｄｕｏ Ｂ２）を原料として第１図に示す方法により製造でき、これを別に製造されたピロールカルボン酸誘導体を用いてアシド化することにより製造される。より具体的な製造例を後述する実施例において例示する。
【００２８】
本発明の化合物のひとつであるＸが窒素原子でＲがアセチル基の化合物（以下、ＩＰＤｕという。）を用いて、８塩基の種々のオリゴヌクレオチドとの認識をした結果を第２図に示す。第２図に示す試験は、本発明の化合物ＩＰＤｕとディスタマイシンを使用したものであり、本発明の化合物を−●−○−△で示し、ディスタマイシンを＋）−◇−○−○−○で示している（図中では、○が灰色で示されている。）。そして、本発明の化合物の△印で示されている部分で遺伝子と共有結合をしている。
【００２９】
前述したように、ＩＰＤｕはＧ−Ｗ−Ｖ（式中、ＶはＡ又はＧ、ＷはＡ若しくはＴ又はＵを示す。）の塩基配列を認識するので、第２図中の４種のオリゴヌクレオチドのうち、Ｇ−Ｔ−Ｇの塩基配列を有するもの（第２図中の左側部分の２種）及びＧ−Ａ−Ｇの塩基配列を有するもの（第２図中の右下側のもの）は、その塩基配列を認識して効率よく共有結合するのに対して、前記した認識配列とは異なるＡ−Ｔ−Ｇの塩基配列を有するもの（第２図中の右上側のもの）はミスマッチとなり、反応が遅く、４６時間経過後も８％程度に過ぎない。このように、本発明の化合物が完全に配列を認識していることが判る。
【００３０】
第２図の左下側に示されるオリゴヌクレオチドが最もよくマッチしており、このものをエレクトロスプレー質量分析で分析した結果を第６図に示す。この質量分析のスペクトルチャートから、本発明の化合物がＤＮＡに共有結合していることが示された。
【００３１】
第３図は、前記同様に本発明のＸがＣＨでＲがアセチル基である化合物（以下、ＰＰＤｕという。）を用いて試験をした結果を示すものである。
【００３２】
前述したように、ＰＰＤｕはＷ−Ｗ−Ｖ（式中、ＶはＡ又はＧ、ＷはＡ若しくはＴ又はＵを示す。）の塩基配列を認識するので、第３図中の４種のオリゴヌクレオチドのうち、Ｔ−Ｔ−Ｇの塩基配列を有するもの（第３図中の下側部分の２種）及びＡ−Ｔ−Ｇの塩基配列を有するもの（第３図中の左上側のもの）は、その塩基配列を認識して効率よく共有結合するのに対して、前記した認識配列とは異なるＧ−Ｔ−Ｇの塩基配列を有するもの（第３図中の右上側のもの）はミスマッチとなり、反応が遅く、２２時間経過後も２６％程度に過ぎない。このように、本発明の化合物が完全に配列を認識していることが判る。
【００３３】
第４図は、同様の試験を長鎖のＤＮＡを用いて作った結果を示している。この試験に使用したＤＮＡの全塩基配列は配列表の配列番号２に示されている。
【００３４】
第４図の右側はＰＰＤｕを用いた結合を、左側はＩＰＤｕを用いた場合を示している。第４図の右側においては、部分配列がＷ−Ｗ−Ｇである箇所において本発明のＰＰＤｕによるアルキル化が生起していることが判った。また、第４図の左側においては、部分配列がＧ−Ｗ−Ｇである箇所において本発明のＰＰＤｕによるアルキル化が生起していることが判った。
【００３５】
なお、第４図の試験においては、ＩＰＤｕ又はＰＰＤｕの濃度を、４、８、１６、及び、３２μＭの４段階で行っている（各濃度においてディスタマイシン（Ｄｉｓｔ）の濃度をそれぞれ８、１６、３２、及び、６４μＭとした。）。
【００３６】
第５図は、本発明の化合物としてＰｙ−Ｐｙ−Ｐｙ−γ−Ｉｍ−Ｐｙ−Ｐｙ−Ｄｕを 用いて、４５０ｂｐ（Ｉ’ＤＮＡ（配列表の配列番号１に示す。））と４２６ｂｐ（Ｉ ＩＩ’ＤＮＡ（配列表の配列番号３に示す。））を用いて前記と同様な試験をした結果 を示すものである。
【００３７】
ＰＰＤｕの認識配列であるＷ−Ｗ−Ａの部分配列を有する部分においてアルキル化が生起しているスポットが観察できた。この試験においては、本発明の前記の化合物を濃度、０．２５、０．５、１．０、及び、２．０μＭの４段階で使用した。
【００３８】
以上の試験からも明らかなように、本発明の化合物は、遺伝子の特定の塩基配列の部分を特異的にアルキル化し、当該遺伝子の発現を阻害することができる。
【００３９】
即ち、本発明の化合物は、遺伝子の標的とする塩基配列の部分を特異的にアルキル化することができ、当該アルキル化により遺伝子の機能を阻害することにより、その発現を制御することができる。
【００４０】
第７図に本発明の好ましい化合物が例示されている。
【００４１】
また、本発明の化合物は、ピロールイミダゾール系のポリアミドであり、細胞透過性に優れており、生体へ通常の方法で投与することにより、標的の遺伝子を特異的に制御することができるものである。
【００４２】
したがって、本発明は、本発明の化合物を用いた遺伝子の特異的なアルキル化剤、それを用いた遺伝子の制御方法、及び、癌などの遺伝子に誘発される各種疾患を治療又は予防する医薬組成物を提供するものである。
【００４３】
【実施例】
次に本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００４４】
実施例１：ＸがＮでＲがアセチル基の化合物の製造
（１）アルキル化部（Ｄｕ）の製造
窒素雰囲気下、デュオカルマイシンＢ２の１２２ｍｇ（０．２０９ｍｍｏｌ）をメタノール１０ｍｌとアセトニトリル１０ｍｌの混合物に溶解し、０℃に冷却し、これに２８％ソディウムメトキサイドのメタノール溶液１２０μｌを滴下した。反応混合物を０℃で１１時間撹拌した後、３５ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５．３）を加えた。メタノールを留去し、食塩を加え、残渣を酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し濃縮した。濃縮物をカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：アセトン＝１：０〜３：１）で精製した。４４ｍｇの黄色の生成物を得た（収率７７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ；
6.06( s,br,1H), 5.71( s,1H), 5.01( s,br,1H), 3.79( m,1H),
3.71( s,3H), 3.66( d,J=11.0Hz,1H), 3.01( m,1H),
2.04( dd,J=3.7Hz,1H), 1.61( s,3H),
1.00( dd,J=3.7 and 4.9Hz,1H).
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ；
193.64, 176.55, 174.95, 168.32, 166.84, 108.82, 98.65, 71.14,
53.21, 51.90, 30.49, 24.39, 22.60, 20.98
ＦＡＢＭＳ ｍ／ｅ ２７５［Ｍ＋１］
【００４５】
（２）Ｉｍ−Ｐｙの製造
（ａ）窒素雰囲気下、４ｍｌの無水酢酸に、４−アミノ−Ｎ−メチル−イミダゾール−２−イル−カルボン酸エチルエステル塩酸塩３．０２５ｇ（１４．７ｍｍｏｌ）とピリジン１０ｍｌ及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）１５ｍｌの混合物を加えた。反応混合物を１時間室温で撹拌し、約１５ｍｌに濃縮した。１００ｍｌの水を加えた後、混合物を酢酸エチルで抽出した。抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、−３０℃に冷却して、目的のＮ−アセチル体２．６４ｇを得た（収率８５％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
10.55( s,1H), 7.47( s,1H), 4.25( q,J=7.0Hz,2H), 3.89( s,3H),
1.97( s,3H), 1.28( t,J=7.0Hz,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
167.00, 158.43, 137.58, 130.77, 114.62, 60.47, 35.32, 22.60,
14.02
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ９Ｈ１３Ｎ３Ｏ３ 計算値：２１１．０９５７
実測値：２１１．０９６０
【００４６】
（ｂ）前記の（ａ）で得られたアセチル体０．９５０ｇ（４．５０ｍｍｏｌ）を１６ｍｌのメタノール中にとり、２Ｎ−ＮａＯＨ１６ｍｌを加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。メタノールを留去し、残った水溶液を４℃に冷却し、１Ｎ−ＨＣｌをもちいてｐＨ２に調整した。沈殿物を集め水で洗浄し、乾燥して遊離カルボン酸０．７６３ｇを白色固体として得た（収率９３％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
10.45( s,1H), 7.43( s,1H), 3.87( s,3H), 1.97( s,3H)
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ７Ｈ９Ｎ３Ｏ３ 計算値：１８３．０６４４
実測値：１８３．０６６６
【００４７】
（ｃ）前記の（ｂ）で得られた遊離カルボン酸体０．５５１ｇ（３．０１ｍｍｏｌ）の３０ｍｌＤＭＦ溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）０．４８８ｇ（３．６１ｍｍｏｌ）とジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）０．７４４ｇ（３．６１ｍｍｏｌ）の混合物を加えた。混合物を室温で４０時間撹拌した後、メチル ４−アミノ−１−メチルピロール−２−カルボン酸エステル塩酸塩０．５７４ｇ（３．０１ｍｍｏｌ）とＤＭＦ１０ｍｌ及び１５ｍｌのＤＩＥＡの混合物を加えた。混合物を室温で４日間撹拌した。濾過して、ＤＭＦを留去し、２００ｍｌの酢酸エチルを加えた。濾過して沈殿物を除き、酢酸エチル溶液を１Ｎ塩酸で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、−３０℃に冷却して、目的のアミド−メチルエステル体０．５２２ｇを得た（収率５４％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
10.19( s,1H), 10.05( s,1H), 7.50( d,J=1.8Hz,1H), 7.40( s,1H),
6.68( d,J=1.8Hz,1H), 3.93( s,3H), 3.83( s,3H), 3.73( s,3H),
2.01( s,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
167.24, 160.73, 155.86, 136.15, 133.78, 121.99, 120.95, 118.78,
114.01, 108.69, 50.93, 36.23, 34.88, 22.69,
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ１４Ｈ１７Ｎ５Ｏ４ 計算値：３１９．１２８０
実測値：３１９．１２７７
【００４８】
（ｄ）前記の（ｃ）で得られたアミド−メチルエステル体０．５００ｇをメタノール１２．５ｍｌに溶解し、１２．５ｍｌの２Ｎ−ＮａＯＨを加えた。その溶液を室温で終夜撹拌した。メタノールを留去し、水２０ｍｌを加え濾過し、得られた水溶液を１Ｎ塩酸でｐＨ２に調整した。沈殿物を集め乾燥して、目的の遊離カルボン酸体０．４３９ｇを得た（収率９２％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
12.18( s,1H), 10.20( s,1H), 9.98( s,1H), 7.45( s,1H),
7.40( s,1H), 6.92( s,1H), 3.92( s,3H), 3.82( s,3H),
3.34( s,3H), 2.01( S,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
167.23, 161.86, 155.79, 136.15, 133.83, 121.69, 120.42, 119.82,
113.94, 108.74, 36.18, 34.88, 22.69,
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ１３Ｈ１５Ｎ５Ｏ４ 計算値：３０５．１１２４
実測値：３０５．１１２３
【００４９】
（ｅ）前記の（ｄ）で得られた遊離カルボン酸体０．１３５ｇ（０．４４ｍｍｏｌ）と１．１’−カルボニルジイミダゾール８４ｍｇを５ｍｌのＤＭＦに溶解した。室温で５時間撹拌した後、反応混合物を１００ｍｌの冷水に注いだ。沈殿物を集め、塩化メチレンで洗浄し、真空で乾燥し、目的の活性アミド体０．１０８ｇを得た（収率６９％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
10.18( s,2H), 8.24( s,1H), 7.79( s,1H), 7.68( s,1H),
7.43( s,1H), 7.13( s,1H), 7.10( d,J=1.9Hz,1H), 3.94( s,3H),
3.90( s,3H), 2.02( S,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
167.28, 156.76, 156.02, 137.76, 136.18, 133.50, 129.75, 124.42,
122.94, 119.90, 118.52, 114.34, 112.13, 36.32, 34.96, 22.70
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ１６Ｈ１７Ｎ７Ｏ３ 計算値：３５５．１３９３
実測値：３５５．１４０２
【００５０】
（３）アミド化
前記の（１）で得られた化合物１９．４ｍｇ（０．０７１ｍｍｏｌ）の０．５５ｍｌＤＭＦ溶液に、窒素雰囲気下、−４０℃で６０％水素化ナトリウム７．２ｍｇ（０．１８０ｍｍｏｌ）の０．５ｍｌＤＭＦ溶液を滴下した。混合物を−４０℃〜−２０℃で２．５時間撹拌した後、−５０℃に冷却し、前記（２）（ｅ）
で得られた活性アミド体４１．８ｍｇ（０．１１８ｍｍｏｌ）の１．０ｍｌＤＭＦ溶液を滴下した。反応混合物を−５０℃〜−３０℃で３時間撹拌した。冷たい０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）の２０ｍｌを添加した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、残渣をＴＬＣで酢酸エチルを用いて溶出して、目的のＩＰＤｕ１５．１ｍｇを得た（収率３４％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ；
8.68( s,1H), 7.68( s,br,1H), 7.33( s,1H), 7.31( s,1H),
6.51( d,,J=1.81Hz,1H), 6.43( s,1H), 6.10( s,br,1H),
4.20( dd,,J=5.5 and 4.9Hz,1H), 4.02( d,J=11.6Hz,1H),
3.98( s,3H), 3.78( s,3H), 3.67( s,3H), 2.86( m,1H),
2.21( dd,J=3.7Hz,1H), 2.10( s,3H), 1,59( s,3H),
1.24( t,J=4.3Hz,1H)
ＨＲＦＡＢＭＳ ｍ／ｅ ５６２．２０５４ ［Ｍ＋Ｈ］
（Ｃ２７Ｈ２８Ｎ７Ｏ７ とした計算値：５６２．２０５０）
【００５１】
実施例２：ＸがＣＨで、Ｒがアセチル基の化合物の製造
（１）Ｐｙ−Ｐｙの製造
（ａ）実施例１の（２）の（ａ）と同様にしてピロール誘導体を得た（収率９１％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ；
7.79( s,1H), 7.26( d,J=1.8Hz,1H), 6.60( d,J=1.8Hz,1H),
3.78( s,3H), 3.72( s,3H), 2.05( s,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
166.52, 160.70, 122.81, 120.28, 118.56, 107.58, 50.87, 36.06,
22.95
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ９Ｈ１２Ｎ２Ｏ３ 計算値：１９６．０８４８
実測値：１９６．０８３７
【００５２】
（ｂ）実施例１の（２）の（ｂ）と同様にしてピロール誘導体を得た（収率８４％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
9.80( s,1H), 7.24( d,J=1.8Hz,1H), 6.62( d,J=1.8Hz,1H),
3.77( s,3H), 1.93( s,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
166.49, 161.83, 122.53, 119.83, 119.57, 107.61, 36.06, 22.95
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ８Ｈ１０Ｎ２Ｏ３ 計算値：１８２．０６９１
実測値：１８２．０６８２
【００５３】
（ｃ）実施例１の（２）の（ｃ）と同様にしてピロール誘導体を得た（収率５１％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
9.87( s,1H), 9.80( s,1H), 7.43( d,J=2.0Hz,1H),
7.12( d,J=2.0Hz,1H), 6.88( d,J=2.0Hz,1H), 6.82( d,J=2.0Hz,1H),
3.82( s,3H), 3.80( s,3H), 3.72( s,3H), 1.95( s,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
166.42, 160.74, 158.36, 122.84, 122.45, 122.13, 120.70, 118.48
118.12, 108.36, 103.84, 50.87, 36.08, 36.00, 22.98
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ１５Ｈ１８Ｎ４Ｏ４ 計算値：３１８．１３２８
実測値：３１８．１３１０
【００５４】
（ｄ）実施例１の（２）の（ｄ）と同様にしてピロール誘導体を得た（収率８７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
9.83( s,1H), 9.79( s,1H), 7.39( d,J=2.0Hz,1H),
7.12( d,J=2.0Hz,1H), 6.82( dd,J=2.0 and 1.5Hz,2H),
3.80( s,6H), 1.96( s,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
166.42, 161.88, 158.33, 122.53(d), 122.12, 120.24, 119.47,
118.05, 108.36, 103.82, 36.04, 35.98, 23.00
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ１４Ｈ１６Ｎ５Ｏ４ 計算値：３０４．１１７１
実測値：３０４．１１６７
【００５５】
（ｅ）実施例１の（２）の（ｅ）と同様にしてピロール誘導体を得た（収率７４％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
9.98( s,1H), 9.80( s,1H), 8.25( s,1H), 7.75( d,J=1.5Hz,1H),
7.68( t,J=2.0 and 1.0Hz,1H), 7.13( t,J=2.0 and 1.0Hz,2H),
6.93( d,J=1.5Hz,1H), 6.88( d,J=1.5Hz,1H), 3.90( s,3H),
3.82( s,3H), 1.96( s,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
166.47, 158.46, 156.75, 137.70, 129.67, 124.32, 123.88, 122.25,
122.13, 119.68, 118.56, 118.40, 111.69, 104.04, 36.23, 36.10,
23.02
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ１７Ｈ１８Ｎ６Ｏ３ 計算値：３５４．１４４０
実測値：３５４．１４４２
【００５６】
（２）アミド化
実施例１の（３）と同様にしてピロール誘導体ＰＰＤｕを得た（収率２６％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ；
8.28( s,br,1H), 7.78( s,br,1H), 7.32( s,1H), 6.94( s,1H),
6.64( s,1H), 6.55( s,1H), 6.43( s,1H), 6.39( s,1H),
4.20( dd,J=5.5 and 4.9Hz,1H), 4.00( d,J=12.0Hz,1H),
3.81( s,3H), 3.76( s,3H), 3.70( s,3H), 2.90-2.86( m,1H),
2.21( dd,J=3.7Hz,1H), 2.03( s,3H), 1,23( s,3H),
0.86( t,J=4.3Hz,1H)
ＨＲＦＡＢＭＳ ｍ／ｅ ５６１．２０８９ ［Ｍ＋Ｈ］
（Ｃ２８Ｈ２９Ｎ６Ｏ７ とした計算値：５６１．２０９８）
【００５７】
実施例３：アルキル化の試験
ＤＮＡ８量体をＤＮＡ自動合成機で合成した。ＤＮＡオリゴヌクレオチドのアルキル化は次のようにして行った。本発明の化合物（０．１ｍＭ）、ディスタマイシンＡ（０．１ｍｍｏｌ）及びＤＮＡ８量体（１ｍＭ）を５０ｍＭの炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）に加え、０℃で種々の時間インキュベートした。反応をＨＰＬＣ（ケムコボンド ５−ＯＤＳ−Ｈ カラム）でモニターした。溶出液は０．０５Ｍギ酸アンモニウムと０〜５０％アセトニトリルのリニアな傾斜（０〜４０分）で、流量は１．０ｍｌ／分であった。２５４ｎｍで検出した。
本発明のＩＰＤｕを用いた場合の結果を第２図に示す。
本発明のＰＰＤｕを用いた場合の結果を第３図に示す。
【００５８】
実施例４：ＩＰＤｕ及びＰＰＤｕによる長鎖ＤＮＡのアルキル化の試験
５’−テキサス レッド−エンド−モディファイド ４５０ｂｐＤＮＡをＰＣＲ法により調製した。５’−テキサス レッド−エンド−モディファイドｐＵＣ１８の３７８〜３９５及びｐＵＣ１８の逆の１８６１〜１８８１を用いた。
実施例３と同様にしてアルキル化の試験をした。
結果を第４図及び第５図に示す。
【００５９】
【発明の効果】
本発明は、特定の塩基配列を特異的にアルキル化することができる化合物を提供する。本発明の化合物は、遺伝子中の標的とした塩基配列に選択的かつ特異的にアルキル化することができ、これにより当該塩基配列を有する遺伝子の発現を制御し、遺伝子が誘発する各種疾患の治療・予防などに有用である。
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】第１図は、本発明の化合物の製造方法を例示したものである。
【図２】第２図は、ＩＰＤｕ−Ｄｉｓｔによるアルキル化の反応性、ミスマッチのものは反応性が低い。
【図３】第３図は、ＰＰＤｕによるアルキル化の反応性、ミスマッチのものは反応性が低い。
【図４】第４図は、ＩＰＤｕ及びＰＰＤｕによるＤＮＡフラグメント（ＩＩ’）を用いた配列の認識を示す。
【図５】第５図は、ＩＰＤｕ及びＰＰＤｕによるＤＮＡフラグメント（Ｉ’）及び（ＩＩ’）を用いた配列の認識を示す。
【図６】第６図は、ＩＰＤｕ−Ｄｉｓｔ−８量体複合体のエレクトロスプレー質量分析によるスペクトルチャートを示す。
【図７】第７図は、本発明の化合物の好ましいものの例示である。
【発明の属する技術分野】
本発明は、遺伝子をアルキル化することができる化合物、その化合物を用いたアルキル化剤、そのアルキル化剤を用いて遺伝子の発現を制御する方法、及び、当該化合物を含有してなる医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
分子生物学の急速な進歩により、癌をはじめさまざまな疾病の原因がＤＮＡの変異であることが次つぎと明らかにされてきている。また、ヒューマンゲノムプロジェクトによりヒトＤＮＡの全塩基配列の決定も数年以内に完了するものとみられ、これら疾病の分子レベルの理解に基づいた治療法の出現がますます望まれてきている。しかし細胞の外から遺伝子の発現を制御する一般的な方法論が確立していないことが、このようなアプローチの実現の大きな壁になっている。最近、ディスタマイシンなどの抗生物質によるＤＮＡの分子認識をヒントとして、塩基配列特異的に結合する分子が設計され、遺伝子発現の制御が可能になってきた。
【０００３】
三日月型をしたディスタマイシン、ネトロプシンなどの抗生物質が、ＤＮＡのアデニン・チミン（Ａ・Ｔ）塩基対に富む配列のＡ−Ｔ間の水素結合のマイナーグループに結合することがＸ線結晶構造解析やＮＭＲにより明らかにされ、この認識を利用したさまざまな分子が合成されてきた。ピロール環をイミダゾールに変えることにより、グアニン・シトシン（Ｇ・Ｃ）塩基対を認識するように改変できることについては以前から予想されていたが（M.L,Kopka,C.Yoon,D.Goodsell,P.Pjura,R.E.Dickerson,Proc.Natl,Acad.Aci,USA,82,1376,(1985)) ; (J.W.Lown,K.Krowickl,U.G.Bhat,A.Skorobogaty,B.Ward,J.C.Dabrowiak,Biochemistry,25,7408(1986).)、実際にはそう単純ではなく、多くの混沌とした実験結果が得られていた。
【０００４】
Ｗｅｍｍｅｒらは、ディスタマイシンによるＤＮＡへの結合についてＮＭＲを用いて詳細に検討した。その結果、これまで１枚しか収容されないと考えられていたＤＮＡマイナーグループにディスタマイシンが２枚入りうることを示した（J.G.Pelton,D.E.Wemmer,Proc.Natl,Acad.Sci,USA,86,5723(1989).)。Ｄｅｒｖａｎらはこのような結合モードを考慮すると、いままでの混沌とした結果が説明できることに着目し、アンチパラレルに配向したメチルピロール（Ｐｙ）、メチルイミダゾール（Ｉｍ）ポリアミドのペアにより２本鎖ＤＮＡの塩基配列が認識できることを見いだした。
【０００５】
すなわち、Ｐｙ−ＩｍによりＣ−Ｇ塩基対が、Ｉｍ−ＰｙによりＧ−Ｃ塩基対が、Ｐｙ−ＰｙによりＡ−ＴまたはＴ−Ａ塩基対を認識するという一般則を導きだしたのである（S.White,E.E.Baird,P.B.Dervan,Chemistry&Biology,4,569(1997).)。ペアに共有結合を導入して、結合におけるエントロピー損失を防ぎ、より強い結合と認識能を得るためいろいろなヘアピンや環状のポリアミドが合成された。なかでもγリンカー(−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−）をもつヘアピンがすぐれた結合能と認識能をもつことが示され、そのＤＮＡとの複合体の構造も決定されている（R.P.L.de Clairac,B.H.Geierstanger,M.Marksich,P.B.Dervan,D.E.Wemmer,J.Am.Chem.Soc.,119,7909(1997).）。
【０００６】
また、ピロールイミダゾールのみでつくられるヘアピンポリアミドでは認識可能な配列は７塩基対が上限であるが（J.M.Turner,E.F.Baird,P.B.Dervan,ibid.,119,7636(1997).)、ホモダイマーを用いた系においてＡ・Ｔ配列を認識するβ−アラニン−ペアの導入で１１塩基対の認識も可能になっている（S.E.Swalley,E.E.Baird,D.B.Dervan,Chem.Enr.J,3,1600(1997)）。
【０００７】
さらに、Ｄｅｒｖａｎ、ＧｏｔｔｅｓｆｅｌｄらはＺｎフィンガータンパクであるＴＦＩＩＩＡの認識配列中の４番目のフィンガーの結合配列のマイナーグループに拮抗して結合するポリアミドを設計し５ＳＲＮＡの発現がｉｎ ｖｉｔｒｏの実験において選択的に制御されることを示した（J.M.Gottesfeld,L.Neely,J.W.Trauger,E.E.Baird,P.B.Dervan,Nature,387,202(1997).)。また、同時にｉｎ ｖｉｔｒｏの実験において、ポリアミドが核内に透過していることも示された。
【０００８】
近年、遺伝子の制御に関して、オリゴヌクレオチドやペプチド核酸（ＰＮＡ）などが注目されているが、細胞透過性が問題となっていることを考えると、これらメチルピロール-メチルイミダゾールポリアミドは遺伝子発現を制御する分子として、分子生物学の道具として、さらには医薬としても期待がもてる化合物であることが示されてきた。
【０００９】
従来のＰｙ−Ｉｍ系のポリアミドは、塩基対の水素結合のマイナーグループを認識するだけであり、遺伝子と共有結合するものではなかった。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、塩基対の水素結合のマイナーグループを認識すると共に、塩基と共有結合をし得る化合物を提供する。本発明の化合物は、特定の塩基配列を認識すると共に、隣接する塩基と共有結合により強固に結合し、当該塩基配列を有する遺伝子の発現を制御することができる。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明は、次式（Ｉ）
【００１２】
【化２】
（式中、Ｒは低級アシル基又はポリアミド基を示し、Ｘは窒素原子又はＣＨを示す。）
で表される化合物に関する。
【００１４】
また、本発明は、前記一般式（Ｉ）で表される化合物からなる遺伝子のアルキル化剤に関する。より詳細には、本発明のアルキル化剤は、遺伝子中の特異的な塩基配列、Ｗ−Ｗ−Ｖ（式中、ＶはＡ又はＧ、ＷはＡ若しくはＴ又はＵを示す。）又はＧ−Ｗ−Ｖ（式中、ＶはＡ又はＧ、ＷはＡ若しくはＴ又はＵを示す。）などの配列を認識して当該部分を選択的にアルキル化することができるものである。
【００１５】
さらに、本発明は、前記のアルキル化剤を用いて、遺伝子の特異的な塩基配列を包含する部分の発現を制御する方法に関する。
【００１６】
また、本発明は、前記一般式（Ｉ）で表される化合物を含有してなる、遺伝子により誘発され得る疾患を治療又は予防するための医薬組成物にも関する。
【００１７】
本発明の一般式（Ｉ）におけるＲの低級アシル基としては、カルボニル基の炭素原子を含めて炭素数１〜１２、好ましくは２〜６の低級アシル基であり、例えば、アセチル基、プロピオニル基、イソプロピオニル基、ブタノイル基などが挙げられるが、立体的に小さなもののほうが好ましい。
【００１８】
また、Ｒのポリアミド基としては、Ｎ−メチル−４−アミノ−２−カルボキシピロール（ＨＯ−Ｐｙ−Ｈ）、Ｎ−メチル−４−アミノ−２−カルボキシイミダゾール（ＨＯ−Ｉｍ−Ｈ）、Ｎ−メチル−４−アミノ−３−ヒドロキシ−２−カルボキシピロール（ＨＯ−Ｈｐ−Ｈ）、４−アミノ酪酸（ＨＯ−γ−Ｈ）（γ−リンカー用）などのアミノカルボン酸からなるポリアミドが挙げられる。これらのポリアミドのアミド基の窒素−水素結合の部位が、遺伝子の塩基を認識し、即ち、一般的にはＰｙ−ＩｍはＣ−Ｇ対を認識し、Ｉｍ−ＰｙはＧ−Ｃ対を認識し、Ｐｙ−ＰｙはＡ−Ｔ対又はＴ−Ａ対を認識することから、認識させたい塩基配列に応じて、前記ポリアミドを設計することができる。
【００１９】
Ｒにおけるポリアミドのアミド基は、遺伝子の塩基対の片側に対して５〜７個、好ましくは３個までのものが好ましく、それ以上のアミド基を有することもできるが、塩基配列に対する親和性の向上を期待することは難しい。好ましいポリアミド基としては、Ｎ−メチル−４−アセチルアミノ−イミダゾール−２−カルボニル基が挙げられる。
【００２０】
Ｒにおけるポリアミド基中のγ−アミノ酪酸部分は、γ−リンカーとして作用するものであり、この部分でポリアミド鎖がヘアピンカーブして、遺伝子の塩基対の対になっている塩基配列を認識することになる。
本発明の一般式（Ｉ）におけるＲのポリアミド基としては、次式
【化３】
で示されるものが好ましい。
【００２２】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物のアルキル化部分は、次式で示されるデュオカルマイシンＡ（DuocarmycinＡ）のアルキル化機構と同様な機構でアルキル化する。
【化４】
しかしながら、デュオカルマイシンＡのアルキル化はアデニン（Ａ）のプリン環でのみ生起するのに対して、本発明の化合物のアルキル化はアデニン（Ａ）又は（Ｇ）のいずれのプリン環においても生起する点で相違がある。
【００２４】
本発明の化合物のアミド結合に続くＰｙ−Ｐｙ−の部分は、遺伝子の塩基配列Ｗ−Ｗ（Ｗは、Ａ若しくはＴ又はＵを示す。）を認識配列とし、Ｉｍ−Ｐｙ−の部分は遺伝子の塩基配列のＧ−Ｗ（Ｗは、Ａ若しくはＴ又はＵを示す。）を認識配列としている。したがって、本発明の化合物は次式（II）又は（III）
Ｗ−Ｗ−Ｖ （II）
Ｇ−Ｗ−Ｖ （III）
（式中、ＶはＡ又はＧ、ＷはＡ若しくはＴ又はＵを示す。）
の塩基配列を認識し、塩基Ｖ（Ａ又はＧ）の部分で遺伝子と共有結合を形成するものである。
【００２５】
しかしながら、本発明のアルキル化剤はこれらの塩基配列に制限されるものではなく、前述したように標的とする塩基配列を必要に応じて設計することができる。
【００２６】
また、前述したＲの部分において、さらにポリアミド結合を延ばすことにより、認識できる塩基配列をさらに延ばすことができる。
【００２７】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、例えば、第１図（第１図は、Ｒがアセチル基の場合を示す。）に示す方法で製造することができる。本発明の化合物のアルキル化部分は、デュオカルマイシンＢ２（Ｄｕｏ Ｂ２）を原料として第１図に示す方法により製造でき、これを別に製造されたピロールカルボン酸誘導体を用いてアシド化することにより製造される。より具体的な製造例を後述する実施例において例示する。
【００２８】
本発明の化合物のひとつであるＸが窒素原子でＲがアセチル基の化合物（以下、ＩＰＤｕという。）を用いて、８塩基の種々のオリゴヌクレオチドとの認識をした結果を第２図に示す。第２図に示す試験は、本発明の化合物ＩＰＤｕとディスタマイシンを使用したものであり、本発明の化合物を−●−○−△で示し、ディスタマイシンを＋）−◇−○−○−○で示している（図中では、○が灰色で示されている。）。そして、本発明の化合物の△印で示されている部分で遺伝子と共有結合をしている。
【００２９】
前述したように、ＩＰＤｕはＧ−Ｗ−Ｖ（式中、ＶはＡ又はＧ、ＷはＡ若しくはＴ又はＵを示す。）の塩基配列を認識するので、第２図中の４種のオリゴヌクレオチドのうち、Ｇ−Ｔ−Ｇの塩基配列を有するもの（第２図中の左側部分の２種）及びＧ−Ａ−Ｇの塩基配列を有するもの（第２図中の右下側のもの）は、その塩基配列を認識して効率よく共有結合するのに対して、前記した認識配列とは異なるＡ−Ｔ−Ｇの塩基配列を有するもの（第２図中の右上側のもの）はミスマッチとなり、反応が遅く、４６時間経過後も８％程度に過ぎない。このように、本発明の化合物が完全に配列を認識していることが判る。
【００３０】
第２図の左下側に示されるオリゴヌクレオチドが最もよくマッチしており、このものをエレクトロスプレー質量分析で分析した結果を第６図に示す。この質量分析のスペクトルチャートから、本発明の化合物がＤＮＡに共有結合していることが示された。
【００３１】
第３図は、前記同様に本発明のＸがＣＨでＲがアセチル基である化合物（以下、ＰＰＤｕという。）を用いて試験をした結果を示すものである。
【００３２】
前述したように、ＰＰＤｕはＷ−Ｗ−Ｖ（式中、ＶはＡ又はＧ、ＷはＡ若しくはＴ又はＵを示す。）の塩基配列を認識するので、第３図中の４種のオリゴヌクレオチドのうち、Ｔ−Ｔ−Ｇの塩基配列を有するもの（第３図中の下側部分の２種）及びＡ−Ｔ−Ｇの塩基配列を有するもの（第３図中の左上側のもの）は、その塩基配列を認識して効率よく共有結合するのに対して、前記した認識配列とは異なるＧ−Ｔ−Ｇの塩基配列を有するもの（第３図中の右上側のもの）はミスマッチとなり、反応が遅く、２２時間経過後も２６％程度に過ぎない。このように、本発明の化合物が完全に配列を認識していることが判る。
【００３３】
第４図は、同様の試験を長鎖のＤＮＡを用いて作った結果を示している。この試験に使用したＤＮＡの全塩基配列は配列表の配列番号２に示されている。
【００３４】
第４図の右側はＰＰＤｕを用いた結合を、左側はＩＰＤｕを用いた場合を示している。第４図の右側においては、部分配列がＷ−Ｗ−Ｇである箇所において本発明のＰＰＤｕによるアルキル化が生起していることが判った。また、第４図の左側においては、部分配列がＧ−Ｗ−Ｇである箇所において本発明のＰＰＤｕによるアルキル化が生起していることが判った。
【００３５】
なお、第４図の試験においては、ＩＰＤｕ又はＰＰＤｕの濃度を、４、８、１６、及び、３２μＭの４段階で行っている（各濃度においてディスタマイシン（Ｄｉｓｔ）の濃度をそれぞれ８、１６、３２、及び、６４μＭとした。）。
【００３６】
第５図は、本発明の化合物としてＰｙ−Ｐｙ−Ｐｙ−γ−Ｉｍ−Ｐｙ−Ｐｙ−Ｄｕを 用いて、４５０ｂｐ（Ｉ’ＤＮＡ（配列表の配列番号１に示す。））と４２６ｂｐ（Ｉ ＩＩ’ＤＮＡ（配列表の配列番号３に示す。））を用いて前記と同様な試験をした結果 を示すものである。
【００３７】
ＰＰＤｕの認識配列であるＷ−Ｗ−Ａの部分配列を有する部分においてアルキル化が生起しているスポットが観察できた。この試験においては、本発明の前記の化合物を濃度、０．２５、０．５、１．０、及び、２．０μＭの４段階で使用した。
【００３８】
以上の試験からも明らかなように、本発明の化合物は、遺伝子の特定の塩基配列の部分を特異的にアルキル化し、当該遺伝子の発現を阻害することができる。
【００３９】
即ち、本発明の化合物は、遺伝子の標的とする塩基配列の部分を特異的にアルキル化することができ、当該アルキル化により遺伝子の機能を阻害することにより、その発現を制御することができる。
【００４０】
第７図に本発明の好ましい化合物が例示されている。
【００４１】
また、本発明の化合物は、ピロールイミダゾール系のポリアミドであり、細胞透過性に優れており、生体へ通常の方法で投与することにより、標的の遺伝子を特異的に制御することができるものである。
【００４２】
したがって、本発明は、本発明の化合物を用いた遺伝子の特異的なアルキル化剤、それを用いた遺伝子の制御方法、及び、癌などの遺伝子に誘発される各種疾患を治療又は予防する医薬組成物を提供するものである。
【００４３】
【実施例】
次に本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００４４】
実施例１：ＸがＮでＲがアセチル基の化合物の製造
（１）アルキル化部（Ｄｕ）の製造
窒素雰囲気下、デュオカルマイシンＢ２の１２２ｍｇ（０．２０９ｍｍｏｌ）をメタノール１０ｍｌとアセトニトリル１０ｍｌの混合物に溶解し、０℃に冷却し、これに２８％ソディウムメトキサイドのメタノール溶液１２０μｌを滴下した。反応混合物を０℃で１１時間撹拌した後、３５ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５．３）を加えた。メタノールを留去し、食塩を加え、残渣を酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し濃縮した。濃縮物をカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：アセトン＝１：０〜３：１）で精製した。４４ｍｇの黄色の生成物を得た（収率７７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ；
6.06( s,br,1H), 5.71( s,1H), 5.01( s,br,1H), 3.79( m,1H),
3.71( s,3H), 3.66( d,J=11.0Hz,1H), 3.01( m,1H),
2.04( dd,J=3.7Hz,1H), 1.61( s,3H),
1.00( dd,J=3.7 and 4.9Hz,1H).
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ；
193.64, 176.55, 174.95, 168.32, 166.84, 108.82, 98.65, 71.14,
53.21, 51.90, 30.49, 24.39, 22.60, 20.98
ＦＡＢＭＳ ｍ／ｅ ２７５［Ｍ＋１］
【００４５】
（２）Ｉｍ−Ｐｙの製造
（ａ）窒素雰囲気下、４ｍｌの無水酢酸に、４−アミノ−Ｎ−メチル−イミダゾール−２−イル−カルボン酸エチルエステル塩酸塩３．０２５ｇ（１４．７ｍｍｏｌ）とピリジン１０ｍｌ及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）１５ｍｌの混合物を加えた。反応混合物を１時間室温で撹拌し、約１５ｍｌに濃縮した。１００ｍｌの水を加えた後、混合物を酢酸エチルで抽出した。抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、−３０℃に冷却して、目的のＮ−アセチル体２．６４ｇを得た（収率８５％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
10.55( s,1H), 7.47( s,1H), 4.25( q,J=7.0Hz,2H), 3.89( s,3H),
1.97( s,3H), 1.28( t,J=7.0Hz,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
167.00, 158.43, 137.58, 130.77, 114.62, 60.47, 35.32, 22.60,
14.02
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ９Ｈ１３Ｎ３Ｏ３ 計算値：２１１．０９５７
実測値：２１１．０９６０
【００４６】
（ｂ）前記の（ａ）で得られたアセチル体０．９５０ｇ（４．５０ｍｍｏｌ）を１６ｍｌのメタノール中にとり、２Ｎ−ＮａＯＨ１６ｍｌを加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。メタノールを留去し、残った水溶液を４℃に冷却し、１Ｎ−ＨＣｌをもちいてｐＨ２に調整した。沈殿物を集め水で洗浄し、乾燥して遊離カルボン酸０．７６３ｇを白色固体として得た（収率９３％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
10.45( s,1H), 7.43( s,1H), 3.87( s,3H), 1.97( s,3H)
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ７Ｈ９Ｎ３Ｏ３ 計算値：１８３．０６４４
実測値：１８３．０６６６
【００４７】
（ｃ）前記の（ｂ）で得られた遊離カルボン酸体０．５５１ｇ（３．０１ｍｍｏｌ）の３０ｍｌＤＭＦ溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）０．４８８ｇ（３．６１ｍｍｏｌ）とジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）０．７４４ｇ（３．６１ｍｍｏｌ）の混合物を加えた。混合物を室温で４０時間撹拌した後、メチル ４−アミノ−１−メチルピロール−２−カルボン酸エステル塩酸塩０．５７４ｇ（３．０１ｍｍｏｌ）とＤＭＦ１０ｍｌ及び１５ｍｌのＤＩＥＡの混合物を加えた。混合物を室温で４日間撹拌した。濾過して、ＤＭＦを留去し、２００ｍｌの酢酸エチルを加えた。濾過して沈殿物を除き、酢酸エチル溶液を１Ｎ塩酸で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、−３０℃に冷却して、目的のアミド−メチルエステル体０．５２２ｇを得た（収率５４％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
10.19( s,1H), 10.05( s,1H), 7.50( d,J=1.8Hz,1H), 7.40( s,1H),
6.68( d,J=1.8Hz,1H), 3.93( s,3H), 3.83( s,3H), 3.73( s,3H),
2.01( s,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
167.24, 160.73, 155.86, 136.15, 133.78, 121.99, 120.95, 118.78,
114.01, 108.69, 50.93, 36.23, 34.88, 22.69,
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ１４Ｈ１７Ｎ５Ｏ４ 計算値：３１９．１２８０
実測値：３１９．１２７７
【００４８】
（ｄ）前記の（ｃ）で得られたアミド−メチルエステル体０．５００ｇをメタノール１２．５ｍｌに溶解し、１２．５ｍｌの２Ｎ−ＮａＯＨを加えた。その溶液を室温で終夜撹拌した。メタノールを留去し、水２０ｍｌを加え濾過し、得られた水溶液を１Ｎ塩酸でｐＨ２に調整した。沈殿物を集め乾燥して、目的の遊離カルボン酸体０．４３９ｇを得た（収率９２％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
12.18( s,1H), 10.20( s,1H), 9.98( s,1H), 7.45( s,1H),
7.40( s,1H), 6.92( s,1H), 3.92( s,3H), 3.82( s,3H),
3.34( s,3H), 2.01( S,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
167.23, 161.86, 155.79, 136.15, 133.83, 121.69, 120.42, 119.82,
113.94, 108.74, 36.18, 34.88, 22.69,
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ１３Ｈ１５Ｎ５Ｏ４ 計算値：３０５．１１２４
実測値：３０５．１１２３
【００４９】
（ｅ）前記の（ｄ）で得られた遊離カルボン酸体０．１３５ｇ（０．４４ｍｍｏｌ）と１．１’−カルボニルジイミダゾール８４ｍｇを５ｍｌのＤＭＦに溶解した。室温で５時間撹拌した後、反応混合物を１００ｍｌの冷水に注いだ。沈殿物を集め、塩化メチレンで洗浄し、真空で乾燥し、目的の活性アミド体０．１０８ｇを得た（収率６９％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
10.18( s,2H), 8.24( s,1H), 7.79( s,1H), 7.68( s,1H),
7.43( s,1H), 7.13( s,1H), 7.10( d,J=1.9Hz,1H), 3.94( s,3H),
3.90( s,3H), 2.02( S,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
167.28, 156.76, 156.02, 137.76, 136.18, 133.50, 129.75, 124.42,
122.94, 119.90, 118.52, 114.34, 112.13, 36.32, 34.96, 22.70
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ１６Ｈ１７Ｎ７Ｏ３ 計算値：３５５．１３９３
実測値：３５５．１４０２
【００５０】
（３）アミド化
前記の（１）で得られた化合物１９．４ｍｇ（０．０７１ｍｍｏｌ）の０．５５ｍｌＤＭＦ溶液に、窒素雰囲気下、−４０℃で６０％水素化ナトリウム７．２ｍｇ（０．１８０ｍｍｏｌ）の０．５ｍｌＤＭＦ溶液を滴下した。混合物を−４０℃〜−２０℃で２．５時間撹拌した後、−５０℃に冷却し、前記（２）（ｅ）
で得られた活性アミド体４１．８ｍｇ（０．１１８ｍｍｏｌ）の１．０ｍｌＤＭＦ溶液を滴下した。反応混合物を−５０℃〜−３０℃で３時間撹拌した。冷たい０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）の２０ｍｌを添加した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、残渣をＴＬＣで酢酸エチルを用いて溶出して、目的のＩＰＤｕ１５．１ｍｇを得た（収率３４％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ；
8.68( s,1H), 7.68( s,br,1H), 7.33( s,1H), 7.31( s,1H),
6.51( d,,J=1.81Hz,1H), 6.43( s,1H), 6.10( s,br,1H),
4.20( dd,,J=5.5 and 4.9Hz,1H), 4.02( d,J=11.6Hz,1H),
3.98( s,3H), 3.78( s,3H), 3.67( s,3H), 2.86( m,1H),
2.21( dd,J=3.7Hz,1H), 2.10( s,3H), 1,59( s,3H),
1.24( t,J=4.3Hz,1H)
ＨＲＦＡＢＭＳ ｍ／ｅ ５６２．２０５４ ［Ｍ＋Ｈ］
（Ｃ２７Ｈ２８Ｎ７Ｏ７ とした計算値：５６２．２０５０）
【００５１】
実施例２：ＸがＣＨで、Ｒがアセチル基の化合物の製造
（１）Ｐｙ−Ｐｙの製造
（ａ）実施例１の（２）の（ａ）と同様にしてピロール誘導体を得た（収率９１％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ；
7.79( s,1H), 7.26( d,J=1.8Hz,1H), 6.60( d,J=1.8Hz,1H),
3.78( s,3H), 3.72( s,3H), 2.05( s,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
166.52, 160.70, 122.81, 120.28, 118.56, 107.58, 50.87, 36.06,
22.95
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ９Ｈ１２Ｎ２Ｏ３ 計算値：１９６．０８４８
実測値：１９６．０８３７
【００５２】
（ｂ）実施例１の（２）の（ｂ）と同様にしてピロール誘導体を得た（収率８４％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
9.80( s,1H), 7.24( d,J=1.8Hz,1H), 6.62( d,J=1.8Hz,1H),
3.77( s,3H), 1.93( s,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
166.49, 161.83, 122.53, 119.83, 119.57, 107.61, 36.06, 22.95
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ８Ｈ１０Ｎ２Ｏ３ 計算値：１８２．０６９１
実測値：１８２．０６８２
【００５３】
（ｃ）実施例１の（２）の（ｃ）と同様にしてピロール誘導体を得た（収率５１％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
9.87( s,1H), 9.80( s,1H), 7.43( d,J=2.0Hz,1H),
7.12( d,J=2.0Hz,1H), 6.88( d,J=2.0Hz,1H), 6.82( d,J=2.0Hz,1H),
3.82( s,3H), 3.80( s,3H), 3.72( s,3H), 1.95( s,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
166.42, 160.74, 158.36, 122.84, 122.45, 122.13, 120.70, 118.48
118.12, 108.36, 103.84, 50.87, 36.08, 36.00, 22.98
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ１５Ｈ１８Ｎ４Ｏ４ 計算値：３１８．１３２８
実測値：３１８．１３１０
【００５４】
（ｄ）実施例１の（２）の（ｄ）と同様にしてピロール誘導体を得た（収率８７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
9.83( s,1H), 9.79( s,1H), 7.39( d,J=2.0Hz,1H),
7.12( d,J=2.0Hz,1H), 6.82( dd,J=2.0 and 1.5Hz,2H),
3.80( s,6H), 1.96( s,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
166.42, 161.88, 158.33, 122.53(d), 122.12, 120.24, 119.47,
118.05, 108.36, 103.82, 36.04, 35.98, 23.00
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ１４Ｈ１６Ｎ５Ｏ４ 計算値：３０４．１１７１
実測値：３０４．１１６７
【００５５】
（ｅ）実施例１の（２）の（ｅ）と同様にしてピロール誘導体を得た（収率７４％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
9.98( s,1H), 9.80( s,1H), 8.25( s,1H), 7.75( d,J=1.5Hz,1H),
7.68( t,J=2.0 and 1.0Hz,1H), 7.13( t,J=2.0 and 1.0Hz,2H),
6.93( d,J=1.5Hz,1H), 6.88( d,J=1.5Hz,1H), 3.90( s,3H),
3.82( s,3H), 1.96( s,3H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６） δ；
166.47, 158.46, 156.75, 137.70, 129.67, 124.32, 123.88, 122.25,
122.13, 119.68, 118.56, 118.40, 111.69, 104.04, 36.23, 36.10,
23.02
ＨＲＥＩＭＳ ｍ／ｅ Ｃ１７Ｈ１８Ｎ６Ｏ３ 計算値：３５４．１４４０
実測値：３５４．１４４２
【００５６】
（２）アミド化
実施例１の（３）と同様にしてピロール誘導体ＰＰＤｕを得た（収率２６％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） δ；
8.28( s,br,1H), 7.78( s,br,1H), 7.32( s,1H), 6.94( s,1H),
6.64( s,1H), 6.55( s,1H), 6.43( s,1H), 6.39( s,1H),
4.20( dd,J=5.5 and 4.9Hz,1H), 4.00( d,J=12.0Hz,1H),
3.81( s,3H), 3.76( s,3H), 3.70( s,3H), 2.90-2.86( m,1H),
2.21( dd,J=3.7Hz,1H), 2.03( s,3H), 1,23( s,3H),
0.86( t,J=4.3Hz,1H)
ＨＲＦＡＢＭＳ ｍ／ｅ ５６１．２０８９ ［Ｍ＋Ｈ］
（Ｃ２８Ｈ２９Ｎ６Ｏ７ とした計算値：５６１．２０９８）
【００５７】
実施例３：アルキル化の試験
ＤＮＡ８量体をＤＮＡ自動合成機で合成した。ＤＮＡオリゴヌクレオチドのアルキル化は次のようにして行った。本発明の化合物（０．１ｍＭ）、ディスタマイシンＡ（０．１ｍｍｏｌ）及びＤＮＡ８量体（１ｍＭ）を５０ｍＭの炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）に加え、０℃で種々の時間インキュベートした。反応をＨＰＬＣ（ケムコボンド ５−ＯＤＳ−Ｈ カラム）でモニターした。溶出液は０．０５Ｍギ酸アンモニウムと０〜５０％アセトニトリルのリニアな傾斜（０〜４０分）で、流量は１．０ｍｌ／分であった。２５４ｎｍで検出した。
本発明のＩＰＤｕを用いた場合の結果を第２図に示す。
本発明のＰＰＤｕを用いた場合の結果を第３図に示す。
【００５８】
実施例４：ＩＰＤｕ及びＰＰＤｕによる長鎖ＤＮＡのアルキル化の試験
５’−テキサス レッド−エンド−モディファイド ４５０ｂｐＤＮＡをＰＣＲ法により調製した。５’−テキサス レッド−エンド−モディファイドｐＵＣ１８の３７８〜３９５及びｐＵＣ１８の逆の１８６１〜１８８１を用いた。
実施例３と同様にしてアルキル化の試験をした。
結果を第４図及び第５図に示す。
【００５９】
【発明の効果】
本発明は、特定の塩基配列を特異的にアルキル化することができる化合物を提供する。本発明の化合物は、遺伝子中の標的とした塩基配列に選択的かつ特異的にアルキル化することができ、これにより当該塩基配列を有する遺伝子の発現を制御し、遺伝子が誘発する各種疾患の治療・予防などに有用である。
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】第１図は、本発明の化合物の製造方法を例示したものである。
【図２】第２図は、ＩＰＤｕ−Ｄｉｓｔによるアルキル化の反応性、ミスマッチのものは反応性が低い。
【図３】第３図は、ＰＰＤｕによるアルキル化の反応性、ミスマッチのものは反応性が低い。
【図４】第４図は、ＩＰＤｕ及びＰＰＤｕによるＤＮＡフラグメント（ＩＩ’）を用いた配列の認識を示す。
【図５】第５図は、ＩＰＤｕ及びＰＰＤｕによるＤＮＡフラグメント（Ｉ’）及び（ＩＩ’）を用いた配列の認識を示す。
【図６】第６図は、ＩＰＤｕ−Ｄｉｓｔ−８量体複合体のエレクトロスプレー質量分析によるスペクトルチャートを示す。
【図７】第７図は、本発明の化合物の好ましいものの例示である。
Claims (9)
- 次式（Ｉ）
で表される化合物。 - Ｒがアセチル基である請求項１に記載の化合物。
- ＲがＮ−メチル−４−アミノ−２−カルボキシピロール及び／又はＮ−メチル−４−アミノ−２−カルボキシイミダゾールからなるポリアミド基である請求項１に記載の化合物。
- Ｒが、４−アミノ酪酸（γ−リンカー（−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−））を含有するポリアミド基である請求項１に記載の化合物。
- 請求項１〜４のいずれかに記載の化合物からなる遺伝子のアルキル化剤。
- アルキル化のために認識される塩基配列が、式（Ｉ）におけるＸがＣＨの場合にＷ−Ｗ−Ｖ（式中、ＶはＡ又はＧ、ＷはＡ若しくはＴ又はＵを示す。）であり、又は式（Ｉ）におけるＸが窒素原子の場合にＧ−Ｗ−Ｖ（式中、ＶはＡ又はＧ、ＷはＡ若しくはＴ又はＵを示す。）である請求項５に記載のアルキル化剤。
- さらに、ディスタマイシンと組み合わせて使用されることを特徴とする請求項５又は６に記載のアルキル化剤。
- 請求項１〜４のいずれかに記載の化合物を含有してなる、癌を治療又は予防するための医薬組成物。
- 請求項１〜４のいずれかに記載の化合物からなるアルキル化剤により、癌遺伝子の発現を制御することによるものである請求項８に記載の医薬組成物。
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| JP4061819B2 (ja) | 2000-05-12 | 2008-03-19 | 独立行政法人科学技術振興機構 | インターストランドクロスリンク剤の合成方法 |
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| MXPA03011094A (es) * | 2001-05-31 | 2004-12-06 | Medarex Inc | Citotoxinas, profarmacos, ligadores, y estabilizadores utiles para ello. |
| CA2450773C (en) * | 2001-06-25 | 2010-08-31 | Japan Science And Technology Agency | Method of the solid phase synthesis of pyrrole-imidazole polyamide |
| JP3898532B2 (ja) | 2002-03-08 | 2007-03-28 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 新規なヘアピン型ポリアミド |
| US7807844B2 (en) | 2003-09-04 | 2010-10-05 | Nihon University | TGF-β gene expression inhibitor |
| EP1731519A4 (en) * | 2004-03-13 | 2008-10-15 | Tmrc Co Ltd | NOVEL INDOLE DERIVATIVE SERVING ALKYLER A DNA-BASED BASE SEQUENCE AND ALKYLING AGENT AND MEDICAMENT COMPRISING EACH OF THE SAME |
| WO2005112919A2 (en) * | 2004-05-19 | 2005-12-01 | Medarex, Inc. | Self-immolative linkers and drug conjugates |
| RU2402548C2 (ru) * | 2004-05-19 | 2010-10-27 | Медарекс, Инк. | Химические линкеры и их конъюгаты |
| JP2007176795A (ja) | 2004-08-18 | 2007-07-12 | Univ Nihon | ＴＧＦ−β遺伝子発現抑制剤 |
| ES2386366T3 (es) * | 2005-02-18 | 2012-08-17 | Medarex, Inc. | Anticuerpo monoclonal humano contra el antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA) |
| US7714016B2 (en) * | 2005-04-08 | 2010-05-11 | Medarex, Inc. | Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates |
| EA016577B1 (ru) * | 2005-09-26 | 2012-06-29 | Медарекс, Инк. | Конъюгаты антитело-лекарство и их применение |
| EA015324B1 (ru) | 2005-10-26 | 2011-06-30 | Медарекс, Инк. | Способы и соединения для получения аналогов сс-1065 |
| WO2007059404A2 (en) | 2005-11-10 | 2007-05-24 | Medarex, Inc. | Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates |
| TWI412367B (zh) | 2006-12-28 | 2013-10-21 | Medarex Llc | 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物 |
| TW200900059A (en) | 2007-02-21 | 2009-01-01 | Medarex Inc | Chemical linkers with single amino acids and conjugates thereof |
| JP5685081B2 (ja) * | 2008-04-17 | 2015-03-18 | 浩喜 永瀬 | マトリックスメタロプロテネース９遺伝子選択的発現抑制剤 |
| JP4873510B2 (ja) * | 2008-07-01 | 2012-02-08 | 学校法人日本大学 | 標的遺伝子特異的ヒストン修飾制御剤 |
| CN104220442B (zh) * | 2012-04-05 | 2016-11-23 | 内尔维阿诺医学科学有限公司 | 烷化剂 |
| ES2701076T3 (es) | 2012-11-24 | 2019-02-20 | Hangzhou Dac Biotech Co Ltd | Enlazadores hidrofílicos y sus usos para la conjugación de fármacos a las moléculas que se unen a las células |
| WO2015044003A1 (en) * | 2013-09-25 | 2015-04-02 | Nerviano Medical Sciences S.R.L. | THIENO[2,3-e]INDOLE DERIVATIVES AS NEW ANTITUMOR AGENTS |
| US10464955B2 (en) | 2014-02-28 | 2019-11-05 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Charged linkers and their uses for conjugation |
| CA2991973C (en) | 2015-07-12 | 2021-12-07 | Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. | Bridge linkers for conjugation of a cell-binding molecule |
| US9839687B2 (en) | 2015-07-15 | 2017-12-12 | Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. | Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule |
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