JP2001500387A - ペプチド核酸のモノマー及びオリゴマー - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 新規なペプチド核酸（ＰＮＡ）オリゴマー及びその構成モノマーが開示される。このＰＮＡオリゴマー及び結合したＰＮＡは核酸と三重鎖構造を形成し、天然に存在するヌクレオベースに比較して、核酸標的のチミジンに対して高い特異性を示す。

Description

【発明の詳細な説明】 ペプチド核酸のモノマー及びオリゴマー 関連出願への相互参照 本出願は、１９９７年５月２３日に出願された米国特許出願第０８／８６２， ６２９号の一部継続出願であり、この出願の開示はそのまま参照により本明細書 中に組み込まれるものとする。 発明の分野 本発明は、オリゴマー化合物とその構成モノマー、特にペプチド核酸（ＰＮＡ ）のオリゴマー及びモノマーに向けられている。ペプチド核酸オリゴマーは、高 められた結合特異性で核酸を有する三重らせん（三重鎖）構造を形成をするのに 有用である。本発明の１つの側面では、新規なＰＮＡオリゴマーが三重鎖構造に おいてチミジン及びデオキシウリジンに対する特異性を高めた。 発明の背景 ペプチド核酸は、ＤＮＡとＲＮＡの両方に結合する点で、オリゴヌクレオチド の有用な代用物である（Egholmら、Nature 1993，365，566‐568及びその引用 文献を参照のこと）。 ＰＮＡは、ＤＮＡとＲＮＡの両方に結合し、ＰＮＡ／ＤＮＡ又はＰＮＡ／ＲＮ Ａの二重鎖を形成する。得られたＰＮＡ／ＤＮＡ又はＰＮＡ／ＲＮＡの二重鎖は 、そのより高い融解温度（Ｔｍ）によって証明されるように、対応するＤＮＡ／ ＤＮＡ又はＤＮＡ／ＲＮＡの二重鎖より強い親和性で結合している。このより高 い熱安定性は、ＤＮＡ又はＲＮＡの二重鎖に存在している電荷反発に遭わないＰ ＮＡ骨格の中性が原因とされている。ＰＮＡの中性的な骨格は、ＰＮＡ／ＤＮＡ （ＲＮＡ）二重鎖のＴｍを塩濃度から独立させもする。従って、ＰＮＡ／ＤＮＡ 二重鎖は、イオン強度に強く依存しているＤＮＡ／ＤＮＡ二重鎖の相互作用を上 回る更なる利点を提供する。ホモピリミジンＰＮＡは、相補的なＤＮＡ又はＲＮ Ａと 結合し、熱安定性が高い（ＰＮＡ）₂／ＤＮＡ（ＲＮＡ）三重鎖を形成すること が示されている（例えば、Nielsenら、Science 1991，254，1497；Egholmら、J ．Am．Chem．Soc.，1992，114，1895；Egholmら、J．Am．Chem．Soc.，1992，11 4，9677を参照のこと）。 親和性が高まるだけでなく、ＰＮＡは高められた特異性でＤＮＡと結合するこ とも示されている。ＰＮＡ／ＤＮＡ二重鎖のミスマッチが融解するときは、ＤＮ Ａ／ＤＮＡ二重鎖に比較してＴｍの８〜２０℃の低下が見られる。これほど大き いＴｍの低下は、１つのミスマッチが存在する対応するＤＮＡ／ＤＮＡ二重鎖で は見られない。Egholm，M．ら、Nature 1993，365，p.566を参照のこと。 ＤＮＡ又はＲＮＡ鎖へのＰＮＡ鎖の結合は、２つの方向の１つで起こり得る。 ５'から３'への方向のＤＮＡ又はＲＮＡ鎖が、ＰＮＡのカルボキシル末端がその ＤＮＡ又はＲＮＡの５'末端の方に向けられ、ＰＮＡのアミノ末端がそのＤＮＡ 又はＲＮＡの３'末端の方に向けられるようにして相補的なＰＮＡ鎖と結合する とき、その方向は逆平行であると言われる。平行な方向では、ＰＮＡのカルボキ シル末端及びアミノ末端は、ＤＮＡ又はＲＮＡの５'−３'方向に関して逆の配向 になる。 その特質のために、ＰＮＡはいくつかの異なる応用分野で有用であることが知 られている。特に、ＰＮＡは相補的なＲＮＡ又はＤＮＡと二重鎖及び三重鎖を形 成するために使用されている（例えば、Knudsenら、Nucleic Acids Res.，199 6，24，494-500；及びNielsenら、J.Am．Chem．Soc.，1996，118，2287-2288を 参照のこと）。さらに、いくつかの論説がこの分野で最近公表されている。例え ば、Hyrupら、Bioorganic & Med．Chem.，1996，4，5-23；Nielsen、“ペプチ ド核酸（ＰＮＡ）：遺伝子治療薬のリード”Trainor（編）、Perspectives Dru g Disc．Des.，1996，4，76-84を参照のこと。 ＰＮＡはオリゴヌクレオチドよりも強い結合性及び高い特異性を有しているの で、クローニング、ブロット法及び蛍光in situハイブリダイゼーション（ＦＩ ＳＨ）のような応用分野のプローブとして大変有用である。ホモピリミジンＰＮ Ａは、ホモプリンの標的における鎖置換のために使用されている。局所的な三重 鎖は遺伝子の転写を阻害する。さらに、Ｄループに重複するか又は隣接する制 限部位は制限酵素によって開裂されない。ＤＮＡフラグメント内の特定の制限部 位にＰＮＡが結合すると、その部位での開裂を阻害し得る。そのような阻害はク ローニング及びサブクローニング法において有用である。標識化されたＰＮＡは 、蛍光又は他のタイプの検出可能なラベルを有するＰＮＡ分子を、二重鎖ＤＮＡ 中の相補配列と鎖侵入（strand invasion）を用いてハイブリダイズさせること によって、ＤＮＡ分子を直接マップするために使用されもする。 ＰＮＡは、ＰＣＲベースアッセイ法（ＰＣＲクランピング）において点突然変 異を検出するためにも使用されている。ＰＣＲクランピングでは、ＰＣＲベース アッセイにおける点突然変異の検出、例えば研究下のＤＮＡセグメントにおける 通常の野生型対立遺伝子と突然変異対立遺伝子との相違点を検出するために、Ｐ ＮＡが使用される。典型的には、野生型の配列に相補的なＰＮＡオリゴマーを合 成し、その１つが突然変異体の配列に相補的である２種のＤＮＡプライマーを有 するＰＣＲ反応混合物に含ませる。野生型ＰＮＡオリゴマーとＤＮＡプライマー は標的に対するハイブリダイゼーションを競合する。ＤＮＡプライマーのハイブ リダイゼーションとそれに続く増幅が起こるのは、この標的が突然変異対立遺伝 子である場合だけである。この方法を用いれば、突然変異体の存在及び正確なア イデンティティーを決定し得る。 相補的なＤＮＡ及びＲＮＡ鎖に結合するオリゴヌクレオチド及びオリゴヌクレ オチド類似体を診断薬、研究用試薬及び潜在的な治療薬として応用することにか なりの研究が向けられている。多くの使用のために、オリゴヌクレオチド及びオ リゴヌクレオチド類似体は、活性を発現するためには細胞膜を越えて輸送され、 細胞に取込まれなければならない。 ＰＣＴ／ＥＰ／０１２１９は、対応するＤＮＡよりも強く相補的なＤＮＡ及び ＲＮＡと結合する新規なペプチド核酸（ＰＮＡ）化合物を記載している。その活 性又はその膜又は細胞の輸送をモジュレートするか又は別のやり方で影響を及ぼ す基を、これら化合物に追加することが望まれている。そのような輸送を高める ための１つの方法は、ペンダント親油性基を結合することによる。 前もって形成されたモノマーを経るペプチド核酸の合成が、国際特許出願ＷＯ ９２／２０７０２号及びＷＯ９２／２０７０３号に記載されている。なお、いず れの内容もそのまま参照により本明細書中に組み込まれるものとする。また、Ｐ ＮＡの合成、構造、生物学的性質及び使用に関する最近の進歩が報告されている 。例えば、ＷＯ９３／１２１２９号及びCook等への米国特許第５，５３９，０８ ３号、Egholmら、Nature 1993，365，566‐568，Nielsenら、Science，1991，2 54，1497‐1500；及びEgholmら、J．Am．Chem．Soc.，1992，114，1895‐1897を 参照のこと。ペプチド核酸が二本鎖ＤＮＡの鎖置換に効果があることも示されて いる（Patel，D．J.、Nature，1993，365，490‐492を参照のこと）。上記の特 許及び公表物はそのまま参照により本明細書中に組み込まれるものとする。 オリゴヌクレオチドによる三重らせんの形成は、二本鎖デオキシリボ核酸（Ｄ ＮＡ）の配列特異的な開裂がMoserら、Science，1987，238，645‐650によって 証明されて以来、熱心な研究分野になっている。三重鎖形成オリゴヌクレオチド が遺伝子治療、診断用プローブ及び他の生物医学的な応用において潜在的な用途 があると考えられている。例えば、Uhlmannら、Chemical Reviews，1990，90， 543‐584を参照のこと。 ピリミジンオリゴヌクレオチドは、二本鎖ＤＮＡにおけるホモプリンの標的へ の結合を介して三重らせん構造を形成することが分かっている。これらの構造で は、その新しいピリミジン鎖は、ＤＮＡの主溝においてプリンのワトソン−クリ ック型の鎖に対して平行に配向し、配列特異的なHoogsteen型の水素結合を介し て結合する。この配列特異性は、アデニンを認識するチミン（Ｔ：Ａ−Ｔ）及び グアニンを認識するプロトン化シトシン（Ｃ⁺：Ｇ−Ｃ）に由来する（Bestら、J ．Am．Chem．Soc.，1995，117，1187‐1193を参照のこと）。あまりよく研究さ れていない三重鎖モチーフでは、プリンリッチなオリゴヌクレオチドが二本鎖Ｄ ＮＡのプリン標的に結合する。このモチーフの第三の鎖の方向は、プリンのワト ソン−クリック型の鎖に対して逆平行であり、その特異性は、グアニンを認識す るグアニン（Ｇ：Ｇ−Ｃ）及びアデニンを認識するチミン又はアデニン（Ａ：Ａ −Ｔ又はＴ：Ａ−Ｔ）に由来する。Greenbergら、J．Am．Chem．Soc.，1995，11 7，5016‐5022を参照のこと。 ホモピリミジンＰＮＡは、相補的なオリゴヌクレオチドと非常に安定なＰＮＡ ：ＤＮＡ−ＰＮＡ複合体を形成する。２つのＰＮＡ鎖及び１つのヌクレオチド 鎖を含む三重らせん構造の形成は、１９９３年７月２日に出願されたDouble-Str anded Peptide Nucleic Acidsと題する米国特許出願第０８／０８８，６６１号 に報告されている。なお、この内容はそのまま参照により本明細書中に組み込ま れるものとする。ＤＮＡのプリン標的鎖に対してHoogsteen型の鎖が平行である 三重鎖の形成は、逆平行の複合体の形成より好ましい。このことから、Hoogstee n型の鎖においてシトシンの代わりにシュードイソシトシンを使用してｐＨ依存 的な熱安定性が高められた三重らせん構造を得るためにビス−ＰＮＡを使用する ことが考慮される。Egholmら、J．Am．Chem．Soc.，1992，114，1895‐1897を参 照のこと。また、公開ＰＣＴ出願ＷＯ９６／０２５５８号も参照のこと。これら はいずれも参照によりそっくりそのまま本明細書中に組み込まれるものとする。 ペプチド核酸は、ＤＮＡ又はＲＮＡがＤＮＡ又はＲＮＡのいずれかに対するよ りもＤＮＡとＲＮＡのいずれに対しても（その融解温度によって定量されるよう に）より高い結合親和性を有することが示されている。この結合親和性の増加に よって、これらペプチド核酸オリゴマーは、核酸分子種に対する分子プローブ及 び診断薬として特に有用になる。 オリゴヌクレオチドに取込まれたカルバゾール様の２'−デオキシシチジン類 似体が２重鎖モチーフの相補的なＲＮＡにおいてグアニンと特異的に対合するこ とがすでに示されている（“Pyrimidine Derivatives for Labeled Binding Par tner”と題する、１９９６年５月２６日発行の米国特許第５，５０２，１７７号 ；Matteucci，M．D.，von Krosigk，U.，Tetrahedron Letters，1996，37，5057 ‐5060；Kuei‐Ying，L．ら、J．Am．Chem．，1995，117，3873‐3874）。 三重鎖構造の形成において現時点でいくつか制限があること（ホモプリン標的 に限られていることなど）は、ＤＮＡの特定部位をペプチド核酸によって配列特 異的に認識することに対する主要な難点の１つである。Nielse、J．Am．Chem．S oc.，1996，118，2287-2288を参照のこと。従って、ワトソン−クリック型の塩 基対と結合じ得るヌクレオベース部分を好ましくはピリミジン三重らせんモチー フの内部に含有する新しいＰＮＡオリゴマーに対する要望がある。 発明の要旨 本発明により提供されるのは、オリゴマー化合物、特に式Ｉ： ［式中： Ｌは、アデノシン−チミジンヌクレオベース対の認識部分であり； Ａは、単結合、メチレン基又は以下の式： （式中： Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ₃、ＣＨ₂又はＣ（ＣＨ₃）₂であり； Ｙは、単結合、Ｏ、Ｓ又はＮＲ₄であり； ｐ、ｑ、ｒ及びｓは、それぞれ独立して０又は１〜５の整数であり； Ｒ₁及びＲ₂は、水素；ヒドロキシ又はアルコキシ又はアルキルチオ基で置換 されてもよい（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ；アルキルチオ； アミノ及びハロゲンから成る群からそれぞれ独立して選択され；そして Ｒ₃及びＲ₄は、水素；（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ又はアルコキシ又 はアルキルチオ基で置換された(Ｃ₁−Ｃ₄)アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ； アルキルチオ及びアミノから成る群からそれぞれ独立して選択される。）の基で あり； Ｂは、Ｎ又はＲ₃−Ｎ⁺であって、Ｒ₃は上記の定義通りであり； Ｅは、ＣＲ₆Ｒ₇、ＣＨＲ₆ＣＨＲ₇又はＣＲ₆Ｒ₇ＣＨ₂であって、Ｒ₆は水素であ りＲ₇は天然に存在するαアミノ酸の側鎖から成る群から選択されるか又はＲ₆及 びＲ₇は、水素、（Ｃ₂−Ｃ₆）アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリー ル、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルチオ、ＮＲ₃ Ｒ₄及びＳＲ₅から成る群から独立して選択され、Ｒ₃及びＲ₄は上記の定義通りで あって、Ｒ₅は、水素；（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル；ヒドロキシ、アルコキシ又はア ルキルチオ置換（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルであるか、又はＲ₆及びＲ₇は、一緒に脂環 系又はヘテロ環系をとり； Ｄは、ＣＲ₆Ｒ₇、ＣＨ₂ＣＲ₆Ｒ₇又はＣＨＲ₆ＣＨＲ₇であって、Ｒ₆及びＲ₇は 上記の定義通りであり；そして Ｇは、いずれの方向でもよい、−ＮＲ₃ＣＯ−、−ＮＲ₃ＣＳ−、−ＮＲ₃ＳＯ −又は−ＮＲ₃ＳＯ₂−であって、Ｒ₃は上記の定義通りである。］ を有する部分を含むペプチド核酸である。 好ましい態様では、このモノマー単位は式ＩＩ： ［式中： Ｒ₈は、Ｈ、ＣＯＣＨ₃又はアミノ保護基であり； Ｒ₉は、水素又は天然に存在するアミノ酸の側鎖であり； Ｒ₁₀は、Ｏ、ＮＨ、Ｏ−アルキレン又はリジン残基であり； Ｗは−（ＣＨ₂）_m−であって、ｍは０〜約６であるか、又は （式中、ｂは０〜４の整数である。）であり； ｋは、０〜約５であり； ｎは、０又は１であり； Ｌは、式： （Ｑは、ＣＨ又はＮであり； Ｒ₁₇は、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₈アルキルであり； Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル又はハロゲンで あるか； 又はＲ₁₁及びＲ₁₂は、それらが結合している炭素原子と一緒にフェニル基を 形成する。）を有し；そして Ｔは、式： （ｊ及びｚは、それぞれ独立して０〜約５であって、ｊとｚの和は１〜７であ り； Ｍは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｓ（Ｏ）₂、フェニル又はＰ（Ｏ）₂であり； Ｖは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ₂であり；そして ａ、ｈ及びｇは、それぞれ独立して０又は１である。）を有する。］ を有する。 また、本発明により提供されるのは、式ＩＩＩ： （式中： Ｌ、Ａ、Ｂ、Ｄ及びＥは、上記の意味を有し、Ｆは、それぞれ独立して、ＮＨ Ｒ₃又はＮＰｇＲ₃であって、Ｒ₃は上記の定義通りであり、Ｐｇはアミノ保護基 である。）を有するモノマー化合物である。 好ましい態様では、本発明のモノマー化合物は、以下の式ＩＶ： （式中： Ｒ₈、Ｒ₉、Ｔ、Ｌ、Ｗ、ｋ及びｎは上記の意味を有し、Ｒ₁₃及びＲ₁₄は、それ ぞれ独立してＨ又は保護基である。）を有する。 本発明の化合物の幾つかの好ましい態様では、ｇ及びｈはそれぞれ０である。 より好ましい態様では、ｇ及びｈはそれぞれ０であり、ａは０である。さらに好 ましい態様では、ａは０であり、ｇは０であり、ＸはＮＨであり、そしてｈは１ である。 幾つかの好ましい態様では、Ｌは、式： のうちの１つである。 幾つかの好ましい態様では、Ｒ₄及びＲ₅はそれぞれＨである。さらに好ましい 態様では、Ｒ₄及びＲ₅は、それらが結合している原子と一緒にフェニル環を形成 する。 幾つかの好ましい態様では、ＱはＮであり、他の好ましい態様では、ＱはＣＨ である。 好ましくは、Ｔは低級アルキルか又はアルキルアミノである。特に好ましい態 様では、Ｔは−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＮＨ−、−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−Ｏ− ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−（ＣＨ₂）_m−である。 他の好ましい態様では、Ｗは、式： （式中、ｂは好ましくは０〜４の整数であり、２及び３が特に好ましい。）を有 する。さらに好ましい態様では、Ｃα又はＣβの少なくとも１つがＳ配位である 。 幾つかの好ましい態様では、本発明の化合物はペプチド核酸である。他の好ま しい態様では、本発明の化合物は、連結基によって連結している複数のペプチド 核酸オリゴマー、好ましくは２つのオリゴマーを含み、そのペプチド核酸オリゴ マーの少なくとも１つは式ＩＩを有する部分を含む。特に好ましい態様では、２ つのペプチド核酸オリゴマーが連結部分によって連結されていて、それは好まし くは１つ又はそれ以上の８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸基であり、よ り好ましくは、３つの８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸基である。 本発明の化合物の幾つかの特に好ましい態様は、式： ［Ｒ₁₅は、ＯＨ、保護されたヒドロキシル基又は保護基であり； Ｒ₁₆は、Ｈ又はアミノ保護基であり； Ｌは、式： （Ｑは、ＣＨ又はＮであり； Ｒ₁₇は、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₈アルキルであり； Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル又はハロゲンで あるか； 又は、Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それらが結合している炭素原子と一緒にフェニル基 を形成する。）を有し； Ａは、単結合、メチレン基又は式：（式中： Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ₃、ＣＨ₂又はＣ（ＣＨ₃）₂であり； Ｙは、単結合、Ｏ、Ｓ又はＮＲ₄であり； ｐ、ｑ、ｒ及びｓは、それぞれ独立して、０又は１〜５の整数であり； Ｒ₁及びＲ₂は、水素；ヒドロキシ又はアルコキシ又はアルキルチオ基で置換 されてもよい（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ；アルキルチオ； アミノ及びハロゲンから成る群からそれぞれ独立して選択され；そして Ｒ₃及びＲ₄は、水素；（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ又はアルコキシ又 はアルキルチオ基で置換された（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ ；アルキルチオ及びアミノから成る群からそれぞれ独立して選択される。）の基 である。］ を有する また、本発明により提供されるのは、病的な状態との関連が疑われる配列をコ ードしかつ１つ又はそれ以上のチミン残基を含有する一本鎖ＤＮＡ；該一本鎖核 酸のある領域に相補的な領域を含む第一ペプチド核酸オリゴマー；及び該一本鎖 核酸のある領域に相補的な配列を含む第二ペプチド核酸であって、該一本鎖核酸 のチミン残基に相補的な１つ又はそれ以上の位置に非プリンヌクレオベースを有 する残基、好ましくは式ＩＩの残基を有する第二ペプチド核酸、を含む組成物、 好ましくは三重鎖の化合物である。 また、本発明は、三重鎖の化合物を形成する方法であって： （ａ）１つ又はそれ以上のチミン残基を含有する一本鎖の核酸を選択する工程 ； （ｂ）該一本鎖核酸のある領域に相補的である領域を含む第一オリゴマーを提 供する工程；及び （ｃ）該一本鎖核酸及び第一オリゴマーを、該三重らせん化合物を形成するの に有効な時間及び条件下で、第二オリゴマーと接触させる工程であって、該第二 オリゴマーが、該一本鎖核酸のある領域に相補的な配列を含むペプチド核酸オリ ゴマーでありかつ該一本鎖核酸のチミン残基に相補的な１つ又はそれ以上の位置 に式ＩＩの残基を有する工程 を含んでなる方法を提供する。好ましくは、第一オリゴマーはＰＮＡ又はＤＮＡ である。 本発明の方法の幾つかの好ましい態様では、第一オリゴマーは、一本鎖核酸に 対して逆平行に配向していて、第二オリゴマーはΞ重鎖化合物内の一本鎖核酸に 対して平行に配向している。特に好ましい態様では、三重鎖の化合物はＰＮＡ− ＤＮＡ−ＰＮＡの式を有する。 好ましくは、一本鎖の核酸はＤＮＡ又はＲＮＡである。 さらに好ましい態様では、第一オリゴマーはペプチド核酸であり、この第一オ リゴマーは、連結部分によって第二オリゴマーと連結している。 本発明の方法の幾つかの好ましい態様では、第一及び第二オリゴマーは、それ ぞれ４〜約２０ヌクレオベースの長さである。 また、本発明は、既知のヌクレオベース配列を含有する化学的又は微生物学的 実体を検出するため方法であって： １つ又はそれ以上のチミン残基を含有する化学的又は微生物学的実体からヌク レオベース配列を選択すること； 該選択されたヌクレオベース配列に相補的な領域を含有するＰＮＡオリゴマー を提供すること； 該化学的又は微生物学的実体の該選択されたヌクレオベース配列及び該相補的 なＰＮＡオリゴマーを、該選択されたヌクレオベース配列に相補的である配列を 含有するさらに別のペプチド核酸オリゴマーと接触させて、三重らせん化合物を 形成すること、この際、該さらに別のペプチド核酸オリゴマーは、該選択された ヌクレオベース配列のチミン残基に相補的な１つ又はそれ以上の位置に式ＩＩの 残基を有する；及び 該三重らせん化合物を検出すること を含んでなる方法を提供する。 二本鎖ポリヌクレオチドの配列特異的認識方法であって、該ポリヌクレオチド を式ＩＩの残基を有する化合物と接触させることを含んでなる方法も提供される 。 二本鎖ポリヌクレオチドの配列特異的認識方法であって、該ポリヌクレオチド を、該ポリヌクレオチドと結合して三重鎖構造を形成するオリゴマー化合物と接 触させることを含み、該オリゴマー化合物が、式Ｉ、より好ましくは式ＩＩを有 するモノマー単位を含む方法も提供される。 好ましい態様の説明 １つの側面では、本発明は新規なオリゴマー化合物、特に研究用試薬として及 び相補的な核酸に対する特定のプローブとして有用であるペプチド核酸を提供す る。本発明は、そのオリゴマー化合物の製造に有用であるモノマーのシントンも 提供する。 好ましい態様では、本発明の化合物は、式Ｉ： ［式中： Ｌは、アデノシンーチミジンヌクレオベース対の認識部分であり： Ａは、単結合、メチレン基又は式： （式中： Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ₃、ＣＨ₂又はＣ（ＣＨ₃）₂であり； Ｙは、単結合、Ｏ、Ｓ又はＮＲ₄であり； ｐ、ｑ、ｒ及びｓは、それぞれ独立して、０又は１〜５の整数であり； Ｒ₁及びＲ₂は、水素；ヒドロキシ又はアルコキシ又はアルキルチオ基で置換 されてもよい（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ；アルキルチオ； アミノ及びハロゲンから成る群からそれぞれ独立して選択され；そして Ｒ₃及びＲ₄は、水素；（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ又はアルコキシ又 はアルキルチオ基で置換された(Ｃ₁−Ｃ₄)アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ； アルキルチオ及びアミノから成る群からそれぞれ独立して選択される。）の基で あり； Ｂは、Ｎ又はＲ₃−Ｎ⁺であって、Ｒ₃は上記の定義通りであり； Ｅは、ＣＲ₆Ｒ₇、ＣＨＲ₆ＣＨＲ₇又はＣＲ₆Ｒ₇ＣＨ₂であって、Ｒ₆は水素であ りＲ₇は天然に存在するαアミノ酸の側鎖から成る群から選択されるか、又はＲ₆ 及びＲ₇は、水素、（Ｃ₂−Ｃ₆）アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリ ール、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルチオ、ＮＲ₃ Ｒ₄及びＳＲ₅から成る群から独立して選択され、Ｒ₃及びＲ₄は上記の定義通り であり、Ｒ₅は、水素；（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル；ヒドロキシ、アルコキシ又はア ルキルチオ置換（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルであるか、又はＲ₆及びＲ₇は一緒に脂環系 又はヘテロ環系をとり； Ｄは、ＣＲ₆Ｒ₇、ＣＨ₂ＣＲ₆Ｒ₇又はＣＨＲ₆ＣＨＲ₇であって、Ｒ₆及びＲ₇は 上記の定義通りであり；そして Ｇは、いずれの方向でもよい、−ＮＲ₃ＣＯ−、−ＮＲ₃ＣＳ−、ＮＲ₃ＳＯ− 又は−ＮＲ₃ＳＯ₂−であって、Ｒ₃は上記の定義通りである。］ の部分を含有する。 より好ましい態様では、本発明の化合物は式ＩＩ：［式中： Ｒ₈は、Ｈ、ＣＯＣＨ₃又はアミノ保護基であり； Ｒ₉は、水素又は天然に存在するアミノ酸の側鎖であり； Ｒ₁₀は、Ｏ、ＮＨ、Ｏ−アルキレン又はリジン残基であり； Ｗは−（ＣＨ₂）_m−であって、ｍは０〜約６であるか、又は （式中、ｂは０〜４の整数である。）であり； ｋは、０〜約５であり； ｎは、０又は１であり； Ｌは、式： （Ｑは、ＣＨ又はＮであり； Ｒ₁₇は、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₈アルキルであり； Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル又はハロゲンで あるか； 又はＲ₁₁及びＲ₁₂は、それらが結合している炭素原子と一緒にフェニル基を 形成する。）を有し，そして Ｔは、式： （ｊ及びｚは、それぞれ独立して０〜約５であって、ｊとｚの和は１〜７であ り； Ｍは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｓ（Ｏ）₂、フェニル又はＰ（Ｏ）₂であり； Ｖは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ₂であり；そして ａ、ｈ及びｇは、それぞれ独立して０又は１である。）を有する。］ の部分を含有する。 本発明の化合物の好ましい態様には、式ＩＩの部分を１つ又はそれ以上含有す るオリゴマー化合物が含まれる。このオリゴマーには、式ＩＩの部分が１つほど であっても、そのオリゴマーのモノマー単位の大部分が式ＩＩの部分であっても よい。 本発明の化合物のさらに好ましい態様には、１つ又はそれ以上の連結部分によ って連結している２つのＰＮＡオリゴマーであって、そのＰＮＡオリゴマーの片 方又は両方が式ＩＩの部分を少なくとも１つ含有するオリゴマー（ビスＰＮＡオ リゴマー）を包含する。本発明は、また、複数のＰＮＡオリゴマーが連結部分に よって連結しているより高次に連結したＰＮＡオリゴマーであって、１つ又はそ れ以上の連結したＰＮＡオリゴマーが式ＩＩの部分を少なくとも１つ含むオリゴ マーを包含する。 本明細書で使用する“ペプチド核酸”（ＰＮＡ）という用語は、ある点ではオ リゴヌクレオチドに類似しているが、構造において異なる化合物を意味する。ペ プチド核酸では、オリゴヌクレオチドのデオキシリボース骨格がペプチド連結を 有する骨格に置換されている。各サブユニットは、天然に存在するか又は天然に は存在しない塩基を付けている。１つのそのような骨格は、アミド結合を介して 連結したＮ−（２−アミノエチル）グリシンの反復単位から構築される。 本発明は、また、例えば本発明のＰＮＡオリゴマーの製造において有用である ＰＮＡモノマーを提供する。幾つかの好ましい態様では、本発明のＰＮＡモノマ ーはアキラルな骨格を有する。アキラルなＰＮＡ骨格の１つの好ましい例は、２ −アミノエチルグリシン骨格である。例えば、国際特許出願ＷＯ９２／２０７０ ２号及びＷＯ９２／２０７０３号を参照のこと。これらの内容はいずれも参照に より本明細書中に組み込まれるものとする。 他の好ましい態様では、本発明はキラルな骨格を含有するＰＮＡモノマーを提 供する。幾つかの好ましい態様では、脂環式構造の取込みを介してキラリティー がＰＮＡ骨格に導入される。１つの特に好ましい態様では、この脂環式構造には 、 アミノエチルグリシン骨格の２−アミノエチル部分のα及びβ炭素が含まれ、 式： （式中、ｂは、０〜４の整数であり；αはグリシルアミノ基に隣接する炭素を示 し；そしてβは、α炭素に隣接する１つの炭素を示す。）を有する。この脂環式 構造は、４、５、６又は７員環であり得る。好ましい態様ではこの脂環式構造は ５又は６員環であり、特に好ましいのは６員環である。 光学的に活性な試薬を使用することで、純粋なＳＳ、ＲＲ、ＳＲ及びＲＳ異性 体の合成が可能になる。本発明の幾つかの態様で好ましいのは、ＳＳ異性体であ る。 典型的には、キラル骨格を有するモノマーは、シス又はトランス異性体として 入手可能な（１，２）−ジアミノシクロヘキサンを使用して製造される。このシ ス−（１，２）−ジアミノシクロヘキサンはメソ化合物である。このようなメソ 化合物の使用は、ラセミ混合物の分割を必要とする。トランス−（１，２）−ジ アミノシクロヘキサンは、鏡像異性的に純粋な形態として市販されているので、 その骨格の２−アミノエチル部分のＣα及びＣβのいずれについてもキラリティ ーが予め決定されたモノマーによく適している。 このジアミンは、典型的にはアミノ基の１つをジ−ｔ−ブチルピロカーボネー ト（Ｂｏｃ₂Ｏ）で保護されてからブロモ酢酸メチルでＮ−アルキル化され、キ ラルな骨格となる。ＤＣＣ／ＤｈｂｔＯＨを使用してリガンド（必要に応じて適 切に保護される）をこのキラル骨格とカップリングさせてから塩基性加水分解を すれば、キラルな骨格を含有する所望のモノマーが得られる。このやり方で、Ｓ Ｓ及びＲＲモノマーが合成され得る。ＲＳ及びＳＲ異性体は、シス−（１，２） −ジアミノシクロヘキサンを使用し、得られるラセミ混合物を分割すれば合成で きる。分割は、例えば、液体クロマトグラフィーによって達成され得る。 得られるモノマーは、配座上の制限が増えるので、そのモノマーの親油性を高 めると考えられる。キラル骨格を含むＰＮＡモノマーは、１９９４年１２月２８ 日に出願された同時出願中の米国特許出願第０８／３６６，２３１号に開示され ており、その内容はそのまま参照により本明細書中に組み込まれるものとする。 本発明の少なくとも１つのキラルモノマーを含むＰＮＡオリゴマーは、当業者 に知られている方法によって製造される。アミノ酸をペプチドへ段階的又は断片 的に固相アセンブリーするための確立された方法は、普通、弱く架橋結合したス チレン−ジビニルベンゼン共重合体のビーズ化マトリックスを利用し、その架橋 結合した共重合体は、ジビニルベンゼンの混合物が付加したスチレンモノマーの 粒状重合によって形成されたものである。１〜２％レベルの架橋結合が通常利用 される。そのようなマトリックスは、また、本発明による固相ＰＮＡ合成でも使 用することができる。 幾つかの好ましい態様では、本発明のＰＮＡオリゴマーは、１つ又はそれ以上 のキラルなモノマーサブユニットを含有する。本発明のＰＮＡオリゴマーは、１ つのキラルサブユニット又は複数のキラルサブユニットを含有しても、キラルサ ブユニットから主に又は完全に構成されてもよい。 好ましくは、ＰＮＡオリゴマーは、標的分子に相補的である、即ち、ＰＮＡオ リゴマーの少なくとも一部分が、ワトソン−クリック型の塩基対吸引力により標 的分子に、又はHoogsteen型の水素結合により、三重鎖構造にハイブリダイズす る能力を有するように製造される。 好ましい態様では、ＰＮＡ骨格のアミノアルキル窒素は、式ＩＩ及びＩＶにお いてＲ₈と表示される置換基を有し得る。好ましくは、Ｒ₈は、水素、ＣＯＣＨ₃ 又はアミノ保護基である。 本発明の化合物上に存在する官能基は，保護基を含有し得る。保護基そのもの は、アミノ基やカルボキシル基のような官能基へ選択的に付け外しできる化学的 官能基として知られている。これらの基は、ある化合物中に存在して、その化合 物がさらされる化学反応条件に対してそのような官能基を不活性にする。あらゆ る多種多様な保護基が本発明で利用され得る。アミノ基に対する１つの好ましい 保護基はＢｏｃ基である。本発明による他の好ましい保護基は、Greene，T．W． 及びWuts，P.G.M.,“Protective Groups in Organic Synthesis”2d．Ed.，Wile y & Sons，1991に見出し得る。 置換基Ｒ₉は、水素又は天然に存在するアミノ酸の側鎖である。本明細書で使 用する“アミノ酸”という用語は、アミノ基及びカルボキシル基を両方含む分子 を意味し、ＣＨ(ＣＯＯＨ)(ＮＨ₂)−（側鎖）という一般式を有する。天然に存 在するアミノ酸は、自然界で見出されるアミノ酸、即ち、生物体によって産生さ れるものである。１つの代表的なアミノ酸側鎖は、リジンの側鎖、つまり−（Ｃ Ｈ₂）₄−ＮＨ₂である。他の代表的な天然に存在するアミノ酸は、例えば、Lehni nger，Biochemistry，Second Edition，Worth Publications，Inc.，1975，page s 73-77に見出され得る。 好ましい態様では、Ｒ₁₀は、Ｏ、ＮＨ、Ｏ−アルキレン又はリジン残基である 。本明細書で使用する“アルキル”という用語には、例えば、エチル、イソプロ ピル及びシクロプロピル基のような直鎖、分岐鎖又は環状の炭化水素基が含まれ る。好ましいアルキル基は、１〜約１０の炭素原子を有する。“アルキレン”と いう用語は、二価のアルキル基、即ち、メチレン（−ＣＨ₂−）、エチレン（− ＣＨ₂ＣＨ₂−）、プロピレン（−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−）等を意味する。 “アルコキシ”という用語は、−Ｏ−アルキル基としてのその慣例的な意味を 有する。“アルキルチオ”基は、−Ｓ−アルキルという式の基を意味する。ハロ ゲンは、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を含む。 アリールという用語は、例えば、フェニル、ナフチル、キシリル、ピロール及 びフリル基を含む単環式及び多環式芳香族の基を表すためのものである。アリー ル基（例、イミダゾール基）は、３つ程度に少ない炭素原子を含み得るが、好ま しいアリール基は６〜約１４の炭素原子を、より好ましくは６〜約１０の炭素原 子を含有することができる。本発明によるアラルキル及びアルカリール基は、そ れぞれ、アルキルとアリール部分とを含む。アラルキル基は、そのアルキル部分 を介して結合し、アルカリール基はそのアリール基を介して結合する。ベンジル 基は、アラルキル基の１つの例を提供し、ｐ−トルイルは、アルカリール基の１ 例を提供する。本明細書で使用する“ヘテロ環”という用語は、窒素、イオウ又 は酸素のようなヘテロ原子を少なくとも１つ含む環系を意味する。“ヘテロアリ ール”という用語は、アリールヘテロ環基を特に意味する。 本発明の文脈では、“ポリヌクレオチド”という用語は、リボ核酸又はデオキ シリボ核酸のオリゴマー又はポリマーを意味する。 本発明のＰＮＡモノマーでは、アデノシン−チミジンヌクレオベース対の認識 部分が、式Ｉの置換基Ａとして表されるつなぎ部分（tether）によってＰＮＡ骨 格に結合している。幾つかの好ましい態様では、このつなぎ部分は、好ましくは ＰＮＡ骨格の窒素原子と結合するカルボニル基が末端になる。より好ましい態様 では、このつなぎ部分は、２−アミノエチルグリシン骨格のグリシル窒素に結合 しているカルボニル基が末端になる。さらに好ましい態様では、このつなぎ部分 は、２−アミノエチルグリシン骨格のキラルな誘導体のグリシル窒素に結合して いるカルボニル基が末端になり、そのアミノエチルグリシン骨格の２−アミノエ チル部分のα及びβ炭素は、上記のように、脂環式環の一部になる。 幾つかの好ましい態様では、ＰＮＡ結合カルボニル基に結合したつなぎ部分は 、式： （式中、ｊ及びｚは、それぞれ独立して、０〜約５であるが、ｊとｚの和は１〜 ７であり；Ｇは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｓ（Ｏ）₂、フェニル又はＰ（Ｏ）₂であり；Ｘは 、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ₂であり；そして、ａ、ｈ及びｇは、それぞれ独立して、０ 又は１である。）を有する。幾つかの好ましい態様では、つなぎ部分は、アルキ ル又はアルキルアミノであり、好ましくは、約６より少ない炭素、特に好ましく は２つの炭素を有する。特に好ましいつなぎ部分には、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＮＨ− 、−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−及び−Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂ −ＣＨ₂−基が含まれる。三重鎖構造の相補的な位置に存在しているリガンドと ＡＴ対（特にチミン）との間の相互作用を最大化すべき適切な配置及び方向をリ ガンドが有するように、つなぎ部分を選択することが望ましい。好ましくは、つ なぎ部分は、直鎖状で、直鎖のなかに３〜６の原子、より好ましくは４〜５の原 子、特に好ましくは４つの原子を含む。 幾つかの好ましい態様では、そのエチル部分にキラル中心を有する少なくとも １つのＰＮＡモノマーが、ミスマッチ（即ち、標的分子の変異性）の起こること が予測されるか又は知られている部位でＰＮＡオリゴマーへ取り込まれる。 本発明のＰＮＡオリゴマーは、それへ結合する多様な置換基を有し得る。例え ば、幾つかの好ましい態様では、本発明のオリゴマーはＰＮＡのより容易な検出 又は輸送をもたらす結合基（conjugate group）を有する。この結合基は、レポ ーター酵素、レポーター分子、ステロイド、炭水化物、テルペン、ペプチド、タ ンパク質、芳香族親油性分子、非芳香族親油性分子、リン脂質、インターカレー ター、細胞受容体結合性分子、架橋剤、水溶性ビタミン、脂溶性ビタミン、ＲＮ Ａ開裂性複合体、金属キレート剤、ポルフィリン、アルキル化剤、及び、ポリマ ーアミン、ポリマーグリコール及びポリエーテルのようなポリマー化合物であり 得る。本発明のＰＮＡには、直接的に又は所望により連結部分を介して結合して いる１つ又はそれ以上の結合体（conjugate）が含まれ得る。そのように誘導体 化されるとき、ＰＮＡは、例えば、診断薬又は治療薬として、ある試験構造体の 相補的な核酸又は三重鎖へ他の特質を与えるのに、又は細胞膜を越えて治療薬又 は診断薬を輸送するのに有用である。 上記の結合基は、ＰＮＡ骨格上の任意のところで、つまり、式ＩＩのモノマー 単位上かＰＮＡの他のところのいずれかで、本発明のＰＮＡオリゴマーに結合さ せることができる。この結合基は、モノマーに結合して、ＰＮＡオリゴマーの中 へ取込まれ得る。別のやり方では、この結合基は、構成モノマーからのアセンブ リーの後にＰＮＡオリゴマーと結合させてもよい。結合基を付けるための方法は 、１９９４年１０月６日に出願された同時出願中の米国出願第０８／３１９，４ １１号に開示されている。なお、その内容はそのまま参照により本明細書中に組 み込まれるものとする。 幾つかの特に好ましい態様では、本発明のオリゴマー化合物は、発色団又は発 蛍光団、例えば、フルオレセイン又はローダミンのようなレポーター分子を有す る。例えば、少なくとも１つのキラルモノマーを有するものを含め、本発明のＰ ＮＡオリゴマーは、アミノヘキサンのリンカー基を使用して、フルオレセイン又 はローダミンを含むように容易に誘導体化される。これら誘導体化されたＰＮＡ オリゴマーは、興味の対象のＤＮＡのある断片に対するプローブとしての使用に よく適している。当業者は、本発明が多種の他のタイプの標識試薬又はリンカー に適用できることを理解するであろう。 式Ｉ〜ＩＶの置換基Ｌによって表される、本発明の化合物のアデノシン−チミ ジンヌクレオベース対認識部分は、三重らせん鎖のチミジンに相補的な（つまり 、アデノシン−チミジン塩基対に相補的な）位置に通常見出されるヌクレオベー スの代用物である。本発明のアデノシン−チミジンヌクレオベース対認識部分は 、アンチセンスの応用では、二重鎖と三重鎖モチーフのいずれによっても、チミ ンの代用物として使用され得る。 ワトソン−クリック型のアデノシン−チミジン塩基対に相補的な位置にアデノ シン−チミジンヌクレオベース対認識部分を含有するモノマー単位を有する(即 ち、ワトソン−クリック型のアデノシン−チミジン塩基対に相補的な位置に式Ｉ 又はＩＩのモノマー単位を有する)本発明のオリゴマーを取込んだ三重鎖構造は 、ワトソン−クリック型のアデノシンーチミジン塩基対に相補的な部位に天然の ヌクレオベースを有する点を除けば同一である三重鎖構造と比較して、増加した 結合性を示す（つまり、より高い融解温度を有する）。それ故、本発明の化合物 は、この増加した結合性によって、三重らせん構造の中のチミン残基を“認識す る”ことができる。従って、本明細書で定義される“アデノシン−チミジンヌク レオベース対認識部分”という用語は、三重らせん構造においてワトソン−クリ ック型の塩基対と結合し得る天然のヌクレオベースに代わって用いられるとき、 そのアデノシン−チミジンヌクレオベース対認識部分を有さない同一の三重鎖と 比較して、より増加した結合性を有する三重鎖構造を形成する、非天然のヘテロ 環部分である。 本発明の幾つかの好ましい態様では、アデノシン−チミジンヌクレオベース対 認識部分は、Ｃ−ピリミジン（例えば、つなぎ部分で又はつなぎ部分なしで骨格 にピリミジンを連結させている結合が窒素原子ではなく炭素を介してなされてい るピリミジン）又はイソピリミジンである。 式Ｉ〜ＩＶの−Ｔ−Ｌによって表される、本発明の化合物のアデノシン−チミ ジンヌクレオベース対認識部分及びつなぎ部分は、三重鎖構造、例えばＰＮＡ： ＤＮＡ−ＰＮＡ三重鎖構造のＤＮＡ部分の相補的なチミジン残基に対して最大の 親和性をもたらすように選択される。特定の理論に拘束されることを望むわけで はないが、ワトソン−クリック型の二重らせん構造の主溝におけるＴ−Ａ塩基対 のチミンを認識するためには、リガンドは、チミンの５−メチル基を回避するに 十分な自由度をもたらすつなぎ部分のあるＰＮＡ骨格に結合されることが望まし いと考えられる。さらに、選択されたリガンドは、好ましくはチミンの４−オキ ソ基に結合し得る水素供与体を有する。さらに有用な特徴は、リガンド上に位置 しているか又は結合していて、アデニンのＮ−６水素原子と水素結合を形成する 水素受容体として機能し得る、第二の官能基の存在である。ワトソン−クリック 型の二重らせん構造でチミンを認識する本発明の化合物は、これら属性を有する と考えられる。 アデノシン−チミジンヌクレオベース対認識部分は、当業者に知られている方 法によって選択され得る。例えば、アデノシン−チミジンヌクレオベース対認識 部分は、Biosym，San Diego，Carforniaから入手可能なInsight II及びDiscover プログラムのような適切なコンピュータモデルプログラムによって選択され得る 。 幾つかの好ましい態様では、アデノシン−チミジンヌクレオベース対認識部分 は、式： を有する。 他の好ましい態様では、アデノシン−チミジンヌクレオベース対認識部分は、 式： （式中、 Ｑは、ＣＨ又はＮであり； Ｒ₁₇は、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₈アルキルであり； Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル又はハロゲンであ るか； 又はＲ₁₁及びＲ₁₂は、それらが結合している炭素原子と一緒にフェニル基を形 成する。） を有する。 別の好ましい態様では、アデノシン−チミジンヌクレオベース対認識部分に結 合しているつなぎ部分、つまり式ＩのＡ又は式ＩＩのＴは、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｎ Ｈ−、−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、又は−Ｏ−ＣＨ₂ −ＣＨ₂−ＣＨ₂−基である。 特に好ましい態様では、本発明のモノマーは、式： ［Ｌは、式： （Ｑは、ＣＨ又はＮであり； Ｒ₁₇は、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₈アルキルであり； Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル又はハロゲンで あるか； 又はＲ₁₁及びＲ₁₂は、それらが結合している炭素原子と一緒にフェニル基を 形成する。）を有し； Ａは、単結合、メチレン基又は、式； （式中： Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ₃、ＣＨ。又はＣ（ＣＨ₃）₂であり； Ｙは、単結合、Ｏ、Ｓ又はＮＲ₄であり； ｐ、ｑ、ｒ及びｓは、それぞれ独立して、０又は１〜５の整数であり； Ｒ₁及びＲ₂は、水素；ヒドロキシ又はアルコキシ又はアルキルチオ基で置換 され得る（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ；アルキルチオ；アミ ノ及びハロゲンから成る群からそれぞれ独立して選択され； Ｒ₃及びＲ₄は、水素；（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ又はアルコキシ又 はアルキルチオ基で置換された（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ ；アルキルチオ及びアミノから成る群からそれぞれ独立して選択さる。）の基で あり； Ｒ₁₅は、ＯＨ、保護されたヒドロキシル基、又は保護基であり；そして Ｒ₁₆は、Ｈ又は保護基である。］ を有する 本発明のＰＮＡオリゴマー及び連結したＰＮＡオリゴマーは、ＰＮＡ₂／ＤＮ Ａ三重らせん構造を形成するのに有用である。本発明の化合物の好ましい態様に は、ＰＮＡ鎖の少なくとも１つが、式Ｉ、好ましくは式ＩＩによるモノマー部分 を少なくとも１つ含有する三重らせん（即ち、三重鎖）ＰＮＡ・ＤＮＡ−ＰＮＡ 構造が含まれる。より好ましい態様では、ＰＮＡ・ＤＮＡ−ＰＮＡ内の２つのＰ ＮＡオリゴマーがビス−ＰＮＡの構成メンバーになる；即ち、２つのＰＮＡオリ ゴマーが１つ又はそれ以上の連結部分（“連結基”）によってともに連結される 。 本発明の化合物においてＰＮＡオリゴマーを連結する連結部分は、そのＰＮＡ オリゴマーが三重鎖構造を形成するに十分な自由度を有するように選択される。 多種の基が連結部分として使用され得、例えば、アミノ酸基によって連結される “ｅｇｌ基”（エチレングリコール）及び“Ａｈａ基”（６−アミノヘキサン酸 ）がある。さらなる連結セグメントには、α−アミノ酸、特にグリシン又はリジ ンとの空間を占める上記のＡｈａ基が含まれる。１つの特に好ましい連結部分は 、カップリングしたときに“多重エチレングリコール単位”（“ｅｇｌ”）を効 果的にもたらす１つ又はそれ以上の８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸残 基である。 広範囲の他の化合物も連結セグメントに有用であり、従って、本発明の範囲内 に含まれる。一般に、連結セグメントは、１つ又はそれ以上の官能基からなる空 間スパン（Space spanning）基で分離された一級アミノ基とカルボキシル基を有 する化合物である。幾つかの代表的な空間スパン基は、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキル、Ｃ₂ 〜Ｃ₂₀アルケニル、Ｃ₂〜Ｃ₂₀アルキニル、少なくとも１つのＯ又はＳ原子を有 するＣ₁〜Ｃ₂₀アルカノイル、Ｃ₇〜Ｃ₃₄アラルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール及びア ミノ酸である。好ましいアルカノイル基は、Ｏ又はＳのような１〜１０個のヘテ ロ原子を有し得る。好ましいアルカノイル基には、メチル、エチル及びプロピル アルカノキシ、特にポリエトキシ、即ち、エチレングリコールが含まれる。α− アミノ酸のＤ、Ｌ及びＤＬ異性体を含むアミノ酸、並びに長鎖のアミノ酸も、一 緒に連結して連結セグメントを形成することができる。特に好ましいアミノ酸は 、６−アミノヘキサン酸である。空間スパン基として使用されるアラルキル基は 、芳香環上に位置するか又は１つ若しくはそれ以上のＣＨ₂基で隔てられている アミノ基又はカルボキシ基を有し得、この場合、ＣＨ₂基の総数は２０以下であ る。アラルキルが連結したＰＮＡの置換位置は様々であり得るが、現時点ではオ ルト及びメタが好ましい。というのは、これらの位置での置換、特にオルトでの 置換は、ビス−ＰＮＡが曲がって、この２っの結合したペプチド核酸鎖がお互い に平 行な空間配置をとることが促進されるからである。誘発された湾曲部を含む他の 群のビスＰＮＡは、シス−アルケニルリンカー又はプロリンリンカーを取込むも のである。 連結セグメントを選択するときに１つ考慮すべきことは、ＰＮＡ化学との適合 性、及びＰＮＡの一末端上の官能基を第二のＰＮＡの一末端上の官能基に連結す る能力である。また、連結セグメントは、２つの連結したＰＮＡがｓｓＤＮＡ、 ｓｓＲＮＡ又はｄｓＤＮＡと、２つの独立したＰＮＡ一本鎖が相互作用するのと 同じように相互作用し得るほど柔軟であるように選択され得る。有効であること が分かった幾つかの好ましい連結セグメントは、２３及び２４原子の長さを有す る。 本明細書で使用する“相補的”という用語は、核酸（ＲＮＡ又はＤＮＡ）二重 鎖；ＰＮＡ−核酸二重鎖；核酸、ＰＮＡ又はそれらの混合物を含む三重鎖構造の 内部にワトソン−クリック型又はHoogsteen型の結合を形成する能力としてのそ の慣例的な意味を有する。 本発明のＰＮＡ₂／ＤＮＡ化合物では、ＰＮＡオリゴマーは典型的にはワトソ ン−クリック型の逆平行鎖として製造され、追加的なＰＮＡオリゴマーは平行（ 例えば、Hoogsteen型の）鎖として製造される。１つの好ましい態様では、本発 明のＰＮＡモノマーは、Hoogsteen型の鎖において、標的核酸のチミン又はウラ シルに相補的な位置で使用されて、このHoogsteen型の鎖の結合性が増加し、そ の結果、形成される三重らせんの融解温度（Ｔｍ）が増加する。 本明細書で使用する“結合親和性”という用語は、水素結合、ファンデルワー ルス相互作用、疎水性の相互作用等を介して標的分子に結合する２重鎖の能力を 意味する。標的分子には、一本鎖ＤＮＡ又はＲＮＡ、並びにＤＮＡ、ＲＮＡ及び ＰＮＡのようなそれらの類似体間の二重鎖が含まれる。 本明細書で使用する“ヌクレオベース”という用語は、核酸の二重鎖又は三重 鎖構造中のワトソン−クリック型又はHoogsteen型の結合に参画し得るヘテロ環 塩基というその慣例的な意味を有する。これらには、天然のヌクレオベースであ るアデニン、グアニン、シトシン、チミン及びウラシル、並びにＤＮＡ又はＲＮ Ａ類似体において天然のヌクレオベースの機能を模倣することが知られている 非天然のヌクレオベース（つまり、ヌクレオベースの類似体）が含まれる。代表 的なヌクレオベース類似体は、例えば、S.T.CrookとB．Lebleu編，“Antisense Research and Application，Chapter 15，CRC Press，1993及びMeriganらへの米 国特許第３，６８７，８０８号に見出される。なお、これらの内容はそのまま参 照により本明細書中に組み込まれるものとする。 幾つかの好ましい態様では、本発明のＰＮＡオリゴマーは、核酸標的とともに 三重らせん構造を形成し、ここでＰＮＡオリゴマーはこれまでに報告されている ＰＮＡオリゴマーに比較して増加した結合親和性を有する。核酸標的中のチミン 又はウラシルに相補的な位置に式Ｉ〜ＩＶのＰＮＡモノマー部分を有するＰＮＡ オリゴマー及び連結したＰＮＡオリゴマーは、チミン又はウラシルに相補的であ る位置にアデニンを有する連結したＰＮＡオリゴマーで形成される同一の三重鎖 構造に比較して、向上した結合特異性を示す（以下の実施例５を参照のこと）。 従って、本発明のＰＮＡオリゴマー及び連結したＰＮＡオリゴマーには、チミ ジン残基を含有するオリゴヌクレオチド配列を検出又は同定することが望まれる 用途がある。従って、本発明のＰＮＡオリゴマーは、研究試薬及び診断ツールと して有用である。１つの好ましい態様では、本発明のオリゴマー及び連結したオ リゴマーは、１つ又はそれ以上のチミン残基を含有する、病的な状態との関連が 疑われる核酸配列の検出に有用である。従って、本発明には、病的な状態との関 連が疑われる核酸配列、及び少なくとも１つの本発明のＰＮＡオリゴマーを含有 する三重鎖構造が含まれる。 幾つかの好ましい態様では、病的な状態との関連が疑われる配列をコードしか つ１つ又はそれ以上のチミン残基を含有する一本鎖ＤＮＡ；該一本鎖核酸のある 領域に相補的な領域を含む第一ペプチド核酸；及び該一本鎖核酸のある領域に相 補的な配列を含む第二ペプチド核酸であって、該一本鎖核酸のチミン残基に相補 的な１つ又はそれ以上の位置に式Ｉの残基、好ましくは式ＩＩの残基を有する第 二ペプチド核酸、を含む本発明の組成物が提供される。 本発明は、また、三重鎖の化合物を形成する方法であって、（ａ）１つ又はそ れ以上のチミン残基を含有する一本鎖の核酸を選択すること；（ｂ）該一本鎖核 酸のある領域に相補的である領域を含む第一オリゴマーを提供すること；及び （ｃ）該一本鎖核酸及び第一オリゴマーを、該三重らせん化合物を形成するのに 有効な時間及び条件下で、第二オリゴマーと接触させることを含んでなり、その 際、該第二オリゴマーが、該一本鎖核酸のある領域に相補的な配列を含み、かつ 該一本鎖核酸のチミン残基に相補的な１つ又はそれ以上の位置に式Ｉ又はＩＩの 残基を有する方法を提供する。 幾つかの好ましい態様では、一本鎖の核酸は、病原性のような生物学的活性に ついて選択される。次いで、第一オリゴマーは、この一本鎖核酸のある領域、好 ましくは１つ以上のチミン残基を有する領域に相補的である領域を含むように合 成される。これら一本鎖核酸及び第一オリゴマーの第二オリゴマーとの接触は、 当技術分野で知られている三重鎖形成を促進する様々な方法によって実現され得 る。例えば、サンプル中の核酸をインビトロで定量するための米国特許出願第０ ８／０８８，６６１号を参照のこと。これは、前記第一及び第二オリゴマーとそ のサンプルに対する有効な三重鎖形成に必要なすべての試薬を所望により含有す る１つ又はそれ以上の溶液をピペッティングすることによってなし得る。 好ましい態様では、既知のヌクレオベース配列を含有する化学的又は微生物学 的実体を検出するため方法であって、ａ）１つ又はそれ以上のチミン残基を含有 する化学的又は微生物学的実体からヌクレオベース配列を選択すること；ｂ）該 選択されたヌクレオベース配列に相補的な領域を含有するＰＮＡオリゴマーを提 供すること；ｃ）該化学的又は微生物学的実体の該選択されたヌクレオベース配 列及び該相補的なＰＮＡオリゴマーを、該選択されたヌクレオベース配列に相補 的である配列を含有するさらに別のＰＮＡオリゴマーと接触させて、三重らせん 化合物を形成すること、この際、該さらに別のＰＮＡオリゴマーは、該選択され たヌクレオベース配列のチミン残基に相補的な１つ又はそれ以上の位置に式Ｉ又 はＩＩの残基を有する；及びｄ）該三重らせん化合物を検出することを含んでな る方法が提供される。 三重らせん化合物の検出は、上記のように本発明の化合物に共有的又は非共有 的に結合している発色団又は発蛍光団のようなレポーター分子の検出によって達 成され得る。有用な結合体は、ＷＯ９５／１４７０８、ＷＯ９５／１６２０２及 びＷＯ９２／２０７０３に記載されている。別のやり方では、検出は、Ｔｍ試験 、 質量測定及び架橋試験を含む、いくつかの手段のうち任意のもので成し得る。 さらに別のＰＮＡオリゴマーは、別のやり方では、固体支持体上での固定化を 可能にするポリスチレンのような部分に結合し得る。そのような部分の１つの例 は、ストレプタビジンのコーティングを介してポリスチレンに結合し得るビオチ ンである。次いで、三重らせん構造の形成は、他のＰＮＡオリゴマー又は化学的 な実体のヌクレオベース配列のいずれかに結合したラベルによって達成され得る 。 化学的な実体とは、化学合成されたオリゴマー及び化学的又は酵素的に（例、 ＰＣＲ）増幅されたヌクレオベース配列を含有する化合物を含むと解釈される。 本発明に関連した微生物学的な実体とは、例えば、動物、脊椎動物、細菌又は植 物由来の細胞、又はＨＩＶ又はＨＢＶのようなウイルス、プラスミド又はゲノム を含むと解釈される。 これら分析方法において、さらに別のＰＮＡオリゴマーが取込まれた三重鎖構 造の形成は、分析されるサンプル、例えば、上記の化学的又は微生物学的な実体 を含有するサンプル中のその実体の存在を示すものとして解釈される。 本発明は、また、前記ポリヌクレオチドを式Ｉ又はＩＩの化合物と接触させる ことを含む、二本鎖ポリヌクレオチドの配列特異的認識のための方法を提供する 。 本発明は、さらに、二本鎖ポリヌクレオチドの配列特異的認識方法であって、 該ポリヌクレオチドを、該ポリヌクレオチドと結合して三重鎖構造を形成するオ リゴマー化合物と接触させることを含み、該オリゴマー化合物が、式Ｉ又はＩＩ を有するモノマー単位を含む方法を提供する。 本発明の追加的な利点及び新規な特徴は、以下に提示されるその実施例を検討 すれば、当業者に明らかになるだろう。ただし、それらは添付の特許請求を限定 すると解されてはならない。 実施例 化合物ＩＩないしＶの合成を下記スキーム１にまとめる。 スキームＩ実施例１ Ｎ−（３−クロロピリダジン−６−イル）−３−アミノプロピオン酸（化合物II ） 無水エタノール（２０ｍＬ）中の３，６−ジクロロピリダジン（５０.０ミリ モル、７.４５ｇ）及び３−アミノプロピオン酸（６０.０ミリモル、５.３４ｇ ）の溶液に炭酸カリウム（３０.０ミリモル、４.１５ｇ）を添加し、その懸濁液 を加熱して３時間還流させた。この混合物を室温に冷却し、その明褐色固体残滓 を酢酸エチル（３００ｍＬ）と水（３００ｍＬ）とに分配した。水相のｐＨを２ Ｍ塩酸水溶液で３.５に調整し、黄色固体を濾過し、無水エタノール（１０ｍＬ ）及びジエチルエーテル（２×２０ｍＬ）で洗浄して５.０４ｇ（５０％）を得 た。ＴＬＣでのＲｆが０.３１（ジクロロメタン／メタノール／酢酸、８５：１ ０：５）であることから、この生成物は純粋であった。 実施例２ Ｎ−（３−ベンジルオキシピリダジン−６−イル）−３−アミノプロピオン酸（ 化合物III） 水素化ナトリウム（２２.０ミリモル、０．８８ｇ）をベンジルアルコール（ １０ｍＬ）に溶解した。得られた溶液にＮ−（３−クロロピリダジン−６−イル ）−３−アミノプロピオン酸（１０.０ミリモル、２.０１ｇ）を添加し、その混 合物を約１６５℃（油浴１８０℃）に３時間加熱した。室温に冷却した後、水（ １２０ｍＬ）を添加し、水相をジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で抽出した。２ Ｍ塩酸水溶液でｐＨを４.０に調整した。その明褐色沈殿を濾過し、水（２×１ ｍＬ）で洗浄して五酸化リンで乾燥させた。得られた固体を乾燥させて表題の化 合物１.３６ｇ（４７％）を得た。ＴＬＣでのＲｆが０.１６（ジクロロメタン／ メタノール／酢酸、８５：１０：５）であることから、この生成物は純粋であっ た。 実施例３ Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）−Ｎ−［Ｎ’−｛（３−ベンジルオキシ）ピ リダジン−６−イル｝−３−アミノプロピオニル］グリシンエチル（化合物IV） Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシンエチル（１.８０ミリモル、４４ ４ｍｇ）をジメチルホルムアミド（１２ｍＬ）に溶解し、Ｎ−（３−ベンジルオ キシピリダジン−６−イル）−３−アミノプロピオン酸（１.９８ミリモル、５ ４２ｍｇ）及び３−ヒドロキシ−１,２,３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オ ン（２.０ミリモル、３２６ｍｇ）を添加した。この混合物を氷浴において冷却 し、Ｎ,Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミド（２.２ミリモル、４５４ｍｇ ）を添加した。１時間後、氷浴を取り除き、混合物を室温で一晩攪拌した。その 混合物を真空下で蒸発させ、ジクロロメタン（４０ｍＬ）に再溶解して５パーセ ント重炭酸ナトリウム水溶液（２×２０ｍＬ）で洗浄した。アセトニトリル（１ ０ｍＬ）を添加し、有機相を真空下で蒸発させた。その粗製生成物を、シリカカ ラムを用いてジクロロメタン／メタノール（９７：３）で溶出して精製した。生 成物を含む画分をプールし、真空下で蒸発させて表題の化合物０.７０４ｇ（７ ８％）を得た。ＴＬＣでのＲｆが０.４１（ジクロロメタン／メタノール、９０ ：１０）であることから、この生成物は純粋であった。 実施例４ Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）−Ｎ−［Ｎ’−（３−オキソ−２,３−ジヒ ドロピリダジン−６イル）−３−アミノプロピオニル］グリシン（化合物Ｖ） Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）−Ｎ−［Ｎ’−（（３−ベンジルオキシ） ピリダジン−６−イル）−３−アミノプロピオニル］グリシンエチル（０.８８ ミリモル、４４０ｍｇ）をテトラヒドロフラン（４.２５ｍＬ）に懸濁させた。 この懸濁液を冷却し、１Ｍ水酸化リチウム水溶液（２.５ｍＬ）を添加した。３ ０分後、ジクロロメタン（６ｍＬ）を添加し、有機相を水（６ｍＬ）で抽出した 。 ２Ｍ塩酸水溶液を滴下により添加することで水相のｐＨを４.０に調整し、その 水相をジクロロメタン（６ｍＬ）で抽出した。有機相を真空下で蒸発させ、無水 エタノール（３０ｍＬ）に溶解してパラジウム／炭素触媒（２４０ｍｇ）を添加 した。この混合物を２時間水素化し、触媒を濾別した。得られた溶液を減圧下で 濃縮した後、高真空下で乾燥させて表題の化合物３３３ｍｇ（８０％）を得た。 ＴＬＣでのＲｆが０.０７（ジクロロメタン／メタノール、８０：２０）である ことから、この生成物は純粋であった。 実施例５ 核酸標的中のチミジン（Ｔ−Ａ塩基対）に対する３−オキソ−２，３−ジヒドロ ピリダジンの特異性の評価 ビス−ＰＮＡを含むＰＮＡオリゴマーの合成をEgholmら，J．Am．Chem.Soc.， 1992，114，1895-1897及び9677-9678に説明される通りに行った。 Linked Peptide Nucleic Acidsと題する公開ＰＣＴ出願WO96／02558号も参照の こと。 ３−オキソ−２,３−ジヒドロピリダジン基を有するＰＮＡオリゴマーによる オリゴデオキシヌクレオチド中のチミジンに対する特異性を決定するため、１０ 量体標的配列を含む１６量体オリゴデオキシヌクレオチドを調製し、Hoogsteen 鎖の２つの位置で基が変化する３種類のビス−ＰＮＡで処理した。これらのビス −ＰＮＡは、２つの１０量体ＰＮＡを３つの連続する８−アミノ−３,６−ジオ キサオクタン酸基を介して結合させて調製した。これら２つの１０量体は以下に 示されるように逆平行に結合させた。Hoogsteen鎖における（標的配列によって 決定されるような）通常はプロトン化シトシンが存在する位置は、シュードイソ シトシン（Ｊ）が占めている。 これらの３種類のビス−ＰＮＡは、上記の図において変数Ｘで指定される基に 関してのみ異なっていた。各ビス−ＰＮＡの結合をＰＮＡ及びＤＮＡが約３μＭ の溶液で、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭリン酸ナトリウム、０．１ｍＭＥ Ｄ ＴＡ中のｐＨ７.０で測定した。２６０ｎｍでの吸収を５〜９０℃まで０.５℃間 隔で記録した。 Ｎ−アセチル−Ｎ−（２−アミノエチル）グリシン基は、主鎖に結合する塩基 を持たないヌル位置である。Ｎ−アセチル−Ｎ−（２−アミノエチル）グリシン 基は積み重なることも、チミンと水素結合を形成することもできない。グアニン は、ＤＮＡ三重らせんにおいてグアニンがチミン（Ｔ）と相互作用してかなり安 定なＧ：Ｔ−Ａトリプレットを形成することが報告されている（Bestら，J．Am ．Chem．Soc.，1995，117，1187-1193を参照）ため、比較として用いた。 Ｔｍの増加は、３−オキソ−２,３−ジヒドロピリダジンによるチミジンに対 する特異性の増加のためであると信じられる。この増加はグアニンよりもかなり 大きい。 実施例６ 核酸標的中のシチジン（Ｃ−Ｇ塩基対）に対する３−オキソ−２,３−ジヒドロ ピリダジンの特異性の評価 ビス−ＰＮＡを含むＰＮＡオリゴマーの合成をEgholmら，J．Am．Chem.Soc.， 1992，114，1895-1897及び9677-9678に説明される通りに行った。 Linked Peptide Nucleic Acidsと題する公開ＰＣＴ出願WO96／02558号も参照の こと。 ３−オキソ−２,３−ジヒドロピリダジン基を有するＰＮＡオリゴマーによる オリゴデオキシヌクレオチド中のチミジンに対する特異性を決定するため、10量 体標的配列を含む１６量体オリゴデオキシヌクレオチドを調製し、Hoogsteen鎖 の２つの位置で基が変化する３種類のビス−ＰＮＡで処理した。これらのビス− ＰＮＡは、２つの１０量体ＰＮＡを３つの連続する８−アミノ−３,６−ジオキ サオクタン酸（ｅｇｌ）基を介して結合させて調製した。これら２つの１０量体 は以下に示されるように逆平行に結合させた。Hoogsteen鎖における（標的配列 によって決定されるような）通常はプロトン化シトシンが存在する位置は、シュ ードイソシトシン（“Ｊ”で表示）が占めている。 これらの３種類のビス−ＰＮＡは、上に示される構造において変数Ｘで指定さ れる基に関してのみ異なっていた。各ビス−ＰＮＡの結合をＰＮＡ及びＤＮＡが 約３μＭの溶液で、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭリン酸ナトリウム、０．１ ｍＭ ＥＤＴＡ中のｐＨ７．０で測定した。２６０ｎｍでの吸収を５〜９０℃ま で０.５℃間隔で記録した。 Ｎ−アセチル−Ｎ−（２−アミノエチル）グリシン基は、主鎖に結合する塩基 を持たないヌル位置である。Ｎ−アセチル−Ｎ−（２−アミノエチル）グリシン 基は積み重なることも、シチジンと水素結合を形成することもできない。 ３−オキソ−２,３−ジヒドロピリダジンをＣ−Ｇ対の次に組み込み、ヌル基 及びシチジン基と比較して、チミジンで見られる特異性の増加（ヌル塩基につい て５７℃対４７℃、実施例５）がシチジンについて見られるかどうかを見た。Ｔ ｍの大きな低下としてシチジンで見られる効果は三重構造の不安定化であった。 ヌル塩基（Ｘ＝Ｎ−アセチル−Ｎ−（２−アミノエチル）グリシン）及びグアニ ジン基はほぼ同じ効果を示す；他に対して大きく安定化されているとも不安定化 されているとも考えられない。 実施例７ 核酸標的への配列番号２の結合の評価 ８つの異なるオリゴデオキシヌクレオチド標的配列へのビスＰＮＡ（配列番号 ２、実施例５）の結合を実施例５に説明される手順に従って測定した。特異性に ４対する不一致の効果を見るため、２つの３−オキソ−２,３−ジヒドロピリダ ジン（以下、“ＯＤＨＰ”）基に相補的であるオリゴデオキシヌクレオチド標的 配列上の位置を変更する。標的配列及び形成される三重らせん構造で得られるＴ ｍを以下に示す。 ＯＤＨＰ・Ｔ−Ａトリプレットの形成は、ＯＤＨＰをアデニン、グアニン又は シトシンと向かい合わせて配置した場合の熱的安定性の劇的な減少によって示さ れるように、非常に特異的であることが立証された。チミン（Ｔ）対照に対する 不一致当たりの溶融温度（不一致当たりのδＴｍ）の差は、Ａについて１２℃； Ｇについて１６.５℃；及びＣについて１２.０℃であった。配列番号１３（両可 変位置にウラシルを有する）でのＴｍの増加は、チミンに存在するメチル基によ る妨害を反映するものと信じられる。 実施例８ 核酸標的への配列番号６の結合の評価 ４つの異なるオリゴデオキシヌクレオチド標的配列への配列番号６の結合を実 施例５に記載される手順に従って測定した。特異性に対する不一致の効果を見る ため、２つの３−オキソ−２,３−ジヒドロピリダジン基に相補的であるオリゴ デオキシヌクレオチド標的配列上の位置を変更する。標的配列及び形成される三 重らせん構造で得られるＴｍを以下に示す。 ３−オキソ−２,３−ジヒドロピリダジン基がＣ−Ｇ塩基対と相互作用する場 合、Ｔｍから分かるように、強い不安定化効果が存在する。この効果は、このＣ −Ｇ塩基対と相補的な位置のヌル塩基、又はシチジン基では見られない。 式VI−VIIを有するモノマーシントンの合成（実施例９〜１５）を以下に示す 。 実施例９ ［１,８］ナプチリジン（Napthyridin)−２（１Ｈ）−オン３−酢酸 −７８℃に冷却したＴＨＦ（３０ｍＬ）及びＬＤＡ（２４.４ミリモル）の溶 液に、ＴＨＦ（４.０ｍＬ）中のコハク酸ジ−ｔ−ブチル（５.６０ｇ）の溶液を 徐々に添加した。１５分後、ＴＨＦ（７ｍＬ）に溶解した３−カルバルデヒド− ２−ピバロイルアミノピリジン（２.３７ｇ）を添加した。この透明黄色溶液を −７８℃で１５分間攪拌した後、室温に暖めた。その後、この溶液を飽和塩化ア ンモニウム水溶液（２００ｍＬ）に注ぎ入れ、ジクロロメタン（２×１００ｍＬ ）で抽出した。有機相を乾燥させ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、真空中で蒸発させた。３Ｍ ＨＣｌ水溶液：ＴＨＦの３：１混合液中のこのジアステレオマーアルコールの溶 液を加熱して２４時間還流させた。室温に冷却した後、ｐＨを４に調整し、生じ た固体をを濾過し、真空下で乾燥させて表題の化合物１.５２ｇ（６５％）を黄 褐色の物質として得た。 実施例１０ Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）−Ｎ−（［１,８］ナプチリジン−２（１Ｈ ）−オン−３−イル）アセチル）グリシンメチル Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシンメチル（４.５０ミリモル）をＤ ＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、［１,８］ナプチリジン−２（１Ｈ）−オン３−酢 酸（１.０２ｇ、５.００ミリモル）、ＨＯＡｔ（０.６８ｍＬ）５.００ミリモル ）及びＤＩＥＡ（０.８７１ｍＬ、５.０ミリモル）を添加した。０℃に冷却した 後、ＤＣＣ（１.１３ｇ、５.５ミリモル）を添加した。１時間後、氷浴を取り除 き、混合物を室温で一晩攪拌した。その混合物を真空中で蒸発させ、酢酸エチル （１５０ｍＬ）に再溶解して、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液（２×５０ｍＬ）、次い で水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、真空中で蒸発 させた。粗製生成物をシリカカラムで、ジクロロメタン／メタノール（９：１、 ｖ／ｖ）で溶離して精製した。生成物を含む画分をプールし、真空中で蒸発させ て表題の化合物１.０９ｇ（５８％）を黄褐色固体として得た。 実施例１１ Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）−Ｎ−（［１,８］ナプチリジン−２（１Ｈ ）−オン−３−イル）アセチル）グリシン（化合物VI） Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）−Ｎ−（［１,８］ナプチリジン−２（１ Ｈ）−オン−３−イル）アセチル）グリシンメチルの溶液に２Ｍ ＬｉＯＨ水溶 液（６.０ｍＬ、１２.０ミリモル）を添加した。２０分後、室温で水（１５ｍＬ ）をさらに添加し、ＴＨＦを真空中で除去した。２Ｍ ＨＣｌを添加することに より水相のｐＨを３.０に調整した。沈殿を濾別し、水（２×１０ｍＬ）で洗浄 し、真空中で乾燥させて表題の化合物８５２ｍｇ（８８％）を無色の粉末として 得た。 実施例１２ ３−ホルミル−２−ピバロイルアミノキノリン −７８℃のＴＨＦ（７５ｍＬ）中の２−ピバロイルアミノキノリン（５.００ ｇ、２１.９２ミリモル）の溶液に、ＢｕＬｉ（５.４８ｍＬ、ヘキサン中１０Ｍ 、５４.８０ミリモル）を添加した。２時間後、−７８℃で、Ｎ−ホルミルモル ホリン（３.７９ｇ、３７.８８ミリモル）を添加することによりジアニオンの反 応を停止させた。この反応混合物を室温に暖め、２Ｍ ＨＣｌ水溶液（２０ｍＬ ）に注ぎ入れた。２Ｍ ＨＣｌを添加することにより水相のｐＨを７.０に調整し 、 水相を水（１００ｍＬ）で希釈してジエチルエーテル（２×１００ｍＬ）で抽出 した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、真空中で蒸発させて乾燥させた。この 粗製生成物を石油エーテル／酢酸エチルから再結晶し、表題の化合物２.９２ｇ （５２％）を得た。 実施例１３ ベンゾ［ｂ］［１,８］ナプチリジン−２（１Ｈ）−オン３酢酸 −７８℃に冷却したＴＨＦ（１５ｍＬ）及びＬＤＡ（ＴＨＦ中２Ｍ、１５.９ ミリモル、７.９５ｍＬ）の溶液に、ＴＨＦ（３.０ｍＬ）中のコハク酸ジ−ｔ− ブチル（１５.９ミリモル、３.２８ｇ）の溶液を徐々に添加した。１５分後、− ７８℃で、ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解した３−ホルミル−２−ピバロイルアミノ キノリン（１.９２ｇ、７.５０ミリモル）を添加した。この透明黄色溶液を−７ ８℃で１５分間攪拌した後、室温に暖めた。この溶液を飽和塩化アンモニウム水 溶液（２００ｍＬ）に注ぎ入れ、ジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で抽出した 。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、真空中で蒸発させた。このジアステレオマ ーアルコールの粗製生成物をＴＨＦ（５ｍＬ）及びＨＣｌ（３Ｍ、水溶液）の混 合液中で加熱して２４時間還流させ、次いで水（１００ｍＬ）に注ぎ入れてＫ₂ ＣＯ₃で中和した。黄褐色の沈殿を水（２×２５ｍＬ）で洗浄し、真空中で一晩 乾燥させた。その粗製生成物（１.６０ｇ）をアセトニトリル（５０ｍＬ）中で 加熱し、熱いまま濾過した。生成物をエーテル（２×２５ｍＬ）で洗浄し、真空 中で乾燥させて、ＨＰＬＣ（２６０ｎｍ）によって純度６１％と判定された物質 １.５０ｇ（７９％）を得た。 実施例１４ Ｎ−（ベンゾ［ｂ］［１,８］ナプチリジン−２（１Ｈ）−オン３−イル）−Ｎ −（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシンメチル Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシンメチル（０.８１２ｇ、３.５ミリ モル）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解し、ベンゾ［ｂ］［１,８］ナプチリジン− ２（１Ｈ）−オン３酢酸（８８３ｍｇ）３.５ミリモル）を添加した。この混合 物を氷浴において冷却し、ＨＢＴＵ（１.５２ｇ、４．０ミリモル）を添加した 。１時間後、氷浴を取り除き、混合物を室温で一晩攪拌した。その混合物を真空 中で蒸発させ、ジクロロメタン（１００ｍＬ）に再溶解して飽和ＮａＨＣＯ₃水 溶液（２×５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、真空中で 蒸発させた。粗製生成物をシリカカラムで、ジクロロメタン／メタノール（９７ ：３、ｖ／ｖ）で溶出して精製した。生成物を含む画分をプールし、真空中で蒸 発させて表題の化合物３４５ｍｇ（２１％）を黄褐色固体として得た。 実施例１５ Ｎ−（ベンゾ［ｂ］［１,８］ナプチリジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル）ア セチル）−Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシン（化合物VIII） ＴＨＦ（４.０ｍＬ）中のＮ−（ベンゾ［ｂ］［１,８］ナプチリジン−２（１ Ｈ）−オン３−イル）−Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシンメチル（０ . ４２６ミリモル、２００ｍｇ）の溶液に２Ｍ水溶液（１.０７ｍＬ、２.１４ミリ モル）を添加した。１５分後、室温で水（７.０ｍＬ）をさらに添加し、ＴＨＦ を真空中で除去した。水相をジクロロメタン（２×２ｍＬ）で抽出し、２Ｍ Ｈ Ｃｌ水溶液を添加することによりｐＨを３.０に調整した。形成された沈殿を濾 別し、水（２×５ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥させて表題の化合物１７６ｍｇ （９１％）を黄褐色粉末として得た。 実施例１６ Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）−Ｎ−（キノリン−２（１Ｈ）−オン−３− イル）アセチル）グリシンメチル Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシンエチル（４４３ｍｇ）１.８ミリ モル）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解し、キノリン−２（１Ｈ）−オン−３−酢酸 （Shanmugam，P.，Naturforsch，1973，196，551-553の手順によって調製）（４ ０６ｍｇ、２.０ミリモル）及びＨＯＡｔ（２７２ｍｇ、２.０ミリモル）を添加 した。この混合物を氷浴で冷却し、ＤＣＣ（４１３ｇ、２.０ミリモル）を添加 した。１時間後、氷浴を取り除き、混合物を室温で一晩攪拌した。その混合物を 真空中で蒸発させ、酢酸エチル（１００ｍＬ）に再溶解して飽和ＮａＨＣＯ₃（ ２×３０ｍＬ）、次いで水（３０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳ Ｏ₄）、真空中で蒸発させた。粗製生成物をシリカカラムで、ジクロロメタン／ メタノール（９：１、ｖ／ｖ）で溶出して精製した。生成物を含む画分をプール し、真空中で蒸発させて表題の化合物４７６ｍｇ（６０％）を黄褐色固体として 得た。 実施例１７ Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）−Ｎ−（キノリン−２（１Ｈ）−オン−３− イル）アセチル）−グリシン（化合物VII） ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＮ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）−Ｎ−（キノリン −２（１Ｈ）−オン−３−イル）アセチル）グリシンメチル（４２７ｍｇ、０. ９９ミリモル）に２ＭＬｉＯＨ水溶液（２.５ｍＬ、５ミリモル）を添加した。 ２０分後、室温で、水（１０ｍＬ）をさらに添加した。ＴＨＦを真空中で蒸発さ せ、２ＭＨＣｌ水溶液（２.５ｍＬ）を激しく攪拌しながら添加した。沈殿を濾 別し、水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥させて表題の化合物２８０ｍ ｇ（７４％）を無色の粉末として得た。 実施例１８ Ｎ−［（２−ヒドロキシ−１０−Ｈ−ピリミド［５,４−ｂ］［１,４］ベンゾチ アジン−１−イル）アセチル］−Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシンエ チル ２−ヒドロキシ−１０−Ｈ−ピリミド［５,４−ｂ］［１,４］ベンゾチアジン （６５３ｍｇ、３.０ミリモル）をＤＭＦ（３０ｍＬ）に懸濁させ、ＮａＨ（鉱 物油中６０％、１３２ｍｇ、３．３ミリモル）を一度に添加した。１５分後、Ｎ −ブロモアセチル−Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）−グリシンエチル（１. １０ｇ、３.３ミリモル）を添加した。この混合物を室温で２時間攪拌し、真空 中で蒸発させ、ジクロロメタン（２００ｍＬ）に再溶解し、飽和ＮａＨＣＯ₃水 溶液（１００ｍＬ）及び飽和ＮａＣｌ水溶液で１回洗浄した。その混合物を乾燥 させ（ＭｇＳＯ₄）、真空中で蒸発させて乾燥させた。その粗製物質を、メタノ ール／ジクロロメタン（１：９、ｖ／ｖ）を溶離液として用いてシリカゲルカラ ムで精製し、表題の化合物８５３ｍｇ（５７％）を得た。 実施例１９ Ｎ−［（２−ヒドロキシ−１０−Ｈ−ピリミド［５,４−ｂ］［１,４］ベンゾチ アジン−１−イル）アセチル］−Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシン Ｎ−［（２−ヒドロキシ−１０−Ｈ−ピリミド［５,４−ｂ］［１,４］−ベン ゾチアジン−１−イル）アセチル］−Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシ ンエチル（２０１ｍｇ、０.４ミリモル）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、Ｌｉ ＯＨ（２Ｍ、水溶液、１.０ｍＬ）を添加した。１５分後、室温で水（１０ｍＬ ）を添加してＴＨＦを真空中で蒸発させ、ＨＣｌ（２Ｍ、水溶液、１.０ｍＬ） を激しく攪拌しながら添加した。固形黄色物質を濾別し、真空中で乾燥させて表 題の化合物１７３ｍｇ（９１％）を得た。 実施例２０ Ｎ−（ベンゾ［ｂ］［１,８］ナプチリジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル）ア セチル）−Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシンモノマーを選択された位 置に有するＰＮＡＩＯ量体のＰＮＡ及びＤＮＡ標的配列へのハイブリダイゼーシ ョン ０、１、又は３つの三環系Ｎ−（ベンゾ［ｂ］［１,８］ナプチリジン−２（ １Ｈ）−オン−３−イル）アセチル）−Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリ シンモノマー（実施例１５）が選択された位置に組み込まれているＰＮＡ１０量 体のハイブリダイゼーションを、ＰＮＡ（配列番号２１）及びＤＮＡ（配列番号 ２２）標的配列の両者に対して測定した。ＰＮＡ配列は前出のEgholmに説明され る通りに調製した。 これら３つのＰＮＡは、下記表において変数ｂＴで指定される基に関してのみ 異なっていた。各ＰＮＡの結合をＰＮＡ及びＤＮＡ又はＰＮＡ及びＰＮＡが約３ μＭの溶液中で、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭリン酸ナトリウム、０.１ｍＭ ＥＤＴＡ中のｐＨ７.０で測定した。２６０ｎｍでの吸収を５〜９０℃まで０. ５℃間隔で記録した。 各変数（Ｅ１）は組み込まれたＮ−（ベンゾ［ｂ］［１,８］ナプチリジン− ２（１Ｈ）−オン−３−イル）アセチル）−Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル） グリシンモノマーである。ＰＮＡ−ＰＮＡ二重鎖におけるＮ−（ベンゾ［ｂ］［ １,８］ナプチリジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル）アセチル）−Ｎ−（２− Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシンモノマーの効果は無効であり、例えば、不安定 化しない。ＰＮＡオリゴマーにおけるこれら３つの三環系モノマーの効果はＤＮ Ａ標的との相互作用に対して大きな効果を有し、Ｔｍの８℃の増加を生じる。 実施例２１〜３９ ３−ホルミル−６−メチル−２−（ピバロイルアミノ）ピリジン及び３−ホル ミル−５−メチル−２−（ピバロイルアミノ）ピリジンはTurner，J.A．J．Org ．Chem．1990，55，4744-4750に従って調製した。Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエ チル）グリシンメチルはDueholmら，Org．Prep．and Proc．Int.，1993，25，45 7-461に従って調製した。以下の化学薬品は受け取ったまま用いた：ブチルリ チウム（ヘキサン中２.５Ｍ、Aldrich ２３,０７１−５）、ジシクロヘキシルカ ルボジイミド(ＤＣＣ)(Aldrich D、０００−２)、ジイソプロピルアミン(Aldric h １１,００１−９）及び３−ヒドロキシ−１,２,３−ベンゾトリアジン−４（ ３Ｈ）−オン（ＤｈｂｔＯＨ）（Aldrich ３２,７９６−４）。 コハク酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルは、コハク酸塩化物（６１ｇ、０.４０モル） をジメチルアニリン（０.８４モル、１０１ｇ）、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール （５７ｇ、０.７５モル）及びジエチルエーテル（２００ｍＬ）の還流混合液に 滴下により添加することで調製した。生じた溶液を還流下で２時間攪拌し、水（ ２００ｍＬ）を添加することにより反応を停止させた。有機相を分離し、１０％ Ｈ₂ＳＯ₄（２５ｍＬ）及びＮａＨＣＯ₃（１００ｍＬ）で２回抽出し、乾燥（Ｍ ｇＳＯ₄）させて真空中で油状になるまで蒸発させた。クーゲルローア（Kugelro hr）蒸留（１１６℃、１６ｍｍＨｇ）により、所望の生成物（１１ｇ、２２％） を白色の低融点固体として得た。 核酸合成用のホスホロアミダイトはCruaChemから入手した。ＴＬＣはシリカ６ ０（Merck ５５５４アルミニウムシート）で、カラムクロマトグラフィーはシリ カ６０（２３Ｏ−４ＯＯメッシュＡＳＴＭ）（Merck ９３８５）で行った。¹Ｈ 及び¹³Ｃｎｍｒスペクトルは５ｍｍ管において２５０ＭＨｚ（Bruker ＡＭＸ２ ５０）又は４００ＭＨｚ（Varian Unity ４００）のいずれかで得た；化学シフ トは低磁場方向が正である。ＦＡＢ質量スペクトルはJeol Ｈｘ１１０／１１０ 質量分析計で記録した。全てのＰＮＡオリゴマーは、３,５−ジメトキシ−４− ヒドロキシケイ皮酸をマトリックスとして用いて、陽イオンモード稼働のKratos Compact MALDIIIで記録するＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分光法によって特徴付けた 。Ｔ_m値はGilford Response分光計で得、ＰＮＡ及びＤＮＡが約３μＭの溶液で 、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｎａ₂ＨＰＯ₄、０.１ｍＭＥ ＤＴＡ中のｐＨ ７.０で測定した：２６０ｎｍでの吸収を５〜９０℃まで０.５℃間隔で記録した 。ＰＮＡのオリゴマー化は前出のDueholmに従来記載される通りに行った。ＤＮ Ａのオリゴマー化は、標準プロトコルに従い、MilliGen/Biosearch ８７００Ｄ ＮＡ合成機で行った。ＰＮＡ配列は前出のEgholmに説明される通り に調製した。 式IXを有するモノマーシントンの調製を以下に示す（実施例２１〜３９）。 ここで： モノマー Ｒ１１ Ｒ１２ Ｒ１７ Ｅ１（ｂＴ） Ｈ Ｈ Ｈ Ｅ２（７−Ｃｌ−ｂＴ） Ｃｌ Ｈ Ｈ Ｅ３（６−Ｃｌ−ｂＴ） Ｈ Ｃｌ Ｈ Ｅ４（７−ＣＨ₃−ｂＴ） ＣＨ₃ Ｈ Ｈ Ｅ５（６−ＣＨ₃−ｂＴ） Ｈ ＣＨ₃ Ｈ Ｅ６（５−ＣＨ₃−ｂＴ） Ｈ Ｈ ＣＨ₃ アンチセンス及び抗原によって遺伝子の発現を阻害するアプローチは、生理学 的条件下での一本鎖及び二本鎖核酸の効率的な特異的標的指向性を頼みとする。 オリゴヌクレオチドによるｄｓＤＮＡの効率的な三重鎖標的指向性はシトシンＮ ３のプロトン化に依存し、したがって、このｐＨ依存性を排除するために多数の 核酸塩基が合成され、評価されている。このクラスの核酸塩基のうちで最も成功 している構成要素は、５−メチルシトシン、¹シュードイソシトシン²及び８−オ キソアデニンである。５−メチルシトシンはＣ−５置換基の結果としてＮ３の塩 基性が増加しているシトシン模倣体のクラスを代表するが、シュードイソシトシ ン及び８−オキソアデニンはシトシンの“恒久的にプロトン化された”類似体で あり、したがって、実質的にｐＨとは無関係に三重構造を形成することが可能で ある。 幾つかの好ましい態様において、本発明は、１,８−ナフチリジン−２,７−（ Ｉ,８Ｈ）−ジオン核酸塩基を含むＰＮＡを提供し、この核酸塩基は、プロトン 化されたシトシンの機能を模倣する能力に加えて、拡大した芳香族表面積を有す る。 以下の例においては、モノマーＥ１〜Ｅ６をＰＮＡの１０量体オリゴマーに、 離れた部位に加えて隣接する部位に組み込むことにより、１,８−ナフチリジン −２（１Ｈ）−オン複素環系の二重鎖認識特性を評価した。これらのＰＮＡとＤ ＮＡ、ＰＮＡ及びＲＮＡ標的との二重鎖は、ワトソン・クリックの相補的ＰＮＡ −ＤＮＡ、ＰＮＡ−ＰＮＡ、又はＰＮＡ−ＲＮＡオリゴマー認識系とは異なるよ うにアデニンが１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン単位と向かい合うよう に設計した。異なるように置換された１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン 単位を含む複合体の熱的安定性を、対応する非置換１,８−ナフチリジン−２（ １Ｈ）−オン及びチミン含有対照と比較した。 化合物Ｅ１〜６の調製を下記スキーム２に一般的に示す。 （ａ）ＬＤＡ及びコハク酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルを用いてジエチルエーテル中、 −７８℃で予め形成されたコハク酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルのエノレートをＴＨＦ 中の出発化合物の予備冷却溶液（−７８℃）に添加し、最初に−７８℃で、次い で室温で攪拌した；この反応からの粗製生成物を３ＭＨＣｌ水溶液を用いて還流 温度で処理した；（ｂ）Ｎ−（２Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシンメチル、Ｄｈ ｂｔＯＨ及びＤＣＣ；又はＤＭＦ中のＨＢＴＵ、室温で一晩；（ｃ）ＴＨＦ中の ２ＭＬｉＯＨ、室温。 実施例２１ ６−アミノ−２−（ピバロイルアミノ）ピリジン ジオキサン（２５０ｍＬ）中の２,６−ジアミノピリジン（５０.０ｇ、０.４ ６モル）の溶液に、ジオキサン（５０ｍＬ）に溶解した塩化ピバロイル（２７. ９ｇ、０.２３モル）を徐々に（１時間）添加した。得られた混合物を２時間攪 拌し、白色沈殿（２,６−ジアミノピリジン塩酸塩）を濾別した。有機相を真空 中で蒸発させて乾燥させ、その粗製生成物をｎ−ヘキサン／酢酸エチルから再結 晶して所望の生成物（３２.８３ｇ、７４％）を無色の結晶（ｍｐ１４０−１４ １℃）として得た。 実施例２２ ６−クロロ−２−（ピバロイルアミノ）ピリジン 濃ＨＣｌ水溶液（１５０ｍＬ）中の６−アミノ−２−（ピバロイルアミノ）ピ リジン（２８.００ｇ、０.１４５モル）の予め冷却した（−１０℃）懸濁液に、 水（８ｍＬ）に溶解した亜硝酸カリウム（１４.８１ｇ、０.１７４モル）を１. ５時間にわたって添加した。得られた反応混合物を−１０℃、窒素の下で５時間 攪拌した後、濃ＮａＯＨ水溶液を添加することによりｐＨを９に調製した。この 水溶液を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、有機画分を２Ｍ ＮａＯＨ（ ３ ×４０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ₄）させて真空中で蒸発させ 、ｎ−ヘキサン／酢酸エチルから再結晶して所望の生成物（１７.７０ｇ、５８ ％）を白色粉末（ｍ.ｐ.８６−８７℃）として得た。 実施例２３ （７−クロロ−１,８−ナフトフィリジン（naphtphyridin）−２（１Ｈ）−オキ ソ−３−イル）酢酸 ジエチルエーテル（１５０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（２２.０３ｇ、 １００ミリモル）の予め冷却した（−７８℃）溶液にＢｕＬｉ（ヘキサン中２. ５Ｍ）（４０ｍＬ、１００ミリモル）を添加し、その溶液をこの温度で１５分間 攪拌した後、ジエチルエーテル（２０ｍＬ）に溶解したコハク酸ジ−ｔｅｒｔ− ブチル（１０.８３ｇ、５０.０ミリモル）を徐々に添加した。−７８℃で２０分 後、乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ、ＬＡＢ−ＳＣＡＮ Ｃ２５２０、モレキュラーシー ブで乾燥）に溶解した６−クロロ−３−ホルミル−２−（ピバロイルアミノ）ピ リジン（Turner，J．A.，J．Org．Chem.，1990，55，4744-4750）（１１.３２ｇ 、５０.０ミリモル）を徐々に添加した。その黄色溶液を−７８℃で３０分間攪 拌した後、室温に暖めた。次に、その溶液をＮＨ₄Ｃｌ（飽和、水溶液）（２０ ０ｍＬ）に注ぎ入れ、水層を分離してジエチルエーテル（２×１００ｍＬ）で２ 回抽出した。合わせた有機層を水（１００ｍＬ）で１回、食塩水（１００ｍＬ） で１回洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させて真空中で蒸発させた。そのジアステレオ マーアルコールの粗製生成物をジオキサン（１５０ｍＬ）及びＨＣｌ（３Ｍ、水 溶液）（１５０ｍＬ）に溶解し、６時間還流させた。得られた黄色沈殿を濾別し 、水で１回、ジエチルエーテルで１回洗浄し、真空中で乾燥させて所望の生成物 を黄色固体として得た（１０.９１ｇ、８９％）。 実施例２４ Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−アミノエチル）−Ｎ−（７ −クロロ−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オキソ−３−イル）アセチルグ リシンメチル （７−クロロ−１,８−ナフトフィリジン−２（１Ｈ）−オキソ−３−イル） 酢酸（０.５０ｇ、２.１０ミリモル）及びＤｈｂｔＯＨ（０.３４ｇ、２.１０ミ リモル）を乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶解した。この混合物を氷上で冷却し、Ｄ ＣＣ（０.４３ｇ、２.１０ミリモル）を添加して４０分間攪拌した。ＤＭＦ（５ ｍＬ）に溶解したＮ−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル ）グリシンメチル（０.４６ｇ、２.１０ミリモル）を添加した。１時間後、氷浴 を取り除き、混合物を室温で一晩攪拌した。その混合物を真空中で蒸発させ、Ｅ ｔＯＡｃ(2５ｍＬ）に再溶解し、濾過してＮａＨＣＯ₃（５％、水溶液）（３× ２５ｍＬ）及び食塩水（２×２５ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ₄ ）させ、濾過して真空中で蒸発させた。その粗製生成物をシリカカラムで、ジク ロロメタン／メタノール（９：１ｖ／ｖ）で溶出して精製した。生成物を含む画 分を真空中で蒸発させ、所望の生成物（０.６１ｇ、６４％）を僅かに黄色の固 体（ｍｐ６８−６９℃）として得た。 ；この化合物は２種類の回転異性体として存在する；少数回転異性体の化学シフ トは括弧内に示す)： 実施例２５ Ｎ−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−アミノエチル）−Ｎ−（７ −クロロ−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オキソ−３−イル）アセチルグ リシン メチルＮ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−アミノエチル）− Ｎ−（７−クロロ−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オキソ−３−イル）ア セチルグリシン（０.６０７ｇ、１.３４ミリモル）をＴＨＦ（１０ｍＬｍＬ、Ｌ ＡＢ−ＳＣＡＮ Ｃ２５２０、モレキュラーシーブで乾燥）に溶解し、ＬｉＯＨ （０.４２８Ｍ、水溶液）（６.９０ｍＬ、２.９５ミリモル）を添加した。３０ 分後、室温で水（１０ｍＬ）をさらに添加し、ＴＨＦを真空中で除去した。ＨＣ ｌ（２Ｍ、水溶液）を添加することによりこの水溶液のｐＨを３.０に調整した 。 白色沈殿を濾別し、水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥させて生成物（ ３５５ｍｇ、６０％）を僅かに黄色の粉末（ｍｐ１７６−７８℃）として得た。 ；この化合物は２種類の回転異性体として存在する；少数回転異性体の化学シフ トは括弧内に示す)：実施例２６ （７−メチル−１,８−ナフチリジン−２−オン−３−イル）酢酸 ジエチルエーテル（１２５ｍＬ、モレキュラーシーブで乾燥）中のＮ,Ｎ−ジ イソプロピルアミン（４.８４ｇ、４８.０ミリモル）の予め冷却した（−７８℃ ）の溶液にＢｕＬｉ（ヘキサン中２.５Ｍ）（１９.０ｍＬ）４８.０ミリモル） を添加し、その溶液をこの温度で１５分間攪拌した後、ジエチルエーテル（１０ ｍＬ）に溶解したコハク酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５.７５ｇ、０.０２５０モル ）を徐々に添加した。−７８℃で２０分後、乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ、ＬＡＢ−Ｓ ＣＡＮ Ｃ２５２０、モレキュラーシーブで乾燥）に溶解した３−ホルミル−６ −クロロ−２−（ピバロイルアミノ）ピリジン（５.００ｇ、２３.０ミリモル） を徐々に添加した。得られた黄色溶液を−７８℃で３０分間攪拌した後、室温に 暖めた。次に、その溶液をＮＨ₄Ｃｌ（飽和、水溶液）（１００ｍＬ）に注ぎ入 れた。水層を分離し、ジエチルエーテル（３×５０ｍＬ、モレキュラーシーブで 乾燥）で抽出した。合わせた有機層を水（５０ｍＬ）で１回、食塩水（５０ｍＬ ）で１回洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させて真空中で蒸発させた。そのジアステレ オマーアルコールの粗製生成物をＨＣｌ（３Ｍ、水溶液）（８０ｍＬ）に溶解し 、３.５時間還流させた。水相をジエチルエーテル（３×７５ｍＬ、モレキュラ ーシーブで乾燥）、クロロホルム（３×５０ｍＬ）で洗浄した後、Ｋ₂ＣＯ₃を添 加することによりｐＨ７に調整した。生じた黄色沈殿を濾別し、水で１回、ジエ チルエーテルで１回洗浄し、真空中で乾燥させて所望の生成物（１.２５ｇ、２ ７％）を黄色固体として得た。ｍｐ．＞２５０℃。 ；この化合物は２種類の回転異性体として存在する；少数回転異性体の化学シフ トは括弧内に示す)： 実施例２７ Ｎ−（（７−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル）ア セチル）−Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）グ リシンメチル ＤＭＦ（２５ｍＬ）中の（７−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）− オン−３−イル）酢酸（０.９９５ｇ、４.６０ミリモル）及びＤｈｂｔＯＨ（０ .７４４ｇ、４.６０ミリモル）の予め冷却した（０℃）溶液にＤＣＣ（１.０４ ｇ、５.００ミリモル）を添加し、その混合物を０℃で４０分間攪拌した後、Ｎ −（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）グリシンエチル （１.１０ｇ、５.０ミリモル）を添加した。この混合物を室温で一晩攪拌し、真 空中で蒸発させ、酢酸エチル（７５ｍＬ）に再溶解して５％ＮａＨＣＯ₃（３× ２５ｍＬ）及び食塩水（２×２５ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥 させ、濾過して真空中で蒸発させた。粗製生成物を、ジクロロメタン／メタノー ル（９０：１０ｖ／ｖ）を溶離液として用いてシリカで精製した。生成物を含む 画分をプールし、真空中で蒸発させて所望の生成物（７９０ｍｇ、４１％）（ｍ ｐ９８−１００℃）を得た。 ；この化合物は２種類の回転異性体として存在する；少数回転異性体の化学シフ トは括弧内に示す)： 実施例２８ Ｎ−（（７−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル）ア セチル）−Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）グ リシン ＴＨＦ（１０ｍＬ、ＬＡＢ−ＳＣＡＮ Ｃ２５２０、モレキュラーシーブで乾 燥）中のＮ−（（７−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン−３− イル）アセチル）−Ｎ−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル ）グリシンメチル（０.７７５ｇ、１.７９ミリモル）の溶液にＬｉＯＨ（２Ｍ、 水溶液）（２.０ｍＬ）を添加した。得られた溶液を室温で３０分間攪拌し、水 を さらに添加してＴＨＦを真空中で除去した。その水溶液のｐＨをｐＨ３.０に調 整して沈殿を集め、濾過により洗浄（２×１０ｍＬ）して所望の生成物（４２４ ｍｇ、５６％）を無色の沈殿（ｍｐ９４−９５℃）として得た。 ；この化合物は２種類の回転異性体として存在する少数回転異性体の化学シフト は括弧内に示す）：実施例２９ ６−Ｍエチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オキソ−３−酢酸 ジエチルエーテル（７５ｍＬ、モレキュラーシーブで乾燥）中のジイソプロピ ルアミン（３５.７ミリモル、３.６１ｇ）の予め冷却した（−７８℃）溶液にＢ ｕＬｉ（ヘキサン中２.５Ｍ）（３１.５ミリモル、１２.６ｍＬ）を添加し、得 られた溶液を室温で１５分間攪拌した後、ジエチルエーテル（５０ｍＬ、モレキ ュラーシーブで乾燥）に溶解したコハク酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１８.７ミリ モル、３.８５ｇ）を徐々に添加した。−７８℃で３０分後、ＴＨＦ（３０ｍＬ 、ＬＡＢ−ＳＣＡＮ Ｃ２５２０、モレキュラーシーブで乾燥）に溶解した２,２ −ジメチル−Ｎ−（３−ホルミル−５−メチル−２−ピリジニル）プロパンアミ ド（１７ミリモル、３.７４ｇ）を徐々に添加し、生じた黄色混合物の攪拌を− ７８℃でさらに３０分継続した後、その溶液を室温に暖めてＮＨ₄Ｃｌ（飽和、 水溶液）（１００ｍＬ）に注ぎ入れた。水相をジエチルエーテル（５０ｍＬ、モ レキュラーシーブで乾燥）で３回抽出し、有機抽出物を食塩水（５０ｍＬ）で洗 浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させて真空中で蒸発させた。粗製生成物を酢酸エチル／ ヘキサンから再結晶してジアステレオマー混合物（３.３６ｇ、４４％）を得、 それを真空中で乾燥させた後そのまま用いた。ジオキサン（２５ｍＬ）中の上記 ジ アステレオマー混合物（７.０ミリモル、３.１５ｇ）にＨＣｌ（３Ｍ、水溶液） （２５ｍＬ）を添加し、得られた溶液を還流下で１０時間攪拌した。ジオキサン を真空中で蒸発させ、水（２５ｍＬ）をさらに添加し、ｐＨを８.０に調整した 後、ジクロロメタン（５０ｍＬ）で抽出した。水相を１５分間激しく攪拌して残 留するジクロロメタンを除去し、ＨＣｌ（２Ｍ、水溶液）を添加することにより 水相のｐＨを４.０に調整した。沈殿を濾別して水（２×５ｍＬ）で洗浄し、真 空中で乾燥させて所望の生成物を無色の粉末として得た（８７８ｍｇ、５７％） 。 実施例３０ Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）−Ｎ−（６− メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オキソ−３−イル）アセチルグリ シンメチル ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の６−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オ キソ−３−酢酸（３.３０ミリモル、７１９ｍｇ）の溶液にＤＩＥＡ（３.３０ミ リモル、４２７ｍｇ）及びＨＢＴＵ（３.３０ミリモル、１.２５ｇ）、次いでＮ −（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）グリシンメチル （３.００ミリモル、６９６ｍｇ）を添加し、この混合物を室温で２時間攪拌し た。その混合物を真空中で蒸発させ、ジクロロメタン（１００ｍＬ）に再溶解し て５％ＮａＨＣＯ₃（２×５０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥させ 、濾過して真空中で蒸発させ、その粗製生成物を、ジクロロメタン／メタノール （９５：５ｖ／ｖ）を溶離液として用いてシリカで精製した。生成物を含む画分 を真空中で蒸発させ、所望の生成物（５５１ｍｇ、４１％）を無色の泡状物質と して得た。 ；この化合物は２種類の回転異性体として存在する；少数回転異性体の化学シフ トは括弧内に示す)： 実施例３１ Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）−Ｎ−（６− メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル）アセチルグリシ ン ＴＨＦ（８ｍＬ、ＬＡＢ−ＳＣＡＮ Ｃ２５２０、モレキュラーシーブで乾燥 ）に溶解したＮ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル） −Ｎ−（６−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オキソ−３−イル） アセチルグリシンメチル（１.０ミリモル、４０５ｍｇ）の溶液にＬｉＯＨ（２ Ｍ、水溶液）を添加し、得られた溶液を室温で１５分間攪拌した。水（８ｍＬ） をさらに添加してＴＨＦを真空中で蒸発させ、ＨＣｌ（２Ｍ、水溶液）を添加す ることによりその水溶液のｐＨを３.０に調整した。無色の粉末を濾別して水（ ２×５ｍＬ）で洗浄し、所望の生成物（２２８ｍｇ、８４％）をＨＰＬＣ（２６ ０ｎｍ）で純粋な無色の粉末として得た。 ；この化合物は２種類の回転異性体として存在する；少数回転異性体の化学シフ トは括弧内に示す)： 実施例３２ ６−クロロ−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オキソ−３−酢酸 ジエチルエーテル（１００ｍＬ、モレキュラーシーブで乾燥）中のジイソプロ ピルアミン（４６.２ミリモル、４.６７ｇ）の予め冷却した（−７８℃）の溶液 にＢｕＬｉ（ヘキサン中２.５Ｍ）（４６.２ミリモル、１８.５ｍＬ）を添加し 、生じた溶液を室温で１５分間攪拌した後、ジエチルエーテル（２０ｍＬ、モレ キュラーシーブで乾燥）に溶解したコハク酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２４.２ミ リモル、４.９９ｇ）を徐々に添加した。−７８℃で２０分後、ＴＨＦ(５０ｍＬ 、ＬＡＢ−ＳＣＡＮ Ｃ２５２０、モレキュラーシーブで乾燥）に溶解した２,２ −ジメチル−Ｎ−（５−クロロ−３−ホルミル−２−ピリジニル）プロパンアミ ン（２２.０ミリモル、５.０３ｇ）を徐々に添加し、生じた黄色混合物の攪拌を −７８℃で６０分間継続した後、その溶液を室温に暖めてＮＨ₄Ｃｌ（飽和、水 溶液）（１００ｍＬ）に注ぎ入れた。水相をジエチルエーテル（５０ｍＬ、モレ キュラーシーブで乾燥）で３回抽出し、有機抽出物を食塩水（５０ｍｌ）で洗浄 し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させて真空中で蒸発させた。その粗製生成物を酢酸エチル ／ヘキサンから再結晶してジアステレオマー混合物を得、真空中で乾燥させた後 それをそのまま用いた；この粗製ジアステレオマー混合物をジオキサン（７５ｍ Ｌ）に溶解し、ＨＣｌ（３Ｍ、水溶液）（７５ｍＬ）を添加した。得られた溶液 を還流下で６時間攪拌し、室温に冷却して濾過した。ジオキサンを真空中で蒸発 させ、Ｋ₂ＣＯ₃を添加することにより水相のｐＨを８.０に調整して、その水相 をジエチルエーテル（２５ｍＬ、モレキュラーシーブで乾燥）で抽出した。その 後、ＨＣｌ（４Ｍ、水溶液）を添加することにより水相のｐＨをｐＨ３.０に調 整し、僅かに黄褐色の沈殿を濾別して水（２×２０ｍＬ）で洗浄した。この固体 を真空中で乾燥させて所望の化合物（３.２１ｇ、５８.２％）を白色固体として 得た。 実施例３３ Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）−Ｎ−（６− クロロ−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オキソ−３−イル）アセチルグリ シンメチル ＤＭＦ中の６−クロロ−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オキソ−３−酢 酸（３１３ｍｇ、１.２５ミリモル）、トリエチルアミン（３０４ｍｇ、３.０ミ リモル）、ＤｈｂｔＯＨ（２０４ｍｇ、１.２５ミリモル）及びＮ−（２−（ｔ ｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）グリシンエチル塩酸塩（２８ ３ｍｇ、１.０ミリモル）の溶液にＤＣＣ（２５８ｍｇ、１.２５ミリモル）を添 加した。得られた溶液を室温で一晩攪拌し、真空中で蒸発させた。その混合物を ジクロロメタン（１５０ｍＬ）に再溶解して濾過し、５％ＮａＨＣＯ₃（２×５ ０ｍＬ）、次いで食塩水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥さ せ、濾過して真空中で蒸発させた。その粗製生成物を、酢酸エチル（９５：５ｖ ／ｖ）を溶離液として用いてシリカで精製した。生成物を含む画分を真空中で蒸 発させ、所望の生成物（２９４ｍｇ、６３.０％）を無色の粉末として得た。 ；この化合物は２種類の回転異性体として存在する；少数回転異性体の化学シフ トは括弧内に示す)：実施例３４ Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）−Ｎ−（６− メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル）アセチルグリシ ネート Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）−Ｎ−（６ −クロロ−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オキソ−３−イル）アセチルグ リシンメチル（３７４ｍｇ、０.８ミリモル）の溶液にＬｉＯＨ（２Ｍ、水溶液 ）を添加した。得られた混合物を室温で１５分間攪拌した。その後、水（８ｍＬ ）をさらに添加してＴＨＦを真空中で蒸発させ、ＨＣｌ（４Ｍ、水溶液）を添加 することにより水相のｐＨを３.０に調整し、沈殿を濾別して水（２×５ｍＬ） で洗浄した。得られた溶液を室温で１５分間攪拌し、水（８ｍＬ）をさらに添加 してＴＨＦを真空中で蒸発させ、ＨＣｌ（２Ｍ、水溶液）を添加することにより 水相のｐＨを３.０に調整した。白色沈殿を濾別して水（２×５ｍＬ）で洗浄し 、真空中で乾燥させ、所望の生成物（２８１ｍｇ、８０.２％）を、ＨＰＬＣ（ ２６０ｎｍ）で純粋な無色の粉末として得た。 ；この化合物は２種類の回転異性体として存在する；少数回転異性体の化学シフ トは括弧内に示す)：実施例３５ ３−ホルミル−４−メチル−２−（ピバロイルアミノ）ピリジン ジエチルエーテル（１００ｍＬ）モレキュラーシーブで乾燥）中の４−メチル −２−（ピバロイルアミノ）ピリジン（６.８７ｇ、３６.０ミリモル）の予め冷 却した（−７８℃）溶液にｔｅｒｔ−ＢｕＬｉ（５０.０ｍＬ、７５.０ミリモル ）を徐々に添加した。得られた溶液を−７８℃で３.５時間攪拌した後、ＤＭＦ （５.１９ｇ、７１.０ミリモル）を添加して−７８℃でさらに３０分間攪拌し、 次いで室温に暖めて２Ｍ ＨＣｌ（水溶液、１００ｍＬ）に注ぎ入れた。この混 合物を１５分間攪拌した後、Ｋ₂ＣＯ₃を添加することによりｐＨを７.０に調整 した。水相をジエチルエーテル（３×７５ｍＬ、モレキュラーシーブで乾燥）で 洗浄し、合わせた有機画分を食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄ ）させて真空中で蒸発させた。その粗製生成物を酢酸エチル／ヘキサンから再結 晶し、所望の生成物（４.６６ｇ、５９％）を僅かに黄褐色の結晶（ｍｐ１１７ −２０℃）として得た。 実施例３６ （５−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル）酢酸 ジエチルエーテル（１２５ｍＬ、モレキュラーシーブで乾燥）中のＮ,Ｎ−ジ イソプロピルアミン（６.２ｍＬ、０．０４４モル）の予め冷却した溶液にＢｕ Ｌｉ（ヘキサン中２.５Ｍ）（１７.８ｍＬ、０.０４４モル）を添加し、得られ た溶液を室温で１５分間攪拌した後、ジエチルエーテル（１０ｍＬ、モレキュラ ーシーブで乾燥）に溶解したコハク酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５.３５ｇ、２３ ミリモル）を徐々に添加した。−７８℃で３０分後、ＴＨＦ（１０ｍＬ、ＬＡＢ −ＳＣＡＮ Ｃ２５２０、モレキュラーシーブで乾燥）に溶解した３−ホルミル −４−メチル−２−（ピバロイルアミノ）−ピリジン（４.６５ｇ、２１.０ミリ モル）を徐々に添加し、この温度での攪拌を３０分間継続した。この溶液を室温 に暖め、ＮＨ₄Ｃｌの溶液（飽和、水溶液、１００ｍＬ）に注ぎ入れた。水相を ジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で３回抽出し、有機抽出物を水（５０ｍＬ） 及 び食塩水（５０ｍＬ）で洗浄してＭｇＳＯ₄で乾燥させ、真空中で蒸発させた。 その粗製生成物を酢酸エチル／ヘキサンから再結晶してジアステレオマー混合物 を得、真空中で乾燥させた後それをそのまま用いた。このジアステレオマー混合 物をＨＣｌ（３Ｍ、水溶液、５０ｍＬ）に溶解し、その溶液を還流下で３.５時 間攪拌して室温に冷却し、ジエチルエーテル（２×５０ｍＬ）で洗浄し、Ｋ₂Ｃ Ｏ₃で中和してクロロホルム（３×５０ｍＬ）で再度洗浄した。冷却して沈殿さ せた後、表題の化合物１.３９ｇ（３７％）を得た（ｍｐ＞２５０℃）。 実施例３７ Ｎ−（（５−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル）ア セチル）−Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）グ リシンメチル ＤＭＦ（２５ｍＬ）中の（５−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）− オン−３−イル）酢酸（１.２０ｇ、５.５０ミリモル）及びＤｈｂｔＯＨ（０. ９８７ｇ、６.１０ミリモル）の予め冷却した（０℃）溶液にＤＣＣ（１.２５ｇ 、６.１０ミリモル）を添加し、得られた混合物を４０分間攪拌した後、Ｎ−（ ２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）グリシンメチル（１ .３２ｇ、６.１０ミリモル）を添加した。この混合物を室温で一晩攪拌し、真空 中で蒸発させ、酢酸エチル（７５ｍＬ）に再溶解してＤＣＵを濾別した。有機相 をＮａＨＣＯ₃（３×２５ｍＬ）及び食塩水（２×２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ ＭｇＳＯ₄）させて真空中で蒸発させた。粗製生成物を、ＭｅＯＨ／ジクロロメ タン（９５：５から９０：１０ｖ／ｖ）を溶離液として用いてシリカで精製した 。生成物を含む画分をプールし、真空中で蒸発させて所望の生成物（７５２ｍｇ 、３３％）（ｍｐ１７５−７７℃）を得た。 ；この化合物は２種類の回転異性体として存在する；少数回転異性体の化学シフ トは括弧内に示す)： 実施例３８ Ｎ−（（５−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル）ア セチル）−Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）グ リシン ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＮ−（（５−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１ Ｈ）−オン−３−イル）アセチル）−Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカル ボニル）−アミノエチル）グリシンメチル（０.７２ｇ、１.７０ミリモル）の溶 液にＬｉＯＨ（水溶液、２Ｍ）（２.０ｍＬ）を添加した。得られた溶液を室温 で４５分間攪拌した後、さらに水を添加し、ＴＨＦを真空中で蒸発させ、その水 溶液のｐＨを３.０に調整した。生じた沈殿を水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、遠 心によって集め、真空中で乾燥させて所望の生成物（３６６ｍｇ、５３％）を白 色粉末（ｍｐ１３３−３６℃）として得た。 ；この化合物は２種類の回転異性体として存在する；少数回転異性体の化学シフ トは括弧内に示す)： 実施例３９ 修飾ＰＮＡを用いるハイブリダイゼーション研究 各ＰＮＡの結合を、ＰＮＡ及びＤＮＡ又はＰＮＡ及びＰＮＡが約３μＭの溶液 において、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭリン酸ナトリウム、０.１ｍＭ ＥＤ ＴＡ中のｐＨ７.０で測定した。２６０ｎｍでの吸収を５〜９０℃まで０.５℃間 隔で記録した。 置換は以下に示されるように略す： （Ｅ１） Ｎ−（ベンゾ［ｂ］［１,８］ナプチリジン−２（１Ｈ）−オン− ３−イル）アセチル）−Ｎ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシン； （Ｅ２） ７−クロロ−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン； （Ｅ３） ６−クロロ−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン； （Ｅ４） ７−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン （Ｅ５） ６−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン；及び （Ｅ６） ５−メチル−１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン。 ΔＴ_mは、チミン含有対照の熱的安定性に対して修飾当たりで示す。 Ａ．修飾位置を１つ有するＰＮＡ₁₀量体の、相補的ＰＮＡ及びＤＮＡ標的配列 に対するハイブリダイゼーション 選択された位置に０又は１つの修飾が組み込まれているＰＮＡ１０量体のハイ ブリダイゼーションをＰＮＡ（配列番号２１）及びＤＮＡ（配列番号２２）（実 施例２０を参照）標的配列の両者に対して測定した。ＰＮＡ配列は前出のEgholm に説明される通りに調製した。 これらのＰＮＡ１０量体は、修飾ＰＮＡモノマーが占める１０量体内の１つの 位置に関してのみ異なる（下記表を参照）。 Ｂ．３つの修飾位置を有するＰＮＡ１０量体の、相補的ＰＮＡ及びＤＮＡ標的 配列に対するハイブリダイゼーション 選択された位置に０又は３つの修飾が組み込まれているＰＮＡ１０量体のハイ ブリダイゼーションをＰＮＡ（配列番号２１）及びＤＮＡ（配列番号２２）（実 施例２０を参照）標的配列の両者に対して測定した。ＰＮＡ配列は前出のEgholm に説明される通りに調製した。 これらのＰＮＡ１０量体は、修飾ＰＮＡモノマーが占める１０量体内の３つの 位置に関してのみ異なる（下記表を参照）。 Ｃ．３つの修飾位置を有するＰＮＡ１０量体の、相補的ＰＮＡ及びＤＮＡ標的 配列に対するハイブリダイゼーション 選択された位置に０又は３つの修飾が組み込まれているＰＮＡ１０量体のハイ ブリダイゼーションをＰＮＡ（配列番号４０）及びＤＮＡ（配列番号４１）標的 配列の両者に対して測定した。ＰＮＡ配列は前出のEgholmに説明される通りに調 製した。 これらのＰＮＡ１０量体は、修飾ＰＮＡモノマーが占める１０量体内の３つの 位置に関してのみ異なる（下記表を参照）。 Ｄ．３つの修飾位置を有するＰＮＡ１０量体の、相補的ＰＮＡ及びＤＮＡ標的 配列に対するハイブリダイゼーション 選択された位置に０又は１つの修飾が組み込まれているＰＮＡ１０量体のハイ ブリダイゼーションを、相補的であるか、又は修飾ＰＮＡにおいて修飾されてい る位置に１つの不一致を有するかのいずれかのＰＮＡ及びＤＮＡ鎖に対して測定 した。非修飾ＰＮＡもこれら８種類の標的と標準としてハイブリダイズさせる。 ＤＮＡ（5'-dAGT GXT CTA C-3'）又はＰＮＡ（H-AGT GXT CTA C-NH₂）を調製し 、Ｘ位置はＡ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちの１つを表し、したがって、８つの個別の 標的配列が得られた（下記表を参照）。 Ｅ．Hoogsteen鎖に３つの離れた修飾を含むビス−ＰＮＡ（各々は、３つの連 結した８−アミノ−３,６−ジオキサオクタン酸（ｅｇｌ）基を介して結合する 逆平行７量体である）の、７量体標的領域を含む１３量体ＤＮＡへのハイブリダ イゼーション Hoogsteen鎖の選択された位置に０又は３つの修飾が組み込まれているＰＮＡ １０量体のハイブリダイゼーションを、７量体標的配列を含む１３量体ＤＮＡに 対して測定した。アデニンを１３量体ＤＮＡ標的内で、hoogsteen鎖における修 飾された位置に一致させて配置した。ビス−ＰＮＡの合成は前出のEgholmに説明 される通りに行った（下記表を参照）。これらのビス−ＰＮＡは、２つの１０量 体ＰＮＡを３つの連続する８−アミノ−３,６−ジオキサオクタン酸（ｅｇｌ） 基を介して逆平行方向に結合させて調製した。Hoogsteen鎖における（標的配列 によって決定されるような）通常はプロトン化シトシンが存在する位置は、シュ ードイソシトシン（“Ｊ”と表す）が占めている。ΔＴ_mは、チミン含有対照の 熱的安定性に対して修飾当たりで示す。 Ｆ．Hoogsteen鎖に３つの隣接する修飾を含むビス−ＰＮＡ（各々は、３つの 連結した８−アミノ−３,６−ジオキサオクタン酸（ｅｇｌ）基を介して結合す る逆平行７量体である）の、７量体標的領域を含む１３量体ＤＮＡへのハイブリ ダイゼーション Hoogsteen鎖の選択された位置に０又は３つの修飾が組み込まれているＰＮＡ １０量体のハイブリダイゼーションを、７量体標的配列を含む１３量体ＤＮＡに 対して測定した。アデニンを１３量体ＤＮＡ標的内で、hoogsteen鎖における修 飾された位置に一致させて配置した。ビス−ＰＮＡの合成は前出のEgholmに説明 される通りに行った（下記表を参照）。これらのビス−ＰＮＡは、２つの１０ 量体ＰＮＡを３つの連続する８−アミノ−３,６−ジオキサオクタン酸（ｅｇｌ ）基を介して逆平行方向に結合させて調製した。Hoogsteen鎖における（標的配 列によって決定されるような）通常はプロトン化シトシンが存在する位置は、シ ュードイソシトシン（“Ｊ”と表す）が占めている。ΔＴ_mは、チミン含有対照 の熱的安定性に対して修飾当たりで示す。実施例４０〜４２ 式Ｘを有するモノマーシントンの調製を以下に示す（実施例４０〜４２）。 この新規１,８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル核酸塩基はＪ塩 基の代替物であり、好ましい態様において、これは三重鎖形成モチーフにおける Ｇ含有塩基対を認識することが可能である。 実施例４０ （１,８−ナフチリジン−２,７（１,８Ｈ）−ジオン−３−イル）酢酸 ＮａＯＨ（６Ｍ、水溶液）（５０ｍＬ）中の（７−クロロ−１,８−ナフチリ ジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル）酢酸（４．００ｇ、１７．０ミリモル）の 懸濁液を１９時間加熱して還流させた後、室温に冷却した。ＨＣｌ（濃、水溶液 ）を添加することによりこの水溶液のｐＨを７．０に調整し、生じた沈殿を濾過 により集め、水で繰り返し洗浄して所望の生成物（３．４７ｇ、９４％）を無色 の粉末(ｍｐ＞２５０℃)として得た。実施例４１ Ｎ−（（１,８−ナフチリジン−２,７（１,８Ｈ）−ジオン−３−イル）アセチ ル）−Ｎ−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）グリシン メチル（３） ＤＭＦ中の（１,８−ナフチリジン−２,７（１,８Ｈ）−ジオン−３−イル） 酢酸（１.８０ｇ、８.３８ミリモル）及びＨＯＡｔ（１.３４ｇ、１０.１ミリモ ル）の予め冷却した溶液にＤＣＣ（２.０８ｇ、１０.１ミリモル）を添加し、そ の混合物を０℃で４０分間攪拌した後、Ｎ−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカル ボニル）アミノエチル）−グリシンメチル（２.２２ｇ、９.００ミリモル）を添 加した。その混合物を室温で一晩攪拌し、真空中で蒸発させ、ジクロロメタン（ １００ｍＬ）に再溶解してＤＣＵを濾別した。有機相をＮａＨＣＯ₃（飽和、水 溶液）（３×７５ｍＬ）、食塩水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾 燥させて真空中で蒸発させた。その粗製生成物を、ＡｃＯＨ／ＭｅＯＨ／ＣＨ₂ Ｃｌ₂（２／９／８９ ｖ／ｖ／ｖ）を溶離液として用いてシリカで精製した。生 成物含有画分をプールし、真空中で蒸発させて所望の生成物（１.７０ｇ、４６ ％）(ｍｐ１９７−１９８℃)を得た。 実施例４２ Ｎ−（（１,８−ナフチリジン−２,７（１,８Ｈ）−ジオン−３−イル）アセチ ル）−Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノエチル）グリシ ン（４） ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のＮ−（（１,８−ナフチリジン−２,７（１,８Ｈ）− ジオン−３−イル）アセチル）−Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニ ル）アミノエチル）グリシンメチル（１.７０ｇ）３.７９ミリモル）の予め冷却 した（０℃）溶液にＮａＯＨ（２Ｍ、水溶液）（２０ｍＬ）を添加した。この溶 液を室温で１５分間攪拌し、水をさらに添加して真空中でＴＨＦを蒸発させた。 ＨＣｌ（２Ｍ、水溶液）を添加することによりこの水溶液のｐＨを３.０に調整 し、生じた沈殿を水（２×５ｍＬ）で洗浄し、遠心により集め、乾燥させて所望 の生成物（１.３１ｇ、８２％）を無色の粉末（ｍｐ１９５−９７℃）として得 た。 実施例４３ Hoogsteen鎖に修飾を含む修飾ビス−ＰＮＡ（各々は、３つの連結した８−ア ミノ−３,６−ジオキサオクタン酸（ｅｇｌ）基を介して結合する逆平行７量体 である）のハイブリダイゼーション／ｐＨ依存性（ｐＨ９．０、７．０及び５． ０） （Ｅ７）＝１,８−ナフチリジン−２,７（１,８Ｈ）−ジオン （Ｅ８）＝フェノチアジン Ａ．hoogsteen鎖にシトシン、シュードイソシトシン又は１,８−ナフチリジン −２,７（１,８Ｈ）−ジオンを有するビス−ＰＮＡのハイブリダイゼーション１ ,８−ナフチリジン−２,７（１，８Ｈ）−ジオン（Ｅ７）のジケト互変体のハイ ブリダイゼーションを、合成ＤＮＡ 5'-dCGCAGAGAAACGC-3'（配列番号７４）の 相補的標的領域を標的指向するビス−ＰＮＡ７量体中のシトシン及びシュードイ ソシトシンと比較する。 Ｂ．hoogsteen鎖の離れた位置にシトシン、シュードイソシトシン、フェノチ アジン又は１,８−ナフチリジン−２,７（１,８Ｈ）−ジオンを有するビス−Ｐ ＮＡのハイブリダイゼーション １,８−ナフチリジン−２,７（１,８Ｈ）−ジオン（Ｅ７）のジケト互変体の ハイブリダイゼーションを、合成ＤＮＡ 5'-dCGCAGAGAGACGC-3'（配列番号７８ ）の相補的標的領域を標的指向するビス−ＰＮＡ７量体中のシトシン、シュード イソシトシン、及びフェノチアジンと比較する。 Ｃ．hoogsteen鎖の隣接する位置にシトシン、シュードイソシトシン、フェノ チアジン又は１,８−ナフチリジン−２,７（１,８Ｈ）−ジオンを有するビス− ＰＮＡのハイブリダイゼーション １,８−ナフチリジン−２,７（１,８Ｈ）−ジオン（Ｅ７）のジケト互変体の ハイブリダイゼーションを、合成ＤＮＡ 5'-dCGCAAGGGAACGC-3'（配列番号８３ ）の相補的標的領域を標的指向するビス−ＰＮＡ７量体中のシトシン、シュード イソシトシン、及びフェノチアジンと比較する。 実施例４４〜５６ 式XI〜XIIIを有するモノマーシントンの調製を以下に示す(実施例４４〜５５) 。 これらの核酸塩基モノマーは、二重鎖及び三重鎖の両者の形成におけるＴ残基 認識体として、アンチセンスの適用において有利に用いられる。 実施例４４ （３−オキソ−２,３,４,５−テトラヒドロピリダジン−６−イル）プロピオン 酸エチル 無水エタノール（５０ｍＬ）中のヒドラジン一水和物（９５ミリモル、４.７ ６ｇ）の溶液に４−オキソピメリン酸ジエチル（１００ミリモル、２３.０３ｇ ）を添加した。この混合物を室温で１時間攪拌し、真空中で蒸発乾燥させて所望 の生成物（１８.９６ｇ、定量的）を純粋な（ＨＰＣＬ ２６０ｎｍ）白色固体と して得た。この物質をＨＰＬＣ（２６０ｎｍ）で分析したところ、純粋であるこ とが見出された。ＵＶ λｍａｘ ２４２ｎｍ。 実施例４５ （３−オキソ−２,３,−ジヒドロピリダジン−６−イル）−プロピオン酸エチル エタノール（５０ｍＬ）中の（３−オキソ−２,３,４,５−テトラヒドロピリ ダジン−６−イル）−プロピオン酸エチル（５０.０ミリモル、９.９０ｇ）の溶 液に臭素（７５.０ミリモル、１１.９９ｇ）を添加した。この混合物を室温で１ ４時間攪拌し、その混合物をＮａＨＣＯ₃（飽和、水溶液）（５００ｍＬ）に注 ぎ入れた。得られた混合物をジエチルエーテル（５×５００ｍＬ）で徹底的に抽 出した。合わせた有機画分をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、真空中で蒸発させた。その 粗製生成物をトルエンから再結晶し、表題の化合物（３.３５ｇ、３４.１％）を 高純度（ＨＰＬＣ、２６０ｎｍ）の無色針状体として得た。ＵＶ λｍａｘ２２ ８ｎｍ及び２８５ｎｍ。 実施例４６ ３−オキソ−２,３,−ジヒドロピリダジン−６−イル−プロピオン酸 ＴＨＦ中の（３−オキソ−２,３,−ジヒドロピリダジン−６−イル）−プロピ オン酸エチル（３.００ミリモル、５８９ｍｇ）の溶液にＬｉＯＨ（２Ｍ、水溶 液）（７.５０ｍＬ）を添加した。この溶液を室温で１５分間攪拌し、水（２５ ｍＬ）をさらに添加してＴＨＦを真空中で除去した。ＨＣｌ（２Ｍ、水溶液）を 添加することにより水相のｐＨを３.０に調整し、固形物質を濾別して水（２× ３ｍＬ）で洗浄した。その固体を真空中で乾燥させ、所望の生成物（４６１ｍｇ 、９１.４％）を無色の粉末として得た。 実施例４７ Ｎ−（２−Ｂｏｃアミノエチル）−Ｎ−［３−オキソ−２,３,−ジヒドロピリダ ジン−６−イル−プロピオニル］グリシンメチル ＤＭＦ中の３−オキソ−２,３,−ジヒドロピリダジン−６−イル−プロピオン 酸（２.００ミリモル、３３６ｍｇ）の溶液にトリエチルアミン（２.００ミリモ ル、２０２ｍｇ）、ＤｈｂｔＯＨ（２.２０ミリモル、３５９ｍｇ）、及びＮ−( ２−Ｂｏｃ−アミノエチル)グリシンメチル(２.２０ミリモル、４６４ｍｇ)、次 いでＤＣＣ（２.２０ミリモル、４５４ｍｇ）を添加した。この溶液を室温で一 晩攪拌し、真空中で蒸発させた。生じた油をジクロロメタン（１００ｍＬ）にと り、ＮａＨＣＯ₃（飽和、水溶液、５０ｍＬ）で２回洗浄し、食塩水（５０ｍＬ ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させて真空中で蒸発乾燥させた。その粗製生成物 を、酢酸エチル／メタノール（９５：５）を溶離液として用いてシリカで精製 した。生成物を含む画分をプールし、真空中で蒸発させて表題の化合物（４０５ ｍｇ、５３％）を無色の泡状物質として得た。 実施例４８ Ｎ−（２−Ｂｏｃアミノエチル）−Ｎ−［３−オキソ−２,３,−ジヒドロピリダ ジン−６−イル−プロピオニル］グリシン（式XI） ＴＨＦ（１２.５ｍＬ）中のＮ−（２−Ｂｏｃアミノエチル）−Ｎ−［３−オ キソ−２,３,−ジヒドロピリダジン−６−イル−プロピオニル］グリシンメチル （１.００ミリモル、３８２ｍｇ）の溶液にＬｉＯＨ（２Ｍ、水溶液、２.０ｍＬ ）を添加した。この溶液を室温で１５分間攪拌し、水（１０ｍＬ）をさらに添加 してＴＨＦを真空中で除去した。ＨＣｌ（２Ｍ、水溶液）を添加することにより 水相のｐＨを３.０に調整した。ジクロロメタン（ＤＣＭ）で連続抽出すること によって生成物を単離した後、真空中で蒸発させて所望の生成物（２１５ｍｇ、 ８０％）を無色の粉末として得た（ＵＶ_max２８７ｎｍ）。実施例４９ Ｏ−（３−オキソ−２,３−ジヒドロピリダジン−６−イル）−２−オキシ−酢 酸 ３,６−ジヒドロキシピリダジン（５.００ｇ、４４.６ミリモル）を無水エタ ノール／水（３：１）（４０ｍＬ）に懸濁させ、ＫＯＨ（２.１０ｇ、３７.６ミ リモル）を添加した。３０分後、ブロモ酢酸エチル（９.２０ｇ、５４.９ミリモ ル）を徐々に添加した。この懸濁液を加熱して還流させ、一晩放置した。その混 合物を真空中で蒸発させ、水（３０ｍＬ）をさらに添加した。水相を酢酸エチル （４×５０ｍＬ）で抽出し、有機画分を真空中で蒸発させた、その粗製生成物を 、１％酢酸を含むメタノール／クロロホルム（１：４ ｖ／ｖ）を溶離液として 用いてシリカゲルカラムで精製した。生成物を含む画分をプールし、真空中で蒸 発させて所望の生成物（１.５６ｇ、２１％）（１％酢酸を含むメタノール／ク ロロホルム（１：４ ｖ／ｖ）を用いるＴＬＣ、Ｒｆ０.３２により純粋）を得た 。 実施例５０ Ｎ−（２−Ｂｏｃアミノエチル）−Ｎ−［Ｏ−（３−オキソ−２,３−ジヒドロ ピリダジン−６−イル）−２−オキシ−アセチル］グリシンエチル Ｎ−（２−Ｂｏｃアミノエチル）グリシンエチル（３９５ｍｇ、１.６０ミリ モル）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解し、Ｏ−（３−オキソ−２,３−ジヒドロピ リダジン−６−イル）−２−オキシ−酢酸（３００ｍｇ、１.７６ミリモル）、 次いで３−ヒドロキシ−１,２,３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン（２９ １ｍｇ、１.７８ミリモル）を添加した。この混合物を氷上で冷却し、Ｎ,Ｎ'− ジシクロヘキシルカルボジイミド（４０４ｍｇ、１.９６ミリモル）を添加した 。１時間後、氷浴を取り除き、混合物を室温で一晩攪拌した。その混合物を真空 中で蒸発させ、粗製生成物を、ジクロロメタン／メタノール（９３：７ ｖ／ｖ ） を溶離液として用いてシリカで精製した。生成物を含む画分をプールし、真空中 で蒸発させて、ＴＬＣ、Ｒｆ０.３０（ジクロロメタン／メタノール ９０：１ ０ ｖ／ｖ）で純粋な表題の化合物（４３６ｍｇ、６２％）を得た。 実施例５１ Ｎ−（２−Ｂｏｃアミノエチル）−Ｎ−［Ｏ−（３−オキソ−２,３−ジヒドロ ピリダジン−６−イル）−２−オキシアセチル］グリシン（式XII） Ｎ−（２−Ｂｏｃアミノエチル）−Ｎ−［Ｏ−（３−オキソ−２,３−ジヒド ロピリダジン−６−イル）−２−オキシアセチル］グリシンエチル（４０２ｍｇ 、１.０１ミリモル）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に懸濁させ、ＬｉＯＨ（２Ｍ、水溶 液）（２.５０ｍＬ）を添加した。９０分後、水（１０ｍＬ）をさらに添加し、 ＴＨＦを真空中で除去した。ＨＣｌ（４Ｍ、水溶液）を添加することにより水相 のｐＨを４.０に調整した。この混合物を冷所に一晩放置し、生じた沈殿を濾別 して氷冷水（３×１０ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥させて表題の化合物（１２ ４ｍｇ、３４％）を白色粉末として得た。この生成物はＴＬＣ、Ｒｆ０.３３（ ブタノール／酢酸／水 ４：１：１ ｖ／ｖ／ｖ）で純粋であった。 実施例５２ Ｏ−［３−オキソ−２,３,−ジヒドロピリダジン−６−イル］４−ヒドロキシ酪 酸エチル ＤＭＦ（４０ｍＬ）中の３,６−ジヒドロキシピリダジン（２０.０ミリモル、 ２.２４ｇ）の溶液にＮａＨ（鉱物油中の６０％分散液）を一度に添加した。こ の不均一混合物を室温で３０分間攪拌した後、４−ブロモ酪酸エチル（２５.０ ミリモル、４.８８ｇ）を添加し、その不均一混合物を１００℃で２時間攪拌し た。得られた黄色溶液を真空中で蒸発させて酢酸エチル（５００ｍＬ）にとり、 ５％ＮａＨＣＯ₃水溶液（２×２００ｍＬ）、次いで食塩水（２００ｍＬ）で洗 浄した。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過して真空中で蒸発させた。得られ た粗製物質を酢酸エチル／石油エーテルから再結晶し、所望の生成物を無色の輝 く粉末として得た（２.３５ｇ、５２％）。実施例５３ Ｏ−［３−オキソ−２,３,−ジヒドロピリダジン−６−イル］４−ヒドロキシ酪 酸 ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のＯ−［３−オキソ−２,３,−ジヒドロピリダジン−６ −イル］４−ヒドロキシ酪酸エチル（５.００ミリモル、１.１３ｇ）の溶液にＬ ｉＯＨ（２Ｍ、水溶液）（１０.０ｍＬ）を添加した。この溶液を室温で１５分 間攪拌し、水（２０ｍＬ）をさらに添加してＴＨＦを真空中で除去した。ＨＣｌ （２Ｍ、水溶液）を添加することにより水相のｐＨを３．０に調整し、固形物質 を濾別して水（２×５ｍＬ）で洗浄した。真空中で乾燥させた後、表題の化合物 （９０９ｍｇ、９１.８％）を無色の粉末として得た。 実施例５４ Ｎ−（２−Ｂｏｃアミノエチル）−Ｎ−［Ｏ−（３−オキソ−２,３,−ジヒドロ ピリダジン−６−イル）４−ヒドロキシブチリル］グリシンメチル ＤＭＦ中のＯ−［３−オキソ−２,３,−ジヒドロピリダジン−６−イル］４− ヒドロキシ酪酸(３．３０ミリモル、６５３ｍｇ）の溶液にジイソプロピルエチ ルアミン（３.３ミリモル、４２７ｍｇ）及びＨＢＴＵ（３.３０ミリモル、１. ２５ｇ）、次いでＮ−（２−Ｂｏｃ−アミノエチル）グリシンメチル（３.０ミ リモル、６９６ｍｇ）を添加した。この溶液を室温で一晩攪拌し、真空中で蒸発 させた。得られた油をジクロロメタン（２００ｍＬ）にとり、ＮａＨＣＯ₃（飽 和、水溶液）（７０ｍＬ）で２回、次いで食塩水（７０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳ Ｏ₄で乾燥させた。この溶液を濾過し、真空中で濃縮して乾燥させた。その粗製 生成物を、ジクロロメタン／メタノール（９５：５）を溶離液として用いてシリ カで精製した。生成物を含む画分をプールし、真空中で蒸発させて所望の生成物 （０.９３ｇ、７５％）を無色の泡状物質として得た。 実施例５５ Ｎ−（２−Ｂｏｃアミノエチル）−Ｎ−［Ｏ−（３−オキソ−２,３,−ジヒドロ ピリダジン−６−イル）４−ヒドロキシブチリル］−グリシン（式XIII） 表題の化合物を、実施例５１に説明される手順により、実施例５４において調 製される表題の化合物を用いて調製する。 本明細書において言及され、又は参照される特許、出願、及び刊行物の各々は 参照することによりその全体がここに組み込まれることが意図されている。 当業者が認めるように、本発明の精神から逸脱することなく、多くの変更及び 変形を本発明の好ましい態様に対してなすことができる。そのような変種の全て が本発明の範囲内にあることが意図されている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｄ 471/04 １１４ Ｃ０７Ｄ 471/04 １１４Ａ 513/04 ３８１ 513/04 ３８１ Ｃ０８Ｇ 69/08 Ｃ０８Ｇ 69/08 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ， ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，Ｌ Ｓ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，Ｅ Ｅ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，Ｍ Ｄ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 エルトルプ，アンネ・ベー デンマーク王国デーコー―2000 フレズレ グスベル，ロルフス・プラッツ 27

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式： ［式中： Ｌは、アデノシン−チミジンヌクレオベース対の認識部分であり； Ａは、単結合、メチレン基又は以下の式： （式中： Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓe、ＮＲ₃、ＣＨ₂又はＣ（ＣＨ₃）₂であり； Ｙは、単結合、Ｏ、Ｓ又はＮＲ₄であり； ｐ、ｑ、ｒ及びｓは、それぞれ独立して０又は１〜５の整数であり； Ｒ₁及びＲ₂は、水素；ヒドロキシ又はアルコキシ又はアルキルチオ基で置換 されてもよい（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ；アルキルチオ； アミノ及びハロゲンから成る群からそれぞれ独立して選択され；そして Ｒ₃及びＲ₄は、水素；（Ｃ₁−Ｃ₄）ナルキル；ヒドロキシ又はアルコキシ又 はアルキルチオ基で置換された(Ｃ₁−Ｃ₄)アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ； アルキルチオ及びアミノから成る群からそれぞれ独立して選択される。）の基で あり； Ｂは、Ｎ又はＲ₃−Ｎ⁺であって、Ｒ₃は上記の定義通りであり； Ｅは、ＣＲ₆Ｒ₇、ＣＨＲ₆ＣＨＲ₇又はＣＲ₆Ｒ₇ＣＨ₂であって、Ｒ₆は水素であ りＲ₇は天然に存在するαアミノ酸の側鎖から成る群から選択されるか又はＲ₆及 びＲ₇は、水素、（Ｃ₂−Ｃ₆）アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリー ル、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルチオ、ＮＲ₃ Ｒ₄及びＳＲ₅から成る群から独立して選択され、Ｒ₃及びＲ₄は上記の定義通りで あって、Ｒ₅は、水素；（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル；ヒドロキシ、アルコキシ又はア ルキルチオ置換（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルであるか、又はＲ₆及びＲ₇は、一緒に脂環 系又はヘテロ環系をとり； Ｄは、ＣＲ₆Ｒ₇、ＣＨ₂ＣＲ₆Ｒ₇又はＣＨＲ₆ＣＨＲ₇であって、Ｒ₆及びＲ₇は 上記の定義通りであり；そして Ｇは、いずれの方向でもよい、−ＮＲ₃ＣＯ−、−ＮＲ₃ＣＳ−、−ＮＲ₃ＳＯ −又は−ＮＲ₃ＳＯ₂−であって、Ｒ₃は上記の定義通りである。］ を有するモノマー単位を含んでなるオリゴマー化合物。 ２．オリゴマー化合物がペプチド核酸である、請求項１に記載の化合物。 ３．モノマー単位が、式： ［式中： Ｒ₈は、Ｈ、ＣＯＣＨ₃又はアミノ保護基であり； Ｒ₉は、水素又は天然に存在するアミノ酸の側鎖であり； Ｒ₁₀は、Ｏ、ＮＨ、Ｏ−アルキレン又はリジン残基であり； Ｗは−（ＣＨ₂）_m−であって、ｍは０〜約６であるか、又は （式中、ｂは０〜４の整数である。）であり； ｋは、０〜約５であり； ｎは、０又は１であり； Ｌは、式： （Ｑは、ＣＨ又はＮであり； Ｒ₁₇は、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₈アルキルであり； Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル又はハロゲンで あるか； 又はＲ₁₁及びＲ₁₂は、それらが結合している炭素原子と一緒にフェニル基を 形成する。）を有し；そして Ｔは、式： （ｊ及びｚは、それぞれ独立して０〜約５であって、ｊとｚの和は１〜７であ り； Ｍは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｓ（Ｏ）₂、フェニル又はＰ（Ｏ）₂であり； Ｖは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ₂であり；そして ａ、ｈ及びｇは、それぞれ独立して０又は１である。）を有する。］ を有する、請求項１に記載の化合物。 ４．Ｌが、式： を有する、請求項３に記載の化合物。 ５．Ｌが、式： を有する、請求項３に記載の化合物。 ６．Ｌが、式： を有する、請求項３に記載の化合物。 ７．Ｌが、式： を有する、請求項３に記載の化合物。 ８．Ｌが、式：を有する、請求項３に記載の化合物。 ９．ｇ及びｈがそれぞれ０である、請求項３に記載の化合物。 １０．ａが０である、請求項９に記載の化合物。 １１．ａが０であり、ｇが０であり、ＶがＮＨであり、そしてｈが１である、 請求項３に記載の化合物。 １２．ｂが２又は３である、請求項３に記載の化合物。 １３．Ｃα又はＣβの少なくとも１つがＳ配位である、請求項１２に記載の化 合物。 １４．Ｔが式−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＮＨ−を有する、請求項３に記載の化合物。 １５．Ｔが式−ＣＨ₂−を有する、請求項３に記載の化合物。 １６．Ｔが式−ＣＨ₂−ＣＨ₂−を有する、請求項３に記載の化合物。 １７．Ｔが式−Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−を有する、請求項３に記載の化合物。 １８．Ｔが式−Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−を有する、請求項３に記載の化合 物。 １９．Ｗが−（ＣＨ₂）_m−である、請求項３に記載の化合物。 ２０．ｍが２である、請求項１９に記載の化合物。 ２１．Ｗが、式：を有する、請求項３に記載の化合物。 ２２．ｂが２である、請求項２１に記載の化合物。 ２３．ｂが３である、請求項２１に記載の化合物。 ２４．連結基によって連結された複数のペプチド核酸オリゴマーからなる化合 物であって、前記ペプチド核酸オリゴマーの少なくとも１つが、式： ［式中： Ｒ₈は、Ｈ、ＣＯＣＨ₃又はアミノ保護基であり； Ｒ₉は、水素又は天然に存在するアミノ酸の側鎖であり； Ｒ₁₀は、Ｏ、ＮＨ、Ｏ−アルキレン又はリジン残基であり； Ｗは−（ＣＨ₂）_m−であって、ｍは０〜約６であるか、又は （式中、ｂは０〜４の整数である。）であり； ｋは、０〜約５であり； ｎは、０又は１であり； Ｌは、式： （Ｑは、ＣＨ又はＮであり； Ｒ₁₇は、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₈アルキルであり； Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル又はハロゲンで あるか； 又はＲ₁₁及びＲ₁₂は、それらが結合している炭素原子と一緒にフェニル基を 形成する。）を有し；そして Ｔは、式： （ｊ及びｚは、それぞれ独立して０〜約５であって、ｊとｚの和は１〜７であ り； Ｍは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｓ（Ｏ）₂、フェニル又はＰ（Ｏ）₂であり； Ｖは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ₂であり；そして ａ、ｈ及びｇは、それぞれ独立して０又は１である。）を有する。］ を有する部分を含んでなる化合物。 ２５．２つのペプチド核酸オリゴマーが結合基によって結合している、請求項 ２４に記載の化合物。 ２６．連結基が１つ又はそれ以上の８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸 基を含む、請求項２４に記載の化合物。 ２７．式：［式中： Ｌは、アデノシン−チミジンヌクレオベース対の認識部分であり； Ａは、単結合、メチレン基又は以下の式： （式中： Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ₃、ＣＨ₂又はＣ（ＣＨ₃）₂であり； Ｙは、単結合、Ｏ、Ｓ又はＮＲ₄であり； ｐ、ｑ、ｒ及びｓは、それぞれ独立して０又は１〜５の整数であり； Ｒ₁及びＲ₂は、水素；ヒドロキシ又はアルコキシ又はアルキルチオ基で置換 されてもよい（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ；アルキルチオ； アミノ及びハロゲンから成る群からそれぞれ独立して選択され；そして Ｒ₃及びＲ₄は、水素；（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ又はアルコキシ又 はアルキルチオ基で置換された(Ｃ₁−Ｃ₄)アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ； アルキルチオ及びアミノから成る群からそれぞれ独立して選択される。）の基で あり； Ｂは、Ｎ又はＲ₃−Ｎ⁺であって、Ｒ₃は上記の定義通りであり； Ｅは、ＣＲ₆Ｒ₇、ＣＨＲ₆ＣＨＲ₇又はＣＲ₆Ｒ₇ＣＨ₂であって、Ｒ₆は水素であ りＲ₇は天然に存在するαアミノ酸の側鎖から成る群から選択されるか又はＲ₆及 びＲ₇は、水素、（Ｃ₂−Ｃ₆）アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリー ル、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルチオ、ＮＲ₃ Ｒ₄及びＳＲ₅から成る群から独立して選択され、Ｒ₃及びＲ₄は上記の定義通りで あって、Ｒ₅は、水素；（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル；ヒドロキシ、アルコキシ又はア ルキルチオ置換（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルであるか、又はＲ₆及びＲ₇は、一緒に脂環 系又はヘテロ環系をとり； Ｄは、ＣＲ₆Ｒ₇、ＣＨ₂ＣＲ₆Ｒ₇又はＣＨＲ₆ＣＨＲ₇であって、Ｒ₆及びＲ₇は 上記の定義通りであり；そして Ｆは、それぞれ独立して、ＮＨＲ₃又はＮＰｇＲ₃であって、Ｒ₃は上記の定義 通りあり、そしてＰｇはアミノ保護基である。］ を有する化合物。 ２８．式： ［式中： Ｒ₈は、Ｈ、ＣＯＣＨ₃又はアミノ保護基であり； Ｒ₉は、水素又は天然に存在するアミノ酸の側鎖であり； Ｒ₁₀は、Ｏ、ＮＨ、Ｏ−アルキレン又はリジン残基であり； Ｗは−（ＣＨ₂）_m−であって、ｍは０〜約６であるか、又は （式中、ｂは０〜４の整数である。）であり； ｋは、０〜約５であり； ｎは、０又は１であり； Ｌは、式： （Ｑは、ＣＨ又はＮであり； Ｒ₁₇は、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₈アルキルであり； Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル又はハロゲンで あるか； 又はＲ₁₁及びＲ₁₂は、それらが結合している炭素原子と一緒にフェニル基を 形成する。）を有し；そして Ｔは、式： （ｊ及びｚは、それぞれ独立して０〜約５であって、ｊとｚの和は１〜７であ り； Ｍは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｓ（Ｏ）₂、フェニル又はＰ（Ｏ）₂であり； Ｖは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ₂であり； ａ、ｈ及びｇは、それぞれ独立して０又は１である。）を有し；そして Ｒ₁₃及びＲ₁₄は、それぞれ独立して、Ｈ、又は窒素若しくは酸素の保護基であ る。］ を有する、請求項２５に記載の化合物。 ２９．Ｌが、式： を有する、請求項２８に記載の化合物。 ３０．Ｌが、式：を有する、請求項２８に記載の化合物。 ３１．Ｌが、式： を有する、請求項２８に記載の化合物。 ３２．Ｌが、式： を有する、請求項２８に記載の化合物。 ３３．Ｌが、式：を有する、請求項２８に記載の化合物。 ３４．ｇ及びｈがそれぞれ０である、請求項２８に記載の化合物。 ３５．ａが０である、請求項３４に記載の化合物。 ３６．ａが０であり、ｇが０であり、ＸがＮＨであり、そしてｈが１である、 請求項２８に記載の化合物。 ３７．ｂが２又は３である、請求項２８に記載の化合物。 ３８．Ｃα又はＣβの少なくとも１つがＳ配位である、請求項３７に記載の化 合物。 ３９．Ｔが式−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＮＨ−を有する、請求項２８に記載の化合物。 ４０．Ｔが式−ＣＨ₂−を有する、請求項２８に記載の化合物。 ４１．Ｔが式−ＣＨ₂−ＣＨ₂−を有する、請求項２８に記載の化合物。 ４２．Ｔが式−Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−を有する、請求項２８に記載の化合物。 ４３．Ｔが式−Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−を有する、請求項２８に記載の化 合物。 ４４．式： ［Ｌは、式： （Ｑは、ＣＨ又はＮであり； Ｒ₁₇は、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₈アルキルであり； Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル又はハロゲンで あるか； 又は、Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それらが結合している炭素原子と一緒にフェニル基 を形成する。）を有し； Ａは、単結合、メチレン基又は式： （式中： Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓe、ＮＲ₃、ＣＨ₂又はＣ（ＣＨ₃）₂であり； Ｙは、単結合、Ｏ、Ｓ又はＮＲ₄であり； ｐ、ｑ、ｒ及びｓは、それぞれ独立して、０又は１〜５の整数であり； Ｒ₁及びＲ₂は、水素；ヒドロキシ又はアルコキシ又はアルキルチオ基で置換 されてもよい（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ；アルキルチオ； アミノ及びハロゲンから成る群からそれぞれ独立して選択され； Ｒ₃及びＲ₄は、水素；（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ又はアルコキシ又 はアルキルチオ基で置換された(Ｃ₁−Ｃ₄)アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ； アルキルチオ及びアミノから成る群からそれぞれ独立して選択される。）の基で あり； Ｒ₁₅は、ＯＨ、保護されたヒドロキシル基又は保護基であり；そして Ｒ₁₆は、Ｈ又はアミノ保護基である。］ の化合物。 ４５．病的な状態との関連が疑われる配列をコードし、かつ１つ又はそれ以上 のチミン残基を含有する一本鎖ＤＮＡ； 該一本鎖核酸のある領域に相補的な領域を含む第一ペプチド核酸オリゴマー： 及び 該一本鎖核酸のある領域に相補的な配列を含む第二ペプチド核酸オリゴマーで あって、該一本鎖核酸の該チミン残基に相補的な１つ又はそれ以上の位置に、式 ： ［式中： Ｒ₈は、Ｈ、ＣＯＣＨ₃又はアミノ保護基であり； Ｒ₉は、水素又は天然に存在するアミノ酸の側鎖であり； Ｒ₁₀は、Ｏ、ＮＨ、Ｏ−アルキレン又はリジン残基であり； Ｗは−（ＣＨ₂）_m−であって、ｍは０〜約６であるか、又は （式中、ｂは０〜４の整数である。）であり； ｋは、０〜約５であり； ｎは、０又は１であり； Ｌは、式： （Ｑは、ＣＨ又はＮであり； Ｒ₁₇は、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₈アルキルであり； Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル又はハロゲンで あるか； 又はＲ₁₁及びＲ₁₂は、それらが結合している炭素原子と一緒にフェニル基を 形成する。）を有し；そして Ｔは、式： （ｊ及びｚは、それぞれ独立して０〜約５であって、ｊとｚの和は１〜７であ り； Ｍは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｓ（Ｏ）₂、フェニル又はＰ（Ｏ）₂であり； Ｖは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ₂であり；そして ａ、ｈ及びｇは、それぞれ独立して０又は１である。）を有する。］ の残基を有する第二ペプチド核酸オリゴマー を含む組成物。 ４６．一本鎖ＤＮＡ、第一ペプチド核酸、及び第二ペプチド核酸が三重鎖を形 成する、請求項４５に記載の組成物。 ４７．三重らせん化合物を形成する方法であって： （ａ）１つ又はそれ以上のチミン残基を含有する一本鎖核酸を選択する工程； （ｂ）前記一本鎖核酸のある領域に相補的である領域を含む第一オリゴマーを 提供する工程；及び （ｃ）前記一本鎖核酸及び前記第一オリゴマーを、前記三重らせん化合物を形 成するのに有効な時間及び条件下で、第二オリゴマーと接触させる工程であって 、前記第二オリゴマーが、前記一本鎖核酸のある領域に相補的な配列を含み、か つ前記一本鎖核酸の前記チミン残基に相補的な１つ又はそれ以上の位置に、式： ［式中： Ｒ₈は、Ｈ、ＣＯＣＨ₃又はアミノ保護基であり； Ｒ₉は、水素又は天然に存在するアミノ酸の側鎖であり； Ｒ₁₀は、Ｏ、ＮＨ、Ｏ−アルキレン又はリジン残基であり； Ｗは−（ＣＨ₂）_m−であって、ｍは０〜約６であるか、又は （式中、ｂは０〜４の整数である。）であり； ｋは、０〜約５であり； ｎは、０又は１であり； Ｌは、式： （Ｑは、ＣＨ又はＮであり； Ｒ₁₇は、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₈アルキルであり； Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル又はハロゲンで あるか； 又はＲ₁₁及びＲ₁₂は、それらが結合している炭素原子と一緒にフェニル基を 形成する。）を有し；そして Ｔは、式： （ｊ及びｚは、それぞれ独立して０〜約５であって、ｊとｚの和は１〜７であ り； Ｍは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｓ（Ｏ）₂、フェニル又はＰ（Ｏ）₂であり； Ｖは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ₂であり；そして ａ、ｈ及びｇは、それぞれ独立して０又は１である。）を有する。］ の残基を有する工程 を含んでなる方法。 ４８．第一オリゴマーがＰＮＡである、請求項４７に記載の方法。 ４９．第一オリゴマーがＤＮＡである、請求項４７に記載の方法。 ５０．第一オリゴマーが一本鎖核酸に対して逆平行に配向し、第二オリゴマー が三重らせん構造の前記一本鎖核酸に対して平行に配向している、請求項47に記 載の方法。 ５１．三重らせん化合物が式ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡを有する、請求項４７に 記載の方法。 ５２．一本鎖核酸がＤＮＡである、請求項４７に記載の方法。 ５３．一本鎖核酸がＲＮＡである、請求項４７に記載の方法。 ５４．第一オリゴマーがペプチド核酸であり、前記第一オリゴマーが連結部分 によって第二オリゴマーに連結している、請求項４７に記載の方法。 ５５．第一及び第二オリゴマーがそれぞれ４〜約２０ヌクレオベースの長さで ある、請求項５４に記載の方法。 ５６．既知のヌクレオベース配列を含有する化学的又は微生物学的実体を検出 するため方法であって： ａ）１つ又はそれ以上のチミン残基を含有する化学的又は微生物学的実体から ヌクレオベース配列を選択すること； ｂ）前記選択されたヌクレオベース配列に相補的な領域を含有するＰＮＡオリ ゴマーを提供すること； ｃ）前記化学的又は微生物学的実体の前記選択されたヌクレオベース配列及び 前記相補的なＰＮＡオリゴマーを、前記選択されたヌクレオベース配列に相補的 である配列を含有するさらに別のＰＮＡオリゴマーと接触させて、三重らせん化 合物を形成すること、この際、前記さらに別のＰＮＡオリゴマーは、前記選択さ れたヌクレオベース配列の前記チミン残基に相補的な１つ又はそれ以上の位置に 、式： ［式中： Ｒ₈は、Ｈ、ＣＯＣＨ₃又はアミノ保護基であり； Ｒ₉は、水素又は天然に存在するアミノ酸の側鎖であり； Ｒ₁₀は、Ｏ、ＮＨ、Ｏ−アルキレン又はリジン残基であり； Ｗは−（ＣＨ₂）_m−であって、ｍは０〜約６であるか、又は （式中、ｂは０〜４の整数である。）であり； ｋは、０約５であり； ｎは、０又は１であり； Ｌは、式： （Ｑは、ＣＨ又はＮであり； Ｒ₁₇は、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₈アルキルであり； Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル又はハロゲンで あるか； 又はＲ₁₁及びＲ₁₂は、それらが結合している炭素原子と一緒にフェニル基を 形成する。）を有し；そして Ｔは、式： （ｊ及びｚは、それぞれ独立して０〜約５であって、ｊとｚの和は１〜７であ り； Ｍは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｓ（Ｏ）₂、フェニル又はＰ（Ｏ）₂であり； Ｖは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ₂であり；そして ａ、ｈ及びｇは、それぞれ独立して０又は１である。）を有する。］ の残基を有する；及び ｄ）前記三重らせん化合物を検出すること を含んでなる方法。 ５７．二本鎖ポリヌクレオチドの配列特異的認識方法であって、前記ポリヌク レオチドを請求項１の化合物と接触させることを含む方法。 ５８．二本鎖ポリヌクレオチドの配列特異的認識方法であって、前記ポリヌク レオチドを、前記ポリヌクレオチドと結合して三重鎖構造を形成するオリゴマー 化合物と接触させることを含み、前記オリゴマー化合物が、式：［式中： Ｌは、アデノシン−チミジンヌクレオベース対の認識部分であり； Ａは、単結合、メチレン基又は以下の式： （式中： Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ₃、ＣＨ₂又はＣ（ＣＨ₃）₂であり； Ｙは、単結合、Ｏ、Ｓ又はＮＲ₄であり； ｐ、ｑ、ｒ及びｓは、それぞれ独立して０又は１〜５の整数であり； Ｒ₁及びＲ₂は、水素；ヒドロキシ又はアルコキシ又はアルキルチオ基で置換 されてもよい（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ；アルキルチオ； アミノ及びハロゲンから成る群からそれぞれ独立して選択され；そして Ｒ₃及びＲ₄は、水素；（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル；ヒドロキシ又はアルコキシ又 はアルキルチオ基で置換された(Ｃ₁−Ｃ₄)アルキル；ヒドロキシ；アルコキシ； アルキルチオ及びアミノから成る群からそれぞれ独立して選択される。）の基で あり； Ｂは、Ｎ又はＲ₃−Ｎ⁺であって、Ｒ₃は上記の定義通りであり； Ｅは、ＣＲ₆Ｒ₇、ＣＨＲ₆ＣＨＲ₇又はＣＲ₆Ｒ₇ＣＨ₂であって、Ｒ₆は水素であ りＲ₇は天然に存在するαアミノ酸の側鎖から成る群から選択されるか又はＲ₆及 びＲ₇は、水素、（Ｃ₂−Ｃ₆）アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリー ル、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルチオ、ＮＲ₃ Ｒ₄及びＳＲ₅から成る群から独立して選択され、Ｒ₃及びＲ₄は上記の定義通りで あって、Ｒ₅は、水素；（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル；ヒドロキシ、アルコキシ又はア ルキルチオ置換（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルであるか、又はＲ₆及びＲ₇は、一緒に脂環 系又はヘテロ環系をとり； Ｄは、ＣＲ₆Ｒ₇、ＣＨ₂ＣＲ₆Ｒ₇又はＣＨＲ₆ＣＨＲ₇であって、Ｒ₆及びＲ₇は 上記の定義通りであり；そして Ｇは、いずれの方向でもよい、−ＮＲ₃ＣＯ−、−ＮＲ₃ＣＳ−、−ＮＲ₃ＳＯ −又は−ＮＲ₃ＳＯ₂−であって、Ｒ₃は上記の定義通りである。］ を有するモノマー単位を含む方法。 ５９．モノマー単位が、式： ［式中： Ｒ₈は、Ｈ、ＣＯＣＨ₃又はアミノ保護基であり； Ｒ₉は、水素又は天然に存在するアミノ酸の側鎖であり； Ｒ₁₀は、Ｏ、ＮＨ、Ｏ−アルキレン又はリジン残基であり； Ｗは−（ＣＨ₂）_m−であって、ｍは０〜約６であるか、又は （式中、ｂは０〜４の整数である。）であり； ｋは、０〜約５であり； ｎは、０又は１であり； Ｌは、式： （Ｑは、ＣＨ又はＮであり； Ｒ₁₇は、Ｈ又はＣ₁−Ｃ₈アルキルであり； Ｒ₁₁及びＲ₁₂は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル又はハロゲンで あるか； 又はＲ₁₁及びＲ₁₂は、それらが結合している炭素原子と一緒にフェニル基を 形成する。）を有し；そして Ｔは、式： （ｊ及びｚは、それぞれ独立して０〜約５であって、ｊとｚの和は１〜７であ り； Ｍは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｓ（Ｏ）₂、フェニル又はＰ（Ｏ）₂であり； Ｖは、ＮＨ、Ｓ又はＣＨ₂であり；そして ａ、ｈ及びｇは、それぞれ独立して０又は１である。）を有する。］ を有する、請求項５８に記載の方法。