JPH07118243A - 治療および診断のためのｎ−分枝をもつ核酸結合オリゴマー - Google Patents

治療および診断のためのｎ−分枝をもつ核酸結合オリゴマー

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JPH07118243A
JPH07118243A JP6239644A JP23964494A JPH07118243A JP H07118243 A JPH07118243 A JP H07118243A JP 6239644 A JP6239644 A JP 6239644A JP 23964494 A JP23964494 A JP 23964494A JP H07118243 A JPH07118243 A JP H07118243A
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mmol
acid
tert
solution
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JP6239644A
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Antonius Loebberding
アントニウス・レツベルデイング
Burkhard Mielke
ブルクハルト・ミールケ
Christoph Dr Schwemler
クリストフ・シユベムラー
Eckhard Schwenner
エクハルト・シユベナー
Udo Stropp
ウド・シユトロプ
Wolfgang Dr Springer
ボルフガング・シユプリンガー
Axel Kretschmer
アクセル・クレチユマー
Thorsten Poetter
トルステン・ペター
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Bayer AG
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Bayer AG
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Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 遺伝子発現制御に有用な、新規のＮ−分枝オ
リゴマー核酸を提供する。 【構成】 式（Ｉ） 〔例えば、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−４−メタン
スルホニルオキシ−Ｌ−シス−プロリン メチルエステ
ル〕の化合物を、１ないし複数含む医薬品。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【従来の技術】相補的核酸、いわゆるアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドによる遺伝子発現の特異的スイッチ・オ
フは、新規な治療のアプローチを表す。可能性のある応
用は、ウイルス感染の治療からがんの治療まで拡がる
（S. Agrawal, Tibtech 10, 152(1992); W. James, Ant
iviral Chemistry & Chemotherapie 2, 191 (1991); B.
Calabretta, Cancer Research 51, 4504 (1991)）。遺
伝子発現の制御は、ＤＮＡとＲＮＡのレベルにおいて働
き、そして未修飾のオリゴヌクレオチドをもってしても
達成される（C. Helene, Anticancer Drug Design 6, 5
69 (1991); E. Uhlmann, A. Peymann, Chemical Review
s 90, 543 (1990)）。しかしながら、酵素に対する不十
分な安定性および細胞系への不完全な取り込みのため
に、これらのオリゴヌクレオチドは、治療上の適用に対
して適当ではない。治療上の適用は、化学的に修飾され
たアンチセンスオリゴヌクレオチドを必要とする。
【０００２】修飾されたクレオチド内リン酸もしくはリ
ン酸不含のヌクレオチド間結合は、多数の研究において
系統的に研究されてきた；しかしながら、それらの合成
は、非常に困難を伴うことが分かり、しかも治療効果は
不満足のものであることが観察された（E. Uhlmann, A.
Peymann, Chemical Reviews 90, 543 (1990)）。
【０００３】核酸中のリン酸基を修飾もしくは置換する
ことの一つの選択は、完全に、別の骨格によってリボー
スおよびリン酸を置換することである。この概念は、初
めてPithaらによって実現されたが、彼らは、リボース
リン酸をポリ−Ｎ−ビニル誘導体によって置換して、い
わゆる“プラスチックＤＮＡ”に導いた（J. Pitha,P.
O.P. Ts'O, J. Org. Chem. 33, 1341 (1968); J. Pith
a, J. Adv. Polym. Sci. 50, 1 (1983)）。しかしなが
ら、これは、決められた配列の特異的構築には至らな
い。
【０００４】決められた配列の合成は、もし、例えば、
慣例のペプチド合成（M. Bodanbzky, Principles of Pe
ptide Synthesis, Springer, Berlin 1984)）と同様に
段階的に築き上げるポリアミド骨格が、糖リン酸の代わ
りに使用される場合には達成される。この概念は、種々
の研究グループによる異なった方法で実現されてきた
（J.E. Summerton et al. WO 86/05518; R.S. Varma et
al. WO 92/18518; O. Buchardt et al. WO 92/20702;
H. Wang, D.D. Weller, Tetrahedron Letters 32, 7385
(1991); P. Garner, J.U. Yoo, Tetrahedron Letters
34, 1275 (1993);S.-B. Huang, J.S. Nelson, D.D. Wel
ler; J. Org. Chem. 56, 6007 (1991))。ポリアミド核
酸は、診断および分子生物学的応用に対して同様に適し
ている（Buchardt et al. Wo 92/20703）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】この種の構造に関する
研究過程において、新規なＮ−分枝オリゴマー核酸の合
成が、成功裏に達成された。これらの核酸は、ＤＮＡお
よびＲＮＡに驚くほどよく結合することが分かった。そ
の物質は、遺伝子発現を制御するために適しており、そ
して抗ウイルス性を発揮する。さらになお、この種の物
質は、核酸を単離し、同定し、そして定量するための診
断および分子生物学において使用することができる。
【０００６】
【課題を解決するための手段】下記の構造物が合成され
た：本発明は、一般式（Ｉ）
【０００７】
【化２】
【０００８】の化合物に関する。式中、Ａは、−（ＣＨ
2）n−もしくは−ＣＯ−を表し、Ｂは、すべての天然も
しくは非天然の核酸塩基、例えば、チミン、ウラシル、
シトシン、アデニン、グアニンもしくはヒポキサンチ
ン、または化学的修飾によってそれから得られる誘導
体、あるいは、アセチル、トリフルオロアセチル、トリ
クロロアセチル、ベンゾイル、フェニルアセチル、ベン
ジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボ
ニル、アリルオキシカルボニルもしくは（９−フルオレ
ニル）−メトキシカルボニルのような保護基、またはペ
プチドおよび核酸化学において常用されるその他の保護
基によってそのアミノ基において任意に置換されている
か、または遊離のアミノ基を有するそれらのハロゲン化
前駆体を表し、Ｄは、−（ＣＯ）p−を表し、Ｅおよび
Ｇは、互いに独立して、−ＣＨＲ−を表していて、この
場合、Ｒは、Ｈまたは、ＤもしくはＬ型における、任意
に保護基を有する天然もしくは非天然アミノ酸の残基、
例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソ
ロイシン、セリン、スレオニン、システイン、メチオニ
ン、フェニルアラニン、チロシン、ヒスチジン、トリプ
トファン、リジン、オルニチン、アスパラギン、アスパ
ラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、アルギニン、プ
ロリン、ヒドロキシプロリンもしくはサルコシン、例え
ばデヒドロアラニンもしくはデヒドロ−α−アミノ酪酸
のようなデヒドロアミノ酸、例えばフェニルグリシン、
４−ニトロフェニルアラニン、３−ニトロフェニルアラ
ニン、２−ニトロフェニルアラニン、２−，３−もしく
は４−アミノフェニルアラニン、３，４−ジクロロフェ
ニルアラニン、４−ヨードフェニルアラニン、４−メト
キシフェニルアラニン、１−トリアゾリルアラニン、２
−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリ
ジルアラニン、１−ナフチルアラニンもしくは２−ナフ
チルアラニンのようなその他の非天然アミノ酸からの残
基を表し、あるいは、任意に、ＥおよびＧは、アルキル
鎖−（ＣＨ2）q−をとおしてともに結合しており、Ｋ
は、−ＣＯ−，−ＳＯ2−もしくは−ＣＨ2−を表し、Ｌ
は、キャリヤーシステム（ｃａｒｒｉｅｒ ｓｙｓｔｅ
ｍ）、リポーターリガンド、可溶化基もしくは水素であ
り得るし、Ｍは、Ｌとは独立して、キャリヤーシステ
ム、リポーターリガンド、可溶化基もしくは水素であり
得るし、ｍは、０、１、２もしくは３であり得るし、ｎ
は、０、１、２、３もしくは４であり得るし、ｐは、
０、１もしくは２であり得るし、ｑは、０、１もしくは
２であり得るし、そしてｓは、１および３０の間の値を
仮定することができる。
【０００９】一般式（Ｉ）の化合物は、次の場合により
好適である。式中、Ａは、−（ＣＨ2）n−もしくは−Ｃ
Ｏ−を表し、Ｂは、すべての天然核酸塩基、例えば、チ
ミン、ウラシル、シトシン、アデニン、グアニンもしく
はヒポキサンチン、あるいは、アセチル、トリフルオロ
アセチル、トリクロロアセチル、ベンゾイル、フェニル
アセチル、ベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチ
ルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニルもしくは
（９−フルオレニル）−メトキシカルボニルのような保
護基、またはペプチドおよび核酸化学において常用され
るその他の保護基によってそのアミノ基において任意に
置換されているか、または遊離のアミノ基を有するそれ
らのハロゲン化前駆体を表し、Ｄは、−（ＣＯ）p−を
表し、ＥおよびＧは、互いに独立して、−ＣＨＲ−を表
していて、この場合、Ｒは、Ｈまたは、ＤもしくはＬ型
における、任意に保護基を有する天然もしくは非天然ア
ミノ酸の残基、例えば、グリシン、アラニン、バリン、
ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、システ
イン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、ヒス
チジン、トリプトファン、リジン、オルニチン、アスパ
ラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、
アルギニン、プロリン、ヒドロキシプロリンもしくはサ
ルコシン、例えばデヒドロアラニンもしくはデヒドロ−
α−アミノ酪酸のようなデヒドロアミノ酸、例えばフェ
ニルグリシン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルア
ラニン、４−ピリジルアラニン、１−ナフチルアラニン
もしくは２−ナフチルアラニンのようなその他の非天然
アミノ酸からの残基を表し、あるいは、任意に、Ｅおよ
びＧは、アルキル鎖−（ＣＨ2）q−をとおしてともに結
合しており、Ｋは、−ＣＯ−，−ＳＯ2−もしくは−Ｃ
Ｈ2−であり得るし、Ｌは、キャリヤーシステム、リポ
ーターリガンド、可溶化基もしくは水素であり得るし、
Ｍは、Ｌとは独立して、キャリヤーシステム、リポータ
ーリガンド、可溶化基もしくは水素であり得るし、ｍ
は、０、１、２もしくは３であり得るし、ｎは、０、
１、２もしくは３であり得るし、ｐは、０もしくは１で
あり得るし、ｑは、０、１もしくは２であり得るし、そ
してｓは、３および２０の間の値を仮定することができ
る。
【００１０】さらにまた、本発明は、一般式（ＩＩ）
【００１１】
【化３】
【００１２】の化合物に関する。式中、Ａは、−（ＣＨ
2）n−もしくは−ＣＯ−を表し、Ｂは、すべての天然も
しくは非天然の核酸塩基、例えば、チミン、ウラシル、
シトシン、アデニン、グアニンもしくはヒポキサンチ
ン、または化学的修飾によってそれから得られる誘導
体、あるいは、アセチル、トリフルオロアセチル、トリ
クロロアセチル、ベンゾイル、フェニルアセチル、ベン
ジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボ
ニル、アリルオキシカルボニルもしくは（９−フルオレ
ニル）−メトキシカルボニルのような保護基、またはペ
プチドおよび核酸化学において常用されるその他の保護
基によってそのアミノ基において任意に置換されている
か、または遊離のアミノ基を有するそれらのハロゲン化
前駆体を表し、Ｄは、−（ＣＯ）p−を表し、Ｅおよび
Ｇは、互いに独立して、−ＣＨＲ−を表し、Ｒは、Ｈま
たは、ＤもしくはＬ型における、任意に保護基を有する
天然もしくは非天然アミノ酸の残基、例えば、グリシ
ン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリ
ン、スレオニン、システイン、メチオニン、フェニルア
ラニン、チロシン、ヒスチジン、トリプトファン、リジ
ン、オルニチン、アスパラギン、アスパラギン酸、グル
タミン、グルタミン酸、アルギニン、プロリン、ヒドロ
キシプロリンもしくはサルコシン、例えばデヒドロアラ
ニンもしくはデヒドロ−α−アミノ酪酸のようなデヒド
ロアミノ酸、例えばフェニルグリシン、４−ニトロフェ
ニルアラニン、３−ニトロフェニルアラニン、２−ニト
ロフェニルアラニン、２−，３−もしくは４−アミノフ
ェニルアラニン、３，４−ジクロロフェニルアラニン、
４−ヨードフェニルアラニン、４−メトキシフェニルア
ラニン、１−トリアゾリルアラニン、２−ピリジルアラ
ニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、
１−ナフチルアラニンもしくは２−ナフチルアラニンの
ようなその他の非天然アミノ酸からの残基を表し、ある
いは、任意に、ＥおよびＧは、アルキル鎖−（ＣＨ2）q
−をとおしてともに結合しており、Ｋは、−ＣＯ−，−
ＳＯ2−もしくは−ＣＨ2−を表し、Ｘは、ペプチド化学
から既知の任意の保護基、Ｈ、または保護もしくは非保
護型における任意の天然もしくは非天然アミノ酸を表
し、Ｙは、ＣＯＯＨ，ＣＳＯＨ，ＣＨ2ＯＨ，Ｒ”がペ
プチド化学からの任意の保護基であるＣＯＯＲ”、キャ
リアー、リポーターリガンドもしくは可溶化基を表し、
そしてｎは、０、１、２、３もしくは４であり得るし、
ｑは、０、１もしくは２であり得る。
【００１３】一般式（ＩＩ）の化合物は、次の場合によ
り好適である。式中、Ａは、−（ＣＨ2）n−もしくは−
ＣＯ−を表し、Ｂは、すべての天然核酸塩基、例えば、
チミン、ウラシル、シトシン、アデニン、グアニンもし
くはヒポキサンチン、あるいは、アセチル、トリフルオ
ロアセチル、トリクロロアセチル、ベンゾイル、フェニ
ルアセチル、ベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブ
チルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニルもしく
は（９−フルオレニル）−メトキシカルボニルのような
保護基、またはペプチドおよび核酸化学において常用さ
れるその他の保護基によってそのアミノ基において任意
に置換されているか、または遊離のアミノ基を有するそ
れらのハロゲン化前駆体を表し、Ｄは、−（ＣＯ）p−
を表し、ＥおよびＧは、互いに独立して、−ＣＨＲ−を
表し、Ｒは、Ｈまたは、ＤもしくはＬ型における、任意
に保護基を有する天然もしくは非天然アミノ酸の残基、
例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソ
ロイシン、セリン、スレオニン、システイン、メチオニ
ン、フェニルアラニン、チロシン、ヒスチジン、トリプ
トファン、リジン、オルニチン、アスパラギン、アスパ
ラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、アルギニン、プ
ロリン、ヒドロキシプロリンもしくはサルコシン、例え
ばデヒドロアラニンもしくはデヒドロ−α−アミノ酪酸
のようなデヒドロアミノ酸、例えばフェニルグリシン、
２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピ
リジルアラニン、１−ナフチルアラニンもしくは２−ナ
フチルアラニンのようなその他の非天然アミノ酸からの
残基を表し、あるいは、任意に、ＥおよびＧは、アルキ
ル鎖−（ＣＨ2）q−をとおしてともに結合しており、Ｋ
は、−ＣＯ−，−ＳＯ2−もしくは−ＣＨ2−を表し、Ｘ
は、ペプチド化学からの既知の任意の保護基、Ｈ、また
は保護もしくは非保護型における任意の天然もしくは非
天然アミノ酸を表し、Ｙは、ＣＯＯＨ，ＣＳＯＨ，ＣＨ
2ＯＨ，Ｒ”がペプチド化学からの任意の保護基である
ＣＯＯＲ”、キャリアー、リポーターリガンドもしくは
可溶化基を表し、そしてｎは、０、１、２もしくは３で
あり得るし、ｑは、０、１もしくは２であり得る。
【００１４】一般式（ＩＩ）の化合物は、次の場合に特
に好適である。式中、Ａは、−（ＣＨ2）n−，もしくは
−ＣＯ−を表し、Ｂは、すべての天然核酸塩基、例え
ば、チミン、ウラシル、シトシン、アデニン、グアニン
もしくはヒポキサンチン、あるいは、アセチル、トリフ
ルオロアセチル、トリクロロアセチル、ベンゾイル、フ
ェニルアセチル、ベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ
−ブチルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニルも
しくは（９−フルオレニル）−メトキシカルボニルのよ
うな保護基、またはペプチドおよび核酸化学において常
用されるその他の保護基によってそのアミノ基において
任意に置換されているか、または遊離のアミノ基を有す
るそれらのハロゲン化前駆体を表し、Ｄは、−（ＣＯ）
p−を表し、ＥおよびＧは、互いに独立して、−ＣＨＲ
−を表し、Ｒは、Ｈまたは、ＤもしくはＬ型における、
任意に保護基を有する天然もしくは非天然アミノ酸の残
基、例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、
イソロイシン、セリン、スレオニン、システイン、メチ
オニン、フェニルアラニン、チロシン、ヒスチジン、ト
リプトファン、リジン、オルニチン、アスパラギン、ア
スパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、アルギニ
ン、プロリン、ヒドロキシプロリンもしくはサルコシ
ン、例えばデヒドロアラニンもしくはデヒドロ−α−ア
ミノ酪酸のようなデヒドロアミノ酸からの残基を表し、
あるいは、任意に、ＥおよびＧは、アルキル鎖−（ＣＨ
2）q−をとおしてともに結合しており、Ｋは、−ＣＯ−
であり、Ｘは、ペプチド化学からの既知の任意の保護
基、Ｈ、または保護もしくは非保護型における任意の天
然もしくは非天然アミノ酸を表し、Ｙは、ＣＯＯＨ，Ｃ
ＳＯＨ，ＣＨ2ＯＨ，Ｒ”がペプチド化学からの任意の
保護基であるＣＯＯＲ”、キャリアー、リポーターリガ
ンドもしくは可溶化基を表し、そしてｎは、０、１、２
もしくは３であり得るし、ｑは、０もしくは１であり得
る。
【００１５】キャリアーシステムもしくはリポーターリ
ガンドは、細胞表面に特異的に結合し、そして本発明が
基づく核酸結合オリゴマーのインターナリゼーション
（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）を引き起こす細胞
特異的結合および認識因子を意味する。そのインターナ
リゼーションは、種々の方法において、例えばエンドサ
イトーシスによって、もしくは能動輸送機構によって行
われ得る。
【００１６】細胞表面の構造は、タンパク質、ポリペプ
チド、炭水化物もしくは脂質、またはそれらの組み合わ
せである。この理由によって、その結合および認識因子
は、受容体の天然もしくは合成リガンドであり得る。
【００１７】そのリガンドは、細胞表面構造によって認
識され得るように配列される官能基を備えたタンパク
質、ポリペプチド、炭水化物もしくは脂質、またはこれ
らの組み合わせであり得る。また、それは、生物学的組
織体、例えばウイルスもしくは細胞の一部分もしくは全
体、あるいはリポソームのような人工的輸送システムで
もあり得る。さらにまた、それは、抗体もしくは抗体の
類似物でもあり得る。
【００１８】異なるリガンドが、異なる細胞に、そのオ
リゴマーを差し向けるために使用される必要がある。
【００１９】オリゴマーをマクロファージに差し向ける
ための適切なリガンドは、好ましくは、例えばマンノー
スのような炭水化物、例えばポリリジン、ポリアルギニ
ンおよびポリオルニチンのようなポリカチオン、例えば
アビジンのような塩基性タンパク質、ならびにグリコペ
プチド、ペプチドもしくはリポペプチドである（G.Y.Ch
u et al., WO 92/9304701）。
【００２０】可溶化基は、水中でオリゴマーの溶解度を
仲立ちする官能基を意味する。これらは、例えば、アミ
ノ酸、ヒドロキシカルボン酸、アミノスルホン酸、ヒド
ロキシスルホン酸もしくはジアミンのエステルもしくは
アミドであり得る。オルニチンもしくはリジンのような
ジアミノカルボン酸、または２，４−ジアミノ酪酸のア
ミドが、適切である。
【００２１】グリシルグリシン骨格をもつペプチド−核
酸
【００２２】
【化４】
【００２３】この種の化合物の場合、ＲＮＡもしくはＤ
ＮＡのリボースリン酸骨格もしくはデオキシリボースリ
ン酸骨格は、それぞれ、グリシルグリシンジペプチド
（Ｒ＝Ｈ）からなるポリアミド骨格によって置換され
る。得られたオリゴマーは、高度のたわみ性が注目され
る。その上、異なる性質（例えば極性および電荷分布）
をもつさまざまな別の化合物が、各々の第２の位置にお
いてグリシンの代わりにその他のアミノ酸を組み込むこ
と（Ｒ≠Ｈ）によって利用性を高められる。
【００２４】４−アミノプロリン骨格をもつペプチド−
核酸 この種の構造においては、天然の核酸のリボースリン酸
骨格もしくはデオキシリボースリン酸骨格が、４−アミ
ノプロリンに基づくポリマーによって置換される。低い
たわみ性の化合物が得られる。各々の場合において示さ
れる立体配置に依ってそのオリゴマーの異なるプレ−オ
リエンテーションが達成される。
【００２５】
【化５】
【００２６】モノマーを構築するブロックの合成 グリシルグリシン骨格をもつペプチド−核酸のためのモ
ノマー グリシルグリシン化合物のためのモノマーの合成は、例
として、チミンを構築するブロックを用いて説明され
る：Ｎ−（ベンジル）エタノールアミン１が、３を生成
するために補助塩基の存在で、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブ
チル２によってアルキル化される。そのヒドロキシル基
が、脱離基に変換され（例えば４を生成するために）、
そして複素環核酸塩基によって置換される（例えば５を
生成するために）。
【００２７】
【化６】
【００２８】Ｎ−ベンジル基は、水素化分解的に除去さ
れ、続いて、得られたアミン（例えば、６）は、Ｎ，
Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドのような縮合剤
の存在で、Ｎ−Ｆｍｏｃ−グリシンと反応される。得ら
れたジペプチドエステル７は、トリフルオロ酢酸により
開裂される。その生成物８は、“Ｆｍｏｃ条件”下でペ
プチド固相合成における使用に適している。
【００２９】その他の核酸塩基の誘導体が、類似の方法
で合成できる。
【００３０】
【化７】
【００３１】４−アミノプロリン骨格をもつペプチド−
核酸のためのモノマー この種の構造のためのモノマーの合成は、例としてＬ−
シス系のチミン誘導体を用いて説明することができる：
トランス−Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−４−ヒ
ドロキシ−Ｌ−プロリン ９が、ヨードメチルおよび炭
酸セシウムを用いてメチルエステル１０に変換される。
１０における４−ヒドロキシル基は、脱離基、例えばメ
チルスルホン酸に変換される。この結果、例えば１１が
生成する。アジ化ナトリウムもしくはアジ化リチウムを
用いる置換反応が、Ｃ−４における反転により、シス−
４−アジド誘導体１２に導く。Ｎ−ベンジルオキシカル
ボニル保護基の存在で、アミノ基へのアジ化物官能基の
還元が、例えばピリジン／水中で硫化水素を用いて達成
される。続くｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基の導
入により、選択的に脱保護され得る誘導体１３を得る。
【００３２】その化合物１３のα−Ｎ−ベンジルオキシ
カルボニル保護基は、水素化分解的に除去される。この
結果、核酸塩基に結合するのに適する１４が生成する。
かくして、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボ
ジイミドのような縮合剤の存在で、１４と１−カルボキ
シメチルチミン１５との反応が、チミン化合物１６を与
える。そのメチルエステルの塩基による加水分解によ
り、ペプチド固相合成における使用に好適なペプチド−
核酸１７が生成する。
【００３３】もし、二重反転が１０において行われる場
合には、Ｌ−トランス−４−アミノプロリンの誘導体
が、類似の経路で得られる。Ｄ系統の化合物は、Ｄ−ヒ
ドロキシルプロリンから出発して得ることができる。
【００３４】その他の核酸塩基の誘導体が、類似の経路
によって調製できる。
【００３５】
【化８】
【００３６】オリゴマー化 オリゴマーを生成するためのその構築ブロックの結合
は、固相合成によって、好ましくは、Applied Biosyste
ms 431-Aペプチドシンセサイザーにおいて行われる。Ap
plied Biosystems製のＰＡＭ，ＭＢＨＡもしくはＨＭＰ
樹脂が、ポリマー支持体として用いられる。構築ブロッ
クは、慣用のペプチド合成と同様に、Ｆｍｏｃもしくは
Ｂｏｃ法のいずれかによって結合される。その構築ブロ
ックは、ヒドロキシベンゾトリアゾール／ジシクロヘキ
シルカルボジイミドもしくはペンタフルオロフェノール
／ジシクロヘキシルカルボジイミドを用いる反応によっ
てｎ−メチル−２−ピロリドンにおいて活性化される。
続いて、その配列は、ＨＦもしくはトリフルオロメタン
スルホン酸を用いて処理されることによって（Ｂｏｃ
法、ＰＡＭもしくはＭＢＨＡ樹脂）、またはトリフルオ
ロ酢酸によって（Ｆｍｏｃ法、ＨＭＰ樹脂）切り離され
る。その反応生成物は、アセトニトリル／水中のトリフ
ルオロ酢酸の上昇濃度勾配を用いるＲＰ８における調製
用ＨＰＬＣによって単離される。１５単位までの鎖長を
もつ配列が、この方法によって合成された。
【００３７】以下に挙げたグリシルグリシン構築ブロッ
クは、オリゴマー化のために好適に用いられる：
【００３８】
【化９】
【００３９】
【化１０】
【００４０】これは、次のグリシルグリシン合成同等物
を生じる：
【００４１】
【化１１】
【００４２】以下に挙げた４−アミノプロリン構築ブロ
ックは、オリゴマー化のために好適に用いられる：
【００４３】
【化１２】
【００４４】
【化１３】
【００４５】これは、以下の４−アミノプロリン合成同
等物を生じる：
【００４６】
【化１４】
【００４７】プロテアーゼおよびヌクレアーゼに対する
核酸結合ポリマーの安定性 それらの鎖長、配列および細胞透過性に加えて、プロテ
アーゼおよびヌクレアーゼに対するそれらの抵抗性が、
核酸結合オリゴマーの生物学的効果のために重要とな
る。
【００４８】それ故、アミノプロリン型の合成オリゴマ
ーが、プロテアーゼおよびヌクレアーゼに対する安定性
に関して、天然のオリゴヌクレオチドジエステルと比較
された。
【００４９】この目的のために、その核酸結合オリゴマ
ーは、例えば、プロナーゼＥ、プロテイナーゼＫ、トリ
プシン、エンドプロテアーゼＬｙｓ．Ｃ、Ｖ８プロテア
ーゼ、プロテアーゼＩＸおよびプロテアーゼＸＸＩのよ
うな非特異的および特異的プロテアーゼ、例えば、Ｓ１
ヌクレアーゼおよびＢａｌ３１ヌクレアーゼのようなヌ
クレアーゼ、ホスホジエステラーゼ、ならびに、種々の
ヌクレアーゼおよびプロテアーゼを含む細胞抽出液およ
び臓器抽出液および血清および血液抽出液を用いて処理
された。そのオリゴマーは、ポリアクリルアミドゲル電
気泳動およびＵＶインジケーターを含むＴＬＣプレート
上でのＵＶ投影によって、そしてポリアクリルアミドゲ
ルを銀染色することによって、分解について検査され
た。
【００５０】天然のオリゴヌクレオチドジエステルのみ
が、ヌクレアーゼに対する安定性が低い。それらは、３
０分ないし１時間内に完全に分解される。
【００５１】これに対して、アミノプロリン型の核酸結
合オリゴマーは、ヌクレアーゼおよびプロテアーゼに対
して完全に抵抗性を示し、それ故、アンチセンス阻害剤
としての使用に特に好適である。
【００５２】核酸へのオリゴマーの結合の研究 ゲルシフト分析によって測定されるようなＤＮＡ一本鎖
への結合 本明細書中に記載される核酸結合オリゴマーが、ゲルシ
フト分析において検討された。これらのバンド・シフト
実験において、放射能標識されたＤＮＡジエステルオリ
ゴヌクレオチドの移動挙動の変化が、本明細書中に記載
されたオリゴマーへのハイブリダイゼーションに続くポ
リアクリルアミドゲル電気泳動によって測定された。ハ
イブリッドの形成に因って、ハイブリダイズされたＤＮ
Ａジエステルオリゴヌクレオチドは、電気泳動におい
て、第１に分子量の増加の故に、そして第２に単位質量
当たりの比電荷の減少の故に、よりゆっくりと移動す
る。ハイブリダイズしてないＤＮＡオリゴヌクレオチド
と比較すると、ゲル中のそれらの移動は遅延される。
【００５３】二本鎖プラスミドＤＮＡにおけるストラン
ド置換 例えば、４−アミノプロリンもしくはグリシルグリシン
骨格をもつような核酸結合オリゴマーは、それらが、ス
トランド置換によって、配列選択的な様式で、二本鎖Ｄ
ＮＡ（ｄｓＤＮＡ）への結合を示すという点で生物学的
活性をもつ。この核酸結合オリゴマーの作用は、試験管
内の試験において、配列依存的および濃度依存的の様式
で示すことができる。
【００５４】遺伝子発現の阻害（試験管内での翻訳試
験） ゲルシフトおよびストランド置換実験において、興味が
あることが明らかにされた核酸結合オリゴマーが、特定
の遺伝子によって決定されるタンパク質合成を阻害する
能力について試験された。これに対する必要条件は、核
酸結合オリゴマーの対応する配列が、平行もしくは逆平
行の塩基配列において、関連した遺伝子に含まれること
であり、そして阻害されるべきその遺伝子において適切
な標的配列が、予備実験によって、例えばジエステルオ
リゴヌクレオチドを用いて選択されることである。本明
細書記載の核酸結合オリゴマーが、遺伝子発現の非常に
強力な、配列特異的阻害剤であることが、試験管内翻訳
において明らかになった。そのジエステルオリゴヌクレ
オチドよりも短い配列および低い濃度でも十分であっ
た。
【００５５】本明細書記載の治療学的に活性な核酸結合
オリゴマーは、配列選択的にＲＮＡに結合することによ
って、前述のように遺伝子発現を阻害できるのみなら
ず、また二本鎖ＤＮＡを置換するというそれらの性質の
結果として、阻害されるべき遺伝子のプロモーターおよ
びエンハンサー配列を、配列選択的に不活化することも
できる。
【００５６】遺伝子不活化に関するこの応用のために、
核酸結合オリゴマーは、（−）鎖ＤＮＡの核酸塩基配列
のみならず、また、あらゆる環境下で、阻害されるべき
標的ＤＮＡの（＋）鎖ＤＮＡ配列をも含有する。
【００５７】標的配列は、病気を起こす遺伝子のプロモ
ーターに由来することもある。エンハンサーもしくは転
写因子およびＤＮＡポリメラーゼもしくはＲＮＡポリメ
ラーゼを結合する標的配列、およびウイルス、細菌、真
菌もしくは体内寄生虫の遺伝子に存在するか、あるい
は、がん遺伝子、または炎症性障害、自己免疫障害、も
しくは高血圧のような冠循環の障害、または動脈硬化症
の発現に関与する遺伝子に存在する標的配列は、特に、
核酸結合オリゴマーの治療的適用のための強力な標的配
列として、本明細書中に記載することができる。
【００５８】その核酸結合オリゴマーに加えて、対応す
る医薬製剤は、非経口製剤のために慣用される、例えば
バファーおよび／または安定化剤のような補助物質また
はリポソーム製剤を含有する。局所適用もまた考えられ
る。この目的のために使用され得る製剤は、活性化合物
に加えて、この適用に適する医薬補助物質を含む、例え
ば、軟膏剤、クリーム剤、液剤もしくは硬膏剤である。
【００５９】
【実施例】
（実施例１）Ｎ−ベンジル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−グリシ
ン ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３） ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（３２．３ｍｌ；０．２ｍ
ｏｌ）を、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００
ｍｌ）中のＮ−ベンジルエタノールアミン（３０．２
ｇ；０．２ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２７．９
ｍｌ；０．２ｍｏｌ）の溶液に、氷中で冷却しつつ徐々
に滴下する。その混合液を、室温で２２時間撹拌し、次
いで真空濃縮する。続いて、その残渣を、トルエンを用
いて繰り返し蒸留する。得られたオイルを、ジクロロメ
タン（４００ｍｌ）に採取し、水（各回１６０ｍｌ）を
用いて振盪して２回抽出する。その有機相を乾燥（硫酸
マグネシウム）し、濃縮する。
【００６０】収量：４７．８ｇ（９０％）、無色オイ
ル。
【００６１】（実施例２）Ｎ−ベンジル−Ｎ−［２−（メタンスルホニルオキシ）
エチル］−グリシンｔｅｒｔ−ブチルエステル（４） 実施例１の生成物（１０．０ｇ；３８ｍｍｏｌ）を、無
水ピリジン（１８５ｍｌ）に溶解し、塩化メタンスルホ
ニル（３．７ｍｌ；４６ｍｍｏｌ）を、０℃で徐々に滴
下する。その溶液を、室温で６．５時間撹拌する。続い
て、その溶液を、ジクロロメタン（７４０ｍｌ）で希釈
し、炭酸水素ナトリウムの１０％溶液（各場合２５０ｍ
ｌ）を用いて２回抽出する。その有機相を乾燥（硫酸マ
グネシウム）し、濃縮し、続いて、その残渣をトルエン
を用いて繰り返し蒸留する。
【００６２】収量：１０．７９ｇ（８５％）、褐色オイ
ル。
【００６３】（実施例３）Ｎ−ベンジル−Ｎ−［２−（チミン−１−イル）エチ
ル］−グリシン ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５） 実施例２の生成物（１０．７３ｇ；３１ｍｍｏｌ）、チ
ミン（７．８８ｇ；６２ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム
（８．６４ｇ；６２ｍｍｏｌ）を、無水Ｎ，Ｎ−ジメチ
ルホルムアミド（３２５ｍｌ）に懸濁する。その懸濁液
を、室温で１時間、続いて、８０℃で６時間撹拌する。
その冷却混合液を、トルエンとともに繰り返し蒸留し、
その残渣をクロロホルム（５００ｍｌ）に採取し、水
（各場合１５０ｍｌ）を用いて２回抽出する。その粗生
成物を、シリカゲルのクロマトグラフィー（溶離液：ト
ルエン／エタノール、２７：１）によって精製する。
【００６４】収量：５．５８ｇ（４８％）。
【００６５】（実施例４）Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−グリシン ｔｅｒｔ−
ブチルエステル その化合物は、実施例１と同様にして、無水Ｎ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド（３００ｍｌ）中のトリエチルアミ
ン（３０．７ｇ；０．３ｍｏｌ）の存在で、エタノール
アミン（１８．３３ｇ；０．３ｍｏｌ）およびブロモ酢
酸ｔｅｒｔ−ブチル（５８．６ｇ；０．３ｍｏｌ）から
調製される。その粗生成物を、シリカゲルのクロマトグ
ラフィー（溶離液：クロロホルム／メタノール、１６：
１）によって精製する。
【００６６】収量：３３．６５ｇ（６４％）。
【００６７】（実施例５）Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ−（２−ヒドロキシ
エチル）−グリシンｔｅｒｔ−ブチルエステル 炭酸カリウム（３３．０ｇ；０．１９ｍｏｌ）を、ジオ
キサン（１．０ ｌ）および水（０．５ ｌ）中の実施
例４の化合物（３２．１５ｇ；０．１８ｍｏｌ）溶液に
添加する。ジオキサン（０．２ ｌ）中のクロロギ酸ベ
ンジル（２７．３ｍｌ；０．１９ｍｏｌ）溶液を、室温
で徐々に滴下する。その溶液を、室温で３．５時間撹拌
し、続いて濃縮する。その残渣を、ジクロロメタン
（３．０ ｌ）に採取し、水（１．０ ｌ）を用いて振
盪して抽出する。その水相を、ジクロロメタンで５回再
抽出する。その有機相を、合わせて、乾燥（硫酸マグネ
シウム）し、濃縮する。
【００６８】収量：２４．４７ｇ（４３％）、淡黄色オ
イル。
【００６９】（実施例６）Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ−［２−（メタンス
ルホニルオキシ）エチル］−グリシン ｔｅｒｔ−ブチ
ルエステル 実施例５の生成物（１４．４ｇ；４７ｍｍｏｌ）を、無
水ピリジン（２７０ｍｌ）中で、塩化メタンスルホニル
（４．４７ｍｌ；５８ｍｍｏｌ）と反応させ、続いて、
実施例２に記載のように精製する。
【００７０】収量：１４．７ｇ（８２％）、褐色オイ
ル。
【００７１】（実施例７）Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ−（２−チミン−１
−イル）−グリシンｔｅｒｔ−ブチルエステル 実施例６の生成物（８．４７ｇ；２２ｍｍｏｌ）を、実
施例３に詳述した方法により、溶媒としてＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（２２０ｍｌ）中の炭酸カリウム
（６．０６ｇ；４４ｍｍｏｌ）の存在下、チミン（５．
５１ｇ；４４ｍｍｏｌ）と反応させる。クロマトグラフ
ィーによる精製は、溶離液としてトルエン／エタノール
（１５：１）を用いて実施する。
【００７２】収量：３．１９ｇ（３５％）。
【００７３】（実施例８）Ｎ−［２−（チミン−１−イル）エチル］−グリシン
ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６） ａ）実施例３の生成物（５．５６ｇ；１５ｍｍｏｌ）
を、パラジウム／活性炭（１０％；２．７６ｇ）上の無
水メタノール（７５ｍｏｌ）中で、５時間、室温、大気
圧下で水素化する。その触媒を、溶液から吸引して濾別
し、次いで、その溶液を真空濃縮する。
【００７４】収量：３．８２ｇ（９１％）。
【００７５】ｂ）実施例６の生成物（２．７６ｇ；７ｍ
ｍｏｌ）を、硫酸バリウムのパラジウム（５％；１．３
８ｇ）上のメタノール（１０８ｍｌ）／ジオキサン（７
ｍｌ）中で、２１時間、室温、大気圧下で水素化する。
この時間の最後に、同量の触媒をもう一度添加し、水素
化をさらに７．５時間継続する。続く精製は、ａ）に記
載したように実施される。
【００７６】収量：１．９ｇ（定量的）。
【００７７】（実施例９）Ｎ−［Ｎ’−（フルオレニルメチルオキシカルボニル）
グリシル］−Ｎ−［２−（チミン−１−イル）エチル］
−グリシン ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７） 実施例８の生成物（３．７８ｇ；１３ｍｍｏｌ）および
Ｎ−（フルオレニルメチルオキシカルボニル）グリシン
（５．９ｇ；２０ｍｍｏｌ）を、アルゴンガスの保護気
体下で、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１６０ｍ
ｌ）に溶解する。Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジ
イミド（４．１１ｇ；２０ｍｍｏｌ）を、０℃で、少量
づつ添加する。その混合液を、室温で２１時間、撹拌
し、続いて、沈殿した固体を、吸引濾別する。次いで、
その溶液を真空濃縮し、続いてトルエンを用いて繰り返
し蒸留し、そしてその粗生成物を、シリカゲルでクロマ
トグラフィーする。
【００７８】（溶離液：トルエン／エタノール、３０：
１−２０：１）。
【００７９】収量：６．３３ｇ（８２％）。
【００８０】（実施例１０）Ｎ−［Ｎ’−（フルオレニルメチルオキシカルボニル）
グリシル］−Ｎ−［２−（チミン−１−イル）エチル］
−グリシン（８） 実施例９のｔｅｒｔ−ブチルエステル（６．３１ｇ；１
１ｍｍｏｌ）を、１００％ギ酸（１０５ｍｌ）中に、室
温で７時間放置する。続いて、その溶液を、トルエン、
そしてメタノール（各場合２００ｍｌ）２回とともに蒸
留する。その生成物をメタノールから結晶化する。
【００８１】収量：５．４３ｇ（９６％）。
【００８２】（実施例１１）Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−４−ヒドロキシ−Ｌ−
トランス−プロリンメチルエステル（１０） 無水メタノール（９００ｍｌ）中のＮ−ベンジルオキシ
カルボニル−４−ヒドロキシ−Ｌ−トランス−プロリン
９（４７．５ｇ；１７９ｍｍｏｌ）溶液を、炭酸セシウ
ムを用いてｐＨ＝９．０−９．５に調整する。続いて、
その混合液を、室温で３０分間撹拌し、次いで、濃縮す
る。高真空下で３０分間乾燥した後、その残渣を、無水
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９００ｍｌ）に採取す
る。ヨードメタン（２８．０ｇ；１９７ｍｍｏｌ）を添
加し、その混合液を、室温で２１時間撹拌する。その溶
液を濃縮し、続いて、その残渣を、トルエンとともに繰
り返し蒸留し、クロロホルム（１．８ ｌ）に採取し、
次いで、各々水および炭酸水素ナトリウムの１０％溶液
を用いて１回、そして水を用いて１回（各場合６００ｍ
ｌ）振盪して抽出する。その有機相を、乾燥（硫酸マグ
ネシウム）し、濃縮する。
【００８３】収量：５０．０ｇ（定量的）。
【００８４】（実施例１２）Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−４−メタンスルホニル
オキシ−Ｌ−トランス−プロリン メチルエステル（１
１） 実施例１１の生成物（５０．０ｇ；１７８ｍｍｏｌ）
を、無水ピリジン（９１０ｍｌ）に溶解する。塩化メタ
ンスルホニル（１８．６ｍｌ；２４１ｍｍｏｌ）を、氷
で冷却しながら滴下する。続いて、その溶液を、室温ま
で加温される間、２．５時間撹拌する。次いで、その溶
液を、ジクロロメタン（３．６ ｌ）で希釈し、炭酸水
素ナトリウムの１０％溶液（各場合１．１ ｌ）を用い
て２回振盪によって抽出する。その有機相を乾燥（硫酸
マグネシウム）し、濃縮し、続いて、その残渣をトルエ
ンとともに繰り返し蒸留する。
【００８５】収量：６４．０ｇ（定量的）。
【００８６】（実施例１３）４−アジド−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−シス
−プロリン メチルエステル（１２） 実施例１２で得られたメタンスルホネート（６４．０
ｇ；１７８ｍｍｏｌ）を、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルム
アミド（１．８ ｌ）に溶解し、アジ化リチウム（４
３．８ｇ；８９５ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、その混
合液を５０℃２４時間撹拌する。その反応溶液を真空濃
縮し、続いて、その残渣を、トルエンとともに繰り返し
蒸留し、酢酸エチル（１．８ ｌ）に採取し、そして水
（各回６００ｍｌ）を用いて２回抽出する。その有機相
を乾燥（硫酸マグネシウム）し、濃縮する。
【００８７】収量：５０．５ｇ（９３％）。
【００８８】（実施例１４）Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−４−ｔｅｒｔ−ブチル
オキシカルボニルアミノ−Ｌ−シス−プロリン メチル
エステル（１３） ピリジン／水（５：１；１．０２ ｌ）中の実施例１３
のアジド化合物（５２．０ｇ；０．１７ｍｏｌ）の溶液
を、０℃で硫化水素により飽和させる。その溶液を、室
温で１６時間放置し、続いて、真空濃縮する。その残渣
を、できるだけ少量のエタノールに採取し、沈殿する不
純物を、繰り返し濾別する。そのエタノール溶液を濃縮
し、高真空下で１６時間乾燥する。得られる粗生成物
を、ジオキサン（８５０ｍｌ）に溶解し、次いで、エチ
ルジイソプロピルアミン（４２．６ｍｌ；０．２４ｍｏ
ｌ）および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５６．２ｇ；
０．２６ｍｏｌ）を添加し、そして、その混合液を室温
で３時間撹拌する。得られる混合液を真空濃縮する。そ
の残渣を、ジクロロメタン（１．７ ｌ）に採取し、そ
して０．５Ｎクエン酸溶液（６００ｍｌ）を用いて１回
振盪によって抽出する。その水相を、ジクロロメタンを
用いて３回再抽出する。その合体された有機相を、乾燥
（硫酸マグネシウム）し、濃縮する。その粗生成物を、
シリカゲルのクロマトグラフィー（溶離液：トルエン／
エタノール、２２：１）によって精製する。収量：３
４．９ｇ（５４％）。
【００８９】（実施例１５）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｌ−シ
ス−プロリン メチルエステル（１４） 実施例１４の生成物（１２．３ｇ；３２ｍｍｏｌ）を、
パラジウム／活性炭（１０％；６．２ｇ）上のメタノー
ル（３２０ｍｌ）中で、２．５時間、室温、大気圧下で
水素化する。反応の完結後、その触媒を、吸引して濾別
し、そして、その溶液を濃縮する。
【００９０】収量：７．２ｇ（９１％）。
【００９１】（実施例１６）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（チミン−１−イル）−アセチル］−Ｌ−シス−プロ
リン メチルエステル（１５） １−カルボキシメチル−チミン（７．８２ｇ；４３ｍｍ
ｏｌ）を、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３４０
ｍｌ）中の実施例１５の生成物（６．９７ｇ；２９ｍｍ
ｏｌ）の溶液に添加する。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジシクロ
ヘキシルカルボジイミド（８．８２ｇ；４３ｍｍｏｌ）
を、氷中で冷却しながら添加し、次いで、その溶液を、
室温に加温しながら２．５時間撹拌する。沈殿した固体
を、吸引濾別し、その溶液を真空濃縮し、続いてその残
渣を、トルエンを用いて繰り返し蒸留する。その粗生成
物を、クロマトグラフィー（溶離液：トルエン／エタノ
ール、７：１）で精製する。
【００９２】収量：１０．４４ｇ（８９％）。
【００９３】（実施例１７）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（チミン−１−イル）−アセチル］−Ｌ−シス−プロ
リン（１６） 水酸化リチウム水和物（５０ｍｇ；１．２ｍｍｏｌ）
を、ジオキサン／水（５：１，７ｍｌ）中の実施例１６
の生成物（４１０ｍｇ；１．０ｍｍｏｌ）の溶液に添加
し、その混合液を、室温で５時間撹拌する。次いで、同
量の水酸化リチウム水和物を、再度添加し、その混合液
を、室温でさらに２時間放置する。その溶液を、０．５
Ｎ塩酸で中和し、濃縮する。その生成物をメタノールか
ら結晶化する。
【００９４】収量：１９５ｍｇ（４９％）。
【００９５】（実施例１８）Ｎ4−ベンゾイル−１−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボ
ニルメチルシトシン ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（２４ｍｌ；０．１５ｍｏ
ｌ）を、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．１５
ｌ）中のＮ4−ベンゾイルシトシン（２１．５ｇ；
０．１ｍｏｌ）および炭酸カリウム（１３．８ｇ；０．
１ｍｏｌ）の懸濁液に、室温で徐々に滴下する。その不
均質な混合液を、室温で２０時間激しく撹拌し、続い
て、不溶性の出発物質を、吸引濾別し；その濾液を、真
空濃縮し、続いて、その残渣を、トルエンとともに繰り
返し蒸留し、次いで、クロロホルム（１．０ ｌ）に採
取し；次いで、それを、水（０．３ ｌ）で振盪して１
回抽出し、そしてその相を、直ちに分離する。その有機
相を、さらに１回濾過し、濃縮する。
【００９６】収量：１５．２３ｇ（４６％）。
【００９７】（実施例１９）Ｎ4−ベンゾイル−１−カルボキシメチルシトシン 実施例１８の生成物を、トリフルオロ酢酸（１７０ｍ
ｌ）中に溶解し、室温で１時間４５分放置する。続い
て、その混合液を、トルエンとともに５回蒸留し、その
生成物を、デシケーター内で五酸化リン／水酸化カリウ
ム上で２４時間乾燥する。
【００９８】収量：１１．８ｇ（９３％）。
【００９９】（実施例２０）Ｎ−［（Ｎ4−ベンゾイルシトシン−１−イル）アセチ
ル］−４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−
Ｌ−シス−プロリン メチルエステル Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（８．６７
ｇ；４２ｍｍｏｌ）を、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド（３４０ｍｌ）中のＮ4−ベンゾイル−１−カルボ
キシメチルシトシン（１１．４６ｇ；４２ｍｍｏｌ）お
よび４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｌ
−シス−プロリン メチルエステル（６．８５ｇ；２８
ｍｍｏｌ）の溶液に、氷中で冷却しながら添加し、その
溶液を、室温まで加温しながら２時間撹拌する。次い
で、沈殿した固体を、吸引濾別し、そして濾液を濃縮
し、続いて、その残渣を、トルエンとともに繰り返し蒸
留する。その粗生成物を、クロマトグラフィー（溶離
液：トルエン／エタノール、８：１）によって精製す
る。
【０１００】収量：３．８０ｇ（２７％）。
【０１０１】（実施例２１）Ｎ−［（Ｎ4−ベンゾイルシトシン−１−イル）アセチ
ル］−４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−
Ｌ−シス−プロリン 実施例２０の生成物（２．６８ｇ；５．４ｍｍｏｌ）
を、メタノール（５４ｍ，ｌ）に溶解し、そして１Ｎ水
酸化ナトリウム溶液（６．３ｍｌ）を添加し、その混合
液を、室温で１８時間撹拌する。次いで、その混合液
を、０．５Ｎ塩酸で中和し、濃縮する。その生成物をメ
タノールから結晶化する。
【０１０２】収量：２．４４ｇ（９４％）。
【０１０３】（実施例２２）Ｎ−ベンゾイルオキシカルボニル−４−ニトロベンゾイ
ルオキシ−Ｌ−シス−プロリン メチルエステル Ｚ−Ｌ−トランス−ヒドロキシプロリン メチルエステ
ル３．２９ｇ（１１．８ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ５０
ｍｌ中に溶解する。次いで、トリフェニルホスフィン
３．７６ｇ（１４．３ｍｍｏｌ）およびｐ−ニトロ安息
香酸２．１９ｇ（１３．１ｍｍｏｌ）を、連続して室温
で添加する。その混合液を、０℃まで冷却し、無水ＴＨ
Ｆ中のＤＥＡＤ２．５ｇ（１４．３ｍｍｏｌ）を、この
温度で滴下する。続いて、その混合液を、室温で一夜撹
拌する。次いで、それを、高真空下で濃縮し、その残渣
を、シリカゲルでクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エ
チル／ヘキサン、２：１）を行う。
【０１０４】収量：３．３４ｇ（理論量の６６．２％） Ｒf：０．６８，溶離液、酢酸エチル／ヘキサン（２：
１）。
【０１０５】（実施例２３）Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−４−ヒドロキシ−Ｌ−
シス−プロリン メチルエステル 無水メタノール６００ｍｌ中に、Ｎ−ベンジルオキシカ
ルボニル−４−ニトロベンゾイルオキシ−Ｌ−シス−プ
ロリン メチルエステル２．７１ｇ（６．２ｍｍｏｌ）
を溶解する。続いて、ＣＨ3ＯＨ中のナトリウムメトキ
シド０．３４ｇ（６．３ｍｍｏｌ）の溶液を、５分間内
に滴下する。続いて、その混合液を、室温で３０分間撹
拌し、その後、希塩酸を、ｐＨ５−６まで添加する。そ
の混合液を濃縮し、塩化ナトリウムの飽和溶液を、その
残渣に添加し、この混合液を、酢酸エチルを用いて２回
振盪して抽出する。その有機相を、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥
し、濾過し、濃縮し、シリカゲルでクロマトグラフィー
（溶離液：酢酸エチル／ヘキサン、２：１）を行う。
【０１０６】収量：１．５２ｇ（理論量の８６．０％） Ｒf：０．２８，溶離液、酢酸エチル／ヘキサン（２：
１）。
【０１０７】（実施例２４）Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−４−メタンスルホニル
オキシ−Ｌ−シス−プロリン メチルエステル Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−４−ヒドロキシ−Ｌ−
シス−プロリン メチルエステル１．５９ｇ（５．７ｍ
ｍｏｌ）を、無水ピリジン５０ｍｌに溶解し，０℃に冷
却する。塩化メタンスルホニル０．６ｍｌ（７．７ｍｍ
ｏｌ）を、０℃で滴下し、続いて、室温で３時間撹拌す
る。次いで、その混合液を濃縮し、塩化メチレン１００
ｍｌを、その残渣に添加し、次いで、この後者の混合液
を、ＮａＨＣＯ3の１０％溶液を用いて２回振盪によっ
て抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、再び濃縮し、続い
て、その残渣をトルエンとともに繰り返し蒸留する。
【０１０８】収量：定量的 Ｒf：０．３３，溶離液、トルエン／ＥｔＯＨ（１０：
１）。
【０１０９】（実施例２５）４−アジド−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−トラ
ンス−プロリン メチルエステル Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−４−メタンスルホニル
オキシ−Ｌ−シス−プロリン メチルエステル２．０１
ｇ（５．６ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ５０ｍｌに溶解
し、アジ化リチウム１．３７ｇ（２８ｍｍｏｌ）を、室
温で添加する。その後、その混合液を５０℃で２４時間
撹拌する。次いで、その混合液を真空濃縮し、続いて、
その残渣を、トルエンとともに繰り返し蒸留する。その
残渣を、酢酸エチルに採取し、そして水を用いて２回抽
出し、次いで、その有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、再び
濃縮する。
【０１１０】収量：１．６６ｇ（理論量の９７％）。
【０１１１】Ｒf：０．５８、溶離液、トルエン／Ｅｔ
ＯＨ（１０：１）。
【０１１２】（実施例２６）Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−４−ｔｅｒｔ−ブトキ
シカルボニルアミノ−Ｌ−トランス−プロリン メチル
エステル ピリジン２７ｍｌおよび水５．３ｍｌ中の４−アジド−
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−トランス−プロリ
ン メチルエステル１．５９ｇ（５．２ｍｍｏｌ）の溶
液を、０℃で硫化水素により飽和させる。その混合液
を、室温で４５分間放置し、次いで、過剰のＨ2Ｓを、
窒素を通気して除去し、その混合液を、真空濃縮し、続
いて、その残渣を、トルエンとともに繰り返し蒸留す
る。その残渣を、エタノール３０ｍｌに採取し、沈殿す
る不純物を濾別する。その母液を、再び濃縮し、高真空
下で一夜乾燥する。得られる粗生成物を、ジオキサン
（無水）３０ｍｌに溶解し、エチルジイソプロピルアミ
ン１．３２ｍｌおよびＢＯＣ2Ｏ１．７３ｇを添加す
る。次いで、この混合液を室温で３時間撹拌し、次い
で、真空濃縮する。その残渣を、ＣＨ2Ｃｌ2 ５０ｍｌ
に採取し、そして０．５Ｎクエン酸を用いて１回振盪に
よって抽出し、その水相を、ＣＨ2Ｃｌ2を用いてさらに
３回抽出する。その合体された有機相を、Ｎａ2ＳＯ4で
乾燥し、濾過し、濃縮し、そしてその残留するオイル
を、シリカゲルでクロマトグラフィー（溶離液：トルエ
ン／ＥｔＯＨ、２５：１）する。
【０１１３】収量：１．６５ｇ（理論量の８３．７
％）。
【０１１４】Ｒf：０．４４、溶離液、トルエン／Ｅｔ
ＯＨ（１０：１）。
【０１１５】（実施例２７）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｌ−ト
ランス−プロリン メチルエステル Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−４−ｔｅｒｔ−ブチル
オキシカルボニルアミノ−Ｌ−トランス−プロリン メ
チルエステル２．９５ｇ（７．７ｍｍｏｌ）を、無水メ
タノール８０ｍｌに溶解し、パラジウム／活性炭（１０
％；１．４５ｇ）上で、２．５時間、室温、大気圧下で
水素化する。反応の完結後（ＴＬＣ，トルエン／ＥｔＯ
Ｈ、８：１で追跡）、その触媒を、吸引して濾別し、そ
の濾液を濃縮する。
【０１１６】収量：１．７５ｇ（理論量の９２．１％） Ｒf：０．２３、溶離液、トルエン／ＥｔＯＨ（８：
１）。
【０１１７】（実施例２８）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（チミン−１−イル）−アセチル］−Ｌ−トランス−
プロリン メチルエステル １−カルボキシ−メチルチミン２７５ｍｇ（１．５ｍｍ
ｏｌ）を、無水ＤＭＦ１０ｍｌに溶解し、−３０℃まで
冷却し、ＨＯＢＴｘＨ2Ｏ ２３０ｍｇ（１．７ｍｍｏ
ｌ）およびＥＤＣＬｘＨＣｌ ３３０ｍｇ（１．７ｍｍ
ｏｌ）を、この温度で添加する。次いで、その混合液
を、−３０℃で１５分間撹拌し、そしてＤＭＦ１０ｍｌ
およびトリエチルアミン０．４１ｍｌ（３ｍｍｏｌ）中
の４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｌ−
トランス−プロリン メチルエステル２４５ｍｇ（１ｍ
ｍｏｌ）の懸濁液を、−３０℃で添加する。その混合液
を、−３０℃で１時間撹拌し、続いて、室温で２４時間
放置する。次いで、それを濃縮し、その残渣を、酢酸エ
チルに採取し、１Ｎ ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3の飽和溶液
およびＮａＣｌの飽和溶液を用いて、順次抽出する。そ
の有機相を、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮する。
【０１１８】収量：３００ｍｇ（理論量の７３．１
％）。
【０１１９】Ｒf：０．１６、溶離液、トルエン／Ｅｔ
ＯＨ（８：１）。
【０１２０】（実施例２９）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（チミン−１−イル）−アセチル］−Ｌ−トランス−
プロリン ＬｉＯＨｘＨ2Ｏ ５０ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）を、ジ
オキサン６ｍｌおよび水１．２ｍｌ中の４−ｔｅｒｔ−
ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−［（チミン−１−
イル）−アセチル］−Ｌ−トランス−プロリン メチル
エステル４１０ｍｇ（１ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、そ
の混合液を、室温で５時間撹拌する。その後、さらにＬ
ｉＯＨｘＨ2Ｏ ５０ｍｇを添加し、その混合液を、さ
らに２時間撹拌する。その溶液を、０．５ＮＨＣｌで中
和し、続いて、その残渣をトルエンとともに繰り返し蒸
留し、次いで、イソプロパノールとともに沸騰させ、加
熱混合液から吸引濾別し、エーテルで洗浄する。
【０１２１】収量：３７５ｍｇ（理論量の９１．４％） Ｒf：０．２４、溶離液、ＣＨ2Ｃｌ2ＣＨ3ＯＨ（２：
１）。
【０１２２】（実施例３０）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（Ｎ4−ベンジルオキシカルボニルシトシン−１−イ
ル）−アセチル］−Ｌ−シス−プロリン メチルエステ
ル ４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｌ−シ
ス−プロリン メチルエステル４５４ｍｇ（１．５ｍｍ
ｏｌ）を、無水ＤＭＦ１０ｍｌ中に溶解し、−３０℃ま
で冷却する。ＨＯＢＴ２３０ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）お
よびＥＤＣ３３０ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）を、この温度
で添加し、続いて、その混合液を、−３０℃で１５分間
撹拌する。次いで、無水ＤＭＦ１０ｍｌおよびトリエチ
ルアミン０．４１ｍｌ（３ｍｍｏｌ）中のＮ4−ベンジ
ルオキシカルボニ−１−カルボキシメチルシトシン２４
５ｇの溶液を、滴下し（−３０℃で）、続いて、その懸
濁液を、この温度で１時間撹拌する。次いで、それを室
温まで加温し、一夜撹拌する。次いで、その溶液を、高
真空で濃縮し、酢酸エチルを添加する。その後、その混
合液を、１Ｎ ＨＣｌで１回、重炭酸ナトリウムの溶液
で１回およびＮａＣｌの溶液を用いて１回、抽出する。
その有機相を、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮す
る。
【０１２３】収量：４６０ｍｇ（理論量の８６．９％） Ｒf：０．５７、溶離液、ＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＯＨ（１
０：１）。
【０１２４】（実施例３１）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（Ｎ6−ベンジルオキシカルボニルシトシン−９−イ
ル）−アセチル］−Ｌ−シス−プロリン ４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（Ｎ4−ベンジルオキシカルボニルシトシン−１−イ
ル）−アセチル］−Ｌ−シス−プロリン メチルエステ
ル４４０ｍｇ（０．８３ｍｍｏｌ）を、無水ジオキサン
６ｍｌおよびＨ2Ｏ１．２ｍｌに溶解する。ＬｉＯＨｘ
Ｈ2Ｏ ４２ｍｇ（１ｍｍｏｌ）を、この溶液に添加
し、その混合液を、室温で５時間撹拌する。その後、さ
らにＬｉＯＨｘＨ2Ｏ ４２ｍｇを添加し、撹拌をさら
に２時間継続する。次いで、その溶液を、０．５ＮＨＣ
ｌで中和し、続いて、濃縮し、その残渣をトルエンとと
もに繰り返し再蒸留する。その結晶性残渣を約１０分
間、イソプロパノールとともに沸騰させ、次いで、加熱
混合液から吸引濾別し、エーテルで洗浄する。
【０１２５】収量：２５０ｍｇ（理論量の５８．４％） Ｒf：０．５７、溶離液、ＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＯＨ（２：
１）。
【０１２６】（実施例３２）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（Ｎ6−ベンジルオキシカルボニルアデニン−９−イ
ル）−アセチル］−Ｌ−シス−プロリン メチルエステ
ル Ｎ6−ベンジルオキシカルボニル−９−カルボキシメチ
ルアデニン３２７ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭ
Ｆ６１０ｍｌ中に溶解し、−３０℃まで冷却する。ＨＯ
ＢＴ １７５ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）およびＥＤＣｌ
２４８ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）を、この温度で添加し、
その混合液を、−３０℃でさらに１５分間撹拌しつつ放
置する。次いで、無水ＤＭＦ１０ｍｌおよびトリエチル
アミン０．４１ｍｌ（３ｍｍｏｌ）中の４−ｔｅｒｔ−
ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｌ−シス−プロリン
メチルエステル７３２ｍｇ（３ｍｍｏｌ）の溶液を、−
３０℃で滴下する。続いて、その混合液を、−３０℃で
さらに１時間撹拌し、その後、室温で一夜撹拌する。高
真空で濃縮した後、酢酸エチルをその残渣に添加し、こ
の混合液を、１Ｎ ＨＣｌで１回、重炭酸ナトリウム溶
液で１回およびＮａＣｌ溶液を用いて１回、抽出する。
その有機相を、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮す
る。
【０１２７】収量：３６０ｍｇ（理論量の６５％） Ｒf：０．８６、溶離液、ＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＯＨ（４：
１）。
【０１２８】（実施例３３）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（Ｎ6−ベンジルオキシカルボニルアデニン−９−イ
ル）−アセチル］−Ｌ−シス−プロリン ４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（Ｎ6−ベンジルオキシカルボニルアデニン−９−イ
ル）−アセチル］−Ｌ−シス−プロリン メチルエステ
ル１．４３ｇ（２．５８ｍｍｏｌ）を、ジオキサン２４
ｍｌおよびＨ2Ｏ４．８ｍｌに溶解し、ＬｉＯＨｘＨ2Ｏ
１２６ｍｇ（３．０９ｍｍｏｌ）を、この溶液に添加
し、その混合液を、室温で５時間撹拌する。その後、さ
らにＬｉＯＨｘＨ2Ｏ １２６ｍｇを添加し、その混合
液を、さらに２時間撹拌する。次いで、その溶液を、
０．５ＮＨＣｌで中和し、濃縮し、その残渣をトルエン
とともに繰り返し蒸留する。その結晶性残渣を約１０分
間、イソプロパノールとともに沸騰させ、加熱混合液か
ら吸引濾別し、エーテルでよく洗浄し、乾燥する。
【０１２９】収量：１００ｍｇ（理論量の４３．１％） Ｒf：０．８１、溶離液、ＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＯＨ（８：
１）。
【０１３０】（実施例３４）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（Ｎ6−ベンジルオキシカルボニルアデニン−９−イ
ル）−アセチル］−Ｌ−トランス−プロリン メチルエ
ステル Ｎ6−ベンジルオキシカルボニル−９−カルボキシメチ
ルアデニン３２７ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭ
Ｆ１０ｍｌ中に溶解し、−３０℃まで冷却する。ＨＯＢ
Ｔ １７５ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）およびＥＤＣｌ ２
４８ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）を、この温度で添加し、そ
の混合液を、−３０℃でさらに１５分間撹拌しつつ放置
する。次いで、無水ＤＭＦ１０ｍｌおよびトリエチルア
ミン０．４１ｍｌ（３ｍｍｏｌ）中の４−ｔｅｒｔ−ブ
チルオキシカルボニルアミノ−Ｌ−トランス−プロリン
メチルエステル７３２ｍｇ（３ｍｍｏｌ）の溶液を、
−３０℃で滴下する。続いて、その混合液を、−３０℃
でさらに１時間撹拌し、その後、室温で一夜撹拌する。
高真空で濃縮した後、酢酸エチルをその残渣に添加し、
この混合液を、１Ｎ ＨＣｌで１回、重炭酸ナトリウム
溶液で１回およびＮａＣｌ溶液を用いて１回、抽出す
る。その有機相を、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮
する。
【０１３１】収量：３６０ｍｇ（理論量の６５％） Ｒf：０．８８、溶離液、ＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＯＨ（４：
１）。
【０１３２】（実施例３５）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（Ｎ6−ベンジルオキシカルボニルアデニン−９−イ
ル）−アセチル］−Ｌ−トランス−プロリン ４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（Ｎ6−ベンジルオキシカルボニルアデニン−９−イ
ル）−アセチル］−Ｌ−トランス−プロリン メチルエ
ステル１．２２ｇ（２．２０ｍｍｏｌ）を、ジオキサン
２０ｍｌおよびＨ2Ｏ ４ｍｌに溶解する。ＬｉＯＨｘ
Ｈ2Ｏ １０７ｍｇ（２．６４ｍｍｏｌ）を、この溶液
に添加し、その混合液を、室温で５時間撹拌する。その
後、さらにＬｉＯＨｘＨ2Ｏ １０７ｍｇを添加し、そ
の混合液を、さらに２時間撹拌する。次いで、その溶液
を、０．５ＮＨＣｌで中和し、濃縮し、その残渣をトル
エンとともに繰り返し蒸留する。その結晶性残渣を、イ
ソプロパノール中で沸騰させ、加熱混合液から吸引濾別
し、エーテルでよく洗浄し、乾燥する。
【０１３３】収量：７２０ｍｇ（理論量の６１％） Ｒf：０．８、溶離液、ＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＯＨ（４：
１）。
【０１３４】（実施例３６）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（Ｎ4−ベンジルオキシカルボニルシトシン−１−イ
ル）−アセチル］−Ｌ−トランス−プロリン メチルエ
ステル Ｎ4−ベンジルオキシカルボニル−１−カルボキシメチ
ルシトシン４５４ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭ
Ｆ１０ｍｌ中に溶解し、−３０℃まで冷却する。ＨＯＢ
Ｔ ２３０ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）およびＥＤＣｌ ３
３０ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）を、この温度で添加し、続
いて、その混合液を、−３０℃でさらに１５分間撹拌す
る。次いで、無水ＤＭＦ１０ｍｌおよびトリエチルアミ
ン０．４１ｍｌ（３ｍｍｏｌ）中の４−ｔｅｒｔ−ブチ
ルオキシカルボニルアミノ−Ｌ−トランス−プロリン
メチルエステル２４５ｍｇ（１ｍｍｏｌ）の溶液を、−
３０℃で滴下し、続いて、その懸濁液を、この温度で１
時間撹拌する。次いで、その混合液を室温まで加温し、
一夜撹拌する。次いで、その溶液を、高真空で濃縮し、
酢酸エチルを添加する。その後、この混合液を、１Ｎ
ＨＣｌで１回、重炭酸ナトリウム溶液で１回およびＮａ
Ｃｌ溶液を用いて１回、抽出する。その有機部分を、Ｎ
ａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮する。その残渣を、シ
リカゲルでのクロマトグラフィーによって精製する。溶
離液、ＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＯＨ、１０：１。収量：４８
０ｍｇ（理論量の９０．７％） Ｒf：０．５９、溶離液、ＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＯＨ（１
０：１）。
【０１３５】（実施例３７）４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（Ｎ4−ベンジルオキシカルボニルシトシン−１−イ
ル）−アセチル］−Ｌ−トランス−プロリン ４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−Ｎ−
［（Ｎ4−ベンジルオキシカルボニルシトシン−１−イ
ル）−アセチル］−Ｌ−トランス−プロリン メチルエ
ステル４５０ｍｇ（０．８５ｍｍｏｌ）を、ジオキサン
６ｍｌおよびＨ2Ｏ １．２ｍｌに溶解する。ＬｉＯＨ
ｘＨ2Ｏ ４２ｍｇ（１ｍｍｏｌ）を、この溶液に添加
し、その混合液を、室温で５時間撹拌する。その後、さ
らにＬｉＯＨｘＨ2Ｏ ４２７ｍｇを添加し、その混合
液を、さらに２時間撹拌する。次いで、その溶液を、
０．５ＮＨＣｌで中和し、濃縮し、その残渣をトルエン
とともに繰り返し蒸留する。その結晶性残渣を、イソプ
ロパノールとともに沸騰させ、加熱混合液から吸引濾別
し、エーテルで洗浄する。
【０１３６】収量：３４０ｍｇ（理論量の７７．６％） Ｒf：０．３０、溶離液、ＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3ＯＨ（２：
１）。
【０１３７】（実施例３８）Ｈ−（ＩＩ Ｔ）2−Ａｌａ−ＯＨの固相合成 Ｎ−フルオレニルメトキシカルボニル−アラニン−ＨＭ
Ｐ樹脂１９２ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を、最初に、反応
容器中に導入する。各結合段階の前に、Ｎ−フルオレニ
ルメトキシカルボニル保護基を、ピペリジン処理によっ
て開裂する。各場合において、ＩＩＦｍｏｃＴ２５３ｍ
ｇ（０．５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−メチル−２−ピロリドン
中のヒドロキシベンゾトリアゾール１３５ｍｇ（１．０
ｍｍｏｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド２０
６ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）による反応によって活性化す
る。次いで、ポリマー支持体への段階毎の結合を行う。
最終の結合の後、Ｎ−フルオレニルメトキシカルボニル
保護基を、ピペリジン処理によって除去する。支持体か
らの開裂を、トリフルオロ酢酸による６０分間の処理に
よって行う。精製を、アセトニトリル中ＴＦＡの上昇濃
度勾配を用いてＣ８でのＲＰ−ＨＰＬＣによって実施す
る。
【０１３８】収量：１２ｍｇ（１９％）。
【０１３９】（実施例３９）Ｈ−（ＩＩ Ｔ）8−Ａｌａ−ＯＨの固相合成 Ｎ−フルオレニルメトキシカルボニル−アラニン−ＨＭ
Ｐ樹脂１９２ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を、最初に、反応
容器中に導入する。各結合段階の前に、Ｎ−フルオレニ
ルメトキシカルボニル保護基を、ピペリジン処理によっ
て開裂する。各場合において、ＩＩＦｍｏｃＴ２５３ｍ
ｇ（０．５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−メチル−２−ピロリドン
中のヒドロキシベンゾトリアゾール１３５ｍｇ（１．０
ｍｍｏｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド２０
６ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）による反応によって活性化す
る。次いで、ポリマー支持体への段階毎の結合を行う。
最終の結合の後、Ｎ−フルオレニルメトキシカルボニル
保護基を、ピペリジン処理によって除去する。支持体か
らの開裂を、トリフルオロ酢酸による６０分間の処理に
よって行う。精製を、アセトニトリル中ＴＦＡの上昇濃
度勾配を用いてＣ８でのＲＰ−ＨＰＬＣによって実施す
る。
【０１４０】収量：１３３ｇ（６０％）。
【０１４１】（実施例４０）Ｈ−（ＩＩＩ Ｔ）2−Ａｌａ−ＯＨの固相合成 ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アラニン−ＰＡＭ
樹脂１２５ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を、最初に、反応容
器中に導入する。各結合段階の前に、ｔｅｒｔ−ブチル
オキシカルボニル保護基を、トリフルオロ酢酸処理によ
って開裂する。各場合において、ＩＩＩＢｏｃＴ２００
ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−メチル−２−ピロリド
ン中のヒドロキシベンゾトリアゾール３６５ｍｇ（２．
７ｍｍｏｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド２
０６ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）による反応によって活性化
する。次いで、ポリマー支持体への段階毎の結合を行
う。最終の結合の後、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニ
ル保護基を、トリフルオロ酢酸処理によって除去する。
支持体からの開裂を、トリフルオロ酢酸２ｍｌ中トリフ
ルオロメタンスルホン酸２００μｌ溶液による２５分の
処理によって行う。精製を、アセトニトリル中ＴＦＡの
上昇濃度勾配を用いてＣ８でのＲＰ−ＨＰＬＣによって
実施する。
【０１４２】収量：２９ｍｇ（４５％）。
【０１４３】（実施例４１）Ｈ−（ＩＩＩ Ｔ）8−Ａｌａ−ＯＨの固相合成 ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アラニン−ＰＡＭ
樹脂１２５ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を、最初に、反応容
器中に導入する。各結合段階の前に、ｔｅｒｔ−ブチル
オキシカルボニル保護基を、トリフルオロ酢酸処理によ
って開裂する。各場合において、ＩＩＩＢｏｃＴ２００
ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−メチル−２−ピロリド
ン中のヒドロキシベンゾトリアゾール３６５ｍｇ（２．
７ｍｍｏｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド２
０６ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）による反応によって活性化
する。次いで、ポリマー支持体への段階毎の結合を行
う。最終の結合の後、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニ
ル保護基を、トリフルオロ酢酸処理によって除去する。
支持体からの開裂を、トリフルオロ酢酸２ｍｌ中トリフ
ルオロメタンスルホン酸２００μｌ溶液による２５分の
処理によって行う。精製を、アセトニトリル中ＴＦＡの
上昇濃度勾配を用いてＣ８でのＲＰ−ＨＰＬＣによって
実施する。
【０１４４】収量：４７ｍｇ（２０％）。
【０１４５】（実施例４２）Ｈ−（ＩＩＩ Ｔ）12−Ａｌａ−ＯＨの固相合成 ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−クロロベンジ
ルオキシカルボニル−リジン−ＰＡＭ樹脂１６４ｍｇ
（０．１ｍｍｏｌ）を、最初に、反応容器中に導入す
る。各結合段階の前に、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボ
ニル保護基を、トリフルオロ酢酸処理によって開裂す
る。各場合において、ＩＩＩＢｏｃＴ２００ｍｇ（０．
５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−メチル−２−ピロリドン中のヒド
ロキシベンゾトリアゾール３６５ｍｇ（２．７ｍｍｏ
ｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド２０６ｍｇ
（１．０ｍｍｏｌ）による反応によって活性化する。次
いで、ポリマー支持体への段階毎の結合を行う。最終の
結合の後、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル保護基
を、トリフルオロ酢酸処理によって除去する。支持体か
らの開裂を、トリフルオロ酢酸２ｍｌ中トリフルオロメ
タンスルホン酸２００μｌ溶液による２５分の処理によ
って行う。精製を、アセトニトリル中ＴＦＡの上昇濃度
勾配を用いてＣ８でのＲＰ−ＨＰＬＣによって実施す
る。
【０１４６】収量：１７４ｍｇ（５０％）。
【０１４７】（実施例４３）Ｈ−（ＩＩＩ Ｃ−ＩＩＩ Ｔ）−Ａｌａ−ＯＨの固相
合成 ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アラニン−ＰＡＭ
樹脂１２５ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を、最初に、反応容
器中に導入する。各結合段階の前に、ｔｅｒｔ−ブチル
オキシカルボニル保護基を、トリフルオロ酢酸処理によ
って開裂する。各場合において、ＩＩＩＢｏｃＣBz２４
３ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）およびＩＩＩＢｏｃＴ２００
ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−メチル−２−ピロリド
ン中のヒドロキシベンゾトリアゾール３６５ｍｇ（２．
７ｍｍｏｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド２
０６ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）による反応によって活性化
する。次いで、ポリマー支持体への段階毎の結合を行
う。最終の結合の後、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニ
ル保護基を、トリフルオロ酢酸処理によって除去する。
支持体からの開裂を、トリフルオロ酢酸２ｍｌ中トリフ
ルオロメタンスルホン酸２００μｌ溶液による２５分の
処理によって行う。ベンゾイル保護基を、５５℃で、濃
アンモニアを作用させて脱離する。精製を、アセトニト
リル中ＴＦＡの上昇濃度勾配を用いてＣ８でのＲＰ−Ｈ
ＰＬＣによって実施する。
【０１４８】収量：２８ｍｇ（４５％）。
【０１４９】（実施例４４ゲルシフト解析を用いる一本鎖ＤＮＡへのオリゴマー結
合の研究 特有の塩基配列のオリゴヌクレオチド１μｇを、容量１
０μｌにおいて、ポリヌクレオチドキナーゼおよびγ−
ＡＴＰを用いて、常法により５’末端を標識する（Samb
rook, Fritsch, Maniatis: Molecular Cloning, A Labo
ratory Manual,Cold Spring Harbor, 1989）。標識の
後、そのサンプルを、７０℃で１０分間加熱して酵素を
変性させ、続いて、無標識オリゴマー９μｇと混合す
る。試験される核酸結合オリゴマーの必要量（１−１０
μｇ）を、この混合液１μｌに添加し、そして全量を、
容量２０μｌにおいて、２２℃（室温）で３０分間イン
キュベートする（ハイブリダイゼーション）。その後、
そのサンプルを、３０分間氷上に置く。ハイブリダイズ
されない標識オリゴマーを、同様に処理し、対照とす
る。そのサンプルを、１ｘトリス−ホウ酸−ＥＤＴＡバ
ッファーを用いて１５％ポリアクリルアミドゲル上に添
加する。ゲルおよびバッファーを、冷蔵庫中で予め冷却
（８℃）し、その電気泳動を、冷蔵庫中で一夜５５Ｖで
実施させる。電気泳動の後、オートラジオグラムを、Ａ
ｇｆａフィルムで作成する（露出時間、１−１６時
間）。
【０１５０】（例示実験４５）核酸結合オリゴマーによる二本鎖プラスミドＤＮＡ中の
ストランド置換の実証 試験は、次のように実施された：（実施例において使用
されたプラスミドＤＮＡは、その試験での単なるモデル
基質である。互いに一定の距離において、ポリアデニン
配列領域を含むその他のプラスミドも、また使用でき
る）。
【０１５１】長さにおいて４８８０塩基対をもち、そし
て少なくとも９個の連続するアデニンヌクレオチドを有
する２個のポリアデニン配列領域（その配列領域は、１
１５０塩基対離れた距離にある）を含む二本鎖の環状プ
ラスミドＤＮＡが、本試験において使用される。
【０１５２】各々が、Ｈ2Ｏ １４μｌ中に未切断のプ
ラスミドＤＮＡ１．０μｇを含有する６サンプルが、平
行して準備され、（１−６）と命名された。各場合にお
いて、実施例２５からの核酸結合性オリゴマー Ｈ−
（ＩＩＩ Ｔ）12−Ｌｙｓ−ＯＨ ０．０１μｇ、０．
１μｇ、１．０μｇおよび２．０μｇの溶液１μｌ量
を、サンプル３〜６に添加し、そしてその混合液を、密
封されたエッペンドルフ反応管中で、３７℃で４５分間
インキュベートした。続いて、バッファー（２５０ｍＭ
酢酸ナトリウム、１ＭＮａＣｌ、２．５％グリセロー
ル、５ｍＭＺｎＣｌ2、ｐＨ４．４）４μｌを、そのサ
ンプル全てに添加し、一方、１０Ｕ／μｌの活性をもつ
アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｏｒｙｚａｅ）由来のＳ１ヌクレアーゼ（Boehringer M
annheim製）１μｌを、サンプル２〜６に添加した。３
０℃で１５分間インキュベートした後、サンプルを氷上
に置き、０．５ＭＥＤＴＡ１μｌおよびローディング
（ｌｏａｄｉｎｇ）バッファー（５０％グリセロール、
４０ｍＭトリス／ＨＣｌ中０．２５％ブロモフェノール
ブルー、２０ｍＭ酢酸ナトリウム、１ｍＭＥＤＴＡ、ｐ
Ｈ＝７．２）３μｌを添加し、そしてすぐに、そのサン
プルを、１．２％アガロースゲル上で電気泳動により分
画し、そして、臭化エチジウムで染色後、ゲル上の得ら
れたプラスミド断片のサイズを、２５４ｎｍＵＶ光を用
いるトランスイルミネーターにおいて、分子量スタンダ
ード（１−ｋｂラダー（ｌａｄｄｅｒ）、Gibco-BRL
製、D-7514 Eggenstein）と比較して測定した。
【０１５３】４８８０塩基対（直鎖状化プラスミド）お
よび、３７２０および１１５０塩基対（配列選択的断片
化）のＤＮＡ断片が、実施例２５からのオリゴマーを、
濃度０．１μｇより多く含むサンプル（サンプル５およ
び６）において認められることを発見した。
【０１５４】環状の未切断プラスミドＤＮＡの代わり
に、二つのポリアデニン配列領域の一つの隣接点での制
限エンドヌクレアーゼ分解によって直鎖化されたプラス
ミドを、そのサンプルに添加した修飾試験混合液を用い
ると、長さ３７３０および１１５０塩基対のＤＮＡ断片
が、サンプル５および６において同様に現れた。
【０１５５】この一連の試験を用いて、実施例２５のオ
リゴマーの二本鎖ＤＮＡへの、濃度依存的、配列選択的
結合を実証すること、および高塩濃度におけるＳ１ヌク
レアーゼ分解（Ｓ１ヌクレアーゼの一本鎖特異的活性）
の方法によって、結果として生じる一本鎖ＤＮＡを実証
することができた。
【０１５６】（実施例４６）遺伝子発現の阻害（試験管内での翻訳試験） ウサギ網状赤血球溶解物（Promega, Madison, Wisconsi
n）が、試験管内翻訳のために使用され、それは、ＨＩ
Ｖ−Ｉ由来のｔａｔ遺伝子およびトルペド・カリホルニ
カ（Ｔｏｒｐｅｄｏ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）由来の
アセチルコリン受容体のデルタサブユニットの試験管内
で転写されたｍＲＮＡを翻訳する。その他の遺伝子が同
様に使用され得る。その遺伝子のｃＤＮＡ構築物は、常
法により、ＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼもしくはＴ７−
ＲＮＡポリメラーゼを用いて転写され（Sambrook et a
l., 前記）、続いて、そのＤＮＡプラスミドは、ＤＮア
ーゼで分解され、そしてｍＲＮＡは、フェノールで処理
され、エタノールで３回沈殿された。得られるｍＲＮＡ
１−２μｇを、35Ｓ標識システインの存在で、試験管内
翻訳のために使用した。生成した放射性タンパク質を、
“Laemli,U.K. Nature 227, 683-685 (1970)”による６
−１８％もしくは６−１０％不連続ＳＤＳＰＡＧＥにお
いて分析した。
【０１５７】核酸結合オリゴマーによる翻訳の阻害を、
定量的に測定するために、オリゴマーの必要量（０．０
１−２μｇ）を、ｍＲＮＡに添加し、次いで、翻訳を、
上記ウサギ網状赤血球溶解物において実施した。その試
験混合液からのＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動ゲル
のオートラジオグラフを、スキャナーを用いて定量的に
評価した。
【０１５８】（実施例４７）プロテアーゼに対する安定性 プロテアーゼ安定性を検討するために、例示の方法で、
実施例２４および２５から得た核酸結合オリゴマーを用
いて、各場合、オリゴマー７５μｇ、そして下記表に挙
げたようにプロテアーゼ５μｌおよびプロテアーゼバッ
ファー（１Ｍトリス／ＨＣｌ，ｐＨ７．５；０．４ＭＣ
ａＣｌ２）５μｌを含む混合液を、二重に蒸留したＨ２
Ｏを用いて全量５０μｌにし、３７℃で３時間インキュ
ベートした。
【０１５９】Ｔリンパ球および血液からの細胞抽出液
が、また、精製された特定のプロテアーゼに加えてその
安定性研究に使用された。この目的のために、細胞懸濁
液５０ｍｌを、２０００ｒｐｍにおいて遠心分離し、ト
リス／ＨＣｌバッファー、ｐＨ７．５；４０ｍＭＣａＣ
ｌ２５００μｌに採取し、２０％ＳＤＳ５μｌを用いて
溶解した。０．１Ｍトリス／ＨＣｌバッファー、ｐＨ
７．５；４０ｍＭＣａＣｌ２に対して、そして４時間後
にバッファーを変えて透析の後、５μｌを、試験に直接
使用した。血液は、二重に蒸留したＨ２Ｏを用いて直接
溶解し、次いで、５μｌをその試験に使用した。ウシ血
清アルブミン（ＢＳＡ）およびリゾチームは、プロテア
ーゼによる分解のポジティブコントロールとして使用さ
れた。
【０１６０】等量のタンパク質ローディングバッファー
（８％β−メルカプトエタノール、３．５％ＳＤＳ、８
Ｍ尿素、１２５ｍＭトリス／ＨＣｌ、ｐＨ８；０．０２
％ブロモフェノールブルー、２０％グリセロール）を、
その混合液に添加した。
【０１６１】次いで、混合液の３０μｌ量を、ポリアク
リルアミドゲル（濃縮ゲル、４％、分離ゲル、１５％）
に添加し、２８０Ｖ／４０ｍＡで２．５時間電気泳動し
た。続いて、そのゲルを、ＵＶ投影によって解析した。
これを行うために、ゲルを、ＵＶインジケーターを含有
するＭｅｒｃｋＴＬＣクロマトプレート（シリカゲル６
０Ｆ ２５４）に載せ、２５４ｎｍで評価した。
【０１６２】これに加えて、タンパク質バンドの銀染色
を行った。これを行うために、ゲルを、次の溶液中でイ
ンキュベートした： １． ５０％メタノール、５％ＴＣＡ、３０分のインキ
ュベーション ２． ５０％メタノール、５％ＴＣＡ、１％ＣｕＣ
ｌ２、ＺｎＣｌ２、１５分 ３． １０％エタノール、５％酢酸、１５分 ４． ０．０１％ＫＭｎＯ４、水中、１５分 ５． １０％エタノール、５％酢酸、１０分 ６． １０％エタノール、１５分 ７． Ｈ２Ｏ、１５分 ８． ０．０１％ＡｇＮＯ３、１０分 ９． Ｈ２Ｏ、２０秒 １０．１０％Ｋ２ＣＯ３、１分 １１．現像剤（０．００７５％ホルムアルデヒド、１０
％Ｈ２ＣＯ３）、６−１０分 １２．５％酢酸、１０％エタノール、１分 １３．Ｈ２Ｏ、２時間 そのゲルを、プラスチックフィルム中の５％グリセロー
ル中で保存するか、またはゲル乾燥機中で処理した。
【０１６３】結果は、下表に示される。実施例２４およ
び２５からの核酸結合オリゴマーは、試験されたプロテ
アーゼおよび細胞抽出液に対して安定である。
【０１６４】
【表１】
【０１６５】（実施例４８）ヌクレアーゼに対する安定性 ヌクレアーゼに対する実施例２４および２５から得た核
酸結合オリゴマーの安定性を検討するために、各場合に
おいて、下記表に挙げたようにヌクレアーゼ（４０単
位）５μｌ、およびヌクレアーゼバッファー（Ｓ１ヌク
レアーゼバッファー、０．３Ｍ酢酸カリウム、ｐＨ４．
６； ２．５ＭＮａＣｌ、１０ｍＭＺｎＳＯ４、５０％
グリセロール）５μｌとともに、オリゴマー７５μｇ
を、二重に蒸留したＨ２Ｏを用いて全量５０μｌとし、
３７℃で３時間インキュベートした。Ｔリンパ球および
血液からの細胞抽出液が、また、精製された特定のヌク
レアーゼに加えてその安定性研究に使用された。この目
的のために、細胞懸濁液５０ｍｌを、２０００ｒｐｍに
おいて遠心分離し、トリス／ＨＣｌバッファー、ｐＨ
７．５；４０ｍＭＣａＣｌ２で５００μｌに採取し、２
０％ＳＤＳ５μｌを用いて溶解した。０．１Ｍトリス／
ＨＣｌバッファー、ｐＨ７．５；４０ｍＭＣａＣｌ２に
対して、そして４時間後にバッファーを変えて透析の
後、５μｌを、試験に直接使用した。血液は、二重に蒸
留したＨ２Ｏを用いる直接溶解に使用した。ヌクレアー
ゼによる分解のポジティブコントロールとして、２５重
合のオリゴヌクレオチドジエステルを使用した。
【０１６６】等量のタンパク質ローディングバッファー
（８％β−メルカプトエタノール、３．５％ＳＤＳ、８
Ｍ尿素、１２５ｍＭトリス／ＨＣｌ、ｐＨ８；０．０２
％ブロモフェノールブルー、２０％グリセロール）を、
その混合液に添加した。
【０１６７】次いで、混合液の３０μｌ量を、ポリアク
リルアミドゲル（濃縮ゲル、４％、分離ゲル、１５％）
に添加し、２８０Ｖ／４０ｍＡで２．５時間電気泳動し
た。続いて、そのゲルを、ＵＶ投影によって解析した。
これを行うために、ゲルを、ＵＶインジケーターを含有
するＭｅｒｃｋＴＬＣクロマトプレート（シリカゲル６
０Ｆ ２５４）に載せ、２５４ｎｍで評価した。結果
は、下表に示される。核酸結合オリゴマーは、試験され
たヌクレアーゼおよび細胞抽出液に対して安定である。
【０１６８】
【表２】
【０１６９】本発明の特徴および態様は以下のとおりで
ある。
【０１７０】１． 一般式（Ｉ）の化合物。
【０１７１】
【化１５】
【０１７２】式中、Ａは、−（ＣＨ2）n−もしくは−Ｃ
Ｏ−を表し、Ｂは、すべての天然もしくは非天然の核酸
塩基、例えば、チミン、ウラシル、シトシン、アデニ
ン、グアニンもしくはヒポキサンチン、または化学的修
飾によってそれから得られる誘導体、あるいは、アセチ
ル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、ベン
ゾイル、フェニルアセチル、ベンジルオキシカルボニ
ル、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル、アリルオキシ
カルボニルもしくは（９−フルオレニル）−メトキシカ
ルボニルのような保護基、またはペプチドおよび核酸化
学において常用されるその他の保護基によってそのアミ
ノ基において任意に置換されているか、または遊離のア
ミノ基を有するそれらのハロゲン化前駆体を表し、Ｄ
は、−（ＣＯ）p−を表し、ＥおよびＧは、互いに独立
して、−ＣＨＲ−を表していて、この場合、Ｒは、Ｈま
たは、ＤもしくはＬ型における、任意に保護基を有する
天然もしくは非天然アミノ酸の残基、例えば、グリシ
ン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリ
ン、スレオニン、システイン、メチオニン、フェニルア
ラニン、チロシン、ヒスチジン、トリプトファン、リジ
ン、オルニチン、アスパラギン、アスパラギン酸、グル
タミン、グルタミン酸、アルギニン、プロリン、ヒドロ
キシプロリンもしくはサルコシン、例えばデヒドロアラ
ニンもしくはデヒドロ−α−アミノ酪酸のようなデヒド
ロアミノ酸、例えばフェニルグリシン、４−ニトロフェ
ニルアラニン、３−ニトロフェニルアラニン、２−ニト
ロフェニルアラニン、２−，３−もしくは４−アミノフ
ェニルアラニン、３，４−ジクロロフェニルアラニン、
４−ヨードフェニルアラニン、４−メトキシフェニルア
ラニン、１−トリアゾリルアラニン、２−ピリジルアラ
ニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、
１−ナフチルアラニンもしくは２−ナフチルアラニンの
ようなその他の非天然アミノ酸からの残基を表し、ある
いは、任意に、ＥおよびＧは、アルキル鎖−（ＣＨ2）q
−をとおしてともに結合しており、Ｋは、−ＣＯ−，−
ＳＯ2−もしくは−ＣＨ2−を表し、Ｌは、キャリヤーシ
ステム（ｃａｒｒｉｅｒ ｓｙｓｔｅｍ）、リポーター
リガンド、可溶化基もしくは水素であり得るし、Ｍは、
Ｌとは独立して、キャリヤーシステム、リポーターリガ
ンド、可溶化基もしくは水素であり得るし、ｍは、０、
１、２もしくは３であり得るし、ｎは、０、１、２、３
もしくは４であり得るし、ｐは、０、１もしくは２であ
り得るし、ｑは、０、１もしくは２であり得るし、そし
てｓは、１および３０の間の値を仮定することができ
る。
【０１７３】２． 第１項記載の一般式（Ｉ）の化合
物。
【０１７４】式中、Ａは、−（ＣＨ2）n−もしくは−Ｃ
Ｏ−を表し、Ｂは、すべての天然核酸塩基、例えば、チ
ミン、ウラシル、シトシン、アデニン、グアニンもしく
はヒポキサンチン、あるいは、アセチル、トリフルオロ
アセチル、トリクロロアセチル、ベンゾイル、フェニル
アセチル、ベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチ
ルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニルもしくは
（９−フルオレニル）−メトキシカルボニルのような保
護基、またはペプチドおよび核酸化学において常用され
るその他の保護基によってそのアミノ基において任意に
置換されているか、または遊離のアミノ基を有するそれ
らのハロゲン化前駆体を表し、Ｄは、−（ＣＯ）p−を
表し、ＥおよびＧは、互いに独立して、−ＣＨＲ−を表
していて、この場合、Ｒは、Ｈまたは、ＤもしくはＬ型
における、任意に保護基を有する天然もしくは非天然ア
ミノ酸の残基、例えば、グリシン、アラニン、バリン、
ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、システ
イン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、ヒス
チジン、トリプトファン、リジン、オルニチン、アスパ
ラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、
アルギニン、プロリン、ヒドロキシプロリンもしくはサ
ルコシン、例えばデヒドロアラニンもしくはデヒドロ−
α−アミノ酪酸のようなデヒドロアミノ酸、例えばフェ
ニルグリシン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルア
ラニン、４−ピリジルアラニン、１−ナフチルアラニン
もしくは２−ナフチルアラニンのようなその他の非天然
アミノ酸からの残基を表し、あるいは、任意に、Ｅおよ
びＧは、アルキル鎖−（ＣＨ2）q−をとおしてともに結
合しており、Ｋは、−ＣＯ−，−ＳＯ2−もしくは−Ｃ
Ｈ2−であり得るし、Ｌは、キャリヤーシステム、リポ
ーターリガンド、可溶化基もしくは水素であり得るし、
Ｍは、Ｌとは独立して、キャリヤーシステム、リポータ
ーリガンド、可溶化基もしくは水素であり得るし、ｍ
は、０、１、２もしくは３であり得るし、ｎは、０、
１、２もしくは３であり得るし、ｐは、０もしくは１で
あり得るし、ｑは、０、１もしくは２であり得るし、そ
してｓは、３および２０の間の値を仮定することができ
る。
【０１７５】３． 第１項記載の一般式（Ｉ）の化合
物。
【０１７６】式中、Ａは、−（ＣＨ2）n−もしくは−Ｃ
Ｏ−を表し、Ｂは、すべての天然核酸塩基、例えば、チ
ミン、ウラシル、シトシン、アデニン、グアニンもしく
はヒポキサンチン、あるいは、アセチル、トリフルオロ
アセチル、トリクロロアセチル、ベンゾイル、フェニル
アセチル、ベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチ
ルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニルもしくは
（９−フルオレニル）−メトキシカルボニルのような保
護基、またはペプチドおよび核酸化学において常用され
るその他の保護基によってそのアミノ基において任意に
置換されているか、または遊離のアミノ基を有するそれ
らのハロゲン化前駆体を表し、Ｄは、−（ＣＯ）p−を
表し、ＥおよびＧは、互いに独立して、−ＣＨＲ−を表
していて、この場合、Ｒは、Ｈまたは、ＤもしくはＬ型
における、任意に保護基を有する天然もしくは非天然ア
ミノ酸の残基、例えば、グリシン、アラニン、バリン、
ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、システ
イン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、ヒス
チジン、トリプトファン、リジン、オルニチン、アスパ
ラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、
アルギニン、プロリン、ヒドロキシプロリンもしくはサ
ルコシン、または、例えばデヒドロアラニンもしくはデ
ヒドロ−α−アミノ酪酸のようなデヒドロアミノ酸から
の残基を表し、あるいは、任意に、ＥおよびＧは、アル
キル鎖−（ＣＨ2）q−をとおしてともに結合しており、
Ｋは、−ＣＯ−であり、Ｌは、キャリヤーシステム、リ
ポーターリガンド、可溶化基もしくは水素であり得る
し、Ｍは、Ｌとは独立して、キャリヤーシステム、リポ
ーターリガンド、可溶化基もしくは水素であり得るし、
ｍは、０、１、２もしくは３であり得るし、ｎは、０、
１、２もしくは３であり得るし、ｐは、０もしくは１で
あり得るし、ｑは、０もしくは１であり得るし、そして
ｓは、３および１８の間の値を仮定することができる。
【０１７７】４． 第１〜３項記載の１ないし複数の化
合物を含んでなる医薬品。
【０１７８】５． 医薬品調製のための第１〜３項記載
の化合物の使用。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 473/30 473/34 Ｃ０７Ｋ 5/062 ＺＮＡ 8318−4Ｈ 7/06 8318−4Ｈ (72)発明者 クリストフ・シユベムラー ドイツ42799ライヒリンゲン・アムクロス ター59 (72)発明者 エクハルト・シユベナー ドイツ42113ブツペルタール・パウル−エ ールリヒ−シユトラーセ29 (72)発明者 ウド・シユトロプ ドイツ42781ハーン・ブライデンホフアー シユトラーセ12 (72)発明者 ボルフガング・シユプリンガー ドイツ42113ブツペルタール・カテルンベ ルガーシユルベーク31 (72)発明者 アクセル・クレチユマー ドイツ51429ベルギツシユグラートバツ ハ・リヒヤルト−ツエルナー−シユトラー セ32 (72)発明者 トルステン・ペター ドイツ51061ケルン・ロゲンドルフシユト ラーセ63

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 一般式（Ｉ）の化合物。 【化１】 式中、Ａは、−（ＣＨ2）n−もしくは−ＣＯ−を表し、
    Ｂは、すべての天然もしくは非天然の核酸塩基、例え
    ば、チミン、ウラシル、シトシン、アデニン、グアニン
    もしくはヒポキサンチン、または化学的修飾によってそ
    れから得られる誘導体、あるいは、アセチル、トリフル
    オロアセチル、トリクロロアセチル、ベンゾイル、フェ
    ニルアセチル、ベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−
    ブチルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニルもし
    くは（９−フルオレニル）−メトキシカルボニルのよう
    な保護基、またはペプチドおよび核酸化学において常用
    されるその他の保護基によってそのアミノ基において任
    意に置換されているか、または遊離のアミノ基を有する
    それらのハロゲン化前駆体を表し、Ｄは、−（ＣＯ）p
    −を表し、ＥおよびＧは、互いに独立して、−ＣＨＲ−
    を表していて、この場合、Ｒは、Ｈまたは、Ｄもしくは
    Ｌ型における、任意に保護基を有する天然もしくは非天
    然アミノ酸の残基、例えば、グリシン、アラニン、バリ
    ン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、シ
    ステイン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、
    ヒスチジン、トリプトファン、リジン、オルニチン、ア
    スパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン
    酸、アルギニン、プロリン、ヒドロキシプロリンもしく
    はサルコシン、例えばデヒドロアラニンもしくはデヒド
    ロ−α−アミノ酪酸のようなデヒドロアミノ酸、例えば
    フェニルグリシン、４−ニトロフェニルアラニン、３−
    ニトロフェニルアラニン、２−ニトロフェニルアラニ
    ン、２−，３−もしくは４−アミノフェニルアラニン、
    ３，４−ジクロロフェニルアラニン、４−ヨードフェニ
    ルアラニン、４−メトキシフェニルアラニン、１−トリ
    アゾリルアラニン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジ
    ルアラニン、４−ピリジルアラニン、１−ナフチルアラ
    ニンもしくは２−ナフチルアラニンのようなその他の非
    天然アミノ酸からの残基を表し、あるいは、任意に、Ｅ
    およびＧは、アルキル鎖−（ＣＨ2）q−をとおしてとも
    に結合しており、Ｋは、−ＣＯ−，−ＳＯ2−もしくは
    −ＣＨ2−を表し、Ｌは、キャリヤーシステム（ｃａｒ
    ｒｉｅｒ ｓｙｓｔｅｍ）、リポーターリガンド、可溶
    化基もしくは水素であり得るし、Ｍは、Ｌとは独立し
    て、キャリヤーシステム、リポーターリガンド、可溶化
    基もしくは水素であり得るし、ｍは、０、１、２もしく
    は３であり得るし、ｎは、０、１、２、３もしくは４で
    あり得るし、ｐは、０、１もしくは２であり得るし、ｑ
    は、０、１もしくは２であり得るし、そしてｓは、１お
    よび３０の間の値を仮定することができる。
  2. 【請求項２】 請求項１記載の１ないし複数の化合物を
    含んでなる医薬品。
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