JP3261086B2 - セリンプロテアーゼ阻害剤 - Google Patents
セリンプロテアーゼ阻害剤Info
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- JP3261086B2 JP3261086B2 JP30344997A JP30344997A JP3261086B2 JP 3261086 B2 JP3261086 B2 JP 3261086B2 JP 30344997 A JP30344997 A JP 30344997A JP 30344997 A JP30344997 A JP 30344997A JP 3261086 B2 JP3261086 B2 JP 3261086B2
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- Japan
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- luffa
- extract
- serine protease
- hybrid cell
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヘチマとアマチャヅル
の雑種細胞抽出物のセリンプロテアーゼ阻害剤に関す
る。
の雑種細胞抽出物のセリンプロテアーゼ阻害剤に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】セリンプロテアーゼ阻害剤は動物、植物
中に広く分布しており、例えば動物由来のものとして
は、ウシ、ブタ、ヒツジの膵臓、耳下腺、リンパ腺など
から分離されており、植物由来のものとしては、ダイ
ズ、コムギ、トウモロコシなどから分離されている。セ
リンプロテアーゼ阻害剤の応用例として抗炎症剤（特開
平3-176499）、臨床検査薬（特開平03-279859）、急性
循環不全およびそれに伴う臓器機能不全に対する治療薬
（特開平03-227941）がある。
中に広く分布しており、例えば動物由来のものとして
は、ウシ、ブタ、ヒツジの膵臓、耳下腺、リンパ腺など
から分離されており、植物由来のものとしては、ダイ
ズ、コムギ、トウモロコシなどから分離されている。セ
リンプロテアーゼ阻害剤の応用例として抗炎症剤（特開
平3-176499）、臨床検査薬（特開平03-279859）、急性
循環不全およびそれに伴う臓器機能不全に対する治療薬
（特開平03-227941）がある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は新規なセリン
プロテアーゼ阻害剤を提供することを目的としたもので
ある。
プロテアーゼ阻害剤を提供することを目的としたもので
ある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明のヘチマとアマチ
ャヅルの雑種細胞抽出物は特願平01-44297の方法により
作出した雑種細胞のカルス（Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６）
を用いて調製した。
ャヅルの雑種細胞抽出物は特願平01-44297の方法により
作出した雑種細胞のカルス（Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６）
を用いて調製した。
【０００５】ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞のカルス
は単独で用いてもよいし、２種以上の混合物として用い
てもよい。
は単独で用いてもよいし、２種以上の混合物として用い
てもよい。
【０００６】ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物
は、上記の雑種細胞を抽出溶媒と共に浸漬又は加熱した
後、ろ過し、必要ならば濃縮して得られる。ヘチマとア
マチャヅルの雑種細胞を抽出する溶媒として、例えば、
水、低級１価アルコール類（メタノール、エタノール、
1-プロパノール、2-プロパノール、1-ブタノール、2-ブ
タノール等）、液状多価アルコール（1,3-ブチレングリ
コール、プロピレングリコール等）、低級アルキルエス
テル（酢酸エチル、酢酸メチル等）、炭化水素類（ベン
ゼン、 ヘキサン、 ペンタン等）、ケトン類（アセト
ン、メチルエチルケトン等）、エーテル類（エチルエー
テル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）、ア
セトニトリル等が挙げられる。これらの溶媒は、単独で
用いても２種以上を混合して用いてもよい。好ましく
は、水あるいは水溶性溶媒（水と任意の割合で混合可能
な溶媒。例えば、エタノール、1,3-ブチレングリコー
ル、プロピレングリコール等）のうち１種又は２種以上
の溶媒を用いるのがよい。抽出物は、そのまま用いても
よいし、溶媒を一部又は全部留去して用いてもよい。
は、上記の雑種細胞を抽出溶媒と共に浸漬又は加熱した
後、ろ過し、必要ならば濃縮して得られる。ヘチマとア
マチャヅルの雑種細胞を抽出する溶媒として、例えば、
水、低級１価アルコール類（メタノール、エタノール、
1-プロパノール、2-プロパノール、1-ブタノール、2-ブ
タノール等）、液状多価アルコール（1,3-ブチレングリ
コール、プロピレングリコール等）、低級アルキルエス
テル（酢酸エチル、酢酸メチル等）、炭化水素類（ベン
ゼン、 ヘキサン、 ペンタン等）、ケトン類（アセト
ン、メチルエチルケトン等）、エーテル類（エチルエー
テル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）、ア
セトニトリル等が挙げられる。これらの溶媒は、単独で
用いても２種以上を混合して用いてもよい。好ましく
は、水あるいは水溶性溶媒（水と任意の割合で混合可能
な溶媒。例えば、エタノール、1,3-ブチレングリコー
ル、プロピレングリコール等）のうち１種又は２種以上
の溶媒を用いるのがよい。抽出物は、そのまま用いても
よいし、溶媒を一部又は全部留去して用いてもよい。
【０００７】本発明のセリンプロテアーゼ阻害剤には、
ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物の効果を損なわ
ない範囲内で、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸
類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石
鹸、pH調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸
収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、キレート剤等の成分
を配合することができる。
ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物の効果を損なわ
ない範囲内で、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸
類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石
鹸、pH調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸
収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、キレート剤等の成分
を配合することができる。
【０００８】本発明のセリンプロテアーゼ阻害剤は、医
薬品、医薬部外品、化粧品などに用いることができ、そ
の剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲ
ル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファン
デーション、打粉、口紅、アイシャドウ、頬紅、シャン
プー、リンス、ヘアートリートメント、ヘアートニック
等が挙げられる。
薬品、医薬部外品、化粧品などに用いることができ、そ
の剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲ
ル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファン
デーション、打粉、口紅、アイシャドウ、頬紅、シャン
プー、リンス、ヘアートリートメント、ヘアートニック
等が挙げられる。
【０００９】
【実施例】次に本発明を詳細に説明するため実施例を挙
げるが、本発明はこれに限定されるものではない。な
お、実施例に示す配合量の部とは重量部を、％とは重量
％を示す。
げるが、本発明はこれに限定されるものではない。な
お、実施例に示す配合量の部とは重量部を、％とは重量
％を示す。
【００１０】実施例１ ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞熱水抽出物 ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞（Ｆ３）100gに300mL
の水を加え、100℃で２時間抽出した後、ろ過し、その
濾液を濃縮し、乾固して、ヘチマとアマチャヅルの雑種
細胞熱水抽出物6gを得た。
の水を加え、100℃で２時間抽出した後、ろ過し、その
濾液を濃縮し、乾固して、ヘチマとアマチャヅルの雑種
細胞熱水抽出物6gを得た。
【００１１】実施例２ ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞エタノール
抽出物 ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞（Ｆ４）100gに1,000m
Lのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、ろ過
し、その濾液を濃縮し、乾固して、ヘチマとアマチャヅ
ルの雑種細胞エタノール抽出物5gを得た。
抽出物 ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞（Ｆ４）100gに1,000m
Lのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、ろ過
し、その濾液を濃縮し、乾固して、ヘチマとアマチャヅ
ルの雑種細胞エタノール抽出物5gを得た。
【００１２】実施例３ ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞50%エタノ
ール抽出物 ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞（Ｆ５）100gに1,000m
Lの50%エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、ろ
過し、その濾液を濃縮し、乾固して、ヘチマとアマチャ
ヅルの雑種細胞50%エタノール抽出物7gを得た。
ール抽出物 ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞（Ｆ５）100gに1,000m
Lの50%エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、ろ
過し、その濾液を濃縮し、乾固して、ヘチマとアマチャ
ヅルの雑種細胞50%エタノール抽出物7gを得た。
【００１３】実施例４ ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞1,3-ブチレ
ングリコール抽出物 ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞（Ｆ６）50gに、300mL
の1,3-ブチレングリコールを加え、常温で10日間抽出し
た後、ろ過し、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞1,3-ブ
チレングリコール抽出物280gを得た。
ングリコール抽出物 ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞（Ｆ６）50gに、300mL
の1,3-ブチレングリコールを加え、常温で10日間抽出し
た後、ろ過し、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞1,3-ブ
チレングリコール抽出物280gを得た。
【００１４】
【発明の効果】本発明のヘチマとアマチャヅルの雑種細
胞抽出物は、安定した高いセリンプロテアーゼ阻害活性
能を有する。次に、本発明の効果を詳細に説明する。
胞抽出物は、安定した高いセリンプロテアーゼ阻害活性
能を有する。次に、本発明の効果を詳細に説明する。
【００１５】代表的なセリンプロテアーゼであるトリプ
シンおよびエラスターゼに対する阻害活性を測定した。
シンおよびエラスターゼに対する阻害活性を測定した。
【００１６】 実験例１ トリプシン活性阻害試験 ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞熱水抽出物（実施例
１）、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞エタノール抽出
物（実施例２）およびヘチマとアマチャヅルの雑種細胞
50％エタノール抽出物（実施例３）のトリプシン活性に
対する阻害試験を行った。トリプシン（シグマ社製）を
0.1M Tris-HCl(pH7.5)緩衝液に溶解して100U/mLの酵素
溶液を調製した。0.1M Tris-HCl(pH7.5)緩衝液0.5mLに
水440μL、酵素溶液10μLおよびヘチマとアマチャヅル
の雑種細胞抽出物を各濃度でそれぞれ50μLを加え、30
℃で2分間保温した。次に、10mM Boc-Phe-Ser-Arg-MCA
（ペプチド研製）DMSO溶液 10μLを加え、1時間反応
後、常法により反応を停止し、遊離したアミノメチルク
マリンの蛍光強度を測定した。抽出物無添加時の活性に
対する添加時の活性の値から活性阻害率を求めた。その
結果、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物はトリプ
シンに対し、表１に示すような阻害効果を示した。
１）、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞エタノール抽出
物（実施例２）およびヘチマとアマチャヅルの雑種細胞
50％エタノール抽出物（実施例３）のトリプシン活性に
対する阻害試験を行った。トリプシン（シグマ社製）を
0.1M Tris-HCl(pH7.5)緩衝液に溶解して100U/mLの酵素
溶液を調製した。0.1M Tris-HCl(pH7.5)緩衝液0.5mLに
水440μL、酵素溶液10μLおよびヘチマとアマチャヅル
の雑種細胞抽出物を各濃度でそれぞれ50μLを加え、30
℃で2分間保温した。次に、10mM Boc-Phe-Ser-Arg-MCA
（ペプチド研製）DMSO溶液 10μLを加え、1時間反応
後、常法により反応を停止し、遊離したアミノメチルク
マリンの蛍光強度を測定した。抽出物無添加時の活性に
対する添加時の活性の値から活性阻害率を求めた。その
結果、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物はトリプ
シンに対し、表１に示すような阻害効果を示した。
【００１７】
【００１８】 実験例２ エラスターゼ活性阻害試験 ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞熱水抽出物（実施例
１）、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞エタノール抽出
物（実施例２）およびヘチマとアマチャヅルの雑種細胞
50％エタノール抽出物（実施例３）のエラスターゼ活性
に対する阻害試験を行った。カゼインを基質として含む
ポリアクリルアミドゲルを作製し、50U/mLのエラスター
ゼ（シグマ社製）を添加して電気泳動を行った。その
後、このゲルを30mM Tris-HCl(pH7.5)緩衝液中で37℃で
20時間酵素基質反応を行った。この際、ヘチマとアマチ
ャヅルの雑種細胞抽出物を各濃度で緩衝液中に添加し
た。反応終了後、ゲルをタンパク染色すると、エラスタ
ーゼ活性の強いバンドほど染色されにくくなる。このバ
ンドをデンシトメーターにて定量し、抽出物無添加時の
活性に対する添加時の活性の値から、活性阻害率を求め
た。その結果、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物
はエラスターゼ活性に対し、表２に示すような阻害効果
を示した。
１）、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞エタノール抽出
物（実施例２）およびヘチマとアマチャヅルの雑種細胞
50％エタノール抽出物（実施例３）のエラスターゼ活性
に対する阻害試験を行った。カゼインを基質として含む
ポリアクリルアミドゲルを作製し、50U/mLのエラスター
ゼ（シグマ社製）を添加して電気泳動を行った。その
後、このゲルを30mM Tris-HCl(pH7.5)緩衝液中で37℃で
20時間酵素基質反応を行った。この際、ヘチマとアマチ
ャヅルの雑種細胞抽出物を各濃度で緩衝液中に添加し
た。反応終了後、ゲルをタンパク染色すると、エラスタ
ーゼ活性の強いバンドほど染色されにくくなる。このバ
ンドをデンシトメーターにて定量し、抽出物無添加時の
活性に対する添加時の活性の値から、活性阻害率を求め
た。その結果、ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物
はエラスターゼ活性に対し、表２に示すような阻害効果
を示した。
【００１９】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 43/00 Ａ６１Ｐ 43/00 審査官 高原 慎太郎 (56)参考文献 特開 平２−222676（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−258105（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−5006（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−287522（ＪＰ，Ａ) 特開 平９−20641（ＪＰ，Ａ) 特開 平９−268121（ＪＰ，Ａ) 特開 平９−25213（ＪＰ，Ａ) 特開 平９−20643（ＪＰ，Ａ) 特開 平９−20640（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 7/00 - 7/50 A61K 35/78 A61P 43/00 C12N 5/14 ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】 ヘチマとアマチャヅルの雑種細胞抽出物
を含有することを特徴とするセリンプロテアーゼ阻害
剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30344997A JP3261086B2 (ja) | 1997-10-17 | 1997-10-17 | セリンプロテアーゼ阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30344997A JP3261086B2 (ja) | 1997-10-17 | 1997-10-17 | セリンプロテアーゼ阻害剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11124325A JPH11124325A (ja) | 1999-05-11 |
| JP3261086B2 true JP3261086B2 (ja) | 2002-02-25 |
Family
ID=17921131
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30344997A Expired - Lifetime JP3261086B2 (ja) | 1997-10-17 | 1997-10-17 | セリンプロテアーゼ阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3261086B2 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1163900A1 (en) * | 1998-11-05 | 2001-12-19 | Protease Sciences, Incorporated | Cosmetic compositions containing human type serine protease inhibitors |
| JP2004075661A (ja) * | 2002-06-18 | 2004-03-11 | Shiseido Co Ltd | 表皮基底膜ケアを特徴とする皮膚外用剤、皮膚基底膜構造形成促進剤および人工皮膚の製造方法 |
| KR100667448B1 (ko) | 2005-09-01 | 2007-01-10 | 주식회사 쵸이스코스메틱 | 돌외 추출물이 함유된 화장료 조성물 |
| WO2018035396A1 (en) * | 2016-08-18 | 2018-02-22 | Mitchell Lawrence Jones | Sampling systems and related materials and methods |
| KR102435006B1 (ko) * | 2020-11-20 | 2022-08-24 | 주식회사 바이오에프디엔씨 | 돌외의 식물세포 배양물을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 외용제 조성물 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60258105A (ja) * | 1984-06-06 | 1985-12-20 | Nonogawa Shoji:Kk | 化粧料 |
| JPS615006A (ja) * | 1984-06-19 | 1986-01-10 | Sanki Shoji Kk | 皮膚用剤 |
| JPH02222676A (ja) * | 1989-02-23 | 1990-09-05 | Nonogawa Shoji:Kk | 雑種細胞、その作出方法および化粧料 |
| JP2867163B2 (ja) * | 1990-03-31 | 1999-03-08 | 株式会社資生堂 | 浴用組成物 |
| JPH0920641A (ja) * | 1995-07-07 | 1997-01-21 | Shiseido Co Ltd | プロテアーゼ阻害剤 |
| JPH0920640A (ja) * | 1995-07-07 | 1997-01-21 | Shiseido Co Ltd | 肌荒れ改善用外用剤 |
| JPH0920643A (ja) * | 1995-07-07 | 1997-01-21 | Shiseido Co Ltd | 肌荒れ改善用外用剤 |
| JPH0925213A (ja) * | 1995-07-13 | 1997-01-28 | Shiseido Co Ltd | 皮膚外用剤 |
| JPH09268121A (ja) * | 1996-04-04 | 1997-10-14 | Shiseido Co Ltd | 皮膚外用剤 |
-
1997
- 1997-10-17 JP JP30344997A patent/JP3261086B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH11124325A (ja) | 1999-05-11 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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