KR101828056B1 - 천화분 추출물을 유효성분으로 함유하는 uvb로 인한 피부 손상 회복용 화장료 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 천화분 추출물을 유효성분으로 함유하는 UVB 피부 손상 복구용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 천화분 추출물을 유효성분으로 함유함으로써, miR-142-3p의 발현을 억제하여 'DNA 손상 회복 활성에 관여하는 BMAL1 유전자의 발현'을 증가시켜, UVB에 의한 피부 손상을 복구하는데 매우 우수한 효과를 발휘한다.

Description

천화분 추출물을 유효성분으로 함유하는 UVB로 인한 피부 손상 회복용 화장료 조성물 {Cosmetic composition for repairing skin damaged by UVB irradiation with the extract of Trichosanthes kirilowii}
본 발명은 천화분 추출물을 유효성분으로 함유하는 UVB 피부 손상 복구용 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부는 신체의 모든 기관들과 마찬가지로 노화가 진행되어 기능이 쇠퇴하는데, 피부 노화의 원인에는 신체 노화에 따른 피부 노화 (내적 요인)와 여러 해로운 환경 노출에 따른 피부 노화 (외적 요인)가 있다. 특히, 외적 요인에 의한 노화 중 자외선 (UV)에 의한 광피부노화가 피부 노화를 촉진하는 주요 환경요인으로 작용한다. 이러한 요인으로 노화된 피부는 주름 형성, 피부톤 손실 및 피부 처짐 등의 현상이 나타난다.
자외선 중 에너지 강도가 가장 강한 자외선 B 방사선 (UVB)은 DNA 손상, 산화 스트레스 및 염증의 원인이며, 피부 면역 시스템을 억제하여 피부 노화 및 피부암을 유발한다. 또한, 자외선 B 방사선 (UVB)은 피부에서 시클로부탄 피리미딘이량체 (CPDs) 및 6-4 광분해 생성물 (6-4 PPs)의 형성을 유도하는데, 이 물질들은 돌연변이 DNA 병변을 발생시키고, 이는 세포의 DNA 손상, 세포 노화 및 사멸을 유발한다.
상기의 피리미딘이량체 (CPDs) 및 6-4 광분해 생성물 (6-4 PPs)은 뉴클레오티드 절단복구 (NER)로 알려진 과정을 통하여 회복된다. 이 뉴클레오티드 절단복구 (NER)는 UV로 유발되는 DNA 병변의 회복을 위한 중요한 과정이며, 이 과정은 DNA 손상 위치의 3' 말단의 한 부분과 다른 5' 말단의 부분이 절단됨으로써 단일 가닥 단편 형태의 손상된 DNA가 삭제되고, 삭제된 올리고뉴클레오타이드는 DNA 회복 합성에 의해 새로운 올리고뉴클레오타이드로 교체된 후 DNA 연결효소에 의해 완전히 회복된다.
한편, DNA 손상 반응은 생체 시계 및 miRNA에 의해서도 조절될 수 있다. 생체 시계는 인간을 포함하는 거의 모든 생물에서 호르몬 분비, 체온 및 수면 패턴과 같은 행동 및 생리의 일상 리듬을 조절한다.
최근의 연구 결과들에 따르면 DNA 손상 반응이 생체시계와 연관이 있는 것으로 확인되었으며, 이는 피부에서 보통의 생물학적 주기 리듬 및 유전자 발현 레벨이 UVB 방사선에 의해 억제될 수 있음을 의미하는 것으로, 인간 각질 세포에서의 Per, Clock 및 Bmal1 유전자 연구에 의해 입증되었다.
또한, 각질세포에서 miRNA 발현의 변화가 UVB 방사선 노출 사이에 연관이 있다고 보고된 바 있으며 (B.R. Zhou, Y. Xu, F. Permatasari, W. Liu, W. Li, X. Guo, Q. Huang, Z. Guo, D. Luo, Characterization of the miRNA profile in UVB-irradiated normal human keratinocytes, Exp. Dermatol. 21(4) (2012) 317-319. doi:10.1111/j.1600-0625.2012.01465.x.), 최근에는 miR-142-3p가 시계 유전자인 BMAL1의 유전자 발현 조절에 영향을 주는 것이 확인되었다 (V.R. Shende, N. Neuendorff, D.J. Earnest, Role of miR-142-3p in the post-transcriptional regulation of the clock gene Bmal1 in the mouse SCN, PLoS One 8 (2013) e65300. doi:10.1371/journal.pone.0065300).
한편, 천화분 (Trichosanthes kirilowii)은 박과의 하눌타리 (Trichosanthes kirilowii Maximowicz) 또는 노랑하눌타리 (Trichosanthes kirilowii Max. var. japonica Kitamura)의 피층을 벗긴 뿌리를 말하며, 동아시아에서 당뇨, 암 관련 증상, 기침 및 가슴 농양 환자를 위한 전통 의학에 사용되어 왔다. 하지만, 천화분의 '피부 세포에서의 DNA 손상 복구'에 대한 영향 및 효과에 대해서는 완전히 조사된 바가 없는 실정이다.
한국등록특허 제10-0869696호 (등록일자: 2008.11.14)에는, 피부 항상성 유지에 도움을 주는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 자작나무 추출물을 함유하여 자외선에 의해 발현이 감소된 유전자의 발현을 정상화시킴으로써 피부세포의 항상성을 유지할 수 있는 효과를 기재하고 있다. 한국등록특허 제10-0416400호 (등록일자: 2004.01.13)에는, 천화분 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 피부 미백용 외용제 조성물에 관한 것으로, 건조시킨 천화분에 증류수, 메탄올, 에틸아세테이트, 노말 부탄올, n-헥산을 추출용매로 하여 추출한 다음 여과하고 감압 농축하여 제조한 천화분 추출물은 멜라닌 생성의 주효소인 티로시나아제의 활성을 억제하고 멜라닌 색소 생성을 억제하는 효과가 있으며, 이를 유효성분으로 0.05 ∼ 5.00 중량%로 첨가함으로써 안정성이 뛰어나고 부작용이 없으며 멜라닌 색소 생성 억제효과가 있어, 기미, 주근깨 및 햇빛의 그을음 등 피부의 색소침착을 방지하고 피부 미백효과가 뛰어난 피부 미백용 외용제 조성물을 제공할 수 있는 효과를 기재하고 있다.
본 발명에서는 UVB에 의한 DNA 손상 회복 활성을 증대시킬 수 있는 천화분 추출물을 이용하여 UVB 피부 손상 복구용 화장료 조성물을 개발해 제공하고자 한다.
본 발명은 천화분 추출물을 유효성분으로 함유하는 UVB 피부 손상 복구용 화장료 조성물을 제공한다.
한편, 본 발명에 있어서, 상기 천화분 추출물은 추출 용매라면 어느 것이나 다 포함할 수 있으나, 바람직하게는 에탄올 추출물인 것이 좋다.
한편, 본 발명에 있어서, 상기 천화분 추출물은 바람직하게 miR-142-3p의 발현 억제를 통해 BMAL1 유전자의 발현을 증가시키는 것이 좋다.
한편, 본 발명에 있어서, 상기 UVB 피부 손상 복구는 바람직하게 BMAL1 유전자의 발현 증가로 인한 DNA 회복 활성 증가로 말미암은 것이 좋다.
한편, 본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 일 예로, 수용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형일 수 있다.
한편, 본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 일 예로, 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이섀도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형 중에서 선택되는 어느 하나의 제형일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 천화분 추출물을 유효성분으로 함유함으로써, miR-142-3p의 발현을 억제하여 'DNA 손상 회복 활성에 관여하는 BMAL1 유전자의 발현'을 증가시키는 것을 통해, UVB에 의한 피부 손상을 복구하는데 매우 우수한 효과를 발휘한다.
도 1은 UVB에 노출된 HaCaT 세포에 천화분 추출물을 25, 50, 100 및 200 ㎍/ml의 농도로 처리한 후, MTT 어세이를 통하여 세포 생존 능력을 측정한 결과이다.
도 2의 (A)는 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포에 천화분 추출물 100 ㎍/ml을 처리한 후, HaCaT 세포의 DNA 단편을 Comet 어세이로 비교 측정한 결과이다. 대조군으로는 UVB 방사능 비노출 및 천화분 추출물 비처리 HaCaT 세포를 사용하였으며, 비교대조군으로는 천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포를 사용하였다.
도 2의 (B)는 도 2의 (A)에서 측정한 Comet 꼬리의 양을 현미경으로 측정하여 통계 분석한 결과이다. (*p<0.05, **p<0.01, compared with non-UVB-exposed control)
도 3의 (A)는 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포에 천화분 추출물을 100 ㎍/ml의 농도로 처리한 후, BMAL1의 mRNA 발현 레벨을 RT-PCR을 통해 측정한 결과이다. 대조군으로는 UVB 방사능 비노출 및 천화분 추출물 비처리 HaCaT 세포를 사용하였으며, 비교대조군으로는 천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포를 사용하였다.
도 3의 (B)는 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포에 천화분 추출물을 100 ㎍/ml의 농도로 처리한 후, BMAL1의 단백질 발현 레벨을 웨스턴 블럿을 통해 측정한 결과이다. 대조군으로는 UVB 방사능 비노출 및 천화분 추출물 비처리 HaCaT 세포를 사용하였으며, 비교대조군으로는 천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포를 사용하였다.
도 4는 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포에 천화분 추출물을 100 ㎍/ml의 농도로 처리한 후, miR-142-3p의 발현 레벨을 qRT-PCR로 측정한 결과이다. (*p<0.05, compared UVB-exposed control)
본 발명은 HaCaT 세포에서 천화분 추출물의 UVB에 대한 DNA 손상 복구 효과를 평가하였으며, 실험 결과, HaCaT 각질세포에서 천화분의 에탄올 추출물은 100 ㎍/ml 이하의 낮은 농도에서 낮은 세포독성을 보였고, Comet 어세이 결과로부터 천화분 추출물이 UVB에 의해 DNA 손상이 유도되었을 때 DNA 손상 복구를 강화시키는 것을 확인하였다.
또한, 천화분 추출물이 miR-142-3p를 하향조절함으로써, 뇌와 근육의 주요 생체 시계 단백질인 BMAL1 (ARNT-like protein-1)을 상향조절하는 것을 확인하였다.
상기의 결과는 천화분 추출물이 BMAL1과 miR-142-3p를 조절함으로써, UVB에 의한 DNA 손상 복구를 강화시킨다는 것을 확인한 결과이며, 천화분 추출물이 광노화와 일광화상과 같이 'UVB에 의한 광손상으로 인한 다양한 질환의 진단 및 치료'에 광범위한 영향력을 갖는다는 것을 의미하는 것이다.
따라서, 본 발명에서는 천화분 추출물이 UVB에 의한 손상과 관련된 피부 질병의 치료를 위한 물질로서 개발될 수 있음을 확인하였다.
이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예 또는 실험예를 통해 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예 또는 실험예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
[제조예 1: 천화분 추출물 제조]
천화분 (T.kirilowii) 분말 50g과 70% 에탄올 1L를 혼합하여 상온에서 3시간 동안 교반하였으며, 상층액을 필터하여 수득하였다. 그 후, 에탄올을 회전 진공 증발기를 이용해 제거하여 천화분 추출물을 제조하였다.
[실시예 1: 천화분 추출물의 UVB에 의한 DNA 손상 복구 증진 효과 확인]
(1) 천화분 추출물의 세포독성 여부 확인
천화분 추출물의 세포독성 여부를 확인하고자, 1×104개의 HaCaT 세포를 96-웰 배양 플레이트에서 혈청이 포함된 배양 배지로 24시간 동안 배양한 후, 혈청이 제거된 배양 배지를 이용하여 24시간 동안 추가로 배양하였다. 이와 같이 배양된 HaCaT 세포를 UVB에 노출시킨 후, 25, 50, 100, 및 200 ㎍/ml 농도의 천화분 추출물이 함유되고 혈청이 제거된 배양 배지를 이용하여 24시간 동안 배양하였다. 그 후, MTT 용액 (5 mg/ml) 20 μl를 각 웰에 첨가하고 37℃에서 4시간 동안 반응시켰다. 포르마잔 생성물은 100 μl의 이소프로판올에 녹였으며, 560 nm의 파장으로 측정하였다.
측정 결과, 100 ㎍/ml 이하 농도의 천화분 추출물을 처리한 HaCaT 세포에서는 유의적인 세포독성 현상이 나타나지 않았으며, 고농도인 200 ㎍/ml 농도의 천화분 추출물을 처리한 HaCaT 세포에서만 세포독성이 확인되었다 (도 1). 이러한 결과를 통하여, 천화분 추출물의 농도 중 100 ㎍/ml 농도를 선택하여 하기 실험에서 사용하였다. 도 1은 UVB에 노출된 HaCaT 세포에 천화분 추출물을 25, 50, 100 및 200 ㎍/ml의 농도로 처리한 후, MTT 어세이를 통하여 세포 생존 능력을 측정한 결과이다.
(2) 천화분 추출물의 UVB 노출로 인한 DNA 손상 복구 확인
UVB 노출로 유도된 DNA 손상 복구에 대한 천화분 추출물의 효과를 확인하기 위하여, Comet 어세이 (SCGE, 단일세포전기영동법)를 이용하여 DNA 단편을 측정하였다.
혈청이 포함되지 않은 배양 배지로 HaCaT 세포를 24시간 동안 배양한 후, PBS로 세척하였다. 그 후, PBS로 소량 덮힌 HaCaT 세포를 UVB 방사능 (12.5 mJ/cm2)에 노출시킨 후, 즉시 세포에 100 ㎍/ml 농도의 천화분 추출물을 처리하여 8시간 동안 반응시켰다. 대조군으로는 'UVB 방사능 비노출 및 천화분 추출물비처리 HaCaT 세포'를 사용하였으며, 비교대조군으로는 '천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포'를 제조하여 본 실시예 및 하기 실시예에서 사용하였다. 그 후, 각 세포를 수득하여 CometslideTM 슬라이드 상의 아가로스젤에 로딩하였으며, 이 슬라이드를 4℃의 라이시스 버퍼에 1시간 동안 반응시켰다. 각 슬라이드는 중립상태의 50 V에서 전기영동한 후, 각 슬라이드를 증류수 및 70% 에탄올로 씻어내고, 10분 동안 SYBR green으로 염색하여 현미경으로 확인하였다.
또한, Comet의 꼬리는 각각 최소 30개의 세포 자료를 토대로 현미경을 이용하여 측정하였으며, UVB에 노출되지 않은 대조군 세포와 비교해 통계분석하여 도 2의 (A) 및 (B)에 나타내었다.
실험 결과, 'UVB에 노출한 후, 100 ㎍/ml 농도의 천화분 추출물을 처리한 HaCaT 세포'의 경우, 비교대조군인 '천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB에 노출된 HaCaT 세포'와 비교했을 때 DNA 손상 및 DNA 단편이 감소한 것을 확인할 수 있었다. 또한, UVB에 의해 유도된 DNA 손상으로부터 천화분 추출물이 HaCaT 세포를 보호한다는 것을 확인하였다 (미도시). 상기의 실험 결과로 천화분 추출물이 DNA 손상 복구뿐만 아니라, UVB에 의해 유도된 DNA 손상 보호에도 중요한 역할을 한다는 것을 확인하였다. 도 2의 (A)는 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포에 천화분 추출물 100 ㎍/ml을 처리한 후, HaCaT 세포의 DNA 단편을 Comet 어세이로 비교 측정한 결과이다. 대조군으로는 UVB 방사능 비노출 및 천화분 추출물 비처리 HaCaT 세포를 사용하였으며, 비교대조군으로는 천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포를 사용하였다.
도 2의 (B)는 도 2의 (A)에서 측정한 Comet 꼬리의 양을 현미경으로 측정하여 통계 분석한 결과이다. (*p<0.05, **p<0.01, compared with non-UVB-exposed control)
[실시예 2: 천화분 추출물의 BMAL1의 발현 조절 확인]
몇 가지 연구 보고에 따르면, 뉴클레오타이드 절단 회복의 일주기 리듬 (Circadian Oscillation)은 DNA 손상을 확인하는 단백질인 XPA 단백질의 일주기 리듬과 관계가 있다. 이 XPA 단백질은 CLOCK과 BMAL1에 의해 양성조절되며, CRY와 PER에 의해 음성조절되므로, 절단 회복은 일주기 리듬에 의존적이다.
한편, BMAL1은 일주기 리듬 조절에 필수적인 역할을 하는 주요 생체 시계 인자이다. 본 실시예에서는 천화분 추출물의 DNA 손상 회복을 조절하는 분자적 기작을 확인하기 위해, HaCaT 세포에서 BMAL1의 발현 변화를 확인하고자 하였다.
(1) 천화분 추출물의 BMAL1의 mRNA 발현 조절 확인
천화분 추출물의 DNA 손상 복구 조절에 대한 분자적 기작을 확인하기 위하여, 천화분 추출물이 HaCaT 세포에서 BMAL1의 mRNA 발현에 어떠한 영향을 미치는지 확인하고자 하였다.
상기 실시예 1에서 제조한 것과 동일하게 'UVB 방사능 (12.5 mJ/cm2)에 노출시킨 후, 100 ㎍/ml 농도의 천화분 추출물을 8시간 동안 처리한 HaCaT 세포', 대조군으로 'UVB 방사능 비노출 및 천화분 추출물 비처리 HaCaT 세포' 및 비교대조군으로 '천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB에 노출된 HaCaT 세포'를 제조하였다.
그 후, 정제된 트라이졸 시약을 이용하여 시약 제조사의 설명에 따라 각 세포의 총 RNA를 추출하였다. 그 후, RNA 농도를 UV 분광광도계로 측정하고 일정량의 RNA를 PCR Master Mix를 이용하여 cDNA로 합성하였으며, 합성된 cDNA와 BMAL1 프라이머를 이용하여 94℃ 30초 30 사이클, 60℃ 1분, 72℃ 30초의 조건으로 PCR을 수행하였다.
실험 결과, '천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포'인 비교대조군의 경우, 대조군인 'UVB 방사능 비노출 및 천화분 추출물 비처리 HaCaT 세포'에 비하여 BMAL1의 mRNA 발현이 감소되었으며, 'UVB 방사능에 노출되고 천화분 추출물을 100 ㎍/ml로 처리한 HaCaT 세포'에서는 BMAL1의 mRNA 발현이 증가한 것을 확인하였다. 이로 인하여 천화분 추출물이 BMAL1의 mRNA 발현에 영향을 미친다는 것을 확인하였다 (도 3의 (A)). 도 3의 (A)는 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포에 천화분 추출물을 100 ㎍/ml의 농도로 처리한 후, BMAL1의 mRNA 발현 레벨을 RT-PCR을 통해 측정한 결과이다. 대조군으로는 'UVB 방사능 비노출 및 천화분 추출물 비처리 HaCaT 세포'를 사용하였으며, 비교대조군으로는 '천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포'를 사용하였다.
(2) 천화분 추출물의 BMAL1의 단백질 발현 조절 확인
상기에서 제조된 'UVB 방사능 (12.5 mJ/cm2)에 노출시킨 후, 100 ㎍/ml 농도의 천화분 추출물을 8시간 동안 처리한 HaCaT 세포', 대조군으로 'UVB 비노출 및 천화분 추출물을 비처리 HaCaT 세포' 및 비교대조군으로 '천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB에 노출된 HaCaT 세포'를 각각 차가운 PBS로 두 차례 씻어낸 후, 단백질 가수분해효소 억제제 혼합물이 포함된 라이시스 버퍼를 이용하여 세포를 용해하였다. 세포 용해물의 단백질 농도는 BCA (Bicinchoninic acid) 시약을 사용하여 측정하였다.
그 후, 각 세포의 용해물을 동일한 양으로 SDS-폴리아크릴아마이드 젤에 로딩하여 세포 용해물의 단백질을 분리하여 폴리비닐리덴 디플루오라이드 (PVDF) 멤브레인에 트랜스퍼하였다. 멤브레인은 BMAL1 항체 및 비교대조군인 Actin 항체를 이용하여 4℃에서 하룻밤 반응시켰다. 그 후, (HRP)-conjugated 2차 안티바디를 이용하여 반응시켰으며, 화학발광 시약을 이용하여 멤브레인 상의 BMAL1 및 Actin 단백질 발현 정도를 확인하였다.
실험 결과, '천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포'인 비교대조군의 경우, 대조군인 'UVB 방사능 비노출 및 천화분 추출물 비처리 HaCaT 세포'에 비하여 BMAL1의 단백질 발현이 감소되었으며, 'UVB 방사능에 노출되고 천화분 추출물을 100 ㎍/ml로 처리한 HaCaT 세포'에서는 BMAL1의 단백질 발현이 증가한 것을 확인하였다. (도 3의 (B)). 도 3의 (B)는 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포에 천화분 추출물을 100 ㎍/ml의 농도로 처리한 후, BMAL1의 단백질 발현 레벨을 웨스턴 블럿을 통해 측정한 결과이다. 대조군으로는 'UVB 방사능 비노출 및 천화분 추출물 비처리 HaCaT 세포'를 사용하였으며, 비교대조군으로는 '천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포'를 사용하였다.
상기의 실험결과를 종합해보았을 때, 각질세포에서의 특정 세포 반응 기작에 천화분 추출물 매개 DNA 손상 복구가 포함되어 있을 것이라 판단되었다.
[실시예 3: 천화분 추출물의 miR-142-3p의 억제를 통한 Bmal1 발현 상향조절 확인]
일반적으로, BMAL1은 miR-142-3p의 억제를 통해 상향조절되어 DNA 손상 복구를 증진시킨다고 알려져 있다. 따라서, 본 실시예에서는 천화분 추출물이 miR-142-3p에 미치는 영향을 확인하고자 하였다.
먼저 'UVB 방사능 (12.5 mJ/cm2)에 노출시킨 후, 100 ㎍/ml 농도의 천화분 추출물을 24시간 동안 처리한 HaCaT 세포', 대조군으로 'UVB 비노출 및 천화분 추출물 비처리 HaCaT 세포' 및 비교대조군으로 '천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB에 노출된 HaCaT 세포'를 제조하였다. 정제된 트라이졸 시약을 이용하여 시약 제조사의 설명에 따라 각 세포의 총 RNA를 추출하였다. RNA 농도를 UV 분광광도계로 측정한 후, 일정량의 RNA를 cDNA 합성 키트를 이용하여 cDNA로 합성하였다. 그 후, SYBR Green I Master를 사용하여 제조사의 설명에 따라 qRT-PCR를 수행하였다. miRNA 레벨은 U6을 이용하여 정규화 하였으며, miRNA의 상대적 발현은 Lightcycler 480 II software (Roche)와 2-△△Ct방법을 이용하여 수량화하였다.
실험 결과, 비교대조군인 '천화분 추출물을 처리하지 않고 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포'의 경우, 대조군인 'UVB 방사능 비노출 및 천화분 추출물을 비처리 HaCaT 세포'에 비해 miR-142-3p의 발현이 증가한 반면, 'UVB에 노출된 후 천화분 추출물 100 ㎍/ml를 처리한 HaCaT 세포'의 경우 miR-142-3p의 발현이 감소하는 것을 확인하였다 (도 4). 이는 HaCaT 세포에서의 천화분 추출물 매개 DNA 손상 복구가 miR-142-3p의 발현 억제와 연관성이 있음을 확인한 결과였다.
도 4는 UVB 방사능에 노출된 HaCaT 세포에 천화분 추출물을 100 ㎍/ml의 농도로 처리한 후, miR-142-3p의 발현 레벨을 qRT-PCR로 측정한 결과이다. (*p<0.05, compared UVB-exposed control)

Claims (6)

  1. 천화분 70% 에탄올 추출물을 함유하되 최대 100 μg/ml의 농도 내로 함유하고, miR-142-3p의 발현 억제를 통해 BMAL1 유전자의 발현을 증가시키고, BMAL1 유전자의 발현 증가로 인한 DNA 회복 활성의 증가로 말미암아 UVB에 의해 손상된 HaCaT 세포의 DNA를 복구하는 것을 특징으로 하는 UVB에 의한 HaCaT 세포의 DNA 손상 복구용 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은,
    수용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 UVB에 의한 HaCaT 세포의 DNA 손상 복구용 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은,
    수중유형 및 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이섀도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형 중에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 UVB에 의한 HaCaT 세포의 DNA 손상 복구용 화장료 조성물.
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