KR101856480B1

KR101856480B1 - 미세조류 추출물을 함유하는 자외선으로 인한 피부 손상 방지용 및 두피 자극 완화용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101856480B1
Application number: KR1020160170783A
Authority: KR
Inventors: 홍인기; 김힐; 목은영; 김학수; 이정구
Original assignee: 주식회사 래디안; 주식회사 서울화장품
Priority date: 2016-12-14
Filing date: 2016-12-14
Publication date: 2018-05-11
Anticipated expiration: 2036-12-14

Abstract

본 발명은 미세조류인 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 추출물을 함유하는 자외선으로 인한 피부 손상 방지용 및 두피 자극 완화용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 추출물을 함유함으로써, 자외선에 관여하는 인자를 억제 또는 활성화시켜 자외선에 의한 피부 손상을 방지하는데 매우 우수한 효과를 발휘한다. 또한, 본 발명의 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 항알러지 효능을 가지며 세포 독성이 없어 안전할 뿐만 아니라, 두피 세포의 분화를 촉진하고 염모제에 의한 자극을 완화시킴으로써 두피 자극을 효과적으로 방지할 수 있다.

Description

미세조류 추출물을 함유하는 자외선으로 인한 피부 손상 방지용 및 두피 자극 완화용 화장료 조성물 {Cosmetic composition with microalgae extract for anti-UV and skin-irritation alleviation effect}

본 발명은 미세조류인 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 추출물을 함유하는 자외선으로 인한 피부 손상 방지용 및 두피 자극 완화용 화장료 조성물에 관한 것이다.

태양 광선에 포함되어 있는 자외선은 그 파장 영역에 따라 정파장 자외선 (UVA, 320~400nm), 중파장 자외선 (UVB, 200~280nm) 및 단파장 자외선 (UVC, 200~280nm)으로 분리되며, 이 자외선들은 피부에 여러 부작용을 유발한다. UVC은 인체에 매우 유해하나 현재까지는 대기중의 오존층에 흡수되어 지표상에는 거의 도달하지 않으며, 주로 UVA와 UVB가 피부에 부작용을 유발한다. 그 중 에너지가 UVA보다 더 큰 중파장 자외선, 즉 UVB는 일광화상 (홍반, 수포 유발), 피부암, 색소 침착, 피부 단백질 변성 및 피부 세포 각질화 촉진 등의 부작용을 일으킨다. 따라서, 피부에 조사되는 자외선을 최대한 막아주는 것이 피부손상방지에 매우 중요하다.

한편, 두피는 가장 바깥쪽 조직 순으로 표피 (epidermis), 진피 (dermis), 피하조직 (subcutaneous tissue)으로 구성되어 있다. 표피는 신체의 민감한 조직을 손상 받지 않도록 보호해주는 기능을 하나, 외부의 온도, 습도의 변화, 공해물질 등 여러 가지 물리적, 화학적 외부 자극과 스트레스, 영향 결핍 등으로 인해 보습 기능 등을 상실하여 자극이 유발될 수 있으며, 더 나아가 탈모에도 영향을 미칠 수 있다. 현대에 들어서 염색 혹은 퍼머 등과 같은 화학적 시술이 증가함으로 인해 두피 건강의 중요성이 대두하고 있으며, 두피에 안전한 제품에 대한 요구가 점점 증가하고 있는 추세이다.

한편, 미세조류 (microalgae)는 약 40,000종이 알려져 있을 정도로 다양한 생물군을 가지며, 자연에서 여러 유용물질을 생산하는 것으로 알려져 있다. 미세조류 유래의 유용물질은 가장 잘 알려진 건강보조식품 외에도 천연색소, 의약 원료물질, 생화학물질 등으로 매우 다양하게 사용된다. 특히, 홍조류로 피떡말목에 속하는 미세조류인 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum)은 지방산, 지질, 세포벽의 다당류 및 색소의 근원으로써 여러 제품에 쓰이고 있다.

한국공개특허 제10-2013-0015037호 (공개일자: 2013.02.13)에는, 미세녹조류를 이용한 항염증 및 항여드름 효능을 가지는 추출물 및 그의 제조방법에 관한 것으로, 이를 더욱 상세하게 설명하면, 미세녹조류 (Tetraselmis suecica, Chlorella ellipsodiea)로 부터의 추출물을 분리하여 제조하였으며, 미세녹조류의 추출물이 피부에 대한 항염증과 항여드름 효능을 가짐으로 하여, 화장품 신소재를 개발하고 고부가가치의 제품을 통하여 미세녹조류의 효용 가치를 높여 산업적으로 이용범위의 확대시키고자 미세녹조류(Tetraselmis suecica, Chlorella ellipsodiea)를 이용한 항염증과 항여드름 효능을 가지는 추출물 및 그의 제조방법이 기재되어 있다. 한국등록특허 제10-1197101호 (등록일자: 2012.10.29)에는, 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri), 시네코시스티스 종. PCL 6803(Synechocystis sp. PCC 6803) 및 보트리오코커스 브라우니(Botryococcus braunii)의 헥산, 클로로포름 및 부탄올 추출물을 포함하는 피부 미백용 조성물이 기재되어 있다.

본 발명에서는 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 추출물을 이용하여 자외선으로 인한 피부 손상 방지용 및 두피 자극 완화용 화장료 조성물을 개발해 제공하고자 한다.

본 발명은 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 추출물을 함유하는 자외선으로 인한 피부 손상 방지용 화장료 조성물을 제공한다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 추출물은 추출 용매라면 어느 것이나 다 포함할 수 있으나, 바람직하게는 에탄올 추출물인 것이 좋다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이섀도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형 중에서 선택되는 어느 하나의 제형일 수 있다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 헤어 샴푸, 트리트먼트 및 팩 등 컨디셔너 류, 축모 및 웨이브 제품의 퍼머넌트 류, 염모제, 헤어 에센스 및 로션 등 헤어케어 류, 헤어 젤 및 왁스, 스프레이 등 스타일링 류, 산성컬러, 바디 클렌져 제형 중에서 선택되는 어느 하나의 제형일 수 있다.

본 발명은 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 추출물을 함유하는 두피 자극 완화용 화장료 조성물을 제공한다.

한편, 본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 수용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 미세조류인 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 추출물을 함유함으로써, 자외선에 관여하는 인자를 억제 또는 활성화시켜 자외선에 의한 피부 손상을 방지하는데 매우 우수한 효과를 발휘한다.

또한, 본 발명의 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 추출물을 함유하는 화장료 조성물은, 항알러지 효능을 가지고, 피부 자극을 유발하지 않아, 안전할 뿐만 아니라, 두피 세포의 분화를 촉진하고 염모제에 의한 자극을 완화시킴으로써 두피 자극을 효과적으로 방지할 수 있다.

도 1은 각질형성세포 (A) 및 모유두세포 (B)에서, 미세조류 추출물의 농도에 따른 세포 독성 여부를 세포 생존 능력을 통해 측정한 그래프이다.
도 2는 각질형성세포에서, 미세조류 추출물 농도에 따른 자외선에 의한 TNF-a (A) 및 IL-6 (B)의 발현 억제능을 측정한 그래프이다. 대조군으로는 덱사메타손 10 μM을 사용하였다.
도 3은 모두유세포에서, 미세조류 추출물 농도에 따른 베타카테닌 (β-catenin)의 세포 핵 내 유입 증가 수준을, 베타카테닌의 단백질 발현량을 통해 측정한 결과이다. 3 ㎍/㎖의 윈트3a (wnt3a)를 처리한 모유두세포를 대조군으로 사용하였다.
도 4는 모유두세포에서, 미세조류 추출물 농도에 따른 베타카테닌의 활성능을 측정한 그래프이다. 대조군으로는 윈트3a (wnt3a)를 처리한 모유두세포의 세포용출액을 사용하였다.
도 5는 모유두세포에서, 미세조류 추출물 농도에 따른 케라틴 17 (Keratin 17), IL-6R, Gp130의 mRNA 발현 정도를 측정한 결과이다. 대조군으로는 3 ㎍/㎖의 윈트3a (wnt3a)를 처리한 모유두세포를 사용하였다.
도 6은 모유두세포에서, 미세조류 추출물 농도에 따른 케라틴 17 (Keratin 17), IL-6R, Gp130 단백질의 발현량을 측정한 결과이다. 대조군으로는 3 ㎍/㎖의 윈트3a (wnt3a)를 처리한 모유두세포를 사용하였다.
도 7은 랫드 유래 호염구세포 (RBL-2H3, Basophil)에서, 미세조류 추출물 농도에 따른 히스타민의 발현 억제능을 측정한 결과이다. 대조군으로는 10 μM의 덱사메타손을 처리한 호염구세포를 사용하였다.
도 8은 인체 피부에서, 미세조류 추출물의 피부 자극 유발 여부를 측정한 결과이다. 대조군으로는 미세조류 추출물 대신 증류수를 사용하였다.
도 9는 염모제 자극에 대한 미세조류 추출물의 피부 자극 완화 효과를 확인한 결과이다. 대조군으로는 미세조류 추출물 대신 증류수 및 경쟁사 제품이 각각 포함된 염모제를 사용하였다.

본 발명에서는 자외선 B (UVB) 파장으로 처리된 각질형성세포 (HaCaT) 및 모유두세포 (HFDPC)에 미세조류인 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 70% 에탄올 추출물 (이하 미세조류 추출물)을 처리하여 자외선으로 인한 피부 손상 방지 및 두피 자극 완화 효과를 확인하였다.

미세조류 추출물의 각질형성세포 및 모유두세포에서 TNF-α의 발현 억제 및 IL-6 발현 억제를 통한 자외선으로 인한 피부 손상 방지 효과를 확인하였다. 또한, 모유두세포의 분화 촉진 여부의 지표인 베타카테닌 (β-catenin), 케라틴17 (Keratin17), IL-6R 및 Gp130의 발현 여부를 확인함으로써, 미세조류 추출물의 자외선으로 인한 피부 손상방지 및 두피 자극 완화 효과를 확인하였다.

한편, 미세조류추출물의 항알러지 효능, 피부자극 유발 여부를 평가하여 안전한 물질임을 확인하였으며, 미세조류추출물이 포함된 염모제의 두피 자극 정도를 측정한 결과, 염모제에 의한 두피 자극을 효과적으로 완화시키는 것을 확인하였다.

이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예 및 실험예를 통해 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예 및 실험예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.

[실시예 1: 미세조류 추출물의 제조]

본 실시예에서는 미세조류 추출물을 제조하고자 하였다.

미세조류인 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 분말에 '70% 에탄올'을 첨가하여 추출을 수행함으로써 미세조류 추출물을 수득하였다. 이때, 추출용매의 양은 미세조류 분말의 건조 중량 1 g 당 5~20 ㎖를 첨가하였고, 실온에서 3시간 동안 침적 추출하였다. 추출 후, 여과를 통해 추출액을 회수하였으며, 회전 감압 농축기를 사용하여 회수된 추출액을 농축함으로써 미세조류 추출물을 최종 제조하였다. 이와 같이 제조한 미세조류 추출물은 하기 실험에서 사용하였다.

[실험예 1: 미세조류 추출물의 세포독성 측정]

본 실험예에서는 'MTT assay'를 통하여 상기 실시예 1에서 제조한 미세조류 추출물의 세포독성을 확인하고자 하였다.

사람 유래의 각질형성세포와 모유두세포를 각각 96웰 플레이트에 1×10⁵ cells/㎖의 농도로 접종하고 37℃, 5% CO₂ 조건의 배양기에서 배양하였다.

상기 실시예 1에서 제조한 미세조류 추출물을 1, 10, 50 및 100 ㎍/㎖ 농도가 되게 희석한 후 (하기 표 1 참조), 상기 각질형성세포 및 모유두세포가 배양된 각각의 웰 플레이트에 첨가하고, 24시간 동안 같은 조건의 배양기에서 추가로 배양하였다.

24시간 후, MTT 시약을 이용하여 세포의 생존율을 측정하여 세포독성을 평가하였으며, 음성대조군으로는 시료를 처리하지 않은 각질형성세포와 모유두세포를 동일하게 배양하여 사용하였다.

용매 종류	미세조류 추출물 처리 농도(㎍/㎖)
70% 에탄올	1
	10
	50
	100

실험결과, 모든 70% 에탄올 농도 (1, 10, 50 및 100 ㎍/㎖)의 미세조류 추출물이 각질형성세포 및 모유두세포 모두에 대해 세포 독성을 보이지 않는 것을 확인할 수 있었다 (도 1). 도 1은 각질형성세포 (A) 및 모유두세포 (B)에서, 미세조류 추출물의 농도에 따른 세포 독성 여부를 측정한 그래프이다.

[실험예 2 : 미세조류 추출물의 TNF-α 및 IL-6 발현 저해능 평가]

본 실험예에서는 각질형성세포에서 미세조류 추출물이 자외선 B에 의해 생성되는 TNF-α 및 IL-6 발현에 미치는 영향을 확인하고자 하였다.

사람 유래의 각질형성세포를 24웰 플레이트에 1×10⁵ cells/㎖의 농도로 접종하고 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ 조건의 배양기에서 배양한 후, 배양된 세포에 자외선 B를 12.5 mJ/cm² 조사하였다. 그 후, 미세조류 추출물 50 ㎍/㎖ 및 100 ㎍/㎖을 상기 웰 플레이트에 각각 첨가하고, 24시간 동안 같은 조건에서 배양하였다. 배양 후, 배양액을 수득하여 세포에서 분비된 TNF-α 및 IL-6의 양을 면역분석법을 통해 측정하였다. 이때, 미세조류 추출물 대신 10 μM의 덱사메타손 (dexamethasone, Dex.)을 처리한 것을 제외하고는 상기와 동일하게 실험한 각질형성세포를 양성대조군으로 사용하였다.

실험결과, 미세조류 추출물에서 자외선 B에 의해 생성되는 TNF-α 및 IL-6의 발현이 농도 의존적으로 억제되었으며, 100 ㎍/㎖의 농도에서는 TNF-α의 발현이 양성대조군으로 사용한 덱사메타손과 유사한 수준으로 억제되는 것을 확인할 수 있었다 (도 2).

도 2는 각질형성세포에서, 미세조류 추출물 농도에 따른 자외선에 의한 TNF-a (A) 및 IL-6 (B)의 발현 억제능을 측정한 그래프이다. 대조군으로는 덱사메타손 10 μM을 사용하였다.

[실험예 3: 베타카테닌 (β-catenin)의 핵 내 이동에 미세조류 추출물이 미치는 영향 평가]

모유두세포 내 베타카테닌은 세포질에 존재하다가 윈트 (wnt) 또는 기타 자극에 의해 핵 내로 들어가 전사 인자로 작용하여 모발 성장과 관련된 유전자 발현을 높이게 된다. 본 실험예에서는 미세조류 추출물이 모발 성장 활성과 관련된 인자인 베타카테닌의 단백질 발현에 미치는 영향을 확인하고자 하였다.

사람 유래의 모유두세포를 6웰 플레이트에 1.5×10⁶ cells/㎖의 농도로 접종하고, 37℃, 5% CO₂ 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양한 후, 배양된 세포에 자외선 B를 12.5 mJ/cm² 조사하였다. 그 후, 상기 실시예 1에서 제조한 미세조류 추출물 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖을 상기 웰 플레이트에 각각 첨가하여 같은 조건의 배양기에서 24시간 배양하였다.

배양 후, 세포를 회수하고, 1x 하이포토닉 완충액 (hypotonic buffer)을 넣은 후, 얼음에서 15분간 세포막을 용해시켰다. 그 후, 4℃, 14,000 rpm에서 2분간 원심 분리하여 상층액 (세포질 부분, cytoplasmic fraction)을 수득한 후, 완전세포용액완충액 (complete lysis buffer)을 넣고, 얼음에서 30분간 핵막을 용해시켰다. 그 후, 다시 4℃, 14,000 rpm에서 10분간 원심 분리한 후, 상층액 (핵 부분, nuclear fraction)을 취하고, BCA 정량법을 이용하여 베타카테닌의 단백질 양을 측정하였다.

SDS-폴리아크릴아마이드 겔 전기영동 (SDS-PAGE)과 전기영동 (electrophoresis)을 통해 획득한 세포질 부분 (cytoplasmic fraction)과 핵 부분 (nuclear fraction)의 단백질 발현량을 면역블롯법 (immunoblot)을 이용하여 확인하였다. 이때, 대조군으로는 3 ㎍/㎖의 윈트3a (wnt3a)를 처리한 모유두세포를 사용하였다.

실험결과, 미세조류 추출물을 처리하면, 자외선 B에 의해 핵 내로의 이동이 억제되던 베타카테닌의 양이 다시 회복되는 것을 확인할 수 있었다 (도 3).

도 3은 모두유세포에서, 미세조류 추출물 농도에 따른 베타카테닌 (β-catenin)의 세포 핵 내 유입 증가 수준을, 베타카테닌의 단백질 발현량을 통해 측정한 결과이다. 대조군으로는 3 ㎍/㎖의 윈트3a (wnt3a)를 처리한 모유두세포를 사용하였다.

[실험예 4: 베타카테닌 (β-catenin) 활성에 미세조류 추출물이 미치는 영향 평가]

본 실험예에서는 TCF/LEF 발광효소분석 (luciferase assay)을 통하여 미세조류 추출물이 전자인사로써 베타카테닌의 활성에 어떠한 영향을 미치는지 확인하고자 하였다.

사람 유래의 모유두세포를 60웰 플레이트에 1×10⁵ cells/㎖의 농도로 접종하고, 37℃, 5% CO₂ 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후, 리포펙타민 2000 (LipofectAmine2000) 시약을 이용하여 TCF/LEF 프로모터 유전자가 삽입된 플라스미드를 세포에 주입하였다. 각 세포에 자외선 B 파장을 12.5 mJ/cm²로 처리한 후, 미세조류 추출물 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖을 상기 웰 플레이트에 각각 첨가하고 동일한 조건의 배양기에서 배양하였다. 용해 완충제 (Lysis buffer)를 이용하여 세포를 15분간 녹여낸 후 세포용출액을 수득하였으며, 이를 루미노미터 플레이트 (luminometer plate)에 넣어 반응시켰다. 반응 후, 루미노미터 (luminometer)를 이용해 발광 값을 측정함으로써, 베타카테닌 (β-catenin)의 활성 정도를 측정하였다. 대조군으로는 윈트3a (wnt3a)를 처리한 모유두세포의 세포용출액을 사용하였다.

실험결과, 미세조류 추출물의 농도 의존적으로 베타카테닌의 활성이 증가하는 것을 확인하였으며, 100 ㎍/㎖ 농도에서는 윈트3a (wnt3a)를 처리한 경우와 유사한 수준으로 베타카테닌의 활성을 증가시키는 것을 확인하였다. 이로써 미세조류 추출물이 핵 내로 이동된 베타카테닌 (β-catenin)의 전사인자로써 이의 활성 증가에도 영향을 미치는 것을 확인할 수 있었다 (도 4).

도 4는 모유두세포에서 미세조류 추출물 농도에 따른 베타카테닌의 활성능을 측정한 그래프이다. 대조군으로는 윈트3a (wnt3a)를 처리한 모유두세포의 세포용출액을 사용하였다.

[실험예 5: 모유두세포에 대한 분화 촉진 효능 평가]

본 실험예에서는 미세조류 추출물이 모유두세포의 분화에 관여하는 케라틴 17 (Keratin 17), IL-6R, Gp130의 mRNA 발현에 미치는 영향을 확인하고자 하였다.

모유두세포의 분화에 있어서, 케라틴17 (Keratin 17)은 성장기 (anagen)를 지속시켜주는 역할을 하며, 이와 반대로 TNF-α는 성장기를 퇴화기 (catagen)로 변경시킨다. 또한, IL-6는 염증을 유도할 뿐만 아니라, IL-6R와 결합하여 모공의 세포의 증식을 억제하는 것으로 알려져 있다. Gp130은 IL-6와 IL-6R의 결합 후 동종이량화 (homodimerize)되어 다운스트림 (downstream)으로 신호를 전달하는 것으로 알려져 있다. 이로 인해 IL-6와 IL-6R의 발현을 낮추어 주는 것이 모유두세포 분화 증대에 있어 중요한 것이다.

사람 유래의 모유두세포를 6웰 플레이트에 1.5×10⁶ cells/㎖의 농도로 접종하고, 37℃, 5% CO₂ 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양한 후, 각 세포에 자외선 B 파장을 12.5 mJ/cm²로 처리하였다. 그 후, 미세조류 추출물 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖을 상기 웰 플레이트에 각각 첨가하여 같은 조건의 배양기에서 24시간 배양하였다.

24시간 후, 세포를 회수하고 트라이졸 (Trizol)을 이용하여 mRNA를 추출하였으며, 역전사효소를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA를 케라틴 17 (Keratin 17), IL-6R, Gp130 프라이머 (하기 표 2 참조) 이용하여 증폭시킨 후 유전자 발현 정도를 측정하였다. 대조군으로는 3 ㎍/㎖의 윈트3a (wnt3a)를 처리한 모유두세포를 이용하였다.

유전자명	분류	유전자서열
Keratin 17	Forward	5'-ATG GCA GAG AAG AAC CGC AA-3'
Keratin 17	Reverse	5'-CCA CAA TGG TAC GCA CCT GA-3'
IL-6R	Forward	5'-AGC CTC CCA GTG CAA GAT TC-3'
IL-6R	Reverse	5'-AGC CAG CTA TCT GGG GAA GA-3'
Gp130	Forward	5'-AAG CCC AAT CCG CCA CAT AA-3'
Gp130	Reverse	5'-AGG CAA TGT CTT CCA CAC GA-3'

실험결과, 미세조류 추출물의 농도가 증가할수록 자외선 B에 의해 감소된 케라틴 17 (Keratin17)의 발현이 유의적으로 증가하였고, 자외선 B에 의해 증가되었던 IL-6R의 발현은 감소하는 것을 확인할 수 있었다.

한편, Gp130의 경우, 미세조류 추출물의 농도에 따른 mRNA 발현의 변화가 나타나지 않았다. 하지만, Gp130과 결합하는 IL-6 및 IL-6R의 발현이 미세조류 추출물에 의해 억제되는 것을 확인하였기 때문에 (상기 실험예 2 및 본 실험예 5), 세포 증식 감소로 이어질 것이라 판단되었다 (도 5).

도 5는 모유두세포에서, 미세조류 추출물 농도에 따른 케라틴 17 (Keratin 17), IL-6R, Gp130의 mRNA 발현 정도를 측정한 결과이다. 대조군으로는 3 ㎍/㎖의 윈트3a (wnt3a)를 처리한 모유두세포를 사용하였다.

[실험예 6: 모유두세포에 대한 분화 촉진 효능 평가]

본 실험예에서는 미세조류 추출물이 모유두세포의 분화에 관여하는 케라틴 17 (Keratin 17), IL-6R, Gp130 단백질의 발현에 미치는 영향을 확인하고자 하였다.

사람 유래의 모유두세포를 6웰 플레이트에 1.5×10⁶ cells/㎖의 농도로 접종하고, 37℃, 5% CO₂ 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양한 후, 각 세포에 자외선 B 파장을 12.5 mJ/cm²로 처리하였다. 그 후, 미세조류 추출물 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖을 상기 웰 플레이트에 각각 첨가하여 24시간 배양하였다. 이후, 배양된 세포를 회수하고, 리파 완충액 (RIPA buffer)을 이용하여 세포를 용해시킨 후, BCA 정량법을 이용하여 단백질의 양을 확인하였다. SDS-폴리아크릴아마이드 겔 전기영동 (SDS-PAGE)과 전기영동 (electrophoresis)을 통해 단백질의 발현량을 확인하였다. 이때, 대조군으로는 미세조류 추출물 대신 3 ㎍/㎖의 윈트3a (wnt3a) 단백질을 처리한 모유두세포를 사용하였다.

실험결과, 자외선 B에 의해 감소된 케라틴 17 (Keratin17)의 발현이 미세조류 추출물의 처리에 의해 증가하는 것을 확인할 수 있으며, 자외선 B에 의해 증가되었던 IL-6R의 발현이 미세조류 추출물의 처리에 의해 감소하는 것을 확인할 수 있었다. Gp130의 경우, 상기 실험예 6의 mRNA 발현 측정과 동일하게 유의적인 차이가 확인되지 않았다 (도 6).

도 6은 모유두세포에서 미세조류 추출물 농도에 따른 케라틴 17 (Keratin 17), IL-6R, Gp130 단백질의 발현량을 측정한 결과이다. 대조군으로는 3 ㎍/㎖의 윈트3a (wnt3a)를 처리한 모유두세포를 사용하였다.

[실험예 7: 미세조류 추출물의 항알러지 효능 평가]

본 실험예에서는 미세조류 추출물의 알러지 유발 여부를 확인하고자 하였다.

랫드 유래의 호염구세포 (RBL-2H3, Basophil)를 24웰 플레이트에 1×10⁵ cells/㎖의 농도로 접종하고, 37℃, 5% CO₂ 조건의 배양기에서 배양한 후, 1 ㎍/㎖의 항 DNP-BSA (anti-DNP-BSA)를 배지에 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 미세조류 추출물 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖을 각각 상기 웰 플레이트에 첨가하고 동일한 조건의 배양기에서 30분간 배양하였다. 30분 후, 20 ㎍/㎖의 DNP-BSA로 30분간 세포를 자극 시킨 후, 상층액을 수거하여 1N NaOH와 1% c-프탈알데하이드 (o-Phthalaldehyde)을 처리하여 실온에서 5분간 반응시켰다. 그 후, 흡광도를 측정해 히스타민의 발현 정도를 측정하였다. 대조군으로는 10 μM의 덱사메타손을 처리한 호염구세포를 이용하였다.

실험결과, 히스타민의 발현이 미세조류 추출물의 농도 의존적으로 억제되는 것을 확인하였으며, 이를 통하여 미세조류 추출물의 항알러지 효능을 확인할 수 있었다. (도 7).

도 7은 랫드 유래 호염구세포 (RBL-2H3, Basophil)에서 미세조류 추출물 농도에 따른 히스타민의 발현 억제능을 측정한 결과이다. 대조군으로는 10 μM의 덱사메타손을 처리한 호염구세포를 사용하였다.

[실험예 8: 미세조류 추출물의 피부 안전성 평가]

본 실험예에서는 미세조류 추출물의 인체 피부에 대한 안전성을 확인하고자 하였다.

건강한 20~30대 성인 남녀 10명을 대상으로 팔 안쪽 부위에 핀 쳄버 (Finn Chamber)를 이용하여 24시간 동안 미세조류 추출물을 첩포하였다. 24시간 후에 핀 쳄버 (Finn Chamber)를 제거하였으며, 제거 후 1시간, 24시간 경과에 따른 피부 자극 유발 여부를 육안으로 확인하였다. 대조군으로는 미세조류 추출물 대신 증류수를 첩포하여 수행하였다.

실험결과, 미세조류 추출물은 피부 자극을 유발하지 않는 것을 확인할 수 있었다 (도 8).

도 8은 인체 피부에서 미세조류 추출물의 피부 자극 유발 여부를 측정한 결과이다. 대조군으로는 미세조류 추출물 대신 증류수를 사용하였다.

[ 실험예 9: 미세조류 추출물의 염모제 자극 완화 효능 평가]

본 실험예에서는 미세조류 추출물이 염모제에 혼합되었을 때, 피부 자극에 미치는 영향을 확인하고자 하였다.

건강한 20~30대 성인 남녀 10명을 대상으로 팔 안쪽 부위에 핀 쳄버 (Finn Chamber)을 이용하여 1%의 미세조류 추출물이 함유된 염모제 (1제 및 2제 1:1 비율 혼합)를 20분간 첩포하였다. 20분 후 핀 쳄버 (Finn Chamber)를 제거하였으며, 제거 1시간 경과 후 피부의 홍반 및 자극감을 확인하였다.

홍반이나 특이한 현상이 없는 경우 0, 주위보다 약간 붉어지거나 약간의 자극이 있는 경우 1, 주위보다 현저히 붉어지거나 자극이 있는 경우 2, 주위보다 심하게 붉어지고 부풀어오르거나 자극이 심한 경우 3으로 판정하고 평균으로 자극도를 계산하였다. 대조군으로는 미세조류 추출물 대신 증류수 및 경쟁사 제품이 각각 포함된 염모제를 사용하였다.

실험결과, 미세조류 추출물은 염모제에 의해 유발되는 자극 및 홍반을 완화시키는 것을 확인할 수 있었다 (도 9).

도 9는 미세조류 추출물의 처리에 따른 염모제 자극에 의한 피부자극 완화 효과를 확인한 결과이다. 대조군으로는 미세조류 추출물 대신 증류수 및 경쟁사 제품이 각각 포함된 염모제를 사용하였다.

Claims

삭제
삭제
삭제
삭제
포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 추출물을 함유하며,
모유두세포에서 베타카테닌의 활성을 증가시키고 모유두세포의 분화를 촉진하는 것을 특징으로 하는 모유두세포의 분화 촉진용 화장료 조성물.
제5항에 있어서,
상기 포피리듐 크루엔툼 (Porphyridium cruentum) 추출물은,
에탄올 추출물인 것을 특징으로 하는 모유두세포의 분화 촉진용 화장료 조성물.
제5항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
헤어 샴푸, 트리트먼트 및 팩의 컨디셔너 류, 축모 및 웨이브 제품의 퍼머넌트 류, 염모제, 헤어 에센스 및 로션의 헤어케어 류, 헤어 젤, 왁스 및 스프레이의 스타일링 류, 산성컬러 제형 중에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 모유두세포의 분화 촉진용 화장료 조성물.
삭제