JP3177246B2 - 未去勢のオスの家畜に対する抗ｌｈｒｈ免疫方法と、そのためのペプチド - Google Patents
未去勢のオスの家畜に対する抗ｌｈｒｈ免疫方法と、そのためのペプチドInfo
- Publication number
- JP3177246B2 JP3177246B2 JP50689392A JP50689392A JP3177246B2 JP 3177246 B2 JP3177246 B2 JP 3177246B2 JP 50689392 A JP50689392 A JP 50689392A JP 50689392 A JP50689392 A JP 50689392A JP 3177246 B2 JP3177246 B2 JP 3177246B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lhrh
- vaccine
- administered
- globulin
- emulsion
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 66
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 34
- 230000003053 immunization Effects 0.000 title claims description 19
- 244000144972 livestock Species 0.000 title claims description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 title description 16
- XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N gonadorelin Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 111
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 claims abstract description 95
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 claims abstract description 95
- 101000996723 Sus scrofa Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 claims abstract description 95
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 84
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 24
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 claims abstract description 12
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 230000008901 benefit Effects 0.000 claims abstract description 5
- 102000002572 Alpha-Globulins Human genes 0.000 claims description 34
- 108010068307 Alpha-Globulins Proteins 0.000 claims description 34
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 claims description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 23
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 21
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 17
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 15
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 12
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 12
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 12
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 11
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 claims description 11
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 10
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims description 10
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 9
- SGNXVBOIDPPRJJ-PSASIEDQSA-N 1-[(1r,6r)-9-azabicyclo[4.2.1]non-4-en-5-yl]ethanone Chemical compound CC(=O)C1=CCC[C@@H]2CC[C@H]1N2 SGNXVBOIDPPRJJ-PSASIEDQSA-N 0.000 claims description 8
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 claims description 8
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 claims description 8
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 8
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 8
- 239000003948 anatoxin Substances 0.000 claims description 7
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims description 6
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 6
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 6
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 claims description 6
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 claims description 5
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 claims description 5
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 claims description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 4
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 230000002710 gonadal effect Effects 0.000 claims description 4
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims description 3
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims description 3
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 claims description 3
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 3
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims description 3
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 3
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims 3
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 claims 3
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 claims 2
- IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N L-Leucyl-L-Arginyl-L-Proline Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCCC1C(O)=O IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- ABRICLFKFRFDKS-IHPCNDPISA-N Trp-Ser-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ABRICLFKFRFDKS-IHPCNDPISA-N 0.000 abstract 1
- 230000001548 androgenic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 abstract 1
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 61
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 28
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- HOWBSMILMYIFKQ-OBCLEYQXSA-N (2s)-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2r)-6-amino-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[(2-amino-2-oxoethyl)carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyph Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 HOWBSMILMYIFKQ-OBCLEYQXSA-N 0.000 description 14
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 14
- -1 2-pyridyldithio Chemical group 0.000 description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 10
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 10
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 9
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HFVMLYAGWXSTQI-QYXZOKGRSA-N 5alpha-androst-16-en-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C=CC4)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 HFVMLYAGWXSTQI-QYXZOKGRSA-N 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 7
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 7
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 6
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 239000003163 gonadal steroid hormone Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 5
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 5
- 206010033733 Papule Diseases 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 5
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 239000005556 hormone Chemical class 0.000 description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N iodane Chemical compound [125IH] XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 5
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 description 5
- 235000019645 odor Nutrition 0.000 description 5
- 231100000430 skin reaction Toxicity 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 5
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 206010040914 Skin reaction Diseases 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 125000001325 propanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- ZFRKQXVRDFCRJG-UHFFFAOYSA-N skatole Chemical group C1=CC=C2C(C)=CNC2=C1 ZFRKQXVRDFCRJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035483 skin reaction Effects 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IUVCFHHAEHNCFT-INIZCTEOSA-N 2-[(1s)-1-[4-amino-3-(3-fluoro-4-propan-2-yloxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]ethyl]-6-fluoro-3-(3-fluorophenyl)chromen-4-one Chemical compound C1=C(F)C(OC(C)C)=CC=C1C(C1=C(N)N=CN=C11)=NN1[C@@H](C)C1=C(C=2C=C(F)C=CC=2)C(=O)C2=CC(F)=CC=C2O1 IUVCFHHAEHNCFT-INIZCTEOSA-N 0.000 description 3
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 3
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- HFVMLYAGWXSTQI-ZDZHTXOZSA-N (10s,13r)-10,13-dimethyl-1,2,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15-dodecahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)C3CC[C@](C)(C=CC4)C4C3CCC21 HFVMLYAGWXSTQI-ZDZHTXOZSA-N 0.000 description 2
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 2
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 241000473945 Theria <moth genus> Species 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000061 acid fraction Substances 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 2
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 2
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 2
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 2
- 150000003141 primary amines Chemical group 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 229940074386 skatole Drugs 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- VBCGRIRZQYBNKU-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-3-yl) propanoate Chemical compound CCC(=O)OC1CC(=O)NC1=O VBCGRIRZQYBNKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISCMYZGMRHODRP-UHFFFAOYSA-N 3-(iminomethylideneamino)-n,n-dimethylpropan-1-amine Chemical compound CN(C)CCCN=C=N ISCMYZGMRHODRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- QADHLRWLCPCEKT-UHFFFAOYSA-N Androstenediol Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)O)C4C3CC=C21 QADHLRWLCPCEKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101100377706 Escherichia phage T5 A2.2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 101000928239 Homo sapiens Afamin Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical class C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108010071492 LHRH (1-10) Proteins 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 102000005686 Serum Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 description 1
- 108010003786 Vaxstrate Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- NXQOQNROJJFYCJ-FZFXZXLVSA-N androst-16-ene Chemical compound C1CCC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C=CC4)[C@@H]4[C@@H]3CCC21 NXQOQNROJJFYCJ-FZFXZXLVSA-N 0.000 description 1
- 150000001428 androst-16-enes Chemical class 0.000 description 1
- AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N androst-4-ene-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N 0.000 description 1
- QADHLRWLCPCEKT-LOVVWNRFSA-N androst-5-ene-3beta,17beta-diol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 QADHLRWLCPCEKT-LOVVWNRFSA-N 0.000 description 1
- 229950009148 androstenediol Drugs 0.000 description 1
- 229960005471 androstenedione Drugs 0.000 description 1
- AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N androstenedione Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical class C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 230000009969 flowable effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N glycinamide Chemical compound NCC(N)=O BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 102000050808 human AFM Human genes 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000023508 male gonad development Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000003715 nutritional status Nutrition 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920003192 poly(bis maleimide) Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002294 pubertal effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- WHMDPDGBKYUEMW-UHFFFAOYSA-N pyridine-2-thiol Chemical compound SC1=CC=CC=N1 WHMDPDGBKYUEMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020995 raw meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000009329 sexual behaviour Effects 0.000 description 1
- 230000011273 social behavior Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 230000021595 spermatogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019638 tenderness Nutrition 0.000 description 1
- 239000000647 testicular hormone Substances 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 150000003515 testosterones Chemical class 0.000 description 1
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
- A61K38/09—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH], i.e. Gonadotropin-releasing hormone [GnRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0006—Contraceptive vaccins; Vaccines against sex hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6081—Albumin; Keyhole limpet haemocyanin [KLH]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 未去勢の家畜のオスの肉の感覚上の品質を改良する方
法と、この方法で用いられるワクチンと、このワクチン
を製造するための新規なペプチドと、ワクチンの製造方
法。
法と、この方法で用いられるワクチンと、このワクチン
を製造するための新規なペプチドと、ワクチンの製造方
法。
本発明は去勢されていない家畜、特に牛、羊およびブ
タのオスの肉の感覚上の品質（qualites organoleptiqu
e）、特に臭いと味と柔らかさを改良する方法に関する
ものである。
タのオスの肉の感覚上の品質（qualites organoleptiqu
e）、特に臭いと味と柔らかさを改良する方法に関する
ものである。
本発明はこの方法で使用可能なワクチンと、このワク
チンを製造するための新規なペプチドと、これらに関す
るワクチン方法とに関するものである。
チンを製造するための新規なペプチドと、これらに関す
るワクチン方法とに関するものである。
食肉用の家畜を肥育する際には去勢されたオスよりも
去勢されていないオスを利用する方が有利であるという
ことは過去数十年間、畜産学の専門家達が強調してきた
ことである。その理由は成長速度が速く（特に牛と
羊）、餌の利用効率が良く、全ての家畜種において脂身
が少なく筋肉が多い肉が得られるためである（S.C.SEID
EMAN et al.,J.of Animal Science,1982,55（４）826−
840、M.BONNEAU,INRA Prod.Anim.,1988,1（２）133−14
0）。
去勢されていないオスを利用する方が有利であるという
ことは過去数十年間、畜産学の専門家達が強調してきた
ことである。その理由は成長速度が速く（特に牛と
羊）、餌の利用効率が良く、全ての家畜種において脂身
が少なく筋肉が多い肉が得られるためである（S.C.SEID
EMAN et al.,J.of Animal Science,1982,55（４）826−
840、M.BONNEAU,INRA Prod.Anim.,1988,1（２）133−14
0）。
しかし、これら報告書でも指摘されているように、未
去勢のオスを利用した場合の最大の欠点は、オスのブタ
と羊の場合には肉に不快な臭いと味が残り、未去勢のオ
スの牛と羊の肉は固いことである。そのため、一般には
外科的な去勢手術が行われている。
去勢のオスを利用した場合の最大の欠点は、オスのブタ
と羊の場合には肉に不快な臭いと味が残り、未去勢のオ
スの牛と羊の肉は固いことである。そのため、一般には
外科的な去勢手術が行われている。
全ての家畜種で要求される速い成育および高い餌の利
用効率に寄与する雄の性ホルモンステロイドの決定要素
であるアンドロステネジオール、アンドロステネジオン
およびテストステロンは、未去勢のオスの牛と羊の肉を
固くする原因にもなっている。また、オスブタの非性ホ
ルモンステロイドすなわち16−アンドロステン誘導体の
５α−アンドロステノン（５α−アンドロスト−16−オ
ン−３）は思春期に達した未去勢のオスブタの多くの肉
に不快臭と味を与える原因の１つであり、肉の品質を落
とし、生肉で市販する際の障害になっている。
用効率に寄与する雄の性ホルモンステロイドの決定要素
であるアンドロステネジオール、アンドロステネジオン
およびテストステロンは、未去勢のオスの牛と羊の肉を
固くする原因にもなっている。また、オスブタの非性ホ
ルモンステロイドすなわち16−アンドロステン誘導体の
５α−アンドロステノン（５α−アンドロスト−16−オ
ン−３）は思春期に達した未去勢のオスブタの多くの肉
に不快臭と味を与える原因の１つであり、肉の品質を落
とし、生肉で市販する際の障害になっている。
また、未去勢のオスブタの肉が不快な臭いと味を有す
る原因の１つは腸内細菌によって作られるトリプトファ
ンの誘導体：スカトールである。この物質は環境、栄養
状態および品種等の要因ででき、未去勢のオスブタでは
この物質が脂肪組織に多く蓄積される。この物質は生殖
腺での性ホルモンの分泌に関係するといわれている。
る原因の１つは腸内細菌によって作られるトリプトファ
ンの誘導体：スカトールである。この物質は環境、栄養
状態および品種等の要因ででき、未去勢のオスブタでは
この物質が脂肪組織に多く蓄積される。この物質は生殖
腺での性ホルモンの分泌に関係するといわれている。
幼い動物での雄性の発達すなわち精巣ホルモン、特に
精巣ステロイドの分泌を低下または停止させるために、
このステロイドまたはその分泌に関与するホルモン、特
に黄体形成ホルモンまたはLH（Luteinizing Hormone）
および黄体形成ホルモン分泌ホルモン（LHRH、Luteiniz
ing Hormone Releasing Hormon）ともよばれるゴナドリ
ベリンホルモン（GnRH）を能動的すなわち積極的に免疫
無効化（immunoneutralisation）する試みは既に試験的
に行われている。
精巣ステロイドの分泌を低下または停止させるために、
このステロイドまたはその分泌に関与するホルモン、特
に黄体形成ホルモンまたはLH（Luteinizing Hormone）
および黄体形成ホルモン分泌ホルモン（LHRH、Luteiniz
ing Hormone Releasing Hormon）ともよばれるゴナドリ
ベリンホルモン（GnRH）を能動的すなわち積極的に免疫
無効化（immunoneutralisation）する試みは既に試験的
に行われている。
また、ブタの16−アンドロステンの５α−アンドロス
テノンの組織内レベルを下げるために、この化合物に対
する能動免疫の試み（E.D.WILLIAMSON et al.,Livestoc
k Production Science,1985,12,251−264）または受動
免疫の試み（R.CLAUS,Immunizartion with Hormones in
Reproduction Research,Nieschlag,1975）も行われて
いる。さらに、精巣ステロイドの分泌を停止または低下
するために、各々の種に特異的な向生殖腺性ホルモンLH
の免疫無効化（R.E.FALVO et al.,J.Anim.Science,198
6,63,986−994）または内因性LHRHの抗LHRH免疫無効化
も行われている。多くの人が推薦するのは抗LHRH能動免
疫のみである。ブタの場合にはこの方法でα−アンドロ
ステノンの低下に成功している（A.CARATY,M.BONNEAU,
C.R.Acad.Sci.Paris 1986,303,Series III（16）673−6
76;R.E.FAVLO et al.,J.Anim.Sci.,1986,63,986−99
4）。
テノンの組織内レベルを下げるために、この化合物に対
する能動免疫の試み（E.D.WILLIAMSON et al.,Livestoc
k Production Science,1985,12,251−264）または受動
免疫の試み（R.CLAUS,Immunizartion with Hormones in
Reproduction Research,Nieschlag,1975）も行われて
いる。さらに、精巣ステロイドの分泌を停止または低下
するために、各々の種に特異的な向生殖腺性ホルモンLH
の免疫無効化（R.E.FALVO et al.,J.Anim.Science,198
6,63,986−994）または内因性LHRHの抗LHRH免疫無効化
も行われている。多くの人が推薦するのは抗LHRH能動免
疫のみである。ブタの場合にはこの方法でα−アンドロ
ステノンの低下に成功している（A.CARATY,M.BONNEAU,
C.R.Acad.Sci.Paris 1986,303,Series III（16）673−6
76;R.E.FAVLO et al.,J.Anim.Sci.,1986,63,986−99
4）。
シャンバジャー（B.D.SCHANBACHER,Am.J.Physiol.,19
82,242,E201−E205）は羊において抗LHRH免疫によって
オスの羊の精巣の発達を遅らせ、去勢効果を与える方法
を提案している。ロバートソン（P.S.ROBERTSON Vet.Re
c.,1979,105,516−517）は牛における抗LHRH免疫による
去勢法を報告している。
82,242,E201−E205）は羊において抗LHRH免疫によって
オスの羊の精巣の発達を遅らせ、去勢効果を与える方法
を提案している。ロバートソン（P.S.ROBERTSON Vet.Re
c.,1979,105,516−517）は牛における抗LHRH免疫による
去勢法を報告している。
テストステロンの分泌を停止させ、精巣およびそれに
付随する腺の重量を減少させ、精子形成を停止させ、性
欲を消失させることができるということは実験動物に対
する抗LHRH免疫無効化試験の報告（ARIMURA et al.,End
ocrinology,1973,93,1092−1103;FRASER H.M.et al.,J.
Endocr.1974,63,399−406;MAKIKO T.et al.,Contracept
ion,1973,8（２）,133−145;CARELLI C.et al.,Proc.Na
tl.Acad.Sci.,USA,1982,79,5392−5395）および数種家
畜に対する抗LHRH免疫無効化試験の報告（JEFFCOATE et
al.,Theriogenology,1978,10（４）,323−335;ROBERTS
ON I.S.et al.,Veterinary Record,1979,105,556;SCANB
ACHER B.D.Am.J.Physiol.1982,242,E201−E205）が示し
ている。
付随する腺の重量を減少させ、精子形成を停止させ、性
欲を消失させることができるということは実験動物に対
する抗LHRH免疫無効化試験の報告（ARIMURA et al.,End
ocrinology,1973,93,1092−1103;FRASER H.M.et al.,J.
Endocr.1974,63,399−406;MAKIKO T.et al.,Contracept
ion,1973,8（２）,133−145;CARELLI C.et al.,Proc.Na
tl.Acad.Sci.,USA,1982,79,5392−5395）および数種家
畜に対する抗LHRH免疫無効化試験の報告（JEFFCOATE et
al.,Theriogenology,1978,10（４）,323−335;ROBERTS
ON I.S.et al.,Veterinary Record,1979,105,556;SCANB
ACHER B.D.Am.J.Physiol.1982,242,E201−E205）が示し
ている。
これらの報告では、繁殖目的で、従来の外科的去勢に
代わって免疫無効化、特に抗LHRH免疫無効化が採用され
ることを示唆している。
代わって免疫無効化、特に抗LHRH免疫無効化が採用され
ることを示唆している。
アメリカ合衆国特許第4,556,555号にはゴナドトロピ
ンに対する抗体を含む抗血清を用いて思春期前の動物を
受動免疫する方法が記載されている。
ンに対する抗体を含む抗血清を用いて思春期前の動物を
受動免疫する方法が記載されている。
国際特許出願第WO 90/11,298号には、ブタ肉の品質を
向上させるために、２つのLHRH配列をキャリアー蛋白に
結合させたものを用いて出生時に抗LHRH免疫する方法が
記載されている。
向上させるために、２つのLHRH配列をキャリアー蛋白に
結合させたものを用いて出生時に抗LHRH免疫する方法が
記載されている。
国際特許出願第WO 88/00,056号には、オス動物の社会
的行動または性的行動を改善するために、成長速度に影
響を与える外科的去勢手術に代わって抗LHRH免疫による
去勢方法が記載されている。この方法では生後８〜40週
間のオス牛にワクチンを接種し、数回のブースター注射
を行う。
的行動または性的行動を改善するために、成長速度に影
響を与える外科的去勢手術に代わって抗LHRH免疫による
去勢方法が記載されている。この方法では生後８〜40週
間のオス牛にワクチンを接種し、数回のブースター注射
を行う。
オーストラリアのウェブスターズ（WEBSTERS）社から
ワクストレイト（登録商標VAXSTRATE）の商品名で市販
されている抗LHRHワクチンは牛で使用されている。
ワクストレイト（登録商標VAXSTRATE）の商品名で市販
されている抗LHRHワクチンは牛で使用されている。
ファルボ達（R.E.Falvo et al.J.Anim.Sci.1986,63:9
86−994）はLHRH−ヒト血清グロブリン結合体を完全フ
ロイントアジュバントに加えたものまたはアジュバント
としてムラミルペプチドを用いて未去勢のオスブタ群を
免疫化して、ワクチン接種と数回のブースター注射の後
に高力価の抗LHRHを観察している。しかし、この高抗体
力価を維持するためにはブースター注射を繰り返し行う
必要がある。
86−994）はLHRH−ヒト血清グロブリン結合体を完全フ
ロイントアジュバントに加えたものまたはアジュバント
としてムラミルペプチドを用いて未去勢のオスブタ群を
免疫化して、ワクチン接種と数回のブースター注射の後
に高力価の抗LHRHを観察している。しかし、この高抗体
力価を維持するためにはブースター注射を繰り返し行う
必要がある。
ロバートソン（I.S.Robertson）は破傷風アナトキシ
ンまたはチログロブリンと結合させたLHRHによる免疫法
を報告している。筆者はこの免疫手段を用いることによ
って去勢時期を遅らせ、それによって体重を有利に増加
させることができるという点を示唆している。しかし、
フロイントのアジュバントは使用が禁止されているの
で、去勢方法そのものとアジュバントとを実用可能な段
階にするにはさらに研究が必要であるとしている。
ンまたはチログロブリンと結合させたLHRHによる免疫法
を報告している。筆者はこの免疫手段を用いることによ
って去勢時期を遅らせ、それによって体重を有利に増加
させることができるという点を示唆している。しかし、
フロイントのアジュバントは使用が禁止されているの
で、去勢方法そのものとアジュバントとを実用可能な段
階にするにはさらに研究が必要であるとしている。
カラティとボノウ（A.Caraty and M.Bonneau,C.R.Aca
d.Sc.Paris,vol.303,Series III,No.16,1986）はオスブ
タに対して抗LHRH免疫を行っている。著者達は、屠殺の
２〜３週間前にステロイドの生成を停止させることによ
って、脂肪組織中にアンドロステノンが蓄積して生じる
問題を無くし、この種の動物の食肉への利用価値を高め
ることができることを示唆している。しかし、著者達は
養豚で使用可能な技術として抗LHRH能動免疫を提案でき
るようになるまでにはこの免疫法の技術をさらに大きく
進歩させる必要があると結論付けている。
d.Sc.Paris,vol.303,Series III,No.16,1986）はオスブ
タに対して抗LHRH免疫を行っている。著者達は、屠殺の
２〜３週間前にステロイドの生成を停止させることによ
って、脂肪組織中にアンドロステノンが蓄積して生じる
問題を無くし、この種の動物の食肉への利用価値を高め
ることができることを示唆している。しかし、著者達は
養豚で使用可能な技術として抗LHRH能動免疫を提案でき
るようになるまでにはこの免疫法の技術をさらに大きく
進歩させる必要があると結論付けている。
また、免疫無効化時期が遅れると、実用上で重要な問
題すなわち処置の安全性、特にワクチン（特に油性ワク
チン）により生じる局所反応の問題が起こり、食肉とし
て拒絶されたり、グレードが下げられる危険がある。
題すなわち処置の安全性、特にワクチン（特に油性ワク
チン）により生じる局所反応の問題が起こり、食肉とし
て拒絶されたり、グレードが下げられる危険がある。
なお、牛と羊の食肉の感覚上の品質を良くするという
点についてはこれまでに触れられたことは全くなかっ
た。
点についてはこれまでに触れられたことは全くなかっ
た。
本出願人は、動物の肉の感覚上の品質を良くするため
に産業上利用可能な方法を見出した。
に産業上利用可能な方法を見出した。
本発明方法は、能動または受動的な抗LHRH免疫無効化
によって性ホルモンまたは非性ホルモンのステロイドの
活性を動物を屠殺する直前までほぼ停止させるととも
に、動物の雄性に起因する利点を屠殺時まで実質的に継
続させることができる。
によって性ホルモンまたは非性ホルモンのステロイドの
活性を動物を屠殺する直前までほぼ停止させるととも
に、動物の雄性に起因する利点を屠殺時まで実質的に継
続させることができる。
本発明の第１の好ましい具体例では、抗LHRHワクチ
ン、好ましくは乳化（エマルジョン）状態の抗LHRHワク
チンを動物の肥大成長期またはその前に投与し、その
後、屠殺の少し前に再度抗LHRHを投与する。この方法は
２回に分けて投与するか、コントロールリリース法を用
いて行うことができる。
ン、好ましくは乳化（エマルジョン）状態の抗LHRHワク
チンを動物の肥大成長期またはその前に投与し、その
後、屠殺の少し前に再度抗LHRHを投与する。この方法は
２回に分けて投与するか、コントロールリリース法を用
いて行うことができる。
ブタの場合には、屠殺前に水性アジュバント、特に水
酸化アルミニウムゲルおよび／またはサポニンと一緒に
抗LHRHワクチンを投与するのが好ましい。この投与は屠
殺の15〜21日前に投与するのが好ましい。
酸化アルミニウムゲルおよび／またはサポニンと一緒に
抗LHRHワクチンを投与するのが好ましい。この投与は屠
殺の15〜21日前に投与するのが好ましい。
これに対して牛の場合（場合によっては羊）では、屠
殺前のワクチン投与に乳化剤状のアジュバントを使用
し、屠殺の１〜２ヵ月前に行うのが好ましい。この屠殺
直前の投与は最初の投与から少なくとも２週間後、好ま
しくは数ヵ月後にする。
殺前のワクチン投与に乳化剤状のアジュバントを使用
し、屠殺の１〜２ヵ月前に行うのが好ましい。この屠殺
直前の投与は最初の投与から少なくとも２週間後、好ま
しくは数ヵ月後にする。
いずれの場合でも１回目の投与に使用するワクチン
（牛の場合は２回目の投与にも使用する）乳化剤状ワク
チンは油中水型乳化剤の形にするのが好ましい。しか
し、その他の形式の乳化剤を使用することもできる。
（牛の場合は２回目の投与にも使用する）乳化剤状ワク
チンは油中水型乳化剤の形にするのが好ましい。しか
し、その他の形式の乳化剤を使用することもできる。
本発明のワクチン（好ましくは乳化剤型）は生殖腺ス
テロイドの分泌に実質的に影響を与えない、あるいは影
響が測定不可能であるような弱い免疫反応を最初に起す
ように設計されている。本発明のワクチンはエマルジョ
ンにするのが好ましいが、同じ効果が得られるならば、
その他の製剤法でもよい。
テロイドの分泌に実質的に影響を与えない、あるいは影
響が測定不可能であるような弱い免疫反応を最初に起す
ように設計されている。本発明のワクチンはエマルジョ
ンにするのが好ましいが、同じ効果が得られるならば、
その他の製剤法でもよい。
屠殺前の投与では、肉の品質または外観を損なう可能
性がある局所反応または全体反応を引き起こさないで、
ステロイドの分泌を停止または大幅に低下させるように
処方されたワクチンを使用する。
性がある局所反応または全体反応を引き起こさないで、
ステロイドの分泌を停止または大幅に低下させるように
処方されたワクチンを使用する。
ブタの場合には、下記２種類の製剤法で調合した水溶
液の結合体（conjugue）にするのが好ましい： 第１の製剤法は、生殖腺ステロイドの分泌が測定でき
ない程度の弱い免疫反応を起こす高純度の鉱物油、動物
油または植物油と非イオン性表面活性剤との混合物より
成る安定な油中水型乳剤にする。
液の結合体（conjugue）にするのが好ましい： 第１の製剤法は、生殖腺ステロイドの分泌が測定でき
ない程度の弱い免疫反応を起こす高純度の鉱物油、動物
油または植物油と非イオン性表面活性剤との混合物より
成る安定な油中水型乳剤にする。
第２の製剤法は、生殖腺ステロイドを減少または消失
させ、それに付随する腸由来のスカトールの運搬を減少
させるのに充分な量のニュートラライジング抗LHRH抗体
（anticorp anti−LHRH neutralisants）が産生される
ような迅速で強い免疫反応を引き起すエマルジョンでは
ない水酸化アルミニウムとサポニンとのゲルにする。
させ、それに付随する腸由来のスカトールの運搬を減少
させるのに充分な量のニュートラライジング抗LHRH抗体
（anticorp anti−LHRH neutralisants）が産生される
ような迅速で強い免疫反応を引き起すエマルジョンでは
ない水酸化アルミニウムとサポニンとのゲルにする。
本発明で使用する乳剤はフロイントの完全アジュバン
トまたは不完全アジュバントと違って、使用時にワクチ
ンを直ぐに調整できる安定なエマルジョンである。炎症
性の皮膚反応は非常に弱く、２種のワクチン製剤を投与
した位置に限定され、外見上では極めて狭い範囲に限定
された丘疹が現れる。内部への拡散（internal develop
ment）は表面真皮に限定され、屠殺時には消失し、特に
目立った肉芽種が残ることはない。
トまたは不完全アジュバントと違って、使用時にワクチ
ンを直ぐに調整できる安定なエマルジョンである。炎症
性の皮膚反応は非常に弱く、２種のワクチン製剤を投与
した位置に限定され、外見上では極めて狭い範囲に限定
された丘疹が現れる。内部への拡散（internal develop
ment）は表面真皮に限定され、屠殺時には消失し、特に
目立った肉芽種が残ることはない。
本発明の他の具体例では、高度免疫抗LHRH血清または
血漿あるいは抗LHRHモノクロナル抗体を屠殺の数日前、
好ましくは５〜15日前に動物に投与する。
血漿あるいは抗LHRHモノクロナル抗体を屠殺の数日前、
好ましくは５〜15日前に動物に投与する。
ウマの高度免疫血漿を筋肉注射により投与すると抗LH
RH受動免疫が獲得されて、性ホルモンまたは非性ホルモ
ンのステロイドの分泌が減少または停止するのが観察さ
れる。免疫した動物の血清中のLHRH抗体力価の測定値を
十分なレベルにすると、３日後に血漿テストステロンが
減少し、その後12日間同じレベルが維持される。オスブ
タの肉の不快臭および特殊な味が消費者に認識されない
程度にするには、組織内のアンドロステノン量を0.50μ
g/g以下まで下げればよい。この受動免疫法の結果はテ
ストテロンを12日間大幅に減少させ続ければ、組織内の
アンドロステノン濃度を閾値以下に低下させることがで
きるということを示している。この受動免疫はブタのハ
イブリドーマまたはヘテロハイブリドーマから分泌され
る抗LHRHモノクロナル抗体を用いて行うことができる。
RH受動免疫が獲得されて、性ホルモンまたは非性ホルモ
ンのステロイドの分泌が減少または停止するのが観察さ
れる。免疫した動物の血清中のLHRH抗体力価の測定値を
十分なレベルにすると、３日後に血漿テストステロンが
減少し、その後12日間同じレベルが維持される。オスブ
タの肉の不快臭および特殊な味が消費者に認識されない
程度にするには、組織内のアンドロステノン量を0.50μ
g/g以下まで下げればよい。この受動免疫法の結果はテ
ストテロンを12日間大幅に減少させ続ければ、組織内の
アンドロステノン濃度を閾値以下に低下させることがで
きるということを示している。この受動免疫はブタのハ
イブリドーマまたはヘテロハイブリドーマから分泌され
る抗LHRHモノクロナル抗体を用いて行うことができる。
本発明製剤の投与は経皮投与で行うのが好ましく、特
にフランス国特許第FR−Ａ−2,652,257号に記載の針を
使用しない注射装置を用いて加圧ジェットで行うのが好
ましい。
にフランス国特許第FR−Ａ−2,652,257号に記載の針を
使用しない注射装置を用いて加圧ジェットで行うのが好
ましい。
本発明方法は肉の品質を下げる原因となる局部反応を
起こさないという点で極めて重要である。
起こさないという点で極めて重要である。
炎症性の皮膚反応は極めて弱く、ワクチン製剤の投与
位置に限定され、外見上は極めて狭い範囲に丘疹が現れ
る。内部拡散は表面真皮に限定され、屠殺時には消失
し、特に目立った肉芽種が残るようなこともない。炎症
反応は一時的で、投与位置に限定されるので、上記２つ
の製剤法で作ったワクチンを針無しの注射器を用いて経
皮投与することができる。
位置に限定され、外見上は極めて狭い範囲に丘疹が現れ
る。内部拡散は表面真皮に限定され、屠殺時には消失
し、特に目立った肉芽種が残るようなこともない。炎症
反応は一時的で、投与位置に限定されるので、上記２つ
の製剤法で作ったワクチンを針無しの注射器を用いて経
皮投与することができる。
本発明の抗LHRH免疫法では、非免疫原性のLHRHペプチ
ドまたはLHRHペプチドの断片をキャリアーとよばれる免
疫原性蛋白に経済的方法で共有結合によって結合（conj
ugate）させる必要がある。
ドまたはLHRHペプチドの断片をキャリアーとよばれる免
疫原性蛋白に経済的方法で共有結合によって結合（conj
ugate）させる必要がある。
LHRHまたはGnRHは、自然物でも合成物でも１〜10で表
される10個のアミノ酸がアミノ末端からカルボキシ末端
まで下記の式でつながっている： 抗LHRH免疫原結合体に関しては種々の報告があり、以下
のものをハプテンとすることができる： （ａ）LHRH全体またはその一部または複数の部位を変性
させたものを用いて、アミノ末端、カルボキシ末端また
は所望の中間位置に結合させる。
される10個のアミノ酸がアミノ末端からカルボキシ末端
まで下記の式でつながっている： 抗LHRH免疫原結合体に関しては種々の報告があり、以下
のものをハプテンとすることができる： （ａ）LHRH全体またはその一部または複数の部位を変性
させたものを用いて、アミノ末端、カルボキシ末端また
は所望の中間位置に結合させる。
（ｂ）５〜７までのアミノ酸よりなる未変性または変性
したペプチド断片を用いて、アミノ末端、カルボキシ末
端または所望の中間位置で結合させる。
したペプチド断片を用いて、アミノ末端、カルボキシ末
端または所望の中間位置で結合させる。
（ｃ）置換アミノ基を有する（最も一般的には６位に有
する）作動薬（agoniste）を用いて、中間位置で結合さ
せる。
する）作動薬（agoniste）を用いて、中間位置で結合さ
せる。
キャリアー蛋白としてはウシ血清アルブミン、ヒト血
清アルブミン、チログロブリン、オボアルブミンおよび
ヒトまたはウマのグロブリンが使用されている。
清アルブミン、チログロブリン、オボアルブミンおよび
ヒトまたはウマのグロブリンが使用されている。
ヨーロッパ特許第EP−Ａ−181,236号にはLHRH分子の
最後の８つのアミノ酸に対応する配列を含むノナペプチ
ドまたはデカペプチドで構成され、そのアミノ末端側に
リジンまたはシステイン−リジン配列が付加された免疫
原性結合体が記載されている。
最後の８つのアミノ酸に対応する配列を含むノナペプチ
ドまたはデカペプチドで構成され、そのアミノ末端側に
リジンまたはシステイン−リジン配列が付加された免疫
原性結合体が記載されている。
国際特許第WO 88/05,308号には天然分子の5,6および
７のアミノ酸断片で構成される結合体が記載され、各断
片はＮ−末端を有するピログルタミン酸またはカルボキ
シ末端を有するグリシナミドを含み、免疫原性蛋白と結
合した末端には別のアミノ酸またはアミノ酸配列をさら
に付加することができる。
７のアミノ酸断片で構成される結合体が記載され、各断
片はＮ−末端を有するピログルタミン酸またはカルボキ
シ末端を有するグリシナミドを含み、免疫原性蛋白と結
合した末端には別のアミノ酸またはアミノ酸配列をさら
に付加することができる。
使用する結合剤は（１）活性化試薬、（２）ホモ二官
能性試薬および（３）ヘテロ二官能性試薬の３種類に大
別される。活性化試薬を用いた場合の二分子間の結合は
予め存在していた２つの官能基の間で起こり、それ以外
の場合はリガンドとよばれる炭化水素残基によって行わ
れる。
能性試薬および（３）ヘテロ二官能性試薬の３種類に大
別される。活性化試薬を用いた場合の二分子間の結合は
予め存在していた２つの官能基の間で起こり、それ以外
の場合はリガンドとよばれる炭化水素残基によって行わ
れる。
活性化剤としては糖蛋白のオリゴ糖類残基をアルデヒ
ドへ酸化するのに使用される過ヨウ素酸を挙げることが
できる。結合に関与する別の分子のアミノ基はこのアル
デヒドと反応する。
ドへ酸化するのに使用される過ヨウ素酸を挙げることが
できる。結合に関与する別の分子のアミノ基はこのアル
デヒドと反応する。
カルボジイミドは抗原を蛋白にカップリングさせるの
に広く用いられている活性化剤で、その中で最もよく用
いられるのはＮ−エチル−Ｎ′−（３−ジメチルアミノ
プロピル）カルボジイミド（EDC）の塩酸塩で、この場
合には反応を水性媒体中で行うことができる。この反応
によってＯ−アルキルイソウレア中間体の形に活性化さ
れた蛋白質のカルボキシル基と別の分子のアミングルー
プとの間にアミド結合が形成される。この利点は簡単に
使用できる点にある。
に広く用いられている活性化剤で、その中で最もよく用
いられるのはＮ−エチル−Ｎ′−（３−ジメチルアミノ
プロピル）カルボジイミド（EDC）の塩酸塩で、この場
合には反応を水性媒体中で行うことができる。この反応
によってＯ−アルキルイソウレア中間体の形に活性化さ
れた蛋白質のカルボキシル基と別の分子のアミングルー
プとの間にアミド結合が形成される。この利点は簡単に
使用できる点にある。
ホモ二官能性試薬とは炭化水素鎖によって互いに隔て
られた２つの同一な官能基を有する分子である。例とし
ては２つの第一アミン基と反応するグルタルアルデヒ
ド、第一アミンおよびチオールと反応するアルキルジイ
ソシアネートまたはアリールジイソシアネート、チロシ
ンの芳香族残基とカップリングするビスジアゾ化ベンジ
ジンを挙げることができ、特に、ビスマレイミドおよび
ビスアミジネートを挙げることができる。ホモ二官能性
試薬を用いた場合の主たる欠点は、これらの試薬が性質
が同じ２つの分子と反応してオリゴマーまたはポリマー
を形成することがあるため、生成する結合体の種類がコ
ントロールできない点にある。
られた２つの同一な官能基を有する分子である。例とし
ては２つの第一アミン基と反応するグルタルアルデヒ
ド、第一アミンおよびチオールと反応するアルキルジイ
ソシアネートまたはアリールジイソシアネート、チロシ
ンの芳香族残基とカップリングするビスジアゾ化ベンジ
ジンを挙げることができ、特に、ビスマレイミドおよび
ビスアミジネートを挙げることができる。ホモ二官能性
試薬を用いた場合の主たる欠点は、これらの試薬が性質
が同じ２つの分子と反応してオリゴマーまたはポリマー
を形成することがあるため、生成する結合体の種類がコ
ントロールできない点にある。
この欠点を克服するために化学者達が開発したヘテロ
二官能性試薬では、２つの官能基がそれぞれ別の特性を
有し、一般には一方の官能基は緩やかな反応条件下で蛋
白の遊離アミン基と反応するＮ−ヒドロキシスクシンイ
ミドエステルであり、これがＮ−ハイドロキシサクシン
イミドおよび共有アミド結合を介して第２の官能基を有
するカップリング剤を含む蛋白になる。一般には、後者
はカップリングされる分子のチオールと反応する。この
チオールは分子内に最初からシステイン残基（これは天
然成分でも、ペプチドの場合には合成段階で意図的に導
入したものでも良い）の形で存在しているか、２−イミ
ノチオレーンまたはＮ−［３−（２−ピリジルジチオ）
プロパノイロキシ］スクシンイミド（SPDP）のような試
薬によって還元後に導入しても良い。
二官能性試薬では、２つの官能基がそれぞれ別の特性を
有し、一般には一方の官能基は緩やかな反応条件下で蛋
白の遊離アミン基と反応するＮ−ヒドロキシスクシンイ
ミドエステルであり、これがＮ−ハイドロキシサクシン
イミドおよび共有アミド結合を介して第２の官能基を有
するカップリング剤を含む蛋白になる。一般には、後者
はカップリングされる分子のチオールと反応する。この
チオールは分子内に最初からシステイン残基（これは天
然成分でも、ペプチドの場合には合成段階で意図的に導
入したものでも良い）の形で存在しているか、２−イミ
ノチオレーンまたはＮ−［３−（２−ピリジルジチオ）
プロパノイロキシ］スクシンイミド（SPDP）のような試
薬によって還元後に導入しても良い。
上記の使用可能なもののうち、LHRH全体を使用するの
が好ましい。この場合には（Ｄ−Lys6）−LHRHのような
作動薬よりも天然のLHRHが好ましい。これら２つのペプ
チドを用いて調製した結合体は免疫活性が異なる。
が好ましい。この場合には（Ｄ−Lys6）−LHRHのような
作動薬よりも天然のLHRHが好ましい。これら２つのペプ
チドを用いて調製した結合体は免疫活性が異なる。
天然型LHRHをα−グロブリンに結合するための試薬と
してはグルタルアルデヒドよりもカルボジイミドが好ま
しい。
してはグルタルアルデヒドよりもカルボジイミドが好ま
しい。
ヒトまたはウシ血清アルブミンよりもヒトまたはウマ
のα−グロブリンのIV−１画分またはIV−４画分がより
好ましい。
のα−グロブリンのIV−１画分またはIV−４画分がより
好ましい。
各ワクチンは同一の活性成分、特にα−グロブリン−
LHRH結合体を含むのが好ましく、LHRHは天然形が好まし
く、α−グロブリンはヒトまたはウマ由来のもの、特に
IV−１および／またはIV−４画分であるのが好ましい。
結合体は２〜20mg/mlのα−グロブリン/LHRH混合物を含
む0.9％塩化ナトリウム溶液１容量に対して、Ｎ−エチ
ル−Ｎ′−（３−ジメチル−アミノプロピル）カルボジ
イミド（EDC）の塩酸塩を2.5％含む0.9％の塩化ナトリ
ウム溶液0.5〜２容量を添加し、攪拌後、混合物を一夜
放置し、ゲル浸透クロマトグラフィーで精製して得るの
が好ましい。
LHRH結合体を含むのが好ましく、LHRHは天然形が好まし
く、α−グロブリンはヒトまたはウマ由来のもの、特に
IV−１および／またはIV−４画分であるのが好ましい。
結合体は２〜20mg/mlのα−グロブリン/LHRH混合物を含
む0.9％塩化ナトリウム溶液１容量に対して、Ｎ−エチ
ル−Ｎ′−（３−ジメチル−アミノプロピル）カルボジ
イミド（EDC）の塩酸塩を2.5％含む0.9％の塩化ナトリ
ウム溶液0.5〜２容量を添加し、攪拌後、混合物を一夜
放置し、ゲル浸透クロマトグラフィーで精製して得るの
が好ましい。
キャリアー蛋白としては血清アルブミン、特にウシま
たはヒト血清アルブミン、チログロブリン、オバルブミ
ン、ヒトまたはウマのグロブリンおよびアナトキシン、
特に破傷風アナトキシンを用いることができる。
たはヒト血清アルブミン、チログロブリン、オバルブミ
ン、ヒトまたはウマのグロブリンおよびアナトキシン、
特に破傷風アナトキシンを用いることができる。
LHRHペプチドのカルボキシ末端画分をカルボジイミド
でαグロブリンに結合させたもの、またはその作動薬で
ある（Ｄ−Lys6）−LHRHをSPDPでα−グロブリンに結合
させたものに対するオスブタの免疫反応が優越であるこ
とが観察されているので、LHRHのカルボキシ末端を有す
る有利なペプチドを用いた抗LHRH免疫原性結合体を定義
することができる。
でαグロブリンに結合させたもの、またはその作動薬で
ある（Ｄ−Lys6）−LHRHをSPDPでα−グロブリンに結合
させたものに対するオスブタの免疫反応が優越であるこ
とが観察されているので、LHRHのカルボキシ末端を有す
る有利なペプチドを用いた抗LHRH免疫原性結合体を定義
することができる。
すなわち、本発明の第２の好ましい具体例では、本出
願人はLHRHの最後の８アミノ酸を含む新規なペプチドす
なわち以下の式で表されるデカペプチド： を使用するのが有利であるということと、このペプチド
は中性LHRHのようなホルモン活性を示さずに高い免疫原
性を有するということを見出した。
願人はLHRHの最後の８アミノ酸を含む新規なペプチドす
なわち以下の式で表されるデカペプチド： を使用するのが有利であるということと、このペプチド
は中性LHRHのようなホルモン活性を示さずに高い免疫原
性を有するということを見出した。
本発明の他の対象は、この新規なペプチド（３−10）
と、このペプチドを含み且つ上記の免疫原性キャリアー
蛋白（オバルブミンおよびウマのα−グロブリン、特に
IV−１および／またはIV−４画分が好ましい）とカップ
リングされた結合体にある。
と、このペプチドを含み且つ上記の免疫原性キャリアー
蛋白（オバルブミンおよびウマのα−グロブリン、特に
IV−１および／またはIV−４画分が好ましい）とカップ
リングされた結合体にある。
本発明では、LHRH（３−10）ペプチドを特にウマのα
−グロブリンまたはオバルブミンに結合する試薬として
はグルタルアルデヒドおよびヘテロ二官能性試薬よりも
カルボジイミドを用いるのが好ましい。
−グロブリンまたはオバルブミンに結合する試薬として
はグルタルアルデヒドおよびヘテロ二官能性試薬よりも
カルボジイミドを用いるのが好ましい。
結合体の好ましい調製方法では、LHRH（３−10）とキ
ャリアー蛋白、オバルブミンまたはα−グロブリンをそ
れぞれ２〜40mg/mlの割合で0.1M塩化ナトリウム/0.1M
２−（Ｎ−モルフォリノ）エタンスルホン酸緩衝液に添
加する。次いで、同じ緩衝液で調製したＮ−エチル−
Ｎ′−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
の2.5％溶液を0.5〜２倍量添加する。1Nの水酸化ナトリ
ウムを用いてpHを調節する。攪拌後、混合物を一夜放置
し、ゲル浸透クロマトグラフィーで精製する。このクロ
マトグラフィーによってカップリングしていないLHRH
（３−10）と、残留カルボジイミドと、その加水分解生
成物とが除去される。
ャリアー蛋白、オバルブミンまたはα−グロブリンをそ
れぞれ２〜40mg/mlの割合で0.1M塩化ナトリウム/0.1M
２−（Ｎ−モルフォリノ）エタンスルホン酸緩衝液に添
加する。次いで、同じ緩衝液で調製したＮ−エチル−
Ｎ′−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
の2.5％溶液を0.5〜２倍量添加する。1Nの水酸化ナトリ
ウムを用いてpHを調節する。攪拌後、混合物を一夜放置
し、ゲル浸透クロマトグラフィーで精製する。このクロ
マトグラフィーによってカップリングしていないLHRH
（３−10）と、残留カルボジイミドと、その加水分解生
成物とが除去される。
本発明の他の対象は上記本発明方法で使用可能な主活
性成分として上記の結合体を含む新規なLHRHワクチンに
ある。
性成分として上記の結合体を含む新規なLHRHワクチンに
ある。
本発明のさらに他の対象は上記方法を用いた抗LHRH
（３−10）受動免疫法にある。
（３−10）受動免疫法にある。
本発明のさらに他の対象は、１回目の接種で投与する
ワクチンと、屠殺前の投与するワクチンとを同数ずつ単
一の包装中に収容した免疫セットにある。各ワクチン
は、例えば上記フランス国特許に記載の経皮ジェット投
与用に少量に濃縮した状態で包装されているのが好まし
い。
ワクチンと、屠殺前の投与するワクチンとを同数ずつ単
一の包装中に収容した免疫セットにある。各ワクチン
は、例えば上記フランス国特許に記載の経皮ジェット投
与用に少量に濃縮した状態で包装されているのが好まし
い。
以下、本発明の複数の製品およびワクチン接種方法を
比較した試験と、LHRHペプチドのカルボキシ末端画分に
対してオスブタの免疫反応が優越であることを示す試験
と、本発明でオスブタに抗LHRHのワクチンを接種した試
験とを用いて本発明をさらに詳細に説明する。
比較した試験と、LHRHペプチドのカルボキシ末端画分に
対してオスブタの免疫反応が優越であることを示す試験
と、本発明でオスブタに抗LHRHのワクチンを接種した試
験とを用いて本発明をさらに詳細に説明する。
I.LHRH全体を用いた場合 A.LHRHペプチドの一番外側のカルボキシ末端を修正しな
い結合体が強い免疫原性を示し、（Ｄ−Lys6）−LHRH作
動薬を使用した結合体よりも天然型のLHRHをベースとし
た結合体を選択すべきことを示す実験 A1.未去勢のオスブタおよびオスのラットOFAでの抗LHRH
免疫 天然型のLHRH（B1およびB2）または（Ｄ−Lys6）−LH
RH（A1およびA2）とヒトアルブミンとの結合体で構成さ
れる２種類の抗LHRHワクチンの活性を比較した。各結合
体は水相およびSPDP中でカルボジイミドを用いて油中水
型乳化剤に調製し、ブタには筋肉注射によって、ラット
には皮下注射によって投与した。結果は以下の通り： （１）天然型LHRHをベースとしたワクチンの方が活性が
高い。免疫反応を示す個体の内、より多くの個体におい
て、LHRHペプチド結合体の量は（Ｄ−Lys6）−LHRHペプ
チド結合体の量よりも少ない（表１および３）。
い結合体が強い免疫原性を示し、（Ｄ−Lys6）−LHRH作
動薬を使用した結合体よりも天然型のLHRHをベースとし
た結合体を選択すべきことを示す実験 A1.未去勢のオスブタおよびオスのラットOFAでの抗LHRH
免疫 天然型のLHRH（B1およびB2）または（Ｄ−Lys6）−LH
RH（A1およびA2）とヒトアルブミンとの結合体で構成さ
れる２種類の抗LHRHワクチンの活性を比較した。各結合
体は水相およびSPDP中でカルボジイミドを用いて油中水
型乳化剤に調製し、ブタには筋肉注射によって、ラット
には皮下注射によって投与した。結果は以下の通り： （１）天然型LHRHをベースとしたワクチンの方が活性が
高い。免疫反応を示す個体の内、より多くの個体におい
て、LHRHペプチド結合体の量は（Ｄ−Lys6）−LHRHペプ
チド結合体の量よりも少ない（表１および３）。
（２）多くの固体の中で同一結合体による免疫反応を示
す固体に投与の効果が見られる。
す固体に投与の効果が見られる。
A1.1 SPDPを用いた（Ｄ−Lys6）−LHRHとアルブミンと
の結合体の調製。
の結合体の調製。
（Ｄ−Lys6）−LHRHとアルブミンとの結合体を、｛Ｎ
−［３−（２−ピリジルジチオ）プロパノイル］−Ｄ−
Lys6）−LHRHの調製と、Ｎ−（３−メルカプトプロパノ
イル）アルブミンの調製と、カップリングとの３段階で
調製する。
−［３−（２−ピリジルジチオ）プロパノイル］−Ｄ−
Lys6）−LHRHの調製と、Ｎ−（３−メルカプトプロパノ
イル）アルブミンの調製と、カップリングとの３段階で
調製する。
｛Ｎ−［３−（２−ピリジルジチオ）プロパノイル］
−Ｄ−Lys6）−LHRHは、水溶液中で過剰のSPDPとLHRHと
を反応させて調製する（LHRH1モルに対してSPDP6モ
ル）。一夜４℃に置いた後、生成物を遠心分離する。生
成物を8Mの尿素に溶解し、溶液中の２−ピリジルジチオ
基を検定する。
−Ｄ−Lys6）−LHRHは、水溶液中で過剰のSPDPとLHRHと
を反応させて調製する（LHRH1モルに対してSPDP6モ
ル）。一夜４℃に置いた後、生成物を遠心分離する。生
成物を8Mの尿素に溶解し、溶液中の２−ピリジルジチオ
基を検定する。
Ｎ−（３−メルカプトロパノイル）アルブミンは0.1M
のリン酸緩衝液100mlに溶解させた1gのヒトアルブミン
に0.2mmolのSPDPを作用させて調製する。４℃で一夜接
触させた後、ジチオスレイトールで還元してpH6に酸性
化する。その後、ゲル濾過クロマトグラフィーにより精
製し、チオールと蛋白を測定して平均置換度を知る。
のリン酸緩衝液100mlに溶解させた1gのヒトアルブミン
に0.2mmolのSPDPを作用させて調製する。４℃で一夜接
触させた後、ジチオスレイトールで還元してpH6に酸性
化する。その後、ゲル濾過クロマトグラフィーにより精
製し、チオールと蛋白を測定して平均置換度を知る。
チオール基1.25に対して２−ピリジルジチオグループ
を１にしてカップリングする。pHを７〜7.5にし、１時
間後に遊離の２−ピリジンチオンを測定して、収率を決
定する。
を１にしてカップリングする。pHを７〜7.5にし、１時
間後に遊離の２−ピリジンチオンを測定して、収率を決
定する。
この値から平均置換度を求める。最後に、クロマトグ
ラフィーで結合体を精製し、限外濾過で濃縮する。
ラフィーで結合体を精製し、限外濾過で濃縮する。
A1.2 カルボジイミドを用いたLHRH−アルブミン結合体
の調製。
の調製。
1000mgのＮ−エチル−Ｎ′−（３−ジメチルアミノプ
ロピル）−カルボジイミドの塩酸塩を使用する直前に40
mlの0.9％塩化ナトリウム溶液に溶解し、これを300mgの
LHRHと300mgのヒトアルブミンとを30mlの0.9％塩化ナト
リウム溶液に溶解したものに添加する。攪拌後、混合物
を遮光し、一夜室温に放置する。その後、セファデック
スＧ−50ゲルを用いたクロマトグラフィーで結合体画分
を回収し、必要に応じて濃縮・凍結する。
ロピル）−カルボジイミドの塩酸塩を使用する直前に40
mlの0.9％塩化ナトリウム溶液に溶解し、これを300mgの
LHRHと300mgのヒトアルブミンとを30mlの0.9％塩化ナト
リウム溶液に溶解したものに添加する。攪拌後、混合物
を遮光し、一夜室温に放置する。その後、セファデック
スＧ−50ゲルを用いたクロマトグラフィーで結合体画分
を回収し、必要に応じて濃縮・凍結する。
カップリングしていないLHRHを含む画分からカップリ
ングしていないLHRHの量、従って平均結合度を求める。
この値は再現性があり、100mgのアルブミンに対してカ
ップリングするLHRHは８〜10mgの範囲で変化する。
ングしていないLHRHの量、従って平均結合度を求める。
この値は再現性があり、100mgのアルブミンに対してカ
ップリングするLHRHは８〜10mgの範囲で変化する。
クロマトグラフィー前後の結合体のUVスペクトルから
クロマトグラフィーでの結合体の回収率、従って結合し
ているLHRHの量（濃度）を求める。
クロマトグラフィーでの結合体の回収率、従って結合し
ているLHRHの量（濃度）を求める。
A1.3 測定法 抗体の力価はジェフコート達の方法（JEFFCOATE et a
l.,Acta.Endocr.,Copenh.,1974,75:625−635）に従って
決定した。
l.,Acta.Endocr.,Copenh.,1974,75:625−635）に従って
決定した。
テストステロンは放射化したテストステロンC19−カ
ルボキシメチルエーテル［125I］ヒスタミンを用いたRI
A法で血漿から直接測定した。
ルボキシメチルエーテル［125I］ヒスタミンを用いたRI
A法で血漿から直接測定した。
各種ペプチドの結合はコッポランド達の方法（COPPOL
AND et al.,Endocr.,1979 104:1504−1506））でヨウ素
−125でラベルした後、ジェフコート達の方法（JEFFCOA
TE et al.,Acta.Endocr.,Copenh.,1974,75:625−635）
で測定した。
AND et al.,Endocr.,1979 104:1504−1506））でヨウ素
−125でラベルした後、ジェフコート達の方法（JEFFCOA
TE et al.,Acta.Endocr.,Copenh.,1974,75:625−635）
で測定した。
A1.4 具体例 （１）ラットでの試験 表1:ヨウ素−125でラベルしたLHRHの固定度から測定
した抗LHRH抗体反応 表2:血漿テストステロン濃度に対する抗LHRH免疫の効
果 投与量 ワクチンA1:（Ｄ−Lys6−LHRH 結合体50μｇ ワクチンB1:LHRH結合体 12μｇ （２）未去勢のオスブタでの試験 表3:ヨウ素−125でラベルしたLHRHの固定度から測定
した抗LHRH抗体反応 投与量 ワクチンA1:（Ｄ−Lys6）−LHRH結合体0.5mg ワクチンA2:（Ｄ−Lys6）−LHRH結合体6mg ワクチンB1:LHRH結合体 0.15mg ワクチンB2:LHRH結合体 1.20mg A2 ブタに筋肉注射（IM）または経皮投与（ID）したカ
ルボジイミドで結合させたLHRH−α−グロブリン結合体
と、SPDPで結合させ油中水型乳化剤にした（Ｄ−LYS6）
−LHRH−α−グロブリン結合体とからなる２種類のワク
チンの比較 A2.1 SPDPで結合させた（Ｄ−Lys6）−LHRH−α−グロ
ブリンの調製 実施例A1に記載の方法を繰り返すが、濃度10mg/mlの
アルブミンを濃度6mg/mlのα−グロブリンに代える。
した抗LHRH抗体反応 表2:血漿テストステロン濃度に対する抗LHRH免疫の効
果 投与量 ワクチンA1:（Ｄ−Lys6−LHRH 結合体50μｇ ワクチンB1:LHRH結合体 12μｇ （２）未去勢のオスブタでの試験 表3:ヨウ素−125でラベルしたLHRHの固定度から測定
した抗LHRH抗体反応 投与量 ワクチンA1:（Ｄ−Lys6）−LHRH結合体0.5mg ワクチンA2:（Ｄ−Lys6）−LHRH結合体6mg ワクチンB1:LHRH結合体 0.15mg ワクチンB2:LHRH結合体 1.20mg A2 ブタに筋肉注射（IM）または経皮投与（ID）したカ
ルボジイミドで結合させたLHRH−α−グロブリン結合体
と、SPDPで結合させ油中水型乳化剤にした（Ｄ−LYS6）
−LHRH−α−グロブリン結合体とからなる２種類のワク
チンの比較 A2.1 SPDPで結合させた（Ｄ−Lys6）−LHRH−α−グロ
ブリンの調製 実施例A1に記載の方法を繰り返すが、濃度10mg/mlの
アルブミンを濃度6mg/mlのα−グロブリンに代える。
カップリングした（Ｄ−Lys6）−LHRHの最終収量は45
〜50％である。
〜50％である。
なお、MP−α−グロブリンの調製時に、SPDPおよび／
またはα−グロブリンの濃度を変えて、α−グロブリン
の置換度、従って結合レベルを任意に変えることができ
る。
またはα−グロブリンの濃度を変えて、α−グロブリン
の置換度、従って結合レベルを任意に変えることができ
る。
A2.2 カルボジイミド（EDC）で結合させたLHRH−ヒト
α−グロブリンの調製 実施例A1に記載の方法を繰り返すが、ヒトアルブミン
をヒト−α−グロブリンに代える。結合度は100mgのヒ
ト−α−アルブミンに対して24〜28mgのLHRHが結合する
レベルである。
α−グロブリンの調製 実施例A1に記載の方法を繰り返すが、ヒトアルブミン
をヒト−α−グロブリンに代える。結合度は100mgのヒ
ト−α−アルブミンに対して24〜28mgのLHRHが結合する
レベルである。
A2.3 カルボジイミドで結合させたLHRH−α−グロブリ
ンをベースとしたワクチンが２番目のものよりも効力が
高いことを示す試験 効力は血漿テストステロンが完全に消失した個体数で
表す（表４）。
ンをベースとしたワクチンが２番目のものよりも効力が
高いことを示す試験 効力は血漿テストステロンが完全に消失した個体数で
表す（表４）。
A.3 カルボジイミドでヒト−α−グロブリンに結合さ
せたLHRHペプチドのカルボキシ末端画分またはSPDPでヒ
ト−α−グロブリンに結合させたその作動薬（Ｄ−Ly
s6）−LHRHのカルボキシ末端画分に対するオスブタの免
疫反応の優越性 このテストではラベルした２種類のLHRH断片による抗
LHRH血清および抗（Ｄ−Lys6）−LHRH血清の固定度合い
を比較した。LHRH断片としてはアミノ末端部位を削除し
たLHRH（３−10）と、天然のカルボキシ末端部位からア
ミド部位を削除したものに相当する遊離酸の形にしたLH
RH（１−10）を用いた。これら２種類の画分はカルボキ
シ末端画分を向いた抗体およびアミノ末端画分を向いた
抗体をそれぞれ認識する。
せたLHRHペプチドのカルボキシ末端画分またはSPDPでヒ
ト−α−グロブリンに結合させたその作動薬（Ｄ−Ly
s6）−LHRHのカルボキシ末端画分に対するオスブタの免
疫反応の優越性 このテストではラベルした２種類のLHRH断片による抗
LHRH血清および抗（Ｄ−Lys6）−LHRH血清の固定度合い
を比較した。LHRH断片としてはアミノ末端部位を削除し
たLHRH（３−10）と、天然のカルボキシ末端部位からア
ミド部位を削除したものに相当する遊離酸の形にしたLH
RH（１−10）を用いた。これら２種類の画分はカルボキ
シ末端画分を向いた抗体およびアミノ末端画分を向いた
抗体をそれぞれ認識する。
多くの動物において、抗体はペプチドLHRH（３−10）
のみに結合し、LHRHの遊離の酸には全く結合しないこと
が示された。このことからペプチドのカルボキシ末端画
分に対する免疫反応の優越性が示された（抗LHRH血清に
ついては10/58、抗（Ｄ−Lys6）−LHRH血清については3
/10）。
のみに結合し、LHRHの遊離の酸には全く結合しないこと
が示された。このことからペプチドのカルボキシ末端画
分に対する免疫反応の優越性が示された（抗LHRH血清に
ついては10/58、抗（Ｄ−Lys6）−LHRH血清については3
/10）。
LHRHの遊離酸画分に対して100％の結合した血清はな
かった。このことはアミノ末端のみを認識していること
を示している。
かった。このことはアミノ末端のみを認識していること
を示している。
最もよく観察された混合反応は抗LHRH血清よりも抗
（Ｄ−Lys6）−LHRH血清でよりアミノ末端画分が認識さ
れていることを示している。LHRH血清ではアミノ末端画
分の40％以上を認識を示した血清は58検体中わずかに３
検体であるが、抗（Ｄ−Lys6）−LHRH血清では10検体中
４検体であった。
（Ｄ−Lys6）−LHRH血清でよりアミノ末端画分が認識さ
れていることを示している。LHRH血清ではアミノ末端画
分の40％以上を認識を示した血清は58検体中わずかに３
検体であるが、抗（Ｄ−Lys6）−LHRH血清では10検体中
４検体であった。
Ｂ カルボジイミドを用いて調製したLHRH−α−グロブ
リン結合体の免疫活性は、グルタルアルデヒドを用いて
調製した結合体の活性よりも高いことを示す試験 B.1 グルタルアルデヒドを用いたLHRH−α−グロブリ
ン結合体の調製 濃度10mg/mlのグルタルアルデヒド溶液2.5mlを、30分
かけて、10mgのLHRHおよび50mgのヒトα−グロブリン
（セルヴァ（Serva）社勢）をpH7.5の0.1Mリン酸緩衝液
5mlに溶解したものに１滴ずつ添加する。この際、１滴
添加ごとに緩やかに攪拌する。混合物を2.5時間室温に
放置した後、25mgの亜硫酸ナトリウムを0.5mgの水に溶
解したものを添加して反応を止する。結合体を、pH7.5
の150mM塩化ナトリウム/10mMリン酸緩衝液を用いて４℃
で透析し、限外濾過で濃縮する。
リン結合体の免疫活性は、グルタルアルデヒドを用いて
調製した結合体の活性よりも高いことを示す試験 B.1 グルタルアルデヒドを用いたLHRH−α−グロブリ
ン結合体の調製 濃度10mg/mlのグルタルアルデヒド溶液2.5mlを、30分
かけて、10mgのLHRHおよび50mgのヒトα−グロブリン
（セルヴァ（Serva）社勢）をpH7.5の0.1Mリン酸緩衝液
5mlに溶解したものに１滴ずつ添加する。この際、１滴
添加ごとに緩やかに攪拌する。混合物を2.5時間室温に
放置した後、25mgの亜硫酸ナトリウムを0.5mgの水に溶
解したものを添加して反応を止する。結合体を、pH7.5
の150mM塩化ナトリウム/10mMリン酸緩衝液を用いて４℃
で透析し、限外濾過で濃縮する。
B.2 等量のLHRH結合体を用いて調製した抗LHRHワクチ
ンのブタでの比較試験 効力は血漿テストステロンが完全に消失した個体数で
示す。（表７） C.ヒトα−グロブリンを用いた結合体はヒト血清アルブ
ミンを用いた結合体よりも強い免疫活性を有することを
示す試験 効力は血漿内のテストステロンが完全に消失した個体
数により示す（表８）。
ンのブタでの比較試験 効力は血漿テストステロンが完全に消失した個体数で
示す。（表７） C.ヒトα−グロブリンを用いた結合体はヒト血清アルブ
ミンを用いた結合体よりも強い免疫活性を有することを
示す試験 効力は血漿内のテストステロンが完全に消失した個体
数により示す（表８）。
D.ヒトα−グロブリンを用いた結合体に相当するウマの
α−グロブリン、IV−１画分を用いた結合体の免疫活性 D.1 カルボジイミドを用いたLHRH−ウマα−グロブリ
ン結合体の調製 実施例A1に記載の方法を繰り返したがヒトアルブミン
をウマのα−グロブリンに代えた（IV−１画分）。
α−グロブリン、IV−１画分を用いた結合体の免疫活性 D.1 カルボジイミドを用いたLHRH−ウマα−グロブリ
ン結合体の調製 実施例A1に記載の方法を繰り返したがヒトアルブミン
をウマのα−グロブリンに代えた（IV−１画分）。
D.2 ヒトまたはウマのαグロブリンに結合させたLHRH
の12μｇを４週間の間隔をおいて２回ラットに皮下投与
した試験 E.本発明の油中水型乳剤が他の乳剤に比べてより高いア
ジュバント活性を有することを示す試験（表10） カルボジイミドを用いたLHRHとヒト−α−グロブリン
との結合体を用いてブタに対して５個所に同じ量だけ経
皮投与する試験を行った。
の12μｇを４週間の間隔をおいて２回ラットに皮下投与
した試験 E.本発明の油中水型乳剤が他の乳剤に比べてより高いア
ジュバント活性を有することを示す試験（表10） カルボジイミドを用いたLHRHとヒト−α−グロブリン
との結合体を用いてブタに対して５個所に同じ量だけ経
皮投与する試験を行った。
試験した乳剤は以下の通り： 油中水型の流動性乳剤（Ｂ） 本発明乳剤（表では製剤Ｃ） 抗原で希釈した市販の乳剤（Ｅ） 結合体で懸濁させた油相（Ｆ） 全ての製剤に対して最終的な抗体投与量は同じにし
た。
た。
また、各乳剤はそれらの製剤に特有な通常の条件下で
製造した。
製造した。
F.組織内アンドロステノンの低下によって測定した肉の
感覚上の品質を向上させるための抗LHRH受動免疫の効果
（表11） G.カルボジイミドでα−グロブリンに結合させたLHRHを
含む油中水型乳剤（第１ワクチン）と、水酸化アルミニ
ウムとサポニンのゲルからなる製剤（第２ワクチン）と
の効力および許容値 これら２種のワクチンをLHRH結合体の量が同じとなる
ように肥大成長期初期と屠殺の18〜21日前とに公知の無
針注射器（Pigjet）を用いて投与した。
感覚上の品質を向上させるための抗LHRH受動免疫の効果
（表11） G.カルボジイミドでα−グロブリンに結合させたLHRHを
含む油中水型乳剤（第１ワクチン）と、水酸化アルミニ
ウムとサポニンのゲルからなる製剤（第２ワクチン）と
の効力および許容値 これら２種のワクチンをLHRH結合体の量が同じとなる
ように肥大成長期初期と屠殺の18〜21日前とに公知の無
針注射器（Pigjet）を用いて投与した。
２回の試験を２段階で行った。第１、３および５群に
は第１段階で、第２および４群には第２段階で行った
（表12、13）。
は第１段階で、第２および４群には第２段階で行った
（表12、13）。
G.1 ワクチン量が同じ場合には経皮投与の投与個所の
増加とともに抗LHRH免疫無効化の効力が大きくなること
を示す試験 G.2 炎症性皮膚反応で判定した使用したワクチンの許
容度 炎症性皮膚反応は投与後に動物に現れる丘疹（各投与
部位に丘疹が生じる）の大きさによって０〜４で判定し
た。各群を以下の判定値で評価した（表13）： 投与後第１週目の平均判定値（Ad.1） 各ワクチンに対する屠殺時の平均判定値（S1） 第４群のワクチンを用いた場合に最も許容度が良かっ
た。
増加とともに抗LHRH免疫無効化の効力が大きくなること
を示す試験 G.2 炎症性皮膚反応で判定した使用したワクチンの許
容度 炎症性皮膚反応は投与後に動物に現れる丘疹（各投与
部位に丘疹が生じる）の大きさによって０〜４で判定し
た。各群を以下の判定値で評価した（表13）： 投与後第１週目の平均判定値（Ad.1） 各ワクチンに対する屠殺時の平均判定値（S1） 第４群のワクチンを用いた場合に最も許容度が良かっ
た。
II.ペプチド（３−10）の利用 A.血漿内テストステロンおよび組織内アンドロステノン
を測定して抗LHRH免疫反応性と生物学的効果とを測定す
る方法 抗LHRH免疫反応はジェフコート達（JEFFCOATE et a
l.,Acto.Endocr.（Copenh.）,1974,75,625−635）の方
法に従って抗体の力価を求めた。
を測定して抗LHRH免疫反応性と生物学的効果とを測定す
る方法 抗LHRH免疫反応はジェフコート達（JEFFCOATE et a
l.,Acto.Endocr.（Copenh.）,1974,75,625−635）の方
法に従って抗体の力価を求めた。
ラベルを受けたペプチドへの結合は、コッポランド達
（COPPOLAND et al.,Endocrinology,1979,104,1504−15
06）の方法に従って各ペプチドをヨウ素−125でラベル
し、血清中のこれらペプチドを前記ジェフコーテ達の方
法に従って測定した。
（COPPOLAND et al.,Endocrinology,1979,104,1504−15
06）の方法に従って各ペプチドをヨウ素−125でラベル
し、血清中のこれらペプチドを前記ジェフコーテ達の方
法に従って測定した。
生物学的効果は、血漿内テストステロンおよび組織内
アンドロステノンの減少度または消失度によって測定し
た。
アンドロステノンの減少度または消失度によって測定し
た。
血漿内テストステロンの定量は放射化したC19−カル
ボキシメチルエーテル−［125I］ヒスタミン（FURUYAMA
S.et al.,Steroids,1972,16,415）を用いてRIA法で血
漿から直接測定した。
ボキシメチルエーテル−［125I］ヒスタミン（FURUYAMA
S.et al.,Steroids,1972,16,415）を用いてRIA法で血
漿から直接測定した。
組織内アンドロステノンの定量は放射化した５α−［
3H］アンドロステノンを用いたRIA法によって、脂肪組
織サンプルに対してクラウスの方法（CLAUS,C.R.Acad.S
ci.,Paris,1974.278,229−302）によって行った。
3H］アンドロステノンを用いたRIA法によって、脂肪組
織サンプルに対してクラウスの方法（CLAUS,C.R.Acad.S
ci.,Paris,1974.278,229−302）によって行った。
B.カルボジイミドを用いたヒトのα−グロブリンに結合
させたLHRHペプチドまたはSPDPを用いたヒトのα−グロ
ブリンに結合させたその作動薬（Ｄ−Lys6）−LHRHのカ
ルボキシ末端画分に対するブタの免疫反応の優越性 B1.カルボジイミドを用いたLHRH−ヒトα−グロブリン
結合体の調製 この結合体は、2.5％のＮ−エチル−Ｎ′−（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミド（EDC）を含む
0.9％の塩化ナトリウム溶液0.5〜２容積を２〜20mg/ml
の比率でαグロブリン/LHRH混合物を含む0.9％の塩化ナ
トリウム溶液１容積に添加し、攪拌後、混合物を一夜放
置し、ゲル浸透クロマトグラフィーで精製して調製する
のが好ましい。
させたLHRHペプチドまたはSPDPを用いたヒトのα−グロ
ブリンに結合させたその作動薬（Ｄ−Lys6）−LHRHのカ
ルボキシ末端画分に対するブタの免疫反応の優越性 B1.カルボジイミドを用いたLHRH−ヒトα−グロブリン
結合体の調製 この結合体は、2.5％のＮ−エチル−Ｎ′−（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミド（EDC）を含む
0.9％の塩化ナトリウム溶液0.5〜２容積を２〜20mg/ml
の比率でαグロブリン/LHRH混合物を含む0.9％の塩化ナ
トリウム溶液１容積に添加し、攪拌後、混合物を一夜放
置し、ゲル浸透クロマトグラフィーで精製して調製する
のが好ましい。
B2.SPDPを用いた［（Ｄ−Lys6）−LHRH］−ヒトα−グ
ロブリン結合体の調製 ［（Ｄ−Lys6）−LHRH］−ヒトα−グロブリン結合体
の調製は以下の３段階で行う：｛Ｎ−［３−（２−ピリ
ジルジチオ）プロパノイル］−Ｄ−Lys6｝−LHRHの調
製、Ｎ−（３−メルカプトプロパノイル）−ヒトα−グ
ロブリンの調製およびカップリング。
ロブリン結合体の調製 ［（Ｄ−Lys6）−LHRH］−ヒトα−グロブリン結合体
の調製は以下の３段階で行う：｛Ｎ−［３−（２−ピリ
ジルジチオ）プロパノイル］−Ｄ−Lys6｝−LHRHの調
製、Ｎ−（３−メルカプトプロパノイル）−ヒトα−グ
ロブリンの調製およびカップリング。
｛Ｎ−［３−（２−ピリジルジチオ）プロパノイル］
−Ｄ−Lys6｝−LHRHは、過剰なSPDPとLHRHとを水溶液中
で反応させ（Ｄ−Lys6−LHRH1molに対してSPDPを6mo
l）、次いで一夜４℃に放置した後、遠心分離して生成
物を得る。それを8Mの尿素に溶かし、溶液中の２−ピリ
ジルジチオ基を検定する。
−Ｄ−Lys6｝−LHRHは、過剰なSPDPとLHRHとを水溶液中
で反応させ（Ｄ−Lys6−LHRH1molに対してSPDPを6mo
l）、次いで一夜４℃に放置した後、遠心分離して生成
物を得る。それを8Mの尿素に溶かし、溶液中の２−ピリ
ジルジチオ基を検定する。
Ｎ−（３−メルカプトプロパノイル）−ヒトα−グロ
ブリンは、100mlの0.1Mリン酸緩衝液に溶解した0.6gの
ヒトα−グロブリンに0.2mmolのSPDPを反応させ、４℃
で一夜接触させた後、ジチオスレイトールと反応させて
pH6に酸性化し、ゲル濾過クロマトグラフィーで精製す
る。チオールおよび蛋白の収率を検定し、平均置換度を
求める。
ブリンは、100mlの0.1Mリン酸緩衝液に溶解した0.6gの
ヒトα−グロブリンに0.2mmolのSPDPを反応させ、４℃
で一夜接触させた後、ジチオスレイトールと反応させて
pH6に酸性化し、ゲル濾過クロマトグラフィーで精製す
る。チオールおよび蛋白の収率を検定し、平均置換度を
求める。
カップリングはチオールグループ1.25に対して２−ピ
リジルジチオグループを１にして行う。pH7〜7.5にし、
１時間後に遊離した２−ピリジンエチオンを定量して収
率を求める。
リジルジチオグループを１にして行う。pH7〜7.5にし、
１時間後に遊離した２−ピリジンエチオンを定量して収
率を求める。
この値から平均置換度を求める。最後に、結合体をク
ロマトグラフィーで精製し、限外濾過で濃縮する。カッ
プリング後の（Ｄ−Lys6）−LHRHの最終的な収率は45〜
50％程度になる。
ロマトグラフィーで精製し、限外濾過で濃縮する。カッ
プリング後の（Ｄ−Lys6）−LHRHの最終的な収率は45〜
50％程度になる。
B3.A1およびA2に記載の条件下で結合させたLHRHペプチ
ドのカルボキシ末端画分に対するオスブタでの免疫反応
の優越性を抗LHRHおよび抗（Ｄ−Lys6）−LHRH血清によ
る２種類のラベルされたLHRH断片の固定度を比較して決
定する方法 上記２種類の断片としてLHRH（３−10）（アミノ末端
部位を削除したLHRH）と、遊離酸の形のLHRH（１−10）
（LHRHのカルボキシ末端部位のアミド部位を削除したも
の）とを用いる。これらの断片はそれぞれカルボキシ末
端画分およびアミノ末端画分を特に認識する。
ドのカルボキシ末端画分に対するオスブタでの免疫反応
の優越性を抗LHRHおよび抗（Ｄ−Lys6）−LHRH血清によ
る２種類のラベルされたLHRH断片の固定度を比較して決
定する方法 上記２種類の断片としてLHRH（３−10）（アミノ末端
部位を削除したLHRH）と、遊離酸の形のLHRH（１−10）
（LHRHのカルボキシ末端部位のアミド部位を削除したも
の）とを用いる。これらの断片はそれぞれカルボキシ末
端画分およびアミノ末端画分を特に認識する。
ペプチドのカルボキシ末端画分に対する反応はいずれ
の結合体で免疫した固体に対しても全て共通である（68
/68）。（Ｄ−Lys6）−LHRH結合体で免疫した10固体か
ら得た10血清の中の３つと、LHRH結合体で免疫した68血
清の中の10つとがカルボキシ末端画分のみに結合した。
その他の固体ではカルボキシ末端画分に向う傾向の強い
混合反応を示した。
の結合体で免疫した固体に対しても全て共通である（68
/68）。（Ｄ−Lys6）−LHRH結合体で免疫した10固体か
ら得た10血清の中の３つと、LHRH結合体で免疫した68血
清の中の10つとがカルボキシ末端画分のみに結合した。
その他の固体ではカルボキシ末端画分に向う傾向の強い
混合反応を示した。
アミノ末端画分に対する反応は全体に共通ではない
（55/68）。LHRHの遊離酸画分のみに結合した血清はな
かった。
（55/68）。LHRHの遊離酸画分のみに結合した血清はな
かった。
C.カルボジイミドで調製したLHRH（３−10）−ウマα−
グロブリンIV−４とLHRH（３−10）オバルブミン結合体
を用いた抗LHRH能動免疫試験 C1.カルボジイミドを用いたLHRH（３−10）−ウマα−
グロブリンIV−４結合体の調製 85mgのLHRH（３−10）と、170mgのウマα−グロブリ
ンIV−４とを0.1M塩化ナトリウム/0.1M ２−（Ｎ−モ
ルフォリノ）エタンスルホン酸緩衝液12.8mlに溶解す
る。上記溶液17mlに溶解した212mgのＮ−エチル−Ｎ′
−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸
塩を添加する。直後に1Nの水酸化ナトリウムを1.3ml添
加してpHを6.0に調節する。
グロブリンIV−４とLHRH（３−10）オバルブミン結合体
を用いた抗LHRH能動免疫試験 C1.カルボジイミドを用いたLHRH（３−10）−ウマα−
グロブリンIV−４結合体の調製 85mgのLHRH（３−10）と、170mgのウマα−グロブリ
ンIV−４とを0.1M塩化ナトリウム/0.1M ２−（Ｎ−モ
ルフォリノ）エタンスルホン酸緩衝液12.8mlに溶解す
る。上記溶液17mlに溶解した212mgのＮ−エチル−Ｎ′
−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸
塩を添加する。直後に1Nの水酸化ナトリウムを1.3ml添
加してpHを6.0に調節する。
攪拌後、混合物を室温に16時間放置し、結合体をゲル
浸透クロマトグラフィーで精製して結合体を非結合LHRH
から分離する。後者の量を測定し、その差からカップリ
ングしたLHRHの量を求める。
浸透クロマトグラフィーで精製して結合体を非結合LHRH
から分離する。後者の量を測定し、その差からカップリ
ングしたLHRHの量を求める。
C2.カルボジイミドと結合したLHRH（３−10）−オバル
ブミンの調製 LHRH（３−10）60mgと、オバルブミン120mgとを0.1M
塩化ナトリウム/0.1M ２−（Ｎ−モルフォリノ）エタ
ンスルホン酸緩衝液9mlに溶解する。同じ緩衝液12mlに
溶解した150mgのＮ−エチル−Ｎ′−（３−ジメチルア
ミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を添加する。1Nの
水酸化ナトリウム（約1.9ml）を添加してpH7.0に調節す
る。混合物を室温に一夜放置し、遠心分離で清澄化す
る。上清をセファデックスゲルを用いてクロマトグラフ
ィーにかけて未反応のLHRHと最初のカルボジイミド由来
の生成物とから結合体を分離する。結合していないLHRH
（３−10）を測定することによってLHRH（３−10）のカ
ップリング収率が求められる。
ブミンの調製 LHRH（３−10）60mgと、オバルブミン120mgとを0.1M
塩化ナトリウム/0.1M ２−（Ｎ−モルフォリノ）エタ
ンスルホン酸緩衝液9mlに溶解する。同じ緩衝液12mlに
溶解した150mgのＮ−エチル−Ｎ′−（３−ジメチルア
ミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を添加する。1Nの
水酸化ナトリウム（約1.9ml）を添加してpH7.0に調節す
る。混合物を室温に一夜放置し、遠心分離で清澄化す
る。上清をセファデックスゲルを用いてクロマトグラフ
ィーにかけて未反応のLHRHと最初のカルボジイミド由来
の生成物とから結合体を分離する。結合していないLHRH
（３−10）を測定することによってLHRH（３−10）のカ
ップリング収率が求められる。
C3.カルボジイミドを用いたLHRH（３−10）断片とウマ
のα−グロブリンIV−４との結合体から調製した抗LHRH
ワクチンに対する免疫反応、生物学的効力、許容度LHRH
（３−10）の結合体を油中水型乳剤に添加した製剤（第
１ワクチン）と、水酸化アルミニウムとサポニンのゲル
に添加した製剤（第２ワクチン）とを投与量を0.4mlに
して６頭のオスブタにそれぞれ肥大成長期初期および屠
殺の17日前に経皮投与した。投与は公知の無針注射器
（ピッグジェット）を用いて行った。投与は0.2mlずつ
２回に分けて１回の投与を５箇所に分けて投与した。
のα−グロブリンIV−４との結合体から調製した抗LHRH
ワクチンに対する免疫反応、生物学的効力、許容度LHRH
（３−10）の結合体を油中水型乳剤に添加した製剤（第
１ワクチン）と、水酸化アルミニウムとサポニンのゲル
に添加した製剤（第２ワクチン）とを投与量を0.4mlに
して６頭のオスブタにそれぞれ肥大成長期初期および屠
殺の17日前に経皮投与した。投与は公知の無針注射器
（ピッグジェット）を用いて行った。投与は0.2mlずつ
２回に分けて１回の投与を５箇所に分けて投与した。
免疫反応は２度目のワクチン接種の10日後に最大とな
る。個々の抗体力価（ヨウ素−125が50％結合を示す希
釈度の逆数）はそれぞれ以下の通り： 10日後 280 660 2,700 3,200 4,600 13,000 16日後 290 400 2,000 2,400 3,100 8,600 この免疫反応から、６頭の固体全体で２回目の投与か
ら10日目から血漿テストステロンが無くなるという生物
学的効果が得られることが分る。テストステロンが消失
するとともに、組織内アンドステノンも同様に消失す
る。
る。個々の抗体力価（ヨウ素−125が50％結合を示す希
釈度の逆数）はそれぞれ以下の通り： 10日後 280 660 2,700 3,200 4,600 13,000 16日後 290 400 2,000 2,400 3,100 8,600 この免疫反応から、６頭の固体全体で２回目の投与か
ら10日目から血漿テストステロンが無くなるという生物
学的効果が得られることが分る。テストステロンが消失
するとともに、組織内アンドステノンも同様に消失す
る。
ワクチンに対する許容度は炎症性皮膚反応で判定す
る。すなわち、投与後にワクチンを打った位置に現れる
丘疹の寸法で段階を付けて評価する。この局部的な炎症
反応は２度目のワクチン投与後10日目に完全に消える。
る。すなわち、投与後にワクチンを打った位置に現れる
丘疹の寸法で段階を付けて評価する。この局部的な炎症
反応は２度目のワクチン投与後10日目に完全に消える。
フロントページの続き (72)発明者 シューヴェ，クレール フランス国 69007 リヨン クール ガンベッタ 68 (72)発明者 ボノウ，ミシェル，ベルナール フランス国 35160 モンフォール （番地なし） “ル プティ ブロムド ゥ" (56)参考文献 特表 平１−500900（ＪＰ，Ａ) 米国特許3780014（ＵＳ，Ａ) 欧州特許出願公開181236（ＥＰ，Ａ ２) 国際公開88／5308（ＷＯ，Ａ１) Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，（1982) Ｖｏｌ．242，ｐ．201−205 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 7/00 - 7/23 A01K 67/00 A61K 39/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (35)
- 【請求項１】動物を飼育し、抗LHRHワクチンを用いて能
動免疫して、去勢していないオスの家畜の肉の感覚上の
品質、特に臭い、味および柔らかさを改善する方法にお
いて、 動物を飼育する期間中またはその前に、生殖腺ステロイ
ドの分泌にほとんど影響を与えないか、測定不可能な影
響しかを与えないような弱い免疫反応を起す抗LHRHワク
チンを一回だけ投与し、且つ、屠殺前に、ステロイドの
分泌を停止または大幅に低下させる抗LHRH免疫を誘導す
る抗LHRHワクチンを投与することによって、屠殺時まで
雄性に起因する利点を実質的に維持することを特徴とす
る方法。 - 【請求項２】最初に投与するワクチンおよび屠殺する少
し前に再投与するワクチンを乳剤または水性アジュバン
ト添加ワクチンの中から選択する請求項１に記載の方
法。 - 【請求項３】最初に投与する抗LHRHワクチンを乳剤にす
る請求項１または２に記載の方法。 - 【請求項４】屠殺する少し前に再投与する抗LHRHワクチ
ンを水性アジュバント添加ワクチンにする請求項１から
３のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項５】水性アジュバントとして水酸化アルミニウ
ムゲルおよび／またはサポニンを使用する請求項４に記
載の方法。 - 【請求項６】屠殺の15〜21日前に水性アジュバントと共
にワクチンを投与する請求項４または５に記載の方法。 - 【請求項７】牛および羊に対して屠殺前に乳剤状のアジ
ュバントと共に抗LHRHワクチンを投与する請求項１〜３
のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項８】屠殺の１〜２か月前に乳剤状のワクチンを
投与する請求項７に記載の方法。 - 【請求項９】１回目の投与の４週間から数ヶ月後に乳剤
状のワクチンを投与する請求項７または８に記載の方
法。 - 【請求項１０】乳剤状のワクチンが油中水型乳剤状であ
る請求項２、３および７〜９のいずれか一項に記載の方
法。 - 【請求項１１】油中水型乳剤が高純度の鉱物油と非イオ
ン性の表面活性剤との混合物で作られている請求項10に
記載の方法。 - 【請求項１２】LHRHペプチドからなる免疫有効成分を含
むワクチンを投与する請求項１〜11のいずれか一項に記
載の方法。 - 【請求項１３】下記の群の中から選択される免疫原性キ
ャリアー蛋白： （１）ウシまたはヒトの血清アルブミン （２）チログロブリン （３）オバルブミン （４）アナトキシン、特に破傷風アナトキシン （５）ヒトまたはウマグロブリン とカップリングさせた下記： （ａ）LHRH全体または変性したLHRH （ｂ）未変性または変性したLHRHペプチド断片または （ｃ）LHRH作動薬 で構成される抗LHRH免疫結合体を投与する請求項１〜12
のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１４】抗LHRH免疫結合体がウマのα−グロブリ
ン、特にIV−１および／またはIV−４画分とカップリン
グさせたLHRHから成る請求項13に記載の方法。 - 【請求項１５】抗LHRH免疫結合体がウマのα−グロブリ
ン、特にIV−１および／またはIV−４画分またはオバル
ブミンとカップリングさせたLHRH（３−10）から成る請
求項13に記載の方法。 - 【請求項１６】LHRH/LHRH（３−10）と免疫原性キャリ
アー蛋白とがカルボジイミドでカップリングされている
請求項14または15に記載の方法。 - 【請求項１７】屠殺の数日前に抗LHRH血清または高度免
疫血漿を動物に投与する請求項１に記載の方法。 - 【請求項１８】屠殺の数日前に抗LHRHモノクロナル抗体
を動物に投与する請求項１に記載の方法。 - 【請求項１９】屠殺の５〜15日前に皮下注射または筋肉
内注射によって投与する請求項16または17に記載の方
法。 - 【請求項２０】無針注射器を用いた加圧ジェットによっ
て、好ましくは数個所に、経皮投与する請求項１〜19の
いずれか一項に記載の方法。 - 【請求項２１】動物を飼育する期間の前に最初のワクチ
ンを投与する請求項１〜20のいずれか一項に記載の方
法。 - 【請求項２２】下記の（１）および（２）からなること
を特徴とする、去勢していないオスの家畜の肉の感覚上
の品質を改善するための抗LHRHワクチンキット：、 （ａ）生殖腺ステロイドの分泌にほとんど影響を与えな
いか、測定不可能な影響しかを与えないような弱い免疫
反応を起して動物の雄性を発達させるために動物を飼育
する期間中またはその前に最初に投与される抗LHRHワク
チン、 （ｂ）ステロイドの分泌を停止または大幅に低下させる
抗LHRH免疫を誘導する、（ａ）のワクチンの後で且つ屠
殺の少し前に投与される抗LHRHワクチン。 - 【請求項２３】ワクチンが免疫原性キャリアー蛋白とLH
RHペプチドとの結合体を主成分として含む請求項22に記
載のキット。 - 【請求項２４】LHRHペプチドが下記の（ａ）〜（ｃ）の
群の中から選択される請求項23に記載のキット： （ａ）LHRH全体または変性したLHRH （ｂ）未変性または変性したLHRHペプチド断片 （ｃ）LHRH作動薬 - 【請求項２５】免疫原性キャリアー蛋白が下記の（１）
〜（８）の群の中から選択される請求項23に記載のキッ
ト： （１）血清アルブミン、 （２）チログロブリン、 （３）オバルブミン、 （４）アナトキシン、 （５）破傷風アナトキシン、 （６）ウマグロブリン、 （７）ヒトグロブリン、 （８）αグロブリン。 - 【請求項２６】最初に投与する抗LHRHワクチンを乳剤に
する請求項22〜25のいずれか一項に記載のキット。 - 【請求項２７】屠殺する少し前に再投与する抗LHRHワク
チンを乳剤にする請求項22〜26のいずれか一項に記載の
キット。 - 【請求項２８】乳剤状のワクチンが油中水型乳剤状であ
る請求項26または27に記載のキット。 - 【請求項２９】乳剤状のワクチンが鉱物油と非イオン性
の表面活性剤との混合物で作られている請求項26〜28の
いずれか一項に記載のキット。 - 【請求項３０】屠殺の少し前に再投与する抗LHRHワクチ
ンを水性アジュバント添加ワクチンにする請求項22〜26
のいずれか一項に記載のキット。 - 【請求項３１】水性アジュバントが水酸化アルミニウム
ゲルおよび／またはサポニンである請求項30に記載のキ
ット。 - 【請求項３２】屠殺の少し前に再投与する抗LHRHワクチ
ンを水性アジュバント添加ワクチンにする豚用の請求項
30に記載のキット。 - 【請求項３３】屠殺の少し前に再投与する抗LHRHワクチ
ンを乳剤状のワクチンにする牛および羊用の請求項22〜
29のいずれか一項に記載のキット。 - 【請求項３４】各ワクチンが同数だけ単一の包装中に収
容されている請求項22〜33のいずれか一項に記載のキッ
ト。 - 【請求項３５】抗LHRHワクチンがLHRHペプチドを含む免
疫有効成分からなる請求項22か、請求項22と請求項26〜
34のいずれか一項とを組み合わせたキット。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9102513A FR2673377B1 (fr) | 1991-03-01 | 1991-03-01 | Procede pour ameliorer les qualites organoleptiques des animaux domestiques non castres. |
| FR91/02513 | 1991-03-01 | ||
| FR91/15289 | 1991-12-10 | ||
| FR9115289A FR2685333B1 (fr) | 1991-12-10 | 1991-12-10 | Nouveau peptide notamment pour la realisation de conjugues immunogenes anti-lhrh, vaccins les incorporant et ensemble de vaccination y relatif. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05506459A JPH05506459A (ja) | 1993-09-22 |
| JP3177246B2 true JP3177246B2 (ja) | 2001-06-18 |
Family
ID=26228546
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP50689392A Expired - Lifetime JP3177246B2 (ja) | 1991-03-01 | 1992-02-26 | 未去勢のオスの家畜に対する抗ｌｈｒｈ免疫方法と、そのためのペプチド |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5573767A (ja) |
| EP (1) | EP0501882B1 (ja) |
| JP (1) | JP3177246B2 (ja) |
| KR (1) | KR100257214B1 (ja) |
| AT (1) | ATE194625T1 (ja) |
| CA (1) | CA2081660C (ja) |
| CZ (1) | CZ287775B6 (ja) |
| DE (1) | DE69231232T2 (ja) |
| DK (1) | DK0501882T3 (ja) |
| ES (1) | ES2149166T3 (ja) |
| GR (1) | GR3034509T3 (ja) |
| HU (1) | HU214453B (ja) |
| IE (1) | IE920648A1 (ja) |
| PL (1) | PL296623A1 (ja) |
| PT (1) | PT501882E (ja) |
| SK (1) | SK282056B6 (ja) |
| TW (1) | TW221674B (ja) |
| UA (1) | UA40570C2 (ja) |
| WO (1) | WO1992015330A1 (ja) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5688506A (en) * | 1994-01-27 | 1997-11-18 | Aphton Corp. | Immunogens against gonadotropin releasing hormone |
| US6761890B1 (en) * | 1995-06-07 | 2004-07-13 | Pepscan Systems B.V. | Peptide, immunogenic composition and vaccine or medical preparation, a method to immunize animals against the hormone LHRH, and analogs of the LHRH tandem repeat peptide and their use as vaccine |
| CU22627A1 (es) * | 1996-12-17 | 2000-12-22 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Preparado vacunal para la inmuno-castración reversible de mamíferos |
| AUPO776897A0 (en) * | 1997-07-09 | 1997-07-31 | Csl Limited | A method of achieving production gains in livestock and agents useful for same |
| US6524592B2 (en) * | 1997-10-17 | 2003-02-25 | American Home Products Corporation | Veterinary vaccines |
| US20080050367A1 (en) | 1998-04-07 | 2008-02-28 | Guriq Basi | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| US7790856B2 (en) | 1998-04-07 | 2010-09-07 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| TWI239847B (en) * | 1997-12-02 | 2005-09-21 | Elan Pharm Inc | N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease |
| US7964192B1 (en) | 1997-12-02 | 2011-06-21 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Prevention and treatment of amyloidgenic disease |
| CA2327262A1 (en) * | 1998-05-05 | 1999-11-11 | Biostar Inc. | Methods of raising animals for meat production |
| ATE285806T1 (de) | 1999-10-11 | 2005-01-15 | Felton International Inc | Universelle antiinfektionsschutzvorrichtung für nadellose injektoren |
| US6770054B1 (en) | 1999-11-23 | 2004-08-03 | Felton International, Inc. | Injector assembly with driving means and locking means |
| US7887506B1 (en) | 1999-11-23 | 2011-02-15 | Pulse Needlefree Systems, Inc. | Safety mechanism to prevent accidental patient injection and methods of same |
| MY139983A (en) | 2002-03-12 | 2009-11-30 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| WO2003089590A2 (en) * | 2002-04-16 | 2003-10-30 | Vaxin, Inc. | TRANSIENT AND/OR PERMANENT MODIFICATION OF SEXUAL BEHAVIOR AND/OR FERTILITY USING RECOMBINANT CHIMERIC GnRH |
| EP2161037A3 (en) | 2003-04-22 | 2010-05-26 | Ipsen Pharma | Camptothecin-Somatostatin conjugates |
| JP2005098877A (ja) * | 2003-09-25 | 2005-04-14 | Hitachi Software Eng Co Ltd | 抗体検出体、その製造方法、及び抗体検出方法 |
| KR20080004445A (ko) * | 2004-09-10 | 2008-01-09 | 더 카운실 오브 더 퀸스랜드 인스티튜트 오브 메디칼 리서어치 | 절단형 ｌｈｒｈ 포뮬레이션 |
| AR052051A1 (es) | 2004-12-15 | 2007-02-28 | Neuralab Ltd | Anticuerpos ab humanizados usados en mejorar la cognicion |
| KR100701550B1 (ko) * | 2005-05-24 | 2007-03-30 | 한국과학기술연구원 | 베어링리스 스텝모터 |
| US8784810B2 (en) | 2006-04-18 | 2014-07-22 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of amyloidogenic diseases |
| JP5752343B2 (ja) * | 2007-01-24 | 2015-07-22 | 株式会社ココカラファインネクスト | Ｓ／ｏ型経皮免疫剤 |
| US8003097B2 (en) | 2007-04-18 | 2011-08-23 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of cerebral amyloid angiopathy |
| JP5889529B2 (ja) | 2007-07-27 | 2016-03-22 | ヤンセン・サイエンシズ・アイルランド・ユーシー | アミロイド原性疾患の処置 |
| JO3076B1 (ar) | 2007-10-17 | 2017-03-15 | Janssen Alzheimer Immunotherap | نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe |
| US9067981B1 (en) | 2008-10-30 | 2015-06-30 | Janssen Sciences Ireland Uc | Hybrid amyloid-beta antibodies |
| US10920242B2 (en) | 2011-02-25 | 2021-02-16 | Recombinetics, Inc. | Non-meiotic allele introgression |
| ES2674439T3 (es) | 2011-06-01 | 2018-06-29 | Merial, Inc. | Administración sin aguja de vacunas contra el VSRRP |
| KR20150100651A (ko) * | 2012-10-30 | 2015-09-02 | 리컴비네틱스 인코포레이티드 | 동물의 성적 성숙 조절 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4024121A (en) * | 1976-01-27 | 1977-05-17 | Schally Andrew Victor | (Pyro)-Glu-His-Trp-D-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHR and intermediates |
| US4018726A (en) * | 1975-06-12 | 1977-04-19 | Andrew Victor Schally | [D-Phe6 ]-LH-RH and intermediates therefor |
| US4010125A (en) * | 1975-06-12 | 1977-03-01 | Schally Andrew Victor | [D-Trp6 ]-LH-RH and intermediates therefor |
| US4770874A (en) * | 1983-08-22 | 1988-09-13 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| US4676981A (en) * | 1984-02-07 | 1987-06-30 | University Of Saskatchewan | Monoclonal antibodies against GnRH |
| US4608251A (en) * | 1984-11-09 | 1986-08-26 | Pitman-Moore, Inc. | LHRH analogues useful in stimulating anti-LHRH antibodies and vaccines containing such analogues |
| US4556555A (en) * | 1985-01-25 | 1985-12-03 | North Carolina State University | Process for the immunological neutering of animals |
| IL78775A (en) * | 1985-05-15 | 1992-06-21 | Biotech Australia Pty Ltd | Oral vaccines |
| NZ220932A (en) * | 1986-07-03 | 1990-05-28 | Victoria State | Composition comprising an antigenic substance, such as lhrh, conjugated to at least two different carriers and method of immunological castration and spaying |
| JPH01500663A (ja) * | 1986-08-18 | 1989-03-09 | バンジ・（オーストラリア）・プロプライアタリー・リミテッド | 動物の生殖機能の調節 |
| AU602187B2 (en) * | 1987-01-14 | 1990-10-04 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Anti-reproductive hormone |
| GB8713240D0 (en) * | 1987-06-05 | 1987-07-08 | Proteus Biotech Ltd | Hormones |
| US4975420A (en) * | 1987-09-30 | 1990-12-04 | University Of Saskatchewan | Agents and procedures for provoking an immune response to GnRH and immuno sterilizing mammals |
| US5036047A (en) * | 1988-09-29 | 1991-07-30 | Pitman-Moore, Inc. | Method and composition for preventing conception |
| NL8900726A (nl) * | 1989-03-23 | 1990-10-16 | Stichting Centr Diergeneeskund | Peptide, immunogene samenstelling en vaccin- of geneesmiddelpreparaat; werkwijze voor het immuniseren van een zoogdier tegen lhrh, en werkwijze voor het verbeteren van de vleeskwaliteit van varkens. |
| US5484592A (en) * | 1989-03-23 | 1996-01-16 | Stitching Centraal Diergeneeskundig Instituut | Peptide, immunogenic composition and vaccine or medicinal preparation: a method of immunising a mammal against LHRH, and a method of improving the meat quality of pigs |
-
1992
- 1992-02-26 PT PT92400496T patent/PT501882E/pt unknown
- 1992-02-26 DK DK92400496T patent/DK0501882T3/da active
- 1992-02-26 CA CA002081660A patent/CA2081660C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-02-26 KR KR1019920702707A patent/KR100257214B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-02-26 WO PCT/FR1992/000176 patent/WO1992015330A1/fr active IP Right Grant
- 1992-02-26 PL PL29662392A patent/PL296623A1/xx unknown
- 1992-02-26 DE DE69231232T patent/DE69231232T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-02-26 HU HU9203419A patent/HU214453B/hu unknown
- 1992-02-26 ES ES92400496T patent/ES2149166T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-02-26 EP EP92400496A patent/EP0501882B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1992-02-26 UA UA93004193A patent/UA40570C2/uk unknown
- 1992-02-26 AT AT92400496T patent/ATE194625T1/de active
- 1992-02-26 SK SK3280-92A patent/SK282056B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-02-26 JP JP50689392A patent/JP3177246B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-02-28 IE IE064892A patent/IE920648A1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-03-05 TW TW081101687A patent/TW221674B/zh active
- 1992-10-30 CZ CZ19923280A patent/CZ287775B6/cs not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-11-17 US US08/343,883 patent/US5573767A/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-09-28 GR GR20000402199T patent/GR3034509T3/el unknown
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，（１９８２）Ｖｏｌ．２４２，ｐ．２０１−２０５ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TW221674B (ja) | 1994-03-11 |
| HU9203419D0 (en) | 1993-01-28 |
| CZ287775B6 (cs) | 2001-01-17 |
| ES2149166T3 (es) | 2000-11-01 |
| EP0501882B1 (fr) | 2000-07-12 |
| GR3034509T3 (en) | 2000-12-29 |
| PL296623A1 (en) | 1993-09-20 |
| JPH05506459A (ja) | 1993-09-22 |
| EP0501882A2 (fr) | 1992-09-02 |
| CA2081660A1 (en) | 1992-09-02 |
| UA40570C2 (uk) | 2001-08-15 |
| US5573767A (en) | 1996-11-12 |
| SK328092A3 (en) | 1995-01-05 |
| PT501882E (pt) | 2000-12-29 |
| DK0501882T3 (da) | 2000-12-11 |
| DE69231232D1 (de) | 2000-08-17 |
| EP0501882A3 (en) | 1992-10-14 |
| CA2081660C (en) | 2001-05-01 |
| HUT63338A (en) | 1993-08-30 |
| WO1992015330A1 (fr) | 1992-09-17 |
| DE69231232T2 (de) | 2001-01-04 |
| KR100257214B1 (ko) | 2000-05-15 |
| ATE194625T1 (de) | 2000-07-15 |
| CZ328092A3 (en) | 1993-10-13 |
| IE920648A1 (en) | 1992-09-09 |
| SK282056B6 (sk) | 2001-10-08 |
| HU214453B (hu) | 1998-03-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3177246B2 (ja) | 未去勢のオスの家畜に対する抗ｌｈｒｈ免疫方法と、そのためのペプチド | |
| IE83361B1 (en) | A method for improving the organoleptic qualities of meat | |
| JP5231378B2 (ja) | 免疫原性ｌｈｒｈ組成物およびそれに関する方法 | |
| EP0464124B1 (en) | A peptide, immunogenic composition and vaccine or medicinal preparation; a method of immunising a mammal against lhrh, and a method of improving the meat quality of pigs | |
| RU2147307C1 (ru) | Улучшенный пептид, иммуногенная композиция и вакцина с его использованием, способ иммунизации животных против гормона лгвг | |
| AU622858B2 (en) | Biologically active molecules | |
| US5885966A (en) | Peptide, immunogenic composition and vaccine or medical preparation, a method to immunise animals against the hormone LHRH, and analogs of the LHRH tandem repeat peptide and their use as vaccine | |
| EP0274496A1 (en) | Composition and method for immunological castration and spaying | |
| JPH04503663A (ja) | 避妊方法とその組成物 | |
| Ayalew | A review on the effect of immunocastration against gonadal physiology and boar taint. | |
| Turkstra et al. | Active immunisation against gonadotropin-releasing hormone, an active tool to block the fertility axis in mammals | |
| CZ289521B6 (cs) | Anti-LHRH vakcinační souprava pro výrobu masa se zlepąenými organoleptickými vlastnostmi, získávaného z nevykastrovaných samců domácích zvířat | |
| NZ196126A (en) | Increasing ovulation rate in female cattle | |
| EP0072880B1 (en) | A composition for use in the control of ovulation of female bovines | |
| FR2685333A1 (fr) | Nouveau peptide notamment pour la realisation de conjugues immunogenes anti-lhrh, vaccins les incorporant et ensemble de vaccination y relatif. | |
| NZ337256A (en) | Pharmaceutical carrier derived from deep sea shark oil and uses thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090406 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100406 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110406 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120406 Year of fee payment: 11 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120406 Year of fee payment: 11 |