JP3124427B2 - 光学活性な４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールの製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、式（１）又は式（２）
で示されるような４，４−ジアルコキシ−２−ブタノー
ルの光学活性体の製造方法に関する。

【０００２】

【化６】 さらに詳しくは、式（１）又は式（２）で示される４，
４−ジアルコキシ−２−ブタノールのエナンチオマー混
合物に微生物を作用させ、式（１）又は式（２）で示さ
れる４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールの光学異性
体の一方を、他方の光学異性体よりも多く残存させるこ
とを特徴とする光学活性な４，４−ジアルコキシ−２−
ブタノールの製造方法に関する。

【０００３】なお、本発明で対象にしている式（１）又
は式（２）で示される光学活性な４，４−ジアルコキシ
−２−ブタノールの不斉炭素とは、式（１）又は式
（２）で示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタノー
ルの２位の炭素を意味する。

【０００４】また、式（１）又は式（２）で示される化
合物には、Ｒ¹ 、Ｒ² が異なる場合や、Ａが非対称であ
る化合物も含まれ、この場合はアセタール炭素も不斉炭
素になるが、このアセタール炭素の立体は特に問題にし
ない。

【０００５】

【従来の技術】式（１）で示される４，４−ジアルコキ
シ−２−ブタノールの光学活性体は抗生物質をはじめと
する種々の医薬品の重要な合成中間体である。従来、式
（１）又は式（２）で示される４，４−ジアルコキシ−
２−ブタノールの光学活性体を製造する方法としては、
４，４−ジメトキシ−２−ブタノンをアルコールデヒド
ロゲナーゼにより選択的に還元して、（Ｓ）−４，４−
ジメトキシ−２−ブタノールを得る方法（J.Am.Chem.So
c.,107,4028(1985))、（Ｓ）−α−メチル−１，３−ジ
チアン−２−エタノールにＰｂＯ₂ 、ＢＦ₃ 存在下にメ
タノールを反応させて、（Ｓ）−４，４−ジメトキシ−
２−ブタノールを得る方法（TetrahedronLett.,24,287
(1983)）、（Ｒ）−３−（エトキシエトキシ）ブタナー
ルにピリジニウムトシレートの存在下でエチレングリコ
ールを反応させて、（Ｒ）−α−メチル−１，３−ジオ
キソラン−２−エタノールを得る方法（Tetrahedron Le
tt.,28,6587(1987) ）や、ラセミの酢酸２−（１，３−
ジオキソラン−２−イル）−１−メチルエチルエステル
または酪酸２−（１，３−ジオキソラン−２−イル）−
１−メチルエチルエステルをリパーゼ存在下で、選択的
に加水分解させて、（Ｓ）−α−メチル−１，３−ジオ
キサン−２−エタノールまたは（Ｒ）−α−メチル−
１，３−ジオキサン−２−エタノールを得る方法（Tetr
ahedron,45,869(1989)やJ.Org.Chem.,56,2656(1991))等
が知られている。

【０００６】しかし、アルコールデヒドロゲナーゼによ
り選択的に還元する方法は、使用するアルコールデヒド
ロゲナーゼなどの酵素が高価であること、（Ｓ）−α−
メチル−１，３−ジチアン−２−エタノールにＰｂ
Ｏ₂ 、ＢＦ₃ 存在下にメタノールを反応させる方法は、
有害な鉛化合物を使用すること、（Ｒ）−３−（エトキ
シエトキシ）ブタナールをアセタール化する方法は、
（Ｒ）−３−（エトキシエトキシ）ブタナールの合成が
多工程であること、リパーゼ存在下で選択的に加水分解
させる方法は、選択性が低いことなどの欠点がある。

【０００７】また、ラセミの４，４−ジメトキシ−２−
ブタノールにリパーゼ存在下で石油エーテル中、ペンタ
ン酸ビニルを反応させて、カルボン酸エステルである
（Ｒ）−２−ペンタノイルオキシ−４，４−ジメトキシ
ブタンを得る際には、式（１）で示される化合物に含ま
れる（Ｓ）−４，４−ジメトキシ−２−ブタノールが副
生していると考えられる（J.Am.Chem.Soc.,110,7200(19
88））が、使用するリパーゼが高価であること、ペンタ
ン酸ビニル等のエステル化剤が必要であること、選択性
が低いことなどの欠点がある。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】これらの事情により、
経済的に優れ、かつ簡便な手段により光学純度の高い式
（１）又は式（２）で示される光学活性４，４−ジアル
コキシ−２−ブタノールを得る方法の確立が望まれてい
た。

【０００９】本願発明は、経済性に優れ、かつ簡便な手
段により光学純度の高い式（１）又は式（２）で示され
る光学活性４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールを得
る方法に関するものである。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明者らは経済的に優
れ、かつ簡便な方法で、光学純度の高い式（１）又は式
（２）で示される光学活性４，４−ジアルコキシ−２−
ブタノールを得る方法として、式（１）又は式（２）で
示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールのエナ
ンチオマー混合物に微生物を作用させる方法に着目し
た。

【００１１】この目的に適した微生物を検索した結果、
ピキア・オプンティア・バライティー・サーモトレラン
ス（Pichia opuntiae var thermotolerans) 、ピキア・
トレタナ（Pichia toletana)、シュードモナス・ディミ
ヌタ（Pseudomonas diminuta）、TRP-13が属するシュー
ドモナス・エスピー（Pseudomonas sp．）、トリコスポ
ロン・キャピテータム（Trichosporon capitatum）のい
ずれかの種に属する微生物が、式（１）又は式（２）で
示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールのエナ
ンチオマー混合物に作用して対応する（Ｒ）体を残存さ
せること、およびピキア・ファリノサ（Pichia farinos
a ）、シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putid
a）、トリコスポロン・クタネウム（Trichosporon cuta
neum ）のいずれかの種に属する微生物が、式（１）又
は式（２）で示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタ
ノールのエナンチオマー混合物に作用して対応する
（Ｓ）体を残存させることを見出し、本発明を完成した
ものである。

【００１２】具体的には、式（１）又は式（２）で示さ
れる４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールのエナンチ
オマー混合物に作用し、対応する（Ｒ）体を残存させう
る能力を有する菌株としては、ピキア・オプンティア・
バライティー・サーモトレランス（Pichia opuntiae va
r.thermotolerans)IFO10025 、ピキア・トレタナ（Pich
ia toletana)IFO0950 、シュードモナス・ディミヌタ
（Pseudomonas diminuta)IFO12697 、シュードモナス・
エスピー（Pseudomonas sp.)TRP-13、トリコスポロン・
キャピテータム（Trichosporon capitatum）IFO1197 等
を挙げることができる。

【００１３】また、式（１）又は式（２）で示される
４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールのエナンチオマ
ー混合物に作用し、対応する（Ｓ）体を残存させうる能
力を有する菌株としては、ピキア・ファリノサ（Pichia
farinosa)IFO1163 、シュードモナス・プチダ（Pseudo
monas putida)TRP-7、トリコスポロン・クタネウム（Tr
ichosporon cutaneum ）IFO1198 等を挙げることができ
る。

【００１４】これらの微生物は、野生株、変異株、また
は細胞融合もしくは遺伝子操作法などの遺伝的手法によ
り誘導される組み換え株など、いずれの株でも好適に用
いることができる。

【００１５】なお、ＩＦＯ番号の付された微生物は、
（財）発酵研究所（ＩＦＯ）発行のList of Culture 、
第９版、第１巻(1992)に記載されており、該ＩＦＯから
入手することができる。

【００１６】またシュードモナス・プチダ（Pseudomona
s putida)TRP-7、シュードモナス・エスピー（Pseudomo
nas sp.)TRP-13は茨城県の土壌より分離された菌株であ
り、それぞれ微工研条寄第３８８１号（ＦＥＲＭ ＢＰ
−３８８１）、微工研条寄第３８８２号（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−３８８２）として工業技術院生命工学研究所に寄託
されている。以下これらの菌学的性質を示す。

【００１７】

【表１】 シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida)TRP-7 形態 １）細菌の形および大きさ 桿菌０．５〜
０．６μｍ×１．５〜１８．０μｍ ２）運動性 ＋ ３）グラム染色性 − ４）胞子の有無 − ５）鞭毛 極鞭毛、＞１ 生理学的性質 １）オキシダーゼ ＋ ２）カタラーゼ ＋ ３）アミノペプチターゼ ＋ ４）インドールの生成 − ５）ＶＰテスト − ６）硝酸塩の還元 − ７）脱窒反応 − ８）ウレアーゼ ＋ ９）フェニルアラニンデアミナーゼ − １０）シュークロースからレバンの生成 − １１）レシチナーゼ − １２）澱粉の加水分解 − １３）ゼラチンの加水分解 − １４）カゼインの加水分解 − １５）ＤＮＡの加水分解 − １６）Ｔｗｅｅｎ８０の加水分解 ＋ １７）エスクリンの加水分解 − １８）３％ＫＯＨによる溶菌 ＋

【表２】 １９）酸素に対する態度 好気的 ２０）４℃での生育 ＋ ２１）３７℃での生育 − ２２）４１℃での生育 − ２３）ｐＨ５．６での生育 ＋ ２４）Mac-Conkey-Agar 培地での生育 ＋ ２５）SS-Agar 培地での生育 ＋ ２６）Cetrimid-Agar 培地での生育 ＋ ２７）色素の生成 蛍光性 ＋ ピロシアニン − ２８）ＯＦテスト ０ ２９）グルコースからガスの生成 − ３０）酸の生成 グルコース ＋ フルクトース ＋ キシロース ＋ ３１）PNPG（β−ガラクトーシダーゼ） − ３２）アルギニンジヒドロラーゼ ＋

【表３】 ３３）炭素源の利用 アジピン酸 − ベンゾイルギ酸 ＋ カプロン酸 ＋ ブチルアミン ＋ クエン酸 ＋ ｍ−イノシトール − レブリン酸 ＋ セバシン酸 − リンゴ酸 ＋ ソルビトール − フェニル酢酸 ＋ アセトアミド − Ｌ−アラビノース − シュークロース − フルクトース ＋ アゼライン酸 − グルコース ＋ Ｄ−ガラクトース ＋ マンノース ＋ ムコン酸 ＋ マルトース − ゲラニオール − マンニトール ＋ グリシン − グルコン酸 ＋ ｎ−ブタノール ＋ Ｎ−アセチルグルコサミン − Ｄ−アラニン ＋ Ｌ−バリン ＋ アントラニル酸 − アドニトール − Ｌ−トリプトファン − トレハロース ＋ Ｌ−キヌレン酸 − Ｄ−グルカル酸 ＋ α−アミルアミン − 以上の菌学的性質をバージーの細菌分類書（Bargey's m
anual of SystematicBacteriology(1986)）に基づいて
分類すると、TRP-7 はシュードモナス・プチダ（Pseudo
monas putida）と同定された。

【００１８】

【表４】 シュードモナス・エスピー（Pseudomonas sp.)TRP-13 形態 １）細菌の形および大きさ 桿菌０．５μｍ
×１．０〜２．５μｍ ２）運動性 ＋ ３）グラム染色性 − ４）胞子の有無 − ５）鞭毛 極鞭毛、１ 生理学的性質 １）オキシダーゼ ＋ ２）カタラーゼ ＋ ３）アミノペプチターゼ ＋ ４）インドールの生成 − ５）ＶＰテスト − ６）硝酸塩の還元 ＋ ７）脱窒反応 ＋ ８）フェニルアラニンデアミナーゼ − ９）シュークロースからレバンの生成 − １０）レシチナーゼ − １１）澱粉の加水分解 − １２）ゼラチンの加水分解 − １３）カゼインの加水分解 − １４）ＤＮＡの加水分解 − １５）Ｔｗｅｅｎ８０の加水分解 − １６）エスクリンの加水分解 ＋ １７）３％ＫＯＨによる溶菌 ＋ １８）酸素に対する態度 好気的

【表５】 １９）４℃での生育 − ２０）３７℃での生育 ＋ ２１）４１℃での生育 − ２２）ｐＨ５．６での生育 ＋ ２３）Mac-Conkey-Agar 培地での生育 ＋ ２４）SS-Agar 培地での生育 ＋ ２５）Cetrimid-Agar 培地での生育 ＋ ２６）色素の生成 蛍光性 − ピロシアニン − ２７）ＯＦテスト ０ ２８）グルコースからガスの生成 − ２９）酸の生成 グルコース ＋ フルクトース ＋ キシロース ＋ ３０）PNPG（β−ガラクトシダーゼ） − ３１）アルギニンジヒドロシダーゼ ＋

【表６】 ３２）炭素源の利用 酢酸 ＋ 乳酸 ＋ アジピン酸 ＋ スペリン酸 − カプロン酸 ＋ アドニトール − クエン酸 ＋ 酪酸 ＋ グリコール酸 − トレハロース − マロン酸 − Ｄ−グルカル酸 − リンゴ酸 ＋ ベンゾイルギ酸 − フェニル酢酸 ＋ Ｌ−マンデル酸 − Ｌ−アラビノース − ｍ−イノシトール − グルコース ＋ セバシン酸 ＋ マンノース − ソルビトール − マルトース − アセトアミド − キシロース − シュークロース − マンニトール − アゼライン酸 ＋ グルコン酸 ± Ｄ−ガラクトース ＋ Ｎ−アセチルグルコサミン ± ムコン酸 ＋ Ｌ−セリン − ゲラニオール ＋ エタノール ＋ プロピレングリコール ＋ ｎ−プロパノール ＋ 以上の菌学的性質をバージーの細菌分類書（Bargey's m
anual of SystematicBacteriology(1986)）に基づいて
分類すると、TRP-13はシュードモナス・エスピー（Pseu
domonas sp.)と同定された。

【００１９】本発明に用いる微生物を培養するための培
地は、その微生物が増殖し得るものであれば特に制限は
ない。例えば、炭素源としては、上記微生物が利用可能
であればいずれも使用でき、具体的には、グルコース、
フルクトース、シュクロース、デキストリンなどの糖
類、ソルビトール、エタノール、グリセロールなどのア
ルコール類、フマール酸、クエン酸、酢酸、プロピオン
酸などの有機酸類およびその塩類、パラフィンなどの炭
化水素類など、あるいは、これらの混合物を使用するこ
とができる。窒素源としては例えば、塩化アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウムなどの無機
酸のアンモニウム塩、フマル酸アンモニウム、クエン酸
アンモニウムなどの有機酸のアンモニウム塩、肉エキ
ス、酵母エキス、コーンスティープリカー、カゼイン加
水分解物、尿素などの無機有機含窒素化合物、あるいは
これらの混合物を使用することができる。他に無機塩、
微量金属塩、ビタミン類など、通常の培養に用いられる
栄養源を適宜、混合して用いることができる。また必要
に応じて微生物の増殖を促進する因子、本発明の目的化
合物の生成能力を高める因子、あるいは培地のｐＨ保持
に有効な物質も添加できる。

【００２０】培養方法としては、培地ｐＨは３．０〜
９．５、好ましくは４〜８、培養温度は２０〜４５℃、
好ましくは２５〜３７℃で、嫌気的あるいは好気的に、
その微生物の生育に適した条件下５〜１２０時間、好ま
しくは１２〜７２時間程度培養する。

【００２１】式（１）又は式（２）で示される４，４−
ジアルコキシ−２−ブタノールのエナンチオマー混合物
から光学活性な式（１）又は式（２）で示される４，４
−ジアルコキシ−２−ブタノールを生成させる方法とし
ては、培養液をそのまま用い該培養液に式（１）又は式
（２）で示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタノー
ルのエナンチオマー混合物を添加する方法、遠心分離な
どにより菌体を分離し、これをそのままあるいは洗浄し
た後、緩衝液、水などに再懸濁したものに式（１）又は
式（２）で示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタノ
ールのエナンチオマー混合物を添加し反応させる方法な
どがある。この反応の際、グルコース、シュクロースな
どの炭素源をエネルギー源として添加したほうが良い場
合もある。また、菌体は生菌体のままでも良いし、菌体
破砕物、アセトン処理、凍結乾燥などの処理をほどこし
たものでも良い。

【００２２】また、これらの菌体を、例えば、ポリアク
リルアミドゲル法、含硫多糖ゲル法（カラギーナンゲル
法など）、アルギン酸ゲル法、寒天ゲル法などの公知の
方法で固定化して用いることもできる。

【００２３】式（１）又は式（２）で示される４，４−
ジアルコキシ−２−ブタノールのエナンチオマー混合物
はそのまま、あるいは水に溶解し、または反応に影響を
与えないような有機溶媒に溶解したり、界面活性剤など
に分散させたりして、反応開始から一括にあるいは分割
して添加しても良い。

【００２４】反応はｐＨ２〜１０、好ましくはｐＨ３〜
９の範囲で、温度は１０〜６０℃、好ましくは２０〜４
０℃の範囲で１〜１２０時間程度、攪拌下あるいは静置
下で行う。反応時間を長くすると式（１）又は式（２）
で示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールの残
存量は減少する場合が多いが、光学純度の高い光学活性
な式（１）又は式（２）で示される４，４−ジアルコキ
シ−２−ブタノールを得ることが可能である。基質の使
用濃度は特に制限されないが、０．１〜２０％程度が好
ましい。

【００２５】反応によって残存生成した光学活性な式
（１）又は式（２）で示される４，４−ジアルコキシ−
２−ブタノールは、反応液から直接あるいは菌体分離
後、有機溶媒による抽出、蒸留、カラムクロマトなどの
通常の精製方法を用いることにより、容易に単離でき
る。

【００２６】また、精製操作の前に、適当な化合物で処
理することも可能である。

【００２７】本発明において、微生物あるいはその処理
物を作用させる式（１）又は式（２）で示される４，４
−ジアルコキシ−２−ブタノールは、（Ｒ）体、（Ｓ）
体の任意の割合の混合物で良い。すなわち、ラセミ体あ
るいは（Ｒ）体、（Ｓ）体のいずれかが過剰の混合物が
用いられる。

【００２８】Ｒ¹ 、Ｒ² は、直鎖又は分岐状のアルキル
基中から任意に選択できるが、アルキル基の炭素数は１
〜７であることが好ましい。アルキル基の好適な例とし
ては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロ
ピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、
ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ
−ヘプチル基などが挙げられる。Ｒ¹ 、Ｒ² は同じ基で
も異なる基でもよいが、同じ基である方が合成上は簡便
である。

【００２９】Ａは、直鎖又は分岐状のアルキレン基の中
から任意に選択できるが、アルキレン基の炭素数は２〜
５であることが好ましい。アルキレン基の好適な例とし
ては、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、プロ
ピレン、エチルエチレン、１−メチルトリメチレン、２
−メチルトリメチレン、１，３−ジメチルトリメチレ
ン、などが挙げられる。

【００３０】式（１）又は式（２）で示される２−ブタ
ノールの具体的な例としては、４，４−ジメトキシ−２
−ブタノール、４，４−ジエトキシ−２−ブタノール、
４，４−ジプロポキシ−２−ブタノール、４，４−ジイ
ソプロポキシ−２−ブタノール、４，４−ジブトキシ−
２−ブタノール、４，４−ジイソブトキシ−２−ブタノ
ール、４，４−ジ−ｔ−ブトキシ−２−ブタノール、
４，４−ジペントキシ−２−ブタノール、４，４−ジイ
ソペントキシ−２−ブタノール、４，４−ジヘキシルオ
キシ−２−ブタノール、４，４−ジヘプチルオキシ−２
−ブタノール、α−メチル−１，３−ジオキソラン−２
−エタノール、α−メチル−１，３−ジオキサン−２−
エタノール、α−メチル−１，３−ジオキセパン−２−
エタノール、α，４−ジメチル−１，３−ジオキソラン
−２−エタノール、α−メチル−４−エチル−１，３−
ジオキソラン−２−エタノール、α，４−ジメチル−
１，３−ジオキサン−２−エタノール、α，５−ジメチ
ル−１，３−ジオキサン−２−エタノール、α，４，５
−トリメチル−１，３−ジオキサン−２−エタノールな
どが挙げられる。

【００３１】式（１）又は式（２）で示される４，４−
ジアルコキシ−２−ブタノールのラセミ体は、既知の方
法により容易に合成できる。例えば、３−ケトブタナー
ルの対応するアセタールを還元することにより（例え
ば、J.Org.Chem.,53,4175(1988))、あるいは酸触媒存在
下でアルドールと対応するアルコールとを反応させるこ
とにより（例えば、Chem.Ber.,52,1800(1919））容易に
合成できる。

【００３２】

【実施例】以下、本発明を具体的に実施例にて説明する
が、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものでは
ない。

【００３３】なお、実施例における反応液の遠心分離上
澄液中の式（１）又は式（２）で示される４，４−ジア
ルコキシ−２−ブタノールの定量は、ガスクロマトグラ
フィー（カラム：ＦＡＬ−Ｍ（２ｍ）、インジェクショ
ン温度：２００℃、カラム温度：１４０℃）により測定
した。

【００３４】なお、残存率（％）とは（残存濃度）／
（仕込み濃度）×１００を意味する。また、異性体過剰
率（％ee）はベンゾイル化後、光学分割カラムを用いた
高速液体クロマトグラフィー（カラム：ダイセル化学工
業製キラルセルＯＤ−Ｈ、溶媒：ｎ−ヘキサン：２−プ
ロパノール＝２５０：１、波長：２５４ｎｍ、流速：
１．０ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度：室温）により測定し
た。

【００３５】（実施例１） （菌体調製用培地） グルコース ２ ％ 酵母エキス ０．３％ ヘプトン ０．５％ 麦芽エキス ０．３％ ｐＨ ６．０ 上記の菌体調製用培地５ｍｌを２１ｍｍφ試験管に入
れ、滅菌後、表７に示した微生物をそれぞれ植菌し、３
０℃で４８時間振盪培養を行った。続いて遠心分離で菌
体を分離し、生菌体を得た。

【００３６】次に、２１ｍｍφ試験管中の４，４−ジメ
トキシ−２−ブタノールのラセミ体０．５％およびＣａ
ＣＯ₃ ０．１％を含む水溶液２ｍｌに、遠心分離で得た
菌体を添加し、３０℃で４８時間往復振盪反応させた。

【００３７】反応終了後、遠心分離により除菌し、上澄
液を得た。上澄液をガスクロマトグラフィー分析して
４，４−ジメトキシ−２−ブタノールの残存濃度を測定
し、残存率を求めた。

【００３８】（カラム：ＦＡＬ−Ｍ（２ｍ）、インジェ
クション温度：２００℃、カラム温度：１４０℃、４，
４−ジメトキシ−２−ブタノールの保持時間：１１．１
分） また、この上澄液に塩化ナトリウムを添加後、酢酸エチ
ル２ｍｌを用いて抽出し、酢酸エチル層を無水硫酸ナト
リウムにより乾燥し、減圧下溶媒を留去しシロップを得
た。

【００３９】このシロップをヘキサン２ｍｌに溶解さ
せ、ピリジン存在下、塩化ベンゾイルで１昼夜ベンゾイ
ル化した。反応液に水を添加し、重曹水、クエン酸水で
洗浄後、ヘキサン層を高速液体クロマトグラフィーにて
異性体過剰率（％ee）を分析した。（カラム：ダイセル
化学工業製キラルセルＯＤ−Ｈ、溶媒：ｎ−ヘキサン：
２−プロパノール＝２５０：１、波長：２５４ｎｍ、流
速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度：室温、ベンゾイ
ル体の保持時間：（Ｓ）体 ９．５分、（Ｒ）体１０．
６分）なお、絶対立体配置の決定は（Ｒ）−ＭＴＰＡエ
ステル化し、 ^１ Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）のケミカル
シフト値の文献（J.Am.Chem.Soc.,107,4028(1985))との
比較により行った。

【００４０】得られた結果を表７に示す。

【００４１】

【表７】 微生物 絶対 ％ 残存率 配置 ee (%) ピキア・オプンティア バライティー・サーモトレランス Ｒ 24 75 （Pichia opuntiae var.thermotolerans)IFO10025 ピキア・トレタナ Ｒ 20 77 （Pichia toletana)IFO0950 シュードモナス・ディミヌタ Ｒ 100 38 （Pseudomonas diminuta)IFO12697 シュードモナス・エスピー Ｒ 33 42 （Pseudomonas sp.)TRP-13 トリコスポロン・キャピテータム Ｒ 11 61 （Trichosporon capitatum）IFO1197 ピキア・ファリノサ Ｓ 53 63 （Pichia farinosa)IFO1163 トリコスポロン・クタネウム Ｓ 23 48 （Trichosporon cutaneum ）IFO1198 （実施例２）実施例１と同様に、４，４−ジエトキシ−
２−ブタノールのラセミ体を用いて実施した。

【００４２】残存濃度は、反応液の遠心分離上澄液を以
下のガスクロマトグラフィー条件で測定して求めた。

【００４３】（カラム：ＦＡＬ−Ｍ（２ｍ）、インジェ
クション温度：２００℃、カラム温度：１４０℃、４，
４−ジエトキシ−２−ブタノールの保持時間：１７．５
分） 異性体過剰率（％ee）は、ベンゾイル体を以下の高速液
体クロマトグラフィー条件で測定して求めた。

【００４４】（カラム：ダイセル化学工業製キラルセル
ＯＤ−Ｈ、溶媒：ｎ−ヘキサン：２−プロパノール＝２
５０：１、波長：２５４ｎｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ、カラム温度：室温、ベンゾイル体の保持時間：
（Ｓ）体 ６．５分、（Ｒ）体 ７．１分）） なお、絶対立体配置の決定は、得られた光学活性４，４
−ジエトキシ−２−ブタノールを塩化ベンジルおよびＮ
ａＨでベンジル化した、４，４−ジエトキシ−２−ベン
ジルオキシブタンと、（Ｒ）−３−ヒドロキシ酪酸メチ
ルエステルから誘導した（Ｒ）−４，４−ジエトキシ−
２−ベンジルオキシブタンとの比較により行った。

【００４５】ベンジル体は、以下の高速液体クロマトグ
ラフィー条件で測定した。

【００４６】（カラム：ダイセル化学工業製キラルセル
ＯＤ−Ｈ、溶媒：ｎ−ヘキサン：２−プロパノール＝２
５０：１、波長：２５４ｎｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ、カラム温度：室温、ベンジル体の保持時間：（Ｒ）
体 ６．２分、（Ｓ）体 ７．６分））得られた結果を
表８に示す。

【００４７】

【表８】 微生物 絶対 ％ 残存率 配置 ee (%) シュードモナス・エスピー Ｒ 30 16 （Pseudomonas sp.)TRP-13 シュードモナス・プチダ Ｓ 98 22 （Pseudomonas putida)TRP-7 （実施例３）実施例１と同様に、α−メチル−１，３−
ジオキソラン−２−エタノールのラセミ体を用いて実施
した。

【００４８】残存濃度は、反応液の遠心分離上澄液を以
下のガスクロマトグラフィー条件で測定して求めた。

【００４９】（カラム：ＦＡＬ−Ｍ（２ｍ）、インジェ
クション温度：２００℃、カラム温度：１４０℃、α−
メチル−１，３−ジオキソラン−２−エタノールの保持
時間：２０．６分）異性体過剰率（％ｅｅ）は、ベンゾ
イル体を以下の高速液体クロマトグラフィー条件で測定
して求めた。

【００５０】（カラム：ダイセル化学工業製キラルセル
ＯＤ−Ｈ、溶媒：ｎ−ヘキサン：２−プロパノール＝２
５０：１、波長：２５４ｎｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ、カラム温度：室温、ベンゾイル体の保持時間：
（Ｓ）体 １６．３分、（Ｒ）体１８．２分） なお、絶対立体配置の決定は、得られた光学活性α−メ
チル−１，３−ジオキソラン−２−エタノールを塩化ベ
ンジルおよびＮａＨでベンジル化した、２−（２−ベン
ジルオキシプロピル）−１，３−ジオキソランと、
（Ｒ）−３−ヒドロキシ酪酸メチルエステルから誘導し
た（Ｒ）−２−（２−ベンジルオキシプロピル）−１，
３−ジオキソランとの比較により行った。

【００５１】ベンジル体は、以下の高速液体クロマトグ
ラフィー条件で測定した。

【００５２】（カラム：ダイセル化学工業製キラルセル
ＯＤ−Ｈ、溶媒：ｎ−ヘキサン：２−プロパノール＝２
５０：１、波長：２５４ｎｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ、カラム温度：室温、ベンジル体の保持時間：（Ｓ）
体 １２．９分、（Ｒ）体 １５．４分）得られた結果
を表９に示す。

【００５３】

【表９】 微生物 絶対 ％ 残存率 配置 ee (%) シュードモナス・エスピー Ｒ 64 36 (Pseudomonas sp.)TRP-13

【００５４】

【発明の効果】本発明の微生物を用いた光学活性な式
（１）又は式（２）で示される４，４−ジアルコキシ−
２−ブタノールの製造方法は、簡便に光学純度の高い光
学活性な式（１）又は式（２）で示される４，４−ジア
ルコキシ−２−ブタノールを製造することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:40） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:645）

Claims (8)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ピキア・オプンティア バライティー・
   サーモトレランス（Pichia opuntiae var thermotolera
   ns) 、ピキア・トレタナ（Pichia toletana)、シュード
   モナス・ディミヌタ（Pseudomonas diminuta）、TRP-13
   が属するシュードモナス・エスピー（Pseudomonas s
   p．）、トリコスポロン・キャピテータム（Trichosporo
   n capitatum）のいずれかの種に属する微生物を、式
   （１）又は式（２）で示される４，４−ジアルコキシ−
   ２−ブタノールのエナンチオマー混合物に作用させて、
   式（１）又は式（２）で示される４，４−ジアルコキシ
   −２−ブタノールの２位の（Ｒ）体を、式（１）又は
   （２）で示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタノー
   ルの（Ｓ）体よりも多く残存させることを特徴とする光
   学活性な４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールの製造
   方法。 【化１】
2. 【請求項２】 ピキア・ファリノサ（Pichia farinosa
   ）、シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putid
   a）、トリコスポロン・クタネウム（Trichosporoncutan
   eum ）のいずれかの種に属する微生物を、式（１）又は
   式（２）で示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタノ
   ールのエナンチオマー混合物に作用させて、式（１）又
   は式（２）で示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタ
   ノールの２位の（Ｓ）体を、式（１）又は式（２）で示
   される４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールの（Ｒ）
   体よりも多く残存させることを特徴とする光学活性な
   ４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールの製造方法。 【化２】
3. 【請求項３】 ４，４−ジアルコキシ−２−ブタノール
   が式（１）で示されるものである請求項１記載の製造方
   法。 【化３】
4. 【請求項４】 Ｒ¹ 、Ｒ² がメチル基またはエチル基で
   ある請求項３記載の製造方法。
5. 【請求項５】 ４，４−ジアルコキシ−２−ブタノール
   が式（２）で示されるものである請求項１記載の製造方
   法。 【化４】
6. 【請求項６】 Ａがエチレン基である請求項５記載の製
   造方法。
7. 【請求項７】 ４，４−ジアルコキシ−２−ブタノール
   が式（１）で示されるものである請求項２記載の製造方
   法。 【化５】
8. 【請求項８】 Ｒ¹ 、Ｒ² がメチル基またはエチル基で
   ある請求項７記載の製造方法。