JP3105986B2 - 光学活性ハロヒドリンの製造法 - Google Patents
光学活性ハロヒドリンの製造法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、光学活性ハロヒドリン
の製造法に関するものである。本発明により製造される
(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオール、(R)-(-)-4-ハ
ロ-3−ヒドロキシブチロニトリルおよび(R)-エピハロヒ
ドリンは、種々の医薬品や生理活性物質の合成原料、例
えば、L-カルニチン、ジヒドロキシブタン酸、4-アミノ
-3−ヒドロキシブタン酸などの合成原料として有用であ
ることが知られている（特開昭57-165352 号公報参
照）。
の製造法に関するものである。本発明により製造される
(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオール、(R)-(-)-4-ハ
ロ-3−ヒドロキシブチロニトリルおよび(R)-エピハロヒ
ドリンは、種々の医薬品や生理活性物質の合成原料、例
えば、L-カルニチン、ジヒドロキシブタン酸、4-アミノ
-3−ヒドロキシブタン酸などの合成原料として有用であ
ることが知られている（特開昭57-165352 号公報参
照）。
【０００２】
【従来の技術と問題点】光学活性(R)-(-)-3-ハロ-1,2−
プロパンジオールの製造に関しては、D-マンニトールを
原料として得る方法（特開昭57-165352 号公報参照）、
メチル-5−クロロ-5−デオキシ−α-L−アラビノフラノ
シドから得る方法（ケミストリー・アンド・インダスト
リー、p. 533、15、July、1978参照）などが知られてい
る。
プロパンジオールの製造に関しては、D-マンニトールを
原料として得る方法（特開昭57-165352 号公報参照）、
メチル-5−クロロ-5−デオキシ−α-L−アラビノフラノ
シドから得る方法（ケミストリー・アンド・インダスト
リー、p. 533、15、July、1978参照）などが知られてい
る。
【０００３】また、光学活性(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロ
キシブチロニトリルの製造に関しては、微生物学的に製
造した(R)-(-)-2,3-ジクロロ-1−プロパノールより化学
合成的手法で(R)-エピクロロヒドリンへと変換後、シア
ンイオンと反応させ(R)-(-)-4-クロロ-3−ヒドロキシブ
チロニトリルを得る方法が知られている（特開昭63-316
758号公報参照）。しかしながら、これら化学合成的手
法では工程が複雑であり、工業的製法とするには問題点
が多い。
キシブチロニトリルの製造に関しては、微生物学的に製
造した(R)-(-)-2,3-ジクロロ-1−プロパノールより化学
合成的手法で(R)-エピクロロヒドリンへと変換後、シア
ンイオンと反応させ(R)-(-)-4-クロロ-3−ヒドロキシブ
チロニトリルを得る方法が知られている（特開昭63-316
758号公報参照）。しかしながら、これら化学合成的手
法では工程が複雑であり、工業的製法とするには問題点
が多い。
【０００４】また、微生物学的手法を用いて(R)-(-)-3-
ハロ-1,2−プロパンジオールを製造する方法としては、
ラセミ体の(R,S)-3-ハロ-1,2−プロパンジールに微生物
を作用させ、(S)-(+)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールを
選択的に代謝させて(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオ
ールを残存させる方法（特開昭62-158494 号公報参
照）、シュードモナス属に属する細菌をラセミ体の(R,
S)-2,3-ジクロロ-1−プロパノールに作用させ、(R)-(-)
-3-クロロ-1,2−プロパンジオールを分取する方法（特
開昭62-69993号公報参照）が知られているが、これらは
ラセミ体の原料を光学分割する手法であるために、取得
できる(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールの原料に
対するモル収率は50％以下となり経済的に有利な製造法
とはなり得ない。
ハロ-1,2−プロパンジオールを製造する方法としては、
ラセミ体の(R,S)-3-ハロ-1,2−プロパンジールに微生物
を作用させ、(S)-(+)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールを
選択的に代謝させて(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオ
ールを残存させる方法（特開昭62-158494 号公報参
照）、シュードモナス属に属する細菌をラセミ体の(R,
S)-2,3-ジクロロ-1−プロパノールに作用させ、(R)-(-)
-3-クロロ-1,2−プロパンジオールを分取する方法（特
開昭62-69993号公報参照）が知られているが、これらは
ラセミ体の原料を光学分割する手法であるために、取得
できる(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールの原料に
対するモル収率は50％以下となり経済的に有利な製造法
とはなり得ない。
【０００５】そこで、本出願人は、先に、微生物由来の
酵素の作用により、プロキラルな1,3-ジハロ-2−プロパ
ノールから理論光学収率 100％で(R)-(-)-3-ハロ-1,2−
プロパンジオールを製造する方法（特開平2-291280号公
報参照）およびラセミ体のエピハロヒドリンから(R)-
(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールを製造する方法（特
開平2-283295号公報参照）、さらに1,3-ジハロ-2−プロ
パノールから(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロキシブチロニト
リルを製造する方法（特開平3-53889 号公報参照）およ
びエピハロヒドリンから(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロキシ
ブチロニトリルを製造する方法（特開平3-53890 号公報
参照）について特許出願した。
酵素の作用により、プロキラルな1,3-ジハロ-2−プロパ
ノールから理論光学収率 100％で(R)-(-)-3-ハロ-1,2−
プロパンジオールを製造する方法（特開平2-291280号公
報参照）およびラセミ体のエピハロヒドリンから(R)-
(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールを製造する方法（特
開平2-283295号公報参照）、さらに1,3-ジハロ-2−プロ
パノールから(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロキシブチロニト
リルを製造する方法（特開平3-53889 号公報参照）およ
びエピハロヒドリンから(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロキシ
ブチロニトリルを製造する方法（特開平3-53890 号公報
参照）について特許出願した。
【０００６】しかしながら、これら発明で製造される光
学活性ハロヒドリンの光学純度は高いとはいえず、さら
に高い光学純度のハロヒドリンを生成する微生物の探索
が求められていた。
学活性ハロヒドリンの光学純度は高いとはいえず、さら
に高い光学純度のハロヒドリンを生成する微生物の探索
が求められていた。
【０００７】
【発明の概要】本発明者らは、1,3-ジハロ-2−プロパノ
ールやエピハロヒドリンから光学活性なハロヒドリンを
工業的にさらに有利に製造する方法について鋭意検討し
た結果、オウレオバクテリウム属に属する微生物に、1,
3-ジハロ-2−プロパノールやエピハロヒドリンを(R)-
(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールへ変換する能力、シ
アンイオンの存在下で1,3-ジハロ-2−プロパノールやエ
ピハロヒドリンから(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロキシブチ
ロニトリルを生成させる能力、さらには1,3-ジハロ-2−
プロパノールを(R)-エピハロヒドリンへ変換する能力を
見いだし本発明を完成するに至った。これまで、オウレ
オバクテリウム属に属する微生物に、上記変換能力があ
ることは全く知られていなかった。
ールやエピハロヒドリンから光学活性なハロヒドリンを
工業的にさらに有利に製造する方法について鋭意検討し
た結果、オウレオバクテリウム属に属する微生物に、1,
3-ジハロ-2−プロパノールやエピハロヒドリンを(R)-
(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールへ変換する能力、シ
アンイオンの存在下で1,3-ジハロ-2−プロパノールやエ
ピハロヒドリンから(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロキシブチ
ロニトリルを生成させる能力、さらには1,3-ジハロ-2−
プロパノールを(R)-エピハロヒドリンへ変換する能力を
見いだし本発明を完成するに至った。これまで、オウレ
オバクテリウム属に属する微生物に、上記変換能力があ
ることは全く知られていなかった。
【０００８】すなわち、本発明は、下記 (1)〜(5) に示
す光学活性ハロヒドリンの製造法である。
す光学活性ハロヒドリンの製造法である。
【０００９】(1) オウレオバクテリウム属に属する微生
物の作用により1,3-ジハロ-2−プロパノールから(R)-
(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールを生成させることを
特徴とする(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールの製
造法。
物の作用により1,3-ジハロ-2−プロパノールから(R)-
(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールを生成させることを
特徴とする(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールの製
造法。
【００１０】(2) オウレオバクテリウム属に属する微生
物の作用により(R,S)-または(R)-エピハロヒドリンから
(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールを生成させるこ
とを特徴とする(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオール
の製造法。
物の作用により(R,S)-または(R)-エピハロヒドリンから
(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールを生成させるこ
とを特徴とする(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオール
の製造法。
【００１１】(3) オウレオバクテリウム属に属する微生
物の作用により、シアンイオンの存在下で1,3-ジハロ-2
−プロパノールから(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロキシブチ
ロニトリルを生成させることを特徴とする(R)-(-)-4-ハ
ロ-3−ヒドロキシブチロニトリルの製造法。
物の作用により、シアンイオンの存在下で1,3-ジハロ-2
−プロパノールから(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロキシブチ
ロニトリルを生成させることを特徴とする(R)-(-)-4-ハ
ロ-3−ヒドロキシブチロニトリルの製造法。
【００１２】(4) オウレオバクテリウム属に属する微生
物の作用により、シアンイオンの存在下で(R,S)-または
(R)-エピハロヒドリンからから(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒド
ロキシブチロニトリルを生成させることを特徴とする
(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロキシブチロニトリルの製造
法。
物の作用により、シアンイオンの存在下で(R,S)-または
(R)-エピハロヒドリンからから(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒド
ロキシブチロニトリルを生成させることを特徴とする
(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロキシブチロニトリルの製造
法。
【００１３】(5) オウレオバクテリウム属に属する微生
物の作用により1,3-ジハロ-2−プロパノールから(R)-エ
ピハロヒドリンを生成させることを特徴とする(R)-エピ
ハロヒドリンの製造法。
物の作用により1,3-ジハロ-2−プロパノールから(R)-エ
ピハロヒドリンを生成させることを特徴とする(R)-エピ
ハロヒドリンの製造法。
【００１４】
【発明の具体的説明】本発明で使用する微生物として
は、例えば、本発明者により土壌より新たに分離された
オウレオバクテリウム属に属する微生物であるDH-095株
を挙げることができる。本微生物は微工研菌寄第12360
号(Aureobacterium sp. DH095)として工業技術院 微生
物工業技術研究所（微工研）に寄託されており、その菌
学的性質は以下の通りである。
は、例えば、本発明者により土壌より新たに分離された
オウレオバクテリウム属に属する微生物であるDH-095株
を挙げることができる。本微生物は微工研菌寄第12360
号(Aureobacterium sp. DH095)として工業技術院 微生
物工業技術研究所（微工研）に寄託されており、その菌
学的性質は以下の通りである。
【００１５】 DH095 株の菌学的性質 形 態 多形性桿菌 グラム染色性 ＋ 芽 胞 − 運 動 性 ＋ オキシダーゼ − カタラーゼ ＋ 集落の色調 黄 色 rod-coccus cycle − 集落の周辺細胞の伸長 認めず 酸素に対する態度 好気的 細胞壁のジアミノ酸 オルニチン グルコリル試験 ＋（グルコリル型） 細胞壁の糖組成 アラビノース − ガラクトース ＋ キノン系 MK-12
【００１６】以上の菌学的性質をバージェーズ・マニュ
アル・オブ・システマチック・バクテリオロジー(Berge
y's Manual of Systematic Bacteriology) Vol. 2 (198
6)に従って検索すると、 DH095株はオウレオバクテリウ
ム属に属する細菌と同定された。
アル・オブ・システマチック・バクテリオロジー(Berge
y's Manual of Systematic Bacteriology) Vol. 2 (198
6)に従って検索すると、 DH095株はオウレオバクテリウ
ム属に属する細菌と同定された。
【００１７】上記微生物を培養するための培地組成とし
ては、通常これらの微生物が生育し得るものならば何で
も使用できる。例えば、炭素源としてグルコース、フラ
クトース、シュークロース、マルトース等の糖類、酢
酸、クエン酸等の有機酸、エタノール、グリセロール等
のアルコール類等、窒素源としてペプトン、肉エキス、
酵母エキス、タンパク質加水分解物、アミノ酸等の天然
窒素源の他に各種無機、有機酸アンモニウム塩等が使用
できる。また、この他、必要に応じて、無機塩、微量金
属塩、ビタミン等が適宜使用される。この際、高い酵素
活性を誘導させるために、エピクロロヒドリン、1,3-ジ
クロロ-2−プロパノール、3-クロロ-1,2−プロパンジオ
ール等を培地に添加することも有用である。上記微生物
の培養は常法によればよく、例えばｐＨ４〜10、温度20
〜45℃の範囲にて好気的に10〜96時間培養する。
ては、通常これらの微生物が生育し得るものならば何で
も使用できる。例えば、炭素源としてグルコース、フラ
クトース、シュークロース、マルトース等の糖類、酢
酸、クエン酸等の有機酸、エタノール、グリセロール等
のアルコール類等、窒素源としてペプトン、肉エキス、
酵母エキス、タンパク質加水分解物、アミノ酸等の天然
窒素源の他に各種無機、有機酸アンモニウム塩等が使用
できる。また、この他、必要に応じて、無機塩、微量金
属塩、ビタミン等が適宜使用される。この際、高い酵素
活性を誘導させるために、エピクロロヒドリン、1,3-ジ
クロロ-2−プロパノール、3-クロロ-1,2−プロパンジオ
ール等を培地に添加することも有用である。上記微生物
の培養は常法によればよく、例えばｐＨ４〜10、温度20
〜45℃の範囲にて好気的に10〜96時間培養する。
【００１８】1,3-ジハロ-2−プロパノールあるいはエピ
ハロヒドリンに微生物を作用させて光学活性ハロヒドリ
ンを得る方法としては、上記のように培養して得た微生
物の培養液あるいは遠心分離などにより得た菌体の懸濁
液に基質を添加する方法、菌体処理物（例えば、菌体破
砕物、粗・精製酵素等の菌体抽出物など）あるいは常法
により固定化した菌体または、菌体処理物などの懸濁液
に基質を添加する方法、微生物の培養時に基質を培養液
に添加して培養と同時に反応を行う方法などがある。
ハロヒドリンに微生物を作用させて光学活性ハロヒドリ
ンを得る方法としては、上記のように培養して得た微生
物の培養液あるいは遠心分離などにより得た菌体の懸濁
液に基質を添加する方法、菌体処理物（例えば、菌体破
砕物、粗・精製酵素等の菌体抽出物など）あるいは常法
により固定化した菌体または、菌体処理物などの懸濁液
に基質を添加する方法、微生物の培養時に基質を培養液
に添加して培養と同時に反応を行う方法などがある。
【００１９】また、シアンイオンの存在下で1,3-ジハロ
-2−プロパノールやエピハロヒドリンから(R)-(-)-4-ハ
ロ-3−ヒドロキシブチロニトリルを生成させる場合、予
め、微生物菌体を1,3-ジハロ-2−プロパノールなどによ
り処理することで副成物の生成を抑えることができる。
-2−プロパノールやエピハロヒドリンから(R)-(-)-4-ハ
ロ-3−ヒドロキシブチロニトリルを生成させる場合、予
め、微生物菌体を1,3-ジハロ-2−プロパノールなどによ
り処理することで副成物の生成を抑えることができる。
【００２０】本発明で使用する1,3-ジハロ-2−プロパノ
ールは、1,3-ジクロロ-2−プロパノールや1,3-ジブロモ
-2−プロパノールなどであり、エピハロヒドリンは、エ
ピクロロヒドリンやエピブロモヒドリンなどである。
ールは、1,3-ジクロロ-2−プロパノールや1,3-ジブロモ
-2−プロパノールなどであり、エピハロヒドリンは、エ
ピクロロヒドリンやエピブロモヒドリンなどである。
【００２１】反応液中の1,3-ジハロ-2−プロパノールや
エピハロヒドリンの濃度は、特に限定されるものではな
いが、 0.1〜10(W/V) ％が好ましく、これら基質は反応
液に一括して加えるかあるいは分割添加することができ
る。
エピハロヒドリンの濃度は、特に限定されるものではな
いが、 0.1〜10(W/V) ％が好ましく、これら基質は反応
液に一括して加えるかあるいは分割添加することができ
る。
【００２２】また、(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロキシブチ
ロニトリルを生成させる場合、反応液にシアンイオンを
存在させるが、このシアンイオン源に関しては反応溶液
に可溶なシアン化合物であれば何でもよく、例えば、ア
ルカリ金属塩であるシアン化カリウム、シアン化ナトリ
ウム、またシアンヒドリンであるアセトンシアンヒドリ
ンなどが挙げられる。また、シアン化合物の使用量も特
に限定されるものではないが、基質である1,3-ジハロ-2
−プロパノールあるいはエピハロヒドリンに対し等モル
かあるいは過剰量添加することが好ましい。
ロニトリルを生成させる場合、反応液にシアンイオンを
存在させるが、このシアンイオン源に関しては反応溶液
に可溶なシアン化合物であれば何でもよく、例えば、ア
ルカリ金属塩であるシアン化カリウム、シアン化ナトリ
ウム、またシアンヒドリンであるアセトンシアンヒドリ
ンなどが挙げられる。また、シアン化合物の使用量も特
に限定されるものではないが、基質である1,3-ジハロ-2
−プロパノールあるいはエピハロヒドリンに対し等モル
かあるいは過剰量添加することが好ましい。
【００２３】反応温度は、５〜50℃、反応ｐＨは４〜10
の範囲で行うことが好ましい。反応時間は、基質濃度、
菌体濃度あるいはそのほかの反応条件等によって変わる
が、通常１〜120 時間で終了するように条件を設定する
ことが好ましい。
の範囲で行うことが好ましい。反応時間は、基質濃度、
菌体濃度あるいはそのほかの反応条件等によって変わる
が、通常１〜120 時間で終了するように条件を設定する
ことが好ましい。
【００２４】かくして、反応液中に生成、蓄積した(R)-
(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオール、(R)-(-)-4-ハロ-3
−ヒドロキシブチロニトリルあるいは(R)-エピハロヒド
リンは、公知の方法を用いて採取および精製することが
できる。例えば、反応液から遠心分離などの方法によっ
て菌体を除いた後、酢酸エチルなどの溶媒で抽出を行
い、減圧下に溶媒を除去することによって(R)-(-)-3-ハ
ロ-1,2−プロパンジオール、(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロ
キシブチロニトリルあるいは(R)-エピハロヒドリンのシ
ロップを得ることができる。また、このシロップを減圧
下に蒸留することによりさらに精製することもできる。
(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオール、(R)-(-)-4-ハロ-3
−ヒドロキシブチロニトリルあるいは(R)-エピハロヒド
リンは、公知の方法を用いて採取および精製することが
できる。例えば、反応液から遠心分離などの方法によっ
て菌体を除いた後、酢酸エチルなどの溶媒で抽出を行
い、減圧下に溶媒を除去することによって(R)-(-)-3-ハ
ロ-1,2−プロパンジオール、(R)-(-)-4-ハロ-3−ヒドロ
キシブチロニトリルあるいは(R)-エピハロヒドリンのシ
ロップを得ることができる。また、このシロップを減圧
下に蒸留することによりさらに精製することもできる。
【００２５】
【効果】本発明によれば、、高い光学純度のハロヒドリ
ンをそれぞれの基質から一工程で効率よく製造すること
ができる。
ンをそれぞれの基質から一工程で効率よく製造すること
ができる。
【００２６】以下、実施例によって本発明を具体的に説
明するが、本発明はこの例のみに限定されるものではな
い。
明するが、本発明はこの例のみに限定されるものではな
い。
【００２７】実施例１ グルコース 1％、ペプトン 0.5％、肉エキス 0.3％、酵
母エキス 0.3％からなる培地をｐＨ 7.0に調整して、50
ml三角フラスコに 100mlずつ分注し、120 ℃で15分間殺
菌後、あらかじめメンブランフィルターにより除菌して
おいた20(W/V) ％の3-クロロ-1,2−プロパンジオール溶
液 1mlを添加した。上記培地に DH095株を接種し、30℃
にて48時間振とう培養を行った。この培養液50mlを遠心
分離して菌体を集め、50mMのトリス−硫酸緩衝液（ｐＨ
8.0）50mlで２回洗浄後、同緩衝液10mlに菌体を懸濁し
て菌体懸濁液を調製した。上記のようにして得た菌体懸
濁液を酵素源として、155mM の1,3-ジクロロ-2−プロパ
ノールを含む2Mのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ 8.0）25m
l、菌体懸濁液10ml、脱塩水15ml（総容量50ml）の反応
溶液で20℃、８時間反応させた。反応後、反応液から菌
体を遠心分離によって除去し、上清中の生成3-クロロ−
1,2-プロパンジオールをガスクロマトグラフィーにて定
量した結果、68.5mMの3-クロロ-1,2−プロパンジオール
が生成していた。さらに、この上清中から50mlの酢酸エ
チルで３回抽出を行い、抽出液を無水硫酸ナトリウムで
脱水し、減圧下で溶媒を除去してシロップを得た。この
シロップ中の3-−クロロ-1,2−プロパンジオールを常法
にてトシル化した後、キラルセルＯＣ〔ダイセル（株）
製〕を用いた高速液体クロマトグラフィーによる光学異
性体の分析を行ったところ、光学純度78.0％e.e.の3-ク
ロロ-1,2−プロパンジオールであることが判った。
母エキス 0.3％からなる培地をｐＨ 7.0に調整して、50
ml三角フラスコに 100mlずつ分注し、120 ℃で15分間殺
菌後、あらかじめメンブランフィルターにより除菌して
おいた20(W/V) ％の3-クロロ-1,2−プロパンジオール溶
液 1mlを添加した。上記培地に DH095株を接種し、30℃
にて48時間振とう培養を行った。この培養液50mlを遠心
分離して菌体を集め、50mMのトリス−硫酸緩衝液（ｐＨ
8.0）50mlで２回洗浄後、同緩衝液10mlに菌体を懸濁し
て菌体懸濁液を調製した。上記のようにして得た菌体懸
濁液を酵素源として、155mM の1,3-ジクロロ-2−プロパ
ノールを含む2Mのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ 8.0）25m
l、菌体懸濁液10ml、脱塩水15ml（総容量50ml）の反応
溶液で20℃、８時間反応させた。反応後、反応液から菌
体を遠心分離によって除去し、上清中の生成3-クロロ−
1,2-プロパンジオールをガスクロマトグラフィーにて定
量した結果、68.5mMの3-クロロ-1,2−プロパンジオール
が生成していた。さらに、この上清中から50mlの酢酸エ
チルで３回抽出を行い、抽出液を無水硫酸ナトリウムで
脱水し、減圧下で溶媒を除去してシロップを得た。この
シロップ中の3-−クロロ-1,2−プロパンジオールを常法
にてトシル化した後、キラルセルＯＣ〔ダイセル（株）
製〕を用いた高速液体クロマトグラフィーによる光学異
性体の分析を行ったところ、光学純度78.0％e.e.の3-ク
ロロ-1,2−プロパンジオールであることが判った。
【００２８】実施例２ 実施例１と同様にして調製した菌体懸濁液を酵素源とし
て 216mMのエピクロロヒドリンを含む2Mトリス−塩酸
（ｐＨ 8.0）25ml、菌体懸濁液10ml、脱塩水15ml（総容
量50ml）の反応溶液で20℃、６時間反応させた。反応
後、反応液から菌体を遠心分離によって除去し、上清中
の生成3-クロロ-1,2−プロパンジオールをガスクロマト
グラフィーにて定量した結果、97.3mMの3-クロロ-1,2−
プロパンジオールが生成していた。さらに、この上清中
から50ml酢酸エチルで３回抽出を行い、抽出液を無水硫
酸ナトリウムで脱水し、減圧下で溶媒を除去してシロッ
プを得た。このシロップ中の3-クロロ-1,2−プロパンジ
オールを常法にてトシル化した後、キラルセルＯＣ〔ダ
イセル（株）製〕を用いた高速液体クロマトグラフィー
による光学異性体の分析を行ったところ、光学純度48.2
％e.e.の(R)-(-)-3-クロロ-1,2−プロパンジオールであ
ることが判った。
て 216mMのエピクロロヒドリンを含む2Mトリス−塩酸
（ｐＨ 8.0）25ml、菌体懸濁液10ml、脱塩水15ml（総容
量50ml）の反応溶液で20℃、６時間反応させた。反応
後、反応液から菌体を遠心分離によって除去し、上清中
の生成3-クロロ-1,2−プロパンジオールをガスクロマト
グラフィーにて定量した結果、97.3mMの3-クロロ-1,2−
プロパンジオールが生成していた。さらに、この上清中
から50ml酢酸エチルで３回抽出を行い、抽出液を無水硫
酸ナトリウムで脱水し、減圧下で溶媒を除去してシロッ
プを得た。このシロップ中の3-クロロ-1,2−プロパンジ
オールを常法にてトシル化した後、キラルセルＯＣ〔ダ
イセル（株）製〕を用いた高速液体クロマトグラフィー
による光学異性体の分析を行ったところ、光学純度48.2
％e.e.の(R)-(-)-3-クロロ-1,2−プロパンジオールであ
ることが判った。
【００２９】実施例３ 実施例１と同様にして調製した菌体懸濁液を酵素源とし
て、1Mシアン化カリウムを含む2Mトリス−硫酸緩衝液
（ｐＨ 8.0）25ml、菌体懸濁液10ml、1,3-ジクロロ-2−
プロパノール 3.22g（脱塩水で総容量50mlとなるように
する、1,3-ジクロロ-2−プロパノールの最終濃度は500m
M となる）の反応溶液で20℃、１時間反応させた。反応
後、反応液から菌体を遠心分離によって除去し、上清中
の生成4-クロロ-3−ヒドロキシブチロニトリルをガスク
ロマトグラフィーにて定量した結果、100mMの4-クロロ-
3−ヒドロキシブチロニトリルが生成していた。さら
に、この上清中から50mlの酢酸エチルで３回抽出を行
い、抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で溶
媒を除去してシロップを得た。このシロップ中の4-クロ
ロ-3−ヒドロキシブチロニトリルを(R)-(-)-α−メトキ
シ−α−トリフルオロメチルフェニルアセチルクロリド
を用いてそのエステル誘導体とし高速液体クロマトグラ
フィーによる光学異性体の分析を行った。その結果、生
成した4-クロロ-3−ヒドロキシブチロニトリルは光学純
度72.6％e.e.の(R)-(-)-4-クロロ-3−ヒドロキシブチロ
ニトリルであった。
て、1Mシアン化カリウムを含む2Mトリス−硫酸緩衝液
（ｐＨ 8.0）25ml、菌体懸濁液10ml、1,3-ジクロロ-2−
プロパノール 3.22g（脱塩水で総容量50mlとなるように
する、1,3-ジクロロ-2−プロパノールの最終濃度は500m
M となる）の反応溶液で20℃、１時間反応させた。反応
後、反応液から菌体を遠心分離によって除去し、上清中
の生成4-クロロ-3−ヒドロキシブチロニトリルをガスク
ロマトグラフィーにて定量した結果、100mMの4-クロロ-
3−ヒドロキシブチロニトリルが生成していた。さら
に、この上清中から50mlの酢酸エチルで３回抽出を行
い、抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で溶
媒を除去してシロップを得た。このシロップ中の4-クロ
ロ-3−ヒドロキシブチロニトリルを(R)-(-)-α−メトキ
シ−α−トリフルオロメチルフェニルアセチルクロリド
を用いてそのエステル誘導体とし高速液体クロマトグラ
フィーによる光学異性体の分析を行った。その結果、生
成した4-クロロ-3−ヒドロキシブチロニトリルは光学純
度72.6％e.e.の(R)-(-)-4-クロロ-3−ヒドロキシブチロ
ニトリルであった。
【００３０】実施例４ 実施例１と同様にして調製した菌体を500mM 1,3-ジクロ
ロ-2−プロパノールを含む1Mトリス−硫酸（ｐＨ 8.0）
に懸濁し、20℃にて２時間処理した後、50mMトリス−硫
酸（ｐＨ 8.0）50mlで３回洗浄し、同緩衝液50mlに懸濁
し処理菌体懸濁液を調製した。上記のようにして調製し
た処理菌体懸濁液を酵素源として、1Mシアン化カリウム
を含む2Mトリス−硫酸緩衝液（ｐＨ 8.0）25ml、菌体懸
濁液10ml、エピクロロヒドリン 1.25g（脱塩水で総容量
50mlとなるようにする、エピクロロヒドリンの最終濃度
は 270mMとなる）の反応溶液で20℃、１時間反応させ
た。反応後、反応液から菌体を遠心分離によって除去
し、上清中の生成4-クロロ-3−ヒドロキシブチロニトリ
ルをガスクロマトグラフィーにて定量した結果、124mM
の4-クロロ-3−ヒドロキシブチロニトリルが生成してい
た。さらに、この上清中から50mlの酢酸エチルで３回抽
出を行い、抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧
下で溶媒を除去してシロップを得た。このシロップ中の
4-クロロ-3−ヒドロキシブチロニトリルを(R)-(-)-α−
メトキシ−α−トリフルオロメチルフェニルアセチルク
ロリドを用いてそのエステル誘導体とし高速液体クロマ
トグラフィーによる光学異性体の分析を行った。その結
果、生成した4-クロロ-3−ヒドロキシブチロニトリルは
光学純度33.6％e.e.の(R)-(-)-4-クロロ-3−ヒドロキシ
ブチロニトリルであった。
ロ-2−プロパノールを含む1Mトリス−硫酸（ｐＨ 8.0）
に懸濁し、20℃にて２時間処理した後、50mMトリス−硫
酸（ｐＨ 8.0）50mlで３回洗浄し、同緩衝液50mlに懸濁
し処理菌体懸濁液を調製した。上記のようにして調製し
た処理菌体懸濁液を酵素源として、1Mシアン化カリウム
を含む2Mトリス−硫酸緩衝液（ｐＨ 8.0）25ml、菌体懸
濁液10ml、エピクロロヒドリン 1.25g（脱塩水で総容量
50mlとなるようにする、エピクロロヒドリンの最終濃度
は 270mMとなる）の反応溶液で20℃、１時間反応させ
た。反応後、反応液から菌体を遠心分離によって除去
し、上清中の生成4-クロロ-3−ヒドロキシブチロニトリ
ルをガスクロマトグラフィーにて定量した結果、124mM
の4-クロロ-3−ヒドロキシブチロニトリルが生成してい
た。さらに、この上清中から50mlの酢酸エチルで３回抽
出を行い、抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧
下で溶媒を除去してシロップを得た。このシロップ中の
4-クロロ-3−ヒドロキシブチロニトリルを(R)-(-)-α−
メトキシ−α−トリフルオロメチルフェニルアセチルク
ロリドを用いてそのエステル誘導体とし高速液体クロマ
トグラフィーによる光学異性体の分析を行った。その結
果、生成した4-クロロ-3−ヒドロキシブチロニトリルは
光学純度33.6％e.e.の(R)-(-)-4-クロロ-3−ヒドロキシ
ブチロニトリルであった。
【００３１】実施例５ 実施例４と同様にして調製した処理菌体懸濁液を酵素源
として、200mM 1,3-ジクロロ-2−プロパノールを含む2M
トリス−硫酸緩衝液（ｐＨ 8.0）25ml、菌体懸濁液10ml
（脱塩水で総容量50mlとなるようにする）の反応液で20
℃、30分間反応させた。反応後、反応液から菌体を遠心
分離によって除去し、上清中の生成エピクロロヒドリン
をガスクロマトグラフィーにて定量した結果、26.5mMの
エピクロロヒドリンが生成していた。さらに、この上清
中から50mlの酢酸エチルで３回抽出を行い、抽出液を無
水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で溶媒を除去してシ
ロップを得た。このシロップ中のエピクロロヒドリンを
p-トルエンスルフォン酸を用いてそのトシル誘導体と
し、高速液体クロマトグラフィーによる光学異性体の分
析を行った。その結果、生成したエピクロロヒドリンは
光学純度52.3％e.e.のエピクロロヒドリンであった。
として、200mM 1,3-ジクロロ-2−プロパノールを含む2M
トリス−硫酸緩衝液（ｐＨ 8.0）25ml、菌体懸濁液10ml
（脱塩水で総容量50mlとなるようにする）の反応液で20
℃、30分間反応させた。反応後、反応液から菌体を遠心
分離によって除去し、上清中の生成エピクロロヒドリン
をガスクロマトグラフィーにて定量した結果、26.5mMの
エピクロロヒドリンが生成していた。さらに、この上清
中から50mlの酢酸エチルで３回抽出を行い、抽出液を無
水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で溶媒を除去してシ
ロップを得た。このシロップ中のエピクロロヒドリンを
p-トルエンスルフォン酸を用いてそのトシル誘導体と
し、高速液体クロマトグラフィーによる光学異性体の分
析を行った。その結果、生成したエピクロロヒドリンは
光学純度52.3％e.e.のエピクロロヒドリンであった。
Claims (2)
- 【請求項１】 オウレオバクテリウム属に属する微生物
の作用により1,3-ジハロ-2−プロパノールから(R)-(-)-
3-ハロ-1,2−プロパンジオールを生成させることを特徴
とする(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールの製造
法。 - 【請求項２】 オウレオバクテリウム属に属する微生物
の作用により(R,S)-または(R)-エピハロヒドリンから
(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオールを生成させるこ
とを特徴とする(R)-(-)-3-ハロ-1,2−プロパンジオール
の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5652392A JP3105986B2 (ja) | 1992-02-10 | 1992-02-10 | 光学活性ハロヒドリンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5652392A JP3105986B2 (ja) | 1992-02-10 | 1992-02-10 | 光学活性ハロヒドリンの製造法 |
Related Child Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000189297A Division JP3168202B2 (ja) | 1992-02-10 | 2000-06-23 | （ｒ）−（−）−４−ハロ−３−ヒドロキシブチロニトリルの製造法 |
| JP2000189298A Division JP3168203B2 (ja) | 1992-02-10 | 2000-06-23 | （ｒ）−エピハロヒドリンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05219965A JPH05219965A (ja) | 1993-08-31 |
| JP3105986B2 true JP3105986B2 (ja) | 2000-11-06 |
Family
ID=13029477
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5652392A Expired - Lifetime JP3105986B2 (ja) | 1992-02-10 | 1992-02-10 | 光学活性ハロヒドリンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3105986B2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| JP4716784B2 (ja) * | 2005-05-27 | 2011-07-06 | 三菱レイヨン株式会社 | ４−ハロ−３−ヒドロキシブチロニトリルの製造方法及びそれに用いる微生物 |
| JP5001725B2 (ja) * | 2006-06-14 | 2012-08-15 | 三菱レイヨン株式会社 | ４−ハロ−３−ヒドロキシブチロニトリルの製造方法 |
| JP2008067626A (ja) * | 2006-09-13 | 2008-03-27 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ４−ハロ−３−ヒドロキシブチルアミドの製造方法 |
| JP5214249B2 (ja) | 2006-11-09 | 2013-06-19 | 三菱レイヨン株式会社 | ベタインの製造方法 |
| JP2008133198A (ja) * | 2006-11-27 | 2008-06-12 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | Ｌ−カルニチンの製造方法 |
| JP5001631B2 (ja) * | 2006-11-27 | 2012-08-15 | 三菱レイヨン株式会社 | ４−ハロ−３−ヒドロキシブチロニトリルの工業的製造方法 |
| JP2008148637A (ja) * | 2006-12-19 | 2008-07-03 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ４−ハロ−３−ヒドロキシブチルアミドの製造方法 |
| JP2009000097A (ja) * | 2007-05-23 | 2009-01-08 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ４−ハロ−３−ヒドロキシブチルアミドおよびその誘導体の製造方法 |
-
1992
- 1992-02-10 JP JP5652392A patent/JP3105986B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05219965A (ja) | 1993-08-31 |
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