JP2832807B2 - 新規微生物及び該微生物を用いた２，６− ナフタレンジカルボン酸の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規微生物、及び該微
生物の菌体、休止菌体又は酵素を利用して２，６−ジメ
チルナフタレンから２，６−ナフタレンジカルボン酸を
製造する方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】２，６−ナフタレンジカルボン酸化合物
は高機能性樹脂原料、液晶原料、農薬原料として有用な
化合物であり、特に高機能性樹脂であるポリエチレンナ
フタレート（ＰＥＮ）樹脂の原料として大量生産化が望
まれている。

【０００３】２，６−ナフタレンジカルボン酸化合物
は、現在、種々の化学合成法により製造されているが、
これらはいずれも異性体の副生を生じること、高温高圧
反応であるため、官能基の転移が起こり易いこと等の理
由により、高い純度の２，６−ナフタレンジカルボン酸
を生産することは困難な状況にある。更に、化学合成法
は高温高圧反応であることから、大量のエネルギーを消
費するという問題も包含している。

【０００４】これらの問題を解決する方法として、微生
物の酸化機能を用いた酸化反応法の研究が行われてい
る。この微生物を触媒とする酸化反応法は、常温常圧で
反応が進行するうえ、官能基転移が起こらず、さらに異
性体が副生されないというすぐれた特徴を有している。

【０００５】そして、これら微生物による２，６−ナフ
タレンジカルボン酸の製造方法としては、２，６−ジメ
チルナフタレンを単一炭素源として生育できるシュード
モナス エスピー（Pseudomonas sp. ）Ｄ−１８６株を
用いた、２，６−ジメチルナフタレンを唯一炭素源とし
て固体状で供給した発酵法による製造方法（特開平３−
８００９１号公報）が提案されている。また、２，６−
ジメチルナフタレンを生育基質として利用できない新規
放線菌Ｈ−５０３（ＦＥＲＭ Ｐ−１１７５３）を他の
生育基質で培養し、２，６−ジメチルナフタレンを共酸
化して、２，６−ナフタレンジカルボン酸を生産する共
酸化反応法による製造方法（特開平５−１５３６５号公
報）も提案されている。

【０００６】しかしながら、これら従来の製造方法で
は、原料である２，６−ジメチルナフタレンを水溶性培
養液に固体状で供給する固−液反応系のため、原料供給
量が制限され、したがって連続的原料供給、供給制御が
困難であり、効率的な連続生産の面において満足し得る
ものではなかった。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、このよ
うな従来の技術レベルに鑑み、２，６−ジメチルナフタ
レンが溶解した有機溶媒に、微生物を接触させることに
より酸化反応を行なうことができれば、原料供給の制御
が容易になり、連続的な２，６−ナフタレンジカルボン
酸の生産方法の開発が行われるものとの観点にたち、有
機溶媒存在下で安定した酸化反応を行なう能力を持つ微
生物を単離し、これを利用することを、本発明の目的と
してはじめて設定した。

【０００８】そこで、本発明者らは、２，６−ジメチル
ナフタレンの両メチル基の酸化能を有し、有機溶媒に耐
性で有機溶媒を資化せず、基質を含有した有機溶媒と培
地からなる二相系において生育、反応可能である微生物
を見出し、この微生物により有機溶媒に溶解した２，６
−ジメチルナフタレンもしくは２，６−ジメチルナフタ
レンを含有する石油留分を培地に供給し、接触、反応さ
せる二相系反応（液−液反応）による製造方法を提供す
ることとした。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記課題
を解決すべく、有機溶媒に耐性で、かつ有機溶媒存在下
で２，６−ジメチルナフタレンから２，６−ナフタレン
ジカルボン酸を産生する微生物のスクリーニングを行な
い、この微生物により有機溶媒に溶解した２，６−ジメ
チルナフタレンもしくは２，６−ジメチルナフタレンを
含有する石油留分を培地に供給し、接触、反応させる二
相系反応（液−液反応）による製造法を確立すべく鋭意
研究を重ねた結果、目的とする微生物を新たにスクリー
ニングするのに成功し、本発明を完成するに至った。

【００１０】即ち本発明は、有機溶媒に耐性かつ有機溶
媒存在下で２，６−ジメチルナフタレンから２，６−ナ
フタレンジカルボン酸を産生する微生物、またはこれら
休止菌体を、２，６−ジメチルナフタレンを溶解した有
機溶媒、もしくは２，６−ジメチルナフタレンを含有し
ている石油留分と培地からなる二相系反応（液−液反
応）にて、接触、反応させ、２，６−ナフタレンジカル
ボン酸を生産することを特徴とする２，６−ナフタレン
ジカルボン酸を製造方法を提供するものである。

【００１１】本発明に係る新規微生物は、有機溶媒に耐
性を持ち、２，６−ジメチルナフタレンを唯一の炭素源
とする２，６−ジメチルナフタレンが溶解した有機溶媒
と培地からなる二相系培養液中で良好に生育し、かつ
２，６−ナフタレンジカルボン酸を生産するものであっ
て、石油汚染土壌中から新たに単離したものである。

【００１２】（１）微生物のスクリーニング ２，６−ジメチルナフタレンを溶解した有機溶媒、例え
ばデカリンと炭素源を含まないＫ培地とを等量試験管に
分注し二相系培養液とする。これを滅菌後、採取した土
壌を加え振とう培養を行なう。

【００１３】この二相系培養液の水層部を、上記と同様
に調製した二相系培養液に加え、振とう培養を行なう。
培養後の培養液を希釈後、これを無機塩からなる寒天培
地に塗布し、有機溶媒に溶解した２，６−ジメチルナフ
タレンを噴霧供給後、培養する。

【００１４】クリアゾーンを形成し出現したコロニーを
拾い、上記二相系培養液にて培養を行ない２，６−ナフ
タレンジカルボン酸を生産する菌体を選択する。この様
に、２，６−ジメチルナフタレンを溶解した有機溶媒
を、炭素源を含まない培地と混合し培養することによ
り、有機溶媒に耐性を有し有機溶媒を資化せず、かつ有
機溶媒に溶解している２，６−ジメチルナフタレンを基
質として利用し得る菌株を単離することができる。

【００１５】上記スクリーニングに用いられる炭素源を
含まない培地としては、Ｋ培地等の一般的な培地成分を
使用することができる。即ち、無機塩としては、カリウ
ム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、マンガ
ン、鉄、コバルト、銅等の各塩類を使用することができ
る。また、窒素源としては塩化アンモニウム、燐酸アン
モニウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸
アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿
素等の無機窒素化合物や酵母エキス、ペプトン等の有機
窒素源を使用することができる。

【００１６】また、２，６−ジメチルナフタレンを溶解
する有機溶媒は、脂肪族炭化水素類、脂環式炭化水素
類、芳香族炭化水素類、エーテル類、ケトン類及びそれ
らの誘導体の内１種もしくは２種以上の混合物を使用す
ることができる。

【００１７】２，６−ジメチルナフタレンを溶解した有
機溶媒の培地への混合比は任意に設定可能であるが、効
率的な生産もしくは変換をさせる上で６０％以下とする
ことが好ましい。更に培養条件は培地ｐＨが約３．０〜
９．０、好ましくは５．０〜７．０、培養温度は約２０
〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃で、好気的条件で行
なうことが望ましい。

【００１８】以下に一例として、スクリーニングによっ
て得られた本発明菌の菌学的性質を示す。

【００１９】（２）本発明微生物の菌学的性質 （ａ）形態 （１）細胞の形態と大きさ ：桿菌 肉汁寒天培地生育菌（0.7〜0.8）×（1.4〜2.1）ミクロ
ン 肉汁液体培地生育菌（0.7〜1.0）×（1.9〜3.4）ミクロ
ン （２）運動性の有無と鞭毛の着性状態：なし （３）細胞の多形性及び胞子の有無 ：共に無し （４）グラム染色性 ：陰性 （５）抗酸性 ：認められない。

【００２０】（ｂ）各種培地における生育状況 （１）肉汁寒天平板培養：生育良好。コロニー周辺部に
放射状のしわを形成し、周縁は波状。特徴的集落色素、
拡散性色素の産生は認められない。 （２）肉汁寒天斜面培養：生育良好。コロニー周辺部に
放射状のしわを形成し、周縁は波状。特徴的集落色素、
拡散性色素の産生は認められない。 （３）肉汁液体培養 ：培地全体の生育及び薄い表面
被膜の形成が認められる。 （４）肉汁ゼラチン穿刺培養：培地の上部に生育が認め
られるが、液化は認められない。 （５）リトマス・ミルク：アルカリの生成を認める。凝
固は認められない。

【００２１】 （ｃ）生理学的性質（１） （１）硝酸塩の還元 ：陽性 （２）脱窒反応 ：陰性 （３）ＭＲテスト ：陰性 （４）ＶＰテスト ：陰性 （５）インドールの生成 ：陰性 （６）硫化水素の生成 ＴＳＩ寒天 ：陽性 酢酸鉛寒天 ：陽性 （７）デンプンの加水分解 ：陰性 （８）クエン酸の利用 Ｋｏｓｅｒ培地 ：陽性 Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ培地 ：陽性 （９）無機窒素源の利用 硝酸塩 ：陽性 アンモニウム塩 ：陽性 （10）色素の生成 ：陰性 （11）ウレアーゼ ：陰性 （12）オキシダーゼ ：陽性 （13）カタラーゼ ：陽性 （14）生育の範囲 ｐＨ ：5.5〜9.0（6.0〜8.0）で生育良好 温度 ：５〜３５℃（３０℃で良好） （15）酸素に対する態度 ：好気的 （16）ＯＦテスト ：酸化的 （17）酸及びガスの生成 糖質 酸の生成 ガスの生成 Ｌ−アラビノース − − Ｄ−キシロース − − Ｄ−グルコース − − Ｄ−マンノース − − Ｄ−フラクトース − − Ｄ−ガラクトース − − マルトース − − シュークロース − − ラクトース − − トレハロース − − Ｄ−ソルビトール − − Ｄ−マンニトール − − イノシトール − − グリセリン − − デンプン − − （18）アルギニンヒドロラーゼ ：陰性 （19）尿素分解 ：陰性 （20）エスクリン分解 ：陰性 （21）ゼラチン液化 ：陰性 （22）β−ガラクトシダーゼ ：陰性 （23）生育炭素源の利用 グルコース − Ｌ−アラビノース − Ｄ−マンノース − Ｄ−マンニトール ＋ Ｎ−アセチル−Ｄグルコサミン − マルトース − グルコン酸カリウム ＋ ｎ−カプリン酸 − アジピン酸 − ｄｌ−リンゴ酸塩 ＋ クエン酸ナトリウム − フラクトース − 酢酸フェニル −

【００２２】（ｄ）生理学的性質（２） （24）キノン種 ：Ｑ−８ （25）ＧＣ含量（％） ：６１

【００２３】以上の性質から、本菌株は、非発酵性グラ
ム陰性桿菌であると判断し、バージェーズ マニュアル
オブ デターミナテイブ バクテリオロジー（Berge
y's Manual of Determinative Bacteriology）第８版に
基づき検索を行なったところ、本菌株に類似した属とし
てコマモナス（Comamonas）属とアルカリゲネス（Alcal
igenes）属が見出された。さらに、本菌株と類似菌のタ
イプカルチャーとのＤＮＡ−ＤＮＡ−ハイブリダイゼー
ションによる相同性を比較したところ、これらの類似菌
とは異なっており、またＤ−マンニトール及びグルコン
酸カリウムの分解性の点でも特徴的であり、これらの点
から総合的に判断した結果、本菌株を従来既知の属に属
せしめるのは困難であって、新しい属に属せしめるのが
妥当と判定し、本菌を新規に属するＳ１−２２−１８株
と命名し、工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託
（ＦＥＲＭ Ｐ−１４７９２）した。

【００２４】ＤＮＡ−ＤＮＡ−ハイブリダイゼーション
による相同性の比較結果を下記表１に示し、形態を図１
に示した。

【００２５】

【表１】

【００２６】本発明による２，６−ナフタレンジカルボ
ン酸の製造方法としては、本菌を用いて、２，６−ジメ
チルナフタレンを２，６−ナフタレンジカルボン酸に変
換する方法、及び、２，６−ナフタレンジカルボン酸を
直接培養生産せしめる方法のいずれもが使用可能であ
る。

【００２７】その具体的態様としては、次の方法が例示
される。 （ａ）該微生物を予め培養した増殖菌体を、菌体懸濁液
とし、これを２，６−ジメチルナフタレンが溶解した有
機溶媒と接触させて反応させる二相系休止菌体反応。 （ｂ）該微生物を培地と２，６−ジメチルナフタレンを
溶解した有機溶媒とを重層して、培養生産させる二相系
増殖培養反応方法。

【００２８】２，６−ジメチルナフタレンを溶解し供給
する有機溶媒としては、培地と二相を形成し得る有機溶
媒、例えば、ヘキサン、オクタン、イソオクタン、シク
ロオクタン、ノナン、デカン、テトラリン、デカリン、
ヘキシルエーテル等を使用することもできる。上記二相
系反応方法においては、これらの有機溶媒の内、１種も
しくは２種以上を任意に混合して使用することができ
る。

【００２９】更に、本発明に係る微生物は、２，６−ジ
メチルナフタレンを含有している石油留分、例えば、石
油接触分解油で２，６−ジメチルナフタレンを多く含む
ＬＣＯ（ライトサイクルオイル）留分を直接、基質含有
有機溶媒として使用することができるという新規にして
卓越した性質を有するので、変換基質としての２，６−
ジメチルナフタレンを濃縮、分離することや、改めて有
機溶媒に溶解する必要もなくなり、従来利用されていな
かった資源の有効利用ができる。これにより製造工程を
簡素化することができ、効率的かつ経済的生産に寄与す
ること大となる。又、変換後２，６−ナフタレンジカル
ボン酸を含む水層とＬＣＯ留分とを常法にて分離すれ
ば、このＬＣＯ留分は再び石油製品製造への材源として
利用が図れる。すなわち、本発明に係る製造方法は、工
業的な方法としてきわめて卓越したものであって、新規
微生物を分離するのに成功したことにより、本新規製造
方法がはじめて可能になったのである。

【００３０】本発明においては、本菌を培養して得た菌
体が使用できることはもちろんのこと、その休止菌体の
ほか、その処理物も使用することができる。処理物とし
ては、菌体を含有する培養物、休止菌体含有物、菌体破
砕物、これらの濃縮物、ペースト化物、乾燥物、希釈物
等が包含される。また、菌体由来の酵素としては、菌体
から分離、精製した酵素はもとより、酵素含有物も使用
することができる。酵素含有物としては、菌体、休止菌
体、上記した該処理物、培養液等、酵素を含有する物が
すべて包含される。

【００３１】上記反応（ａ）の、増殖菌体に２，６−ジ
メチルナフタレンが溶解した有機溶媒を接触させて反応
させる二相系休止菌体反応方法では、まず炭素源として
糖質、例えば、グルコース、シュークロース、糖蜜等
を、炭化水素としては、例えばヘキサデカン等及びその
他コハク酸等で菌体増殖作用の高いものを用い、窒素源
では例えば、アンモニア、塩化アンモニウム、燐酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素
等を用い、無機塩類としては燐酸カリウム、燐酸ナトリ
ウム、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、硫酸第一鉄、
塩化第二鉄、塩化カルシウム、塩化マンガン等を、さら
には必要に応じてビタミン類、酵母エキス、ペプトン、
トリプトン等の成長促進物質を添加した培地に該微生物
を植菌し、好気的条件で培養を行ない増殖菌体を得る。
ここで得られた菌体培養物を燐酸緩衝液等で洗浄、懸濁
させて菌体懸濁液とし、これを２，６−ジメチルナフタ
レンが溶解もしくは含有する有機溶媒と接触させて二相
系反応を行なう。

【００３２】反応は、ｐＨ３．０〜９．０、２０〜４０
℃の範囲で、１〜５日間好気的に行なう。尚、２，６−
ナフタレンジカルボン酸の生産に伴って低下するｐＨ
は、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム溶液、ア
ンモニア水を滴下することにより調整維持し、２，６−
ナフタレンジカルボン酸の生産能力を維持、向上させる
ことができる。また、反応により電子供与体が減少する
時は、メタノール、エタノール、ＮＡＤ、酢酸、蟻酸等
を適宜供給することが望ましい。

【００３３】基質となる２，６−ジメチルナフタレンの
供給量は、溶媒に用いる有機溶媒の溶解度に応じて添加
することが可能であり、さらに基質を含んだ有機溶媒量
を変化させることにより、反応系での基質濃度を自在に
制御することができる。この有機溶媒系での反応は、従
来の基質を固体状で供給した反応方法に比べ、２，６−
ナフタレンジカルボン酸の生産性をより一層高めること
ができる。

【００３４】上記反応により生成した２，６−ナフタレ
ンジカルボン酸は、反応液水層部をろ過、遠心分離によ
って固液分離し、得られた水溶液を塩酸、硫酸等の酸溶
液で酸性化した後、結晶を濾過して分離、回収すること
ができる。

【００３５】次に、反応方法（ｂ）に記した二相系増殖
培養反応方法は、上記（ａ）の反応方法での菌体増殖時
に、２，６−ジメチルナフタレンを溶解した有機溶媒を
重層し、好気的に培養して２，６−ナフタレンジカルボ
ン酸を生産する方法であり、反応はｐＨ３〜９、２０〜
４０℃の範囲で通常１〜１４日間好気的に行なう。本発
明では増殖培養だけでも２，６−ナフタレンジカルボン
酸を良好に生産することができ、（ａ）と同様の方法で
分離、回収することができる。

【００３６】このようにして、きわめて効率的に２，６
−ナフタレンジカルボン酸及び／又はその塩を工業生産
することができる。本発明において、該塩とは、アルカ
リ金属（例えばナトリウム、カリウム等）塩、アルカリ
土金属（例えばマグネシウム、カルシウム等）塩、これ
らの水酸化物、炭酸塩のほか、アミン塩等の有機塩類等
各種塩類を広く包含するものである。

【００３７】本発明は、有機溶媒に耐性を持ち、有機溶
媒の存在下で２，６−ジメチルナフタレンの両メチル基
を酸化することができる微生物であり、しかも従来には
例のない、石油接触分解油中に含有する２，６−ジメチ
ルナフタレンを、石油接触分解油の存在下において２，
６−ナフタレンジカルボン酸に変換できるというすぐれ
た特徴を有する。

【００３８】したがって、本発明の微生物により、２，
６−ジメチルナフタレンを溶解した有機溶媒、並びに
２，６−ジメチルナフタレンを含有する石油接触分解油
等の石油留分を、基質含有有機溶媒として用いることが
可能となり、二相系反応法の下でより効率的に２，６−
ナフタレンジカルボン酸あるいはその塩を生産すること
ができる。

【００３９】

【実施例】以下に実施例を示し本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【００４０】

【実施例１】 有機溶媒耐性２，６−ナフタレンジカルボン酸生産菌の
分離 下記表２に示す組成からなるＫ液体培地５ｍｌに、２，
６−ジメチルナフタレンを１％（ｗ／ｖ）溶解したデカ
リンを重層し二相系培養液を作製した。二相系培養液は
ｐＨ７．０に調整後、１２１℃で１５分間滅菌して使用
した。

【００４１】

【表２】

【００４２】秋田県申川地方で採取した石油汚染土壌
（約０．５ｇ）を上記培養液に加え、３０℃で７日間振
とう培養を行なった（集積培養Ｉ）。次に、集積培養Ｉ
の水層部から１ｍｌ採取し、新たな上記二相系培養液を
加え、３０℃で３日間、集積培養Ｉと同様の培養条件で
培養した（集積培養II）。

【００４３】更に、集積培養IIの水層部１ｍｌを採取し
てこれより種々希釈液を作成し、その内の１００μｌ
を、培地１リットル当たり１５ｇの寒天を加えて調製し
た寒天培地に塗布し、唯一炭素源としてジエチルエーテ
ルに溶解した２，６−ジメチルナフタレンを噴霧供給し
て、３０℃で５日間培養した。クリアゾーンを形成し出
現したコロニーを、Ｋ液体培地５ｍｌに２，６−ジメチ
ルナフタレンを１％（ｗ／ｖ）溶解したデカリンを重層
してなる二相系培養液に植菌し、３０℃で７日間振とう
培養を行なった。

【００４４】この二相系培養液の水層部を常法に従いＨ
ＰＬＣにより分析し２，６−ナフタレンジカルボン酸量
を定量した。これにより有機溶媒を資化しない２，６−
ジメチルナフタレンから２，６−ナフタレンジカルボン
酸を生産する菌体を選択し、２，６−ナフタレンジカル
ボン酸の生産量の高い菌株として、Ｓ１−２２−１８株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１４７９２）を取得した。

【００４５】

【実施例２】 二相系における増殖培養生産試験 内径２１ｍｍの試験管に、Ｋ液体培地５ｍｌと２，６−
ジメチルナフタレンを１％（ｗ／ｖ）溶解したデカリン
５ｍｌとを入れ、二相系培養液を調製し、この培養液に
Ｓ１−２２−１８株を１白金耳植菌し、３０℃で７日
間、２５０ｒｐｍで振とう培養を行なった。培養後この
二相系培養液の水層部を常法に従い２，６−ナフタレン
ジカルボン酸をＨＰＬＣにて分析、定量したところ、下
記表３に示すとおり３２ｍｇ／ｌの２，６−ナフタレン
ジカルボン酸が生産された。

【００４６】

【表３】

【００４７】

【比較例１】 固−液系における増殖培養生産試験 二相系反応方法と生産性の比較をするため従来の固−液
系反応における生産試験を行なった。

【００４８】２，６−ジメチルナフタレンを有機溶媒に
溶解せず、Ｋ液体培地５ｍｌに固体状で５０ｍｇ添加し
た固−液系培養液に、Ｓ１−２２−１８株を１白金耳植
菌し、実施例２と同様の条件で振とう培養した。培養
後、実施例２と同様に分析、定量を行なったところ、表
３に示すとおり生産量は４．５ｍｇ／ｌであった。

【００４９】

【実施例３】 休止菌体を用いた二相系反応試験 内径２１ｍｍの試験管に、下記表４に示すＫＭ液体培地
１０ｍｌを入れ１２１℃で１５分間蒸気殺菌した後、Ｓ
１−２２−１８株を植菌し、３０℃で２日間振とう培養
により増殖を行なった。この増殖菌体を集菌して０．１
Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．４）で二回洗浄し、同緩衝液３
ｍｌに再懸濁を行なった。この懸濁液と下記表５に示す
各有機溶媒に２，６−ジメチルナフタレンを１％（ｗ／
ｖ）溶解させたもの５ｍｌとを内径２１ｍｍの試験管に
入れ、３０℃で３日間、２５０ｒｐｍで振とう培養を行
なった。培養液の水層部をＨＰＬＣにより分析し２，６
−ナフタレンジカルボン酸量を定量した。用いた有機溶
媒ごとの２，６−ナフタレンジカルボン酸生産量を下記
表５に示す。

【００５０】

【表４】

【００５１】

【表５】

【００５２】

【比較例２】 休止菌体を用いた固−液系反応試験 実施例３の二相系休止菌体反応と比較するため、有機溶
媒を使用せず２，６−ジメチルナフタレンを固体状で５
０ｍｇ添加し、実施例３と同様の手順で休止菌体反応を
試験した。結果を表５に示す。

【００５３】

【実施例４】 休止菌体による石油接触分解油を用いた二相系生産試験 実施例３と同様の方法で、増殖菌体による菌懸濁液を作
製した。この懸濁液５ｍｌと石油接触分解油（ＬＣＯ）
５ｍｌとを内径２１ｍｍの試験管に入れ、３０℃で３日
間、２５０ｒｐｍで振とう培養を行なった。培養液の水
層部をＨＰＬＣにより分析し２，６−ナフタレンジカル
ボン酸量を定量した。５．６ｍｇ／ｌの２，６−ナフタ
レンジカルボン酸が生産された。

【００５４】試験に用いた石油接触分解油（ＬＣＯ）
は、沸点範囲が１６０〜３４０℃であり、２，６−ジメ
チルナフタレンを１．５％（ｗ／ｖ）含有している。

【００５５】これら実施例の結果から、本発明の微生物
によれば二相系反応方法において、良好な２，６−ナフ
タレンジカルボン酸の生産もしくは変換ができ、しかも
従来、発酵生産において未利用であった石油接触分解油
等の石油留分を直接、基質含有有機溶媒として用い変換
できることが明らかとなった。

【００５６】

【発明の効果】本発明によれば、有機溶媒に耐性を示
し、かつ２，６−ジメチルナフタレンの両メチル基末端
酸化能を有する、２，６−ジメチルナフタレンを含む有
機溶媒と培地からなる二相系において、生育もしくは反
応可能である生成菌、もしくはその休止菌体、又はその
処理物もしくは菌体由来の酵素を用い、２，６−ジメチ
ルナフタレンから２，６−ナフタレンジカルボン酸を効
率良く生産することができる。

【００５７】また更に、本発明菌は従来未知の新菌であ
り、しかも、本発明菌によれば上記した効果のほかに、
石油接触分解油等の石油留分を、基質として、そしてま
た有機溶媒として同時に利用することができるので、工
業的な面で特にすぐれている。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明菌の形態を示す。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 酒井 豊 神奈川県横浜市青葉区藤が丘２−36−66 グリーンヒル藤が丘ＣＩＩ−114 (72)発明者 上村 直久 埼玉県川口市並木１−13−32 エバーグ リーン川口609号 (72)発明者 飛田 雅文 神奈川県横浜市戸塚区戸塚町2021−１ ホーユウパレス戸塚711 (72)発明者 小林 俊仁 神奈川県川崎市高津区末長628 アヴニ ール溝の口310 審査官 加藤 浩 (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) C12N 1/20 C12P 7/44

Claims (6)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の菌学的性質を有し、２，６−ナフ
   タレンジカルボン酸生成菌であるＳ１−２２−１８株。 （ａ）形態 （１）細胞の形態と大きさ ：桿菌 肉汁寒天培地生育菌（０．７〜０．８）×（１．４〜
   ２．１）ミクロン 肉汁液体培地生育菌（０．７〜１．０）×（１．９〜
   ３．４）ミクロン （２）運動性の有無と鞭毛の着性状態：なし （３）細胞の多形性及び胞子の有無 ：共に無し （４）グラム染色性 ：陰性 （５）抗酸性 ：認められない。 （ｂ）各種培地における生育状況 （１）肉汁寒天平板培養：生育良好。コロニー周辺部に
   放射状のしわを形成し、周縁は波状。特徴的集落色素、
   拡散性色素の産生は認められない。 （２）肉汁寒天斜面培養：生育良好。コロニー周辺部に
   放射状のしわを形成し、周縁は波状。特徴的集落色素、
   拡散性色素の産生は認められない。 （３）肉汁液体培養 ：培地全体の生育及び薄い表面
   被膜の形成が認められる。 （４）肉汁ゼラチン穿刺培養：培地の上部に生育が認め
   られるが、液化は認められない。 （５）リトマス・ミルク：アルカリの生成を認める。凝
   固は認められない。 （ｃ）生理学的性質（１） （１）硝酸塩の還元 ：陽性 （２）脱窒反応 ：陰性 （３）ＭＲテスト ：陰性 （４）ＶＰテスト ：陰性 （５）インドールの生成 ：陰性 （６）硫化水素の生成 ＴＳＩ寒天 ：陽性 酢酸鉛寒天 ：陽性 （７）デンプンの加水分解 ：陰性 （８）クエン酸の利用 Ｋｏｓｅｒ培地 ：陽性 Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ培地 ：陽性 （９）無機窒素源の利用 硝酸塩 ：陽性 アンモニウム塩 ：陽性 （１０）色素の生成 ：陰性 （１１）ウレアーゼ ：陰性 （１２）オキシダーゼ ：陽性 （１３）カタラーゼ ：陽性 （１４）生育の範囲 ｐＨ ：５．５〜９．０（６．０〜８．０） で生育良好 温度 ：５〜３５℃（３０℃で良好） （１５）酸素に対する態度 ：好気的 （１６）ＯＦテスト ：酸化的 （１７）酸及びガスの生成 糖質 酸の生成 ガスの生成 Ｌ−アラビノース − − Ｄ−キシロース − − Ｄ−グルコース − − Ｄ−マンノース − − Ｄ−フラクトース − − Ｄ−ガラクトース − − マルトース − − シュークロース − − ラクトース − − トレハロース − − Ｄ−ソルビトール − − Ｄ−マンニトール − − イノシトール − − グリセリン − − デンプン − − （１８）アルギニンヒドロラーゼ ：陰性 （１９）尿素分解 ：陰性 （２０）エスクリン分解 ：陰性 （２１）ゼラチン液化 ：陰性 （２２）β−ガラクトシダーゼ ：陰性 （２３）生育炭素源の利用 グルコース − Ｌ−アラビノース − Ｄ−マンノース − Ｄ−マンニトール ＋ Ｎ−アセチル−Ｄグルコサミン − マルトース − グルコン酸カリウム ＋ ｎ−カブリン酸 − アジピン酸 − ｄｌ−リンゴ酸塩 ＋ クエン酸ナトリウム − フラクトース − 酢酸フェニル − （ｄ）生理学的性質（２） （２４）キノン種 ：Ｑ−８ （２５）ＧＣ含量（％） ：６１
2. 【請求項２】 請求項１に示す菌学的性質を有するＳ１
   −２２−１８株を用いて２，６−ナフタレンジカルボン
   酸を生成又は変換取得することを特徴とする２，６−ナ
   フタレンジカルボン酸の製造方法。
3. 【請求項３】 請求項１に示す菌学的性質を有するＳ１
   −２２−１８株を、２，６−ジメチルナフタレンを溶解
   した有機溶媒と培地からなる二相系において培養し、
   ２，６−ナフタレンジカルボン酸を生成させることを特
   徴とする２，６−ナフタレンジカルボン酸あるいはその
   塩の製造方法。
4. 【請求項４】 請求項１に示す菌学的性質を有するＳ１
   −２２−１８株を、２，６−ジメチルナフタレンを含む
   か、もしくは含まない培地で培養し、集菌後その菌体も
   しくは休止菌体、又はその処理物もしくは菌体由来の酵
   素を用いて、２，６−ジメチルナフタレンを含む有機溶
   媒と培地からなる二相系において反応させて、２，６−
   ナフタレンジカルボン酸を生成させるか、もしくは２，
   ６−ジメチルナフタレンを２，６−ナフタレンジカルボ
   ン酸に変換させることを特徴とする２，６−ナフタレン
   ジカルボン酸あるいはその塩の製造方法。
5. 【請求項５】 請求項１に示す菌学的性質を有するＳ１
   −２２−１８株を、２，６−ジメチルナフタレンを含む
   か、もしくは含まない培地で培養し、集菌後その菌体も
   しくは休止菌体、又はその処理物もしくは菌体由来の酵
   素を用いて、２，６−ジメチルナフタレンを含有する石
   油留分と培地からなる二相系において反応させて、２，
   ６−ナフタレンジカルボン酸を生成させるか、もしくは
   ２，６−ジメチルナフタレンを２，６−ナフタレンジカ
   ルボン酸に変換させることを特徴とする２，６−ナフタ
   レンジカルボン酸あるいはその塩の製造方法。
6. 【請求項６】 請求項５記載の石油留分が石油接触分解
   油であることを特徴とする２，６−ナフタレンジカルボ
   ン酸あるいはその塩の製造方法。