JPH0813267B2 - ビブリオ属に属する新規微生物 - Google Patents
ビブリオ属に属する新規微生物Info
- Publication number
- JPH0813267B2 JPH0813267B2 JP10974293A JP10974293A JPH0813267B2 JP H0813267 B2 JPH0813267 B2 JP H0813267B2 JP 10974293 A JP10974293 A JP 10974293A JP 10974293 A JP10974293 A JP 10974293A JP H0813267 B2 JPH0813267 B2 JP H0813267B2
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- microorganism
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、ビブリオ(Vibrio)属
に属する新規微生物に関し、更に詳しくはステロイド化
合物分解性及び有機溶媒耐性を有するビブリオ(Vibrio)
属に属する新規微生物に関する。
に属する新規微生物に関し、更に詳しくはステロイド化
合物分解性及び有機溶媒耐性を有するビブリオ(Vibrio)
属に属する新規微生物に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、難水溶性であり、親油性であるス
テロイド化合物を微生物分解してホルモン様物質に変換
させる場合には、ステロイド化合物を培地中に直接懸濁
させて微生物分解させるか、或は僅かのステロイド化合
物を溶媒に溶かして微生物分解させる方法が採用されて
いる。
テロイド化合物を微生物分解してホルモン様物質に変換
させる場合には、ステロイド化合物を培地中に直接懸濁
させて微生物分解させるか、或は僅かのステロイド化合
物を溶媒に溶かして微生物分解させる方法が採用されて
いる。
【０００３】しかしながら、前者の方法ではステロイド
化合物が溶解しないために、微生物との接触が不十分で
分解効率が悪い。
化合物が溶解しないために、微生物との接触が不十分で
分解効率が悪い。
【０００４】また、後者の場合も、ステロイド化合物と
微生物の接触はよくなるが、有機溶媒耐性がないため微
生物の反応性が抑制されるので、いずれの場合も分解効
率が極めて低かった。
微生物の接触はよくなるが、有機溶媒耐性がないため微
生物の反応性が抑制されるので、いずれの場合も分解効
率が極めて低かった。
【０００５】したがって、高濃度の有機溶媒に耐性を有
し、且つステロイド化合物分解性を兼ね備えた微生物が
嘱望されているが、このような機能を十分に備えた微生
物は未だ発見されていない。
し、且つステロイド化合物分解性を兼ね備えた微生物が
嘱望されているが、このような機能を十分に備えた微生
物は未だ発見されていない。
【０００６】また、ステロイド化合物としては、コレス
テロールが挙げられるが、コレステロールを効率よく分
解できることが要求されると共に、コレステロールを溶
解させる有機溶媒であるベンゼン、トルエン、キシレン
及びヘキサンに対する耐性も要求されるが、このような
機能を備えた微生物は、なおのこと見出されていない。
テロールが挙げられるが、コレステロールを効率よく分
解できることが要求されると共に、コレステロールを溶
解させる有機溶媒であるベンゼン、トルエン、キシレン
及びヘキサンに対する耐性も要求されるが、このような
機能を備えた微生物は、なおのこと見出されていない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】したがって、この発明
の目的は、ステロイド化合物分解性及び有機溶媒耐性に
優れた微生物を提供することにある。
の目的は、ステロイド化合物分解性及び有機溶媒耐性に
優れた微生物を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本願発明者等は、上記条
件を兼ね備えた微生物を見出すべく鋭意検討を重ねた結
果、北海道糖業株式会社北見製糖所敷地内の土壌から分
離された菌株、即ちビブリオ(Vibrio)属に属する菌株が
上記条件を兼ね備えていることを見出し、その発見に基
づいてこの発明を完成させたものである。
件を兼ね備えた微生物を見出すべく鋭意検討を重ねた結
果、北海道糖業株式会社北見製糖所敷地内の土壌から分
離された菌株、即ちビブリオ(Vibrio)属に属する菌株が
上記条件を兼ね備えていることを見出し、その発見に基
づいてこの発明を完成させたものである。
【０００９】即ち、この発明は、ステロイド化合物分解
性及び有機溶媒耐性を有するビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）
属に属する新規微生物を提供するもので、この新規微生
物の一つとしてビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）ｓｐ．Ｚ−２
株が挙げられ、この菌株の単離は、下記の方法によって
行った。
性及び有機溶媒耐性を有するビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）
属に属する新規微生物を提供するもので、この新規微生
物の一つとしてビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）ｓｐ．Ｚ−２
株が挙げられ、この菌株の単離は、下記の方法によって
行った。
【００１０】予め、土壌を50% のベンゼンで処理した
後、ベンゼン層に移行した細胞を酵母エキス0.5%、トリ
プトン1.0%、塩化ナトリウム0.5%、塩化カルシウム0.05
% 、塩化マグネシウム0.01% からなる培地（改変ＬＢ培
地と命名し、以下ＬＢ−II培地と記す）を基準に、更に
コレステロール0.5%及び寒天2.0%を添加した寒天培地で
培養し、コロニーの数株を得る。
後、ベンゼン層に移行した細胞を酵母エキス0.5%、トリ
プトン1.0%、塩化ナトリウム0.5%、塩化カルシウム0.05
% 、塩化マグネシウム0.01% からなる培地（改変ＬＢ培
地と命名し、以下ＬＢ−II培地と記す）を基準に、更に
コレステロール0.5%及び寒天2.0%を添加した寒天培地で
培養し、コロニーの数株を得る。
【００１１】これらの内コレステロールを分解してコロ
ニーの周りに透明帯を形成したものについて、更にコレ
ステロールが１％濃度となるように溶解した有機溶媒を
含むＬＢ−ＩＩ培地で培養し、培養後有機溶媒中のコレ
ステロール濃度の低下が最も大きいものを選択した。こ
れがこの発明の新規微生物であるビブリオ（Ｖｉｂｒｉ
ｏ）ｓｐ．Ｚ−２株である。
ニーの周りに透明帯を形成したものについて、更にコレ
ステロールが１％濃度となるように溶解した有機溶媒を
含むＬＢ−ＩＩ培地で培養し、培養後有機溶媒中のコレ
ステロール濃度の低下が最も大きいものを選択した。こ
れがこの発明の新規微生物であるビブリオ（Ｖｉｂｒｉ
ｏ）ｓｐ．Ｚ−２株である。
【００１２】この菌株は、生命工学工業技術研究所に平
成５年２月17日付けで寄託され、その微生物寄託番号
は、FERM P-13436（以下、Ｚ−２株と記す）であり、こ
の発明に係る微生物は上記Ｚ−２株のほか、自然的及び
人工的変異株をも含むものである。
成５年２月17日付けで寄託され、その微生物寄託番号
は、FERM P-13436（以下、Ｚ−２株と記す）であり、こ
の発明に係る微生物は上記Ｚ−２株のほか、自然的及び
人工的変異株をも含むものである。
【００１３】次に、この発明に係る微生物の菌学的性質
について詳細に説明すると、Ｚ−２株は次の菌学的諸性
質を有する。
について詳細に説明すると、Ｚ−２株は次の菌学的諸性
質を有する。
【００１４】（１）形態 大きさ：(0.5〜1.0)×(2.0〜5.0)μm の捍菌。胞子：形
成しない。 運動性：無し。グラム染色は陰性である。
成しない。 運動性：無し。グラム染色は陰性である。
【００１５】（２）生理学的性質 硝酸塩の還元 ：陽性 澱粉の加水分解 ：陽性 色素の生成 ：なし オキシダーゼ ：陽性 カタラーゼ ：陽性 生育範囲 pH ：5.5 〜10.0( 最適7.0) 温度 ：12〜50℃( 最適37℃) 酸素要求性 ：好気性 ＯＦテスト ：酸化的 糖類からの酸及び：酸を生成、ガスは生成しない。 ガスの発生
【００１６】（３）その他の性質 塩化ナトリウムの耐性：1.5 モル濃度まで生育 ゼラチンの加水分解 ：陽性 カゼインの加水分解 ：陽性 ＤＮａｓｅの産生 ：陽性 リパーゼ ：陽性 キチナーゼ ：陽性
【００１７】以上の菌学的性質からバージー・マニュア
ル第８巻の分類方法に従って、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉ
ｏ）属に属する新規の菌株であると判断し、ビブリオ
（Ｖｉｂｒｉｏ）ｓｐ．Ｚ−２株と命名した。
ル第８巻の分類方法に従って、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉ
ｏ）属に属する新規の菌株であると判断し、ビブリオ
（Ｖｉｂｒｉｏ）ｓｐ．Ｚ−２株と命名した。
【００１８】
【実施例】以下、この発明を実施例に基づいて詳細に説
明する。 実施例１ Ｚ−２株の採取方法 土壌10g にベンゼン10mlを添加し、30℃の温度で１時間
緩やかに浸盪培養を行った。培養後培養物を１時間静置
し、ベンゼン層と水層とに分離し、ベンゼン層の50μl
をコレステロール0.5%、硝酸カリウム0.5%及び寒天2.0%
を含むＬＢ−II寒天培地に塗抹し、37℃で７日間静置培
養を行った。
明する。 実施例１ Ｚ−２株の採取方法 土壌10g にベンゼン10mlを添加し、30℃の温度で１時間
緩やかに浸盪培養を行った。培養後培養物を１時間静置
し、ベンゼン層と水層とに分離し、ベンゼン層の50μl
をコレステロール0.5%、硝酸カリウム0.5%及び寒天2.0%
を含むＬＢ−II寒天培地に塗抹し、37℃で７日間静置培
養を行った。
【００１９】培養後、生育したコロニーの中で、コロニ
ーの周りに透明帯を生じたものを釣り菌し、単離後10ml
の硝酸カリウム0.5%を含むＬＢ−II培地に接種し、更に
1mg/ml濃度のコレステロールを含むベンゼン10mlを加
え、30℃で７日間浸盪培養を行った。これらの操作の
後、ベンゼン存在下で生育し、ベンゼン中のコレステロ
ールの濃度を最も低下させた菌株が、この発明のＺ−２
株である。
ーの周りに透明帯を生じたものを釣り菌し、単離後10ml
の硝酸カリウム0.5%を含むＬＢ−II培地に接種し、更に
1mg/ml濃度のコレステロールを含むベンゼン10mlを加
え、30℃で７日間浸盪培養を行った。これらの操作の
後、ベンゼン存在下で生育し、ベンゼン中のコレステロ
ールの濃度を最も低下させた菌株が、この発明のＺ−２
株である。
【００２０】実施例２ 有機培養耐性試験 菌体の前培養は、大型試験管にＬＢ−II培地10mlを入
れ、滅菌した後、上記前培養液0.5ml を接種し、更に下
記表１に示す濃度となるように各種有機溶媒を培地に重
層し、30℃で５日間激しく浸盪培養を行った。
れ、滅菌した後、上記前培養液0.5ml を接種し、更に下
記表１に示す濃度となるように各種有機溶媒を培地に重
層し、30℃で５日間激しく浸盪培養を行った。
【００２１】培養後、静置して有機溶媒層と培地層とを
分離し、Ｚ−２株の増殖に伴う培地層の濁度を分光光度
計を用いて、波長660nm のＯ・Ｄ（吸光度）で測定し、
その結果を下記表１に示す。
分離し、Ｚ−２株の増殖に伴う培地層の濁度を分光光度
計を用いて、波長660nm のＯ・Ｄ（吸光度）で測定し、
その結果を下記表１に示す。
【００２２】
【表１】
【００２３】実施例３ コレステロール分解試験（１） 前培養は、実施例２と同じ方法で行い、次に大型試験管
に硝酸カリウム0.5%を含むＬＢ−II培地10mlを入れ、滅
菌した後、上記前培養液0.05mlを接種し、更に1mg/mlの
濃度になるようコレステロールを添加した各種有機溶媒
0.5ml （コレステロール含有量0.5mg)を重層し、30℃で
10日間激しく浸盪培養を行った。
に硝酸カリウム0.5%を含むＬＢ−II培地10mlを入れ、滅
菌した後、上記前培養液0.05mlを接種し、更に1mg/mlの
濃度になるようコレステロールを添加した各種有機溶媒
0.5ml （コレステロール含有量0.5mg)を重層し、30℃で
10日間激しく浸盪培養を行った。
【００２４】培養後、１時間静置して溶媒層と培地層と
を分離し、そこに同種の有機溶媒を4.5ml 加えてから溶
媒層5.0ml を回収し、これに無水硫酸ナトリウム1gを加
えて一昼夜放置した。
を分離し、そこに同種の有機溶媒を4.5ml 加えてから溶
媒層5.0ml を回収し、これに無水硫酸ナトリウム1gを加
えて一昼夜放置した。
【００２５】この溶媒の2.5ml を採り、ロータリーエバ
ーポレーターで減圧乾固させた。この乾固物を再びクロ
ロホルム2.5ml にて溶解し、残存コレステロール量を測
定した。別に対照として
ーポレーターで減圧乾固させた。この乾固物を再びクロ
ロホルム2.5ml にて溶解し、残存コレステロール量を測
定した。別に対照として
【００２６】対照実験：菌体無接種とする以外は、同
様に操作し、上記実験と同様に処理して、残存コレステ
ロールを測定した。
様に操作し、上記実験と同様に処理して、残存コレステ
ロールを測定した。
【００２７】対照実験：上記実験と同培地に、予め加
熱滅菌したコレステロールを直接0.5mg 懸濁して培養し
た後、未分解コレステロールを5.0ml のクロロホルムで
抽出し、これに無水硫酸ナトリウム1gを加え、以下上記
実験同様に処理して、残存コレステロール量を測定し
た。
熱滅菌したコレステロールを直接0.5mg 懸濁して培養し
た後、未分解コレステロールを5.0ml のクロロホルムで
抽出し、これに無水硫酸ナトリウム1gを加え、以下上記
実験同様に処理して、残存コレステロール量を測定し
た。
【００２８】コレステロール分解率は、実験処理前後の
コレステロール量の差を処理前のコレステロール量で除
した数値を％として表示し、その結果を下記表２に示
す。
コレステロール量の差を処理前のコレステロール量で除
した数値を％として表示し、その結果を下記表２に示
す。
【００２９】
【表２】
【００３０】実施例４ コレステロール分解試験（２） 前培養液を遠心分離し、菌体を100mM リン酸ナトリウム
緩衝液(pH7.0) 10mlで２回洗浄した後、10mlの同緩衝液
を添加し、30℃で１週間浸盪培養を行った。培養後、１
時間静置して培地と有機溶媒とを分離した。
緩衝液(pH7.0) 10mlで２回洗浄した後、10mlの同緩衝液
を添加し、30℃で１週間浸盪培養を行った。培養後、１
時間静置して培地と有機溶媒とを分離した。
【００３１】この有機溶媒層に1gの無水硫酸ナトリウム
を加えてから一昼夜放置した。放置後、有機溶媒を5ml
採り、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固させた。こ
の乾固物を再びクロロホルム5ml に溶解し、残存コレス
テロール量を測定した。別に対照として
を加えてから一昼夜放置した。放置後、有機溶媒を5ml
採り、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固させた。こ
の乾固物を再びクロロホルム5ml に溶解し、残存コレス
テロール量を測定した。別に対照として
【００３２】対照実験：菌体無接種とする以外は、同
様に操作し、上記実験と同様に処理して、残存コレステ
ロール量を測定した。
様に操作し、上記実験と同様に処理して、残存コレステ
ロール量を測定した。
【００３３】対照実験：有機溶媒を使用しないでコレ
ステロール10mgを直接緩衝液10mlに懸濁し、上記と同様
の方法で浸盪培養を行い、培養後有機溶媒10mlでコレス
テロールを抽出し、無水硫酸ナトリウム1gを加え、以下
上記実験と同様に処理して、残存コレステロールを測定
した。 その結果を下記表３に示す。
ステロール10mgを直接緩衝液10mlに懸濁し、上記と同様
の方法で浸盪培養を行い、培養後有機溶媒10mlでコレス
テロールを抽出し、無水硫酸ナトリウム1gを加え、以下
上記実験と同様に処理して、残存コレステロールを測定
した。 その結果を下記表３に示す。
【００３４】
【表３】
【００３５】実施例５ 各種ステロイド化合物の分解試験 前培養は、実施例２と同じ方法で行い、ステロイド分解
試験は有機溶媒及びステロイド化合物を下記表４に示す
物を使用する以外は、実施例４と同じ方法で行い、その
結果を下記表４に示す。
試験は有機溶媒及びステロイド化合物を下記表４に示す
物を使用する以外は、実施例４と同じ方法で行い、その
結果を下記表４に示す。
【００３６】
【表４】
【００３７】
【発明の効果】この発明に係る微生物は、ステロイド化
合物分解性及び有機溶媒耐性に優れ、したがって有機溶
媒中に溶解された僅かなステロイド化合物の分解に利用
することができる。
合物分解性及び有機溶媒耐性に優れ、したがって有機溶
媒中に溶解された僅かなステロイド化合物の分解に利用
することができる。
Claims (1)
- 【請求項１】 ステロイド化合物分解性及び有機溶媒耐
性を有するビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）ｓｐ．Ｚ−２株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１３４３６）である新規微生物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10974293A JPH0813267B2 (ja) | 1993-04-14 | 1993-04-14 | ビブリオ属に属する新規微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10974293A JPH0813267B2 (ja) | 1993-04-14 | 1993-04-14 | ビブリオ属に属する新規微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06296484A JPH06296484A (ja) | 1994-10-25 |
| JPH0813267B2 true JPH0813267B2 (ja) | 1996-02-14 |
Family
ID=14518100
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10974293A Expired - Fee Related JPH0813267B2 (ja) | 1993-04-14 | 1993-04-14 | ビブリオ属に属する新規微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0813267B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003072762A1 (fr) * | 2002-02-26 | 2003-09-04 | Mercian Corporation | Bacteries rhodococcus utilisant du benzene et plasmide prepare au moyen de ces bacteries |
| KR102027295B1 (ko) * | 2017-08-08 | 2019-11-04 | 전남대학교산학협력단 | 키티나아제를 생산할 수 있는 신규한 살리니비브리오 속 균주 및 이의 용도 |
-
1993
- 1993-04-14 JP JP10974293A patent/JPH0813267B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06296484A (ja) | 1994-10-25 |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |