JP2731852B2 - リゾホスファチジルコリンの新規な製造法 - Google Patents
リゾホスファチジルコリンの新規な製造法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、ホスファチジルコリン含有率の高いリン脂
質をホスホリパーゼA2またはホスホリパーゼA2を含有す
る複合酵素を用いて加水分解するにあたり、該リン脂質
に対して１〜４倍モルの水の存在下、飽和炭化水素類、
芳香族炭化水素類、ケトン類、エステル類、環状エーテ
ル類、ニトリル類、ハロゲン化炭化水素類、アルコール
類またはこれら二種以上の混合有機溶媒中で反応させる
ことを特徴とするリゾホスファチジルコリンの製造法に
関する。
質をホスホリパーゼA2またはホスホリパーゼA2を含有す
る複合酵素を用いて加水分解するにあたり、該リン脂質
に対して１〜４倍モルの水の存在下、飽和炭化水素類、
芳香族炭化水素類、ケトン類、エステル類、環状エーテ
ル類、ニトリル類、ハロゲン化炭化水素類、アルコール
類またはこれら二種以上の混合有機溶媒中で反応させる
ことを特徴とするリゾホスファチジルコリンの製造法に
関する。
一般に、リゾホスファチジルコリンなどのリゾリン脂
質類は、免疫賦活作用および平滑筋の収縮に対する抑制
作用などの有用な作用を発揮することが知られ、さらに
ミセル状で水に極めて溶解しやすいことから、優れた界
面活性能を発揮することも知られている。そのため、こ
れらの優れた作用を発揮するリゾホスファチジルコリン
は、医薬品、農薬、食品および化粧品などの分野で使用
されている。
質類は、免疫賦活作用および平滑筋の収縮に対する抑制
作用などの有用な作用を発揮することが知られ、さらに
ミセル状で水に極めて溶解しやすいことから、優れた界
面活性能を発揮することも知られている。そのため、こ
れらの優れた作用を発揮するリゾホスファチジルコリン
は、医薬品、農薬、食品および化粧品などの分野で使用
されている。
本発明の目的は、ホスファチジルコリン含有率の高い
リン脂質をホスホリパーゼA2またはホスホリパーゼA2を
含有する複合酵素を用いて加水分解するにあたり、該リ
ン脂質に対して１〜４倍モルの水の存在下、飽和炭化水
素類、芳香族炭化水素類、ケトン類、エステル類、環状
エーテル類、ニトリル類、ハロゲン化炭化水素類、アル
コール類またはこれら二種以上の混合有機溶媒中で反応
させることにより、高純度のリゾホスファチジルコリン
を得る工業的製造法を提供することにある。
リン脂質をホスホリパーゼA2またはホスホリパーゼA2を
含有する複合酵素を用いて加水分解するにあたり、該リ
ン脂質に対して１〜４倍モルの水の存在下、飽和炭化水
素類、芳香族炭化水素類、ケトン類、エステル類、環状
エーテル類、ニトリル類、ハロゲン化炭化水素類、アル
コール類またはこれら二種以上の混合有機溶媒中で反応
させることにより、高純度のリゾホスファチジルコリン
を得る工業的製造法を提供することにある。
［従来の技術］ 従来、ホスファチジルコリンを酵素反応に付してリゾ
ホスファチジルコリンを得る方法としては、たとえば、
以下に示すものが知られている。
ホスファチジルコリンを得る方法としては、たとえば、
以下に示すものが知られている。
（１）天然型ホスファチジルコリンにジエチルエーテル
またはジエチルエーテルとエタノールの混合溶媒（容量
比;50:1または25:1）を加え、これにパンクレアチンを
作用させてリゾホスファチジルコリンを得る方法。［デ
ィ・ジェー・ハナハン（D.J.Hanahan），ジャーナル・
オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J.Biol.Chem.）
第195巻、第199〜206頁（1952）］ （２）リン脂質１重量部に対して水分を0.1〜1.0重量部
添加し、ホスホリパーゼＡを用いて、リン脂質を加水分
解する方法。［特開昭63−44893号］ ［発明が解決しようとする課題］ 上記（１）の方法は、酵素と基質（ホスファチジルコ
リン）との複合体をジエチルエーテルで抽出し、ジエチ
ルエーテルまたはジエチルエーテルとエタノールの混合
溶媒中で反応させる方法である。しかし、この方法は、
引火性の強いジエチルエーテルを基質（ホスファチジル
コリン）に対して多量に用いるので、工業的製造法とし
ては好ましくない。
またはジエチルエーテルとエタノールの混合溶媒（容量
比;50:1または25:1）を加え、これにパンクレアチンを
作用させてリゾホスファチジルコリンを得る方法。［デ
ィ・ジェー・ハナハン（D.J.Hanahan），ジャーナル・
オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J.Biol.Chem.）
第195巻、第199〜206頁（1952）］ （２）リン脂質１重量部に対して水分を0.1〜1.0重量部
添加し、ホスホリパーゼＡを用いて、リン脂質を加水分
解する方法。［特開昭63−44893号］ ［発明が解決しようとする課題］ 上記（１）の方法は、酵素と基質（ホスファチジルコ
リン）との複合体をジエチルエーテルで抽出し、ジエチ
ルエーテルまたはジエチルエーテルとエタノールの混合
溶媒中で反応させる方法である。しかし、この方法は、
引火性の強いジエチルエーテルを基質（ホスファチジル
コリン）に対して多量に用いるので、工業的製造法とし
ては好ましくない。
また、上記以外の溶媒、たとえば、95％エタノール、
クロロホルム、石油エーテル中などで上記（１）の方法
を適用しても反応は進行しないことがこの文献に記載さ
れている。
クロロホルム、石油エーテル中などで上記（１）の方法
を適用しても反応は進行しないことがこの文献に記載さ
れている。
また、上記（２）の方法を具体的に述べると、リン脂
質をホスホリパーゼＡを用いて、加水分解する際に、リ
ン脂質１重量部に対して水分を0.1〜1.0重量部添加し、
分散させた後、静置下で反応させる方法である。
質をホスホリパーゼＡを用いて、加水分解する際に、リ
ン脂質１重量部に対して水分を0.1〜1.0重量部添加し、
分散させた後、静置下で反応させる方法である。
しかし、この公開公報に具体的に開示されている原料
リン脂質含有率は65〜86％であり、しかもこの公開公報
で「含有率」と称しているのは、ホスファチジルコリ
ン、ホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチ
ジルイノシトールなどの合計の含有率を示しているの
で、ホスファチジルコリンの含有率が65〜86％であるこ
とを意味するものではない。この公開公報で特に具体的
に開示されている市販粉末脱脂レシチン（ツルーレシチ
ン工業製）もホスファチジルコリンの含有率が低いリン
脂質である。この公開公報に開示されているようなホス
ファチジルコリン含有率が低い原料リン脂質を用いて酵
素反応に付し、リゾホスファチジルコリンを単離するこ
とは容易ではない。そこで、このような方法で高純度の
リゾホスファチジルコリンを単離するためには、カラム
クロマトグラフィー、向流分配法などの煩雑な精製操作
が要求される。
リン脂質含有率は65〜86％であり、しかもこの公開公報
で「含有率」と称しているのは、ホスファチジルコリ
ン、ホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチ
ジルイノシトールなどの合計の含有率を示しているの
で、ホスファチジルコリンの含有率が65〜86％であるこ
とを意味するものではない。この公開公報で特に具体的
に開示されている市販粉末脱脂レシチン（ツルーレシチ
ン工業製）もホスファチジルコリンの含有率が低いリン
脂質である。この公開公報に開示されているようなホス
ファチジルコリン含有率が低い原料リン脂質を用いて酵
素反応に付し、リゾホスファチジルコリンを単離するこ
とは容易ではない。そこで、このような方法で高純度の
リゾホスファチジルコリンを単離するためには、カラム
クロマトグラフィー、向流分配法などの煩雑な精製操作
が要求される。
さらにまた、この方法を本発明方法の原料であるホス
ファチジルコリン含有率の高いリン脂質、たとえば、ホ
スファチジルコリン含有率95％以上のリン脂質に適用す
ると、水の添加量がリン脂質１重量部に対して0.1〜1.0
重量部の場合、反応開始のための分散を充分に行うこと
が困難であるため、極めて反応率が低く、目的とする高
純度のリゾホスファチジルコリンを得るには上記したと
同様煩雑な精製操作が要求される。また、分散性を高め
るために水の添加量を増大させると反応速度が遅くな
り、反応を完結させるためには酵素の増量、高温などの
過酷な条件が要求される。
ファチジルコリン含有率の高いリン脂質、たとえば、ホ
スファチジルコリン含有率95％以上のリン脂質に適用す
ると、水の添加量がリン脂質１重量部に対して0.1〜1.0
重量部の場合、反応開始のための分散を充分に行うこと
が困難であるため、極めて反応率が低く、目的とする高
純度のリゾホスファチジルコリンを得るには上記したと
同様煩雑な精製操作が要求される。また、分散性を高め
るために水の添加量を増大させると反応速度が遅くな
り、反応を完結させるためには酵素の増量、高温などの
過酷な条件が要求される。
さらに、この方法では、リン脂質中のホスファチジル
コリン含有率の高低にかかわらず目的物中に酵素などの
タンパク質類が混入することがあるため、後処理が極め
て煩雑である。
コリン含有率の高低にかかわらず目的物中に酵素などの
タンパク質類が混入することがあるため、後処理が極め
て煩雑である。
したがって、この公開公報に開示されているリン脂質
を酵素により加水分解する方法は、工業的製造法として
好ましくない。
を酵素により加水分解する方法は、工業的製造法として
好ましくない。
従来法にはこれらの欠点があるため、医薬品、農薬、
食品および化粧品などの分野で使用するための高純度の
リゾホスファチジルコリンの工業的製造法の開発が望ま
れていた。
食品および化粧品などの分野で使用するための高純度の
リゾホスファチジルコリンの工業的製造法の開発が望ま
れていた。
［課題を解決するための手段］ 本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を
行った結果、ホスファチジルコリン含有率の高いリン脂
質をホスホリパーゼA2またはホスホリパーゼA2を含有す
る複合酵素を用いて加水分解するにあたり、該リン脂質
に対して１〜４倍モル（約0.02〜0.09倍重量部に相当す
る）の水の存在下、飽和炭化水素類、芳香族炭化水素
類、ケトン類、エステル類、環状エーテル類、ニトリル
類、ハロゲン化炭化水素類、アルコール類またはこれら
二種以上の混合有機溶媒中で反応させれば、加水分解に
よる円滑な脱アシル化が進行して反応率が高くなり、ま
た水の添加量が少ないため酵素の濾去することができる
こと、および生成したリゾホスファチジルコリンを反応
系内から容易に分離することができ、かつ再結晶のよう
な通常の精製操作によって精製できることを見出し、本
発明を完成するに至った。
行った結果、ホスファチジルコリン含有率の高いリン脂
質をホスホリパーゼA2またはホスホリパーゼA2を含有す
る複合酵素を用いて加水分解するにあたり、該リン脂質
に対して１〜４倍モル（約0.02〜0.09倍重量部に相当す
る）の水の存在下、飽和炭化水素類、芳香族炭化水素
類、ケトン類、エステル類、環状エーテル類、ニトリル
類、ハロゲン化炭化水素類、アルコール類またはこれら
二種以上の混合有機溶媒中で反応させれば、加水分解に
よる円滑な脱アシル化が進行して反応率が高くなり、ま
た水の添加量が少ないため酵素の濾去することができる
こと、および生成したリゾホスファチジルコリンを反応
系内から容易に分離することができ、かつ再結晶のよう
な通常の精製操作によって精製できることを見出し、本
発明を完成するに至った。
以下、本発明を詳細に説明する。
ホスファチジルコリン含有率の高いリン脂質として
は、たとえば、卵黄、大豆または動物組織など天然由来
のリン脂質で、ホスファチジルコリン含有率が95％以上
のリン脂質が挙げられる。
は、たとえば、卵黄、大豆または動物組織など天然由来
のリン脂質で、ホスファチジルコリン含有率が95％以上
のリン脂質が挙げられる。
ホスホリパーゼA2を含有する複合酵素としては、たと
えば、ホスホリパーゼA2活性を有する膵臓抽出酵素パン
クレアチンなどの複合酵素が挙げられ、ホスホリパーゼ
A2またはホスホリパーゼA2を含有する複合酵素の使用量
は、好ましくは、リン脂質1gに対して20〜500ユニット
である。
えば、ホスホリパーゼA2活性を有する膵臓抽出酵素パン
クレアチンなどの複合酵素が挙げられ、ホスホリパーゼ
A2またはホスホリパーゼA2を含有する複合酵素の使用量
は、好ましくは、リン脂質1gに対して20〜500ユニット
である。
本反応に使用される有機溶媒における飽和炭化水素類
としては、たとえば、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、
オクタン、イソオクタンおよびシクロヘキサンなどのＣ
５〜８の鎖状または環状の飽和炭化水素類；芳香族炭化
水素類としては、たとえば、ベンゼン、トルエンおよび
キシレンなどのＣ１〜５アルキル基で置換されていても
よいベンゼン類；ケトン類としては、たとえば、アセト
ン、メチルエチルケトン、ジエチルケトンおよびメチル
イソブチルケトンなどのジ−C1〜５アルキルケトン類；
エステル類としては、たとえば、ギ酸メチル、酢酸エチ
ル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ−ブ
チル、プロピオン酸メチル、プロピオン酸エチル、プロ
ピオン酸ｎ−プロピルおよびｎ−プロピオン酸ｎ−ブチ
ルなどのＣ１〜５脂肪族カルボン酸のＣ１〜５アルキル
エステル類；環状エーテル類としては、たとえば、テト
ラヒドロフランおよびジオキサンなどの５〜６員環状エ
ーテル類；ニトリル類としては、たとえば、アセトニト
リル、プロピオニトリルおよびブチロニトリルなどのＣ
１〜５アルキルニトリル類；ハロゲン化炭化水素類とし
ては、たとえば、塩化メチレン、クロロホルム、ジクロ
ロエタンおよびトリクロロエタンなどのハロゲン化Ｃ
１〜５の鎖状の炭化水素類；アルコール類としては、た
とえば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソ
プロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、sec
−ブタノール、tert−ブタノールおよびアミルアルコー
ルなどのＣ１〜５脂肪族アルコール類が挙げられ、これ
らは二種以上混合してもよい。
としては、たとえば、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、
オクタン、イソオクタンおよびシクロヘキサンなどのＣ
５〜８の鎖状または環状の飽和炭化水素類；芳香族炭化
水素類としては、たとえば、ベンゼン、トルエンおよび
キシレンなどのＣ１〜５アルキル基で置換されていても
よいベンゼン類；ケトン類としては、たとえば、アセト
ン、メチルエチルケトン、ジエチルケトンおよびメチル
イソブチルケトンなどのジ−C1〜５アルキルケトン類；
エステル類としては、たとえば、ギ酸メチル、酢酸エチ
ル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ−ブ
チル、プロピオン酸メチル、プロピオン酸エチル、プロ
ピオン酸ｎ−プロピルおよびｎ−プロピオン酸ｎ−ブチ
ルなどのＣ１〜５脂肪族カルボン酸のＣ１〜５アルキル
エステル類；環状エーテル類としては、たとえば、テト
ラヒドロフランおよびジオキサンなどの５〜６員環状エ
ーテル類；ニトリル類としては、たとえば、アセトニト
リル、プロピオニトリルおよびブチロニトリルなどのＣ
１〜５アルキルニトリル類；ハロゲン化炭化水素類とし
ては、たとえば、塩化メチレン、クロロホルム、ジクロ
ロエタンおよびトリクロロエタンなどのハロゲン化Ｃ
１〜５の鎖状の炭化水素類；アルコール類としては、た
とえば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソ
プロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、sec
−ブタノール、tert−ブタノールおよびアミルアルコー
ルなどのＣ１〜５脂肪族アルコール類が挙げられ、これ
らは二種以上混合してもよい。
有機溶媒の使用量は、特に限定されないが、有機溶媒
の種類、操作性などにより適宜選択することができ、通
常、ホスファチジルコリン含有率の高いリン脂質に対し
て0.5〜５倍量（容量／重量）で十分である。
の種類、操作性などにより適宜選択することができ、通
常、ホスファチジルコリン含有率の高いリン脂質に対し
て0.5〜５倍量（容量／重量）で十分である。
また、水の添加量は、ホスファチジルコリン含有率の
高いリン脂質に対して１〜４倍モルが好ましい。さら
に、本発明方法の最適pHは５〜９であるため、pH5〜９
を維持するために緩衝液を使用することもできる。な
お、緩衝液を使用する場合、水の添加量は緩衝液の中の
水も含むものである。
高いリン脂質に対して１〜４倍モルが好ましい。さら
に、本発明方法の最適pHは５〜９であるため、pH5〜９
を維持するために緩衝液を使用することもできる。な
お、緩衝液を使用する場合、水の添加量は緩衝液の中の
水も含むものである。
さらに、酵素活性を高めるためにカルシウムイオンを
ホスファチジルコリン含有率の高いリン脂質に対して0.
01〜0.2倍モル程度添加してもよい。
ホスファチジルコリン含有率の高いリン脂質に対して0.
01〜0.2倍モル程度添加してもよい。
本発明において、緩衝液またはカルシウムイオンを添
加して酵素反応を行った場合、反応終了後、イオン交換
または酸アルカリ処理などの通常の操作によって、使用
した緩衝液またはカルシウムイオンをそれぞれ容易に除
去することができる。
加して酵素反応を行った場合、反応終了後、イオン交換
または酸アルカリ処理などの通常の操作によって、使用
した緩衝液またはカルシウムイオンをそれぞれ容易に除
去することができる。
反応温度は、20℃〜80℃が好ましく、また、反応時間
は、反応温度、酵素の使用量、有機溶媒の種類などによ
っても異なるが、通常、30分〜20時間で十分である。
は、反応温度、酵素の使用量、有機溶媒の種類などによ
っても異なるが、通常、30分〜20時間で十分である。
［発明の効果］ 反応終了後、生成したリゾホスファチジルコリンを含
有する反応液に、たとえば、前記したと同様のアルコー
ル類および／またはハロゲン化炭化水素類などのリゾホ
スファチジルコリンが可溶な有機溶媒（これらは、反応
溶媒として使用されていてもよい）を添加し、過する
ことによって酵素を容易に去することができる。所望
により酵素を去した液を常圧または減圧下で適宜濃
縮した後、冷却すれば、リゾホスファチジルコリンを晶
出させることができる。
有する反応液に、たとえば、前記したと同様のアルコー
ル類および／またはハロゲン化炭化水素類などのリゾホ
スファチジルコリンが可溶な有機溶媒（これらは、反応
溶媒として使用されていてもよい）を添加し、過する
ことによって酵素を容易に去することができる。所望
により酵素を去した液を常圧または減圧下で適宜濃
縮した後、冷却すれば、リゾホスファチジルコリンを晶
出させることができる。
また、酵素を去した液またはこの液を濃縮した
濃縮液に、リゾホスファチジルコリンが不溶な有機溶
媒、たとえば、アセトンなどを添加することによって、
リゾホスファチジルコリンを晶出させることもできる。
濃縮液に、リゾホスファチジルコリンが不溶な有機溶
媒、たとえば、アセトンなどを添加することによって、
リゾホスファチジルコリンを晶出させることもできる。
本発明方法によれば、添加する水の量が少ないので、
リゾホスファチジルコリンと酵素との分離が容易であ
り、そのため酵素の混入が少なく、また、反応率が高い
ため、未反応のホスファチジルコリンの混入が少ない。
その結果、生成したリゾホスファチジルコリンを通常の
精製操作によって精製でき、高純度のリゾホスファチジ
ルコリンを得ることができる。
リゾホスファチジルコリンと酵素との分離が容易であ
り、そのため酵素の混入が少なく、また、反応率が高い
ため、未反応のホスファチジルコリンの混入が少ない。
その結果、生成したリゾホスファチジルコリンを通常の
精製操作によって精製でき、高純度のリゾホスファチジ
ルコリンを得ることができる。
本発明方法は、ケトン類もしくはエステル類中、また
は少なくともケトン類および／もしくはアルコール類を
含有する混合有機溶媒中で実施するのが好ましい。
は少なくともケトン類および／もしくはアルコール類を
含有する混合有機溶媒中で実施するのが好ましい。
特に、本発明方法をアルコール類を含有する混合有機
溶媒中でパンクレアチンを用いて行った場合、水の添加
量が少ないため、加水分解反応によって生成する副生成
物である脂肪酸の大部分が、混合有機溶媒中のアルコー
ルとのエステルに変換されるので、アルコール類を含有
しない有機溶媒を用いて行った場合には除去しにくい脂
肪酸が、たとえば、脂肪酸エステルとして再結晶などの
後処理により除去しやすくなる利点を有する。
溶媒中でパンクレアチンを用いて行った場合、水の添加
量が少ないため、加水分解反応によって生成する副生成
物である脂肪酸の大部分が、混合有機溶媒中のアルコー
ルとのエステルに変換されるので、アルコール類を含有
しない有機溶媒を用いて行った場合には除去しにくい脂
肪酸が、たとえば、脂肪酸エステルとして再結晶などの
後処理により除去しやすくなる利点を有する。
［実施例］ つぎに、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明す
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。
なお、実施例および比較例において使用されているホ
スファチジルコリンとしては、卵黄ホスファチジルコリ
ン（純度99.5％；旭化成社製）を、また、ホスホリパー
ゼA2を含有する複合酵素としては、パンクレアチン原末
（天野制薬社製）を用いた。
スファチジルコリンとしては、卵黄ホスファチジルコリ
ン（純度99.5％；旭化成社製）を、また、ホスホリパー
ゼA2を含有する複合酵素としては、パンクレアチン原末
（天野制薬社製）を用いた。
また、ホスホリパーゼA2による反応率（ホスファチジ
ルコリンがリゾホスファチジルコリンに変換した割合）
は、イアトロスキャン（薄層クロマトグラフィー−水素
炎イオン化法）による分析によって求めた。その際、ホ
スファチジルコリンおよびリゾホスファチジルコリンの
平均分子量は、文献上知られた脂肪酸構成比より算出
し、卵黄ホスファチジルコリンの平均分子量を774、リ
ゾホスファチジルコリンの平均分子量を504とした。
ルコリンがリゾホスファチジルコリンに変換した割合）
は、イアトロスキャン（薄層クロマトグラフィー−水素
炎イオン化法）による分析によって求めた。その際、ホ
スファチジルコリンおよびリゾホスファチジルコリンの
平均分子量は、文献上知られた脂肪酸構成比より算出
し、卵黄ホスファチジルコリンの平均分子量を774、リ
ゾホスファチジルコリンの平均分子量を504とした。
また、得られたリゾホスファチジルコリンの純度は、
イアトロスキャンによって求めた。
イアトロスキャンによって求めた。
また、実施例中の混合液の混合比は、特に断らない限
り容量比を示す。
り容量比を示す。
参考例 パンクレアチン原末中のホスホリパーゼA2活性の測定 以下の実施例および比較例で使用されているパンクレ
アチン原末中のホスホリパーゼA2活性は、パンクレアチ
ン原末中の他の酵素、たとえば、リパーゼ、タンパク分
解酵素などの影響を除去するため、卵黄レシチン（旭化
成社製）に対して10倍量の水を加え超音波（19KHz）で
処理した卵黄レシチン混合物を用いて、バイオシミカ・
バイオフィジカ・アクタ（Biochim.Biophys.Acta）第15
9巻、第103〜117頁（1968年）に記載の卵黄エマルジョ
ンを用いる方法に準じて測定した。その結果、パンクレ
アチン原末（天野製薬社製）のホスホリパーゼA2活性
は、約0.7ユニット/mgであった。
アチン原末中のホスホリパーゼA2活性は、パンクレアチ
ン原末中の他の酵素、たとえば、リパーゼ、タンパク分
解酵素などの影響を除去するため、卵黄レシチン（旭化
成社製）に対して10倍量の水を加え超音波（19KHz）で
処理した卵黄レシチン混合物を用いて、バイオシミカ・
バイオフィジカ・アクタ（Biochim.Biophys.Acta）第15
9巻、第103〜117頁（1968年）に記載の卵黄エマルジョ
ンを用いる方法に準じて測定した。その結果、パンクレ
アチン原末（天野製薬社製）のホスホリパーゼA2活性
は、約0.7ユニット/mgであった。
実施例１ ホスファチジルコリン10.00gにアセトンおよびｎ−ブ
タノールの混合液（2:1）10mlを加え、50℃で攪拌して
溶解させる。これにパンクレアチン原末4.0gおよび蒸留
水0.81mlを加え、同温度で８時間攪拌する。ついで、こ
の反応混合物にｎ−ブタノール30mlを加え、得られた混
合物を40℃で10分間攪拌する。この反応混合物にセライ
トを加えて過し、さらにセライト上をｎ−ブタノール
10mlで洗浄する。液を合わせ、この液の一部をサン
プリングしてイアトロスキャンで分析したところ、反応
率は97％であった。
タノールの混合液（2:1）10mlを加え、50℃で攪拌して
溶解させる。これにパンクレアチン原末4.0gおよび蒸留
水0.81mlを加え、同温度で８時間攪拌する。ついで、こ
の反応混合物にｎ−ブタノール30mlを加え、得られた混
合物を40℃で10分間攪拌する。この反応混合物にセライ
トを加えて過し、さらにセライト上をｎ−ブタノール
10mlで洗浄する。液を合わせ、この液の一部をサン
プリングしてイアトロスキャンで分析したところ、反応
率は97％であった。
液にアセトン120mlを50℃で10分間攪拌下に滴下
し、徐冷した後、氷冷し、析出した結晶を取する。こ
の結晶をアセトン10mlで洗浄し、デシケーター中で乾燥
すれば、ほとんど無色の結晶としてリゾホスファチジル
コリン4.94g（純度98％）を得る。
し、徐冷した後、氷冷し、析出した結晶を取する。こ
の結晶をアセトン10mlで洗浄し、デシケーター中で乾燥
すれば、ほとんど無色の結晶としてリゾホスファチジル
コリン4.94g（純度98％）を得る。
実施例２ ホスファチジルコリン10.00gにアセトンおよびｎ−ブ
タノールの混合液（2:1）10mlを加え、50℃で攪拌して
溶解させる。これにパンクレアチン原末3.0g、蒸留水0.
25mlおよび塩化カルシウム0.20gを加え、同温度で８時
間攪拌する。ついで、実施例１と同様に後処理し、液
の一部をイアトロスキャンで分析したところ、反応率は
98％であった。
タノールの混合液（2:1）10mlを加え、50℃で攪拌して
溶解させる。これにパンクレアチン原末3.0g、蒸留水0.
25mlおよび塩化カルシウム0.20gを加え、同温度で８時
間攪拌する。ついで、実施例１と同様に後処理し、液
の一部をイアトロスキャンで分析したところ、反応率は
98％であった。
実施例３ ホスファチジルコリン10.00gにアセトンおよびｎ−ブ
タノールの混合液（2:1）10mlを加え、50℃で攪拌して
溶解させる。これにパンクレアチン原末4.0gおよび蒸留
水0.81mlを加え、50℃で８時間攪拌する。この反応混合
物にｎ−ブタノール50mlを加え、得られた混合物を30℃
で10分間攪拌する。この反応混合物にセライトを加えて
過し、さらにセライト上をｎ−ブタノール10mlで洗浄
する。液を合わせ、この液の一部をサンプリングし
てイアトロスキャンで分析したところ、反応率は97％で
あった。
タノールの混合液（2:1）10mlを加え、50℃で攪拌して
溶解させる。これにパンクレアチン原末4.0gおよび蒸留
水0.81mlを加え、50℃で８時間攪拌する。この反応混合
物にｎ−ブタノール50mlを加え、得られた混合物を30℃
で10分間攪拌する。この反応混合物にセライトを加えて
過し、さらにセライト上をｎ−ブタノール10mlで洗浄
する。液を合わせ、この液の一部をサンプリングし
てイアトロスキャンで分析したところ、反応率は97％で
あった。
液に蒸留水35mlを加え、攪拌した後、上層を分取す
る。一方、下層にｎ−ブタノール5mlを加え、攪拌した
後、上層を分取する。この上層を先の上層と合わせ、減
圧下に50mlまで濃縮した後、ｎ−ブタノール40mlを加
え、減圧下に50mlまで濃縮する。濃縮液を50℃に維持し
ながら、これにアセトン100mlを滴下し、徐冷した後、
析出した結晶を取する。この結晶をアセトン10mlで洗
浄し、デシケーター中で乾燥すれば、ほとんど無色の結
晶としてリゾホスファチジルコリン5.43g（純度99.6
％）を得る。
る。一方、下層にｎ−ブタノール5mlを加え、攪拌した
後、上層を分取する。この上層を先の上層と合わせ、減
圧下に50mlまで濃縮した後、ｎ−ブタノール40mlを加
え、減圧下に50mlまで濃縮する。濃縮液を50℃に維持し
ながら、これにアセトン100mlを滴下し、徐冷した後、
析出した結晶を取する。この結晶をアセトン10mlで洗
浄し、デシケーター中で乾燥すれば、ほとんど無色の結
晶としてリゾホスファチジルコリン5.43g（純度99.6
％）を得る。
この結晶を５倍容量のエタノールから再結晶すれば、
無色のリゾホスファチジルコリン4.74g（純度99.9％）
を得る。
無色のリゾホスファチジルコリン4.74g（純度99.9％）
を得る。
実施例４ アセトン−ｎ−ブタノール（2:1;10ml）の代わりに、
ｎ−ヘキサン−ｎ−ブタノール（2:1;10ml）、アセトニ
トリル−ｎ−ブタノール（2:1;10ml）、アセトン−クロ
ロホルム（2:1;10ml）、ジエチルケトン（10ml）、メチ
ルエチルケトン（20ml）または酢酸イソプロピル（15m
l）を用いて実施例３と同様に反応させ、液の一部を
イアトロスキャンで分析したところ、反応率は96〜99％
であった。
ｎ−ヘキサン−ｎ−ブタノール（2:1;10ml）、アセトニ
トリル−ｎ−ブタノール（2:1;10ml）、アセトン−クロ
ロホルム（2:1;10ml）、ジエチルケトン（10ml）、メチ
ルエチルケトン（20ml）または酢酸イソプロピル（15m
l）を用いて実施例３と同様に反応させ、液の一部を
イアトロスキャンで分析したところ、反応率は96〜99％
であった。
ついで実施例３と同様に後処理を行い、再結晶すれ
ば、リゾホスファチジルコリン4.60〜4.75g（純度99.7
〜99.9％）を得る。
ば、リゾホスファチジルコリン4.60〜4.75g（純度99.7
〜99.9％）を得る。
比較例１ ホスファチジルコリン10.00gにパンクレアチン原末4.
0gおよび蒸留水0.81mlを加え、50℃で８時間攪拌する。
反応液をイアトロスキャンで分析したところ、反応率は
52％であった。
0gおよび蒸留水0.81mlを加え、50℃で８時間攪拌する。
反応液をイアトロスキャンで分析したところ、反応率は
52％であった。
比較例２ ホスファチジルコリン10.00gにパンクレアチン原末4.
0gおよび蒸留水5.0mlを加え、50℃で８時間攪拌する。
反応液をイアトロスキャンで分析したところ、反応率は
34％であった。
0gおよび蒸留水5.0mlを加え、50℃で８時間攪拌する。
反応液をイアトロスキャンで分析したところ、反応率は
34％であった。
比較例３ ホスファチジルコリン10.00gにパンクレアチン原末4.
0gおよび蒸留水30mlを加え、50℃で８時間攪拌する。反
応液をイアトロスキャンで分析したところ、反応率は７
％であった。
0gおよび蒸留水30mlを加え、50℃で８時間攪拌する。反
応液をイアトロスキャンで分析したところ、反応率は７
％であった。
Claims (4)
- 【請求項１】ホスファチジルコリン含有率の高いリン脂
質をホスホリパーゼA2またはホスホリパーゼA2を含有す
る複合酵素を用いて加水分解するにあたり、該リン脂質
に対して１〜４倍モルの水の存在下、飽和炭化水素類、
芳香族炭化水素類、ケトン類、エステル類、環状エーテ
ル類、ニトリル類、ハロゲン化炭化水素類、アルコール
類またはこれら二種以上の混合有機溶媒中で反応させる
ことを特徴とするリゾホスファチジルコリンの製造法。 - 【請求項２】ケトン類またはエステル類中で反応させる
ことを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載のリゾ
ホスファチジルコリンの製造法。 - 【請求項３】飽和炭化水素類、芳香族炭化水素類、ケト
ン類、エステル類、環状エーテル類、ニトリル類、ハロ
ゲン化炭化水素類およびアルコール類から選ばれる二種
以上の混合有機溶媒中で反応させることを特徴とする特
許請求の範囲第（１）項記載のリゾホスファチジルコリ
ンの製造法。 - 【請求項４】混合有機溶媒が少なくともケトン類および
／またはアルコール類を含有することを特徴とする特許
請求の範囲第（３）項記載のリゾホスファチジルコリン
の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26699188A JP2731852B2 (ja) | 1988-10-22 | 1988-10-22 | リゾホスファチジルコリンの新規な製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26699188A JP2731852B2 (ja) | 1988-10-22 | 1988-10-22 | リゾホスファチジルコリンの新規な製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02113891A JPH02113891A (ja) | 1990-04-26 |
| JP2731852B2 true JP2731852B2 (ja) | 1998-03-25 |
Family
ID=17438546
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26699188A Expired - Fee Related JP2731852B2 (ja) | 1988-10-22 | 1988-10-22 | リゾホスファチジルコリンの新規な製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2731852B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100331932B1 (ko) * | 1999-11-30 | 2002-04-09 | 최승철 | 리소포스파티딜에탄올아민의 제조방법 |
| DE102004002053A1 (de) * | 2004-01-15 | 2005-08-04 | Bioghurt Biogarde Gmbh & Co. Kg | Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserin und dessen Reinigung durch Extraktion |
| CN114644649B (zh) * | 2020-12-21 | 2023-10-24 | 广州白云山汉方现代药业有限公司 | 一种从蛋黄粉中提取高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法 |
-
1988
- 1988-10-22 JP JP26699188A patent/JP2731852B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02113891A (ja) | 1990-04-26 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |