JPS63123389A - 酵素法リン脂質−ｄ−セリン誘導体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は酵素法によるリン脂質−ｄ−セリン誘導体の製
造法、更に詳しくは基質となるリン脂質と受応体と成る
非天然型のｄ−セリンとを従来酵素法で使用されたキャ
ベツ由来のホスホリパーゼＤ等では生起しない転移反応
をホスホリパーゼＤＭの存在下に転移反応させ非天然型
のリン脂質−ｄ−セリン誘導体を製造する方法に関する
。

尚、本発明に於いて、リン脂質−ｄ−セリン誘導体とは
、出発基質であるリン脂質のリン酸構造部分と該リン脂
質の塩基、若しくはアルコール構造部分とのエステル結
合をホスホリパーゼＤＭの作用で加水分解すると同時に
上記反応に用いるｄ−セリンへ転移させて誘導した新し
いリン脂質誘導体を意味する。

〔従来の技術〕

ホスファチシールセリンはアミノ酸含有リン脂質として
特に脳、神経系、赤血球膜等に分布していることがよく
知られているが天然に存在するホスファチシールセリン
は全てホスファチジ−ルーｌ−セリンであり、このこと
は天然に存在するアミノ酸が全てｌ型であることと一致
している。従って天然には非天然型のｄ−セリンを含有
するホスファチジールーｄ−セリンの存在は知られてい
ない。ホスファチジ−ルーｌ−セリンを得る方法として
は上記したごとき生体より分離する以外にはキャベツ由
来のホスホリパーゼＤ転移反応によるレシチンとｌ−セ
リンからの酵素合成法が知られている。（Ｐ、　ＣＯＭ
ＦＵＲＩＵＳ　ａｎｄ　Ｒ，Ｆ、Ａ、　ＺＷＡＡＬ、旧
ｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、　　八ｃｔａ、　　４８
８．　３６（１９７７））、　　（ＴＡＫＡＯＴＡＫＩ
、　ＴＡＫＡＳＨＩ旧ＵＲＡ、ａｎｄ　ＪＵＬＩＡＮ　
Ｎ、ＫＡＮＦＥＲ，、Ａｄｖ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、　Ｂｉ
ｏｌ、　１０１．３０１（１９７８））これに対してこ
れまで非天然型のｄ−セリン含有リン脂質に関しては何
も報告されておらず自然界に於いてはその存在は確認さ
れてはいないし、又酵素によって合成されたと言ったこ
と例も知られていない為、ｄ−セリン含有リン脂質は生
化学的には生起しないものと考えられてきた。本出願人
は既にキャベツ由来のホスホリパーゼＤとはその性質に
於いて著しく異なるホスホリパーゼＤを生産する微生物
を発見しそのホスホリパーゼＤの製造法に関して特開昭
５８−６３３８８．特開昭５８−６７１８３．特開昭６
０−１６４４８３に開示した。更に同出願人は、上記し
た微生物ホスホリパーゼＤがキャベツ由来のホスホリパ
ーゼＤとはアルコール化合物にリン脂質を転移反応させ
る能力において著しく異なることを発見しこのホスホリ
パーゼＤを特にホスホリパーゼＤＭと命名しこのホスホ
リパーゼＤＭを用いたリン脂質誘導体の製造法に関して
特開昭５９−１８７７８６．　　特開昭５９−１８７７
９２．　　特開昭５９−１８７７８７．　　特開昭６０
−４１４９４、特開昭６１−８８８８６．特開昭６１−
８８８８７．特開昭６１−８８８８８．特開昭６１−８
８８９０．特開昭６１−８８８９１に開示した。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明の目的は、従来天然には無く、又酵素合成でも生
起することが全く知られていないリン脂質−ｄ−セリン
誘導体を効率よく製造する方法を提供することにある。

近年リン脂質誘轟体の界面化学特性や生理的、薬理的効
果が注目されており従来天然にはないリン脂質を酵素合
成することはリン脂質の新たな利用分野を開くものとし
て大変大きな意味がある。

〔問題を解決する為の手段〕

本発明者らはリン脂質のセリン誘導体として非天然型の
ｄ−セリンを塩基に持つ非天然型の新規リン脂質−ｄ−
セリン誘導体を効率よく製造する方法について鋭意研究
を重ねた結果、既に本発明者らによって発見されその製
造法に関して上記公報に開示したホスホリパーゼＤＭが
、従来知られるキャベツ由来ホスホリパーゼＤでは生起
しない非天然型のリン脂質−ｄ−セリン誘導体を多量生
成することを発見し、本発明を完成させた。

即ち、本発明は下記式（１） 〔但し式中、Ａは下記（ｉ）、（ｉｉ）又は（ｉｉｉ　
）を示しここで、Ｒ＋、　Ｒｚ及びＲ３は一〇〇〇Ｒ＋
　１であるか及びＲＩ！は同一でも異なっていてもよく
、Ｒ目はＲ＋及びＲ１においてＣ１〜Ｃｏ１ｔ　Ｒｚに
於いてＣ８〜Ｃ２，。

ＲｏｚはＲ，及びＲ３においてＣｂ〜Ｃｚｔ　、Ｒ２に
おいて０１〜ＣｔＺのそれぞれ飽和もしくは不飽和の脂
肪族炭化水素基を示し、Ａ′はオキシドアニオン若しく
はヒドロキシを示し、Ｂは−（ＣＨｚ）　Ｊ＋　（ＣＨ
Ｉ）　３．−　（ＣＨｚ）　ｚＮＨｚ＋　−ＣＨＩＣ）
１２ＮＨ（ＣＨ３）、−ＣＨ２Ｃ）ＩＪ（Ｃ１ｈ）！、
−ＣＨ２ＣＨＯＨＣｏｚｏｕ、若しくは−（ＣＬ）ｌ、
ｌＨ（ここで、ｍは１〜５の数を示す〕、で表わされる
リン脂質と、ｄ−セリンとをホスホリパーゼＤＭの存在
下に反応させることを特徴とする下記式（２） ％式％（２） （但し式中、Ａは上記したと同義であり、Ｈはｌド。

ＮＨ貴、又は金属イオンを示し、Ｓはｄ−セリン残基）
で表わされるリン脂質ｄ−セリン誘導体の製法に関する
。

かくして、繁雑かつ不利益な化学的合成手段を用いずに
極めて温和で容易な反応条件下において副反応を伴う恐
れもなしに、酵素法によってリン脂質−ｄ−セリン誘導
体を製造出来る。

本発明方法で基質として利用する原料リン脂質は、市場
でも入手可能である他、公知の方法によって天然物より
抽出又は合成することが出来る。

そのような物としては例えば卵レシチン、大豆レシチン
、オキアミレシチン、などの動植物組織から得られる混
合リン脂質を初めこれ等から公知の手段で抽出分離、又
は合成されるリン脂質であってもよく例えば、ジアシル
型のリン脂質としてはレシチン、ケファリン、ホスファ
チシールグリセロール、ホスファチジン酸アルキルエス
テル等のリン脂質が、又グリセロリン脂質のアシル結合
の一つがアルキルエーテル結合やアルケニルエーテル結
合であるモノエーテルモノアシル型リン脂質としては、
例えば１−０−アルキル−２−アセチル−５ｎ−グリセ
ロ−３−ホスホリルコリン、ブラスマローゲン等が、又
ジエーテル型リン脂質としては、例えばＬ−α−レシチ
ン−β、Ｔ−ジヘキサデシルが又シクロアルキルエーテ
ル型リン脂質として例えばＬ−α−レシチン−β、Ｔ−
ヘキサデシリジンなどのα型やβ型のリン脂質を例示出
来、又モノエーテル型リゾリン脂質としては例えば、Ｌ
−α−リゾレシチン−γ−ヘキサデシルが、又モノアシ
ル型リゾリン脂質としては例えばリゾレシチン、リゾケ
ファリンなどを例示出来る。

本発明に於いて、上記式（１）原料リン脂質とホスホリ
パーゼＤＭの存在下に転移反応せしめる受応体アルコー
ルのｄ−セリンは合成品が市販されているのでそのｄ、
ｌ−混合体、望ましくはｄ一体を使用すればよい。

本発明方法で用いることの出来るホスホリパーゼＤＭと
しては例えば特開昭５９−１８７７８６に開示されたノ
カルデオプシス（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ）属に属す
るホスホリパーゼＤＭ生産菌、例えばノカルデオブシス
属患７７９株（ＰＥＲＭ−ＢＰ　５１２　）や特開昭５
８−６７１８３に開示されたアクチノマヂエーラ（Ａｃ
ｔｉｎｏａ＋ａｄｕｒａ）属に属するホスホリパーゼＤ
Ｍ生産菌例えばアクチノマヂューラ属嵐３６２　　（Ｆ
ＥＲｌｌ−ＢＰ　５１１　）等を挙げることが出来る。

本発明で利用するホスホリパーゼＤＭはリン脂質例えば
レシチンとセリンとの転移反応に於いてｄ−セリン、！
−セリンいずれにも転移し誘導体を形成するのに対して
キャベツ由来のホスホリパーゼＤなどはｌ−セリンにし
か転移せずこの点でも本発明で用いるホスホリパーゼＤ
Ｍとその他のホスホリパーゼＤとを区別することができ
る。

本発明方法によれば、前記式（１）リン脂質とｄ−セリ
ンとを特開昭５８−６３３８８．特開昭５８−６７１８
３、などにすでに詳しく述べたホスホリパーゼＤＭの存
在下に反応させることにより、前記式（２）で表わされ
るリン脂質−ｄ−セリン誘導体を製造することが出来る
。

この際用いるホスホリパーゼＤＭは精製品でも粗製品で
も利用でき、更に適当な固定化担体例えばプロピレン膜
、各種強１弱イオン交換体吸着法、光硬化樹脂等による
包括法により固定化して利用することも出来る。

反応は、ホスホリパーゼＤＭの存在下で、好ましくは溶
媒の存在下に式（１）リン脂質とｄ−セリンとを接触せ
しめることにより行なうことが出来る。利用する溶媒の
例としては、水性溶媒及び水性溶媒と有機溶媒との混合
溶媒を例示することが出来る。又ホスホリパーゼＤＭの
酵素的触媒作用を阻害Ｃない任意の他の添加剤を含む溶
媒も利用出来、例えば該作用を促進したり、酵素、誘導
体の安定化に役立つ適当な添加剤を含有した溶媒である
ことが出来る。その様なものとしては、例えば牛血清ア
ルブミン蛋白、でんぷん等のＷｔ、酢酸、クエン酸等の
有機酸及びその塩類、アミノ酸及びその塩類、塩酸、硫
酸、リン酸等の無機塩であり、そしてこれら上記の塩と
してはアンモニウム塩、Ｈａ”、Ｋ”等のアルカリ金属
塩、Ｍｇ”＋　Ｃａ”。

Ｈａ”、等のアルカリ土類金属塩、その他Ｆｅ”〜＋１
゜Ｍｎ◆”、Ｚｎ令２．Ａｌ◆２〜◆２．　ｃｕ＋を等
の塩であることを例示することが出来る。そしてこれら
の塩類の添加濃度はリン脂質１モルに対して約０．１モ
ル以上含有した水性溶媒であることが出来る。更に有機
溶媒の例としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなど
のごとき芳香族炭化水素類；アセトン、メチルイソプロ
ピルケトン、などのごときケトン類；ジメチルエーテル
、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテルなどのご
ときエーテル類；酢酸メチル、酢酸エチルなどのごとき
エステル類；四塩化炭素、クロロホルム、ジクロロメタ
ンなどのごときハロゲン化炭化水素類；第三級ブチルア
ルコール、第三級アミルアルコールなどのごとき第三級
アルコール類などを例示することが出来る。

水性溶媒を有機溶媒と混合溶媒の形で利用する場合の両
者の混　合比は適当に選択出来るが、例えば水性溶媒：
有機溶媒（ｖ／ｖ比）の比で５０：１〜１：１０のごと
き混　合比を例示することが出来る。

反応モル比、ホスホリパーゼＤＭの使用量、溶媒の使用
量などは適宜に選択出来るが、例えば、前記式（１）リ
ン脂質１モルに対しｄ−セリン約ｌ：１〜１：１００モ
ル比を例示することが出来る。

又、ホスホリパーゼＤＭの使用量としては、例えば、式
（１）リン脂質１ｇ当り約１０〜１０００単位程度の使
用量を例示することが出来る。更に溶媒の使用量として
は、例えば、式（１）リン脂質に対して約２〜５００倍
（容量）程度の使用量を例示出来る。反応は室温程度で
進行するので特に加熱、冷却の必要はないが例えば２０
℃〜約６０℃のごとき反応温度を例示することが出来る
。又反応時間も適宜に選択出来るが、例えば約１〜約９
６時間のごとき反応時間を例示することが出来る。必要
なら、例えばＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）などの
手法を利用し反応経過を追跡し、誘導体の生成を確認し
て反応時間を適宜決めてもよい。

ホスホリパーゼＤＭの存在下で式（１）リン脂質とｄ−
セリンとを接触せしめる態様は適宜に選択出来るが、攪
拌、もしくは振とう条件下で行なうのが普通である。又
、固定化酵素としてホスホリパーゼＤＭを利用する場合
にも固定化酵素膜、固定化酵素粒子層を介して反応組成
液を接触、循環させる態様により行なうことが出来る。

上述の反応において形成される式（２）リン脂質ｄ−セ
リン誘導体は塩、又は遊離の形で回収、利用することが
出来る。誘導体の塩形成は反応時、水性溶媒に目的の上
記無機塩等を溶解することによっても形成させることが
出来る他、反応後反応液に塩を加えることでも形成出来
る。リン脂質誘導体は溶媒分画、ケイ酸カラムクロマト
、アルミナカラムクロマト、高速液体クロマト、遠心向
流分配抽出、ゲル濾過、吸着クロマト等の適当な方法を
用いて分離、精製することが出来る。本発明によれば、
上述した様にして、式（１）リン脂質とｄ−セリンとを
、ホスホリパーゼＤＭの存在下に反応させて式（２）リ
ン脂質ｄ−セリン誘導体を製造することが出来る。

以下、実施例により本発明方法実施の態様について、更
に詳しく例示する。

〔実施例〕

以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこれにより何
隻制限されるものではない。

なお、ホスホリパーゼＤＭの活性測定法としては、下記
の方法を用いた。

５％卵黄レシチンエマルジョン（０，５ｇ卵黄レシチン
１０−蒸溜水の超音波乳化液）Ｏ，１ｍ１．　０．ＩＭ
ＣａＣｌｚ　０．０５ｎｆ　、　７．５％Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ１００溶液０．１５ｍ＆、　ｐＨ５，５０，ＩＭ　Ｔ
ｒｉｓ−ｍａｌｅａｔｅ緩衝液０．１−を混合し、これ
に酵素液０．１−を加え、３７℃で１０分間反応後、０
．０５ＭＥＤＴＡ−２Ｎａを含むＩ　Ｍ　Ｔｒｉｓ−Ｈ
ＣＩ緩衝液（ｐＨ８，０）０．２　ｍｌを加え、直ちに
５分煮沸して反応を完全に停止した。次にコリンエステ
ラーゼ測定用試薬〔日本商こと鵠製造〕のキットに含ま
れるコリン呈色溶解液に溶解した溶液４ｒｎ１を加え、
３７℃で２０分間反応後、５００ｎｍの吸光度を測定し
た。対照としては、あらかじめ熱失活した酵素液を用い
て同様に反応させたものの吸光度を測定した。そして、
１分間に１μｍｏｌのコリンを遊離する醇素を１単位と
した。

また、アクチノヂューラ属隘３６２株およびノカルデオ
ブシス属隘７７９株の生産するホスホリパーゼＤＭは、
本発明者らによって特開昭５９−１８７７９２参考例１
に示したと同様な方法で培養及び精製を行った。

かくしてアクチノマヂエーラ属ホスホリパーゼＤＭの場
合には１５１の培養液（１０ｕ／ｄ）から１００−の精
製ホスホリパーゼＤＭ（５６０ｕ／ｍりを得、ノカルデ
オプシス属ホスホリパーゼＤＭの場合には、１５βの培
養液（３ｕ／ｍＯから３０−の精製ホスホリパーゼＤＭ
溶液（５６０ｕ　／　ｍｌ　）を得た。

これらの精製ホスホリパーゼＤＭを下記実施例に使用し
た。

実施例１ 下記（１１〜α〔のリン脂質とｄ−セリンとを後掲ＴＬ
Ｃによる転移物確認方法に従って、ホスホリパーゼＤＭ
の存在下で反応させ、リン脂質ｄ−セリン誘導体の形成
を確認した。そのＲｆ値を後掲第−表に示した。

基質（リン脂質） （１）Ｌ−α−レシチン、卵黄由来、（シグマ社）（２
）Ｌ−α−レシチン−β、γ−ジヘキサデカノイル（同
上） （３）Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、卵黄
由来、（同上） （４）Ｌ−α−ホスファチジルグリセロール、卵黄由来
、（同上） （５）Ｌ−α−リゾレシチン−γ−ヘキサデカノイル（
同上） （６）Ｌ−α−レシチン−β、γ−ジヘキサデシル（カ
ルビオケムーベーリング社） （７）Ｌ−α−レシチン−β、Ｔ−ヘキサデシリジン（
同上） （８）　　β−レシチン−α、γ−ジヘキサデカノイル
（同上） （９）ホスファチジルコリンプラスマローゲン（フナコ
シ薬品） Ｑｌｌ−０−ヘキサデシル−２−ｏ−アセチル−５ｎ−
クリセロ−３−ホスホリルコリン（同上） ＴＬＣによるリン脂質ｄ−セリン誘導体の生成確認法 下記組成 リン脂質　　　　　　　　　１０　　ｍｇジエチルエー
テル　　　　　０．５− ０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐｉ４５．５）　　　０．４３　
ｔｎｌＯ，５Ｍ　ＣａＣ１ｚ　　　　　　　　　０．０
５　ｍｆｄ−セリン　　　　　　　　０．４ｇ の反応液にホスホリパーゼＤＭ水溶液０．０２＠Ｚ　（
１１゜２ｕ）を加え、３０℃で２４時間振とう反応した
。反応後０．０５Ｍ　ＥＤＴＡ　２　Ｎａ溶液１−を加
え更にクロロホルム−メタノール混液（２：　ｌｖ／ｖ
）５ｒｄを加え激しく攪拌し生成物を抽出し静置した後
、下層のクロロホルム層を分取しＴＬＣの試料とした。

このうち２０μｌをシリカゲル薄層（メルク社シリカゲ
ル６０ＴＬＣプレート隘５７２１）にスポットし、クロ
ロホルム−アセトン−メタノール−酢酸−水（７０：　
２０　：　１０　：　１０　：　３ｖ／ｖ）を展開溶媒
として展開した。

スポットの検出には　Ｚｉｎｚａｄｅ試薬（リンの呈色
、Ｂｅ１ｓｓ　Ｕ、、　Ｊ、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ、＋　
１３＋　１０４＋　１９６４）とニンヒドリン試薬にニ
ンヒドリンの０．２５％アセトン溶液、ｄ−セリンのア
ミノ基の呈色）を用いた。検出されたスポットで未分解
の基質及びその加水分解物以外のスポットでニンヒドリ
ン呈色したスポットをリン脂質ｄ−セリン誘導体と認め
そのＲｆ値を第−表に示した。

第−表　リン脂質ｄ−セリン誘導体のＲｆ値実施例２ Ｌ−α−レシチン、卵黄由来（シグマ社）２００■、ジ
エチルエーテル２Ｔｎ１、蒸溜水２−２−１ＮａＣ１８
０、ｄ−セリン０．６ｇにホスホリパーゼＤＭ溶液０．
１＋ｎ／（５６ｕ）を加え、３０℃で２４時間振とう反
応を行った。反応後１５ｒｒＩのクロロホルム−メタノ
ール（２：　ｌｖ／ｖ）を加え激しく振ってリン脂質を
抽出し、静置した後、下層のクロロホルム層を分取した
。このクロロホルム層を減圧乾固化した後１ｒｎ！のヘ
キサンに溶解した。この試料５μｌをシリカゲル薄層（
メルク社シリカゲル６０ＴＬＣプレートＮ［Ｌ５７２１
）にスポットし、クロロホルム−アセトン−メタノール
−酢酸−水（７０：　２０　：　１０　：　１０　：　
３　ｖ／Ｖ）の溶媒系で展開したところ、３種類のリン
脂質が検出され、その２つはホスファチジン酸及びレシ
チンとＲｆ値が一致し、残りはニンヒドリン試薬で呈色
したのでホスファチジルｄ−セリンであるとした。そこ
で、このリン脂質混合物を高速液体カラムクロマトグラ
フィーによる精製に供した。

カラムはラジアルバックカートリッジシリカ８ｍｍｘ　
１００１１１　（ウォーターズ社）溶離液はヘキサン−
イソプロパノ−ルー水（６０：　８０　：　１２ｖ／ｖ
）ピークの検出には４４１型紫外線検出器及びＲ４０１
型示差屈折計（いずれもウォーターズ社）を用いた。試
料は０．２−づつ５回に分は注入し、ホスファチジン酸
、レシチン、ホスファチジルｄ−セリンの３成分を分取
した。得られたホスファチジルｄ−セリンはもう一度同
様な操作により精製し、精製ホスファチジルｄ−セリン
３■を得た。得られたホスファチジルｄ−セリンはＴＬ
Ｃ上からは単一であった。

この化合物のＩＲスペクトルは日本分光Ａ２０２型赤外
分光光度計を用い液膜法で測定した。この結果を第二表
に示した。（Ｒｕｎ　Ｎｏ　１　）次にＬ−α−レシチ
ン卵黄由来の代りにＬ−α−レシチン−β、Ｔ−ジヘキ
サデカノイル（シグマ社）又はＬ−α−レシチン−β、
γ−ジヘキサデシル（カルビオケムーベーリング社）を
用いて上記と同様に行い、精製し一α−ホスファチジル
ｄ−セリンーβ、Ｔ−ジヘキサデカノイル及びＬ−α−
ホスファチジルｄ−セリンーβ、Ｔ−ジヘキサデシルを
得た。そのＩＲスペクトルを第２表に示した。（Ｒｕｎ
患２，３） 第二表　リン脂質ｄ−セリン誘導体のＩＲ値実施例３ Ｌ−α−レシチン、卵黄由来（シグマ社）２０■、ジエ
チルエーテル０．５　ｒＢｌ、０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ５，５）０．４３ｍ＃、０．５Ｍ　ＣａＣ１ｚ　０．
０５　ｍｅ、　ｄ−セリンＯ１４ｇの反応液にホスホリ
パーゼ０Ｍ水溶液０．０２ｍＦ（１１，２ｕ）を加え３
０℃で２４時間振とう反応した。

反応後０．０５Ｍ　ＢＤＴＡ　２　Ｎａ溶液１−を加え
更にクロロホルム−メタノール混液（２：　ｌｖ／ｖ）
　５−を加え激しく攪拌し生成物を抽出し静置した後、
下層のクロロホルム層を分取しホスファチジルｄ−セリ
ン生成量を求めその生成量を第三表に示した。

（Ｒｕｎ阻１） 次にＬ−α−レシチン、卵黄由来の代りにＬ−α−レシ
チン−β、Ｔ−ジヘキサデカノイル（シグマ社）又はＬ
−α−ホスファチジルエタノールアミン、卵黄由来、（
同上）、Ｌ−α−ホスファチジルグリセロール、卵黄由
来、（同上）、Ｌ−α−レシチン−β、γ−ジヘキサデ
シル（カルビオケムーベーリング社）、１−ｏ−ヘキサ
デシル−２−Ｏ−アセチル−５ｎ−グリセロ−３−ホス
ホリルコリン（フナコシ　薬品）用い上記と同様に行い
リン脂質ｄ−セリン誘導体の生成量を求めた。

その生成量を第三表に示した。（Ｒｕｎ　ｌｌ＆１２〜
６）さらに、上記に於いてホスホリパーゼＤＭＯ代りに
公知のキャベツ由来ホスホリパーゼＤ（ベーリンガー社
０．３　ｕ／ｎｗ）　５ｎｖを用いる他は上記と同様に
行いリン脂質ｄ−セリン誘導体の生成量を求めた。その
生成量を第三表に示した。（ＲｕｎＮａｌ〜６） 尚、ホスファチジルｄ−セリン及びリン脂質ｄ−セリン
誘導体の生成量はイアトロスキャンにより求めた。即ち
、クロマロッド３２（ヤトロン社シリカゲルロンド）に
リン脂質の２％クロロホルム溶液１μＥをスポットし、
クロロホルム−アセトン−メタノール−酢酸−水（７０
：　２０　：　１０　：　１０　：　３ｖ／ｖ）を展開
溶媒として約Ｌｏａｎ展開し、イアトロスキャン（ヤト
ロン社イアトロスキャンＴＨＩＯ）にかけ、ピーク面積
比から成分の重量比を求めた。

（本頁以下余白） 第三表　リン脂質ｄ−セリン誘導体の生成量第三表のイ
アトロスキャン分析の結果から、ホスファチジルｄ−セ
リン誘導体はホスホリパーゼＤＭでは生成するが、公知
のキャベツ由来ホスホリパーゼＤでは生成しないことが
分かる。

実施例４ 卵黄レシチン（キューピー社）１０ｇ、ジエチルエーテ
ル１００　ｄ、ＮａＣ１４ｇ、　ｄ−セリフ３０ｇ、蒸
溜水１００−、ホスホリパーゼ０Ｍ水溶液３　ｍ　（１
６８０Ｕ）を共栓付き三角フラスコに取り３０℃にて２
４時間攪拌反応を行いホスファチジルｄ−セリンを調製
し、ホスファチジルｄ−セリン生成量を求めたところ７
０％だった。

尚、ホスファチジルｄ−セリンの生成量及び純度は実施
例３に示したイアトロスキャンにより求めた。

反応後静置しエーテル層を分取し、減圧下エーテルを除
去し、メタノールにてホスファチジルｄ−セリンを沈澱
させ、粗ホスファチジルｄ−セリン８ｇを得た。このホ
スファチジルｄ−セリンの純度は９２％だった。次に粗
ホスファチジルｄ−セリン１ｇを１０ｍｆのヘキサン−
アセトン（２：１ｖ／Ｖ）に溶解し１０−のメタノール
を加え遠心分離を行い沈澱を得る操作を３回繰り返し、
乾固し・精製ホスファチジルｄ−セリン０．４ｇを得た
。この精製ホスファチジルｄ−セリンの純度は９９％だ
った。

このようにホスファチジルｄ−セリンはヘキサン等に溶
解し、メタノール、エタノール、プロパツール、ブタノ
ール等のホスファチジルｄ−セリンを溶解しないアルコ
ールを加え沈澱させることにより精製できる。又ホスフ
ァチジル！−セリンも同様な方法により精製出来る。

〔発明の効果〕

本発明方法によれば、上述した様にして、式（１）リン
脂質とｄ−セリンとを、ホスホリパーゼＤＭの存在下に
反応させて、他のホスホリパーゼＤでは生起したことが
ない式（２）リン脂質ｄ−セリン誘導体を製造すること
ができる。

上記リン脂質誘導体はその構造からリポソーム形成基材
の他、乳化剤、分散剤、可溶化剤として食品、化粧品、
医薬品、農薬等に利用出来る。更に多くのリン脂質は特
異な生理活性を有することが知られているが、特にリン
脂質セリン誘導体にのみ認められ他のリン脂質では代用
出来ない薬理としてヒスタミン遊離作用（Ａ、Ｇｏｔｈ
、　Ｈ，ＲＡｄａｍｓ。

Ｍ、Ｋｎｏｏｈｕｉｚｅｎ、　５ｃｉｅｎｃｅ、　１７
３．１０３４（１９７１））、　（Ｊ。

Ｌ、　Ｍｏｎｇｅｒ、　Ｐ　、　５ｖｅｃ、　Ｂｒ、　
Ｊ、　Ｐｈａｒｎ＋ａｃｏ１．　＋　４６＋　７４１　
（１９７２）　）　＋（Ａ、Ｂｕｒｎｉ、　Ｅ、Ｂｉｇ
ｏｎ、　Ａ、Ｂａｔｔｔｓｔｅｌｌａ、　Ｅ、Ｂｏａｒ
ａｔｓ。

Ｌ、Ｍｉｅｔｔｏ、　Ｇ、Ｔｏｆｆａｎｏ、　Ａｇｅｎ
ｔｓ　Ａｃｔｉｏｎｓ、１４．６１９（１９８４））、
　　脳エネルギー代謝調節作用、又はエネルギー消費抑
制作用（Ｅ、Ｂｉｇｏｎ＋　ｆ！、Ｂｏａｒａｔｏ、Ａ
、Ｌｅ−ｏｎＧ　Ｔｏｆｆａｎｏ、　Ｂｒ、Ｊ、Ｐｈａ
ｒｍａｃ、　６７、６１Ｈ１９７９）、６６゜１６７　
（１９７９）　）　、脳機能改善作用（Ｇ、Ｃａ１ｄｅ
ｒｉｎｉ、Ｇ、Ｔｏ−ｆｆａｎｏ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉ
ｏｎａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ　ｆｏｒ　Ｎｅｕｒｏｃｈｅ
ｍｉｓｔ−ｒｙ　５ａｔｅｌｌｉｔｅ　Ｍｅｅｔｉｎｇ
、Ｐａｇｅ　３６Ｊａｙ　２６−２９（１９８５）＋Ｉ
　ｔａ　ｌ　ｙ）その他Ｔ−アミノ酪酸の脳への取込み
を促進することによる抗けいれん作用（ＣｈｗｅｈＡ、
Ｙ、　ＬｅｓｃｉｅＳ、Ｗ、、　Ｊ、Ｎｅｕｒｏｃｈｅ
ｍ、３８．６９１（１９８２））、（Ｔａｆｆａｎｏ　
Ｇ。

Ｍａｚｚａｒｉ　Ｓ、　Ｚａｎｏｔｔｉ　Ａ、Ｂｒｕｎ
ｔ　Ａ、＋Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、Ｒｅｓ、＋９、１０６
５（１９８４））などが知られている。これらの作用は
いずれも天然型のｌ−セリン誘導体において知られてい
ることではあるがその異性体である非天然型のｄ−セリ
ン誘導体においても同様の生理作用が期待できる。又、
ｄ−セリン誘導体は生体内に於いての代謝変換として例
えば血液中でのホスホリパーゼＡ２の作用の受は方がｌ
−セリン誘導体とは同一ではなく緩慢であることも考え
られｌ−セリン誘導体とは異なる効果が加わることも予
想される。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記式（１） ▲数式、化学式、表等があります▼・・・（１） 〔但し式中、Ａは下記（ｉ）、（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）
   ▲数式、化学式、表等があります▼・・・（ｉ）▲数式
   、化学式、表等があります▼・・・（ｉｉ）▲数式、化
   学式、表等があります▼・・・（ｉｉｉ）を示しここで
   、Ｒ＿１、Ｒ＿２及びＲ＿３は−ＯＣＯＲ＿１＿１であ
   るか若しくは−ＯＲ＿１＿２であるか、若しくはＲ＿１
   とＲ＿２、Ｒ＿１とＲ＿２は一緒になって▲数式、化学
   式、表等があります▼〔ここでｎは１１〜１９の数を示
   す〕を表わし、上記に於いて、Ｒ＿１＿１及びＲ＿１＿
   ２は同一でも異なっていてもよく、Ｒ＿１＿１はＲ＿１
   及びＲ＿３においてＣ＿５〜Ｃ＿２＿１、Ｒ＿２におい
   てＣ＿１〜Ｃ＿２＿１、Ｒ＿１＿２はＲ＿１及びＲ＿３
   においてＣ＿６〜Ｃ＿２＿２、Ｒ＿２においてＣ＿１〜
   Ｃ＿２＿２のそれぞれ飽和もしくは不飽和の脂肪族炭化
   水素基を示し、Ａ′はオキシドアニオン若しくはヒドロ
   キシを示し、Ｂは−（ＣＨ＿２）＿２Ｎ＋（ＣＨ＿３）
   ＿３、−（ＣＨ＿２）＿２ＮＨ＿２、−ＣＨ＿２ＣＨ＿
   ２ＮＨ（ＣＨ＿３）、−ＣＨ＿２ＣＨ＿２Ｎ（ＣＨ＿３
   ）＿２、−ＣＨ＿２ＣＨＯＨＣＨ＿２ＯＨ、若しくは−
   （ＣＨ＿２）＿ｍ、Ｈ（ここで、ｍは１〜５の数を示す
   ）を示す〕、で表わされるリン脂質と、ｄ−セリンとを
   ホスホリパーゼＤＭの存在下に反応させることを特徴と
   する下記式（２）▲数式、化学式、表等があります▼・
   ・・（２） （但し式中、Ａは上記したと同義であり、ＭはＨ＾＋、
   ＮＨ＾＋＿３、又は金属イオンを示し、Ｓはｄ−セリン
   残基）で表わされるリン脂質ｄ−セリン誘導体の製法。