JPS6248390A

JPS6248390A - リン脂質の精製法

Info

Publication number: JPS6248390A
Application number: JP60190467A
Authority: JP
Inventors: Masato Nakazato; 真人中里; Osamu Yamada; 理山田; Harumi Tanaka; 晴美田中
Original assignee: Nisshin Oil Mills Ltd
Current assignee: Nisshin Oillio Group Ltd
Priority date: 1985-08-28
Filing date: 1985-08-28
Publication date: 1987-03-03

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（ａｌ産業上の利用分野本発明は、混合リン脂質から特定のリン脂質を分画する
に際し、目的リン脂質以外はリパーゼにより加水分解し
、分画を容易にすることを特徴とするリン脂質の精製法
に関するものである。

（ｂ）従来の技術従来、混合リン脂質から各リン脂質分子種をそれぞれ分
画精製するには溶剤分別、カラム分画。

誘導体による分画等が知られている。

溶剤分別は単一溶剤による抽出から混合溶剤による再結
晶まで様々な方法がある。例えば、エタノールやイソプ
ロピルアルコールを用いて、ホスファチジルコリンとホ
スファチジルイノシトールを分別する方法がある。

カラム分画には、シリカゲル、アルミナ、イオン交換樹
脂を用いる方法が知られている。例えば、シリカゲルカ
ラムに混合リン脂質を供し、クロロホルム−メタノール
で脱離させていく方法があり、メタノールの比率が増加
するにしたがってホスファチジルエタノールアミン、ホ
スファチジルイノシトール、ホスファチジルコリンが順
次溶出され、分画できる。

誘導体による分画法としてはＣｄＣ１，複合体を利用す
る方法や、ホスファチジルエタノールアミンをアセチル
化して分画する方法が知られている。

（ｅ）発明が解決しようとする問題点天然由来のリン脂質は、各種リン脂質の混合物であり、
従来の溶剤分別や誘導体による分画ではそれぞれのリン
脂質を高純度に濃縮することはできなかった。また、こ
れらの方法とカラム分画を組み合わせることによって純
度を高めることはできるが、収率が極めて悪いという欠
点を有していた。特にホスファチジルイノシトールは、
通常の溶剤抽出ではホスファチジルエタノールアミン等
との分別が困難であり、多種類の溶剤とカラム分画を組
み合わせることによってのみ高純度に精製が可能であっ
た。

本発明者らは、上記問題点を解決するために鋭意研究を
行った結果、特異性のあるリパーゼを使用し、混合リン
脂質の組成を単純化することによって、容易にリン脂質
の分画精製を行なえることを見い出し、本発明をなすに
至ったものである。

ｆｄ１問題点を解決するための手段即ち本発明は、混合リン脂質に、リン脂質分子種に対す
る基質特異性のあるリパーゼを反応させ、未反応のリン
脂質を濃縮することを特徴とするリン脂質の精製法であ
る。以下、本発明について詳しく説明する。

本発明に用いる混合リン脂質は、目的とするリン脂質を
含むリン脂質であれば、動植物いずれかのリン脂質であ
っても良い。リン脂質以外の不純物が含まれていても良
いが、精製物の純度を上げるためにはないことが好まし
い。ただし、ホスホリパーゼＣを用いる本発明の反応に
おいては、目的物以外はグリセリドとなり除去されるた
め、グリセリドが含まれていることは全く問題とならな
い。

本発明で用いるリパーゼとは、ホスホリパーゼ等をも含
む広義のリパーゼであり、グリセリン誘導体を加水分解
する酵素の総称である。これらのリパーゼは、リン脂質
分子種に対する基質特異性がある酵素があり、本発明は
ある特定のリン脂質分子種に対して加水分解能を示さな
い酵素があることを利用したものである。特にＢａｃｉ
　ｌ　Ｉ　ｕｓ属。

Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属のホスホリパーゼＣ，キャベ
ツ。

米ぬかのホスホリパーゼＤは、ホスファチジルイノシト
ールに作用せず、ホスファチジルコリン。

ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリ
ンを加水分解するために本発明において有効なリパーゼ
である。

この混合リン脂質の前記リパーゼによる加水分解は、通
常の各々リパーゼの至適条件もしくはそれに近い条件で
行う。これにより目的とするリン脂質と加水分解物の主
として２つの成分の混合物が得られる。ホスホリパーゼ
Ｃにおいては、加水分解されなかった目的とするリン脂
質と加水分解物としてのグリセリドおよびリン酸エステ
ル残基が得られる。またホスホリパーゼＤにおける加水
分解物としては、ホスファチジン酸とコリン等の塩基性
アルコールが得られる。

この反応物は、組成が単純化されているため、溶剤分別
、あるいは膜分離、あるいはカラム分画によって容易に
目的とするリン脂質とそれ以外の加水分解物を分離する
ことができる。特に、ホスホリパーゼＣにおいては、通
常のアセトン分別することにより、アセトン不溶物とし
て加水分解されなかった目的のリン脂質が高純度かつ容
易に得られるため好ましい。またホスホリパーゼＤによ
るホスファチジルイノシトールの精製においては、アル
コール分別により、不溶物としてホスファチジルイノシ
Ｉ・−ルが高純度かつ容易に得られる。

ｔｅｌ実施例実施例１精製卵黄リン脂質（リン脂質含量８０％）１０ｇをリン
酸緩衝液１）Ｈ８，１００ｍ１に分散させ、ホモジナイ
ザーで均質化する。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｕｒｅｏ
ｆａｃｉｅｎｓのホスホリパーゼＣｏ、　１　ｇを添加
し、３０°Ｃ９２４時間攪拌し反応を行う。反応後、ヘ
キサン１００ｍ１を加え、攪拌、静置し、ヘキサン層を
得る。水層に再度ヘキサン１００ｍ１を加え、同一操作
でヘキサン層を得る。これによって緩衝液はほぼ除去で
きる。２つのヘキサン層をあわせ、濃縮、乾燥する。こ
れにアセトン１００ｍ１を加え、抽出する。不溶物をさ
らにアセトン５０ｍ１で洗浄し、乾燥する。約０．５ｇ
の白色物質が得られる。

この物質にはスフィンゴミエリン４５％が含有されてい
た。

実施例２トリグリセリド含有大豆リン脂質（リン脂質含量６０％
）１０ｇを実施例１と同様に処理し、約１ｇの白色物質
が得られる。この物質にはホスファチジルイノシトール
６０％が含有されていた。

実施例３精製大豆リン脂質（リン脂質含量９５％）１０ｇを酢酸
緩衝液ｐＨ５，５，１００ｍ１に分散させ、ホモジナイ
ザーで均質化する。キャベツの葉のホスホリパーゼＤ０
．１ｇを添加し、３０℃２４時間攪拌し反応を行う。反
応後、ヘキサン１００ｍ１で２回抽出を行い、ヘキサン
層を集める。得られたヘキサン層を濃縮、乾燥する。乾
燥物を５％酢酸エタノールで洗浄する。これを乾燥する
と約２ｇの白色物質が得られる。この物質にはホスファ
チジルイノシトール７０％が含有されていた。

実施例４トリグリセリド含有卵黄リン脂質（リン脂質含量５０％
）１００ｇを水１Ｎに分散させ、ホモジナイザーで均質
化する。Ｃａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａのリ
パーゼ１ｇを添加し、３５℃、２４時間攪拌し、反応を
行う。反応液を濃縮、乾燥する。これにヘキサンＩＯ’
Ｏｍｌを加え、抽出する。不溶物をさらにヘキサン５０
ｍ１で洗浄する。２つのヘキサン溶液を濃縮、乾燥する
。約３ｇの白色物質が得られる。この物質にはスフィン
ゴミエリン４０％が含有されていた。

（ｆ）発明の効果本発明によれば、混合リン脂質を特異性のあるリパーゼ
を用いて加水分解することにより、リン脂質を容易に分
離することができ、特に従来、カラム分画によってしか
高純度品が得られなかったホスファチジルイノシトール
をヘキサン、エタノール、アセトンといった安価で安全
な溶剤を使用するだけで精製できるという効果を奏する
。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）混合リン脂質に、リン脂質分子種に対する基質特
異性のあるリパーゼを反応させ、未反応のリン脂質を濃
縮することを特徴とするリン脂質の精製法。
（２）リパーゼとしてホスファチジルコリン、ホスファ
チジルエタノールアミンおよびホスファチジルセリンを
加水分解し、ホスファチジルイノシトールにほとんど作
用しないホスホリセパーゼを使用する特許請求の範囲第
（１）項記載の精製法。
（３）Ｂａｃｉｌｌｕｓ属あるいはＰｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ属のホスホリパーゼＣを使用する特許請求の範囲第
（２）項記載の精製法。
（４）キャベツあるいは米ぬかのホスホリパーゼＤを使
用する特許請求の範囲第（２）項記載の精製法。