JP2559760B2 - 細胞搬送方法 - Google Patents

細胞搬送方法

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JP2559760B2 JP62215288A JP21528887A JP2559760B2 JP 2559760 B2 JP2559760 B2 JP 2559760B2 JP 62215288 A JP62215288 A JP 62215288A JP 21528887 A JP21528887 A JP 21528887A JP 2559760 B2 JP2559760 B2 JP 2559760B2
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Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明はチャンバプレートに複数個設けられた各隔
室に細胞を搬送する方法に関するものである。
〔従来の技術〕
最近、細胞搬送装置によってチャンバプレートの各隔
室に異種の細胞をそれぞれ1個ずつ搬送したのち、それ
らの細胞を融合することが行なわれている。
従来の細胞搬送方法(特開昭62−32874号公報)にお
いては、開口部を有する流路で細胞を搬送し、開口部を
順次チャンバプレートの各隔室の上方に位置させて、開
口部から各隔室に細胞を放出することにより、各隔室に
細胞を搬送している。
〔発明が解決しようとする問題点〕
しかし、このような細胞搬送方法においては、開口部
を順次チャンバプレートの各隔室の上方に位置させる必
要があるから、チャンバプレートに多数の隔室が設けら
れているときには、全ての隔室に細胞を搬送するのに長
時間を要する。とくに、酵素によって細胞膜が除去され
たプロトプラストは短時間で活性を失ってしまうから、
プロトプラストを多数の隔室に搬送したときには、搬送
操作中に初めに搬送したプロトプラストの活性が失われ
てしまうので、異種のプロトプラストを融合する場合に
は、1度に融合しうるプロトプラストの数に限界があ
る。
この発明は上述の問題点を解決するためになされたも
ので、チャンバプレートに設けられた各隔室に短時間に
細胞を搬送することができる細胞搬送方法を提供するこ
とを目的とする。
〔問題点を解決するための手段〕 この目的を達成するため、この発明においては、チャ
ンバプレートに複数個設けられた各隔室に細胞を搬送す
る方法において、キャリアプレートの上記隔室に対応す
る位置にある吸着部に上記細胞を吸着する吸着装置と、
上記吸着装置を上記チャンバプレート上に相対的に移動
する移動装置とを設ける。
本発明の要旨は次の2点にある。
(1)その上に第一および第二の隔室を有するチャンバ
プレートと、前記第一の隔室に対応する位置関係にある
第一の吸着部と前記第二の隔室に対応する位置関係にあ
る第二の吸着部とを有するキャリアプレートを準備し、 前記第一の吸着部および前記第二の吸着部に細胞を吸
着し、 前記第一の隔室と前記第一の吸着部とが相互に対向す
るように、かつ、前記第二の隔室と前記第二の吸着部と
が相互に対向するように前記チャンバプレートと前記キ
ャリアプレートとを接近させた状態で、前記第一の吸着
部に吸着された前記細胞を前記第一の隔室に搬送すると
共に、前記第二の吸着部に吸着された前記細胞を前記第
二の隔室に搬送することを特徴とする細胞搬送方法。
(2)その上に第一および第二の隔室を有するチャンバ
プレートと、前記第一の隔室に対応する位置関係にある
第一の吸着部と前記第二の隔室に対応する位置関係にあ
る第二の吸着部とを有する第一のキャリアプレートと、
前記第一の隔室に対応する位置関係にある第三の吸着部
と前記第二の隔室に対応する位置関係にある第四の吸着
部とを有する第二のキャリアプレートとを準備し、 前記第一の吸着部、前記第二の吸着部、前記第三の吸
着部、前記第四の吸着部に細胞を吸着し、 前記第一の隔室と前記第一の吸着部とが相互に対向す
るように、かつ、前記第二の隔室と前記第二の吸着部と
が相互に対向するように前記チャンバプレートと前記第
一のキャリアプレートとを接近させた状態で、前記第一
の吸着部に吸着された前記細胞を前記第一の隔室に搬送
すると共に、前記第二の吸着部に吸着された前記細胞を
前記第二の隔室に搬送し、 前記第一の隔室と前記第三の吸着部とが相互に対向す
るように、かつ、前記第二の隔室と前記第四の吸着部と
が相互に対向するように前記チャンバプレートと前記第
二のキャリアプレートとを接近させた状態で、前記第三
の吸着部に吸着された前記細胞を前記第一の隔室に搬送
すると共に、前記第四の吸着部に吸着された前記細胞を
前記第二の隔室に搬送することを特徴とする細胞搬送方
法。
〔作用〕
この細胞搬送方法においては、吸着装置の各吸着部に
細胞を吸着させた状態で、移動装置により吸着装置をチ
ャンバプレート上に相対的に移動し、隔室と吸着部との
位置合せをしたのち、細胞を吸着部から離脱させれば、
チャンバプレートの隔室に細胞を搬送することができ
る。
〔実施例〕
第1図はこの発明に係る細胞搬送方法を実施するため
の細胞搬送装置を示す概略断面図、第2図は第1図に示
した細胞搬送装置のキャリアプレートを示す平面図、第
3図は同じく拡大正断面図、第4図は第1図に示した細
胞搬送装置のチャンバプレートを示す拡大断面図であ
る。図において、11は容器、13は一端が容器11の底部に
接続された排出管で、排出管13の他単は緩衝液排出装置
(図示せず)に接続されている。14は容器11内に載置さ
れた支持体、1は支持体14に固定されたチャンバプレー
トで、チャンバプレート1はSi単結晶からなり、厚さは
0.4mm、直径は75mmである。3はチャンバプレート1に
複数設けられた隔室で、隔室3は0.8mmのピッチでマト
リクス状に45×45個配置されている。18は隔室3の底部
に設けられたスリットで、スリット18は隔室3と連通し
ている。7は容器、10は一端が容器7の底部に接続され
た供給管で、供給管10の他端は緩衝液供給装置(図示せ
ず)に接続されている。15はシリンジポンプ(図示せ
ず)を接続するための接続孔、2はキャリアプレート
で、キャリアプレート2はSi単結晶からなり、厚さは0.
4mm、直径は75mmである。4はキャリアプレート2の底
部に設けられた吸着座で、吸着座4は隔室3に対応した
位置に45×45個配置されている。12はキャリアプレート
2に設けられた連通孔で、連通孔12は吸着座4と連通し
ており、貫通孔12の最小径は約10μmである。16はキャ
リアプレート2に取り付けられた枠体、9は一端が枠体
16に接続されたフレキシブルホースで、フレキシブルホ
ース9の他端は緩衝液給排装置(図示せず)に接続され
ている。21はキャリアプレート2、枠体16等で構成され
た吸着装置で、吸着装置21は移動装置(図示せず)によ
って紙面上下方向および左右方向に移動される。6は容
器7、11内に入れられたしょ糖水溶液等の緩衝液であ
る。
この細胞搬送装置を使用した細胞搬送方法において
は、まず第5図(a)に示すように、酵素により個々に
分離した植物細胞5を緩衝液6とともに封入したシリン
ジポンプ8を接続孔15に接続したのち、第5図(b)に
示すように、シリンジポンプ8を駆動して、細胞5を容
器7内に押し出すとともに、緩衝液給排装置によりフレ
キシブルホース9を介して枠体16内の緩衝液6を吸引す
ると、枠体16内が負圧になり、細胞5が吸着座4に吸着
される。つぎに、第5図(c)に示すように、緩衝液給
排装置により枠体16内の緩衝液6を吸引し続けるととも
に、緩衝液供給装置により供給管10を介して容器7内に
緩衝液6を供給すると、緩衝液6が容器7から溢流し
て、吸着座4に吸着されていない細胞5が容器7内から
除去される。つぎに、第5図(d)に示すように、緩衝
液給排装置により枠体16内の緩衝液6を吸引し続けると
ともに、移動装置によって吸着装置21を容器11内に移動
し、隔室3と吸着座4との位置合せをしたのち、第5図
(e)に示すように、キャリアプレート2をチャンバプ
レート1に密着させた状態で、緩衝液給排装置により枠
体16内に緩衝液6を供給して、枠体16内を正圧にすると
ともに、緩衝液排出装置により排出管13を介して支持体
14内の緩衝液6を吸引して、支持体14内を負圧にする
と、細胞5が吸着座4から離脱して、細胞5が隔室3内
に収納される。つぎに、第5図(f)に示すように、緩
衝液排出装置により支持体14内の緩衝液6を吸引し続け
た状態で、移動装置によって吸着装置21に容器7内に移
動すれば、チャンバプレート1を容器11外に搬出するこ
とができる。
このように、この細胞搬送方法においては、液圧によ
り細胞5を吸着座4に吸着させ状態で、移動装置により
吸着装置21をチャンバプレート1上に移動し、隔室3と
吸着座4との位置合せをしたのち、液圧により細胞5を
吸着座4から離脱させれば、細胞5を隔室3内に収納す
ることができるから、一度に多数の細胞5を各隔室3に
搬送することができるので、極めて短時間に細胞5を各
隔室3に搬送することができる。
第6図はこの発明に係る他の細胞搬送方法を実施する
ための細胞搬送装置を示す概略斜視図である。図におい
て、7a、7bは容器11の両側に設けられた容器、21a、21b
は吸着装置、9a、9bはフレキシブルホースで、吸着装置
21a、21bの構成は吸着装置21の構成と同様である。17
a、17bは吸着装置21a、21bを矢印A方向および矢印B方
向に移動する移動装置である。
この細胞搬送装置を使用した細胞搬送方法において
は、第1の細胞を吸着装置21aで吸着した状態で、移動
装置17aにより吸着装置21aをチャンバプレート1上に移
動し、隔室3と吸着装置21aの吸着座との位置合せを
し、第1の細胞を吸着座から離脱して、第1の細胞を隔
室3内に収納し、つぎに第2の細胞を吸着装置21bで吸
着した状態で、移動装置17bにより吸着装置21bをチャン
バプレート1上に移動し、隔室3の吸着装置21bの吸着
座との位置合せをし、第2の細胞を吸着座から離脱し
て、第2の細胞を隔室3内に収納すれば、隔室3内に細
胞対を形成することができる。この状態で、チャンバプ
レート1をポリエチレングリコールに浸すか、電気的パ
ルスを印加すると、各隔室3内で細胞を融合することが
できる。
したがって、異種のプロトプラストを細胞融合すると
きに、この細胞搬送方法を用いれば、短時間に多数のプ
ロトプラストを隔室に搬送することができるから、多数
のプロトプラストを隔室に搬送したとしても、搬送操作
中にプロトプラストの活性が低下することがないので、
1度に融合しうるプロトプラストの数を著しく向上する
ことができる。
なお、上述実施例においては、吸着装置として液圧に
より細胞5を吸着部である吸着座4に吸着させる吸着装
置21を用いたが、表面に有機、無機の膜からなる吸着部
を設け、細胞表面の親水性、付着性等を利用して、細胞
を化学的に吸着する吸着装置を用いてもよい。たとえ
ば、Si単結晶からなるキャリアプレートの表面にSiO2
からなる吸着部を設ければ、細胞の親水性により、細胞
をSiO2膜に吸着することができ、この場合には水を供給
すれば、細胞をSiO2膜から離脱することができる。ま
た、キャリアプレートの表面にポリリジン膜からなる吸
着部を設ければ、細胞の付着性により、細胞をポリリジ
ン膜に吸着することができ、この場合には薬液を供給す
れば、細胞をポリリジン膜から離脱することができる。
また、上述実施例においては、隔室3の形状を吸着座4
の形状とは異なる形状にしたが、隔室の形状を吸着座4
の形状と同一の形状にしてもよく、この場合にはチャン
バプレート1とキャリアプレート2とを密着させた状態
で細胞対を融合してもよい。さらに、上述実施例におい
ては、吸着座4の数を隔室3の数と等しくしたが、たと
えば吸着座4の数を隔室3の数の1/2とするように、吸
着座4の数を隔室3の数より少なくしてもよく、この場
合には搬送操作を複数回行なえば、全ての隔室3に細胞
5を搬送することができる。また、上述実施例において
は、細胞が植物細胞5の場合について説明したが、細胞
が動物細胞等の場合にもこの発明を適用可能であること
は当然であり、また細胞が有核であっても無核であって
もこの発明を適用できることは明らかである。さらに、
上述実施例においては、搬送装置により吸着装置21を移
動したが、搬送装置により容器7、11を移動してもよ
い。すなわち、搬送装置により吸着装置21を容器7、11
に対して相対的に移動すればよい。また、上述実施例に
おいては、2個の容器7、11を設けたが、1個の容器を
着脱可能な仕切板で仕切り、仕切板で仕切られた各部分
に吸着装置21、チャンバプレート1を設けてもよい。さ
らに、チャンバプレート1とキャリアプレート2とを密
着させた状態で、隔室3内で融合細胞を培養してもよ
い。また、チャンバプレート1、キャリアプレート2を
加工するときには、Si単結晶の(100)面を板面に選
び、水酸化カリウム水溶液による異方性エッチングによ
り、隔室3、吸着座4等を形成すれば、サイドエッチの
極めて少ないすり鉢状の隔室3、吸着座4等を精度良く
加工することができる。
〔発明の効果〕
以上説明したように、この発明に係る細胞搬送方法に
おいては、吸着装置の各吸着部に細胞を吸着させた状態
で、移動装置により吸着装置をチャンバプレート上に相
対的に移動し、隔室と吸着部との位置合せをしたのち、
細胞を吸着部から離脱させれば、チャンバプレートの各
隔室に細胞を搬送することができるので、極めて短時間
に細胞を各隔室に搬送することができる。このように、
この発明の効果は顕著である。
【図面の簡単な説明】
第1図はこの発明に係る細胞搬送方法を実施するための
細胞搬送装置を示す概略断面図、第2図は第1図に示し
た細胞搬送装置のキャリアプレートを示す平面図、第3
図は同じく拡大断面図、第4図は第1図に示した細胞搬
送装置のチャンバプレートを示す拡大断面図、第5図は
第1図に示した細胞搬送装置の動作説明図、第6図はこ
の発明に係る他の細胞搬送方法を実施するための細胞搬
送装置を示す概略斜視図である。 1……チャンバプレート 2……キャリアプレート 3……隔室 4……吸着座 5……植物細胞 17a、17b……移動装置 21、21a、21b……吸着装置
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 小比田 啓之 東京都国分寺市東恋ヶ窪1丁目280番地 株式会社日立製作所中央研究所内 (72)発明者 細江 義久 静岡県清水市村松390番地 株式会社日 立製作所清水工場内 (72)発明者 桜野 正敏 静岡県清水市村松390番地 株式会社日 立製作所清水工場内

Claims (4)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】その上に第一および第二の隔室を有するチ
    ャンバプレートと、前記第一の隔室に対応する位置関係
    にある第一の吸着部と前記第二の隔室に対応する位置関
    係にある第二の吸着部とを有するキャリアプレートを準
    備し、 前記第一の吸着部および前記第二の吸着部に細胞を吸着
    し、 前記第一の隔室と前記第一の吸着部とが相互に対向する
    ように、かつ、前記第二の隔室と前記第二の吸着部とが
    相互に対向するように前記チャンバプレートと前記キャ
    リアプレートとを接近させた状態で、前記第一の吸着部
    に吸着された前記細胞を前記第一の隔室に搬送すると共
    に、前記第二の吸着部に吸着された前記細胞を前記第二
    の隔室に搬送することを特徴とする細胞搬送方法。
  2. 【請求項2】前記第一の吸着部に吸着された前記細胞と
    前記第二の吸着部に吸着された前記細胞とは同種のもの
    であることを特徴とする特許請求の範囲第1項記載の細
    胞搬送方法。
  3. 【請求項3】その上に第一および第二の隔室を有するチ
    ャンバプレートと、前記第一の隔室に対応する位置関係
    にある第一の吸着部と前記第二の隔室に対応する位置関
    係にある第二の吸着部とを有する第一のキャリアプレー
    トと、前記第一の隔室に対応する位置関係にある第三の
    吸着部と前記第二の隔室に対応する位置関係にある第四
    の吸着部とを有する第二のキャリアプレートとを準備
    し、 前記第一の吸着部、前記第二の吸着部、前記第三の吸着
    部および前記第四の吸着部に細胞を吸着し、 前記第一の隔室と前記第一の吸着部とが相互に対向する
    ように、かつ、前記第二の隔室と前記第二の吸着部とが
    相互に対向するように前記チャンバプレートと前記第一
    のキャリアプレートとを接近させた状態で、前記第一の
    吸着部に吸着された前記細胞を前記第一の隔室に搬送す
    ると共に、前記第二の吸着部に吸着された前記細胞を前
    記第二の隔室に搬送し、 前記第一の隔室と前記第三の吸着部とが相互に対向する
    ように、かつ、前記第二の隔室と前記第四の吸着部とが
    相互に対向するように前記チャンバプレートと前記第二
    のキャリアプレートとを接近させた状態で、前記第三の
    吸着部に吸着された前記細胞を前記第一の隔室に搬送す
    ると共に、前記第四の吸着部に吸着された前記細胞を前
    記第二の隔室に搬送することを特徴とする細胞搬送方
    法。
  4. 【請求項4】前記第一の吸着部に吸着された前記細胞と
    前記第二の吸着部に吸着された前記細胞とは同種のもの
    であり、前記第三の吸着部に吸着された前記細胞と前記
    第四の吸着部に吸着された前記細胞とは同種のものであ
    ることを特徴とする特許請求の範囲第3項記載の細胞搬
    送方法。
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