JP2540508B2 - 化学反応を触媒する方法 - Google Patents

化学反応を触媒する方法

Info

Publication number
JP2540508B2
JP2540508B2 JP60500123A JP50012385A JP2540508B2 JP 2540508 B2 JP2540508 B2 JP 2540508B2 JP 60500123 A JP60500123 A JP 60500123A JP 50012385 A JP50012385 A JP 50012385A JP 2540508 B2 JP2540508 B2 JP 2540508B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
monoclonal antibody
reactant
reaction
enzyme
product
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP60500123A
Other languages
English (en)
Other versions
JPS61500469A (ja
Inventor
スカチエトマン，ジエラルド
マセイ，リチヤード・ジエイ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
IIJEN Inc
Original Assignee
IIJEN Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by IIJEN Inc filed Critical IIJEN Inc
Publication of JPS61500469A publication Critical patent/JPS61500469A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP2540508B2 publication Critical patent/JP2540508B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
    • C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
    • C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
    • C07K16/4241—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0002—Antibodies with enzymatic activity, e.g. abzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
    • C12P13/227—Tryptophan
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/30—Nucleotides
    • C12P19/34—Polynucleotides, e.g. nucleic acids, oligoribonucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
    • C12P41/004—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of alcohol- or thiol groups in the enantiomers or the inverse reaction
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/25—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving enzymes not classifiable in groups C12Q1/26 - C12Q1/66
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
    • G01N33/542—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with steric inhibition or signal modification, e.g. fluorescent quenching
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus, feline leukaemia virus, human T-cell leukaemia-lymphoma virus
    • G01N2333/155—Lentiviridae, e.g. visna-maedi virus, equine infectious virus, FIV, SIV
    • G01N2333/16—HIV-1, HIV-2
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
    • G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
    • G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
    • G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
    • G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
    • G01N2333/96472—Aspartic endopeptidases (3.4.23)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 本出願は1983年11月29日に出願された米国出願第556,
016号の一部継続出願であり、よつてその出願の内容は
参照のために本出願に組み入れられる。
本発明は化学反応を触媒する（catalyze）ためのモノ
クローナル抗体の使用に関する。モノクローナル抗体は
ハイブリドーマ細胞が産生する免疫グロブリンである。
モノクローナル抗体は単一の抗原決定基と反応し、従来
の血清由来抗体に比べてより優れた特異性を示す。また
多数のモノクローナル抗体をスクリーニングして、所望
の特異性，結合活性（avidity）およびイソタイプを有
する個々の抗体を選択することができる。ハイブリドー
マ細胞系（cell line）は化学的に同一の抗体に対する
恒存性の安価な資源を提供し、そのような抗体の調製を
容易に標準化しうる。
モノクローナル抗体を産生する方法は当業者に周知であ
る。例えばコプロウスキー，エツチ．（Koprowski,H）
ら,1980年４月１日付発行の米国特許第4,196,265号。
モノクローナル抗体による抗原識別は免疫グロブリン
（Ig）分子のＮ−未端域における特異結合部位に帰因す
る。Ig分子は、全てのタンパク−タンパク相互作用に特
有な同型の近距離力を介して抗原と反応すると考えられ
ている。抗原−抗体相互作用は、対応する抗原決定基即
ちエピトープと抗体の結合部位とが相補的な三次元形状
を示すために極めて特異的である。
前記相補的形状により、分子が互いに近接して近づき実
質的な表面域上で相互作用が起こりうる。抗体−抗原相
互作用の特異性は、抗原決定基の立体配置の変化によつ
て抗体に対する抗原の結合定数（binding constant）が
著るしく低下するという事実から立証される。その抗原
に対する抗体の結合定数は一般に、基質に対する酵素の
結合定数よりはるかに大きい。
モノクローナル抗体の用途は知られている。その１つ
が診断法に使用することである。例えばデービツド，ジ
ー．（David,G.）およびグリーン，エツチ．（Green,
H.）,1983年３月８日付発行米国特許第4,376,110号。
モノクローナル抗体は、免疫吸着クロマトグラフイー
によつて物質を回収するためにも用いられてきた。例え
ばミルシユタイン，シー．（Milstein,C.）,1980.サイ
エンテイフイツク・アメリカン（Scientific America
n）243;66,70。
しかしながら、モノクローナル抗体が化学反応を触媒
するために使用されうることは示唆されていない。事
実、触媒作用（catalysis）の分野における開発は免疫
学の分野とは別個に行なわれてきた。抗体を触媒として
使用した試みの唯一の報告例については本出願人らも熟
知しているが、その試みでは所望の反応の速度を大きく
させることはできなかつた。ジー．ピー．ロイヤー（G.
P.Royer）,1980,アドバンシス イン カタリシス（Adv
ances in Catalysis）29;197−227。
化学反応のなかで、反応体は異なる状態を通る一連の
遷移をうけ、最終的に生成物に達する。分子的には、中
間状態を介するこれら遷移は結合長さ，角度などの変化
をもたらす。反応体から生成物への遷移は生成物を生成
すべく分解する中間体の形成を含むものとして考えられ
うる。反応全体の速度を、反応体，中間体および生成物
の間の平衡を特徴づける平衡定数で表わすことができ
る。
触媒作用は、反応体の状態に関しては中間体の安定化
としてみなされうる。触媒は反応速度を増加させる物質
であり、反応の最後には実質的に化学的変化をうけない
まま回収される。触媒は消費されないが、触媒が反応に
関与することは一般に認められている。
触媒作用が産業上重要であるにもかかわらず、簡単な
化学的触媒作用や酵素的触媒作用には多くの制限があ
る。化学的に触媒させた方法ではしばしば所望の生成物
を高収率で製造しえない。前記方法では副反応から不純
物が生じることもよくある。また、多くの重要な化学反
応に対する化学的触媒は知られていない。他の制限とし
ては、比較的高い触媒コスト，化学的活性化の必要性，
大気条件中あるいは少量の水の存在下での有用性欠如、
および大気中の酸素の存在下での可燃性や爆発性が含ま
れる。酵素的触媒作用は、特定の反応を行うために必要
な適度の特異性と触媒機能を有する天然に存在する酵素
の存在と発見に依存する。多くの化学反応に対する酵素
は知られていない。
本発明は、触媒作用に対する新規なアプローチを提供
することによつてこれらの制限を解決する。本発明は、
触媒の分野では今まで得ることのできなかつた作用効率
と特異性とをある程度有する便利で容易に入手可能で安
価な触媒としてのモノクローナル抗体の調製および使用
方法を提供する。
発明の要約 本発明は、少なくとも１種の反応体から少なくとも１
種の生成物への変換（conversion）を含む化学反応の速
度を増加させるための、モノクローナル抗体を含む方法
に関する。
本発明を実施するに際し、モノクローナル抗体と１種
以上の反応体との複合体（complex）を形成するのに適
当な条件下で１種以上の反応体を適当なモノクローナル
抗体と接触させる。１種以上の複合体化された反応体を
生成物へ変換し、生成物を複合体から遊離させる。
一具体例では、本発明はオキシドレダクターゼ，トラ
ンスフエラーゼ，加水分解酵素，リアーゼ，イソメラー
ゼおよびリガーゼの如き酵素によつても触媒されうる化
学反応の速度を増加させるのに有用である。他の具体例
では、本発明は、触媒酵素が知られていない化学反応の
反応速度を増加させるために有用である。そのような反
応の中には、特に酸化，還元，付加，縮合，脱離，置
換，開裂および転位が含まれる。
本発明によれば、化学反応の速度を100倍以上に、好
ましくは１万倍以上に増加させることができる。
抗体−反応体複合体の形成に適した状態は、約6.0〜
約8.0、好ましくは約6.0〜約7.5のpHに維持されかつ約
４℃〜約50℃、好ましくは約20℃〜約45℃の温度に維持
されたプロトン性溶媒（protic solvent）、好ましくは
水を含む溶液相あるいはエマルジヨン反応系により与え
られる。イオン強度μ＝1/2Σciz2 i（式中、ｃは濃度で
あり、ｚはイオン性溶質の電荷である）。それは、１リ
ツトルあたり2.0モル以下、好ましくは１リツトルあた
り約0.1〜1.5モルの値に維持されなければならない。本
発明方法は減圧あるいは加圧下で実施されうるが、好ま
しくは大気圧下で実施する。
本発明の実施に際して使用するのに適したモノクロー
ナル抗体はＫ＞１で特徴づけられる。前記Ｋ＝kr/kp
（式中、krは反応体に対するモノクローナル抗体の親和
性（アフイニテイー）定数であり、kpは生成物に対する
モノクローナル抗体の親和性定数である）。モノクロー
ナル抗体は更にr1＞r0（式中、r1は抗体と反応体との複
合体形成速度であり、r0はモノクローナル抗体の非存在
下での化学反応速度である）、r2＞r0（式中、r2は複合
体化された反応体から複合体化された生成物への変換速
度である）およびr3＞r0（式中、r3は複合体からの生成
物の遊離速度である）によつて特徴づけられる。
適当なモノクローナル抗体を産生する方法も開示され
ている。一具体例では、当業者に周知の方法を変更して
つくつたハイブリドーマ細胞を、適当なモノクローナル
抗体を産生するという能力の点で選別（スクリーニン
グ）する。
別の具体例では、抗−イデイオタイプモノクローナル
抗体を公知の酵素−基質系に対してつくる。抗−イデイ
オタイプモノクローナル抗体は、基質を生成物へ変換す
る速度を増加させるために使用可能であり、アロステリ
ツク制御をうけない。
発明の詳細な説明 上述した様に、本発明は少なくとも１つの反応体から
少なくとも１つの生成物への変換を含む化学反応の速度
を高める方法を提供するものである。本発明の実施に於
いて、反応体（１つ以上）少なくとも１つの適当なモノ
クローナル抗体と、該モノクローナル抗体と該反応体
（１つ以上）との間の複合体の形成、該反応体（１つ以
上）の生成物（１つ以上）への変換及び該生成物（１つ
以上）の該複合体からの遊離を可能にする適切な条件下
で接触させる。
本発明に有用なモノクローナル抗体は、本明細書中に
引用によつて組み入れられている米国特許第4,196,265
号（1980年４月１日発行）中にコプロウスキー（Koprow
ski）等によつて開示されている技術を改良したものに
よつて調製される。これについての詳細は通常の知識を
有する当業者には公知のものである。本発明の１具体例
に於いて、適当な条件下で反応体に対する一連のモノク
ローナル抗体が調製される。これは、まず最初にBALB/C
マウスを適当な抗原で免疫感作することを含む。抗原
は、所望の反応体かあるいはペプチド又は他のキヤリア
分子に結合した所望の反応体か、あるいは反応中間体か
又は反応体、生成物もしくは反応中間体の類似物であり
得る。本明細書中で使用される「類似物（アナログ）」
という用語は、その類似物に対して生産された抗体がそ
の類似物の反応を必ずしも触媒しないか反応体と免疫学
的反応を引き起し得るように、化学構造の点に於いてそ
の反応体に充分似ている異性体、同族体及び他の化合物
を包含する。例えば、触媒されるべき反応がｏ−ニトロ
フエニル−β−Ｄ−ガラクトシドの開裂である場合は、
抗原は例えばアオガイヘモシアニン（keyhole limpet h
emocyanin:KLH）のようなキヤリアに結合した類似物ジ
ニトロフエノールであり得、又抗原はその反応体すなわ
ちｏ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガラクトシドであり得
る。
もう１つの例として、触媒されるべき反応がアミノレ
ブリン酸２分子からポルホビリノーゲンを生ずる縮合で
ある場合、 抗原は類似物である３−グリシル−４−ヒドロキシ−
４−メチル−1,5−ヘパタンニ酸であり得る。
その後免疫感作されたマウスの脾臓から抗体産生リン
パ球を取り出し、SP2/0細胞のようなミエローマ細胞と
融合させて融合細胞（hybridoma cells）を作成する。
これらの融合細胞をその後マイクロタイタープレート
のウエル上に播く。この融合細胞によつて産生される一
連のモノクローナル抗体に対して適度な条件下でスクリ
ーニングを行ない、適度な条件下で所望の反応を触媒す
るモノクローナル抗体を同定する。スクリーニングは、
反応体の標準溶液をマイクロタイターのウエルから採取
した一定量の培地で処理し、従来の機器手段によつて所
望の生成物の存在を測定することによつて便利に行ない
得る。この測定は、例えば分光光度計法、ガス液体クロ
マトグラフイ又は高圧液体クロマトグラフイによつて容
易に行ない得る。所望の生成物又は反応体の標準化試料
との比較によつて、反応速度が定量化され得る。この方
法によつて、触媒作用をもつモノクローナル抗体を産生
する融合細胞を含んでいるウエルを同定する。次いで、
こうして選択された融合細胞がコロニーを形成するまで
培養する。
これらのコロニーはインビトロ（in vitro）又はイン
ビボ（in vivo）のシステムで更に増殖させることもで
きる。後者の場合は、選択された融合細胞を同系BALB/C
マウスのようなマウスの腹腔内に移植すると通常２〜３
週内に腫瘍を形成する。この腫瘍に伴つて所望のモノク
ローナル抗体を含む腹水が生成される。その後、このモ
ノクローナル抗体は、限外過、超遠心、透析及び免疫
アフイニテイークロマトグラフイー等の従来の方法によ
つて腹水から分離回収される。
本発明のモノクローナル抗体は以下の式によつて特徴
付けられる。
（１）Ｋ＝kr／kp＞１ （２）r1＞r0 （３）r2＞r0 （４）r3＞r0 式（１）に於いて、Ｋは、反応体に対するモノクロー
ナル抗体のアフイニテイー定数krの、生成物に対するモ
ノクローナル抗体のアフイニテイー定数kpに対する比と
定義される。この式は、このモノクローナル抗体が生成
物よりも反応体に対してより強い結合アフイニテイー
（binding affinity）を持つているという事実を反映し
ている。従つて、反応体が化学修飾を受け生成物を形成
した結果、複合体を形成した分子に対するモノクローナ
ル抗体の結合アフイニテイーが低下して生成物分子が該
複合体から遊離し、それによつて遊離のモノクローナル
抗体触媒が再生される。好ましくはＫは102より大であ
る。
式（２），（３）及び（４）は本発明に有用なモノク
ローナル抗体の速度論的特性を示している。
式（２）は、抗体−反応体間の複合体形成速度として
定義されるr1がモノクローナル抗体がないときの化学反
応速度r0よりも大でなければならないということを表し
ている。式（３）は、複合体を形成した反応体が複合体
を形成している生成物に変換する速度として定義される
r2がr0よりも大でなければならないことを表している。
式（４）は、複合体からの生成物の遊離速度として定義
されるr3がr0よりも大でなければならないということを
表している。r0，r1，r2及びr3は公知の方法によつて直
接又は間接的に便利に決定され得ることは当業者には理
解されるところである。
これらの特徴の結果、本発明のモノクローナル抗体に
よつて化学反応の速度を好ましくは102倍以上更に好ま
しくは104倍以上に早くすることができる。
本発明に依れば、分離回収されたモノクローナル抗体
を適度な条件下で反応体と接触させる。この条件によつ
て該モノクローナル抗体と該反応体間の複合体が形成さ
れ得る。通常の知識を有する当業者には、複合体形成の
ための適当な条件は問題になつているその特定の反応体
とモノクローナル抗体とに依つて変化し得ることは理解
されよう。従つて、モノクローナル抗体が反応体（１つ
以上）と複合体を形成し得なくなつたり又は別様に不活
性化されない限り本発明方法は様々な反応条件下で実施
され得る。より特定的には複合体形成のための適当な条
件は、プロトン性溶媒（protic solvent）、好ましくは
水を含む溶液相及び乳濁反応システムを包含し、これは
pHが約6.0〜約8.0、好ましくは約6.0〜約7.5で温度が約
４℃〜約50℃、好ましくは約20℃〜約45℃に保たれてい
るものである。イオン強度、μ＝1/2Σcizi 2（ここでｃ
は濃度、ｚはイオン性溶質の電荷である。）は約2.0mol
e/lより小さく、好ましくは0.1〜1.5mole/lに維持すべ
きである。本発明方法は減圧又は加圧下で行ない得る
が、大気圧で行なうのが好ましい。溶液相及び乳濁反応
システムに加えて、モノクローナル抗体が付着される支
持物を用いることも適当な条件として含まれる。このよ
うな支持物は、モノクローナル抗体をそれに付着させる
方法と共に通常の知識を有する当業者には良く知られて
いる。
本発明方法はどのような化学反応の速度を高めるのに
も広く有用である。例えば、本発明方法は１つの反応体
から１つの生成物への変換を含む化学反応に適用し得
る。このような反応はα−ケト酸からα−アミノ酸への
変換を含み、インドールピルビン酸のＬ−トリプトフア
ンへの変換によつて例示され得る。もう１つの例として
は環状ポリヌクレオチドから鎖状ポリヌクレオチドへの
変換がある。ここで“ポリヌクレオチド”という用語は
ポリ及びオリゴヌクレオチドの両者を含む。
本発明方法はもつと複雑な化学量論の化学反応にも適
用され得る。例えば、２つの反応体からの１つの生成物
への変換を含む反応の速度も本発明によつて高められ得
る。このような反応の例としてアミノレブリン酸２分子
からのポルホビリノーゲン１分子への変換がある。
本方法は、１つの反応体から２つの生成物への変換を
含む反応にも有用である。このような反応は、β−Ｄ−
ガラクトシドからのＤ−ガラクトースと第２の生成物へ
の変換、ポリヌクレオチド、ポリペプチド又はポリサツ
カライドからのそれぞれから得られる２つのフラグメン
ト（断片）を生じる開裂によつて例示され得る。ここで
用いられる“ポリペプチド”及び“ポリサツカライド”
という用語は、それぞれポリ及びオリゴペプチド並びに
ポリ及びオリゴサツカライドを含む。
本方法は更に１つの反応体から多数の生成物への変換
を含む化学反応の速度を高めることに有用である。この
ような反応はポリヌクレオチド、ポリペプチド及びポリ
サツカライドからのそれぞれから生じるフラグメント
（断片）への変換等を含む。
本発明のもう１つの具体例では、反応体を１つより多
くのモノクローナル抗体と接触させる。この抗体の各々
は反応体の異なる決定基にそれぞれ作用する。従つて、
反応体がポリヌクレオチドでモノクローナル抗体がこの
ポリヌクレオチド内部の異なつたヌクレオチド配列に作
用するものであるときは、特定のポリヌクレオチドフラ
グメントを該反応体から開裂し得る。
本方法は２つの反応体から２つの生成物への変換を含
む反応の速度を高めるのにも有用である。このような反
応は１つの反応体と２番目の反応体との間での官能基の
交換によつて２つの新しい生成物を生じる、例えばエス
テル交換反応を含む。
前述したところの化学量論の列挙は限定的なものでは
なく、むしろ本発明の広範囲に恒る有用性を指摘し、本
方法がいま問題にされている反応の化学量論に限定され
ないということを示すつもりのものである。
前述の議論及び実例によつても明らかなように、本発
明の方法は酸化還元、付加、縮合、脱離、置換、開裂及
び転位その他のものを含む広範囲な化学反応に対して有
用である。
これらの実例は本発明の触媒特異性が高いということ
もまた例証するものである。例えば本発明の実施に際し
て、ポリヌクレオチドのある特定なヌクレオチド配列だ
け、又はペプチドのある特定なアミノ酸配列だけと相互
作用するモノクローナル抗体を調製し得る。
本発明の方法は酵素によつても触媒され得る反応の速
度を高めることに用い得る。例えば酵素としては、アル
コールデヒドロゲナーゼ、グルコースオキシダーゼ、キ
サンチンオキシダーゼ、ジヒドロウラシルデヒドロゲナ
ーゼ若しくはＬ−アミノ酸オキシダーゼのような酸化還
元酵素、グアニジノ酢酸メチルトランスフエラーゼ、セ
リンヒドロキシメチルトランスフエラーゼ若しくはアス
パラギン酸アミノトランスフエラーゼのような転移酵
素、アセチルコリンエステラーゼ、グルコース−６−ホ
スフアターゼ若しくはホスホジエステラーゼのような加
水分解酵素、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、アルドラ
ーゼ若しくはヒスチジンアンモニア−リアーゼのような
リアーゼ、リブロースリン酸エピメラーゼのようなイソ
メラーゼ又はチロシル−ttRNAシンターゼ若しくはアセ
チルCoAカルボキシラーゼのようなリガーゼが考えられ
る。
前記した様に本方法は、自然にはアミノレブリン酸デ
ヒドラターゼという酵素によつて触媒される反応であ
る、アミノレブリン酸２分子からポルホビリノーゲン１
分子への変換、自然にはホスホジエステラーゼ（制限）
酵素によつて触媒されるポリヌクレオチド中の特定なホ
スホジエステル結合の開裂を含む反応である。環状ポリ
ヌクレオチドから鎖状ポリヌクレオチドへの変換又は鎖
状ポリヌクレオチドから２つ以上のそれのフラグメント
への変換、自然にはトランスアミナーゼ酵素によつて触
媒される反応体から生成物へのアミノ基への転移（tran
sfer）を含む反応である、インドールピルビン酸のよう
なα−ケト酸からＬ−トリプトフアンのようなα−アミ
ノ酸への変換、及び自然にはβ−Ｄ−ガラクトシターゼ
によつて触媒されるβ−Ｄ−ガラクトシド結合の開裂を
含む反応である、β−Ｄ−ガラクトシドからのＤ−ガラ
クトース及び第２生成物への変換、の速度を高めるのに
用いることができる。
本発明のその他の態様においては、ある酵素の既知の
基質である抗原に対するモノクローナル抗体を調製し基
質を生成物に変換する速度を増加させるために使用す
る。本方法は例えば、酵素β−Ｄ−ガラクトシダーゼの
基質として公知のｏ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガラク
トシドのｏ−ニトロフエノールとＤ−ガラクトースへの
分解（変換）の速度を増加させるのに有用である。本方
法においては、該酵素をBALB/Cマウスに接種し、前記し
た一般的技術に従って処理することによって、該酵素に
対する一連のモノクローナル抗体を調製する。こうして
調製した一連の抗体を至適条件下でスクリーニングし、
酵素の活性部位に結合する第１モノクローナル抗体を同
定する。そのようなモノクローナル抗体は、適当な条件
下で抗原（基質）が酵素に対して結合するのを阻害する
抗体をスクリーニングすることによつて同定し得る。こ
のスクリーニング工程は、例えばラジオイムノアツセイ
（RIA）のような酵素結合活性を測定する慣用の方法に
より行うのが便利である。このようにして同定した第１
モノクローナル抗体を一般的方法により分離回収し、新
たな別のBALB/Cマウスに接種するのに使用する。一般的
方法に従い、第１モノクローナル抗体に対する一連のモ
ノクローナル抗体を生成する。かくして生成された抗体
を“抗−イデイオタイプ”モノクローナル抗体と称す
る。次に一連の抗−イデイオタイプモノクローナル抗体
を一般的方法に従つてスクリーニングし、至適条件下で
抗原（基質）に結合しそれを生成物に変換する抗−イデ
イオタイプモノクローナル抗体を同定する。“（適切
な）至適条件”とは抗体−反応体複合体形成のための前
記パラメーター内にある条件を意味する。かくして生成
され、分離回収された抗−イデイオタイプモノクローナ
ル抗体は本発明に従い、基質を生成物に変換する速度を
増加するために使用し得る。
本発明のこの実施態様において酵素の代りにこのよう
なモノクローナル抗体を使用することは、酵素がアロス
テリツクな場合特に有利である。アロステリツク酵素
は、基質、生成物あるいは他の分子であり得るモジユレ
ーター分子により活性化あるいは阻害される酵素であ
る。その結果、アロステリツク酵素の動力学的挙動はモ
ジユレーター（１種以上）の濃度の変動により大きく変
化する。アロステリツク挙動の比較的簡単な例はフイー
ドバツク阻害を受ける酵素により例示される。この場合
酵素の触媒効率は、直接のあるいはその後の生成物の濃
度の増加に従い減少する。これによりこのような酵素の
多くの用途での使用は制限され、生成物の連続的な除去
が必要となる。本発明においてはそのような酵素の代り
にアロステリツクコントロールを受けない適当な抗−イ
デイオタイプモノクローナル抗体を使用することによつ
てアロステリツク性の問題及び制限を打破し得る。
本発明は、以後コファクター（補因子）と称する非タ
ンパク性有機分子によつても触媒され得る反応の速度を
増加するのに使用し得ることもまた考えられる。コファ
クターとは例えば、ピリドキサールリン酸、ニコチンア
ミドアデニンジヌクレオチド、ニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチドリン酸、フラビンアデニンジヌクレオチ
ド、アデノシン三リン酸、チアミンピロリン酸（pyrosp
hospohave）、フラビンモノヌクレオチド、ビオチン、
テトラヒドロ葉酸、コエンザイムB12、及びコエンザイ
ムＡ等である。例えばピリドキサールリン酸によつて触
媒され得る反応にはα−ケト酸及びα−アミノ酸の相互
変換（inter−conversion）がある。コファクターのみ
によつて触媒される反応は他のものも含めて比較的遅い
反応で、また非選択的である。コファクターのみを使用
した時に遭遇する問題を打破するために、コファクター
のみの比較的効率の悪い触媒能力と高度に特異的で効率
の高いモノクローナル抗体の有利性とを結合する本発明
に従つてモノクローナル抗体を調製し得る。そのような
モノクローナル抗体を調製するためには、反応体あるい
は反応体又は生成物の類似物に結合したコファクターを
マウスに接種し、その後前述したコプロウスキー（Kopr
owski）の一般的方法を行なう。次に一般的方法により
一連のハイブリドーマ細胞を調製して、遊離コファクタ
ー及び反応体と複合化し、化学反応の速度を増加し、生
成物を解放（遊離）し得るモノクローナル抗体の生成に
関してスクリーニングする。例えばインドールピルビン
酸−ピリドキサミンリン酸イミンに対するその様なモノ
クローナル抗体は、インドールピルビン酸のアミノ酸ト
リプトフアンへの変換の速度を選択的に増加させる。本
発明のこの態様の実施においては、モノクローナル抗体
と少なくとも等モル量の適当なコファクターを反応混合
物に加えることが好ましい。
本発明の特定実施態様の説明のため、実施例を以下に
記載する。
材料及び方法 以下の実施例で使用した化学的、生物学的試薬は下記
の市販先より入手した。ｏ−ニトロフエニル−β−Ｄ−
ガラクトシダーゼ及びバツフアーはシグマケミカル社
（Sigma Chemical Co.,セントルイス、ミズーリ）より
入手した。ジニトロフエノール（DNP）及びジニトロベ
ンゼンスルホン酸塩はイーストマンコダツク社（Eastma
n Kodak Co.,ロチエスター、ニユーヨーク）より入手し
た。ホースラデイツシユベルオキシド標識ヤギ抗マウス
イムノグロブリン及び2,2′−アジノージ（３−エチル
ベンズチアゾリンスルホン酸）（ABTS）はKLPラボラト
リー（KPL Laboratories,Inc.,ゲザーズバーグ、メリー
ランド）より入手した。マイクロタイタープレート（Im
mulon II ）はダイナテツク（Dynatech,アレキサンド
リア、バージニア）より入手した。カノマイシンはジブ
コラボラトリーズ（GIBCO Laboratories、グランドアイ
ランド、ニユーヨーク）より入手した。牛胎児血清及び
アオガイヘモシアニン及び他のタンパク質はカルバイオ
ケム−ベーリング（Calbiochem−Behring.サンジエゴ、
カリフオルニア）より入手し得る。細胞生長培地及び添
加物はエムエーバイオプロダクツ（M.A.Bioproducts、
ウオーカーズビル、メリーランド）より入手し得る。Sp
20ミエローマ細胞（ATCC CRL 1581）はアメリカンタイ
プカルチユアコレクシヨン（American Type Culture Co
llection,ロツクビル、メリーランド）より入手した。
他の試薬、例えばｏ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガラク
トシド、５−アミノレビユリン酸、過酸化水素、フエノ
ール、硫酸マグネシウム、重炭酸ナトリウム、インドー
ル−３−ピルビン酸、ピリドキサール−５−リン酸モレ
キユラーシーブ及びモルフオ（morpho）CDI等はアルド
リツチケミカル社（Aldrich Chemical Co.,セントルイ
ス、ミズーリ）より入手し得る。BALB/Cマウスはナシヨ
ナルカンサーインステイテユート、フレデリツクリサー
チフアシリテイ（National Cancer Institute,Frederic
k Research Facility,フレドリツク、メリーランド）よ
り入手した。アジユバンドはシグマ（Sigma）より入手
した。マウス乳腺腫瘍ウイルスRNAは、例えばMTV ATCC
VR−731（アメリカンタイプカルチユアコレクシヨン）
のような市販のマウス乳腺腫瘍ウイルスから従来法によ
り抽出し得る。３−グリシル−４−ヒドロキシ−４−メ
チル−1,5−ヘプタン二酸類似体は慣用の合成法、例え
ばアミノレビユリン酸及びレビユリン酸（アルドリツ
ヒ,Aldrich）を適当に保護した分子の塩基触媒縮合及び
その後の脱保護及びHPLC精製により調製し得る。
実施例１ ｏ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガラクトシドによるマウ
スの免疫化 第０日目に、７週令の雌BALB/Cマウスの１グループ
（表１のグループ１）に10mgのｏ−ニトロフエニル−β
−Ｄ−ガラクトシド（ONPG）を静脈内、12mgのONPGを腹
腔内接種した。ONPGはpH7.3の0.1Mリン酸バツフアーに2
5mg/mlの濃度で溶解し、37℃に加温した。第33日目のマ
ウスに、不完全フロインドアジユバント中のONPGを12.5
mg腹腔内接種した。ONPGリン酸バツフアー溶液は等容量
の不完全フロインドアジユバントと混合し、接種に先立
ち乳化させた。第54日目に各マウスから血液試料を採取
した。血液サンプルから遠心分離により血清を分離し４
℃で保存した。
実施例２ ジニトロフエノール−アオガイヘモシアニン結合体によ
るマウスの免疫化 実施例１の接種マウスの91日目に、アオガイヘモシア
ニン（KLH）に結合させ不完全フロイントアジユバント
中に乳化させたジニトロフエノール（DNP）を腹腔内接
種した。ブラツドフオード（Bradford）の方法（1976,
アナル・バイオケム〔Anal.Biochem.〕72:248）により
測定したところ、接種物は10mgのタンパク質を含有して
いた。ジニトロフエノールのKLHへの結合はリトル及び
エイセン（Little,Eisen）の方法（1967,メゾ・イムノ
ル・イムノケム〔Meth.Immunol.Immunochem.〕1:12）に
より行なつた。DNP−KLH接種を第101日目に繰り返し
た。接種物は第91日目の接種物について記載したように
調製した。第105日目に各マウスから血液サンプルを
得、遠心分離により血清を分離し４℃で保存した。
実施例３ ｏ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガラクトシドによるマウ
スの免疫化 BALB/Cマウス（表１のグループ２）に第０日目に完全
フロイントアジユバント中に乳化した50mgあるいは100m
gのONPGを腹腔内に、第30日目にpH7.3の0.1Mリン酸バツ
フアー中のONPG10mgを静脈内に、第63日目に不完全フロ
イントアジユバント中のONPG（25mg/ml）12.5mgを腹腔
内にそれぞれ接種した。その９日後にマウスから採血
し、遠心分離により血清を分離して４℃で保存した。
実施例４ ジニトロフエノール−アオガイヘモシアニン結合体によ
るマウスの免疫化 実施例３の接種マウスの第121日目及び第131日目に、
不完全フロイントマジユバントに乳化したDNP−KLHを10
mg腹腔内接種し、第135日目に採血した。遠心分離によ
り血清を分離し４℃で保存した。
実施例５ マウス血清の評価 Ａ マイクロタイタープレートウエルの調製 炭酸バツフアー中にONPG（1mg/ml）を含有する溶液50
μｌをポリスチレンマイクロタイタープレートの各ウエ
ルに加えた。４℃で18時間後溶液を除去し、ウエルを0.
05％Tween−20を含有するリン酸緩衝生理食塩水（PBS−
Tween）で４回洗浄した。次に、ウエルに１％ウシ血清
アルブミン（BSA）を含有するPBS−Tweenを入れ、120分
間37°でインキユベートしてONPG−コートウエルをブロ
ツクした。
Ｂ ONPG−結合アツセイ 実施例１及び３において採集した血清及び免疫化して
いないマウスの血清を、１％BSAを含有するPBS−Tween
で種々の程度に希釈した。かくして得られた溶液試料を
上記のように調製したONPGコートウエルに加え、37℃で
120分間インキユベートした。その後溶液を除去しPBS−
Tweenでウエルを４回洗浄した。ONPGに結合する血清抗
体の存在を、ホースラデイツシユペルオキシダーゼに結
合した抗−マウスヤギイムノグロブリンを使用するエン
グバル（Engvall）及びパールマン（Perlman）の方法
（1971、イムノケム〔Immunochem.〕8:871）により検出
した。洗浄してウエルから非結合抗マウス抗体を除去し
た後、2,2′−アジノ−ジ（３−エチルベンズチアゾリ
ンスルホン酸）（ABTS）及び過酸化水素を各ウエルに加
え15〜20分間接触させておいた。ONPGで免疫化したマウ
スから得た血清の1:10〜1:320の希釈液と接触したウエ
ルにおいて着色生成物が検出された。実施例３で採集し
た血清のうち当初に100mgのONPGを接種したマウスから
得たものは1:320よりも大きいタイターを有しており、
これは当初50mgのONPGを接種したマウスから得られた血
清の少なくとも２倍以上である。ONPGで免疫化されてい
ないマウスから得た血清は、本アツセイにおいては着色
生成物を生成しなかつた。これ等の結果は、ONPGで免疫
化されたマウスから得た血清はONPGに結合した抗体を含
有していることを示している。
Ｃ ONPGの開裂を触媒する活性のアツセイ ONPGと反応する抗体の触媒活性を下記のようにして測
定した。実施例１及び３において上記したように得たマ
ウス血清の希釈物の50μｌを、１％BSAを含有するPBS−
Tweenバツフアー中のONPG50μｌと23℃で18時間接触さ
せた。同様に、50μｌのPBS−Tween−BSAバツフアー中
の50ngの酵素β−Ｄ−ガラクトシダーゼをONPG溶液と接
触させた。触媒活性の結果、β−Ｄ−ガラクトース及び
ｏ−ニトロフエノールを生成する（後者は黄色を有す
る）ことになる触媒活性はどの血清試料中にも検出され
なかつた。予想されたように酵素β−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼは触媒活性を有していた。
次に実施例２及び４で採集された、KLHに結合したDNP
をさらに接種されたマウスから得られた血清について測
定した。該血清につき上記した方法によりONPGに結合す
る抗体の存在を試験した。免疫化マウスより得た血清が
抗−ONPG抗体を含有することが示された。1:5,120の希
釈血清が、抗−ONPG抗体の存在に対して陽性の反応を示
した。このことは、KLHに結合された類似体による追加
の免疫化が、血清中の抗−ONPG抗体の濃度の増加をもた
らしたことを示している。免疫化していないマウスから
得られた血清を使用すると何の反応も見られなかつた。
実施例２及び４で採集された血清中の血清抗体の触媒
活性を上記のようにして試験した。
結果を表１に示すが、免疫化されたマウスからの血清
試料中において触媒活性が検知されたことを示してい
る。
実施例６ ｏ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガラクトシドで免疫感作
することによる融合（ハイブリダイゼーシヨン）用脾臓
細胞の調製 実施例４と同様に免疫感作し、実施例５と同様にアツ
セイした抗体産生マウスを殺し、その脾臓を摘出する。
10匹のマウスの脾臓を穏やかに細片化し、細いナイロン
スクリーンを通過させてリンパ球（脾臓細胞）懸濁液を
得る。この懸濁液を血清を含有しないRPMI−1640で３回
洗浄する。
実施例７ 融合（ハイブリダイゼーシヨン）用骨髄腫（ミエロー
マ）細胞の調製 SP2/0系由来の骨髄腫細胞を、２％牛胎仔血清、ペニ
シリン及びストレプトマイシンを補つたHB101培地（完
全HB101）中で増殖させる。SP2/0細胞は細胞融合に使用
する前に３日間毎日継代培養し、105細胞/mlを超えない
濃度で接種する。SP2/0細胞は融合前にRPMI−1640で一
回洗浄する。
実施例８ ハイブリドーマ細胞の調製 実施例６と同様に調製したリンパ球懸濁液と実施例７
に従つて調製したSP2/0骨髄腫細胞懸濁液とを4:1の割合
で混合する。
細胞をペレツト状にし、次いで1.6×105リンパ球に対
して1mlの割合でポリエチレングリコール（PEG）1450
（イーストマン−コダツク（Eastman−Kodak）、ロチエ
スター（Rochester）、NY）溶液（RPMI−1640中に50％P
EG wt/volを含有）を細胞ペレツトに滴加する。PEG溶液
で細胞融合した後、細胞懸濁液を200xgで５分間遠心す
る。上清を除去し、最終濃度107細胞/mlとなるように細
胞を完全HB101中に静かに懸濁する。次いで、96−ウエ
ルマイクロタイタープレートのウエル中にこの最終細胞
懸濁物を100μｌの容量で分配し、37℃で培養する。次
いで、24時間後に各ウエルに100μｌのHAT培地（１×10
-4Ｍヒポキサンチン、4.0×10-7Ｍアミノプテリン及び
1.6×10-5Ｍチミジンを補つた完全HB101）を添加する。
各ウエルから約100μｌの培地を吸引し、新しいHAT培地
100μｌを添加することにより２〜３日毎に細胞に栄養
を与える。
HAT培地中での培養の週１の間に、親の骨髄腫細胞と
リンパ球はほとんど死亡するのが観察される。
インキユベーシヨンの10〜15日後に、ハイブリダイゼ
ーシヨンが成功したことを示すHAT培地中での細胞の増
殖が観察される。
実施例９ 触媒的モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細
胞のスクリーニング 実施例８に従つて調製した、ｏ−ニトロフエニル−β
−Ｄ−ガラクトシドからｏ−ニトロフエノールとＤ−ガ
ラクトースへの開裂を触媒しうる抗体を産生するハイブ
リドーマ細胞を含むマイクロタイターウエルを次のよう
にアツセイする：各ウエルがｏ−ニトロフエニル−β−
Ｄ−ガラクトシドの0.05M溶液を含有している第２の96
−ウエルマイクロタイタープレート（アツセイプレー
ト）を調製し、37℃に維持する。第１プレート（ハイブ
リドーマプレート）の各ハイブリドーマ含有ウエルの内
容物のアリコート100μｌを取り出し、アツセイプレー
トの対応ウエルに移す。ｏ−ニトロフエノールの存在は
分光光度計で測定するのが好ましい。又、移した各５分
後にアツセイプレートウエルのアリコート50μｌを生成
物の１つ又は両者の存在についてHPLCで分析する。ｏ−
ニトロフエノールとＤ−ガラクトースを含むことが判明
した各アツセイプレートウエルを同定し、対応するハイ
ブリドーマプレートウエルに印をつける。
実施例10 ハイブリドーマ細胞の培養 実施例９で同定した各触媒的ハイブリドーマ細胞懸濁
物の一部を新しいマイクロタイタープレートの各ウエル
に播種する。ハイブリツド細胞のコロニー形成率は50％
である（すなわち、播種した細胞の50％が増殖してコロ
ニーを形成する）。この操作により、２週間以内に80〜
100％のウエルでハイブリツド細胞のコロニーが得られ
る。実施例９に記載の方法により、再度ハイブリドーマ
細胞の触媒的抗体の産生について調べる。胸腺リンパ球
支持細胞を用い、但し、３つのウエル当りハイブリツド
細胞１つの濃度で、触媒的抗体を産生し続けているハイ
ブリドーマ細胞を再びクローン化する。特異的な組み合
せからのクローンの90％未満が抗体を産生するときには
常にこの操作を繰り返す。
実施例11 インビボ（in vivo）での触媒的モノクローナル抗体 実施例９に従つて選択したハイブリツド細胞106個を
同系のBALB/Cマウスに腹腔内接種すると、２〜３週間以
内に接種したマウスの90％より多くで触知可能な腫瘍が
誘発される。これらの腫瘍は腹水の産生（マウス当り0.
5〜3ml）を伴う。ハイブリドーマを有するマウスの腹水
及び血清中の免疫グロブリン濃度は放射免疫拡散アツセ
イで測定する。個々のマウスの血清及び腹水中のモノク
ローナル抗体の濃度はほぼ等しく、各々ml当り５〜50mg
の抗体を含有している。次に、ゲル過又は限外過の
ような通常の方法で、血清又は腹水からｏ−ニトロフエ
ニル−β−Ｄ−ガラクトシドの開裂を触媒しうるモノク
ローナル抗体を採取する。
実施例12 ｏ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガラクトシドの開裂を触
媒するモノクローナル抗体の使用 0.5Mリン酸バツフアでpH6.8に緩衝し37℃に維持した
蒸留水1000ml中に30.12g（100ミルモル）のｏ−ニトロ
フエニル−β−Ｄ−ガラクトシドを含有する溶液に、実
施例６に従つて調製したモノクローナル抗体10mgを加え
る。反応混合物を２時間静かに攪拌する。次いで、限外
過により反応混合物からモノクローナル抗体を回収す
る。次に、液を10℃に冷却し、重炭酸ナトリウム9.2g
（110ミリモル）で処理する。液をジエチルエーテル1
00ml3部で抽出することによりＤ−ガラクトースを回収
する。エーテル部分を合せて、1.0N重炭酸ナトリウムで
１回洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、過し、
減圧下に濃縮してＤ−ガラクトースを得る。次いで水性
部分と重炭酸ソーダ洗液とを合せ、5N塩酸の添加により
pH3へと酸性化する。次に、酸性化した水性部分をエー
テルで３回抽出する。エーテル抽出物を合せ、硫酸マグ
ネシウム上で乾燥させ、過し、減圧下に濃縮してｏ−
ニトロフエノールを得る。HPLC又は再結晶によりｏ−ニ
トロフエノール及びＤ−ガラクトースを更に精製しても
よい。
実施例13 ポルホビリノーゲン（PBG）産生用触媒的モノクローナ
ル抗体の調製 BALB/Cマウスを３−グリシル−４−ヒドロキシ−４−
メチル−1,5−ヘプタン二酸で免疫感作するほかは実施
例６の方法に従つて、ハイブリダイゼーシヨン用脾臓細
胞を調製する。実施例７に従つて骨髄腫細胞を調製す
る。次に、実施例８の方法に従つて脾臓細胞と骨髄腫細
胞を融合させてハイブリドーマ細胞を生じさせる。次い
で、アツセイ基質がアミノレブリン酸（0.05M）であ
り、アツセイがPBGに対応するHPLC−ピークの出現につ
いて試験するものである、実施例９の方法の変法により
ハイブリドーマ細胞をスクリーニングする。そのように
同定したハイブリドーマ細胞を実施例10の方法に従つて
培養し、実施例11の方法に従つてマウスから得る。
実施例14 PBGの産生を触媒するためのモノクローナル抗体の使用 0.5Mリン酸バツフアでpH6.8に緩衝し、37℃に維持し
た蒸留水1000ml中に13.1g（100ミリモル）のアミノレブ
リン酸を含有する溶液に、実施例13に従つて調製したモ
ノクローナル抗体30mgを添加する。反応混合物を２時間
静かに攪拌する。次いで、限外過により反応混合物か
らモノクローナル抗体を回収する。反応混合物を凍結乾
燥し、残留物をクロマトグラフイーにかけ精製PBGを得
る。
実施例15 Ｌ−トリプトフアン産生用触媒的モノクローナル抗体の
調製 窒素雰囲気下、無水メタノール中で2.03g（10ミリモ
ル）のインドール−３−ピルビン酸と2.65g（10ミルモ
ル）のピリドキサミンリン酸と3gの乾燥した４Åのモレ
キユラーシーブとを混合することによりシツフ塩基を調
製する。反応混合物を一晩静かに攪拌し、過し、減圧
下で濃縮してシツフ塩基を得る。BALB/Cマウスをシツフ
塩基で免疫感作する以外は実施例６の方法で脾臓細胞を
調製する。このようにして得られた脾臓細胞を、実施例
７に従つて調製した骨髄腫細胞と実施例８の方法に従つ
て融合させる。次いで、基質がインドール−３−ピルビ
ン酸（0.05M）とピリドキサミン−５−リン酸（0.05M）
との混合物であり、アツセイによりＬ−トリプトフアン
に対応するHPLCピークの出現について試験する。実施例
９の方法の変法によりハイブリドーマ細胞をスクリーニ
ングする。このように同定したハイブリドーマ細胞を、
実施例10の方法に従つて培養し、実施例11の方法に従つ
てマウスから得る。
実施例16 Ｌ−トリプトフアン産生を触媒するためのモノクローナ
ル抗体の使用 0.5Mリン酸バツフアーでpH6.5に緩衝し、37℃に維持
した蒸留水1000ml中にインドール−３−ピルビン酸20.3
g（100ミリモル）とピリドキサミン５−リン酸26.5g（1
00ミルモル）とを含有する溶液に、実施例15に従つて調
製したモノクローナル抗体50mgを添加する。反応混合物
を２時間静かに攪拌する。次いで、限外過によりモノ
クローナル抗体を回収する。反応混合物を透析した後凍
結乾燥すると生成物のＬ−トリプトフアンが得られる。
実施例17 特異的ヌクレオチド配列でRNAを開裂しうる触媒的モノ
クローナル抗体の調製 （Ａ）抗原の調製 冷水（8ml）中に溶解し、0.1N水酸化ナトリウムでpH
6.5に滴定した牛血清アルブミン（BSA）（50mg）の溶液
に、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチ
ル）カルボジイミド メト−ｐ−トルエンスルホネート
（morpho CDI）を添加し、直後にマウス乳腺腫瘍ウイル
ス35SRNA（50mg）を添加する。反応混合物を室温まで加
温し、周期的に静かに攪拌しながら18時間保存する。次
いで反応混合物を0.05M重炭酸アンモニウムに対して
（４回変えて）、その後、水に対して（４回変えて）透
析する。次に、RNA−蛋白質（BSA）結合体（conjugat
e）を凍結乾燥し、バイアル中に秤量して入れ、−77℃
の窒素雰囲気下で保存する。又、BSAの代りにアオガイ
ヘモシアニン（KLH）、オボアルブミン（OA）及びウサ
ギ血清アルブミン（RA）を使うこともできる。これらの
蛋白質は全てカルバイオケム（Calbiochem）から入手で
きる。
（Ｂ）モノクローナル抗体の調製 上記（Ａ）で調製したBSA結合35SRNAでBALB/Cマウス
を免疫感作する以外は実施例６の方法に従つてハイブリ
ダイゼーシヨン用脾臓細胞を調製する。実施例７に従つ
て骨髄腫細胞を調製する。次いで、実施例８の方法に従
つて、脾臓細胞と骨髄腫細胞を融合しハイブリドーマ細
胞を得る。
0.9％NaClを含有する0.5Mリン酸バツフア（pH6.1）中
の35SRNAとマイクロタイターウエル内容物のアリコート
とを37℃で種々の時間インキユベートすることにより、
このように得られたハイブリドーマ細胞をスクリーニン
グする。次いで、フエノール抽出によりRNAを精製す
る。抗体開裂により発生したフラグメントの数を２次元
ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定し、各開裂部位
のヌクレオチド配列を解明する。測定はいずれもシユワ
ルツ（Schwartz）らがセル（Cell）32:853−869（198
3）に記載した方法に従つて行う。各マイクロタイター
ウエルの内容物により誘導されたRNA開裂で得たフラグ
メントとEco RIで誘導されたフラグメントとを比較する
ことにより、Eco RI開裂部位でのRNA開裂のみを触媒し
うるモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞
が選択される。このように同定したハイブリドーマ細胞
を実施例10の方法に従つて培養し、実施例11の方法に従
つてマウスから得る。
実施例18 Eco RI部位でのRNA開裂を触媒するためのモノクローナ
ル抗体の使用 0.9％NaClを含有する0.5Mリン酸バツフアでpH6.1に緩
衝し、37℃に維持した蒸留水100mlにマウス乳腺腫瘍ウ
イルス35SRNA（50mg）を加える。実施例17に従つて調製
したモノクローナル抗体（5mg）を反応混合物に添加
し、次いで30分間静かに攪拌しながらインキユベートす
る。次にフエノール抽出でRNAを精製し、ポリアクリル
アミドゲル電気泳動でフラグメントを精製する。
実施例19 β−Ｄ−ガラクトシダーゼに対する抗イデイオタイプモ
ノクローナル抗体 （Ａ）酵素活性部位に対するモノクローナル抗体の調製 BALB/Cマウスを酵素β−Ｄ−ガラクトシダーゼで免疫
感作する以外は実施例６の方法に従つてハイブリダイゼ
ーシヨン用脾臓細胞を調製する。実施例７に従つて骨髄
腫細胞を調製する。次いで実施例８の方法に従つて脾臓
細胞と骨髄腫細胞を融合しハイブリドーマ細胞を得る。
このようにして得たハイブリドーマ細胞を、酵素の活性
部位と結合するモノクローナル抗体の産生に関してスク
リーニングする。β−Ｄ−ガラクトシダーゼ及び放射標
識したｏ−ニトロフエニル−β−Ｄ−ガラクトシドとに
対するマイクロタイターウエル内容物の競合阻害のRIA
アツセイによりスクリーニングすると便利である。次い
で、このように選択したハイブリドーマ細胞を実施例10
の方法に従つて培養し、実施例11の方法に従つてマウス
から大量に得る。
（Ｂ）抗イデイオタイプモノクローナル抗体の調製 上記（Ａ）に従つて調製し選択したモノクローナル抗
体でBALB/Cマウスを免疫感作する以外は実施例６の方法
に従つてハイブリダイゼーシヨン用脾臓細胞を調製す
る。骨髄腫細胞は又実施例７の方法に従つて調製する。
実施例８の方法に従つて、脾臓細胞と骨髄腫細胞を融合
してハイブリドーマ細胞を得る。このように得たハイブ
リドーマ細胞は先ず実施例９の方法に従つてスクリーニ
ングする。予備的スクリーニングに基いて選択したハイ
ブリドーマ細胞を次いでアロステリズムについてスクリ
ーニングする。これは、実施例９に従い、但し、周期的
に、生成物のうちの１つの存在を測定することによって
行なう。このようにして得たデーターから反応速度を計
算できる。種々の量の反応体の存在下に又、種々の量の
測定するものではない生成物と共にアツセイを繰り返す
と、抗体の動力学的動態の変化を検出できる。この方法
で、アロステリツクな調節を示す抗イデイオタイプモノ
クローナル抗体が排除できる。非アロステリツクな抗イ
デイオタイプモノクローナル抗体を産生するハイブリド
ーマ細胞を、実施例10の方法に従つて培養し、実施例11
の方法に従つてマウス中での増殖により得る。
（Ｃ）抗イデイオタイプモノクローナル抗体の使用 （Ｂ）で得た抗イデイオタイプモノクローナル抗体を
実施例12の方法に従つて用いることができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 19/02 Ｃ１２Ｐ 19/02 19/34 19/34 Ｚ (72)発明者 マセイ，リチヤード・ジエイ アメリカ合衆国、メアリ−ランド・ 20852、ロツクヴイル、ヴアレリアン・ コート・５

Claims (29)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】少なくとも１種の反応体が少なくとも１種
    の生成物へ変換する化学反応を触媒する方法であって、 該化学反応における反応体から生成物への変換速度を触
    媒的に上昇させることのできる少なくとも１つのモノク
    ローナル抗体と該反応体とを、該反応体とモノクローナ
    ル抗体とが複合体を形成し該反応体が触媒的に該生成物
    へ変換し次いで該生成物が該複合体から遊離する条件下
    で、接触させることからなる上記方法。
  2. 【請求項２】モノクローナル抗体が、 （ａ）化学反応を触媒するモノクローナル抗体を調製
    し；次いで （ｂ）かくして調製されたモノクローナル抗体を大量に
    製造する、 工程から製造されたものである請求項１の方法。
  3. 【請求項３】モノクローナル抗体が、 （ａ）（ｉ）反応体、（ii）ペプチドまたは他の担体分
    子に結合した反応体、（iii）反応中間体、（iv）反応
    体の類似体、（ｖ）生成物の類似体であって、この類似
    体を抗原として得られるモノクローナル抗体が反応体ま
    たは反応中間体に結合できるような該類似体、及び（v
    i）反応中間体の類似体、からなる群より選ばれる抗原
    に対する複数のモノクローナル抗体を誘導し；次いで （ｂ）該複数のモノクローナル抗体をスクリーニングし
    て化学反応を触媒するモノクローナル抗体を同定する、 工程から製造されたものである請求項１または２の方
    法。
  4. 【請求項４】１つの反応体が１つもしくはそれ以上の生
    成物へ変換される請求項１から３のいずれかの方法。
  5. 【請求項５】反応体がポリサッカライドであり、生成物
    がそれから得られるサッカライドである請求項１から４
    のいずれかの方法。
  6. 【請求項６】反応体がポリヌクレオチドであり、生成物
    がそれから得られるヌクレオチド断片である請求項１か
    ら４のいずれかの方法。
  7. 【請求項７】反応体がβ−ガラクトシドであり、２つの
    生成物の少なくとも１つがガラクトースである請求項１
    から４のいずれかの方法。
  8. 【請求項８】２つの反応体が１つもしくはそれ以上の生
    成物へ変換される請求項１から３のいずれかの方法。
  9. 【請求項９】化学反応が、非タンパク性有機分子によっ
    ても触媒され得る反応である請求項１から３のいずれか
    の方法。
  10. 【請求項１０】非タンパク性有機分子がコファクターで
    あって、該コファクターの有効量が反応中に存在する請
    求項９の方法。
  11. 【請求項１１】コファクターがピリドキサルホスフェー
    トである請求項10の方法。
  12. 【請求項１２】化学反応が酵素によっても触媒され得る
    反応である請求項１から３のいずれかの方法。
  13. 【請求項１３】酵素の有効量が反応中に存在する請求項
    12の方法。
  14. 【請求項１４】化学反応が反応体から生成物へのアミノ
    基の交換を含んでおり、酵素がトランスアミナーゼ酵素
    である請求項13の方法。
  15. 【請求項１５】化学反応がポリリボヌクレオチド内のホ
    スホジエステル結合の開裂を含んでおり、酵素が制限酵
    素である請求項13の方法。
  16. 【請求項１６】化学反応がガラクトシル結合の開裂を含
    んでおり、酵素がβ−ガラクトシダーゼである請求項13
    の方法。
  17. 【請求項１７】反応体が環状ポリヌクレオチドであり、
    生成物が線状ポリヌクレオチドである請求項13の方法。
  18. 【請求項１８】反応体上の異なる抗原決定基に対するそ
    れぞれのモノクローナル抗体の２種以上と反応体とが複
    合体を形成する請求項１から３のいずれかの方法。
  19. 【請求項１９】反応体がポリヌクレオチドであり、モノ
    クローナル抗体がポリヌクレオチド内部の異なるヌクレ
    オチド配列に対するものである請求項18の方法。
  20. 【請求項２０】モノクローナル抗体存在下での反応速度
    が、モノクローナル抗体非存在下での反応速度の100倍
    以上である請求項１から３のいずれかの方法。
  21. 【請求項２１】pH6.0から8.0の水性溶液中で、大気圧下
    で、４℃から50℃の温度で、2.0モル/l未満のイオン強
    度で反応を実施する請求項１から３のいずれかの方法。
  22. 【請求項２２】モノクローナル抗体の特徴がＫ＞１（但
    しＫ＝kr/kpであり、krは反応体に対するモノクローナ
    ル抗体のアフィニティー定数であり、kpは生成物に対す
    るモノクローナル抗体のアフィニティー定数である）で
    あり；化学反応の特徴が、r1＞r0（ただし、r1は抗体と
    反応体との複合体の形成速度であり、r0はモノクローナ
    ル抗体が存在しないときの化学反応の速度である）、r2
    ＞r0（ただし、r2は複合体を形成した反応体から複合体
    を形成している生成物への変換速度である）、およびr3
    ＞r0（ただし、r3は生成物の複合体からの遊離速度であ
    る）であって、 モノクローナル抗体が （ａ）（ｉ）反応体、（ii）ペプチドまたは他の担体分
    子に結合した反応体、（iii）反応中間体、（iv）反応
    体の類似体、（ｖ）生成物の類似体であって、この類似
    体を抗原として得られるモノクローナル抗体が反応体ま
    たは反応中間体に結合できるものであるような該類似
    体、及び（vi）反応中間体の類似体からなる群より選ば
    れる抗原に対する複数のモノクローナル抗体を誘導し；
    次いで （ｂ）該複数のモノクローナル抗体をスクリーニングし
    て化学反応を触媒するモノクローナル抗体を同定する、 工程から製造されたものである請求項１の方法。
  23. 【請求項２３】化学反応がコファクターまたは酵素によ
    っても触媒され得る反応であり、コファクターまたは酵
    素が反応中に存在する請求項22の方法。
  24. 【請求項２４】抗原が反応体の類似体である請求項１か
    ら３のいずれかの方法。
  25. 【請求項２５】化学反応がコファクターまたは酵素によ
    っても触媒され得る反応であり、コファクターまたは酵
    素が反応中に存在する請求項１から３のいずれかの方
    法。
  26. 【請求項２６】抗原が反応中間体の類似体である請求項
    １から３のいずれかの方法。
  27. 【請求項２７】工程（ｂ）によって同定されたモノクロ
    ーナル抗体を、モノクローナル抗体を産生するハイブリ
    ドーマ細胞を培養することによって大量に製造する請求
    項３の方法。
  28. 【請求項２８】モノクローナル抗体が、 （ａ）反応体の類似体で動物を免疫して、抗体産生リン
    パ球を誘導し； （ｂ）動物から抗体産生リンパ球を採取し； （ｃ）抗体産生リンパ球とミエローマ細胞とを融合し
    て、モノクローナル抗体を産生する複数のハイブリドー
    マ細胞を調製し； （ｄ）複数のモノクローナル抗体をスクリーニングして
    化学反応を触媒するモノクローナル抗体を同定し；次い
    で （ｅ）モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細
    胞を培養して、工程（ｄ）で同定されたモノクローナル
    抗体を大量に製造する、 工程から得られたものである請求項１の方法。
  29. 【請求項２９】化学反応が酵素によって触媒されること
    が知られた反応であって、 モノクローナル抗体が、 （ａ）酵素に対する複数のモノクローナル抗体を誘導
    し； （ｂ）複数のモノクローナル抗体をスクリーニングし
    て、酵素への反応体の結合を阻止する第１のモノクロー
    ナル抗体を同定し； （ｃ）該第１のモノクローナル抗体を回収し； （ｄ）工程（ｃ）で回収された第１のモノクローナル抗
    体に対する複数の抗イディオタイプモノクローナル抗体
    を誘導し； （ｅ）工程（ｄ）で誘導された複数の抗イディオタイプ
    モノクローナル抗体をスクリーニングして、反応体に結
    合し反応を触媒する第２のモノクローナル抗体を同定
    し； （ｆ）該モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ
    細胞を培養することによって大量にモノクローナル抗体
    を製造する、 工程から製造されるものである請求項１の方法。
JP60500123A 1983-11-29 1984-11-27 化学反応を触媒する方法 Expired - Lifetime JP2540508B2 (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US55601683A 1983-11-29 1983-11-29
US674253 1984-11-27
US06/674,253 US4888281A (en) 1983-11-29 1984-11-27 Method of catalyzing chemical reactions
US556016 1984-11-27
PCT/US1984/001951 WO1985002414A1 (en) 1983-11-29 1984-11-27 Method of catalyzing chemical reactions

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2419267A Division JP2919979B2 (ja) 1983-11-29 1990-12-19 モノクローナル抗体及びその製造法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS61500469A JPS61500469A (ja) 1986-03-20
JP2540508B2 true JP2540508B2 (ja) 1996-10-02

Family

ID=27071048

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP60500123A Expired - Lifetime JP2540508B2 (ja) 1983-11-29 1984-11-27 化学反応を触媒する方法
JP2419267A Expired - Lifetime JP2919979B2 (ja) 1983-11-29 1990-12-19 モノクローナル抗体及びその製造法
JP00124399A Expired - Lifetime JP3158106B2 (ja) 1983-11-29 1999-01-06 モノクローナル抗体及びその製造法

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2419267A Expired - Lifetime JP2919979B2 (ja) 1983-11-29 1990-12-19 モノクローナル抗体及びその製造法
JP00124399A Expired - Lifetime JP3158106B2 (ja) 1983-11-29 1999-01-06 モノクローナル抗体及びその製造法

Country Status (7)

Country Link
US (3) US4888281A (ja)
EP (1) EP0162920A1 (ja)
JP (3) JP2540508B2 (ja)
AU (1) AU3745285A (ja)
CA (1) CA1340511C (ja)
IL (1) IL73685A (ja)
WO (1) WO1985002414A1 (ja)

Families Citing this family (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5037750A (en) * 1984-11-27 1991-08-06 Igen, Inc. Method for producing antibodies which catalyze chemical reactions
WO1985002414A1 (en) * 1983-11-29 1985-06-06 Igen, Inc. Method of catalyzing chemical reactions
US5156965A (en) 1983-11-29 1992-10-20 Igen, Inc. Catalytic antibodies
US5229272A (en) * 1989-04-25 1993-07-20 Igen, Inc. Catalytic antibody components
US6057121A (en) * 1983-11-29 2000-05-02 Igen International, Inc. Method of catalyzing stereochemical reactions
US6846654B1 (en) * 1983-11-29 2005-01-25 Igen International, Inc. Catalytic antibodies as chemical sensors
GB8334498D0 (en) * 1983-12-24 1984-02-01 Beecham Group Plc Compounds
US5030717A (en) * 1986-09-17 1991-07-09 Scripps Clinic And Research Foundation Antibodies which catalyze hydrolysis of ester bonds
US5126258A (en) * 1984-09-07 1992-06-30 Scripps Clinic And Research Foundation Molecules with antibody combining sites that exhibit catalytic properties
US5314642A (en) * 1984-11-27 1994-05-24 Igen, Inc. Interaction system comprising a surfactant-stabilized aqueous phase containing an antibody fragment
US4792446A (en) * 1986-06-23 1988-12-20 Igen, Inc. Production of antibody catalysts
US4963355A (en) * 1986-06-23 1990-10-16 Igen, Inc. Production of antibody catalysts
AU7780687A (en) * 1986-07-23 1988-02-10 Aphton Corp. Immunogens and improved methods of making immunogens
US5079152A (en) * 1987-05-28 1992-01-07 Scripps Clinic And Research Foundation Antibody combining sites that exhibit stereoselective synthase activity, and methods using the same
US4900674A (en) * 1987-05-28 1990-02-13 Scripps Clinic And Research Foundation Antibody combining sites that exhibit amide or ester synthase activity
WO1989001784A1 (en) * 1987-09-02 1989-03-09 Kim Peter S Production of immunoproximity catalysts
ZA889546B (en) * 1987-12-24 1990-08-29 Igen Inc Chemical sensors employing catalytic antibodies
ZA893106B (en) * 1988-04-29 1990-01-31 Igen Inc Interaction system comprising a surfactant-stabilized disperse aqueous phase containing an antibody or antibody fragment
US6702705B1 (en) 1988-05-04 2004-03-09 Igen International, Inc. Prodrugs activated by targeted catalytic proteins
ZA893284B (en) * 1988-05-04 1990-03-28 Igen Inc Peptide analogs and their use as haptens to elicit catalytic antibodies
ZA896408B (en) * 1988-08-26 1991-05-29 Igen Inc Method of catalyzing stereochemical reactions
US5215889A (en) * 1988-11-18 1993-06-01 The Regents Of The University Of California Catalytic and reactive polypeptides and methods for their preparation and use
US5190865A (en) * 1988-11-18 1993-03-02 The Regents Of The University Of California Antibody-enhanced stereospecific hydrolyses
US5162218A (en) * 1988-11-18 1992-11-10 The Regents Of The University Of California Conjugated polypeptides and methods for their preparation
AU621972B2 (en) * 1988-12-14 1992-03-26 United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The Cell culture medium for human liver epithelial cell line
US5236825A (en) * 1989-01-17 1993-08-17 Scripps Clinic And Research Foundation Polyvalent metal ion-containing antibody combining site catalysts
US5429936A (en) * 1989-04-21 1995-07-04 The Regents Of The University Of California Antibody-mediated juxtaposition of reactive moieties
US5318897A (en) * 1989-04-25 1994-06-07 Igen, Inc. Monoclonal antibody and antibody components elicited to a polypeptide antigen ground state
US6048717A (en) * 1989-04-25 2000-04-11 Igen International, Inc. Inhibitors of catalytic antibodies
US5658753A (en) * 1989-04-25 1997-08-19 Paul; Sudhir Catalytic antibody components
US5236836A (en) * 1989-04-25 1993-08-17 Igen, Inc. Autoantibodies which enhance the rate of a chemical reaction
US5194585A (en) * 1989-04-25 1993-03-16 Igen, Inc. Inhibitors of catalytic antibodies
US5599538A (en) * 1989-04-25 1997-02-04 Igen, Inc. Autoantibodies which enhance the rate of a chemical reaction
US6258360B1 (en) 1989-05-04 2001-07-10 Igen International, Inc. Prodrugs activated by targeted catalytic proteins
US5597573A (en) * 1989-05-04 1997-01-28 Igen, Inc. Lipid-A analogs: new monosaccharide and disaccharide intermediates for eliciting therapeutic antibodies and for antitumor and antiviral activities
US6291159B1 (en) * 1989-05-16 2001-09-18 Scripps Research Institute Method for producing polymers having a preselected activity
US6291158B1 (en) * 1989-05-16 2001-09-18 Scripps Research Institute Method for tapping the immunological repertoire
GB8912993D0 (en) * 1989-06-06 1989-07-26 Therapeutic Antibodies Inc Catalytic antibodies
US5219732A (en) * 1989-09-05 1993-06-15 The Regents Of The University Of California Antibody-mediated cofactor-driven reactions
US5302533A (en) * 1989-10-17 1994-04-12 British Technology Group Limited Antibody-enhanced chemiluminescence reactions
WO1991005804A1 (en) * 1989-10-17 1991-05-02 Scripps Clinic And Research Foundation Catalysis of diels-alder reactions, methods and catalysts therefor
US5187086A (en) * 1990-01-26 1993-02-16 Scripps Clinic And Research Foundation Molecules with antibody combining sites that catalyze hydrolysis reactions through use of a charged hapten
US5593969A (en) * 1991-09-03 1997-01-14 Igen Incorporated Lipid-A analogs: monosaccharide and dissaccharide compounds for inhibiting binding of lipid A receptors to lipid A receptors
US5444155A (en) * 1991-09-10 1995-08-22 The Scripps Research Institute Molecules with antibody combining sites that induce asymmetry
US5250426A (en) * 1991-10-22 1993-10-05 The Scripps Research Institute Molecules with antibody combining sites that induce asymmetry
US5763249A (en) * 1991-12-09 1998-06-09 The Regents Of The University Of California Antibody-mediated reduction of α-ketoamides
ZA931263B (en) * 1992-02-24 1993-11-02 Igen Inc Reaction-based selection for expression of and concentration of catalytic moieties
US5302707A (en) * 1992-03-26 1994-04-12 Affymax Technologies N.V. 5-fluorouridine nucleoside phosphate compounds
US5463028A (en) 1992-04-03 1995-10-31 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Reagents for generating a polyclonal hydrolytic antibody response against cocaine and the monoclonal hydrolytic antibodies against cocaine derived through these reagents
JP2721296B2 (ja) * 1993-09-08 1998-03-04 株式会社蛋白工学研究所 糖エステル誘導体を位置選択的に加水分解する触媒抗体
AU727445B2 (en) * 1995-08-18 2000-12-14 Donald W Landry Detection of organic compounds through regulation of antibody-catalyzed reactions
EP0935612A4 (en) * 1996-03-26 2001-12-12 Amrad Operations Pty Ltd Precursors of catalytic antibodies
AUPO930697A0 (en) * 1997-09-19 1997-10-09 Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Research, The Catalytic antibodies and a method of producing same
AU2002213091A1 (en) * 2000-10-20 2002-05-06 Igen International, Inc. Methods and compositions for modifying biologically active target molecules
US8637435B2 (en) * 2007-11-16 2014-01-28 Merck Sharp & Dohme Corp. Eukaryotic cell display systems
US8877686B2 (en) * 2008-03-03 2014-11-04 Glycofi, Inc. Surface display of recombinant proteins in lower eukaryotes
JP2012518419A (ja) 2009-02-25 2012-08-16 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション 糖操作酵母ピチア・パストリスにおけるガラクトース同化経路の代謝操作
RU2012140429A (ru) 2010-02-24 2014-03-27 Мерк Шарп Энд Домэ Корп. Способ увеличения занятости участков n-ликозилирования на терапевтических гликопротеинах, продуцируемых в p pastoris
US10082500B2 (en) 2013-08-22 2018-09-25 Franz Baudenbacher Device and method for detecting a target analyte
EP3122757B1 (en) 2014-02-28 2023-09-06 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Charged linkers and their uses for conjugation
CN109942624B (zh) * 2019-03-14 2021-06-01 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 草铵膦半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法与检测装置
WO2021143712A1 (zh) * 2020-01-13 2021-07-22 利尔化学股份有限公司 一种制备l-草铵膦中间体的方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1595058A (en) * 1976-10-22 1981-08-05 Bellhouse Brian John Membrane blood oxygenators
US4492751A (en) * 1978-04-10 1985-01-08 Miles Laboratories, Inc. Heterogenous specific binding assay employing an enzyme substrate as label
JPS5632942A (en) * 1979-08-23 1981-04-02 Kunimasa Matsushita Foldable fishing pot for deep sea
US4486530A (en) * 1980-08-04 1984-12-04 Hybritech Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4493890A (en) * 1981-03-23 1985-01-15 Miles Laboratories, Inc. Activated apoglucose oxidase and its use in specific binding assays
WO1985002414A1 (en) * 1983-11-29 1985-06-06 Igen, Inc. Method of catalyzing chemical reactions
US4659567A (en) * 1984-09-07 1987-04-21 Scripps Clinic & Research Foundation Molecules with antibody combining sites that bind to hydrolytic transition states
US4792446A (en) * 1986-06-23 1988-12-20 Igen, Inc. Production of antibody catalysts

Also Published As

Publication number Publication date
US4888281A (en) 1989-12-19
US6946272B1 (en) 2005-09-20
JPS61500469A (ja) 1986-03-20
CA1340511C (en) 1999-04-27
JPH11243952A (ja) 1999-09-14
EP0162920A1 (en) 1985-12-04
JPH06121694A (ja) 1994-05-06
AU3745285A (en) 1985-06-13
IL73685A (en) 1995-08-31
US5658752A (en) 1997-08-19
JP2919979B2 (ja) 1999-07-19
WO1985002414A1 (en) 1985-06-06
JP3158106B2 (ja) 2001-04-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2540508B2 (ja) 化学反応を触媒する方法
US7205136B1 (en) Catalytic antibodies
US5037750A (en) Method for producing antibodies which catalyze chemical reactions
JPH06113832A (ja) ジゴキシンに対し高い親和性を有するモノクローナル抗体を産生するハイブリッドセルライン及びその製造法
JPH02500004A (ja) 非還元・非酵素的糖鎖形成蛋白に対するモノクローナル抗体
Brennand et al. A comparison of ELISA screening methods for the production of monoclonal antibodies against soluble protein antigens
Golumbeski Jr et al. The use of tolerization in the production of monoclonal antibodies against minor antigenic determinants
JPH0820445B2 (ja) 決定方法
KR100998419B1 (ko) 햅텐 화합물 및 항체
US6057121A (en) Method of catalyzing stereochemical reactions
AU4213289A (en) Method of catalyzing stereochemical reactions
CA2150497C (en) Inhibitor and anti-inhibitor monoclonal antibodies specific for horseradish peroxidase
EP1780221A1 (en) Anti-synoviolin antibody
JP2706777B2 (ja) 非天然型ｇｄ▲下３▼を認識するモノクローナル抗体
JPH06321998A (ja) 抗フモニシンモノクローナル抗体、ハイブリドーマ、ハプテン抗原及びその製造法
JPH05252986A (ja) 異種二機能抗体およびその利用法
US5478728A (en) Process for antibody combining site-catalyzed SYN elimination in the formation of a CIS olefin
JP2516011B2 (ja) モノクロ−ナル抗体
JP3336775B2 (ja) 抗フコシルトランスフェラーゼ抗体、抗フコシルトランスフェラーゼモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ及び該抗体を用いたフコシルトランスフェラーゼの測定方法
JPH11222500A (ja) モノクローナル抗体、この抗体を産生するハイブリドーマ、この抗体を用いたｄ−３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニルグリコールの測定方法及び測定用試薬
JPH08157500A (ja) Ｆａｓ抗原の定量法
JPH066068B2 (ja) ヒトＩｇＧサブクラスに対するモノクロ−ナル抗体とその製造法および該モノクロ−ナル抗体産生細胞系
JPH075640B2 (ja) タンパク質の固定方法
JPS6229598A (ja) 抗上皮細胞成長因子モノクロ−ナル抗体
JPH0771510B2 (ja) モノクローナル抗体の作成方法

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

EXPY Cancellation because of completion of term