JP2500233B2 - カルシウムおよび（または）マグネシウムの測定方法および測定用試薬組成物 - Google Patents
カルシウムおよび（または）マグネシウムの測定方法および測定用試薬組成物Info
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- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
【０００１】本発明は、分析試料中のマグネシウムの定
量方法、および分析試料中のカルシウムとマグネシウム
の両者の同時的定量方法、およびこれらにおいて使用さ
れる新規試薬組成物に関するものである。
量方法、および分析試料中のカルシウムとマグネシウム
の両者の同時的定量方法、およびこれらにおいて使用さ
れる新規試薬組成物に関するものである。
【０００２】カルシウムは例外として、マグネシウムは
最も豊富な細胞内イオンである。それは、エネルギーに
富むホスフェートの移送におけるＡＴＰの活性化、脂
質、炭化水素、および蛋白質の代謝に関与する酵素の活
性化、ならびにＤＮＡ、ＲＮＡおよびリボソームの高分
子構造の保存を含む多くの生理化学的工程に対して必須
のものである。また、マグネシウムは神経筋器官に対し
て顕著な影響を有し、マグネシウムの濃度低下は、テタ
ニーおよびケイレンを生じ得、一方その水準の増大は、
全身性麻痺、呼吸疾患および心停止を起こし得る。低下
したマグネシウム濃度によるテタニーは、低カルシウム
濃度により起こるものと臨床的に区別できないため、血
清マグネシウムおよびカルシウムの両者のアッセイを同
時に行なうことが、しばしば必要となる。
最も豊富な細胞内イオンである。それは、エネルギーに
富むホスフェートの移送におけるＡＴＰの活性化、脂
質、炭化水素、および蛋白質の代謝に関与する酵素の活
性化、ならびにＤＮＡ、ＲＮＡおよびリボソームの高分
子構造の保存を含む多くの生理化学的工程に対して必須
のものである。また、マグネシウムは神経筋器官に対し
て顕著な影響を有し、マグネシウムの濃度低下は、テタ
ニーおよびケイレンを生じ得、一方その水準の増大は、
全身性麻痺、呼吸疾患および心停止を起こし得る。低下
したマグネシウム濃度によるテタニーは、低カルシウム
濃度により起こるものと臨床的に区別できないため、血
清マグネシウムおよびカルシウムの両者のアッセイを同
時に行なうことが、しばしば必要となる。
【０００３】ホスフェート沈殿技術、錯形成滴定法、螢
光分光測定およびチタンイエローを用いる色素吸着法を
含む多くの方法が、マグネシウム量の測定に使用されて
きた。これらの方法は、一般に時間を消費するか、技術
的欠点に悩まされるものである。マグネシウムアッセイ
の為の最良の方法は、一般には原子吸光分光測定である
が、これは高価な装置を必要とし、小規模な試験所にお
いてはしばしば実用的ではないものである。カルマガイ
ト（ｃａｌｍａｇｉｔｅ）との反応によるマグネシウム
の測定も知られているが、この方法では、試薬が不安定
であり、また測定も一般に種々の妨害が受け易い。
光分光測定およびチタンイエローを用いる色素吸着法を
含む多くの方法が、マグネシウム量の測定に使用されて
きた。これらの方法は、一般に時間を消費するか、技術
的欠点に悩まされるものである。マグネシウムアッセイ
の為の最良の方法は、一般には原子吸光分光測定である
が、これは高価な装置を必要とし、小規模な試験所にお
いてはしばしば実用的ではないものである。カルマガイ
ト（ｃａｌｍａｇｉｔｅ）との反応によるマグネシウム
の測定も知られているが、この方法では、試薬が不安定
であり、また測定も一般に種々の妨害が受け易い。
【０００４】一般に、生物学的液体中の全カルシウム測
定のための既存の方法は、測定に先立って試料の多くの
操作を含む。重力的および滴定的方法は、通常大きい試
料体積を必要とする。色測定法は、手仕事および自動の
両者において共通して高いアルカリ条件下での最終読取
を含む。このような測定に使用される指示薬は、通常、
該最終pHにおいて不安定であり、従って強塩基による試
薬の希釈を必要とする。クロロホスホナゾIII を用いた
カルシウムおよびマグネシウムの測定が知られている
が、しかしながら該クロロホスホナゾIII を用いたカル
シウムとマグネシウムの同時測定方法は、一方のイオン
の測定を他方の妨害なしに行なうためにはpHの過激な変
化を必要とし、加えて信頼おける結果を得るためには実
験条件の綿密な調整が必要である。
定のための既存の方法は、測定に先立って試料の多くの
操作を含む。重力的および滴定的方法は、通常大きい試
料体積を必要とする。色測定法は、手仕事および自動の
両者において共通して高いアルカリ条件下での最終読取
を含む。このような測定に使用される指示薬は、通常、
該最終pHにおいて不安定であり、従って強塩基による試
薬の希釈を必要とする。クロロホスホナゾIII を用いた
カルシウムおよびマグネシウムの測定が知られている
が、しかしながら該クロロホスホナゾIII を用いたカル
シウムとマグネシウムの同時測定方法は、一方のイオン
の測定を他方の妨害なしに行なうためにはpHの過激な変
化を必要とし、加えて信頼おける結果を得るためには実
験条件の綿密な調整が必要である。
【０００５】本発明は、 −分析試料中のマグネシウム測定に有用な試薬組成物、 −分析試料中のマグネシウムおよびカルシウムの同時測
定に有用な試薬組成物、 −分析試料中のマグネシウムの測定方法、 −分析試料中のマグネシウムおよびカルシウムの同時測
定方法、 に関するものである。
定に有用な試薬組成物、 −分析試料中のマグネシウムの測定方法、 −分析試料中のマグネシウムおよびカルシウムの同時測
定方法、 に関するものである。
【０００６】本発明は、第一には分析試料中のマグネシ
ウム測定に有用な試薬組成物に関するものである。本発
明によるマグネシウムの測定方法は、２段階工程であ
る。第１段階において、第１の試薬（“試薬１”）が、
マグネシウムを分析すべき試料に添加される。この試薬
１は、基本的にクロロホスホナゾIII （ＣＰＺ３）、お
よびＥＧＴＡまたは１，２−ビス（２−アミノフェノキ
シ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（ＢＡＰ
ＴＡ）からなる群から選択されるキレート剤を含んでな
る。該キレート剤は、好ましくはエチレングリコールビ
ス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′
−テトラ酢酸（ＥＧＴＡ）である。試薬１は、約０．０
１〜１．０mMのＣＰＺ３および０．１〜１００mMのＥＧ
ＴＡを含有すべきである。より好ましい範囲は、０．０
５〜０．３０ｍＭのＣＰＺ３および０．１〜１０mMのＥ
ＧＴＡであり、最適には約０．２０mMのＣＰＺ３および
１０mMのＥＧＴＡである。該試薬１は、付加的に１種以
上の緩衝剤、洗浄剤、抗微生物剤または抗発泡剤を含ん
でもよい。好ましい緩衝剤は、イミダゾール、ビス−ト
リスプロパン、すなわち１，３−（ビス〔トリス（ヒド
ロキシメチル）メチルアミノ〕プロパン、一塩基性ホス
フェート、テトラブチルアンモニウムヒドロキシド／ホ
ウ酸、またはトリス、すなわち（トリス〔ヒロキシメチ
ル〕アミノメタン）である。最適には、該イミダゾール
は、約７．６のpH、ビス−トリスプロパンは、約８のp
H、一塩基性ホスフェートは約７〜８のpH、およびトリ
スは８のpHであるべきである。限定されるものではない
が、コカミドプロピルアミンオキシド（陽イオン性）、
ナトリウムラウリルエーテルスルフォスクシネート（陰
イオン性）、オクチルフェノキシポリエトキシエタノー
ル（非イオン性）、直鎖アルコールエトキシレート−ナ
トリウム（二価陰イオン性／非イオン性）、Ｎ−アルキ
ルベタイン（両性）、フルオロアルキルアルコール（非
イオン性）、ポリプロポキシ四級アンモニウムクロライ
ド（陽イオン性）、ココアミドプロピルベタイン（両
性）、オレイルアミドプロピルベタイン（両性）、イソ
ステアリルアミドプロピルベタイン（両性）、カプリッ
ク／カプリリックアミドプロピルベタイン（両性）およ
びココアミドベタイン、ならびにベタイン類、ポリオキ
シエチレンエーテル類、ポリオキシエチレンソルビタン
類、または非イオン性フッ素系界面活性剤を含む多くの
種類の洗浄剤が使用され得る。
ウム測定に有用な試薬組成物に関するものである。本発
明によるマグネシウムの測定方法は、２段階工程であ
る。第１段階において、第１の試薬（“試薬１”）が、
マグネシウムを分析すべき試料に添加される。この試薬
１は、基本的にクロロホスホナゾIII （ＣＰＺ３）、お
よびＥＧＴＡまたは１，２−ビス（２−アミノフェノキ
シ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸（ＢＡＰ
ＴＡ）からなる群から選択されるキレート剤を含んでな
る。該キレート剤は、好ましくはエチレングリコールビ
ス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′
−テトラ酢酸（ＥＧＴＡ）である。試薬１は、約０．０
１〜１．０mMのＣＰＺ３および０．１〜１００mMのＥＧ
ＴＡを含有すべきである。より好ましい範囲は、０．０
５〜０．３０ｍＭのＣＰＺ３および０．１〜１０mMのＥ
ＧＴＡであり、最適には約０．２０mMのＣＰＺ３および
１０mMのＥＧＴＡである。該試薬１は、付加的に１種以
上の緩衝剤、洗浄剤、抗微生物剤または抗発泡剤を含ん
でもよい。好ましい緩衝剤は、イミダゾール、ビス−ト
リスプロパン、すなわち１，３−（ビス〔トリス（ヒド
ロキシメチル）メチルアミノ〕プロパン、一塩基性ホス
フェート、テトラブチルアンモニウムヒドロキシド／ホ
ウ酸、またはトリス、すなわち（トリス〔ヒロキシメチ
ル〕アミノメタン）である。最適には、該イミダゾール
は、約７．６のpH、ビス−トリスプロパンは、約８のp
H、一塩基性ホスフェートは約７〜８のpH、およびトリ
スは８のpHであるべきである。限定されるものではない
が、コカミドプロピルアミンオキシド（陽イオン性）、
ナトリウムラウリルエーテルスルフォスクシネート（陰
イオン性）、オクチルフェノキシポリエトキシエタノー
ル（非イオン性）、直鎖アルコールエトキシレート−ナ
トリウム（二価陰イオン性／非イオン性）、Ｎ−アルキ
ルベタイン（両性）、フルオロアルキルアルコール（非
イオン性）、ポリプロポキシ四級アンモニウムクロライ
ド（陽イオン性）、ココアミドプロピルベタイン（両
性）、オレイルアミドプロピルベタイン（両性）、イソ
ステアリルアミドプロピルベタイン（両性）、カプリッ
ク／カプリリックアミドプロピルベタイン（両性）およ
びココアミドベタイン、ならびにベタイン類、ポリオキ
シエチレンエーテル類、ポリオキシエチレンソルビタン
類、または非イオン性フッ素系界面活性剤を含む多くの
種類の洗浄剤が使用され得る。
【０００７】好適な抗微生物剤は、トリメトプリムおよ
びスルファメトキサゾールに加え、チメロサール、アジ
ド、クロラムフェニコール、メチルパラベン（メチル
ｐ−ヒドロキシベンゾエート）、プロピルパラベン、ｎ
−プロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエート、２，４−ジ
クロロベンジルアルコール、ゲンタマイシン、またはヒ
ドロキシメチルアミノ酢酸ナトリウムであってよい。好
適な抗発泡剤は、シリコン基材消泡剤類のいずれかであ
る。試薬１は、好ましくはテトラブチルアンモニウムヒ
ドロキシド、イミダゾール、およびＴＥＳ（２−｛［ト
リス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝−エタンス
ルホン酸）等の緩衝剤を含み、好ましい抗微生物剤は、
スルファメトキサゾールおよびトリメトプリムであり、
好ましい洗浄剤はポリオキシエチレンソルビタンモノラ
ウレートであり、抗発泡剤は、シリコン基材消泡剤であ
る。試薬１の必須ではない成分の有効な濃度範囲は、１
０〜６００ｍＭのＴＥＳ、０．１〜５００ｍＭのイミダ
ゾール、０．０１〜１０％のポリオキシエチレンソルビ
タンモノラウレート、１〜４０％のテトラブチルアンモ
ニウムヒドロキシド、ｍｌあたり１０〜１００マイクロ
グラムのスルファメトキサゾール、ｍｌあたり１〜１０
マイクログラムのトリメトプリムおよび０．０１〜１０
％のシリコン基材消泡剤である。好ましい範囲は、５０
〜３００ｍＭのＴＥＳ、０．１〜２．０ｍＭのイミダゾ
ール、０．１〜１％のポリオキシエチレンソルビタンモ
ノラウレート、１〜５％のテトラブチルアンモニウムヒ
ドロキシド、１０〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキ
サゾール、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび
０．０１〜１％のシリコン基材消泡剤である。最も好ま
しくは、試薬１は、約３％のテトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド、ｍｌあたり５０μｇのスルファメトキサ
ゾール、１４５ｍＭのＴＥＳ、１０ｍＭのＥＧＴＡ、
１．０ｍＭのイミダゾール、０．１％のポリオキシエチ
レンソルビタンモノラウレート、ｍｌあたり５μｇのト
リメトプリム、０．２００ｍＭのＣＰＺ３および０．０
７５％のシリコン基材消泡剤を含んでなる。
びスルファメトキサゾールに加え、チメロサール、アジ
ド、クロラムフェニコール、メチルパラベン（メチル
ｐ−ヒドロキシベンゾエート）、プロピルパラベン、ｎ
−プロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエート、２，４−ジ
クロロベンジルアルコール、ゲンタマイシン、またはヒ
ドロキシメチルアミノ酢酸ナトリウムであってよい。好
適な抗発泡剤は、シリコン基材消泡剤類のいずれかであ
る。試薬１は、好ましくはテトラブチルアンモニウムヒ
ドロキシド、イミダゾール、およびＴＥＳ（２−｛［ト
リス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝−エタンス
ルホン酸）等の緩衝剤を含み、好ましい抗微生物剤は、
スルファメトキサゾールおよびトリメトプリムであり、
好ましい洗浄剤はポリオキシエチレンソルビタンモノラ
ウレートであり、抗発泡剤は、シリコン基材消泡剤であ
る。試薬１の必須ではない成分の有効な濃度範囲は、１
０〜６００ｍＭのＴＥＳ、０．１〜５００ｍＭのイミダ
ゾール、０．０１〜１０％のポリオキシエチレンソルビ
タンモノラウレート、１〜４０％のテトラブチルアンモ
ニウムヒドロキシド、ｍｌあたり１０〜１００マイクロ
グラムのスルファメトキサゾール、ｍｌあたり１〜１０
マイクログラムのトリメトプリムおよび０．０１〜１０
％のシリコン基材消泡剤である。好ましい範囲は、５０
〜３００ｍＭのＴＥＳ、０．１〜２．０ｍＭのイミダゾ
ール、０．１〜１％のポリオキシエチレンソルビタンモ
ノラウレート、１〜５％のテトラブチルアンモニウムヒ
ドロキシド、１０〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキ
サゾール、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび
０．０１〜１％のシリコン基材消泡剤である。最も好ま
しくは、試薬１は、約３％のテトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド、ｍｌあたり５０μｇのスルファメトキサ
ゾール、１４５ｍＭのＴＥＳ、１０ｍＭのＥＧＴＡ、
１．０ｍＭのイミダゾール、０．１％のポリオキシエチ
レンソルビタンモノラウレート、ｍｌあたり５μｇのト
リメトプリム、０．２００ｍＭのＣＰＺ３および０．０
７５％のシリコン基材消泡剤を含んでなる。
【０００８】本発明の方法に従ってマグネシウムを測定
するために有用な第２の試薬組成物は、試薬２と称され
る。試薬２の必須成分はＥＤＴＡである。試薬２は、付
加的に、試薬１について適用可能なものと同様な１種以
上の緩衝剤、洗浄剤、抗微生物剤または抗発泡剤を含ん
でもよい。試薬２は、約１〜５００mMの範囲のＥＤＴＡ
を含んでよい。しかしながら、１０〜２５mMの範囲が好
ましく、最適な態様は、約１６mMの濃度である。試薬１
と同様に、好ましい緩衝剤は、テトラブチルアンモニウ
ムヒドロキシド、イミダゾール、およびＴＥＳであり；
抗微生物剤は、スルファメトキサゾールおよびトリメト
プリムであり；洗浄剤はポリオキシエチレンソルビタン
モノラウレートであり；および該抗発泡剤は、シリコン
基材消泡剤である。試薬２の有効な濃度は、１０〜６０
０mMのＴＥＳ、０．１〜５００mMのイミダゾール、０．
０１〜１０％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウ
レート、１〜４０％のテトラブチルアンモニウムヒドロ
キシド、mlあたり１０〜１００μｇのスルファメトキサ
ゾール、mlあたり１〜１０μｇのトリメトプリムおよび
０．０１〜１０％のシリコン基材消泡剤である。より好
ましい濃度範囲は、５０〜３００mMのＴＥＳ、０．１〜
２．０mMのイミダゾール、０．１〜１％のポリオキシエ
チレンソルビタンモノラウレート、１〜１５％のテトラ
ブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜１００μｇ／
mlのスルファメトキサゾール、１〜１０μｇ／mlのトリ
メトプリムおよび０．０１〜１％のシリコン基材消泡剤
である。試薬２は、最も好ましくは、約３％のテトラブ
チルアンモニウムヒドロキシド、１mlあたり５０μｇの
スルファメトキサゾール、１００mMのＴＥＳ、１６mMの
ＥＤＴＡ、１．０mMのイミダゾール、０．１％のポリオ
キシエチレンソルビタンモノラウレート、mlあたり５μ
ｇのトリメトプリムおよび０．０７５％のシリコン基材
消泡剤を含む。
するために有用な第２の試薬組成物は、試薬２と称され
る。試薬２の必須成分はＥＤＴＡである。試薬２は、付
加的に、試薬１について適用可能なものと同様な１種以
上の緩衝剤、洗浄剤、抗微生物剤または抗発泡剤を含ん
でもよい。試薬２は、約１〜５００mMの範囲のＥＤＴＡ
を含んでよい。しかしながら、１０〜２５mMの範囲が好
ましく、最適な態様は、約１６mMの濃度である。試薬１
と同様に、好ましい緩衝剤は、テトラブチルアンモニウ
ムヒドロキシド、イミダゾール、およびＴＥＳであり；
抗微生物剤は、スルファメトキサゾールおよびトリメト
プリムであり；洗浄剤はポリオキシエチレンソルビタン
モノラウレートであり；および該抗発泡剤は、シリコン
基材消泡剤である。試薬２の有効な濃度は、１０〜６０
０mMのＴＥＳ、０．１〜５００mMのイミダゾール、０．
０１〜１０％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウ
レート、１〜４０％のテトラブチルアンモニウムヒドロ
キシド、mlあたり１０〜１００μｇのスルファメトキサ
ゾール、mlあたり１〜１０μｇのトリメトプリムおよび
０．０１〜１０％のシリコン基材消泡剤である。より好
ましい濃度範囲は、５０〜３００mMのＴＥＳ、０．１〜
２．０mMのイミダゾール、０．１〜１％のポリオキシエ
チレンソルビタンモノラウレート、１〜１５％のテトラ
ブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜１００μｇ／
mlのスルファメトキサゾール、１〜１０μｇ／mlのトリ
メトプリムおよび０．０１〜１％のシリコン基材消泡剤
である。試薬２は、最も好ましくは、約３％のテトラブ
チルアンモニウムヒドロキシド、１mlあたり５０μｇの
スルファメトキサゾール、１００mMのＴＥＳ、１６mMの
ＥＤＴＡ、１．０mMのイミダゾール、０．１％のポリオ
キシエチレンソルビタンモノラウレート、mlあたり５μ
ｇのトリメトプリムおよび０．０７５％のシリコン基材
消泡剤を含む。
【０００９】これらの２種の新規試薬は、本発明の方法
に従ってマグネシウムの測定において使用される。
に従ってマグネシウムの測定において使用される。
【００１０】本発明は、また、分析試料中のカルシウム
およびマグネシウムの両者の同時測定方法を包含するも
のである。この測定法は、更に試薬３、４および５と称
する新規試薬を必要とする。試薬３は、試薬１について
示したようにＣＰＺ３および１種以上の緩衝剤、洗浄
剤、抗微生物剤、または抗発泡剤を含んでなる。試薬３
において、好ましくは該緩衝剤はテトラブチルアンモニ
ウムヒドロキシド、イミダゾール、およびＴＥＳであ
り、抗微生物剤はスルファメトキサゾールおよびトリメ
トプリムであり、洗浄剤はポリオキシエチレンソルビタ
ンモノラウレートであり、および抗発泡剤はシリコン基
材消泡剤である。試薬３の有効な濃度範囲は、約０．０
１〜１．０mMのＣＰＺ３、１０〜６００mMのＴＥＳ、
０．１〜５００mMのイミダゾール、０．０１〜１０％の
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、１〜４
０％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜
１００μｇ／mlのスルファメトキサゾール、１〜１０μ
ｇ／mlのトリメトプリム、および０．０１〜１０％のシ
リコン基材消泡剤である。より好ましくは、これらの範
囲は、０．０５〜０．３０のＣＰＺ３、５０〜３００mM
のＴＥＳ、０．１〜２．０mMのイミダゾール、０．１〜
１％のポリエトキシエチレンソルビタンモノラウレー
ト、１〜１０％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシ
ド、１０〜１００μｇ／mlのスルファメトキサゾール、
１〜１０μｇ／mlのトリメトプリムおよび０．０１〜１
％のシリコン基材消泡剤である。試薬３は、好ましく
は、約３％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド、
５０μｇ／mlのスルファメトキサゾール、１４５mMのＴ
ＥＳ、１．０mMのイミダゾール、０．１％のポリオキシ
エチレンソルビタンモノラウレート、５μｇ／mlのトリ
メトプリム、０．２００mMのＣＰＺ３、および０．０７
５％のシリコン基材消泡剤を含む。
およびマグネシウムの両者の同時測定方法を包含するも
のである。この測定法は、更に試薬３、４および５と称
する新規試薬を必要とする。試薬３は、試薬１について
示したようにＣＰＺ３および１種以上の緩衝剤、洗浄
剤、抗微生物剤、または抗発泡剤を含んでなる。試薬３
において、好ましくは該緩衝剤はテトラブチルアンモニ
ウムヒドロキシド、イミダゾール、およびＴＥＳであ
り、抗微生物剤はスルファメトキサゾールおよびトリメ
トプリムであり、洗浄剤はポリオキシエチレンソルビタ
ンモノラウレートであり、および抗発泡剤はシリコン基
材消泡剤である。試薬３の有効な濃度範囲は、約０．０
１〜１．０mMのＣＰＺ３、１０〜６００mMのＴＥＳ、
０．１〜５００mMのイミダゾール、０．０１〜１０％の
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、１〜４
０％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜
１００μｇ／mlのスルファメトキサゾール、１〜１０μ
ｇ／mlのトリメトプリム、および０．０１〜１０％のシ
リコン基材消泡剤である。より好ましくは、これらの範
囲は、０．０５〜０．３０のＣＰＺ３、５０〜３００mM
のＴＥＳ、０．１〜２．０mMのイミダゾール、０．１〜
１％のポリエトキシエチレンソルビタンモノラウレー
ト、１〜１０％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシ
ド、１０〜１００μｇ／mlのスルファメトキサゾール、
１〜１０μｇ／mlのトリメトプリムおよび０．０１〜１
％のシリコン基材消泡剤である。試薬３は、好ましく
は、約３％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド、
５０μｇ／mlのスルファメトキサゾール、１４５mMのＴ
ＥＳ、１．０mMのイミダゾール、０．１％のポリオキシ
エチレンソルビタンモノラウレート、５μｇ／mlのトリ
メトプリム、０．２００mMのＣＰＺ３、および０．０７
５％のシリコン基材消泡剤を含む。
【００１１】試薬４は、基本的に試薬２と同じ成分を、
好ましい範囲および有効な範囲の両者の濃度範囲におい
て試薬２と同じに含んでいる。唯一の差異は、試薬４の
最良の形態においてＥＤＴＡがＥＧＴＡにより置換され
ていることであり、該ＥＧＴＡ濃度は約６０mMである。
好ましい範囲および有効な範囲の両者の濃度範囲におい
て試薬２と同じに含んでいる。唯一の差異は、試薬４の
最良の形態においてＥＤＴＡがＥＧＴＡにより置換され
ていることであり、該ＥＧＴＡ濃度は約６０mMである。
【００１２】試薬５は、基本的に試薬２と同じ成分を、
好ましい範囲および有効な範囲の両者の濃度範囲におい
て試薬２と同じに含んでいる。唯一の差異は、試薬５の
最良の形態においてＥＤＴＡの濃度が約３２mMであるこ
とである。
好ましい範囲および有効な範囲の両者の濃度範囲におい
て試薬２と同じに含んでいる。唯一の差異は、試薬５の
最良の形態においてＥＤＴＡの濃度が約３２mMであるこ
とである。
【００１３】本発明は、工程： a) 試料を、ＣＰＺ３およびＥＧＴＡまたはＢＡＰＴＡ
からなる群から選択されるキレート剤を含んでなる試薬
（“試薬１”）と混合し、 b) 該試料の吸光度を測定し、 c) 該反応混合物に第２のＥＤＴＡ含有試薬（“試薬
２”）を添加し、 d) 該試料の吸光度を測定すること を含み、よって吸光度の差が該試料中のマグネシウムの
量に比例することを特徴とする分析試料中のマグネシウ
ムの測定方法に関するものである。
からなる群から選択されるキレート剤を含んでなる試薬
（“試薬１”）と混合し、 b) 該試料の吸光度を測定し、 c) 該反応混合物に第２のＥＤＴＡ含有試薬（“試薬
２”）を添加し、 d) 該試料の吸光度を測定すること を含み、よって吸光度の差が該試料中のマグネシウムの
量に比例することを特徴とする分析試料中のマグネシウ
ムの測定方法に関するものである。
【００１４】 マグネシウム測定の別法は、 a) 試料を、ＣＰＺ３およびＥＧＴＡまたはＢＡＰＴＡ
からなる群から選択されるキレート剤を含んでなる試薬
（“試薬１”）と混合し、 b) 該試料の吸光度を測定すること を含み、よって吸光度の差が該試料中のマグネシウムの
量に比例することを特徴とするものである。
からなる群から選択されるキレート剤を含んでなる試薬
（“試薬１”）と混合し、 b) 該試料の吸光度を測定すること を含み、よって吸光度の差が該試料中のマグネシウムの
量に比例することを特徴とするものである。
【００１５】図１：図は、本発明の方法によるマグネシ
ウムの測定における種々の点での試料の吸光度曲線を示
し、1)は、試薬１および試料を含む混合物の種々の波長
での吸光度、2)は、該試薬１−試料混合物に試薬２を添
加した後の種々の波長での吸光度、3)は、種々の波長に
おける吸光度の差を示すものである。
ウムの測定における種々の点での試料の吸光度曲線を示
し、1)は、試薬１および試料を含む混合物の種々の波長
での吸光度、2)は、該試薬１−試料混合物に試薬２を添
加した後の種々の波長での吸光度、3)は、種々の波長に
おける吸光度の差を示すものである。
【００１６】好ましくは、キレート剤はＥＧＴＡであ
る。いずれの分析試料、例えば血清、血漿、または尿も
好適であり、また、他のいずれの試料、例えば公共水中
の分析対象の濃度試験の為の水試料等も好適である。こ
の方法の好ましい実施態様として、試薬１および２の両
者の濃度は前記のとおりである。血清または血漿を用い
る場合には、血液は、血清チューブまたはヘパリン、フ
ッ化ナトリウムもしくはオキサレート等の抗凝集剤を含
むチューブに採取される。該方法の各段階における吸光
度は、マグネシウム結合について敏感な波長、好ましく
は５５０または６７５ナノメータ（nm）のいずれかの波
長にて測定される。該吸光度を５５０nmにて測定する場
合、試料中のマグネシウムの量は、試料中のマグネシウ
ムがＣＰＺ３と複合体を形成する場合の５５０nmにおけ
る吸光度の減少により測定される。他方、吸光度を６７
５nmにて測定する場合には、試料マグネシウムがＣＰＺ
３と複合体を形成することに伴い吸光度が増大する。６
７５nmが好ましいが、いずれの吸光度測定も可能であ
る。吸光度の差は、該試料中のマグネシウム量に比例す
る。試薬２中のＥＤＴＡは、マグネシウムに結合し、試
料−試薬混合物に対するブランクを与える。該ブランク
は、トリグリセリド類、ヘモグロビン、およびビリルビ
ン等の測定波長における妨害物質の干渉を低減する。最
適な結果を得るためには、ＣＰＺ３試薬についてのpHは
約７．５でなければならない。このことは、試薬の安定
性の増大を与える。例えば、旧来のマグネシウム測定の
ためのカルマガイト法においては、１０〜１３のpH範囲
が必要であり、これは試薬を不安定にしていた。本発明
のＣＰＺ３含有試薬のための中性pHは、該試薬をかなり
の時間空気中にさらした場合にも、ＣＯ2 の吸収および
試薬の不安定性を実質的に無くする。ｐＫａが７．５で
あるため、ＴＥＳ緩衝剤は、該試薬に使用するために好
ましい緩衝剤であり、また試薬１中のＥＧＴＡは、試料
カルシウムの妨害を除去する。シリコン基材消泡剤は、
洗浄剤による発泡を低減するために両試薬に添加され
る。テトラブチルアンモニウムヒドロキシドに代えて、
他の塩基、例えばＫａＯＨまたはＫＯＨを使用すること
もできる。
る。いずれの分析試料、例えば血清、血漿、または尿も
好適であり、また、他のいずれの試料、例えば公共水中
の分析対象の濃度試験の為の水試料等も好適である。こ
の方法の好ましい実施態様として、試薬１および２の両
者の濃度は前記のとおりである。血清または血漿を用い
る場合には、血液は、血清チューブまたはヘパリン、フ
ッ化ナトリウムもしくはオキサレート等の抗凝集剤を含
むチューブに採取される。該方法の各段階における吸光
度は、マグネシウム結合について敏感な波長、好ましく
は５５０または６７５ナノメータ（nm）のいずれかの波
長にて測定される。該吸光度を５５０nmにて測定する場
合、試料中のマグネシウムの量は、試料中のマグネシウ
ムがＣＰＺ３と複合体を形成する場合の５５０nmにおけ
る吸光度の減少により測定される。他方、吸光度を６７
５nmにて測定する場合には、試料マグネシウムがＣＰＺ
３と複合体を形成することに伴い吸光度が増大する。６
７５nmが好ましいが、いずれの吸光度測定も可能であ
る。吸光度の差は、該試料中のマグネシウム量に比例す
る。試薬２中のＥＤＴＡは、マグネシウムに結合し、試
料−試薬混合物に対するブランクを与える。該ブランク
は、トリグリセリド類、ヘモグロビン、およびビリルビ
ン等の測定波長における妨害物質の干渉を低減する。最
適な結果を得るためには、ＣＰＺ３試薬についてのpHは
約７．５でなければならない。このことは、試薬の安定
性の増大を与える。例えば、旧来のマグネシウム測定の
ためのカルマガイト法においては、１０〜１３のpH範囲
が必要であり、これは試薬を不安定にしていた。本発明
のＣＰＺ３含有試薬のための中性pHは、該試薬をかなり
の時間空気中にさらした場合にも、ＣＯ2 の吸収および
試薬の不安定性を実質的に無くする。ｐＫａが７．５で
あるため、ＴＥＳ緩衝剤は、該試薬に使用するために好
ましい緩衝剤であり、また試薬１中のＥＧＴＡは、試料
カルシウムの妨害を除去する。シリコン基材消泡剤は、
洗浄剤による発泡を低減するために両試薬に添加され
る。テトラブチルアンモニウムヒドロキシドに代えて、
他の塩基、例えばＫａＯＨまたはＫＯＨを使用すること
もできる。
【００１７】本発明のアッセイは、ＣＯＢＡＳ ＢＩＯ
TM、ＣＯＢＡＳ ＦＡＲＡTM、またはＣＯＢＡＳ ＭＩ
ＲＡTM（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌｅ Ｒｏｃｈｅ Ｉｎ
ｃ．，Ｎｕｔｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）等の標準
的な研究用分析装置によって行なうことができる。
TM、ＣＯＢＡＳ ＦＡＲＡTM、またはＣＯＢＡＳ ＭＩ
ＲＡTM（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌｅ Ｒｏｃｈｅ Ｉｎ
ｃ．，Ｎｕｔｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）等の標準
的な研究用分析装置によって行なうことができる。
【００１８】ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡにおいては、１００
〜２７０μｌの試薬１が、第１のサイクルにおいて２〜
９５μｌの試料と混合される。吸光度は、５５０nmにて
測定される。次いで、３０〜９０μｌの試薬２を加え、
０．５〜３分間（サイクル８）の後に第２の吸光度測定
を５５０nmにて行なう。ここで、好ましくは、１８０μ
ｌの試薬１を、第１のサイクルにおいて４．５μｌの試
料に混合する。吸光度を、５５０nmにて測定する。６０
μｌの試薬を添加し、３分間（サイクル８）経過後、第
２の吸光度測定を５５０nmにて行なう。吸光度変化は、
試料中のマグネシウム濃度に比例する。標準および対照
を、試料と組合せて走らせ、試料中のマグネシウム濃度
を、常法により標準曲線から計算する。
〜２７０μｌの試薬１が、第１のサイクルにおいて２〜
９５μｌの試料と混合される。吸光度は、５５０nmにて
測定される。次いで、３０〜９０μｌの試薬２を加え、
０．５〜３分間（サイクル８）の後に第２の吸光度測定
を５５０nmにて行なう。ここで、好ましくは、１８０μ
ｌの試薬１を、第１のサイクルにおいて４．５μｌの試
料に混合する。吸光度を、５５０nmにて測定する。６０
μｌの試薬を添加し、３分間（サイクル８）経過後、第
２の吸光度測定を５５０nmにて行なう。吸光度変化は、
試料中のマグネシウム濃度に比例する。標準および対照
を、試料と組合せて走らせ、試料中のマグネシウム濃度
を、常法により標準曲線から計算する。
【００１９】本発明のマグネシウム法は、ＣＯＢＡＳ
ＦＡＲＡまたはＣＯＢＡＳ ＢＩＯにおいても測定可能
である。この場合には、３０〜２２５μｌの試薬１を２
〜９５μｌの試料と混合し、２０〜４０℃にて５〜１０
００秒熟成し、吸光度を６７５nmにて測定する。好まし
くは、１８０μｌの試薬１を２μｌの試料と混合する。
このアッセイは、３７℃にて、試料と試薬１との混合後
に行ない、該混合物を１２０秒間熟成し、後に、吸光度
を６７５nmにて測定する。次いで試薬２を添加し、１０
０秒後に第２の吸光度測定を６７５nmにて行なう。２回
の測定の吸光度差は、試料中のマグネシウム濃度に比例
する。
ＦＡＲＡまたはＣＯＢＡＳ ＢＩＯにおいても測定可能
である。この場合には、３０〜２２５μｌの試薬１を２
〜９５μｌの試料と混合し、２０〜４０℃にて５〜１０
００秒熟成し、吸光度を６７５nmにて測定する。好まし
くは、１８０μｌの試薬１を２μｌの試料と混合する。
このアッセイは、３７℃にて、試料と試薬１との混合後
に行ない、該混合物を１２０秒間熟成し、後に、吸光度
を６７５nmにて測定する。次いで試薬２を添加し、１０
０秒後に第２の吸光度測定を６７５nmにて行なう。２回
の測定の吸光度差は、試料中のマグネシウム濃度に比例
する。
【００２０】また、本発明は、工程： a) 試料を試薬３と混合し、 b) 該試料の吸光度を測定し、 c) 試薬４を添加し、 d) 該試料の吸光度を測定し、 e) 試薬５を添加し、 f) 該試料の吸光度を測定する ことを含み、(d) および(b) の間の吸光度差が、試料中
のカルシウム量に比例し、かつ(f) および(d) の間の吸
光度差が、試料中のマグネシウム量に比例することを特
徴とする、分析試料中のカルシウムおよびマグネシウム
の同時測定方法に関する。
のカルシウム量に比例し、かつ(f) および(d) の間の吸
光度差が、試料中のマグネシウム量に比例することを特
徴とする、分析試料中のカルシウムおよびマグネシウム
の同時測定方法に関する。
【００２１】上述のように、分析試料は、血清、血漿、
尿または他のいずれの体液、あるいは水もしくは他の試
料であってもよい。吸光度は、５５０nmまたは６７５nm
にて測定する。試薬３、４および５は、前述のとおりの
濃度が好ましい。
尿または他のいずれの体液、あるいは水もしくは他の試
料であってもよい。吸光度は、５５０nmまたは６７５nm
にて測定する。試薬３、４および５は、前述のとおりの
濃度が好ましい。
【００２２】この方法においても、該アッセイをＣＯＢ
ＡＳ ＢＩＯ、ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ、またはＣＯＢＡ
Ｓ ＦＡＲＡにて行なってもよい。例えば、ＣＯＢＡＳ
ＦＡＲＡでは該アッセイを３７℃にて行なう。約３０
〜２２５μｌの試薬３を、２〜９５μｌの試料と混合
し、吸光度を６７５nmにて測定する。次いで、５〜４０
μｌの試薬４を添加し、吸光度を測定する。次いで５〜
４０μｌの試薬５を添加し、吸光度を測定する。最も好
ましくは、約１８０μｌの試薬３を２μｌの試料と混合
し、吸光度を６７５nmにて測定する。次いで３０μｌの
試薬４を添加し、吸光度を測定する。次いで３０μｌの
試薬５を添加し、吸光度を測定する。カルシウム濃度
は、最初の２回の測定の間の吸光度変化から計算され、
マグネシウム濃度は、２および３の測定間から計算され
る。
ＡＳ ＢＩＯ、ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ、またはＣＯＢＡ
Ｓ ＦＡＲＡにて行なってもよい。例えば、ＣＯＢＡＳ
ＦＡＲＡでは該アッセイを３７℃にて行なう。約３０
〜２２５μｌの試薬３を、２〜９５μｌの試料と混合
し、吸光度を６７５nmにて測定する。次いで、５〜４０
μｌの試薬４を添加し、吸光度を測定する。次いで５〜
４０μｌの試薬５を添加し、吸光度を測定する。最も好
ましくは、約１８０μｌの試薬３を２μｌの試料と混合
し、吸光度を６７５nmにて測定する。次いで３０μｌの
試薬４を添加し、吸光度を測定する。次いで３０μｌの
試薬５を添加し、吸光度を測定する。カルシウム濃度
は、最初の２回の測定の間の吸光度変化から計算され、
マグネシウム濃度は、２および３の測定間から計算され
る。
【００２３】試薬４のＥＧＴＡを、化合物８−ヒドロキ
シキノリンに置換することも可能である。この場合に
は、(d) と(b) との間の吸光度差からＭｇ2+が第一に測
定される。(f) と(d) との間の吸光度差は、試料中のカ
ルシウムに比例するであろう。
シキノリンに置換することも可能である。この場合に
は、(d) と(b) との間の吸光度差からＭｇ2+が第一に測
定される。(f) と(d) との間の吸光度差は、試料中のカ
ルシウムに比例するであろう。
【００２４】
【実施例】本発明は、例示の目的をもってのみ示される
以下の例と関連させて更に完全に記述されるであろう。
以下の例と関連させて更に完全に記述されるであろう。
【００２５】例１ 試薬の調製 試薬１（リットル）：７５mlのテトラブチルアンモニウ
ムヒドロキシドおよび０．０５０ｇのスルファメトキサ
ゾールを、約７５０mlの脱イオン水に溶解した。最終成
分を、以下の順で試薬溶液に完全に溶解させた：第１に
３３．３ｇのＴＥＳ（遊離酸）；第２に３．９２ｇのＥ
ＧＴＡ（遊離酸）；第３に０．０６８１ｇのイミダゾー
ル；第４に０．００５０ｇのトリメトプリム；第５に
０．１５１５ｇのクロロホスフォナゾIII 。最終的に
１．０ｇのポリオキシエチレンソルビタンモノラウレー
ト（Ｔｗｅｅｎ２０）および０．７５ｇのシリコン基材
消泡剤（Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ）を添加し、ＨＣ
ｌにてpHを７．５に調節し、体積を１リットルとした。
試薬１の成分の濃度は、 ３％ テトラブチルアンモニウムヒドロキシド １４５mM ＴＥＳ（遊離酸） １０mM ＥＧＴＡ（遊離酸） １．０mM イミダゾール ５μｇ／ml トリメトプリム ０．２０mM クロロホスフォナゾIII ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ ５０μｇ／ml スルファメトキサゾール である。
ムヒドロキシドおよび０．０５０ｇのスルファメトキサ
ゾールを、約７５０mlの脱イオン水に溶解した。最終成
分を、以下の順で試薬溶液に完全に溶解させた：第１に
３３．３ｇのＴＥＳ（遊離酸）；第２に３．９２ｇのＥ
ＧＴＡ（遊離酸）；第３に０．０６８１ｇのイミダゾー
ル；第４に０．００５０ｇのトリメトプリム；第５に
０．１５１５ｇのクロロホスフォナゾIII 。最終的に
１．０ｇのポリオキシエチレンソルビタンモノラウレー
ト（Ｔｗｅｅｎ２０）および０．７５ｇのシリコン基材
消泡剤（Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ）を添加し、ＨＣ
ｌにてpHを７．５に調節し、体積を１リットルとした。
試薬１の成分の濃度は、 ３％ テトラブチルアンモニウムヒドロキシド １４５mM ＴＥＳ（遊離酸） １０mM ＥＧＴＡ（遊離酸） １．０mM イミダゾール ５μｇ／ml トリメトプリム ０．２０mM クロロホスフォナゾIII ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ ５０μｇ／ml スルファメトキサゾール である。
【００２６】試薬２（１リットル）：７５mlのテトラブ
チルアンモニウムヒドロキシドおよび０．０５０ｇのス
ルファメトキサゾールを、７５０mlの脱イオン水に溶解
させた。最終成分を、以下の順で試薬溶液に完全に溶解
させた：第１に２２．９ｇのＴＥＳ遊離酸；第２に４．
７２ｇのＥＤＴＡ遊離酸；第３に０．０６８１ｇのイミ
ダゾール；第４に０．００５０ｇのトリメトプリム。最
終的に、１．０ｇのＴｗｅｅｎ２０および０．７５ｇの
Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤを加え、ＨＣｌにてpHを
７．５に調節し、体積を１リットルとした。試薬２の成
分の最終的濃度は： ３％ テトラブチルアンモニウムヒドロキシド １００mM ＴＥＳ（遊離酸） １６mM ＥＧＴＡ（遊離酸） １．０mM イミダゾール ５０μｇ／ml スルファメトキサゾール ５μｇ／ml トリメトプリム ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ である。
チルアンモニウムヒドロキシドおよび０．０５０ｇのス
ルファメトキサゾールを、７５０mlの脱イオン水に溶解
させた。最終成分を、以下の順で試薬溶液に完全に溶解
させた：第１に２２．９ｇのＴＥＳ遊離酸；第２に４．
７２ｇのＥＤＴＡ遊離酸；第３に０．０６８１ｇのイミ
ダゾール；第４に０．００５０ｇのトリメトプリム。最
終的に、１．０ｇのＴｗｅｅｎ２０および０．７５ｇの
Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤを加え、ＨＣｌにてpHを
７．５に調節し、体積を１リットルとした。試薬２の成
分の最終的濃度は： ３％ テトラブチルアンモニウムヒドロキシド １００mM ＴＥＳ（遊離酸） １６mM ＥＧＴＡ（遊離酸） １．０mM イミダゾール ５０μｇ／ml スルファメトキサゾール ５μｇ／ml トリメトプリム ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ である。
【００２７】例２ ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡでのマグネシウム測定 該アッセイは、３７℃にて行ない、第１のサイクルにお
いては１８０μｌの試薬１を４．５μｌの試料と混合し
た。吸光度を５５０nmにて測定した。６０mlの試薬２を
第２のサイクルにおいて添加し、３分間後（サイクル
８）に第２の吸光度測定を５５０nmにて行なった。２回
の吸光度変化は、試料中のマグネシウム濃度に比例す
る。標準および対照を試料と組合せて走らせ、試料中の
マグネシウム濃度を、常法に従って標準曲線から計算し
た。
いては１８０μｌの試薬１を４．５μｌの試料と混合し
た。吸光度を５５０nmにて測定した。６０mlの試薬２を
第２のサイクルにおいて添加し、３分間後（サイクル
８）に第２の吸光度測定を５５０nmにて行なった。２回
の吸光度変化は、試料中のマグネシウム濃度に比例す
る。標準および対照を試料と組合せて走らせ、試料中の
マグネシウム濃度を、常法に従って標準曲線から計算し
た。
【００２８】以下の表は、本発明の方法によりマグネシ
ウムを測定した場合の吸光度変化を例示するものであ
る。
ウムを測定した場合の吸光度変化を例示するものであ
る。
【表１】
【００２９】例３ ＣＯＢＡＳ ＦＡＲＡでのマグネシウム測定 該アッセイは、３７℃にて行ない、１８０mlの試薬１を
２μｌの試料と混合し、１２０秒間熟成し、吸光度を６
７５nmにて測定した。６０μｌの試薬２を加え、１００
秒後に第２の吸光度測定を６７５nmにて行なった。２回
の測定の間の吸光度変化は、試料中のマグネシウム濃度
に比例する。標準および対照を試料と組合せて走らせ、
試料中のマグネシウム濃度を、常法に従って標準曲線か
ら計算した。
２μｌの試料と混合し、１２０秒間熟成し、吸光度を６
７５nmにて測定した。６０μｌの試薬２を加え、１００
秒後に第２の吸光度測定を６７５nmにて行なった。２回
の測定の間の吸光度変化は、試料中のマグネシウム濃度
に比例する。標準および対照を試料と組合せて走らせ、
試料中のマグネシウム濃度を、常法に従って標準曲線か
ら計算した。
【００３０】以下の表は、本発明の方法によりマグネシ
ウムを測定した場合の吸光度変化を例示するものであ
る。
ウムを測定した場合の吸光度変化を例示するものであ
る。
【表２】
【００３１】例４ 先行技術との相関関係 ９４人の無作為に選んだ患者からの血清試料を、Ｓｉｇ
ｍａ Ｃａｌｍａｇｉｔｅマグネシウム法（試験キット
カタログ番号５９５−ｍ）に加え、例２の方法に従って
ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡにてアッセイを行なった。２４０
μｌの試薬（等量の試薬１および２を合わせて調製し
た）を、キュベット中にピペットで取り、吸光度を５５
０nmにて測定した。次いで２．４μｌの試料を加え、１
分間後に第２の吸光度測定を５５０nmにて行なった。２
回の測定における吸光度変化は、試料中のマグネシウム
濃度と相関関係があった。例２の方法に従ってアッセイ
された試料は、Ｓｉｇｍａ Ｃａｌｍａｇｉｔｅ法に従
ってアッセイされた同じ試料と相関関係を有していた。
線形回帰線は、Ｙを本発明のアッセイ方法により得た試
料の値、Ｘを先行技術のＣａｌｍａｇｉｔｅ法により得
た試料の値とした場合にＹ＝１．０８Ｘ−０．１４であ
った。これら２つの方法間の相関関係は、０．９５４４
である。
ｍａ Ｃａｌｍａｇｉｔｅマグネシウム法（試験キット
カタログ番号５９５−ｍ）に加え、例２の方法に従って
ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡにてアッセイを行なった。２４０
μｌの試薬（等量の試薬１および２を合わせて調製し
た）を、キュベット中にピペットで取り、吸光度を５５
０nmにて測定した。次いで２．４μｌの試料を加え、１
分間後に第２の吸光度測定を５５０nmにて行なった。２
回の測定における吸光度変化は、試料中のマグネシウム
濃度と相関関係があった。例２の方法に従ってアッセイ
された試料は、Ｓｉｇｍａ Ｃａｌｍａｇｉｔｅ法に従
ってアッセイされた同じ試料と相関関係を有していた。
線形回帰線は、Ｙを本発明のアッセイ方法により得た試
料の値、Ｘを先行技術のＣａｌｍａｇｉｔｅ法により得
た試料の値とした場合にＹ＝１．０８Ｘ−０．１４であ
った。これら２つの方法間の相関関係は、０．９５４４
である。
【００３２】例５ ＣＯＢＡＳ ＦＡＲＡでのカルシウムおよびマグネシウ
ムの測定 このアッセイは、３７℃にて行ない、１８０μｌの試薬
３を２μｌの試料と混合し、吸光度を６７５nmにて測定
した。３０μｌの試薬５を加え、吸光度を６７５nmにて
測定した。カルシウム濃度を(1) および(2) の測定間の
吸光度変化から計算し、またマグネシウム濃度を(2) お
よび(3) の測定間の吸光度差から計算した。
ムの測定 このアッセイは、３７℃にて行ない、１８０μｌの試薬
３を２μｌの試料と混合し、吸光度を６７５nmにて測定
した。３０μｌの試薬５を加え、吸光度を６７５nmにて
測定した。カルシウム濃度を(1) および(2) の測定間の
吸光度変化から計算し、またマグネシウム濃度を(2) お
よび(3) の測定間の吸光度差から計算した。
【００３３】試薬３（１リットル）：７５mlのテトラブ
チルアンモニウムヒドロキシドおよび０．０５０ｇのス
ルファメトキサゾールを約７５０mlの脱イオン水に溶解
させた。最終成分を試薬中に完全に溶解させた：３３．
３ｇのＴＥＳ遊離酸；０．０６８１ｇのイミダゾール；
０．００５０ｇのトリメトプリム；および０．１５１５
ｇのＣＰＺ３。最終的に、１．０ｇのＴｗｅｅｎ２０お
よび０．７５ｇのＦｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤを加え
た。pHをＨＣｌを用いて７．５に調節し、体積を１リッ
トルにした。試薬３の成分の濃度は： ３％ テトラブチルアンモニウムヒドロキシド ５０μｇ／ml スルファメトキサゾール １４５mM ＴＥＳ遊離酸 １．０mM イミダゾール ５μｇ／ml トリメトプリム ０．２０mM クロロホスフォナゾIII ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ である。
チルアンモニウムヒドロキシドおよび０．０５０ｇのス
ルファメトキサゾールを約７５０mlの脱イオン水に溶解
させた。最終成分を試薬中に完全に溶解させた：３３．
３ｇのＴＥＳ遊離酸；０．０６８１ｇのイミダゾール；
０．００５０ｇのトリメトプリム；および０．１５１５
ｇのＣＰＺ３。最終的に、１．０ｇのＴｗｅｅｎ２０お
よび０．７５ｇのＦｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤを加え
た。pHをＨＣｌを用いて７．５に調節し、体積を１リッ
トルにした。試薬３の成分の濃度は： ３％ テトラブチルアンモニウムヒドロキシド ５０μｇ／ml スルファメトキサゾール １４５mM ＴＥＳ遊離酸 １．０mM イミダゾール ５μｇ／ml トリメトプリム ０．２０mM クロロホスフォナゾIII ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ である。
【００３４】試薬４：試薬４を、以下の成分濃度をもっ
て試薬２と同様な方法で調製した： ３％ テトラブチルアンモニウムヒドロキシド ５μｇ／ml トリメトプリム ５０μｇ／ml スルファメトキサゾール １００mM ＴＥＳ遊離酸 １．０mM イミダゾール ６０mM ＥＧＴＡ遊離酸 ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ pH７．
５
て試薬２と同様な方法で調製した： ３％ テトラブチルアンモニウムヒドロキシド ５μｇ／ml トリメトプリム ５０μｇ／ml スルファメトキサゾール １００mM ＴＥＳ遊離酸 １．０mM イミダゾール ６０mM ＥＧＴＡ遊離酸 ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ pH７．
５
【００３５】試薬５：試薬５を、以下の成分濃度をもっ
て試薬２と同様な方法で調製した： ３％ テトラブチルアンモニウムヒドロキシド ５μｇ／ml トリメトプリム ５０μｇ／ml スルファメトキサゾール １００mM ＴＥＳ遊離酸 １．０mM イミダゾール ３２mM ＥＧＴＡ遊離酸 ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ pH７．
５
て試薬２と同様な方法で調製した： ３％ テトラブチルアンモニウムヒドロキシド ５μｇ／ml トリメトプリム ５０μｇ／ml スルファメトキサゾール １００mM ＴＥＳ遊離酸 １．０mM イミダゾール ３２mM ＥＧＴＡ遊離酸 ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ pH７．
５
【００３６】例７ カルシウムの妨害 アッセイを例２および３に記述したのと同様にして行な
った。単一の血清試料を複数の試料に分別し、下記のよ
うに各分別量に対して異なった量のカルシウムを加え
た。試料１中のＥＧＴＡは、カルシウムにキレート化す
る作用をし、かくしてマグネシウムアッセイにおける妨
害を最少にする。
った。単一の血清試料を複数の試料に分別し、下記のよ
うに各分別量に対して異なった量のカルシウムを加え
た。試料１中のＥＧＴＡは、カルシウムにキレート化す
る作用をし、かくしてマグネシウムアッセイにおける妨
害を最少にする。
【００３７】下記の表は、カルシウムによる最少の妨害
を例示している。
を例示している。
【表３】
【００３８】例８ 高温度における試薬１および２の安定性 ５５℃にて３ケ月間保存した後も、試薬１および２の性
能に変化は無かった。下記の表は、強制された試薬（５
５℃にて３ケ月保存された）の性能を新鮮な試薬と比較
して示している。（例３に従って血清試料をアッセイし
た。）
能に変化は無かった。下記の表は、強制された試薬（５
５℃にて３ケ月保存された）の性能を新鮮な試薬と比較
して示している。（例３に従って血清試料をアッセイし
た。）
【表４】
【００３９】例９ 原子吸光分光測定との相関 原子吸光分光測定法（ＡＡ）は、マグネシウム測定に使
用される周知の方法である。８４人の患者の血清試料
を、ＴｉｅｔｚのＣｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ（１９８６）に従ってＲｏｃｈｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃ
ａｌ Ｌａｄｓ、Ｒａｒｉｔａｎ、ＮＪ．により、ＡＡ
を用いてカルシウムについて分析した。同じ試料を、前
述の例２および３の方法に従ってカルシウムについて分
析した。結果は、以下のとおりである。
用される周知の方法である。８４人の患者の血清試料
を、ＴｉｅｔｚのＣｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ（１９８６）に従ってＲｏｃｈｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃ
ａｌ Ｌａｄｓ、Ｒａｒｉｔａｎ、ＮＪ．により、ＡＡ
を用いてカルシウムについて分析した。同じ試料を、前
述の例２および３の方法に従ってカルシウムについて分
析した。結果は、以下のとおりである。
【表５】
【００４０】上記に証明されるように、ＡＡと本発明の
方法との間の相関は、０．９４０５および０．９４９６
である。
方法との間の相関は、０．９４０５および０．９４９６
である。
【００４１】例１０ 単一試薬の適用例 試薬２は、アッセイに対して試料ブランクを与えるもの
であるが、該アッセイは、試薬２無しでもなお行ない得
る。
であるが、該アッセイは、試薬２無しでもなお行ない得
る。
【００４２】ＭＩＲＡでのアッセイ １００−６００μｌ ２−９５μｌ １８０μｌの試薬１を４．５μｌの試料と混合し、吸光
度を５５０nmにて測定した。この吸光度を水ブランクか
ら差引き、該吸光度差が試料マグネシウム濃度に比例し
た。
度を５５０nmにて測定した。この吸光度を水ブランクか
ら差引き、該吸光度差が試料マグネシウム濃度に比例し
た。
【表６】
【００４３】ＦＡＲＡでのアッセイ １０−３７０μｌ １−９５μｌ １８０μｌの試薬１を２μｌの試料と混合し、吸光度を
６７５nmにて測定した。水ブランクから得た吸光度を試
料の吸光度から差引き、この吸光度変化が試料マグネシ
ウム濃度に比例した。
６７５nmにて測定した。水ブランクから得た吸光度を試
料の吸光度から差引き、この吸光度変化が試料マグネシ
ウム濃度に比例した。
【表７】
【００４４】本発明の好ましい実施態様は、更に以下の
とおりに例示される。 (1) 試薬１としての、１〜５％のテトラブチルアンモ
ニウムヒドロキシド、５０〜３００mMのＴＥＳ、０．１
〜２．０mMのイミダゾール、０．１〜１０mMのＥＧＴ
Ａ、０．１〜１％のポリオキシエチレンソルビタンモノ
ラウレート、１０〜１００μｇ／mlのスルファメトキサ
ゾール、１〜１０μｇ／mlのトリメトプリム、０．０５
〜０．３０mMのＣＰＺ３、および０．０１〜１．０％の
シリコン基材消泡剤を含む組成物。 (2) 試薬１としての、約３％のテトラブチルアンモニ
ウムヒドロキシド、５０μｇ／mlのスルファメトキサゾ
ール、１４５mMのＴＥＳ、１０mMのＥＧＴＡ、１．０mM
のイミダゾール、０．１％のポリオキシエチレンソルビ
タンモノラウレート、５μｇ／mlのトリメトプリム、
０．２００mMのＣＰＺ３、および０．０７５％のシリコ
ン基材消泡剤を含む(1) に記載の組成物。
とおりに例示される。 (1) 試薬１としての、１〜５％のテトラブチルアンモ
ニウムヒドロキシド、５０〜３００mMのＴＥＳ、０．１
〜２．０mMのイミダゾール、０．１〜１０mMのＥＧＴ
Ａ、０．１〜１％のポリオキシエチレンソルビタンモノ
ラウレート、１０〜１００μｇ／mlのスルファメトキサ
ゾール、１〜１０μｇ／mlのトリメトプリム、０．０５
〜０．３０mMのＣＰＺ３、および０．０１〜１．０％の
シリコン基材消泡剤を含む組成物。 (2) 試薬１としての、約３％のテトラブチルアンモニ
ウムヒドロキシド、５０μｇ／mlのスルファメトキサゾ
ール、１４５mMのＴＥＳ、１０mMのＥＧＴＡ、１．０mM
のイミダゾール、０．１％のポリオキシエチレンソルビ
タンモノラウレート、５μｇ／mlのトリメトプリム、
０．２００mMのＣＰＺ３、および０．０７５％のシリコ
ン基材消泡剤を含む(1) に記載の組成物。
【００４５】(3) 試薬２としての、約１〜５％のテト
ラブチルアンモニウムヒドロキシド、５０〜３００mMの
ＴＥＳ、１０〜２５mMのＥＤＴＡ、０．１〜２．０mMの
イミダゾール、１０〜１００μｇ／mlのスルファメトキ
サゾール、１〜１０μｇ／mlのトリメトプリム、０．１
〜１％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレー
ト、および０．０１〜１．０％のシリコン基材消泡剤を
含む組成物。 (4) 試薬２としての、約３％のテトラブチルアンモニ
ウムヒドロキシド、５０μｇ／mlのスルファメトキサゾ
ール、１００mMのＴＥＳ、１６mMのＥＤＴＡ、１．０mM
のイミダゾール、０．１％のポリオキシエチレンソルビ
タンモノラウレート、５μｇ／mlのトリメトプリム、お
よび０．０７５％のシリコン基材消泡剤を含む(3) に記
載の組成物。
ラブチルアンモニウムヒドロキシド、５０〜３００mMの
ＴＥＳ、１０〜２５mMのＥＤＴＡ、０．１〜２．０mMの
イミダゾール、１０〜１００μｇ／mlのスルファメトキ
サゾール、１〜１０μｇ／mlのトリメトプリム、０．１
〜１％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレー
ト、および０．０１〜１．０％のシリコン基材消泡剤を
含む組成物。 (4) 試薬２としての、約３％のテトラブチルアンモニ
ウムヒドロキシド、５０μｇ／mlのスルファメトキサゾ
ール、１００mMのＴＥＳ、１６mMのＥＤＴＡ、１．０mM
のイミダゾール、０．１％のポリオキシエチレンソルビ
タンモノラウレート、５μｇ／mlのトリメトプリム、お
よび０．０７５％のシリコン基材消泡剤を含む(3) に記
載の組成物。
【００４６】(5) ０．０１〜１．０mMのＣＰＺ３を含
む試薬３としての組成物。 (6) １０〜６００mMのＴＥＳ、０．１〜５００mMのイ
ミダゾール、０．０１〜１０％のポリオキシエチレンソ
ルビタンモノラウレート、１〜４０％のテトラブチルア
ンモニウムヒドロキシド、１０〜１００μｇ／mlのスル
ファメトキサゾール、１〜１０μｇ／mlのトリメトプリ
ム、および０．０１〜１０％のシリコン基材消泡剤を含
む試薬３としての(5) に記載の組成物。 (7) ０．０５〜０．３mMのＣＰＺ３、１〜５％のテト
ラブチルアンモニウムヒドロキシド、５０〜３００mMの
ＴＥＳ、０．１〜２．０ＴＥＳイミダゾール、１０〜１
００μｇ／mlのスルファメトキサゾール、１〜１０μｇ
／mlのトリメトプリム、０．１〜１％のポリオキシエチ
レンソルビタンモノラウレート、および０．０１〜１％
のシリコン基材消泡剤を含む(6) に記載の組成物。 (8) 約３％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシ
ド、５０μｇ／mlのスルファメトキサゾール、１４５mM
のＴＥＳ、１．０mMのイミダゾール、０．１％のポリオ
キシエチレンソルビタンモノラウレート、５μｇ／mlの
トリメトプリム、０．２００mMのＣＰＺ３、および０．
０７５％のシリコン基材消泡剤を含む前記試薬３として
の組成物。
む試薬３としての組成物。 (6) １０〜６００mMのＴＥＳ、０．１〜５００mMのイ
ミダゾール、０．０１〜１０％のポリオキシエチレンソ
ルビタンモノラウレート、１〜４０％のテトラブチルア
ンモニウムヒドロキシド、１０〜１００μｇ／mlのスル
ファメトキサゾール、１〜１０μｇ／mlのトリメトプリ
ム、および０．０１〜１０％のシリコン基材消泡剤を含
む試薬３としての(5) に記載の組成物。 (7) ０．０５〜０．３mMのＣＰＺ３、１〜５％のテト
ラブチルアンモニウムヒドロキシド、５０〜３００mMの
ＴＥＳ、０．１〜２．０ＴＥＳイミダゾール、１０〜１
００μｇ／mlのスルファメトキサゾール、１〜１０μｇ
／mlのトリメトプリム、０．１〜１％のポリオキシエチ
レンソルビタンモノラウレート、および０．０１〜１％
のシリコン基材消泡剤を含む(6) に記載の組成物。 (8) 約３％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシ
ド、５０μｇ／mlのスルファメトキサゾール、１４５mM
のＴＥＳ、１．０mMのイミダゾール、０．１％のポリオ
キシエチレンソルビタンモノラウレート、５μｇ／mlの
トリメトプリム、０．２００mMのＣＰＺ３、および０．
０７５％のシリコン基材消泡剤を含む前記試薬３として
の組成物。
【００４７】 (9) 分析試料が、血清、血漿、または尿であるマグネ
シウムの分析方法。 (10) 吸光度を５５０nmまたは６７５nmにて測定する
(9) に記載の方法。 (11) １００〜２７０μｌの試薬１を第１のサイクルに
おいて２〜９５μｌの試料と混合し、吸光度を５５０nm
にて測定し、次いで３０〜９０μｌの試薬２を添加し、
０．５〜３分間後に第２の吸光度を５５０nmにて測定
し、これにより吸光度差が試料中のマグネシウム濃度に
比例する１０に記載の方法。 (12) １８０μｌの試薬１を４．５μｌの試料と混合
し、吸光度を５５０nmにて測定し、次いで６０μｌの試
薬２を添加し、３分間後に吸光度を５５０nmにて測定
し、これにより吸光度差が試料中のマグネシウム濃度に
比例する(11)に記載の方法。
シウムの分析方法。 (10) 吸光度を５５０nmまたは６７５nmにて測定する
(9) に記載の方法。 (11) １００〜２７０μｌの試薬１を第１のサイクルに
おいて２〜９５μｌの試料と混合し、吸光度を５５０nm
にて測定し、次いで３０〜９０μｌの試薬２を添加し、
０．５〜３分間後に第２の吸光度を５５０nmにて測定
し、これにより吸光度差が試料中のマグネシウム濃度に
比例する１０に記載の方法。 (12) １８０μｌの試薬１を４．５μｌの試料と混合
し、吸光度を５５０nmにて測定し、次いで６０μｌの試
薬２を添加し、３分間後に吸光度を５５０nmにて測定
し、これにより吸光度差が試料中のマグネシウム濃度に
比例する(11)に記載の方法。
【００４８】(13) 工程： a) 試料を試薬３と混合し、 b) 該試料の吸光度を測定し、 c) 試薬４を添加し、 d) 該試料の吸光度を測定し、 e) 試薬５を添加し、 f) 該試料の吸光度を測定する ことを含んでなり、これにより(d) および(b) の間の吸
光度差が試料中のカルシウム量に比例し、かつ(f) およ
び(d) の間の吸光度差が試料中のマグネシウム量に比例
する、分析試料中のカルシウムおよびマグネシウムの測
定方法。 (14) 分析試料が、血清、血漿、または尿である(13)に
記載の方法。 (15) 吸光度を５５０nmまたは６７５nmにて測定する(1
4)に記載の方法。 (16) ３０〜２２５μｌの試薬３を２〜９５μｌの試料
と混合し、６７５nmにて吸光度を測定し、次いで５〜４
０μｌの試薬４を添加し、６７５nmにて吸光度を測定
し、次いで５〜４０μｌの試薬５を添加し、６７５nmに
て吸光度を測定する(15)に記載の方法。 (17) 約１８０μｌの試薬３を２μｌの試料と混合し、
６７５nmにて吸光度を測定し、次いで３０μｌの試薬４
を添加し、６７５nmにて吸光度を測定し、次いで３０μ
ｌの試薬５を添加し、６７５nmにて吸光度を測定する(1
6)に記載の方法。
光度差が試料中のカルシウム量に比例し、かつ(f) およ
び(d) の間の吸光度差が試料中のマグネシウム量に比例
する、分析試料中のカルシウムおよびマグネシウムの測
定方法。 (14) 分析試料が、血清、血漿、または尿である(13)に
記載の方法。 (15) 吸光度を５５０nmまたは６７５nmにて測定する(1
4)に記載の方法。 (16) ３０〜２２５μｌの試薬３を２〜９５μｌの試料
と混合し、６７５nmにて吸光度を測定し、次いで５〜４
０μｌの試薬４を添加し、６７５nmにて吸光度を測定
し、次いで５〜４０μｌの試薬５を添加し、６７５nmに
て吸光度を測定する(15)に記載の方法。 (17) 約１８０μｌの試薬３を２μｌの試料と混合し、
６７５nmにて吸光度を測定し、次いで３０μｌの試薬４
を添加し、６７５nmにて吸光度を測定し、次いで３０μ
ｌの試薬５を添加し、６７５nmにて吸光度を測定する(1
6)に記載の方法。
【００４９】
【図１】図１は、本発明の方法によるマグネシウムの測
定における種々の点での試料の吸光度曲線を示すグラフ
である。
定における種々の点での試料の吸光度曲線を示すグラフ
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 リチャード アレン カウフマン アメリカ合衆国ニュージャージー州ベレ ビル，ジョラレモン ストリート 744 (56)参考文献 特開 平１−109247（ＪＰ，Ａ) 特開 昭54−29700（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−266460（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−153166（ＪＰ，Ａ) 特開 昭54−42386（ＪＰ，Ａ) 特開 昭57−141300（ＪＰ，Ａ) 特開 昭64−51100（ＪＰ，Ａ) 特公 昭52−48839（ＪＰ，Ｂ２)
Claims (25)
- 【請求項１】体液試料中のマグネシウムの測定方法であ
って、 ａ）０．０１〜１．０ｍＭのクロロホスホナゾＩＩＩな
らびに０．１〜１００ｍＭのエチレングリコール−ビス
（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−
テトラ酢酸、１０〜６００ｍＭの２−｛［トリス（ヒド
ロキシメチル）メチル］アミノ｝−エタンスルホン酸、
０．１〜５００ｍＭのイミダゾール、０．０１〜１０重
量％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、
１〜４０重量％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシ
ド、１０〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾー
ル、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび０．０
１〜１０重量％のシリコン基材消泡剤からなる第１試薬
組成物を、上記試料と混合して、反応混合物Ａを生成す
る工程、 ｂ）この反応混合物Ａの吸光度を測定する工程、 ｃ）１〜５００ｍＭのエチレンジアミン−テトラ酢酸、
１０〜６００ｍＭの２−｛［トリス（ヒドロキシメチ
ル）メチル］アミノ｝−エタンスルホン酸、０．１〜５
００ｍＭのイミダゾール、０．０１〜１０重量％のポリ
オキシエチレンソルビタンモノラウレート、１〜４０重
量％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜
１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１０〜１
００μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび０．０１〜１０
重量％のシリコン基材消泡剤からなる、１〜５００ｍＭ
のエチレンジアミン−テトラ酢酸含有第２試薬組成物を
上記反応混合物Ａに添加して、反応混合物Ｂを生成する
工程、および ｄ）この反応混合物Ｂの吸光度を測定する工程、 からなり、上記吸光度の差が試料中のマグネシウムの量
に比例することを特徴とする、上記体液試料中のマグネ
シウムの測定方法。 - 【請求項２】第１試薬組成物が、１〜５重量％のテトラ
ブチルアンモニウムヒドロキシド、５０〜３００ｍＭの
２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝
−エタンスルホン酸、０．１〜２．０ｍＭのイミダゾー
ル、０．１〜１０ｍＭのエチレングリコール−ビス（２
−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テト
ラ酢酸、０．１〜１重量％のポリオキシエチレンソルビ
タンモノラウレート、１０〜１００μｇ／ｍｌのスルフ
ァメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメトプリ
ム、０．０５〜０．３０ｍＭのクロロホスホナゾＩＩＩ
および０．０１〜１．０重量％のシリコン基材消泡剤か
らなる、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】第１試薬組成物が、約３重量％のテトラブ
チルアンモニウムヒドロキシド、５０μｇ／ｍｌのスル
ファメトキサゾール、１４５ｍＭの２−｛［トリス（ヒ
ドロキシメチル）メチル］アミノ｝−エタンスルホン
酸、１０ｍＭのエチレングリコール−ビス（２−アミノ
エチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸、
１．０ｍＭのイミダゾール、０．１重量％のポリオキシ
エチレンソルビタンモノラウレート、５μｇ／ｍｌのト
リメトプリム、０．２００ｍＭのクロロホスホナゾＩＩ
Ｉおよび０．０７５重量％のシリコン基材消泡剤からな
る、請求項２に記載の方法。 - 【請求項４】第２試薬組成物が、約１〜１５重量％のテ
トラブチルアンモニウムヒドロキシド、５０〜３００ｍ
Ｍの２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミ
ノ｝−エタンスルホン酸、１０〜２５ｍＭのエチレンジ
アミンテトラ酢酸、０．１〜２．０ｍＭのイミダゾー
ル、１０〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾー
ル、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメトプリム、０．１〜１
重量％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート
および０．０１〜１．０重量％のシリコン基材消泡剤か
らなる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項５】第２試薬組成物が、約３重量％のテトラブ
チルアンモニウムヒドロキシド、５０μｇ／ｍｌのスル
ファメトキサゾール、１００ｍＭの２−｛［トリス（ヒ
ドロキシメチル）メチル］アミノ｝−エタンスルホン
酸、１６ｍＭのエチレンジアミン−テトラ酢酸、１．０
ｍＭのイミダゾール、０．１重量％のポリオキシエチレ
ンソルビタンモノラウレート、５μｇ／ｍｌのトリメト
プリムおよび０．０７５重量％のシリコン基材消泡剤か
らなる、請求項４に記載の方法。 - 【請求項６】体液試料中のカルシウムおよびマグネシウ
ムの測定方法であって、 ａ）０．０１〜１．０ｍＭのクロロホスホナゾＩＩＩ、
１０〜６００ｍＭの２−｛［トリス（ヒドロキシメチ
ル）メチル］アミノ｝−エタンスルホン酸、０．１〜５
００ｍＭのイミダゾール、０．０１〜１０重量％のポリ
オキシエチレンソルビタンモノラウレート、１〜４０重
量％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜
１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１０
μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび０．０１〜１０重量
％のシリコン基材消泡剤からなる第３試薬組成物を試料
と混合して、反応混合物ＡＡを生成する工程、 ｂ）この反応混合物ＡＡの吸光度を測定する工程、 ｃ）１〜５重量％のテトラブチルアンモニウムヒドロキ
シド、５０〜３００ｍＭの２−｛［トリス（ヒドロキシ
メチル）メチル］アミノ｝−エタンスルホン酸、０．１
〜２．０ｍＭのイミダゾール、０．１〜１００ｍＭのエ
チレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）
−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸、０．１〜１重量％
のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、１０
〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１
０μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび０．０１〜１．０
重量％のシリコン基材消泡剤からなる、第４試薬組成物
を上記反応混合物ＡＡに添加して、反応混合物ＢＢを生
成する工程、および ｄ）この反応混合物ＢＢの吸光度を測定する工程、 ｅ）１〜５重量％のテトラブチルアンモニウムヒドロキ
シド、５０〜３００ｍＭの２−｛［トリス（ヒドロキシ
メチル）メチル］アミノ｝−エタンスルホン酸、１０〜
５０ｍＭのエチレンジアミン−テトラ酢酸、０．１〜
２．０ｍＭのイミダゾール、１０〜１００μｇ／ｍｌの
スルファメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメ
トプリム、０．１〜１重量％のポリオキシエチレンソル
ビタンモノラウレートおよび０．０１〜１．０重量％の
シリコン基材消泡剤からなる、第５試薬組成物を上記反
応混合物ＢＢに添加して、反応混合物ＣＣを生成する工
程、および ｆ）この反応混合物ＣＣの吸光度を測定する工程、 からなり、上記工程（ｄ）で測定された吸光度と工程
（ｂ）で測定された吸光度との差が試料中のカルシウム
の量に比例し、そして上記工程（ｆ）で測定された吸光
度と工程（ｄ）で測定された吸光度との差が試料中のマ
グネシウムの量に比例することを特徴とする、上記カル
シウムおよびマグネシウムの測定方法。 - 【請求項７】第３試薬組成物が、０．０５〜０．３ｍＭ
のクロロホスホナゾＩＩＩ、１〜５重量％のテトラブチ
ルアンモニウムヒドロキシド、５０〜３００ｍＭの２−
｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝−エ
タンスルホン酸、０．１〜２．０ｍＭのイミダゾール、
１０〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１
〜１０μｇ／ｍｌのトリメトプリム、０．１〜１重量％
のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートおよび
０．０１〜１重量％のシリコン基材消泡剤からなる、請
求項６に記載の方法。 - 【請求項８】第３試薬組成物が、約３重量％のテトラブ
チルアンモニウムヒドロキシド、５０μｇ／ｍｌのスル
ファメトキサゾール、１４５ｍＭの２−｛［トリス（ヒ
ドロキシメチル）メチル］アミノ｝−エタンスルホン
酸、１．０ｍＭのイミダゾール、０．１重量％のポリオ
キシエチレンソルビタンモノラウレート、５μｇ／ｍｌ
のトリメトプリム、０．２００ｍＭのクロロホスホナゾ
ＩＩＩおよび０．０７５重量％のシリコン基材消泡剤か
らなる、請求項７に記載の方法。 - 【請求項９】第４試薬組成物が、３重量％のテトラブチ
ルアンモニウムヒドロキシド、１００ｍＭの２−｛［ト
リス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝−エタンス
ルホン酸、１．０ｍＭのイミダゾール、６０ｍＭのエチ
レングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−
Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸、０．１重量％のツイ
ーン（Ｔｗｅｅｎ）２０、５０μｇ／ｍｌのスルファメ
トキサゾール、５μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび
０．０７５重量％のシリコン基材消泡剤ならびに０．２
３ｍＭのクロロホスホナゾＩＩＩからなる、請求項６〜
８のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項１０】第５試薬組成物が、約３重量％のテトラ
ブチルアンモニウムヒドロキシド、５μｇ／ｍｌのトリ
メトプリム、５０μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾー
ル、１００ｍＭの２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）
メチル］アミノ｝−エタンスルホン酸、１．０ｍＭのイ
ミダゾール、３２ｍＭのエチレンジアミン−テトラ酢
酸、０．１重量％のポリオキシエチレンソルビタンモノ
ラウレートおよび０．０７５重量％のシリコン基材消泡
剤からなる、請求項６〜９のいずれか１項に記載の方
法。 - 【請求項１１】体液試料中のマグネシウム測定用の試薬
組成物であって、０．０１〜１．０ｍＭのクロロホスホ
ナゾＩＩＩ、０．１〜１００ｍＭのエチレングリコール
−ビス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，
Ｎ′−テトラ酢酸、１０〜６００ｍＭの２−｛［トリス
（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝−エタンスルホ
ン酸、０．１〜５００ｍＭのイミダゾール、０．０１〜
１０重量％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレ
ート、１〜４０重量％のテトラブチルアンモニウムヒド
ロキシド、１０〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサ
ゾール、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび
０．０１〜１０重量％のシリコン基材消泡剤からなる試
薬組成物。 - 【請求項１２】１〜５重量％のテトラブチルアンモニウ
ムヒドロキシド、５０〜３００ｍＭの２−｛［トリス
（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝−エタンスルホ
ン酸、０．１〜２．０ｍＭのイミダゾール、０．１〜１
０ｍＭのエチレングリコール−ビス（２−アミノエチル
エーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸、０．１
〜１重量％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレ
ート、１０〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾー
ル、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメトプリム、０．０５〜
０．３０ｍＭのクロロホスホナゾＩＩＩおよび０．０１
〜１．０重量％のシリコン基材消泡剤からなる、請求項
１１に記載の試薬組成物。 - 【請求項１３】約３重量％のテトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド、５０μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾー
ル、１４５ｍＭの２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）
メチル］アミノ｝−エタンスルホン酸、１０ｍＭのエチ
レングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−
Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸、１．０ｍＭのイミダ
ゾール、０．１重量％のポリオキシエチレンソルビタン
モノラウレート、５μｇ／ｍｌのトリメトプリム、０．
２００ｍＭのクロロホスホナゾＩＩＩおよび０．０７５
重量％のシリコン基材消泡剤からなる、請求項１２に記
載の試薬組成物。 - 【請求項１４】体液試料中のマグネシウム測定用の試薬
組成物であって、１〜５００ｍＭのエチレンジアミン−
テトラ酢酸、１０〜６００ｍＭの２−｛［トリス（ヒド
ロキシメチル）メチル］アミノ｝−エタンスルホン酸、
０．１〜５００ｍＭのイミダゾール、０．０１〜１０重
量％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、
１〜４０重量％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシ
ド、１０〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾー
ル、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび０．０
１〜１０重量％のシリコン基材消泡剤からなる、上記試
薬組成物。 - 【請求項１５】約１〜１．５重量％のテトラブチルアン
モニウムヒドロキシド、５０〜３００ｍＭの２−｛［ト
リス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝−エタンス
ルホン酸、１０〜２５ｍＭのエチレンジアミン−テトラ
酢酸、０．１〜２．０ｍＭのイミダゾール、１０〜１０
０μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１０μｇ
／ｍｌのトリメトプリム、０．１〜１重量％のポリオキ
シエチレンソルビタンモノラウレートおよび０．０１〜
１．０重量％のシリコン基材消泡剤からなる、請求項１
４に記載の試薬組成物。 - 【請求項１６】３重量％のテトラブチルアンモニウムヒ
ドロキシド、５０μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾー
ル、１００ｍＭの２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）
メチル］アミノ｝−エタンスルホン酸、１６ｍＭのエチ
レンジアミン−テトラ酢酸、１．０ｍＭのイミダゾー
ル、０．１重量％のポリオキシエチレンソルビタンモノ
ラウレート、５μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび０．
０７５重量％のシリコン基材消泡剤からなる、請求項１
５に記載の試薬組成物。 - 【請求項１７】分析試料における体液試料中のカルシウ
ムおよびマグネシウムの同時測定用試薬組成物であっ
て、０．０１〜１．０ｍＭのクロロホスホナゾＩＩＩ、
１０〜６００ｍＭの２−｛［トリス（ヒドロキシメチ
ル）メチル］アミノ｝−エタンスルホン酸、０．１〜５
００ｍＭのイミダゾール、０．０１〜１０重量％のポリ
オキシエチレンソルビタンモノラウレート、１〜４０重
量％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜
１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１０
μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび０．０１〜１０重量
％のシリコン基材消泡剤からなることを特徴とする試薬
組成物。 - 【請求項１８】０．０５〜０．３ｍＭのクロロホスホナ
ゾＩＩＩ、１〜５重量％のテトラブチルアンモニウムヒ
ドロキシド、５０〜３００ｍＭの２−｛［トリス（ヒド
ロキシメチル）メチル］アミノ｝−エタンスルホン酸、
０．１〜２．０ｍＭのイミダゾール、１０〜１００μｇ
／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍｌ
のトリメトプリム、０．１〜１重量％のポリオキシエチ
レンソルビタンモノラウレートおよび０．０１〜１重量
％のシリコン基材消泡剤からなる、請求項１７に記載の
試薬組成物。 - 【請求項１９】約３重量％のテトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド、５０μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾー
ル、１４５ｍＭの２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）
メチル］アミノ｝−エタンスルホン酸、１．０ｍＭのイ
ミダゾール、０．１重量％のポリオキシエチレンソルビ
タンモノラウレート、５μｇ／ｍｌのトリメトプリム、
０．２００ｍＭのクロロホスホナゾＩＩＩおよび０．０
７５重量％のシリコン基材消泡剤からなる、請求項１８
に記載の試薬組成物。 - 【請求項２０】体液試料中のカルシウムおよびマグネシ
ウムの同時測定用組成物であって、１〜５重量％のテト
ラブチルアンモニウムヒドロキシド、５０〜３００ｍＭ
の２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミ
ノ｝−エタンスルホン酸、０．１〜２．０ｍＭのイミダ
ゾール、０．１〜１００ｍＭのエチレングリコール−ビ
ス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′
−テトラ酢酸、０．１〜１重量％のポリオキシエチレン
ソルビタンモノラウレート、１０〜１００μｇ／ｍｌの
スルファメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメ
トプリムおよび０．０１〜１．０重量％のシリコン基材
消泡剤からなることを特徴とする組成物。 - 【請求項２１】体液試料中のカルシウムおよびマグネシ
ウムの同時測定用組成物であって、３重量％のテトラブ
チルアンモニウムヒドロキシド、１００ｍＭの２−
｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝−エ
タンスルホン酸、１．０ｍＭのイミダゾール、６０ｍＭ
のエチレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテ
ル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラ酢酸、０．１重量％
のツイーン２０、５０μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾ
ール、５μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび０．０７５
重量％のシリコン基材消泡剤ならびに０．２３ｍＭのク
ロロホスホナゾＩＩＩからなることを特徴とする組成
物。 - 【請求項２２】体液試料中のカルシウムおよびマグネシ
ウムの同時測定用組成物であって、１〜５重量％のテト
ラブチルアンモニウムヒドロキシド、５０〜３００ｍＭ
の２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミ
ノ｝−エタンスルホン酸、１０〜５０ｍＭのエチレンジ
アミン−テトラ酢酸、０．１〜２．０ｍＭのイミダゾー
ル、１０〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾー
ル、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメトプリム、０．１〜１
重量％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート
および０．０１〜１．０重量％のシリコン基材消泡剤か
らなることを特徴とする組成物。 - 【請求項２３】約３重量％のテトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド、５μｇ／ｍｌのトリメトプリム、５０μ
ｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１００ｍＭの２−
｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝−エ
タンスルホン酸、１．０ｍＭのイミダゾール、３２ｍＭ
のエチレンジアミン−テトラ酢酸、０．１重量％のポリ
オキシエチレンソルビタンモノラウレートおよび０．０
７５重量％のシリコン基材消泡剤からなる、請求項２２
に記載の組成物。 - 【請求項２４】請求項１〜５のいすれか１項に記載の体
液試料中のマグネシウムを測定するための診断用キット
であって、 請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の第１試薬組成
物、および 請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の第２試薬組成
物、 からなる、上記診断用キット。 - 【請求項２５】請求項６〜１０のいずれか１項に記載の
体液試料中のカルシウムおよびマグネシウムを測定する
ための診断用キットであって、 請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の第３試薬組成
物、 請求項２０または請求項２１に記載の第４試薬組成物、
および 請求項２２または請求項２３に記載の第５試薬組成物、 からなる、上記診断用キット。
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