JP2024015040A - Ｔｇｆ－ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用 - Google Patents

Ｔｇｆ－ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用 Download PDF

Info

Publication number
JP2024015040A
JP2024015040A JP2023199004A JP2023199004A JP2024015040A JP 2024015040 A JP2024015040 A JP 2024015040A JP 2023199004 A JP2023199004 A JP 2023199004A JP 2023199004 A JP2023199004 A JP 2023199004A JP 2024015040 A JP2024015040 A JP 2024015040A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
tβrii
seq
amino acid
polypeptide
gdf15
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023199004A
Other languages
English (en)
Inventor
クマール ラビンドラ
Kumar Ravindra
グリンバーグ アシャ
Asya Grinberg
エス． サコ ダイアン
Dianne S Sako
カストンギー ロズリーヌ
Castonguay Roselyne
スティーブス リタ
Steeves Rita
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Acceleron Pharma Inc
Original Assignee
Acceleron Pharma Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Acceleron Pharma Inc filed Critical Acceleron Pharma Inc
Publication of JP2024015040A publication Critical patent/JP2024015040A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/495—Transforming growth factor [TGF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)

Abstract

【課題】ＴＧＦβスーパーファミリーシグナル伝達をモジュレートするための組成物および方法を提供する。【解決手段】本開示は、ＴβＲＩＩポリペプチド、およびＧＤＦ１５、ＴＧＦβ１またはＴＧＦβ３に対する選択的アンタゴニストとしての、かかるＴβＲＩＩポリペプチドの使用を提供する。本明細書に記載するように、さらなる変異ありまたはなしのＴβＲＩＩ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の一部または全てを含むポリペプチドは、変動する親和性で、ＧＤＦ１５、ＴＧＦβ１もしくはＴＧＦβ３と結合するおよび／またはＧＤＦ１５、ＴＧＦβ１もしくはＴＧＦβ３を阻害する。したがって、ある特定の態様では、本開示は、ＴＧＦβスーパーファミリー関連障害を選択的に阻害する際の使用のためのＴβＲＩＩポリペプチドを提供する。【選択図】なし

Description

本出願は、２０１３年８月２２日に出願された米国仮特許出願第６１／８６８，７１３
号；２０１３年１１月１９日に出願された米国仮特許出願第６１／９０６，２７０号；お
よび２０１３年１１月２０日に出願された米国仮特許出願第６１／９０６，８４９号の優
先権を主張する。基礎出願の開示は、その全体が本明細書において参考として援用される
。
トランスフォーミング増殖因子－ベータ（ＴＧＦβ）スーパーファミリーのメンバーは
、増殖、分化、アポトーシス、運動性、細胞外マトリックス産生、組織リモデリング、血
管新生、免疫応答、細胞接着などの重要な細胞機能に関与する多面的なサイトカインであ
り、慢性炎症性状態とがんほど異なる疾患状態の病態生理においても、重要な役割を果た
す。ＴＧＦβスーパーファミリーのメンバーは、ＴＧＦβ、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）
、骨原性タンパク質（ＯＰ）、増殖および分化因子（ＧＤＦ）、インヒビン／アクチビン
、ミュラー管阻害物質（ＭＩＳ）ならびにグリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）を含む主
要なファミリーグルーピングに分類されてきた。
ＴＧＦβスーパーファミリーメンバーは、特異的なＩ型およびＩＩ型のセリン／スレオ
ニンキナーゼ受容体のヘテロマー複合体の形成を誘導することによって、原形質膜を横切
ってそれらのシグナルを伝達し、これが次に、ＳＭＡＤタンパク質の特定のサブセット（
一部は阻害性および一部は興奮性）を活性化する。これらのＳＭＡＤ分子化合物は、核中
にシグナルを中継し、核において、それらは、他のタンパク質と呼応して、転写応答を指
向する。
機能障害性ＴＧＦβスーパーファミリーシグナル伝達は、がん、線維症、骨疾患、糖尿
病性腎症、ならびにアテローム動脈硬化症などの慢性血管疾患を含む、いくつかの臨床障
害と関連付けられてきた。
したがって、本開示の目的は、ＴＧＦβスーパーファミリーシグナル伝達をモジュレー
トするための組成物および方法を提供することである。
一部には、本開示は、ＴβＲＩＩポリペプチド、およびＧＤＦ１５、ＴＧＦβ１または
ＴＧＦβ３に対する選択的アンタゴニストとしての、かかるＴβＲＩＩポリペプチドの使
用を提供する。本明細書に記載するように、さらなる変異ありまたはなしのＴβＲＩＩ細
胞外ドメイン（ＥＣＤ）の一部または全てを含むポリペプチドは、変動する親和性で、Ｇ
ＤＦ１５、ＴＧＦβ１もしくはＴＧＦβ３と結合するおよび／またはＧＤＦ１５、ＴＧＦ
β１もしくはＴＧＦβ３を阻害する。したがって、ある特定の態様では、本開示は、ＴＧ
Ｆβスーパーファミリー関連障害を選択的に阻害する際の使用のためのＴβＲＩＩポリペ
プチドを提供する。
ある特定の態様では、本開示は、ＴβＲＩＩの細胞外ドメイン中に変異および／または
トランケーションを含むポリペプチドを提供する。ある特定の態様では、本開示は、Ｔβ
ＲＩＩの細胞外ドメイン由来の第１のアミノ酸配列と異種アミノ酸配列とを含むＴβＲＩ
Ｉ融合ポリペプチドであって、この第１のアミノ酸配列が、ａ）配列番号５の２３位～３
５位のいずれかにおいて始まり配列番号５の１５３位～１５９位のいずれかにおいて終わ
る配列、もしくはｂ）配列番号６の２３位～６０位のいずれかにおいて始まり配列番号６
の１７８位～１８４位のいずれかにおいて終わる配列に対して、少なくとも８０％、少な
くとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９
７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一なもしくは同一なアミノ酸配列を含む、
またはかかるアミノ酸配列からなるＴβＲＩＩ融合ポリペプチドを提供する。
ある特定の態様では、本開示は、ヒトＩｇＧ２のＦｃドメインの少なくとも一部分に融
合した、ＴβＲＩＩの野生型または変更されたおよび／もしくはトランケートされた細胞
外ドメインを含むポリペプチドを提供する。したがって、ある特定の態様では、本開示は
、ＴβＲＩＩの細胞外ドメイン由来の第１のアミノ酸配列と異種アミノ酸配列とを含むＴ
βＲＩＩ融合ポリペプチドであって、この第１のアミノ酸配列が、ａ）配列番号５の２３
位～３５位のいずれかにおいて始まり配列番号５の１５３位～１５９位のいずれかにおい
て終わる配列、もしくはｂ）配列番号６の２３位～６０位のいずれかにおいて始まり配列
番号６の１７８位～１８４位のいずれかにおいて終わる配列に対して、少なくとも８０％
、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なく
とも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一なもしくは同一なアミノ酸配列を
含む、またはかかるアミノ酸配列からなり、このポリペプチドが、ヒトＩｇＧ２の少なく
とも定常ドメインを含み、任意選択で、配列番号１９に対して少なくとも８０％、少なく
とも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７
％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み得るまたはかか
るアミノ酸配列からなり得る第２のポリペプチド配列を含み、リンカーが、任意選択で、
第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間に位置付けられるＴβＲＩＩ融合ポリペ
プチドを提供する。この一例は、配列番号５０として提供され、配列番号５１の核酸配列
によってコードされる。ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号５０のアミノ酸配
列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９
％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むまたはかかるアミノ酸配列からなるア
ミノ酸配列を有するポリペプチドを提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、配列
番号５１の核酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７
％、９８％、９９％もしくは１００％同一である核酸配列を含むまたはかかる核酸配列か
らなる核酸配列によってコードされるポリペプチドを提供する。
一部の実施形態では、この第１のアミノ酸配列は、配列番号５の２３位において始まり
配列番号５の１５９位において終わる配列を含むまたはかかる配列からなる。一部の実施
形態では、この第１のアミノ酸配列は、配列番号５の２９位において始まり配列番号５の
１５９位において終わる配列を含むまたはかかる配列からなる。一部の実施形態では、こ
の第１のアミノ酸配列は、配列番号５の３５位において始まり配列番号５の１５９位にお
いて終わる配列を含むまたはかかる配列からなる。一部の実施形態では、この第１のアミ
ノ酸配列は、配列番号５の２３位において始まり配列番号５の１５３位において終わる配
列を含むまたはかかる配列からなる。一部の実施形態では、この第１のアミノ酸配列は、
配列番号５の２９位において始まり配列番号５の１５３位において終わる配列を含むまた
はかかる配列からなる。一部の実施形態では、この第１のアミノ酸配列は、配列番号５の
３５位において始まり配列番号５の１５３位において終わる配列を含むまたはかかる配列
からなる。
一部の実施形態では、この第１のアミノ酸配列は、配列番号６の２３位において始まり
配列番号６の１８４位において終わる配列を含むまたはかかる配列からなる。一部の実施
形態では、この第１のアミノ酸配列は、配列番号６の２９位において始まり配列番号６の
１８４位において終わる配列を含むまたはかかる配列からなる。一部の実施形態では、こ
の第１のアミノ酸配列は、配列番号６の２３位において始まり配列番号６の１７８位にお
いて終わる配列を含むまたはかかる配列からなる。一部の実施形態では、この第１のアミ
ノ酸配列は、配列番号６の２９位において始まり配列番号６の１７８位において終わる配
列を含むまたはかかる配列からなる。
一部の実施形態では、この第１のアミノ酸配列は、配列番号４７の３６位に対応する位
置におけるＤおよび／もしくは配列番号４７の７６位に対応する位置におけるＫを有する
配列を含むまたはかかる配列からなる。
ある特定の態様では、本開示は、配列番号７もしくは配列番号１３の配列に対して少な
くとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９
６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一なまたは同一な第１
のアミノ酸配列またはその活性断片と第２の異種部分とを含むＴβＲＩＩ融合ポリペプチ
ドであって、この第１のアミノ酸配列が、配列番号４７の３６位に対応する位置における
Ｄおよび／または配列番号４７の７６位に対応する位置におけるＫを有するＴβＲＩＩ融
合ポリペプチドを提供する。
一部の実施形態では、この第１のアミノ酸配列は、配列番号７のアミノ酸１～１２に対
応する１～１２アミノ酸または配列番号１３のアミノ酸１～３７に対応する１～３７アミ
ノ酸のＮ末端トランケーションを含む。一部の実施形態では、この第１のアミノ酸配列は
、配列番号７または配列番号１３のアミノ酸１～６に対応する６アミノ酸のＮ末端トラン
ケーションを含む。一部の実施形態では、この第１のアミノ酸配列は、配列番号７のアミ
ノ酸１～１２に対応する１２アミノ酸または配列番号１３のアミノ酸１～３７に対応する
３７アミノ酸のＮ末端トランケーションを含む。一部の実施形態では、この第１のアミノ
酸配列は、配列番号７のアミノ酸１３７～１３２または配列番号１３のアミノ酸１６２～
１５７に対応する１～６アミノ酸のＣ末端トランケーションを含む。一部の実施形態では
、この第１のアミノ酸配列は、配列番号７のアミノ酸１３２～１３７または配列番号１３
のアミノ酸１５７～１６２に対応する６アミノ酸のＣ末端トランケーションを含む。一部
の実施形態では、この第１のアミノ酸配列は、配列番号４７の１１７位と１１８位に対応
する残基の間に、配列番号１８に対応する挿入を含む。
一部の実施形態では、この異種部分は、ｉｎ ｖｉｖｏ安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期
、取り込み／投与、組織局在もしくは分布、タンパク質複合体の形成、および／または精
製のうちの１または複数を増強する１または複数のポリペプチド部分を含む。一部の実施
形態では、この異種部分は、免疫グロブリンＦｃドメインおよび血清アルブミンから選択
されるポリペプチド部分を含む。さらなる実施形態では、この免疫グロブリンＦｃドメイ
ンは、リンカーによってこのＴβＲＩＩポリペプチドに接続されている。
一部の実施形態では、このポリペプチドは、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸
、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分にコン
ジュゲートしたアミノ酸、および有機誘導体化剤にコンジュゲートしたアミノ酸から選択
される１または複数の修飾されたアミノ酸残基を含む。一部の実施形態では、このポリペ
プチドはグリコシル化されている。
ある特定の態様では、本開示は、配列番号７～１７および４７～４９から選択されるア
ミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少な
くとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩの細胞外ドメインの一部分からな
る第１のアミノ酸配列と第２の異種部分とを含むＴβＲＩＩ融合ポリペプチドを提供する
。ある特定の態様では、本開示は、配列番号７～１７および４７～４９から選択されるア
ミノ酸配列に対して少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩの細胞外
ドメインの一部分からなる第１のアミノ酸配列と第２の異種部分とを含むＴβＲＩＩ融合
ポリペプチドを提供する。ある特定の態様では、本開示は、配列番号７～１７および４７
～４９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を
含むＴβＲＩＩの細胞外ドメインの一部分からなる第１のアミノ酸配列と第２の異種部分
とを含むＴβＲＩＩ融合ポリペプチドを提供する。ある特定の態様では、本開示は、配列
番号７～１７および４７～４９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９８％同
一であるアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩの細胞外ドメインの一部分からなる第１のアミノ
酸配列と第２の異種部分とを含むＴβＲＩＩ融合ポリペプチドを提供する。ある特定の態
様では、本開示は、配列番号７～１７および４７～４９から選択されるアミノ酸配列に対
して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩの細胞外ドメインの一部
分からなる第１のアミノ酸配列と第２の異種部分とを含むＴβＲＩＩ融合ポリペプチドを
提供する。ある特定の態様では、本開示は、配列番号７～１７および４７～４９から選択
されるアミノ酸配列であるアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩの細胞外ドメインの一部分から
なる第１のアミノ酸配列と第２の異種部分とを含むＴβＲＩＩ融合ポリペプチドを提供す
る。
ある特定の態様では、本開示は、リーダー配列が除去された、配列番号２５、２７、２
９、３１、３３、３５、３７、３９、４１および４３から選択されるアミノ酸配列に対し
て少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％もしくは少なくとも９５％同
一であるアミノ酸配列もしくはその部分を含むまたはかかるアミノ酸配列もしくはその部
分からなるポリペプチド、例えば、配列番号５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９
、６０、６１および６２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なく
とも８５％、少なくとも９０％もしくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む
またはかかるアミノ酸配列からなるポリペプチドを提供する。ある特定の態様では、本開
示は、リーダー配列が除去された、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７
、３９、４１および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９６％同一であ
るアミノ酸配列もしくはその部分を含むまたはかかるアミノ酸配列もしくはその部分から
なるポリペプチド、例えば、配列番号５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０
、６１および６２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９６％同一であるアミ
ノ酸配列を含むまたはかかるアミノ酸配列からなるポリペプチドを提供する。ある特定の
態様では、本開示は、リーダー配列が除去された、配列番号２５、２７、２９、３１、３
３、３５、３７、３９、４１および４３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも
９７％同一であるアミノ酸配列もしくはその部分を含むまたはかかるアミノ酸配列もしく
はその部分からなるポリペプチド、例えば、配列番号５３、５４、５５、５６、５７、５
８、５９、６０、６１および６２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９７％
同一であるアミノ酸配列を含むまたはかかるアミノ酸配列からなるポリペプチドを提供す
る。ある特定の態様では、本開示は、リーダー配列が除去された、配列番号２５、２７、
２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１および４３から選択されるアミノ酸配列に対
して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列もしくはその部分を含むまたはかかるアミ
ノ酸配列もしくはその部分からなるポリペプチド、例えば、配列番号５３、５４、５５、
５６、５７、５８、５９、６０、６１および６２から選択されるアミノ酸配列に対して少
なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含むまたはかかるアミノ酸配列からなるポリペ
プチドを提供する。ある特定の態様では、本開示は、リーダー配列が除去された、配列番
号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１および４３から選択されるア
ミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列もしくはその部分を含むま
たはかかるアミノ酸配列もしくはその部分からなるポリペプチド、例えば、配列番号５３
、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１および６２から選択されるアミノ酸
配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むまたはかかるアミノ酸配列
からなるポリペプチドを提供する。ある特定の態様では、本開示は、リーダー配列が除去
された、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１および４３か
ら選択されるアミノ酸配列もしくはその部分を含むまたはかかるアミノ酸配列もしくはそ
の部分からなるポリペプチド、例えば、配列番号５３、５４、５５、５６、５７、５８、
５９、６０、６１および６２から選択されるアミノ酸配列を含むまたはかかるアミノ酸配
列からなるポリペプチドを提供する。
ある特定の態様では、本開示は、配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８
、４０、４２および４４から選択されるヌクレオチド配列の相補体に対してストリンジェ
ントな条件下でハイブリダイズする核酸によってコードされるアミノ酸配列を含むＴβＲ
ＩＩポリペプチドを提供する。
上述の各々において、全長ＴβＲＩＩ ＥＣＤを含まないＴβＲＩＩポリペプチドが、
選択され得る。ＴβＲＩＩポリペプチドは、モノマータンパク質として、またはダイマー
化形態で、使用され得る。ＴβＲＩＩポリペプチドはまた、改善された特性、例えば、増
加した半減期、または産生もしくは精製のより高い容易さを提供するために、第２のポリ
ペプチド部分に融合され得る。融合は、直接的であり得るか、またはリンカーが、ＴβＲ
ＩＩポリペプチドと任意の他の部分との間に挿入され得る。リンカーは、構造化されてい
ても構造化されていなくてもよく、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、３０、５０
またはそれ超のアミノ酸からなり得、任意選択で二次構造を比較的含まなくてもよい。
一部の実施形態では、本開示のＴβＲＩＩポリペプチドは、１×１０－８Ｍ未満の平衡
解離定数（ＫＤ）でヒトＧＤＦ１５に結合する。
一部の実施形態では、本開示のＴβＲＩＩポリペプチドは、ＣＨＯ細胞におけるこのポ
リペプチドの発現に特徴的なグリコシル化パターンを有する。
一部の実施形態では、本開示は、本開示の２つのＴβＲＩＩポリペプチドを含むホモダ
イマーを提供する。
一部の実施形態では、本開示は、本開示のＴβＲＩＩポリペプチドのコード配列を含む
、単離されたポリヌクレオチドを提供する。一部の実施形態では、本開示は、この単離さ
れたポリヌクレオチドに作動可能に連結したプロモーター配列を含む組換えポリヌクレオ
チドを提供する。一部の実施形態では、本開示は、本開示の単離されたポリヌクレオチド
または組換えポリヌクレオチドで形質転換された細胞を提供する。一部の実施形態では、
この細胞は、哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、この細胞は、ＣＨＯ細胞または
ヒト細胞である。一部の実施形態では、この細胞は、ＨＥＫ－２９３細胞である。
ある特定の態様では、本開示は、本開示のＴβＲＩＩポリペプチドまたはホモダイマー
と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬調製物を提供する。
ある特定の態様では、本開示は、ＴＧＦβスーパーファミリーメンバーに対する細胞の
応答をモジュレートする方法であって、この細胞を本開示のＴβＲＩＩポリペプチドまた
はホモダイマーに曝露するステップを含む方法を提供する。
ある特定の態様では、本開示は、それを必要とする患者において、ＴＧＦβスーパーフ
ァミリーメンバーと関連する疾患または状態を処置する方法であって、有効量の本開示の
ＴβＲＩＩポリペプチドまたはホモダイマーをこの患者に投与するステップを含む方法を
提供する。一部の実施形態では、このＴＧＦβスーパーファミリーメンバーは、ＴＧＦβ
１、ＴＧＦβ３またはＧＤＦ１５である。
一部の実施形態では、この疾患または状態は、がんである。一部の実施形態では、この
がんは、胃がん、腸管がん、皮膚がん、乳房がん、黒色腫、骨がんおよび甲状腺がんから
選択される。
一部の実施形態では、この疾患または状態は、線維性または硬化性の疾患または障害で
ある。一部の実施形態では、この線維性または硬化性の疾患または障害は、強皮症、アテ
ローム動脈硬化症、肝臓線維症、びまん性全身性硬化症、糸球体腎炎、神経瘢痕、皮膚瘢
痕、放射線誘発線維症、肝線維症および骨髄線維症から選択される。
一部の実施形態では、この疾患または状態は心臓疾患である。
一部の実施形態では、この疾患または状態は、遺伝性出血性末梢血管拡張症（ＨＨＴ）
、マルファン症候群、ロイス・ディーツ症候群、家族性胸部大動脈瘤症候群、動脈蛇行症
候群（ａｒｔｅｒｉａｌ ｔｏｒｔｕｏｓｉｔｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、子癇前症、アテ
ローム動脈硬化症、再狭窄および肥大型心筋症／うっ血性心不全から選択される。
ある特定の態様では、本開示は、ＧＤＦ１５と結合し、ＧＤＦ１５とＴβＲＩＩとの相
互作用を遮断する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
ある特定の態様では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＧＤＦ１５ポリペプ
チドまたはＴβＲＩＩに結合するその断片を提供し、このＧＤＦ１５ポリペプチドは、タ
ンパク質夾雑物に関して、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少
なくとも９８％または少なくとも９９％純粋である。
ある特定の態様では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＧＤＦ１５ポリペプ
チドまたは本開示のＴβＲＩＩポリペプチドと結合するその断片を提供し、このＧＤＦ１
５ポリペプチドは、タンパク質夾雑物に関して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少
なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％純粋である。
一部の実施形態では、このＧＤＦ１５ポリペプチドは、１０－８Ｍ以下の平衡解離定数
（ＫＤ）でＴβＲＩＩに結合する。一部の実施形態では、このＧＤＦ１５ポリペプチドは
、１０－８Ｍ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で本開示のＴβＲＩＩポリペプチドと結合する
。
一部の実施形態では、このＧＤＦ１５ポリペプチドは、ＣＨＯ細胞における発現によっ
て産生される。
ある特定の態様では、本開示は、ＧＤＦ１５を含む試料を本開示のＴβＲＩＩポリペプ
チドと接触させるステップを含む、ＧＤＦ１５を濃縮または精製する方法を提供する。
図１は、ヒトＧＤＦ１５のネイティブ前駆体のアミノ酸配列（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００４８５５．２）を示す図である。実線の下線は、配列決定によってＮ末端を決定した、成熟ＧＤＦ１５（残基１９７～３０８）を示す。点線の下線は、リーダー（残基１～２９）を示す。
図２は、ヒトＧＤＦ１５のネイティブ前駆体をコードするヌクレオチド配列を示す図である。実線の下線は、成熟ＧＤＦ１５をコードする配列（ヌクレオチド５８９～９２４）を示し、点線の下線は、リーダーをコードする配列（ヌクレオチド１～８７）を示す。ＮＭ＿００４８６４．２におけるＳｆｏＩ部位を破壊するために使用したサイレント変異（Ｇ４５６Ａ）には、二重下線を付す。
図３は、マウスＧＤＦ１５のネイティブ前駆体のアミノ酸配列（ＮＰ＿０３５９４９．２）を示す図である。実線の下線は、配列決定によってＮ末端を決定した、成熟ＧＤＦ１５（残基１９２～３０３）を示す。点線の下線は、リーダー（残基１～３０）を示す。
図４は、マウスＧＤＦ１５のネイティブ前駆体をコードするヌクレオチド配列（ＮＭ＿０１１８１９．２から誘導した）を示す図である。実線の下線は、成熟ＧＤＦ１５をコードする配列（ヌクレオチド５７４～９０９）を示し、点線の下線は、リーダーをコードする配列（ヌクレオチド１～９０）を示す。
図５は、ヒトＴＧＦβ受容体ＩＩ型（ｈＴβＲＩＩ）のＢ（短）アイソフォームのネイティブ前駆体のアミノ酸配列（ＮＰ＿００３２３３．４）を示す図である。実線の下線は、成熟細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（残基２３～１５９）を示し、二重下線は、Ａ（長）アイソフォームにおいて置き換えられるバリンを示す。点線の下線は、リーダー（残基１～２２）を示す。
図６は、ヒトＴβＲＩＩのＡ（長）アイソフォームのネイティブ前駆体のアミノ酸配列（ＮＰ＿００１０２００１８．１）を示す図である。実線の下線は、成熟ＥＣＤ（残基２３～１８４）を示し、二重下線は、スプライス生成されたイソロイシン置換を示す。点線の下線は、リーダー（残基１～２２）を示す。
図７は、ｈＴβＲＩＩ短トランケーションおよびそれらのｈＴβＲＩＩ長対応物のＮ末端アラインメントを示す図である。ｈＴβＲＩＩ長トランケーション中に存在する２５アミノ酸の挿入に下線を付す。スプライシングプロセスによって、短アイソフォーム中の挿入部位に隣接するバリンが、長アイソフォームではイソロイシンによって置き換えられることに留意のこと。四角で囲んだ配列はリーダーを示す。 図７は、ｈＴβＲＩＩ短トランケーションおよびそれらのｈＴβＲＩＩ長対応物のＮ末端アラインメントを示す図である。ｈＴβＲＩＩ長トランケーション中に存在する２５アミノ酸の挿入に下線を付す。スプライシングプロセスによって、短アイソフォーム中の挿入部位に隣接するバリンが、長アイソフォームではイソロイシンによって置き換えられることに留意のこと。四角で囲んだ配列はリーダーを示す。
１．概説
本明細書に記載されるタンパク質は、特記しない限り、ヒト形態である。これらのタン
パク質に対するＮＣＢＩ参照は、以下の通りである：ヒトＴβＲＩＩアイソフォームＡ（
ｈＴβＲＩＩ長）、ＮＰ＿００１０２００１８．１；ヒトＴβＲＩＩアイソフォームＢ（
ｈＴβＲＩＩ短）、ＮＰ＿００３２３３．４；ヒトＧＤＦ１５、ＮＰ＿００４８５５．２
；マウスＧＤＦ１５、ＮＰ＿０３５９４９．２。ヒトおよびマウス由来のネイティブＴβ
ＲＩＩおよびＧＤＦ１５タンパク質の配列は、図１～６に示される。
ＴＧＦβスーパーファミリーは、共通の配列エレメントおよび構造モチーフを共有する
種々の増殖因子を含む。これらのタンパク質は、脊椎動物および非脊椎動物の両方におい
て多種多様な細胞型に対して生物学的効果を発揮することが公知である。このスーパーフ
ァミリーのメンバーは、パターン形成および組織特異化において胚発生の間に重要な機能
を果たし、脂肪生成、筋形成、軟骨形成、心発生、造血発生、神経発生および上皮細胞分
化を含む種々の分化プロセスに影響を与え得る。ＴＧＦβファミリーのメンバーの活性を
操作することによって、生物において顕著な生理学的変化を引き起こすことが可能な場合
が多い。例えば、ピエモンテ（Ｐｉｅｄｍｏｎｔｅｓｅ）およびベルギアンブルー（Ｂｅ
ｌｇｉａｎ Ｂｌｕｅ）のウシ品種は、筋肉量における顕著な増加を引き起こす、ＧＤＦ
８（ミオスタチンとも呼ばれる）遺伝子における機能喪失型変異を保有する。Ｇｒｏｂｅ
ｔら、Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．１９９７年、１７巻（１号）：７１～４頁。同様に、ヒトで
は、ＧＤＦ８の不活性対立遺伝子は、増加した筋肉量、および報告によれば、例外的な強
さと関連する。Ｓｃｈｕｅｌｋｅら、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００４年、３５０巻
：２６８２～８頁。
ＴＧＦβシグナルは、リガンド刺激の際に下流のＳＭＡＤタンパク質をリン酸化および
活性化する、Ｉ型（例えば、ＴβＲＩ）およびＩＩ型（例えば、ＴβＲＩＩ）セリン／ス
レオニンキナーゼ受容体のヘテロマー複合体によって媒介される（Ｍａｓｓａｇｕｅ、２
０００年、Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． １巻：１６９～１７
８頁）。これらのＩ型およびＩＩ型の受容体は、システインリッチ領域を有するリガンド
結合性細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および予測されたセリン／スレオニン特異性を
有する細胞質ドメインから構成される膜貫通タンパク質である。Ｉ型受容体は、シグナル
伝達に重要である；ＩＩ型受容体は、リガンドに結合するためおよびＩ型受容体の発現の
ために必要とされる。Ｉ型およびＩＩ型の受容体は、リガンド結合後に安定な複合体を形
成し、ＩＩ型受容体によるＩ型受容体のリン酸化を生じる。ＴＧＦβは、各々ｉｎ ｖｉ
ｖｏで個別の機能を有する３つの哺乳動物アイソフォーム、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およ
びＴＧＦβ３を有する。ＴβＲＩＩへのＴＧＦβの結合は、ＴＧＦβシグナル伝達経路の
活性化を開始する際の重要なステップであり、ＳＭＡＤ２のリン酸化、および活性化され
たＳＭＡＤ２／ＳＭＡＤ４複合体の核への転位置をもたらして、遺伝子発現をモジュレー
トする。
増殖分化因子１５（ＧＤＦ１５）は、ＴＧＦβファミリーのメンバーである。特徴的な
システインノットモチーフを含むＴＧＦβスーパーファミリー中の他のリガンドと同様、
成熟ＧＤＦ１５は、成熟ダイマーＧＤＦ１５を生成するために正準ＲＸＸＲ部位において
フューリン様プロテアーゼによる切断によって除去されるより大きいプロドメイン（Ｈａ
ｒｒｉｓｏｎら、Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ ２９巻：１７４頁、２０１１年；Ｓｈ
ｉら、Ｎａｔｕｒｅ ４７４巻：３４３頁、２０１１年）を有して合成される。ＧＤＦ１
５は、このタンパク質について暗示されている異なる機能を反映して、文献中で、マクロ
ファージ阻害サイトカイン－１（ＭＩＣ－１）、胎盤骨形態形成タンパク質（ＰＬＡＢ）
、胎盤トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＰＴＧＦβ）、前立腺由来因子（ＰＤＦ）
および非ステロイド性抗炎症活性化遺伝子－１（ＮＡＧ－１）として記載されている。Ｇ
ＤＦ１５は、いくつかの生理的および病理的状態と関連付けられてきた。例えば、ＧＤＦ
１５は、胎盤において高度に発現され、妊娠の維持に必要である。ＧＤＦ１５濃度はまた
、前立腺、結腸直腸または膵臓のがん、ならびにグリオーマを有する患者の血清において
、著しく増加される。ＧＤＦ１５が、任意の受容体と直接的に結合または相互作用するこ
とは、生化学的に示されていない。本開示は、ＴＧＦβ ＩＩ型受容体ＴβＲＩＩが、高
い親和性でＧＤＦ１５と結合し、ＧＤＦ１５に対する機能的受容体であるという発見に、
一部関する。ＴβＲＩＩ融合ポリペプチド、およびＴβＲＩＩのリガンド結合性部分を含
む他のポリペプチドは、ＧＤＦ１５誘導性の遺伝子活性化を阻害することが、本明細書で
実証される。ＧＤＦ１５シグナル伝達の強力な阻害は、ＴβＲＩＩがＧＤＦ１５に対する
機能的ＩＩ型受容体であるという証拠を提供し、このシグナル伝達経路における治療的介
入のための新たな道を開く。したがって、一部には、本開示は、ＧＤＦ１５ポリペプチド
に対する生理学的な高親和性受容体を同定する。
驚くべきことに、可溶性ＴβＲＩＩポリペプチドは、ＧＤＦ１５に対する高度に特異的
な高親和性の結合を有することが、本明細書で示される。ＴβＲＩＩは、ＴＧＦβに対す
る公知のＩＩ型受容体であり、高い親和性でＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３と結合する。ヒ
トＴβＲＩＩは、細胞外ドメイン（ＥＣＤ）における選択的スプライシングによって生成
される、少なくとも２つのアイソフォーム－Ａ（長）およびＢ（短）－として天然に生じ
る（図６および５ならびに配列番号６および５）。この長アイソフォームは、２５アミノ
酸の挿入を有し、スプライシングプロセスによって、短アイソフォーム中の挿入部位に隣
接するバリンが、長アイソフォームではイソロイシンによって置き換えられる。可溶性受
容体外部ドメインは、リガンド－受容体相互作用を阻害するために、スカベンジャーまた
はリガンドトラップとして機能し得る。ネイティブＴβＲＩＩ細胞外ドメイン（外部ドメ
イン）を取り込んでいる可溶性ＴβＲＩＩ－Ｆｃ融合タンパク質などのリガンドトラップ
は、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ３および本明細書に開示される知見に基づいてＧＤＦ１５を含
むＴβＲＩＩリガンドに対する凡インヒビターとして機能する。一部の治療設定では、こ
のより広いスペクトルのリガンド結合およびシグナル阻害が有利であり得るが、他の設定
では、より選択的な分子が優れている可能性がある。ＴβＲＩＩ外部ドメインポリペプチ
ドなどのリガンドトラップが選択的なリガンド結合プロファイルを示すことは、高度に望
ましい。本開示は、ＴβＲＩＩの細胞外ドメインのトランケートされた部分および／また
は細胞外ドメイン内の変異を含むポリペプチドが、ＧＤＦ１５、ＴＧＦβ１またはＴＧＦ
β３による細胞シグナル伝達に対して示差的な阻害効果を有するという、驚くべき発見に
関する。一部には、本開示は、ネイティブＴβＲＩＩ細胞外ドメインのものとは別個の変
動するリガンド結合プロファイルを示す、ＴβＲＩＩの細胞外ドメインにおける一連の変
異および／またはトランケーションによって生成されるリガンドトラップを提供する。本
明細書に開示されるバリアントＴβＲＩＩポリペプチドは、ネイティブ全長細胞外ドメイ
ンと比較して有利な特性を提供し、ｉｎ ｖｉｖｏで異なるＴβＲＩＩリガンドによって
媒介される経路を選択的に阻害するために使用され得る。
したがって、ある特定の態様では、本開示は、種々のＧＤＦ１５、ＴＧＦβ１またはＴ
ＧＦβ３関連障害を処置する際の使用のための、ＧＤＦ１５、ＴＧＦβ１またはＴＧＦβ
３のアンタゴニストとしての、ＴβＲＩＩポリペプチドを提供する。任意の特定の作用機
構に束縛されることは望まないが、かかるポリペプチドは、ＧＤＦ１５、ＴＧＦβ１また
はＴＧＦβ３と結合し、これらのリガンドが三元シグナル伝達複合体を形成する能力を阻
害することによって作用すると予測される。
本明細書で使用される用語は、一般に、本発明の文脈内で、かつ各用語が使用される特
定の文脈において、当該分野におけるそれらの通常の意味を有する。特定の用語は、本発
明の組成物および方法ならびにそれらを如何にして作製および使用するかを記載すること
において、実務者にさらなるガイダンスを提供するために、本明細書の以下または他の箇
所において議論される。用語の任意の使用の範囲または意味は、その用語が使用される特
定の文脈から明らかである。
２．ＴβＲＩＩポリペプチド
天然に存在するＴβＲＩＩタンパク質は、細胞の外側に位置付けられるタンパク質の一
部分（細胞外部分）および細胞の内側に位置付けられるタンパク質の一部分（細胞内部分
）を有する膜貫通タンパク質である。本開示の態様は、ＴβＲＩＩの細胞外ドメイン内の
変異および／または細胞外ドメインのトランケートされた部分を含むバリアントＴβＲＩ
Ｉポリペプチドを包含する。上記のように、ヒトＴβＲＩＩは、細胞外ドメイン（ＥＣＤ
）における選択的スプライシングによって生成される、少なくとも２つのアイソフォーム
－Ａ（長）およびＢ（短）－として天然に生じる（図６および５ならびに配列番号６およ
び５）。配列番号５の残基２３～１５９に対応する配列番号７は、ＴβＲＩＩの短アイソ
フォームのネイティブ全長細胞外ドメインを示す。配列番号６の残基２３～１８４に対応
する配列番号１３は、ＴβＲＩＩの長アイソフォームのネイティブ全長細胞外ドメインを
示す。特記しない限り、ＴβＲＩＩの短および長アイソフォームに基づくバリアントに関
するアミノ酸位置の番号付けは、それぞれ、ネイティブ前駆体配列番号５および配列番号
６中の対応する位置を指す。
ある特定の実施形態では、本開示は、バリアントＴβＲＩＩポリペプチドを提供する。
本開示のＴβＲＩＩポリペプチドは、例えばＧＤＦ１５、ＴＧＦβ１またはＴＧＦβ３で
あるがこれらに限定されないＴＧＦβスーパーファミリーメンバーと結合し得、その機能
を阻害し得る。ＴβＲＩＩポリペプチドには、そのＣ末端が配列番号５のアミノ酸１５３
～１５９のいずれかにおいて存在する、天然に存在するＴβＲＩＩポリペプチドのトラン
ケートされたＥＣＤドメインに対して少なくとも８０％同一なアミノ酸配列、および任意
選択で、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは
１００％同一なアミノ酸配列からなるまたはかかるアミノ酸配列を含むポリペプチドが含
まれ得る。ＴβＲＩＩポリペプチドには、そのＣ末端が配列番号６のアミノ酸１７８～１
８４のいずれかにおいて存在する、天然に存在するＴβＲＩＩポリペプチドのトランケー
トされたＥＣＤドメインに対して少なくとも８０％同一なアミノ酸配列、および任意選択
で、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１０
０％同一なアミノ酸配列からなるまたはかかるアミノ酸配列を含むポリペプチドが含まれ
得る。任意選択で、ＴβＲＩＩポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸１６０～５６７か
らなる配列由来または配列番号６のアミノ酸１８５～５９２からなる配列由来の、５つよ
りも多く連続するアミノ酸、あるいは１０、２０、３０、４０、５０、５２、６０、７０
、８０、９０、１００、１５０もしくは２００よりも多く、またはそれ超連続するアミノ
酸を含まない。プロセシングされていないＴβＲＩＩポリペプチドは、任意のシグナル配
列、ならびにシグナル配列に対してＮ末端の任意の配列を含むかまたは排除するかのいず
れかであり得る。本明細書で詳述するように、成熟（プロセシングされた）ＴβＲＩＩポ
リペプチドのＮ末端は、配列番号５のアミノ酸２３～３５または配列番号６のアミノ酸２
３～６０のいずれかにおいて存在し得る。成熟ＴβＲＩＩポリペプチドの例には、配列番
号５のアミノ酸２３～１５９（配列番号７に示される）、配列番号５のアミノ酸２９～１
５９（配列番号９に示される）、配列番号５のアミノ酸３５～１５９（配列番号１０に示
される）、配列番号５のアミノ酸２３～１５３（配列番号１１に示される）、配列番号５
のアミノ酸２９～１５３（配列番号４８に示される）、配列番号５のアミノ酸３５～１５
３（配列番号４７に示される）、配列番号６のアミノ酸２３～１８４（配列番号１３に示
される）、配列番号６のアミノ酸２９～１８４（配列番号１５に示される）、配列番号６
のアミノ酸６０～１８４（配列番号１０に示される）、配列番号６のアミノ酸２３～１７
８（配列番号１６に示される）、配列番号６のアミノ酸２９～１７８（配列番号４９に示
される）および配列番号６のアミノ酸６０～１７８（配列番号４７に示される）が含まれ
るがこれらに限定されない。同様に、ＴβＲＩＩポリペプチドは、配列番号３０のヌクレ
オチド７３～４６５、配列番号３４のヌクレオチド７３～４４７、配列番号３８のヌクレ
オチド７３～４６５、配列番号３８のヌクレオチド９１～４６５もしくは配列番号３８の
ヌクレオチド１０９～４６５またはそれらのサイレントバリアント、あるいはストリンジ
ェントなハイブリダイゼーション条件（一般に、かかる条件は、当該分野で公知であるが
、例えば、６５℃で一晩の、５０％ｖ／ｖホルムアミド、５×ＳＳＣ、２％ｗ／ｖブロッ
キング剤、０．１％Ｎ－ラウロイルサルコシンおよび０．３％ＳＤＳ中でのハイブリダイ
ゼーション、ならびに例えば、約６５℃で５×ＳＳＣ中での洗浄を含み得る）下でそれら
の相補体にハイブリダイズする核酸によってコードされるポリペプチドを含み得る。Ｔβ
ＲＩＩの長アイソフォームに基づく対応するバリアントが、２５アミノ酸の挿入に対して
Ｃ末端の隣接する位置における保存的Ｖａｌ－Ｉｌｅ置換と共に、この挿入をコードする
ヌクレオチド配列を含むことが、当業者によって理解される。これらのＴβＲＩＩポリペ
プチドは、しかるべく、短および長アイソフォームの両方、それらのバリアント（例えば
、配列番号５のアミノ酸２３～１５９または配列番号６のアミノ酸２３～１８４に対応す
る配列中に、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０または３５以下のアミノ酸
置換を含むバリアントを含む）、それらの断片、ならびに上述のいずれかを含む融合タン
パク質を含む、ＴβＲＩＩポリペプチドの単離された細胞外部分を含み得るが、各場合に
おいて、好ましくは、上述のＴβＲＩＩポリペプチドのいずれかは、ＧＤＦ１５、ＴＧＦ
β１またはＴＧＦβ３のうちの少なくとも１つに対する実質的な親和性を保持する。一般
に、ＴβＲＩＩポリペプチドは、生物学的に適切な温度、ｐＨレベルおよびモル浸透圧濃
度において、水性溶液中で可溶性であるように設計される。
一部の実施形態では、本開示のバリアントＴβＲＩＩポリペプチドは、変更されたリガ
ンド結合プロファイルを付与する、細胞外ドメイン中の１または複数の変異を含む。Ｔβ
ＲＩＩポリペプチドは、天然に存在するＴβＲＩＩポリペプチドの対応する部分と比較し
て、アミノ酸配列中に、１、２、５またはそれ超の変更を含み得る。一部の実施形態では
、この変異は、配列番号５の７０位に対応する位置において、置換、挿入または欠失を生
じる。一部の実施形態では、この変異は、配列番号５の１１０位に対応する位置において
、置換、挿入または欠失を生じる。例には、配列番号５のそれぞれ７０位および１１０位
に対応する位置におけるＮからＤへの置換またはＤからＫへの置換が含まれるがこれらに
限定されない。かかるバリアントＴβＲＩＩポリペプチドの例には、配列番号８、配列番
号１４、配列番号１２および配列番号１７に示される配列が含まれるがこれらに限定され
ない。ＴβＲＩＩポリペプチドは、配列番号２６のヌクレオチド７３～４８３、配列番号
４２のヌクレオチド７３～４６５もしくはそれらのサイレントバリアントまたはストリン
ジェントなハイブリダイゼーション条件下でそれらの相補体にハイブリダイズする核酸に
よってコードされるポリペプチドまたはその部分を含み得る。
一部の実施形態では、本開示のバリアントＴβＲＩＩポリペプチドは、ヒトＴβＲＩＩ
アイソフォームＣ（Ｋｏｎｒａｄら、ＢＭＣ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ８巻：３１８頁、２０
０７年）に天然に生じるような、ヒトＴβＲＩＩ ＥＣＤのＣ末端の近傍に位置するグル
タミン酸残基の対（配列番号５の１５１位および１５２位、または配列番号６の１７６位
および１７７位）の間に、３６アミノ酸の挿入（配列番号１８）をさらに含む。
本開示は、ＴβＲＩＩポリペプチドが、ＴβＲＩＩリガンドを選択的にアンタゴナイズ
するように修飾され得ることをさらに実証している。本明細書に提示されるデータは、Ｔ
βＲＩＩポリペプチドのより短いＮ末端およびＣ末端がトランケートされたバリアントを
含むＦｃ融合タンパク質が、ＧＤＦ１５、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３によって媒介され
る細胞シグナル伝達に対して示差的な阻害効果を示すことを示している。具体的には、配
列番号５のアミノ酸２９または３５において始まり、それぞれ細胞外ドメインの６アミノ
酸または１２アミノ酸のＮ末端トランケーションを保有する、Ｎ末端がトランケートされ
たバリアントは、ＴβＲＩＩの短アイソフォームの全長細胞外ドメインと比較して、ＧＤ
Ｆ１５を最も強力に、ＴＧＦβ３を最も弱く、ＴＧＦβ１を中間の程度まで、阻害するこ
とが見出された。配列番号５のアミノ酸１５３において終わり、細胞外ドメインの６アミ
ノ酸のＣ末端トランケーションを保有する、Ｃ末端がトランケートされたバリアントは、
リガンド結合に対して実質的な影響を有さず、したがって、全長バージョンと相互交換可
能に使用され得る。配列番号５の７０位に対応する位置におけるＮからＤへの置換は、Ｔ
ＧＦβ３を強力に阻害し、ＧＤＦ１５に対して中間の影響を有し、ＴＧＦβ１に対する無
視できる影響を有することが見出された。Ｎ７０残基は、潜在的なグリコシル化部位を示
す。さらに、配列番号５の１１０位に対応する位置におけるＤからＫへの置換を含むＦｃ
融合タンパク質は、ＴβＲＩＩの短アイソフォームの全長細胞外ドメインと比較して、Ｇ
ＤＦ１５を最も強力に、ＴＧＦβ１を最も弱く、ＴＧＦβ３を中間の程度まで、阻害する
ことが見出された。１１０位周囲の領域は、公知のＴβＲＩＩリガンドＴＧＦβ１、ＴＧ
Ｆβ２およびＴＧＦβ３に対する選択性とは関連付けられてこなかった。したがって、予
想外に、例えばＮ７０ＤおよびＤ１１０Ｋ（残基の番号付けは、配列番号５の番号付けと
対応する）であるがこれらに限定されないＥＣＤ中の変異を含み、ならびに／またはアミ
ノ酸２９と３５との間で始まりおよび／もしくはアミノ酸１５３とアミノ酸１５９との間
で終結するＴβＲＩＩポリペプチドは、全て、活性であり、異なるリガンドに対して広く
異なる阻害潜在力を示すと予測される。臨床または実験設定に依存して、これらのトラン
ケートされたバリアント形態のいずれかを使用することが望まれ得る。
ある特定の実施形態では、ＴβＲＩＩポリペプチドは、ＧＤＦ１５と結合し、このＴβ
ＲＩＩポリペプチドは、ＴＧＦβ１またはＴＧＦβ３に対する実質的な結合を示さない。
ある特定の実施形態では、ＴβＲＩＩポリペプチドは、ＴＧＦβ１と結合し、このＴβＲ
ＩＩポリペプチドは、ＧＤＦ１５またはＴＧＦβ３に対する実質的な結合を示さない。あ
る特定の実施形態では、ＴβＲＩＩポリペプチドは、ＴＧＦβ３と結合し、このＴβＲＩ
Ｉポリペプチドは、ＧＤＦ１５またはＴＧＦβ１に対する実質的な結合を示さない。結合
は、溶液中で、またはＢｉａｃｏｒｅ（商標）システムなどの表面プラズモン共鳴システ
ム中で、精製されたタンパク質を使用して評価され得る。
ある特定の実施形態では、ＴβＲＩＩポリペプチドは、ＧＤＦ１５細胞シグナル伝達を
阻害し、このＴβＲＩＩポリペプチドは、ＴＧＦβ１またはＴＧＦβ３に対して、中間の
または限定的な阻害効果を有する。ある特定の実施形態では、ＴβＲＩＩポリペプチドは
、ＴＧＦβ１細胞シグナル伝達を阻害し、このＴβＲＩＩポリペプチドは、ＧＤＦ１５ま
たはＴＧＦβ３に対して、中間のまたは限定的な阻害効果を有する。ある特定の実施形態
では、ＴβＲＩＩポリペプチドは、ＴＧＦβ３細胞シグナル伝達を阻害し、このＴβＲＩ
Ｉポリペプチドは、ＧＤＦ１５またはＴＧＦβ１に対して、中間のまたは限定的な阻害効
果を有する。細胞シグナル伝達に対する阻害効果は、当該分野で公知の方法によってアッ
セイされ得る。
総合すると、ＴβＲＩＩポリペプチドの活性部分は、配列番号５のアミノ酸配列２３～
１５３、２３～１５４、２３～１５５、２３～１５６、２３～１５７または２３～１５８
、ならびに配列番号５のアミノ酸２４～３５のいずれかにおいて始まるこれらの配列のバ
リアントを含み得る。同様に、ＴβＲＩＩポリペプチドの活性部分は、配列番号６のアミ
ノ酸配列２３～１７８、２３～１７９、２３～１８０、２３～１８１、２３～１８２また
は２３～１８３、ならびに配列番号６のアミノ酸２４～６０のいずれかにおいて始まるこ
れらの配列のバリアントを含み得る。例示的なＴβＲＩＩポリペプチドは、配列番号５の
アミノ酸配列２９～１５９、３５～１５９、２３～１５３、２９～１５３および３５～１
５３、または配列番号６のアミノ酸配列２９～１８４、６０～１８４、２３～１７８、２
９～１７８および６０～１７８を含む。これらの範囲内のバリアント、特に、配列番号５
または配列番号６の対応する部分に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％
または９９％の同一性を有するバリアントもまた、企図される。配列番号５のアミノ酸１
６０～５６７または配列番号６のアミノ酸１８５～５９２からなる配列を含まないＴβＲ
ＩＩポリペプチドが、選択され得る。
上記のように、本開示は、天然に存在するＴβＲＩＩポリペプチドに対して、特定した
程度の配列同一性または類似性を共有するＴβＲＩＩポリペプチドを提供する。２つのア
ミノ酸配列のパーセント同一性を決定するために、これらの配列は、最適な比較を目的と
して、アラインされる（例えば、ギャップが、最適なアラインメントのために第１および
第２のアミノ酸または核酸配列の一方または両方において導入され得、非相同配列が、比
較を目的として無視され得る）。次いで、対応するアミノ酸位置におけるアミノ酸残基が
比較される。第１の配列中のある位置が、第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残
基によって占められる場合、これらの分子は、その位置において同一である（本明細書で
使用する場合、アミノ酸「同一性」は、アミノ酸「相同性」と等価である）。２つの配列
間のパーセント同一性は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要があ
るギャップの数および各ギャップの長さを考慮した、これらの配列によって共有される同
一な位置の数の関数である。
２つの配列間の配列の比較ならびにパーセント同一性および類似性の決定は、数学的ア
ルゴリズムを使用して達成され得る（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｌｅｓｋ， Ａ． Ｍ．編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８８年；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ： Ｉｎｆｏｒ
ｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ、Ｓｍｉｔｈ， Ｄ． Ｗ．編
、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９３年；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ
Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ、Ｐａｒｔ １、Ｇｒｉｆｆｉｎ
， Ａ． Ｍ．およびＧｒｉｆｆｉｎ， Ｈ． Ｇ．編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ
ｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ、１９９４年；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ， Ｇ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ、１９８７年；ならびにＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ、
Ｇｒｉｂｓｋｏｖ， Ｍ．およびＤｅｖｅｒｅｕｘ， Ｊ．編、Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ
Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１年）。
一実施形態では、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパ
ッケージ中のＧＡＰプログラム中に組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ
（Ｊ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．（４８巻）：４４４～４５３頁（１９７０年））のアルゴリ
ズムを使用して決定される（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて利用可能）
。具体的な実施形態では、以下のパラメーターが、ＧＡＰプログラムにおいて使用される
：Ｂｌｏｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、ならび
に１６、１４、１２、１０、８、６または４のギャップ重み（ｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ）お
よび１、２、３、４、５または６の長さ重み（ｌｅｎｇｔｈ ｗｅｉｇｈｔ）。さらに別
の実施形態では、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェア
パッケージ中のＧＡＰプログラムを使用して決定される（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ， Ｊ．ら、
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２巻（１号）：３８７頁（１９８４年））（ｈ
ｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて利用可能）。例示的なパラメーターには、
ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスならびに４０、５０、６０、７０または８０の
ギャップ重みおよび１、２、３、４、５または６の長さ重みを使用することが含まれる。
特記しない限り、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、Ｂｌｏｓｕｍ ６２マト
リックス、１０のギャップ重みおよび３の長さ重みを使用するＧＡＰプログラムを使用し
て決定され、かかるアルゴリズムが所望のパーセント同一性を計算できない場合、本明細
書に開示される適切な代替法を選択すべきである。
別の実施形態では、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ＰＡＭ１２０重み残
基テーブル、１２のギャップ長ペナルティおよび４のギャップペナルティを使用して、Ａ
ＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）中に組み込まれたＥ． ＭｙｅｒｓおよびＷ．
Ｍｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ、４巻：１１～１７頁（１９８９年））のアルゴリズムを
使用して決定される。
２つのアミノ酸配列間の最良の全体的アラインメントを決定するための別の実施形態は
、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ． Ａｐｐ． Ｂｉｏｓｃｉ．、６巻：２３７～２４５頁
（１９９０年））のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用
して決定され得る。配列アラインメントでは、クエリー配列および対象配列は、共にアミ
ノ酸配列である。前記網羅的配列アラインメントの結果は、パーセント同一性を単位とし
て示される。一実施形態では、アミノ酸配列同一性は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．
Ａｐｐ． Ｂｉｏｓｃｉ．、６巻：２３７～２４５頁（１９９０年））のアルゴリズムに
基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用して実施される。具体的な実施形態
では、アミノ酸アラインメントのパーセント同一性および類似性を計算するために使用さ
れるパラメーターは、マトリックス＝ＰＡＭ １５０、ｋ－タプル＝２、ミスマッチペナ
ルティ＝１、ジョイニングペナルティ＝２０、ランダム化グループ長＝０、カットオフス
コア＝１、ギャップペナルティ＝５およびギャップサイズペナルティ＝０．０５を含む。
ＴβＲＩＩポリペプチドは、Ｎ末端において種々のリーダー配列のうちのいずれかをさ
らに含み得る。かかる配列は、ペプチドが、真核生物の系において発現され、分泌経路へ
と標的化されることを可能にする。例えば、Ｅｒｎｓｔら、米国特許第５，０８２，７８
３号（１９９２年）を参照のこと。あるいは、ネイティブＴβＲＩＩシグナル配列は、細
胞からの突出（ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ）をもたらすために使用され得る。可能なリーダー配
列には、ネイティブリーダー、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）およびミ
ツバチメリチン（それぞれ、配列番号２２～２４）が含まれる。ＴＰＡリーダー配列を取
り込んでいるＴβＲＩＩ－Ｆｃ融合タンパク質の例には、配列番号２５、２７、２９、３
１、３３、３５、３７、３９、４１および４３が含まれる。シグナルペプチドのプロセシ
ングは、変数のなかでも、選択されたリーダー配列、使用される細胞型および培養条件に
依存して変動し得、したがって、成熟ＴβＲＩＩポリペプチドについての実際のＮ末端開
始部位は、Ｎ末端またはＣ末端方向のいずれかで、１、２、３、４または５アミノ酸シフ
トし得る。ＴβＲＩＩ－Ｆｃ融合タンパク質の例には、ＴβＲＩＩポリペプチド部分に下
線を付した、本明細書に示される配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、
３９、４１、４３、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１および６２
が含まれる（実施例を参照のこと）。ＴβＲＩＩの長アイソフォームに基づく対応するバ
リアントが、２５アミノ酸の挿入に対してＣ末端の隣接する位置における保存的Ｖａｌ－
Ｉｌｅ置換と共に、この挿入を含むことが、当業者によって理解される。
ある特定の実施形態では、本開示は、そのポリペプチドのグリコシル化を変更するよう
な、ＴβＲＩＩポリペプチドの特異的変異を企図する。かかる変異は、Ｏ結合型またはＮ
結合型グリコシル化部位などの１または複数のグリコシル化部位を導入または排除するよ
うに、選択され得る。アスパラギン結合型グリコシル化認識部位は、一般に、適切な細胞
グリコシル化酵素によって特異的に認識されるトリペプチド配列、アスパラギン－Ｘ－ス
レオニン（またはアスパラギン－Ｘ－セリン）（式中、「Ｘ」は任意のアミノ酸である）
を含む。この変更は、野生型ＴβＲＩＩポリペプチドの配列に対する、１もしくは複数の
セリンもしくはスレオニン残基の付加または１もしくは複数のセリンもしくはスレオニン
残基による置換によっても、行われ得る（Ｏ結合型グリコシル化部位について）。グリコ
シル化認識部位の第１もしくは第３のアミノ酸位置の一方もしくは両方における種々のア
ミノ酸の置換もしくは欠失（および／または第２の位置におけるアミノ酸欠失）は、修飾
されたトリペプチド配列において非グリコシル化を生じる。ＴβＲＩＩポリペプチド上の
炭水化物部分の数を増加させる別の手段は、ＴβＲＩＩポリペプチドへのグリコシドの化
学的または酵素的カップリングによるものである。使用されるカップリング様式に依存し
て、糖（複数可）は、（ａ）アルギニンおよびヒスチジン；（ｂ）遊離カルボキシル基；
（ｃ）システインのものなどの遊離スルフヒドリル基；（ｄ）セリン、スレオニンもしく
はヒドロキシプロリンのものなどの遊離ヒドロキシル基；（ｅ）フェニルアラニン、チロ
シンもしくはトリプトファンのものなどの芳香族残基；または（ｆ）グルタミンのアミド
基と結合し得る。これらの方法は、参照により本明細書に組み込まれる、１９８７年９月
１１日に公開されたＷＯ８７／０５３３０、ならびにＡｐｌｉｎおよびＷｒｉｓｔｏｎ（
１９８１年）ＣＲＣ Ｃｒｉｔ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２５９～３０６頁中に
記載されている。ＴβＲＩＩポリペプチド上に存在する１または複数の炭水化物部分の除
去は、化学的におよび／または酵素的に達成され得る。化学的脱グリコシル化には、例え
ば、化合物トリフルオロメタンスルホン酸または等価な化合物へのＴβＲＩＩポリペプチ
ドの曝露が関与し得る。この処理は、アミノ酸配列をインタクトなままにしつつ、連結糖
（Ｎ－アセチルグルコサミンまたはＮ－アセチルガラクトサミン）を除いた、ほとんどま
たは全ての糖の切断を生じる。化学的脱グリコシル化は、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎら（１９
８７年）Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５９巻：５２頁およびＥｄ
ｇｅら（１９８１年）Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． １１８巻：１３１頁によってさら
に記載されている。ＴβＲＩＩポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Ｔｈｏｔ
ａｋｕｒａら（１９８７年）Ｍｅｔｈ． Ｅｎｚｙｍｏｌ． １３８巻：３５０頁に記載
されるように、種々のエンドグリコシダーゼおよびエキソグリコシダーゼの使用によって
達成され得る。哺乳動物、酵母、昆虫および植物の細胞は全て、ペプチドのアミノ酸配列
によって影響され得る異なるグリコシル化パターンを導入し得るので、ＴβＲＩＩポリペ
プチドの配列は、必要に応じて、使用される発現系の型に依存して調整され得る。一般に
、ヒトでの使用のためのＴβＲＩＩポリペプチドは、ＨＥＫ２９３またはＣＨＯ細胞株な
どの、適切なグリコシル化を提供する哺乳動物細胞株において発現されるが、他の哺乳動
物発現細胞株、操作されたグリコシル化酵素を有する酵母細胞株、および昆虫細胞も、同
様に有用であると予測される。
本開示は、変異体、特に、ＴβＲＩＩポリペプチドのコンビナトリアル変異体のセット
、ならびにトランケーション変異体を生成する方法をさらに企図する；コンビナトリアル
変異体のプールは、機能的バリアント配列を同定するために特に有用である。かかるコン
ビナトリアルライブラリーをスクリーニングする目的は、例えば、アゴニストもしくはア
ンタゴニストのいずれかとして作用し得る、またはあるいは、新規活性を全て一緒に有す
るＴβＲＩＩポリペプチドバリアントを生成することであり得る。種々のスクリーニング
アッセイは、以下に提供され、かかるアッセイは、バリアントを評価するために使用され
得る。例えば、ＴβＲＩＩポリペプチドバリアントは、ＴβＲＩＩリガンドと結合する能
力、ＴβＲＩＩポリペプチドへのＴβＲＩＩリガンドの結合を防止する能力、またはＴβ
ＲＩＩリガンドによって引き起こされるシグナル伝達を妨害する能力について、スクリー
ニングされ得る。ＴβＲＩＩポリペプチドまたはそのバリアントの活性は、細胞ベースの
アッセイまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイ、特に、実施例に開示されるアッセイのいずれか
においても、試験され得る。
天然に存在するＴβＲＩＩポリペプチドの細胞外ドメインを含むＴβＲＩＩポリペプチ
ドと比較して、選択的なまたは一般に増加した潜在力を有する、コンビナトリアルに誘導
されたバリアントが、生成され得る。同様に、変異誘発は、対応する野生型ＴβＲＩＩポ
リペプチドとは劇的に異なる血清半減期を有するバリアントを生じ得る。例えば、変更さ
れたタンパク質は、ネイティブＴβＲＩＩポリペプチドの破壊、またはネイティブＴβＲ
ＩＩポリペプチドの他の方法による排除もしくは不活化を生じる、タンパク質分解性の分
解または他のプロセスに対して、より安定にされ得るかまたはより不安定にされ得るかの
いずれかである。かかるバリアント、およびそれらをコードする遺伝子は、ＴβＲＩＩポ
リペプチドの半減期をモジュレートすることによって、ＴβＲＩＩポリペプチドレベルを
変更するために利用され得る。例えば、短い半減期は、より一過的な生物学的効果を生じ
得、患者内の組換えＴβＲＩＩポリペプチドレベルのより厳密な制御を可能にし得る。Ｆ
ｃ融合タンパク質では、変異が、タンパク質の半減期を変更するために、リンカー（存在
する場合）および／またはＦｃ部分中に作成され得る。
コンビナトリアルライブラリーは、潜在的ＴβＲＩＩポリペプチド配列の少なくとも一
部分を各々が含むポリペプチドのライブラリーをコードする遺伝子の縮重ライブラリーに
よって産生され得る。例えば、合成オリゴヌクレオチドの混合物は、潜在的ＴβＲＩＩポ
リペプチドのヌクレオチド配列の縮重セットが、個々のポリペプチドとして、またはある
いは、（例えば、ファージディスプレイのために）より大きい融合タンパク質のセットと
して発現可能であるように、遺伝子配列へと酵素的にライゲーションされ得る。
潜在的ＴβＲＩＩポリペプチドバリアントのライブラリーが縮重オリゴヌクレオチド配
列から生成され得る多くの方法が存在する。縮重遺伝子配列の化学的合成は、自動ＤＮＡ
合成機において実施され得、次いで、合成遺伝子が、発現のために適切なベクター中にラ
イゲーションされ得る。縮重オリゴヌクレオチドの合成は、当該分野で周知である（例え
ば、Ｎａｒａｎｇ， ＳＡ（１９８３年）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ３９巻：３頁；Ｉｔ
ａｋｕｒａら、（１９８１年）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ， Ｐｒｏｃ． ３ｒｄ
Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ Ｓｙｍｐｏｓ． Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、ＡＧ Ｗａｌ
ｔｏｎ編、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ： Ｅｌｓｅｖｉｅｒ ２７３～２８９頁；Ｉｔａｋｕｒ
ａら、（１９８４年）Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ５３巻：３２３頁；Ｉ
ｔａｋｕｒａら、（１９８４年）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８巻：１０５６頁；Ｉｋｅら、（
１９８３年）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ． １１巻：４７７頁を参照のこと）。
かかる技術は、他のタンパク質の指向性の進化において使用されてきた（例えば、Ｓｃｏ
ｔｔら、（１９９０年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９巻：３８６～３９０頁；Ｒｏｂｅｒｔｓ
ら、（１９９２年）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８９巻：２４２９～２４３３頁；Ｄｅｖｌｉｎら
、（１９９０年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９巻：４０４～４０６頁；Ｃｗｉｒｌａら、（１
９９０年）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８７巻：６３７８～６３８２頁；ならびに米国特許第５，
２２３，４０９号、同第５，１９８，３４６号および同第５，０９６，８１５号を参照の
こと）。
あるいは、他の形態の変異誘発が、コンビナトリアルライブラリーを生成するために利
用され得る。例えば、ＴβＲＩＩポリペプチドバリアントは、例えば、アラニンスキャニ
ング変異誘発などを使用するスクリーニングによって（Ｒｕｆら、（１９９４年）Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３巻：１５６５～１５７２頁；Ｗａｎｇら、（１９９４年）Ｊ．
Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６９巻：３０９５～３０９９頁；Ｂａｌｉｎｔら、（１９
９３年）Ｇｅｎｅ １３７巻：１０９～１１８頁；Ｇｒｏｄｂｅｒｇら、（１９９３年）
Ｅｕｒ． Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２１８巻：５９７～６０１頁；Ｎａｇａｓｈｉｍａ
ら、（１９９３年）Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６８巻：２８８８～２８９２頁；
Ｌｏｗｍａｎら、（１９９１年）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０巻：１０８３２～１０
８３８頁；およびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍら、（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４巻：
１０８１～１０８５頁）、リンカースキャニング変異誘発によって（Ｇｕｓｔｉｎら、（
１９９３年）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １９３巻：６５３～６６０頁；Ｂｒｏｗｎら、（１９９
２年）Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． １２巻：２６４４～２６５２頁；ＭｃＫｎｉｇ
ｈｔら、（１９８２年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２巻：３１６頁）；飽和変異誘発によって
（Ｍｅｙｅｒｓら、（１９８６年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２巻：６１３頁）；ＰＣＲ変異
誘発によって（Ｌｅｕｎｇら、（１９８９年）Ｍｅｔｈｏｄ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏ
ｌ １巻：１１～１９頁）；または化学的変異誘発などを含むランダム変異誘発によって
（Ｍｉｌｌｅｒら、（１９９２年）Ａ Ｓｈｏｒｔ Ｃｏｕｒｓｅ ｉｎ Ｂａｃｔｅｒ
ｉａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ、ＮＹ；およびＧｒｅｅｎｅｒら、（１９９４年）Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｉｎ Ｍ
ｏｌ Ｂｉｏｌ ７巻：３２～３４頁）、ライブラリーから生成および単離され得る。特
にコンビナトリアル設定におけるリンカースキャニング変異誘発は、ＴβＲＩＩポリペプ
チドのトランケートされた（生物活性）形態を同定するための代替的な方法である。
広い範囲の技術が、点変異およびトランケーションによって作製されたコンビナトリア
ルライブラリーの遺伝子産物をスクリーニングするため、およびそれについて言えば、特
定の特性を有する遺伝子産物についてｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために
、当該分野で公知である。かかる技術は、ＴβＲＩＩポリペプチドのコンビナトリアル変
異誘発によって生成された遺伝子ライブラリーの迅速なスクリーニングに、一般に順応性
がある。大きい遺伝子ライブラリーをスクリーニングするために最も広く使用される技術
は、典型的には、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクター中にクローニングするス
テップ、ベクターの得られたライブラリーで適切な細胞を形質転換するステップ、および
所望の活性の検出が、その産物が検出された遺伝子をコードするベクターの比較的容易な
単離を促進する条件下で、コンビナトリアル遺伝子を発現させるステップを含む。好まし
いアッセイには、ＴβＲＩＩリガンド結合アッセイおよびリガンド媒介性細胞シグナル伝
達アッセイが含まれる。
ある特定の実施形態では、本開示のＴβＲＩＩポリペプチドは、ＴβＲＩＩポリペプチ
ド中に天然に存在する任意の修飾に加えて、翻訳後修飾をさらに含み得る。かかる修飾に
は、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、ペグ化（ポリエチ
レングリコール）およびアシル化が含まれるがこれらに限定されない。結果として、修飾
されたＴβＲＩＩポリペプチドは、非アミノ酸要素、例えば、ポリエチレングリコール、
脂質、モノサッカライドまたはポリサッカライドおよびホスフェートを含み得る。ＴβＲ
ＩＩポリペプチドの機能性に対するかかる非アミノ酸要素の影響は、他のＴβＲＩＩポリ
ペプチドバリアントについて本明細書に記載したように試験され得る。ＴβＲＩＩポリペ
プチドが、ＴβＲＩＩポリペプチドの新生形態を切断することによって細胞中で産生され
る場合、翻訳後プロセシングは、タンパク質の正確な折り畳みおよび／または機能にとっ
ても重要であり得る。異なる細胞（例えば、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、２９３、ＷＩ
３８、ＮＩＨ－３Ｔ３またはＨＥＫ－２９３）は、かかる翻訳後活性のための特異的な細
胞マシナリーおよび特徴的機構を有し、ＴβＲＩＩポリペプチドの正確な修飾およびプロ
セシングを確実にするために選択され得る。
ある特定の態様では、ＴβＲＩＩポリペプチドの機能的バリアントまたは修飾された形
態には、ＴβＲＩＩポリペプチドの少なくとも一部分と１または複数の融合ドメインとを
有する融合タンパク質が含まれる。かかる融合ドメインの周知の例には、ポリヒスチジン
、Ｇｌｕ－Ｇｌｕ、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、プ
ロテインＡ、プロテインＧ、免疫グロブリン重鎖定常領域（Ｆｃ）、マルトース結合タン
パク質（ＭＢＰ）またはヒト血清アルブミンが含まれるがこれらに限定されない。融合ド
メインは、所望の特性を付与するように選択され得る。例えば、一部の融合ドメインは、
アフィニティークロマトグラフィーによる融合タンパク質の単離に特に有用である。アフ
ィニティー精製を目的として、アフィニティークロマトグラフィーのための適切なマトリ
ックス、例えば、グルタチオン、アミラーゼ、およびニッケルまたはコバルトコンジュゲ
ート樹脂が使用される。かかるマトリックスの多くは、（ＨＩＳ６）融合パートナーと共
に有用な、Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＧＳＴ精製システムおよびＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ（商標
）システム（Ｑｉａｇｅｎ）などの「キット」形態で入手可能である。別の例として、融
合ドメインは、ＴβＲＩＩポリペプチドの検出を促進するように選択され得る。かかる検
出ドメインの例には、種々の蛍光タンパク質（例えば、ＧＦＰ）、ならびにそれに対する
特異的抗体が入手可能である通常は短いペプチド配列である「エピトープタグ」が含まれ
る。それに対する特異的モノクローナル抗体が容易に入手可能である周知のエピトープタ
グには、ＦＬＡＧ、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）およびｃ－ｍｙｃタグ
が含まれる。一部の場合では、これらの融合ドメインは、適切なプロテアーゼが融合タン
パク質を部分的に消化するのを可能にし、それによって、そこから組換えタンパク質を遊
離させる、第Ｘａ因子またはトロンビンなどについてのプロテアーゼ切断部位を有する。
次いで、遊離されたタンパク質は、引き続くクロマトグラフィー分離によって、融合ドメ
インから単離され得る。ある特定の好ましい実施形態では、ＴβＲＩＩポリペプチドは、
ＴβＲＩＩポリペプチドをｉｎ ｖｉｖｏで安定化するドメイン（「安定剤」ドメイン）
と融合される。「安定化する」とは、減少した破壊、腎臓による減少したクリアランス、
または他の薬物動態学的効果に起因するか否かには関わらず、血清半減期を増加させるも
のを意味する。免疫グロブリンのＦｃ部分との融合は、広い範囲のタンパク質に対して所
望の薬物動態学的特性を付与することが公知である。同様に、ヒト血清アルブミンへの融
合は、所望の特性を付与できる。選択され得る他の型の融合ドメインには、マルチマー化
（例えば、ダイマー化、テトラマー化）ドメインおよび機能的ドメインが含まれる。
具体的な例として、本開示は、３つのＦｃドメイン配列（例えば、配列番号１９、２０
および２１）のうちの１つに融合されたＴβＲＩＩポリペプチドのバリアントを含む融合
タンパク質を提供する。任意選択で、このＦｃドメインは、Ａｓｐ－２６５、Ｌｙｓ－３
２２およびＡｓｎ－４３４（対応する全長ＩｇＧに従って番号付けした）などの残基にお
いて、１または複数の変異を有する。特定の場合には、これらの変異のうち１または複数
（例えば、Ａｓｐ－２６５変異）を有する変異体Ｆｃドメインは、野生型Ｆｃドメインと
比較して、Ｆｃγ受容体と結合する能力を低減させた。他の場合には、これらの変異のう
ち１または複数（例えば、Ａｓｎ－４３４変異）を有する変異体Ｆｃドメインは、野生型
Ｆｃドメインと比較して、ＭＨＣクラスＩ関連Ｆｃ受容体（ＦｃＲＮ）と結合する能力を
増加させた。
融合タンパク質の異なるエレメントは、所望の機能性と一致する任意の様式でアレンジ
され得ることが理解される。例えば、ＴβＲＩＩポリペプチドは、異種ドメインに対して
Ｃ末端に配置され得、またはあるいは、異種ドメインが、ＴβＲＩＩポリペプチドに対し
てＣ末端に配置され得る。ＴβＲＩＩポリペプチドドメインおよび異種ドメインは、融合
タンパク質中で隣接している必要はなく、さらなるドメインまたはアミノ酸配列が、いず
れかのドメインに対してＣ末端もしくはＮ末端に、またはドメイン間に、含まれ得る。
本明細書で使用する場合、用語「免疫グロブリンＦｃドメイン」または単に「Ｆｃ」は
、免疫グロブリン鎖の定常領域、好ましくは免疫グロブリン重鎖定常領域、またはその一
部分の、カルボキシル末端部分を意味すると理解される。例えば、免疫グロブリンＦｃ領
域は、１）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン、２）ＣＨ１ドメイン
およびＣＨ２ドメイン、３）ＣＨ１ドメインおよびＣＨ３ドメイン、４）ＣＨ２ドメイン
およびＣＨ３ドメイン、または５）２もしくはそれ超のドメインおよび免疫グロブリンヒ
ンジ領域の組合せを含み得る。好ましい実施形態では、この免疫グロブリンＦｃ領域は、
少なくとも免疫グロブリンヒンジ領域ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含み、好ま
しくは、ＣＨ１ドメインを欠く。
一実施形態では、重鎖定常領域が由来する免疫グロブリンのクラスは、ＩｇＧ（Ｉｇγ
）（γサブクラス１、２、３または４）である。他のクラスの免疫グロブリン、ＩｇＡ（
Ｉｇα）、ＩｇＤ（Ｉｇδ）、ＩｇＥ（Ｉｇε）およびＩｇＭ（Ｉｇμ）が、使用され得
る。適切な免疫グロブリン重鎖定常領域の選択は、米国特許第５，５４１，０８７号およ
び同第５，７２６，０４４号において、詳細に議論されている。特定の結果を達成するた
めの、特定の免疫グロブリンクラスおよびサブクラスからの特定の免疫グロブリン重鎖定
常領域配列の選択は、当該分野の技術水準の範囲内とみなされる。免疫グロブリンＦｃ領
域をコードするＤＮＡ構築物の部分は、好ましくは、ヒンジドメインの少なくとも一部分
、および好ましくは、ＦｃガンマのＣＨ３ドメインまたはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥもしく
はＩｇＭのいずれかにおける相同ドメインの少なくとも一部分を含む。
さらに、免疫グロブリン重鎖定常領域内のアミノ酸の置換または欠失は、本明細書に開
示される方法および組成物の実施において有用であり得ることが企図される。一例は、Ｆ
ｃ受容体に対する低減された親和性を有するＦｃバリアントを創出するために、上のＣＨ
２領域中にアミノ酸置換を導入することである（Ｃｏｌｅら（１９９７年）Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ． １５９巻：３６１３頁）。
ある特定の実施形態では、本開示は、他のタンパク質および／もしくは他のＴβＲＩＩ
ポリペプチド種から単離された、または他のタンパク質および／もしくは他のＴβＲＩＩ
ポリペプチド種を他の方法で実質的に含まない（例えば、少なくとも８０％、９０％、９
５％、９６％、９７％、９８％または９９％含まない）、ＴβＲＩＩポリペプチドの単離
および／または精製された形態を利用可能にする。ＴβＲＩＩポリペプチドは、一般に、
組換え核酸からの発現によって産生される。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＴβＲＩＩタンパク質の細胞外部分のコード配列
を含む、可溶性ＴβＲＩＩポリペプチドをコードする核酸を含む。さらなる実施形態では
、本開示は、かかる核酸を含む宿主細胞にも関する。この宿主細胞は、任意の原核または
真核細胞であり得る。例えば、本開示のポリペプチドは、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌細胞、
昆虫細胞（例えば、バキュロウイルス発現系を使用する）、酵母または哺乳動物細胞にお
いて、発現され得る。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知である。したがって、本開示
の一部の実施形態は、ＴβＲＩＩポリペプチドを産生する方法にさらに関する。
３．ＴβＲＩＩポリペプチドをコードする核酸
ある特定の態様では、本開示は、本明細書に開示される断片、機能的バリアントおよび
融合タンパク質を含むＴβＲＩＩポリペプチドのいずれかをコードする単離されたおよび
／または組換え核酸を提供する。配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、
４０、４２および４４は、ＩｇＧ２ ＦｃドメインまたはＮ末端がトランケートされたＩ
ｇＧ１ Ｆｃドメインに融合されたＴβＲＩＩ細胞外ドメインのバリアントをコードする
。対象核酸は、一本鎖または二本鎖であり得る。かかる核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子
であり得る。これらの核酸は、例えば、ＴβＲＩＩポリペプチドを作製するための方法に
おいて、または直接的治療剤として（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉまたは遺伝子治療
アプローチにおいて）、使用され得る。
ある特定の態様では、ＴβＲＩＩポリペプチドをコードする対象核酸は、配列番号２６
、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２および４４のバリアントである核酸
を含むことが、さらに理解される。バリアントヌクレオチド配列には、１または複数のヌ
クレオチド置換、付加または欠失によって異なる配列、例えば、対立遺伝子バリアントが
含まれる。
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３６、
３８、４０、４２および４４に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６
％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である、単離されたまたは組換え核酸配
列を提供する。当業者は、配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、
４２および４４に対して相補的な核酸配列、ならびに配列番号２６、２８、３０、３２、
３４、３６、３８、４０、４２および４４のバリアントもまた、本開示の範囲内であるこ
とを理解する。さらなる実施形態では、本開示の核酸配列は、単離され得る、組換えであ
り得るおよび／もしくは異種ヌクレオチド配列と融合され得る、またはＤＮＡライブラリ
ー中にあり得る。
他の実施形態では、本開示の核酸は、配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３６、
３８、４０、４２および４４に示されるヌクレオチド配列、配列番号２６、２８、３０、
３２、３４、３６、３８、４０、４２および４４の相補体配列、またはそれらの断片に対
して、高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列もまた含
む。上で議論したように、当業者は、ＤＮＡハイブリダイゼーションを促進する適切なス
トリンジェンシーの条件が変動され得ることを、容易に理解する。例えば、約４５℃での
６．０×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）におけるハイブリダイゼーショ
ンと、その後の、５０℃での２．０×ＳＳＣの洗浄とを、実施することができる。例えば
、洗浄ステップにおける塩濃度は、５０℃における約２．０×ＳＳＣの低いストリンジェ
ンシーから、５０℃における約０．２×ＳＳＣの高いストリンジェンシーまでで、選択さ
れ得る。さらに、洗浄ステップにおける温度は、室温、約２２℃での低いストリンジェン
シーの条件から、約６５℃での高いストリンジェンシーの条件まで増加され得る。温度お
よび塩の両方が変動され得、または温度もしくは塩濃度は、他の変数が変化しても一定で
維持され得る。一部の実施形態では、本開示は、室温での６×ＳＳＣとその後の室温での
２×ＳＳＣにおける洗浄の低いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズする核酸を
提供する。
遺伝子コードにおける縮重に起因して配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３６、
３８、４０、４２および４４に示される核酸とは異なる単離された核酸もまた、本開示の
範囲内である。例えば、いくつかのアミノ酸は、１よりも多いトリプレットによって指定
される。同じアミノ酸または同義語（例えば、ＣＡＵおよびＣＡＣは、ヒスチジンについ
て同義語である）を特定するコドンは、タンパク質のアミノ酸配列に影響を与えない「サ
イレント」変異を生じ得る。しかし、対象タンパク質のアミノ酸配列における変化をもた
らすＤＮＡ配列多型が、哺乳動物細胞の間に存在すると予測される。当業者は、特定のタ
ンパク質をコードする核酸の１または複数のヌクレオチドにおけるこれらのバリエーショ
ン（ヌクレオチドの最大約３～５％）が、天然の対立遺伝子バリエーションに起因して、
所与の種の個体の間に存在し得ることを理解する。あらゆるかかるヌクレオチドバリエー
ションおよび得られたアミノ酸多型は、本開示の範囲内である。
ＴβＲＩＩの長アイソフォームに基づく対応するバリアントが、２５アミノ酸の挿入に
対してＣ末端の隣接する位置における保存的Ｖａｌ－Ｉｌｅ置換と共に、この挿入をコー
ドするヌクレオチド配列を含むことが、当業者によって理解される。ＴβＲＩＩの長（Ａ
）または短（Ｂ）アイソフォームのいずれかに基づく対応するバリアントが、天然に存在
するＴβＲＩＩアイソフォームＣについて記載されたのと同じ位置で、３６アミノ酸の挿
入（配列番号１８）をコードする１０８ヌクレオチドの挿入を含むバリアントヌクレオチ
ド配列を含むこともまた、理解される（例証を参照のこと）。
ある特定の実施形態では、本開示の組換え核酸は、発現構築物において、１または複数
の調節ヌクレオチド配列に作動可能に連結され得る。調節ヌクレオチド配列は、一般に、
発現のために使用される宿主細胞に適切である。多数の型の適切な発現ベクターおよび適
切な調節配列が、種々の宿主細胞について、当該分野で公知である。典型的には、前記１
または複数の調節ヌクレオチド配列には、プロモーター配列、リーダーまたはシグナル配
列、リボソーム結合部位、転写開始および終結配列、翻訳開始および終結配列、ならびに
エンハンサーまたはアクチベーター配列が含まれ得るがこれらに限定されない。当該分野
で公知の構成的または誘導性プロモーターが、本開示によって企図される。これらのプロ
モーターは、天然に存在するプロモーター、または１よりも多いプロモーターのエレメン
トを組み合わせるハイブリッドプロモーターのいずれかであり得る。発現構築物は、プラ
スミドのように、エピソーム上で細胞中に存在し得、または発現構築物は、染色体中に挿
入され得る。好ましい実施形態では、この発現ベクターは、形質転換された宿主細胞の選
択を可能にする選択可能なマーカー遺伝子を含む。選択可能なマーカー遺伝子は、当該分
野で周知であり、使用される宿主細胞によって変動する。
本明細書に開示されるある特定の態様では、この対象核酸は、ＴβＲＩＩポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つの調節配列に作動可能に連結した
発現ベクター中で提供される。調節配列は、当該分野で認識されており、ＴβＲＩＩポリ
ペプチドの発現を指向するために選択される。したがって、用語調節配列には、プロモー
ター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメントが含まれる。例示的な調節配列は、Ｇ
ｏｅｄｄｅｌ； Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ： Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅ
ｇｏ、ＣＡ（１９９０年）に記載されている。例えば、それに作動可能に連結した場合に
ＤＮＡ配列の発現を制御する広範な種々の発現制御配列のいずれかが、ＴβＲＩＩポリペ
プチドをコードするＤＮＡ配列を発現させるために、これらのベクターにおいて使用され
得る。かかる有用な発現制御配列には、例えば、ＳＶ４０の初期および後期プロモーター
、ｔｅｔプロモーター、アデノウイルスまたはサイトメガロウイルス最初期プロモーター
、ＲＳＶプロモーター、ｌａｃ系、ｔｒｐ系、ＴＡＣまたはＴＲＣ系、その発現がＴ７
ＲＮＡポリメラーゼによって指向されるＴ７プロモーター、ファージラムダの主要オペレ
ーターおよびプロモーター領域、ｆｄコートタンパク質の制御領域、３－ホスホグリセリ
ン酸キナーゼまたは他の解糖酵素のプロモーター、酸ホスファターゼのプロモーター、例
えば、Ｐｈｏ５、酵母α接合因子のプロモーター、バキュロウイルス系の多角体プロモー
ター、および原核もしくは真核細胞またはそれらのウイルスの遺伝子の発現を制御するこ
とが公知の他の配列、ならびにそれらの種々の組合せが含まれる。発現ベクターの設計は
、形質転換される宿主細胞の選択、および／または発現されることが望まれるタンパク質
の型などの因子に依存し得ることを、理解すべきである。さらに、ベクターのコピー数、
そのコピー数を制御する能力、およびこのベクターによってコードされる任意の他のタン
パク質、例えば抗生物質マーカーの発現もまた、考慮すべきである。
本開示に含まれる組換え核酸は、クローニングされた遺伝子またはその一部分を、原核
細胞、真核細胞（酵母、トリ、昆虫または哺乳動物）のいずれか、またはそれら両方にお
ける発現に適切なベクター中にライゲーションさせることによって、産生され得る。組換
えＴβＲＩＩポリペプチドの産生のための発現ビヒクルには、プラスミドおよび他のベク
ターが含まれる。例えば、適切なベクターには、以下の型のプラスミドが含まれる：Ｅ．
ｃｏｌｉなどの原核細胞における発現のための、ｐＢＲ３２２由来プラスミド、ｐＥＭＢ
Ｌ由来プラスミド、ｐＥＸ由来プラスミド、ｐＢＴａｃ由来プラスミドおよびｐＵＣ由来
プラスミド。
一部の哺乳動物発現ベクターは、細菌におけるベクターの繁殖を促進するための原核生
物配列、および真核細胞において発現される１または複数の真核生物転写単位の両方を含
む。ｐｃＤＮＡＩ／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡＩ／ｎｅｏ、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＳＶ２ｇｐｔ、
ｐＳＶ２ｎｅｏ、ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ、ｐＴｋ２、ｐＲＳＶｎｅｏ、ｐＭＳＧ、ｐＳＶＴ
７、ｐｋｏ－ｎｅｏおよびｐＨｙｇ由来ベクターは、真核細胞のトランスフェクションに
適切な哺乳動物発現ベクターの例である。これらのベクターのうちの一部は、原核細胞お
よび真核細胞の両方における複製および薬物耐性選択を促進するために、ｐＢＲ３２２な
どの細菌プラスミド由来の配列で修飾される。あるいは、ウシパピローマウイルス（ＢＰ
Ｖ－１）またはエプスタイン・バーウイルス（ｐＨＥＢｏ、ｐＲＥＰ由来およびｐ２０５
）などのウイルスの誘導体が、真核細胞中でのタンパク質の一過的な発現のために使用さ
れ得る。他のウイルス（レトロウイルスを含む）発現系の例は、遺伝子治療送達系の説明
において以下に見出され得る。プラスミドの調製および宿主生物の形質転換において使用
される種々の方法は、当該分野で周知である。原核細胞および真核細胞の両方のための他
の適切な発現系、ならびに一般的な組換え手順については、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏ
ｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｆｒ
ｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ編（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、２００１年）を参照のこと。一部の例では、バキュロウイ
ルス発現系の使用によって組換えポリペプチドを発現させることが望ましい場合がある。
かかるバキュロウイルス発現系の例には、ｐＶＬ由来ベクター（例えば、ｐＶＬ１３９２
、ｐＶＬ１３９３およびｐＶＬ９４１）、ｐＡｃＵＷ由来ベクター（例えば、ｐＡｃＵＷ
１）およびｐＢｌｕｅＢａｃ由来ベクター（例えば、β－ｇａｌ含有ｐＢｌｕｅＢａｃ
ＩＩＩ）が含まれる。
ある特定の実施形態では、Ｐｃｍｖ－Ｓｃｒｉｐｔベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、
Ｌａ Ｊｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．）、ｐｃＤＮＡ４ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃ
ａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．）およびｐＣＩ－ｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａ
ｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃ．）などのベクターが、ＣＨＯ細胞における対象ＴβＲＩＩポリペ
プチドの産生のために設計される。好ましい実施形態では、ベクターは、ＨＥＫ－２９３
細胞における対象ＴβＲＩＩポリペプチドの産生のために設計される。明らかなように、
これらの対象遺伝子構築物は、例えば、融合タンパク質またはバリアントタンパク質を含
むタンパク質を、精製のために産生するために、培養物中で繁殖された細胞において、対
象ＴβＲＩＩポリペプチドの発現を引き起こすために使用され得る。
本開示は、対象ＴβＲＩＩポリペプチドのうちの１または複数のコード配列（例えば、
配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２または４４）を含む組
換え遺伝子でトランスフェクトされた宿主細胞にも関する。この宿主細胞は、任意の原核
または真核細胞であり得る。例えば、本明細書に開示されるＴβＲＩＩポリペプチドは、
Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌細胞、昆虫細胞（例えば、バキュロウイルス発現系を使用する）
、酵母または哺乳動物細胞において、発現され得る。他の適切な宿主細胞は、当業者に公
知である。
したがって、本開示は、対象ＴβＲＩＩポリペプチドを産生する方法にさらに関する。
例えば、ＴβＲＩＩポリペプチドをコードする発現ベクターでトランスフェクトされた宿
主細胞は、ＴβＲＩＩポリペプチドの発現を生じさせるための適切な条件下で培養され得
る。このＴβＲＩＩポリペプチドは、ＴβＲＩＩポリペプチドを含む細胞および培地の混
合物から分泌および単離され得る。あるいは、このＴβＲＩＩポリペプチドは、細胞質に
または膜画分中に保持され得、細胞が回収され得、溶解され得、タンパク質が単離され得
る。細胞培養物は、宿主細胞および培地を含む。細胞培養に適切な培地は、当該分野で周
知である。これらの対象ＴβＲＩＩポリペプチドは、イオン交換クロマトグラフィー、ゲ
ル濾過クロマトグラフィー、限外濾過、電気泳動、ＴβＲＩＩポリペプチドの特定のエピ
トープに対して特異的な抗体を用いたイムノアフィニティー精製、およびＴβＲＩＩポリ
ペプチドに融合されたドメインと結合する薬剤を用いたアフィニティー精製（例えば、プ
ロテインＡカラムが、ＴβＲＩＩ－Ｆｃ融合物を精製するために使用され得る）を含む、
タンパク質を精製するための当該分野で公知の技術を使用して、細胞培養培地、宿主細胞
またはそれら両方から単離され得る。好ましい実施形態では、このＴβＲＩＩポリペプチ
ドは、その精製を促進するドメインを含む融合タンパク質である。一例として、精製は、
例えば、任意の順序で、以下のうちの３つまたはそれ超を含む、一連のカラムクロマトグ
ラフィーステップによって達成され得る：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロ
ースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマ
トグラフィーおよびカチオン交換クロマトグラフィー。精製は、ウイルス濾過および緩衝
液交換を用いて完了され得る。
別の実施形態では、組換えＴβＲＩＩポリペプチドの所望の部分のＮ末端においてポリ
（Ｈｉｓ）／エンテロキナーゼ切断部位配列などの精製リーダー配列をコードする融合遺
伝子は、Ｎｉ２＋金属樹脂を使用するアフィニティークロマトグラフィーによる発現され
た融合タンパク質の精製を可能にし得る。次いで、この精製リーダー配列は、精製された
ＴβＲＩＩポリペプチドを提供するために、エンテロキナーゼによる処理によって引き続
いて除去され得る（例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉら、（１９８７年）Ｊ． Ｃｈｒｏｍａｔｏ
ｇｒａｐｈｙ ４１１巻：１７７頁；およびＪａｎｋｎｅｃｈｔら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ
８８巻：８９７２頁を参照のこと）。
融合遺伝子を作製するための技術は、周知である。本質的に、異なるポリペプチド配列
をコードする種々のＤＮＡ断片の接続は、ライゲーションのための平滑末端または粘着末
端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要に応じた付着末端の充填、望ましく
ない接続を回避するためのアルカリホスファターゼ処理、および酵素的ライゲーションを
使用する従来の技術に従って実施される。別の実施形態では、この融合遺伝子は、自動化
ＤＮＡ合成機を含む従来の技術によって合成され得る。あるいは、遺伝子断片のＰＣＲ増
幅が、キメラ遺伝子配列を生成するために引き続いてアニーリングされ得る２つの連続す
る遺伝子断片間の相補的オーバーハングを生じるアンカープライマーを使用して実施され
得る（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ、Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ：１９９２年を
参照のこと）。
ＴβＲＩＩ、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ３およびＧＤＦ１５のアンタゴニストである核酸化
合物のカテゴリーの例には、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ構築物および触媒的核酸構築物
が含まれる。核酸化合物は、一本鎖または二本鎖であり得る。二本鎖化合物は、オーバー
ハングまたは非相補性の領域もまた含み得、ここで、これらの鎖の一方または他方は、一
本鎖である。一本鎖化合物は、自己相補性の領域を含み得、これは、この化合物が、二重
らせん構造の領域を有する、いわゆる「ヘアピン」または「ステムループ」構造を形成す
ることを意味する。核酸化合物は、全長ＴβＲＩＩ核酸配列またはリガンド核酸配列の１
０００以下、５００以下、２５０以下、１００以下または５０、３５、３０、２５、２２
、２０もしくは１８以下のヌクレオチドからなる領域に対して相補的なヌクレオチド配列
を含み得る。相補性の領域は、好ましくは、少なくとも８ヌクレオチド、および任意選択
で少なくとも１０または少なくとも１５ヌクレオチド、例えば、１５～２５ヌクレオチド
の間である。相補性の領域は、標的転写物のイントロン、コード配列または非コード配列
、例えば、コード配列部分内に含まれ得る。一般に、核酸化合物は、約８～約５００ヌク
レオチドまたは塩基対長の長さ、例えば、約１４～約５０ヌクレオチドの長さを有する。
核酸は、ＤＮＡ（特に、アンチセンスとしての使用のため）、ＲＮＡまたはＲＮＡ：ＤＮ
Ａハイブリッドであり得る。任意の１つの鎖は、ＤＮＡおよびＲＮＡの混合物、ならびに
ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれとしても容易に分類できない修飾された形態を含み得る。同
様に、二本鎖化合物は、ＤＮＡ：ＤＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡまたはＲＮＡ：ＲＮＡであり得
、任意の１つの鎖はまた、ＤＮＡおよびＲＮＡの混合物、ならびにＤＮＡまたはＲＮＡの
いずれとしても容易に分類できない修飾された形態を含み得る。核酸化合物は、骨格（ヌ
クレオチド間連結を含む、天然核酸中の糖－リン酸部分）または塩基部分（天然核酸のプ
リンまたはピリミジン部分）への１または複数の修飾を含む、種々の修飾のいずれかを含
み得る。アンチセンス核酸化合物は、好ましくは、約１５～約３０ヌクレオチドの長さを
有し、血清において、細胞において、または化合物が送達される可能性が高い場所、例え
ば経口送達された化合物の場合には胃において、吸入された化合物については肺において
、安定性などの特徴を改善するための、１または複数の修飾を含むことが多い。ＲＮＡｉ
構築物の場合、標的転写物に対して相補的な鎖は、一般に、ＲＮＡまたはその修飾物であ
る。他方の鎖は、ＲＮＡ、ＤＮＡまたは任意の他のバリエーションであり得る。二本鎖ま
たは一本鎖「ヘアピン」ＲＮＡｉ構築物の二重鎖部分は、好ましくは、Ｄｉｃｅｒ基質と
して機能する限り、１８～４０ヌクレオチド長の長さ、および任意選択で約２１～２３ヌ
クレオチド長の長さを有する。触媒的または酵素的核酸は、リボザイムまたはＤＮＡ酵素
であり得、修飾された形態もまた含み得る。核酸化合物は、生理学的条件下およびナンセ
ンスまたはセンス制御がほとんどまたは全く影響を有さない濃度において細胞と接触させ
た場合、約５０％、７５％、９０％またはそれ超、標的の発現を阻害し得る。核酸化合物
の影響を試験するための好ましい濃度は、１、５および１０マイクロモルである。核酸化
合物は、例えば、血管新生に対する影響についても試験され得る。
４．Ｆｃ－融合タンパク質における変更
本出願は、操作されたまたはバリアントＦｃ領域を有するＴβＲＩＩ－Ｆｃ融合タンパ
ク質をさらに提供する。かかる抗体およびＦｃ融合タンパク質は、例えば、抗原依存的細
胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などのエフェクター機能をモジ
ュレートする際に、有用であり得る。さらに、これらの修飾は、抗体およびＦｃ融合タン
パク質の安定性を改善し得る。これらの抗体およびＦｃ融合タンパク質のアミノ酸配列バ
リアントは、ＤＮＡ中に適切なヌクレオチド変化を導入することによって、またはペプチ
ド合成によって、調製される。かかるバリアントは、例えば、本明細書に開示される抗体
およびＦｃ融合タンパク質のアミノ酸配列からの欠失、および／またはかかるアミノ酸配
列中への挿入、および／またはかかるアミノ酸配列内の残基の置換を含む。欠失、挿入お
よび置換の任意の組合せが、最終構築物が所望の特徴を有することを条件として、最終構
築物に到達するために作成される。アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数または位置を
変化させるなど、抗体およびＦｃ融合タンパク質の翻訳後プロセスもまた変更し得る。
低減されたエフェクター機能を有する抗体およびＦｃ融合タンパク質は、Ｂｌｕｅｓｔ
ｏｎｅら（ＷＯ９４／２８０２７およびＷＯ９８／４７５３１を参照のこと；Ｘｕら２０
００年Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００巻；１６～２６頁もまた参照のこと）によって
記載されたＡｌａ－Ａｌａ変異が含まれるがこれに限定されない変化をアミノ酸配列中に
導入することによって産生され得る。したがって、ある特定の実施形態では、定常領域内
にＡｌａ－Ａｌａ変異を含む変異を有する本開示の抗体およびＦｃ融合タンパク質が、エ
フェクター機能を低減または無効にするために、使用され得る。これらの実施形態によれ
ば、抗体およびＦｃ融合タンパク質は、２３４位におけるアラニンへの変異もしくは２３
５位におけるアラニンへの変異、またはそれらの組合せを含み得る。一実施形態では、こ
の抗体またはＦｃ融合タンパク質は、ＩｇＧ４フレームワークを含み、ここで、Ａｌａ－
Ａｌａ変異は、２３４位におけるフェニルアラニンからアラニンへの変異（複数可）およ
び／または２３５位におけるロイシンからアラニンへの変異を記述する。別の実施形態で
は、この抗体またはＦｃ融合タンパク質は、ＩｇＧ１フレームワークを含み、ここで、Ａ
ｌａ－Ａｌａ変異は、２３４位におけるロイシンからアラニンへの変異（複数可）および
／または２３５位におけるロイシンからアラニンへの変異を記述する。この抗体またはＦ
ｃ融合タンパク質は、ＣＨ２ドメインにおける点変異Ｋ３２２Ａを含む他の変異を、代替
的にまたはさらに保有し得る（Ｈｅｚａｒｅｈら２００１年Ｊ Ｖｉｒｏｌ． ７５巻：
１２１６１～８頁）。
特定の実施形態では、この抗体またはＦｃ融合タンパク質は、補体依存性細胞傷害（Ｃ
ＤＣ）を増強するかまたは阻害するために修飾され得る。モジュレートされたＣＤＣ活性
は、Ｆｃ領域中に１または複数のアミノ酸置換、挿入または欠失を導入することによって
達成され得る（例えば、米国特許第６，１９４，５５１号を参照のこと）。あるいは、ま
たはさらに、システイン残基（複数可）が、Ｆｃ領域中に導入され得、それによって、こ
の領域における鎖間ジスルフィド結合形成を可能にする。こうして生成されたホモダイマ
ー抗体は、改善もしくは低減された内在化能および／または増加もしくは減少された補体
媒介性細胞死滅を有し得る。Ｃａｒｏｎら、Ｊ． Ｅｘｐ Ｍｅｄ． １７６巻：１１９
１～１１９５頁（１９９２年）およびＳｈｏｐｅｓ， Ｂ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１４８巻：２９１８～２９２２頁（１９９２年）、ＷＯ９９／５１６４２、Ｄｕｎｃａｎ
およびＷｉｎｔｅｒ Ｎａｔｕｒｅ ３２２巻：７３８～４０頁（１９８８年）；米国特
許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；およびＷＯ９４／２９３
５１を参照のこと。
５．ＧＤＦ１５－ＴβＲＩＩシグナル伝達
本開示は、ＴＧＦβ ＩＩ型受容体（ＴβＲＩＩ）が高い親和性でＧＤＦ１５と結合す
るという発見に一部関する。これまで、ＧＤＦ１５が、受容体と直接的に結合または相互
作用することは、生化学的に示されていない。不適当または不適切なリガンド精製が、市
販のＧＤＦ１５の不活性の潜在的な理由であり得る。ＴβＲＩＩ結合活性を実証する例示
的なＧＤＦ１５ポリペプチド、ならびにかかるポリペプチドを作製および精製する方法は
、本明細書に開示されている。ヒトおよびマウス由来のネイティブ前駆体ＧＤＦ１５タン
パク質およびヌクレオチドの配列は、図１～４に示される。成熟ヒトＧＤＦ１５は、配列
番号１の残基１９７から３０８に及ぶ。同様に、成熟マウスＧＤＦ１５は、配列番号３の
残基１９２から３０３に及ぶ。ある特定の実施形態では、本開示は、他のタンパク質およ
び／もしくは他のＧＤＦ１５ポリペプチド種から単離された、または他のタンパク質およ
び／もしくは他のＧＤＦ１５ポリペプチド種を他の方法で実質的に含まない（例えば、少
なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％含まない）、Ｇ
ＤＦ１５ポリペプチドまたはその断片の単離および／または精製された形態を利用可能に
する。本開示のＧＤＦ１５ポリペプチドは、高い親和性でＴβＲＩＩと結合する。結合は
、溶液中で、またはＢｉａｃｏｒｅ（商標）システムなどの表面プラズモン共鳴システム
中で、精製されたタンパク質を使用して評価され得る。これらのＧＤＦ１５ポリペプチド
は、ＴβＲＩＩポリペプチドに対する、約１０－６、１０－７、１０－８、１０－９Ｍま
たはそれ未満の親和性（解離定数）を有する。好ましくは、本開示のＧＤＦ１５ポリペプ
チドは、本明細書に記載される方法に従って単離および精製される。ＧＤＦ１５ポリペプ
チドは、一般に、組換え核酸からの発現によって産生される。
ＧＤＦ１５ポリペプチドには、配列番号１もしくは配列番号３のＧＤＦ１５ポリペプチ
ドに対して、少なくとも８０％同一なアミノ酸配列、および任意選択で、少なくとも８５
％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一なアミノ酸
配列もしくはその機能的断片からなるまたはかかるアミノ酸配列もしくはその機能的断片
を含むポリペプチドが含まれ得る。ＧＤＦ１５ポリペプチドには、配列番号１の残基１９
７～３０８もしくは配列番号３の残基１９２～３０３を含むＧＤＦ１５ポリペプチドに対
して、少なくとも８０％同一なアミノ酸配列、および任意選択で、少なくとも８５％、９
０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一なアミノ酸配列も
しくはその機能的断片からなるまたはかかるアミノ酸配列もしくはその機能的断片を含む
ポリペプチドが含まれ得る。プロセシングされていないＧＤＦ１５ポリペプチドは、任意
のシグナル配列、ならびにシグナル配列に対してＮ末端の任意の配列を、含むまたは排除
するかのいずれかであり得る。ＧＤＦ１５ポリペプチドには、配列番号１もしくは配列番
号３のバリアント、またはそれぞれ、配列番号１の１９７～３０８もしくは配列番号３の
残基１９２～３０３（例えば、配列番号１もしくは配列番号３の配列中に、２、３、４、
５、１０、１５、２０、２５、３０もしくは３５以上のアミノ酸置換を含むバリアントを
含む）に対応するそれらの部分、それらの断片、ならびに上述のいずれかを含む融合タン
パク質が含まれ得るが、各場合において、好ましくは、上述のＧＤＦ１５ポリペプチドの
いずれかが、ＴβＲＩＩポリペプチドに対する実質的な親和性を有する。
ある特定の実施形態では、本開示のＧＤＦ１５ポリペプチドは、ＧＤＦ１５ポリペプチ
ド中に天然に存在する任意の修飾に加えて、翻訳後修飾をさらに含み得る。かかる修飾に
は、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、ペグ化（ポリエチ
レングリコール）およびアシル化が含まれるがこれらに限定されない。結果として、修飾
されたＧＤＦ１５ポリペプチドは、非アミノ酸要素、例えば、ポリエチレングリコール、
脂質、モノサッカライドまたはポリサッカライドおよびホスフェートを含み得る。ＧＤＦ
１５ポリペプチドの機能性に対するかかる非アミノ酸要素の影響は、他のＧＤＦ１５ポリ
ペプチドについて本明細書に記載したように試験され得る。ＧＤＦ１５ポリペプチドが、
ＧＤＦ１５ポリペプチドの新生形態を切断することによって細胞中で産生される場合、翻
訳後プロセシングは、タンパク質の正確な折り畳みおよび／または機能にとっても重要で
あり得る。異なる細胞（例えば、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、２９３、ＷＩ３８、ＮＩ
Ｈ－３Ｔ３またはＨＥＫ－２９３）は、かかる翻訳後活性のための特異的な細胞マシナリ
ーおよび特徴的機構を有し、ＧＤＦ１５ポリペプチドの正確な修飾およびプロセシングを
確実にするために選択され得る。
ある特定の実施形態では、本開示は、前駆体および成熟ＧＤＦ１５ポリペプチドをコー
ドする核酸を含む。さらなる実施形態では、本開示は、かかる核酸を含む宿主細胞にも関
する。この宿主細胞は、任意の原核または真核細胞であり得る。例えば、本開示のポリペ
プチドは、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌細胞、昆虫細胞（例えば、バキュロウイルス発現系を
使用する）、酵母または哺乳動物細胞において、発現され得る。他の適切な宿主細胞は、
当業者に公知である。したがって、本開示の一部の実施形態は、ＧＤＦ１５ポリペプチド
を産生する方法にさらに関する。
ある特定の態様では、本開示は、本明細書に開示される断片、機能的バリアントおよび
融合タンパク質を含むＧＤＦ１５ポリペプチドのいずれかをコードする単離されたおよび
／または組換え核酸を提供する。対象核酸は、一本鎖または二本鎖であり得る。かかる核
酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子であり得る。これらの核酸は、例えば、ＧＤＦ１５ポリペ
プチドを作製するための方法において、または直接的治療剤として（例えば、アンチセン
ス、ＲＮＡｉまたは遺伝子治療アプローチにおいて）、使用され得る。
ある特定の態様では、ＧＤＦ１５ポリペプチドをコードする対象核酸は、配列番号１ま
たは配列番号３のバリアントである核酸を含むことが、さらに理解される。バリアントヌ
クレオチド配列には、１または複数のヌクレオチド置換、付加または欠失によって異なる
配列、例えば、対立遺伝子バリアントが含まれる。
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１または配列番号３に対して少なくとも
８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一
である、単離されたまたは組換え核酸配列を提供する。当業者は、配列番号１または配列
番号３に対して相補的な核酸配列、および配列番号１または配列番号３のバリアントもま
た、本開示の範囲内であることを理解する。さらなる実施形態では、本開示の核酸配列は
、単離され得る、組換えであり得るおよび／もしくは異種ヌクレオチド配列と融合され得
る、またはＤＮＡライブラリー中にあり得る。
他の実施形態では、本開示の核酸は、配列番号１または配列番号３に示されるヌクレオ
チド配列、配列番号１または配列番号３の相補体配列、またはそれらの断片に対して、高
度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列もまた含む。上で
議論したように、当業者は、ＤＮＡハイブリダイゼーションを促進する適切なストリンジ
ェンシーの条件が変動され得ることを、容易に理解する。例えば、約４５℃での６．０×
塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）におけるハイブリダイゼーションと、そ
の後の、５０℃での２．０×ＳＳＣの洗浄とを、実施することができる。例えば、洗浄ス
テップにおける塩濃度は、５０℃における約２．０×ＳＳＣの低いストリンジェンシーか
ら、５０℃における約０．２×ＳＳＣの高いストリンジェンシーまでで、選択され得る。
さらに、洗浄ステップにおける温度は、室温、約２２℃での低いストリンジェンシーの条
件から、約６５℃での高いストリンジェンシーの条件まで増加され得る。温度および塩の
両方が変動され得、または温度もしくは塩濃度は、他の変数が変化しても一定で維持され
得る。一部の実施形態では、本開示は、室温での６×ＳＳＣとその後の室温での２×ＳＳ
Ｃにおける洗浄の低いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズする核酸を提供する
。
遺伝子コードにおける縮重に起因して配列番号１または配列番号３に示される核酸とは
異なる単離された核酸もまた、本開示の範囲内である。例えば、いくつかのアミノ酸は、
１よりも多いトリプレットによって指定される。同じアミノ酸または同義語（例えば、Ｃ
ＡＵおよびＣＡＣは、ヒスチジンについて同義語である）を特定するコドンは、タンパク
質のアミノ酸配列に影響を与えない「サイレント」変異を生じ得る。しかし、対象タンパ
ク質のアミノ酸配列における変化をもたらすＤＮＡ配列多型が、哺乳動物細胞の間に存在
すると予測される。当業者は、特定のタンパク質をコードする核酸の１または複数のヌク
レオチドにおけるこれらのバリエーション（ヌクレオチドの最大約３～５％）が、天然の
対立遺伝子バリエーションに起因して、所与の種の個体の間に存在し得ることを理解する
。あらゆるかかるヌクレオチドバリエーションおよび得られたアミノ酸多型は、本開示の
範囲内である。
ある特定の実施形態では、本開示の組換え核酸は、発現構築物において、１または複数
の調節ヌクレオチド配列に作動可能に連結され得る。調節ヌクレオチド配列は、一般に、
発現のために使用される宿主細胞に適切である。多数の型の適切な発現ベクターおよび適
切な調節配列が、種々の宿主細胞について、当該分野で公知である。典型的には、前記１
または複数の調節ヌクレオチド配列には、プロモーター配列、リーダーまたはシグナル配
列、リボソーム結合部位、転写開始および終結配列、翻訳開始および終結配列、ならびに
エンハンサーまたはアクチベーター配列が含まれ得るがこれらに限定されない。当該分野
で公知の構成的または誘導性プロモーターが、本開示によって企図される。これらのプロ
モーターは、天然に存在するプロモーター、または１よりも多いプロモーターのエレメン
トを組み合わせるハイブリッドプロモーターのいずれかであり得る。発現構築物は、プラ
スミドのように、エピソーム上で細胞中に存在し得、または発現構築物は、染色体中に挿
入され得る。好ましい一実施形態では、この発現ベクターは、形質転換された宿主細胞の
選択を可能にする選択可能なマーカー遺伝子を含む。選択可能なマーカー遺伝子は、当該
分野で周知であり、使用される宿主細胞によって変動する。
本明細書に開示されるある特定の態様では、この対象核酸は、ＧＤＦ１５ポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つの調節配列に作動可能に連結した
発現ベクター中で提供される。調節配列は、当該分野で認識されており、ＧＤＦ１５ポリ
ペプチドの発現を指向するために選択される。したがって、用語調節配列には、プロモー
ター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメントが含まれる。例示的な調節配列は、Ｇ
ｏｅｄｄｅｌ； Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ： Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅ
ｇｏ、ＣＡ（１９９０年）に記載されている。例えば、それに作動可能に連結した場合に
ＤＮＡ配列の発現を制御する広範な種々の発現制御配列のいずれかが、ＧＤＦ１５ポリペ
プチドをコードするＤＮＡ配列を発現させるために、これらのベクターにおいて使用され
得る。かかる有用な発現制御配列には、例えば、ＳＶ４０の初期および後期プロモーター
、ｔｅｔプロモーター、アデノウイルスまたはサイトメガロウイルス最初期プロモーター
、ＲＳＶプロモーター、ｌａｃ系、ｔｒｐ系、ＴＡＣまたはＴＲＣ系、その発現がＴ７
ＲＮＡポリメラーゼによって指向されるＴ７プロモーター、ファージラムダの主要オペレ
ーターおよびプロモーター領域、ｆｄコートタンパク質の制御領域、３－ホスホグリセリ
ン酸キナーゼまたは他の解糖酵素のプロモーター、酸ホスファターゼのプロモーター、例
えば、Ｐｈｏ５、酵母α接合因子のプロモーター、バキュロウイルス系の多角体プロモー
ター、および原核もしくは真核細胞またはそれらのウイルスの遺伝子の発現を制御するこ
とが公知の他の配列、ならびにそれらの種々の組合せが含まれる。発現ベクターの設計は
、形質転換される宿主細胞の選択、および／または発現されることが望まれるタンパク質
の型などの因子に依存し得ることを、理解すべきである。さらに、ベクターのコピー数、
そのコピー数を制御する能力、およびこのベクターによってコードされる任意の他のタン
パク質、例えば抗生物質マーカーの発現もまた、考慮すべきである。
本開示に含まれる組換え核酸は、クローニングされた遺伝子またはその一部分を、原核
細胞、真核細胞（酵母、トリ、昆虫または哺乳動物）のいずれか、またはそれら両方にお
ける発現に適切なベクター中にライゲーションさせることによって、産生され得る。組換
えＧＤＦ１５ポリペプチドの産生のための発現ビヒクルには、プラスミドおよび他のベク
ターが含まれる。例えば、適切なベクターには、以下の型のプラスミドが含まれる：Ｅ．
ｃｏｌｉなどの原核細胞における発現のための、ｐＢＲ３２２由来プラスミド、ｐＥＭＢ
Ｌ由来プラスミド、ｐＥＸ由来プラスミド、ｐＢＴａｃ由来プラスミドおよびｐＵＣ由来
プラスミド。
一部の哺乳動物発現ベクターは、細菌におけるベクターの繁殖を促進するための原核生
物配列、および真核細胞において発現される１または複数の真核生物転写単位の両方を含
む。ｐｃＤＮＡＩ／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡＩ／ｎｅｏ、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＳＶ２ｇｐｔ、
ｐＳＶ２ｎｅｏ、ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ、ｐＴｋ２、ｐＲＳＶｎｅｏ、ｐＭＳＧ、ｐＳＶＴ
７、ｐｋｏ－ｎｅｏおよびｐＨｙｇ由来ベクターは、真核細胞のトランスフェクションに
適切な哺乳動物発現ベクターの例である。これらのベクターのうちの一部は、原核細胞お
よび真核細胞の両方における複製および薬物耐性選択を促進するために、ｐＢＲ３２２な
どの細菌プラスミド由来の配列で修飾される。あるいは、ウシパピローマウイルス（ＢＰ
Ｖ－１）またはエプスタイン・バーウイルス（ｐＨＥＢｏ、ｐＲＥＰ由来およびｐ２０５
）などのウイルスの誘導体が、真核細胞中でのタンパク質の一過的な発現のために使用さ
れ得る。他のウイルス（レトロウイルスを含む）発現系の例は、遺伝子治療送達系の説明
において以下に見出され得る。プラスミドの調製および宿主生物の形質転換において使用
される種々の方法は、当該分野で周知である。原核細胞および真核細胞の両方のための他
の適切な発現系、ならびに一般的な組換え手順については、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏ
ｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｆｒ
ｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ編（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、２００１年）を参照のこと。一部の例では、バキュロウイ
ルス発現系の使用によって組換えポリペプチドを発現させることが望ましい場合がある。
かかるバキュロウイルス発現系の例には、ｐＶＬ由来ベクター（例えば、ｐＶＬ１３９２
、ｐＶＬ１３９３およびｐＶＬ９４１）、ｐＡｃＵＷ由来ベクター（例えば、ｐＡｃＵＷ
１）およびｐＢｌｕｅＢａｃ由来ベクター（例えば、β－ｇａｌ含有ｐＢｌｕｅＢａｃ
ＩＩＩ）が含まれる。
好ましい実施形態では、Ｐｃｍｖ－Ｓｃｒｉｐｔベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌ
ａ Ｊｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．）、ｐｃＤＮＡ４ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａ
ｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．）、ｐＣＩ－ｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓ
ｏｎ、Ｗｉｓｃ．）およびＵＣＯＥ（商標）由来ベクター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）などの
ベクターが、ＣＨＯ細胞における対象ＴβＲＩＩポリペプチドの産生のために設計される
。明らかなように、これらの対象遺伝子構築物は、例えば、融合タンパク質またはバリア
ントタンパク質を含むタンパク質を、精製のために産生するために、培養物中で繁殖され
た細胞において、対象ＧＤＦ１５ポリペプチドの発現を引き起こすために使用され得る。
本開示は、対象ＧＤＦ１５ポリペプチドのうちの１または複数のコード配列（例えば、
配列番号１または配列番号３）を含む組換え遺伝子でトランスフェクトされた宿主細胞に
も関する。この宿主細胞は、任意の原核または真核細胞であり得る。例えば、本明細書に
開示されるＧＤＦ１５ポリペプチドは、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌細胞、昆虫細胞（例えば
、バキュロウイルス発現系を使用する）、酵母または哺乳動物細胞において、発現され得
る。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知である。好ましい実施形態では、本明細書に開
示されるＧＤＦ１５ポリペプチドは、ＣＨＯ細胞において発現される。
したがって、本開示は、対象ＧＤＦ１５ポリペプチドを産生する方法にさらに関する。
例えば、ＧＤＦ１５ポリペプチドをコードする発現ベクターでトランスフェクトされた宿
主細胞は、ＧＤＦ１５ポリペプチドの発現を生じさせるための適切な条件下で培養され得
る。このＧＤＦ１５ポリペプチドは、ＧＤＦ１５ポリペプチドを含む細胞および培地の混
合物から分泌および単離され得る。あるいは、このＴβＲＩＩポリペプチドは、細胞質に
または膜画分中に保持され得、細胞が回収され得、溶解され得、タンパク質が単離され得
る。細胞培養物は、宿主細胞および培地を含む。細胞培養に適切な培地は、当該分野で周
知である。これらの対象ＧＤＦ１５ポリペプチドは、イオン交換クロマトグラフィー、ゲ
ル濾過クロマトグラフィー、限外濾過、電気泳動、ＧＤＦ１５ポリペプチドの特定のエピ
トープに対して特異的な抗体を用いたイムノアフィニティー精製、およびＧＤＦ１５ポリ
ペプチドに融合されたドメインと結合する薬剤を用いたアフィニティー精製（例えば、プ
ロテインＡカラムが、ＧＤＦ１５－Ｆｃ融合物を精製するために使用され得る）を含む、
タンパク質を精製するための当該分野で公知の技術を使用して、細胞培養培地、宿主細胞
またはそれら両方から単離され得る。好ましい一実施形態では、このＧＤＦ１５ポリペプ
チドは、その精製を促進するドメインを含む融合タンパク質である。一例として、精製は
、例えば、任意の順序で、以下のうちの３つまたはそれ超を含む、一連のカラムクロマト
グラフィーステップによって達成され得る：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファ
ロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロ
マトグラフィーおよびカチオン交換クロマトグラフィー。精製は、ウイルス濾過および緩
衝液交換を用いて完了され得る。
好ましい実施形態では、これらの対象ＧＤＦ１５ポリペプチドは、一連のカチオン交換
カラムクロマトグラフィーステップを使用して、培養培地から精製される。カチオン交換
カラムに使用される材料の例は、カルボキシメチル（ＣＭ）、スルホエチル（ＳＥ）、ス
ルホプロピル（ＳＰ）、ホスフェート（Ｐ）およびスルホネート（Ｓ）などの置換基を有
する樹脂であり得る。カチオン交換カラムクロマトグラフィーに使用される材料の例には
、ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ、Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商
標）Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ、ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ、
Ｃａｐｔｏ（商標）Ｓ、Ｃａｐｔｏ（商標）ＤＥＡＥ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、
Ｓ ＨｙｐｅｒＣｅｌ（商標）（Ｐａｌｌ）、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＧｉｇａＣａｐ Ｓ
－６５０（ＴＯＳＯＨ）、またはカルボキシメチルなどの弱いカチオン交換体が含まれる
。ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｆａｓｔ ＦｌｏｗおよびＱ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ
（商標）Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗが好ましい。
精製を開始するために、ＧＤＦ１５ポリペプチドを安定に発現する宿主細胞由来の馴化
培地のパラメーター、例えば、ｐＨ、イオン強度および温度は、必要に応じて調整され得
る。一部の実施形態では、クロマトグラフィーカラムは、ポリペプチド含有上清との接触
の前に、１または複数の溶液で洗い流され、平衡化される。かかる溶液は、例えば、緩衝
液（例えば、Ｔｒｉｓ、ＭＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ヒスチジン、リン酸塩または酢酸ナトリウ
ム、例えば、１～５００ｍＭの間、２５～１００ｍＭの間、１５～３０ｍＭの間もしくは
２０ｍＭ）、および／または塩（例えば、ＮａＣｌ、ＮａＰＯ４、酢酸ナトリウムもしく
はＣａＣｌ２、例えば、０～２Ｍの間、１～２Ｍの間もしくは５００ｍＭ～１Ｍの間）を
含み得る。平衡化溶液のｐＨは、一般に、３．５～１０の範囲である（例えば、ｐＨ３．
５～６の間、４．０～５．５の間、４．５～４．８の間または４．７）。カラムをポリペ
プチド含有流体と接触させた後、結合したカラムが洗浄され得る。洗浄溶液は、緩衝液（
例えば、Ｔｒｉｓ、ＭＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ヒスチジン、リン酸塩もしくは酢酸ナトリウム
、例えば、１～５００ｍＭの間、２５～１００ｍＭの間、１５～３０ｍＭの間もしくは２
０ｍＭ）および／または塩（例えば、ＮａＣｌ、ＮａＰＯ４、酢酸ナトリウムもしくはＣ
ａＣｌ２、例えば、０～２Ｍの間、１～２Ｍの間、１００ｍＭ～１Ｍの間もしくは１００
ｍＭ～５００ｍＭの間）および／または添加物（例えば、グアニジン、尿素、スクロース
、アルギニンもしくはアルギニン誘導体）および／または溶媒（例えば、エタノール、ア
セトニトリルもしくはポリエチレングリコール）を含み得る。洗浄溶液は、一般に、３．
５～１０の間のｐＨ（例えば、４．５～８．０の間のｐＨ）を有する。ポリペプチドは、
ｐＨの段階変化もしくは勾配変化、塩型、塩濃度、溶媒型、溶媒濃度、ディスプレーサ型
、ディスプレーサ濃度、またはそれらの組合せを使用して、カラムから溶出され得る。一
般に、カラムからポリペプチドを溶出させるために、媒体は、溶出緩衝液と接触させられ
る。一部の実施形態では、溶出緩衝液は、緩衝液（例えば、ＨＥＰＥＳもしくはＴｒｉｓ
、例えば、１０～１００ｍＭ、２５～７５ｍＭもしくは５０ｍＭ）を含み、および／また
は塩（例えば、ＮａＣｌもしくはＣａＣｌ２、例えば、０～２Ｍ、例えば、１０～１００
ｍＭ）を含む。一部の実施形態では、溶出緩衝液は、グリシン、酢酸またはクエン酸（例
えば、２０～２５０ｍＭもしくは１５０ｍＭ）を含み得る。溶出緩衝液は、酢酸（例えば
、２０ｍＭ～約５０ｍＭ）、添加物（例えば、グアニジン、尿素もしくはスクロース、例
えば、１～１０Ｍ、２～８Ｍもしくは６Ｍ）および／または溶媒（例えば、エタノール、
アセトニトリル、ポリエチレングリコール、例えば、１～１０％溶媒、例えば、５％溶媒
）もまた含み得る。溶出緩衝液のｐＨは、約５．０～約１０．０の範囲であり得る。一部
の実施形態では、ｐＨは、勾配溶出を生じるために、（例えば、徐々に）変化され得る。
一部の実施形態では、溶出緩衝液のｐＨは、約８．０である。一部の実施形態では、一連
のカラムクロマトグラフィーステップが実施される。
本明細書に提示されるデータは、ＴβＲＩＩポリペプチドが、ＧＤＦ１５シグナル伝達
のアンタゴニストとして作用することを実証している。可溶性ＴβＲＩＩポリペプチド、
および特にＴβＲＩＩ－Ｆｃは、好ましいアンタゴニストであるが、抗ＧＤＦ１５抗体、
抗ＴβＲＩＩ抗体、アンチセンス、ＧＤＦ１５またはＴβＲＩＩの産生を阻害するＲＮＡ
ｉまたはリボザイム核酸、およびＧＤＦ１５またはＴβＲＩＩの他のインヒビター、特に
、ＧＤＦ１５－ＴβＲＩＩ結合を破壊するものを含む、他の型のＧＤＦ１５アンタゴニス
トが有用であると予測される。
ＧＤＦ１５ポリペプチドと特異的に反応性であり、ＴβＲＩＩポリペプチドへのその結
合と競合する（競合的に結合する）ようにＧＤＦ１５ポリペプチドと結合するか、または
ＧＤＦ１５媒介性のシグナル伝達を他の方法で阻害するかのいずれかである抗体は、ＧＤ
Ｆ１５ポリペプチド活性のアンタゴニストとして使用され得る。同様に、ＴβＲＩＩポリ
ペプチドと特異的に反応性であり、ＧＤＦ１５結合を破壊する抗体は、アンタゴニストと
して使用され得る。
ＧＤＦ１５ポリペプチドまたはＴβＲＩＩポリペプチドに由来する免疫原を使用するこ
とによって、抗タンパク質／抗ペプチド抗血清またはモノクローナル抗体は、標準的なプ
ロトコールによって作製され得る（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅによって編集さ
れたＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ：１９８８年）を参照のこと）。哺乳動物、例え
ば、マウス、ハムスターまたはウサギは、免疫原性形態のＧＤＦ１５ポリペプチド、抗体
応答を惹起することが可能な抗原性断片、または融合タンパク質によって、免疫化され得
る。タンパク質またはペプチドに免疫原性を付与するための技術には、担体へのコンジュ
ゲート化または当該分野で周知の他の技術が含まれる。ＧＤＦ１５またはＴβＲＩＩポリ
ペプチドの免疫原性部分は、アジュバントの存在下で投与され得る。免疫化の進行は、血
漿または血清における抗体力価の検出によって、モニタリングされ得る。標準的なＥＬＩ
ＳＡまたは他のイムノアッセイが、抗体のレベルを評価するために、抗原としての免疫原
と共に使用され得る。
ＧＤＦ１５ポリペプチドの抗原性調製物による動物の免疫化後、抗血清が取得され得、
所望の場合、ポリクローナル抗体が、血清から単離され得る。モノクローナル抗体を産生
するために、抗体産生細胞（リンパ球）が、免疫化した動物から回収され得、ハイブリド
ーマ細胞を得るために、標準的な体細胞融合手順によって、骨髄腫細胞などの不死細胞と
融合され得る。かかる技術は、当該分野で周知であり、これには、例えば、ハイブリドー
マ技術（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、（１９７５年）Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻
：４９５～４９７頁によって元々開発された）、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚ
ｂａｒら、（１９８３年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ、４巻：７２頁）およびヒ
トモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶ－ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、（１
９８５年）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈ
ｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ． ７７～９６頁）が含まれる。ハイ
ブリドーマ細胞は、かかるハイブリドーマ細胞を含む培養物から単離された、ＧＤＦ１５
ポリペプチドと特異的に反応性の抗体およびモノクローナル抗体の産生について、免疫化
学的にスクリーニングされ得る。
用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、これもまた対象ポリペプチドと特異的に反
応性であるその断片を含むことが意図される。抗体は、従来の技術を使用して断片化され
得、それらの断片は、抗体全体について上記したのと同じ様式で、有用性についてスクリ
ーニングされ得る。例えば、Ｆ（ａｂ）２断片は、抗体をペプシンで処理することによっ
て生成され得る。得られたＦ（ａｂ）２断片は、Ｆａｂ断片を産生するために、ジスルフ
ィド架橋を還元するために処理され得る。本発明の抗体は、抗体の少なくとも１つのＣＤ
Ｒ領域によって付与されるＴβＲＩＩまたはＧＤＦ１５ポリペプチドに対する親和性を有
する、二重特異性、単鎖、キメラ、ヒト化および完全にヒトの分子を含むことが、さらに
意図される。抗体は、それと結合し、検出されることができる標識をさらに含み得る（例
えば、標識は、放射性同位体、蛍光化合物、酵素または酵素補因子であり得る）。
ある特定の実施形態では、この抗体は、組換え抗体であり、この用語は、ＣＤＲ移植抗
体もしくはキメラ抗体、ライブラリー選択された抗体ドメインからアセンブルされたヒト
もしくは他の抗体、単鎖抗体および単一ドメイン抗体（例えば、ヒトＶＨタンパク質また
はラクダ科動物（ｃａｍｅｌｉｄ）ＶＨＨタンパク質）を含め、分子生物学の技術によっ
て一部生成された、任意の抗体を包含する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、
モノクローナル抗体であり、ある特定の実施形態では、本発明は、新規抗体を生成するた
めの利用可能な方法を作成する。例えば、ＧＤＦ１５ポリペプチドまたはＴβＲＩＩポリ
ペプチドと特異的に結合するモノクローナル抗体を生成するための方法は、検出可能な免
疫応答を刺激するために有効な抗原ポリペプチドを含む免疫原性組成物の量をマウスに投
与するステップ、このマウスから抗体産生細胞（例えば、脾臓由来の細胞）を取得し、こ
の抗体産生細胞を骨髄腫細胞と融合させて抗体産生ハイブリドーマを取得するステップ、
およびこの抗体産生ハイブリドーマを試験して、この抗原と特異的に結合するモノクロー
ナル抗体を産生するハイブリドーマを同定するステップを含み得る。一旦取得されると、
ハイブリドーマは、細胞培養物中で、任意選択で、ハイブリドーマ由来の細胞が、この抗
原と特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する培養条件下で、繁殖され得る。この
モノクローナル抗体は、細胞培養物から精製され得る。
形容詞「～と特異的に反応性」とは、抗体に関して使用する場合、当該分野で一般に理
解されるように、この抗体が、目的の抗原（例えば、ＧＤＦ１５ポリペプチド）と目的で
はない他の抗原との間で十分に選択的であり、この抗体が、最低でも、特定の型の生物学
的試料において目的の抗原の存在を検出するために有用であることを意味することが意図
される。抗体を使用する、治療適用などの特定の方法では、結合におけるより高い程度の
特異性が望ましい場合がある。モノクローナル抗体は、一般に、所望の抗原と交差反応性
ポリペプチドとを効率的に識別する（ポリクローナル抗体と比較して）より高い傾向を有
する。抗体：抗原相互作用の特異性に影響する１つの特徴は、抗原に対する抗体の親和性
である。所望の特異性が、異なる親和性の範囲で達成され得るが、一般に好ましい抗体は
、約１０－６、１０－７、１０－８、１０－９またはそれ未満の親和性（解離定数）を有
する。ＧＤＦ１５とＴβＲＩＩとの高い親和性を考慮すると、中和性の抗ＧＤＦ１５また
は抗ＴβＲＩＩ抗体は、一般に、１０－９またはそれ未満の解離定数を有すると予測され
る。
さらに、所望の抗体を同定するために抗体をスクリーニングするために使用される技術
は、取得された抗体の特性に影響し得る。例えば、抗体が、溶液中で抗原に結合するため
に使用されるものである場合、溶液結合を試験することが望ましい場合がある。種々の異
なる技術が、特に望ましい抗体を同定するために、抗体と抗原との相互作用を試験するた
めに利用可能である。かかる技術には、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴結合アッセイ（
例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）結合アッセイ、Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ
、Ｓｗｅｄｅｎ）、サンドイッチアッセイ（例えば、ＩＧＥＮ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ，Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、Ｍａｒｙｌａｎｄの常磁性ビーズシステム
）、ウエスタンブロット、免疫沈降アッセイおよび免疫組織化学が含まれる。
ＧＤＦ１５またはＴβＲＩＩアンタゴニストである核酸化合物のカテゴリーの例には、
アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ構築物および触媒的核酸構築物が含まれる。核酸化合物は、
一本鎖または二本鎖であり得る。二本鎖化合物は、オーバーハングまたは非相補性の領域
もまた含み得、ここで、これらの鎖の一方または他方は、一本鎖である。一本鎖化合物は
、自己相補性の領域を含み得、これは、この化合物が、二重らせん構造の領域を有する、
いわゆる「ヘアピン」または「ステムループ」構造を形成することを意味する。核酸化合
物は、全長ＧＤＦ１５核酸配列またはＴβＲＩＩ核酸配列の１０００以下、５００以下、
２５０以下、１００以下または５０、３５、３０、２５、２２、２０もしくは１８以下の
ヌクレオチドからなる領域に対して相補的なヌクレオチド配列を含み得る。相補性の領域
は、好ましくは、少なくとも８ヌクレオチド、および任意選択で少なくとも１０または少
なくとも１５ヌクレオチド、例えば、１５～２５ヌクレオチドの間である。相補性の領域
は、標的転写物のイントロン、コード配列または非コード配列、例えば、コード配列部分
内に含まれ得る。一般に、核酸化合物は、約８～約５００ヌクレオチドまたは塩基対長の
長さ、例えば、約１４～約５０ヌクレオチドの長さを有する。核酸は、ＤＮＡ（特に、ア
ンチセンスとしての使用のため）、ＲＮＡまたはＲＮＡ：ＤＮＡハイブリッドであり得る
。任意の１つの鎖は、ＤＮＡおよびＲＮＡの混合物、ならびにＤＮＡまたはＲＮＡのいず
れとしても容易に分類できない修飾された形態を含み得る。同様に、二本鎖化合物は、Ｄ
ＮＡ：ＤＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡまたはＲＮＡ：ＲＮＡであり得、任意の１つの鎖はまた、
ＤＮＡおよびＲＮＡの混合物、ならびにＤＮＡまたはＲＮＡのいずれとしても容易に分類
できない修飾された形態を含み得る。核酸化合物は、骨格（ヌクレオチド間連結を含む、
天然核酸中の糖－リン酸部分）または塩基部分（天然核酸のプリンまたはピリミジン部分
）への１または複数の修飾を含む、種々の修飾のいずれかを含み得る。アンチセンス核酸
化合物は、好ましくは、約１５～約３０ヌクレオチドの長さを有し、血清において、細胞
において、または化合物が送達される可能性が高い場所、例えば経口送達された化合物の
場合には胃において、吸入された化合物については肺において、安定性などの特徴を改善
するための、１または複数の修飾を含むことが多い。ＲＮＡｉ構築物の場合、標的転写物
に対して相補的な鎖は、一般に、ＲＮＡまたはその修飾物である。他方の鎖は、ＲＮＡ、
ＤＮＡまたは任意の他のバリエーションであり得る。二本鎖または一本鎖「ヘアピン」Ｒ
ＮＡｉ構築物の二重鎖部分は、好ましくは、Ｄｉｃｅｒ基質として機能する限り、１８～
４０ヌクレオチド長の長さ、および任意選択で約２１～２３ヌクレオチド長の長さを有す
る。触媒的または酵素的核酸は、リボザイムまたはＤＮＡ酵素であり得、修飾された形態
もまた含み得る。核酸化合物は、生理学的条件下およびナンセンスまたはセンス制御がほ
とんどまたは全く影響を有さない濃度において細胞と接触させた場合、約５０％、７５％
、９０％またはそれ超、標的の発現を阻害し得る。核酸化合物の影響を試験するための好
ましい濃度は、１、５および１０マイクロモルである。
６．スクリーニングアッセイ
ある特定の態様では、本発明は、ＧＤＦ１５－ＴβＲＩＩシグナル伝達経路のアゴニス
トまたはアンタゴニストである化合物（薬剤）を同定するための、ＴβＲＩＩポリペプチ
ド（例えば、可溶性ＴβＲＩＩポリペプチド）およびＧＤＦ１５ポリペプチドの使用に関
する。このスクリーニングによって同定された化合物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＧＤＦ１５
シグナル伝達活性をモジュレートするそれらの能力を評価するために、試験され得る。任
意選択で、これらの化合物は、ｉｎ ｖｉｖｏで組織成長をモジュレートするそれらの能
力を評価するために、動物モデルにおいてさらに試験され得る。
ＧＤＦ１５およびＴβＲＩＩポリペプチドを標的化することによって組織成長をモジュ
レートするための治療剤についてスクリーニングするための多数のアプローチが存在する
。ある特定の実施形態では、化合物のハイスループットスクリーニングが、ＧＤＦ１５ま
たはＴβＲＩＩ媒介性の細胞シグナル伝達を乱す薬剤を同定するために、実施され得る。
ある特定の実施形態では、このアッセイは、ＧＤＦ１５へのＴβＲＩＩポリペプチドの結
合を特異的に阻害または低減させる化合物をスクリーニングおよび同定するために実施さ
れる。あるいは、このアッセイは、ＧＤＦ１５へのＴβＲＩＩポリペプチドの結合を増強
する化合物を同定するために使用され得る。さらなる実施形態では、これらの化合物は、
ＧＤＦ１５またはＴβＲＩＩポリペプチドと相互作用するそれらの能力によって同定され
得る。
種々のアッセイ形式が、本開示に照らして十分であるが、それにもかかわらず、本明細
書に明示的に記載されていないアッセイ形式が、当業者によって理解される。本明細書に
記載されるように、本発明の試験化合物（薬剤）は、任意のコンビナトリアルケミカル方
法によって創出され得る。あるいは、これらの対象化合物は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ
ｖｉｔｒｏで合成された天然に存在する生体分子であり得る。組織成長のモジュレータ
ーとして作用するそれらの能力について試験される化合物（薬剤）は、例えば、細菌、酵
母、植物もしくは他の生物によって産生され得（例えば、天然産物）、化学的に産生され
得（例えば、ペプチド模倣物を含む小分子）、または組換え産生され得る。本発明によっ
て企図される試験化合物には、非ペプチジル有機分子、ペプチド、ポリペプチド、ペプチ
ド模倣物、糖、ホルモンおよび核酸分子が含まれる。具体的な実施形態では、この試験薬
剤は、約２，０００ダルトン未満の分子量を有する小さい有機分子である。
本発明の試験化合物は、単一の個別の実体として提供され得るか、またはコンビナトリ
アルケミストリーなどによって作製された、より高い複雑度のライブラリーにおいて提供
され得る。これらのライブラリーは、例えば、アルコール、アルキルハライド、アミン、
アミド、エステル、アルデヒド、エーテルおよび他のクラスの有機化合物を含み得る。試
験系への試験化合物の提示は、特に初期スクリーニングステップでは、単離された形態の
化合物でまたは化合物の混合物としてのいずれかであり得る。任意選択で、これらの化合
物は、他の化合物で任意選択で誘導体化され得、化合物の単離を促進する誘導体化基を有
し得る。誘導体化基の非限定的な例には、ビオチン、フルオレセイン、ジゴキシゲニン（
ｄｉｇｏｘｙｇｅｎｉｎ）、緑色蛍光タンパク質、同位体、ポリヒスチジン、磁性ビーズ
、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、光活性化可能なクロスリンカーまたは
それらの任意の組合せが含まれる。
化合物および天然抽出物のライブラリーを試験する多くの薬物スクリーニングプログラ
ムでは、ハイスループットアッセイが、所与の期間に調査される化合物の数を最大化する
ために、望ましい。精製または半精製のタンパク質を用いて誘導され得るものなどの無細
胞系で実施されるアッセイは、迅速な開発と試験化合物によって媒介される分子標的にお
ける変更の比較的容易な検出とを可能にするように生み出され得るという点で、「一次」
スクリーニングとして好ましいことが多い。さらに、試験化合物の細胞毒性またはバイオ
アベイラビリティの影響は、一般に、ｉｎ ｖｉｔｒｏの系では無視され得、その代わり
に、このアッセイは、ＴβＲＩＩポリペプチドとＧＤＦ１５との結合親和性の変更として
現れ得るような、分子標的に対する薬物の影響に主に焦点を当てる。
単に例示するために、本発明の例示的なスクリーニングアッセイでは、目的の化合物は
、通常はＧＤＦ１５と結合することが可能な単離および精製されたＴβＲＩＩポリペプチ
ドと接触させられる。次いで、化合物およびＴβＲＩＩポリペプチドの混合物に、ＴβＲ
ＩＩリガンドを含む組成物が添加される。ＴβＲＩＩ／ＧＤＦ１５複合体の検出および定
量化は、ＴβＲＩＩポリペプチドとＧＤＦ１５との複合体形成を阻害（または強化）する
際の化合物の効力を決定するための手段を提供する。この化合物の効力は、種々の濃度の
試験化合物を使用して取得されたデータから、用量反応曲線を生成することによって評価
され得る。さらに、対照アッセイもまた、比較のためのベースラインを提供するために実
施され得る。例えば、対照アッセイでは、単離および精製されたＧＤＦ１５が、ＴβＲＩ
Ｉポリペプチドを含む組成物に添加され、ＴβＲＩＩ／ＧＤＦ１５複合体の形成が、試験
化合物の非存在下で定量化される。一般に、反応物が混合され得る順序は、変動され得、
同時に混合され得ることが理解される。さらに、精製されたタンパク質の代わりに、細胞
抽出物および溶解物が、適切な無細胞アッセイ系を提供するために使用され得る。
ＴβＲＩＩポリペプチドとＧＤＦ１５との複合体形成は、種々の技術によって検出され
得る。例えば、複合体の形成のモジュレーションは、イムノアッセイまたはクロマトグラ
フィー検出により、例えば、検出可能に標識されたタンパク質、例えば、放射能標識され
た（例えば、３２Ｐ、３５Ｓ、１４Ｃもしくは３Ｈ）、蛍光標識された（例えば、ＦＩＴ
Ｃ）、または酵素的に標識されたＴβＲＩＩポリペプチドまたはＧＤＦ１５を使用して、
定量化され得る。
ある特定の実施形態では、本発明は、ＴβＲＩＩポリペプチドとその結合タンパク質と
の相互作用の程度を、直接的または間接的にのいずれかで測定する際の、蛍光偏光アッセ
イおよび蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）アッセイの使用を企図する。さらに、他の
様式の検出、例えば、光導波路（ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２６４３２および米国特許第５，
６７７，１９６号）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、表面電荷センサーおよび表面力セ
ンサーに基づくものが、本発明の多くの実施形態と適合性である。
さらに、本発明は、ＴβＲＩＩポリペプチドとその結合タンパク質との相互作用を破壊
または強化する薬剤を同定するための、「ツーハイブリッドアッセイ」としても公知の相
互作用トラップアッセイの使用を企図する。例えば、米国特許第５，２８３，３１７号；
Ｚｅｒｖｏｓら（１９９３年）Ｃｅｌｌ ７２巻：２２３～２３２頁；Ｍａｄｕｒａら（
１９９３年）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６８巻：１２０４６～１２０５４頁；Ｂａｒｔ
ｅｌら（１９９３年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４巻：９２０～９２４頁；および
Ｉｗａｂｕｃｈｉら（１９９３年）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ８巻：１６９３～１６９６頁）を
参照のこと。具体的な実施形態では、本発明は、ＴβＲＩＩポリペプチドとその結合タン
パク質との相互作用を解離させる化合物（例えば、小分子またはペプチド）を同定するた
めの逆ツーハイブリッドシステムの使用を企図する。例えば、ＶｉｄａｌおよびＬｅｇｒ
ａｉｎ、（１９９９年）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２７巻：９１９～２９頁
；ＶｉｄａｌおよびＬｅｇｒａｉｎ、（１９９９年）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌ １７巻：３７４～８１頁；ならびに米国特許第５，５２５，４９０号；同第５，９５
５，２８０号；および同第５，９６５，３６８号を参照のこと。
ある特定の実施形態では、これらの対象化合物は、本発明のＴβＲＩＩまたはＧＤＦ１
５ポリペプチドと相互作用するそれらの能力によって同定される。化合物とＴβＲＩＩま
たはＧＤＦ１５ポリペプチドとの相互作用は、共有結合または非共有結合であり得る。例
えば、かかる相互作用は、光架橋、放射能標識されたリガンド結合およびアフィニティー
クロマトグラフィーを含むｉｎ ｖｉｔｒｏの生化学的方法を使用して、タンパク質レベ
ルで同定され得る（Ｊａｋｏｂｙ ＷＢら、１９７４年、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚ
ｙｍｏｌｏｇｙ ４６巻：１頁）。特定の場合には、これらの化合物は、機構ベースのア
ッセイ、例えば、ＧＤＦ１５またはＴβＲＩＩポリペプチドと結合する化合物を検出する
ためのアッセイにおいてスクリーニングされ得る。これは、固相または液相結合事象を含
み得る。あるいは、ＧＤＦ１５またはＴβＲＩＩポリペプチドをコードする遺伝子は、細
胞中にレポーター系（例えば、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼまたは緑色蛍光タ
ンパク質）と共にトランスフェクトされ得、好ましくはハイスループットスクリーニング
によってライブラリーに対してスクリーニングされ得、またはライブラリーの個々のメン
バーを用いてスクリーニングされ得る。他の機構ベースの結合アッセイ、例えば、自由エ
ネルギーにおける変化を検出する結合アッセイが、使用され得る。結合アッセイは、ウェ
ル、ビーズもしくはチップに固定された、または固定化された抗体によって捕捉された、
またはキャピラリー電気泳動によって分離された標的を用いて、実施され得る。結合した
化合物は、通常は比色または蛍光または表面プラズモン共鳴を使用して、検出され得る。
ある特定の態様では、本発明は、ＧＤＦ１５媒介性の細胞シグナル伝達をモジュレート
（刺激または阻害）するための方法および薬剤を提供する。したがって、同定された任意
の化合物は、ＧＤＦ１５シグナル伝達をモジュレートするそれらの能力を確認するために
、細胞または組織全体中で、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで試験され得る。当
該分野で公知の種々の方法が、この目的のために利用され得る。
７．例示的な治療的使用
本明細書で使用する場合、障害または状態を「予防する」治療薬とは、統計学的試料に
おいて、未処置の対照試料と比較して、処置した試料において障害もしくは状態の発生を
低減させ、あるいは未処置の対照試料と比較して、障害もしくは状態の１もしくは複数の
症状の発症を遅延またはその重症度を低減させる化合物を指す。用語「処置する」は、本
明細書で使用する場合、状態が一旦確立された後の、その状態の寛解または排除を含む。
いずれの場合にも、予防または処置は、医師によって提供される診断および治療剤の投与
の意図した結果において、識別され得る。
本開示は、上述のＴβＲＩＩ－Ｆｃ融合タンパク質または核酸アンタゴニスト（例えば
、アンチセンスもしくはｓｉＲＮＡ）を含む、本明細書で以下、集合的に「治療剤」と称
されるＴβＲＩＩポリペプチドの有効量を対象に投与することによって、ＴＧＦβスーパ
ーファミリーメンバーと関連する疾患または状態を処置または予防する方法を提供する。
一部の実施形態では、この疾患または状態は、調節不全のＧＤＦ１５、ＴＧＦβ１または
ＴＧＦβ３シグナル伝達と関連する。特定の心血管または血管障害を処置するための方法
および組成物もまた提供される。さらに、本開示は、がんを処置または予防するための方
法および組成物を提供する。さらに、本開示は、線維性障害および状態を処置または予防
するための方法および組成物を提供する。
特に、本開示のポリペプチド治療剤は、慢性の血管または心血管疾患を処置または予防
するために有用である。この種類の例示的な障害には、心臓疾患（心筋疾患、心筋梗塞、
狭心症および心臓弁膜症を含む）；腎疾患（慢性糸球体炎症、糖尿病性腎不全およびルー
プス関連腎炎症を含む）；アテローム動脈硬化症または他の型の動脈硬化症と関連する障
害（脳卒中、脳出血、くも膜下出血、狭心症および腎動脈硬化症を含む）；血栓性障害（
脳血栓症、血栓性腸管壊死を含む）；糖尿病の合併症（糖尿病関連網膜疾患、白内障、糖
尿病関連腎疾患、糖尿病関連神経病理、糖尿病関連壊疽および糖尿病関連慢性感染を含む
）；血管炎症障害（全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、関節動脈炎症、大細胞型動
脈炎症、川崎病、高安動脈炎、チャーグ・ストラウス症候群およびヘノッホ・シェーンラ
イン紫斑病）；糖尿病性脈管障害；ならびに心障害、例えば、先天性心臓疾患、心筋症（
例えば、拡張型、肥大型、拘束性心筋症）、およびうっ血性心不全が含まれるがこれらに
限定されない。例示的な障害には、遺伝性出血性末梢血管拡張症（ＨＨＴ）、マルファン
症候群、ロイス・ディーツ症候群、家族性胸部大動脈瘤症候群、動脈蛇行症候群、子癇前
症および再狭窄がさらに含まれるがこれらに限定されない。
ＴβＲＩＩポリペプチドは、単独で、またはＴＧＦβ関連の心血管障害および／もしく
は状態を処置するために有用な治療剤などの１もしくは複数の薬剤もしくは治療モダリテ
ィと組み合わせて、対象に投与され得る。ある特定の実施形態では、第２の薬剤または治
療モダリティは、血管形成術、ベータブロッカー、血圧降下薬、強心薬、抗血栓薬、血管
拡張薬、ホルモンアンタゴニスト、エンドセリンアンタゴニスト、カルシウムチャネルブ
ロッカー、ホスホジエステラーゼインヒビター、アンジオテンシン２型アンタゴニストお
よび／またはサイトカインブロッカー／インヒビターのうちの１または複数から選択され
る。
特に、本開示のポリペプチド治療剤は、がん（腫瘍）を処置または予防するために有用
である。用語「がん」および「がん性」とは、調節されない細胞の成長／増殖を典型的に
は特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すまたは記述する。がんまたは新生物
障害の例には、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫および白血病が含まれるがこれらに限定され
ない。かかるがんのより特定の例には、扁平上皮がん、腹膜のがん、肝細胞がん、胃腸管
がん、膵臓がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、ヘパトーマ
、乳房がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、前
立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝癌、胃がん、腸管がん、皮膚がん、骨がん、胃の
がん、黒色腫、および頭頸部扁平上皮がんを含む種々の型の頭頸部がんが含まれる。新生
物障害および関連状態の他の例には、食道癌、莢膜細胞腫、男化腫瘍、子宮内膜増殖症、
子宮内膜症、線維肉腫、絨毛癌、上咽頭癌、喉頭癌、肝芽腫、カポジ肉腫、皮膚癌、血管
腫、海綿状血管腫、血管芽細胞腫、網膜芽細胞腫、星状細胞腫、神経膠芽腫、シュワン細
胞腫、乏突起神経膠腫、髄芽細胞腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、骨原性肉腫、平滑筋肉
腫、尿路癌、ウィルムス腫瘍、腎細胞癌、前立腺癌、母斑症（ｐｈａｋｏｍａｔｏｓｅｓ
）と関連する異常な血管増殖、およびメグズ症候群が含まれる。本明細書に記載される治
療剤による処置に特に適したがんは、以下のうちの１または複数を特徴とし得る：このが
んは、腫瘍もしくは血清において検出可能な上昇したＴβＲＩＩレベル、増加したＧＤＦ
１５、ＴＧＦβ１もしくはＴＧＦβ３の発現レベルもしくは生物学的活性を有し、転移性
であるか、もしくは転移性になる危険性があり、またはそれらの任意の組合せである。
かかる方法のある特定の実施形態では、１または複数のポリペプチド治療剤は、一緒に
（同時に）または異なる時点で（順次）、投与され得る。さらに、ポリペプチド治療剤は
、がんを処置するためまたは血管新生を阻害するために、別の型の化合物と共に投与され
得る。
ある特定の実施形態では、本開示の対象方法は、単独で使用され得る。あるいは、これ
らの対象方法は、増殖性障害（例えば、腫瘍）の処置または予防に対して指向された他の
従来の抗がん治療アプローチと組み合わせて使用され得る。例えば、かかる方法は、予防
的がん予防、手術後のがんの再発および転移の予防において、ならびに他の従来のがん治
療のアジュバントとして、使用され得る。本開示は、従来のがん治療（例えば、化学療法
、放射線療法、光線療法、免疫療法および手術）の有効性が、対象ポリペプチド治療剤の
使用を介して増強され得ることを認識している。
多様な従来の化合物が、抗新生物または抗がん活性を有することが示されている。これ
らの化合物は、固形腫瘍を収縮させるため、転移およびさらなる成長を予防するため、ま
たは白血病もしくは骨髄の悪性腫瘍における悪性細胞の数を減少させるための化学療法に
おいて、医薬剤として使用されてきた。化学療法は、種々の型の悪性腫瘍を処置する際に
有効であるが、多くの抗新生物化合物は、望ましくない副作用を誘導する。２またはそれ
超の異なる処置が組み合わされる場合、これらの処置は、相乗的に作用し得、処置の各々
の投薬量の低減を可能にし、それによって、より高い投薬量において各化合物によっても
たらされる有害な副作用を低減させることが示されている。他の例では、処置に対して抵
抗性の悪性腫瘍は、２またはそれ超の異なる処置の組合せ治療に応答し得る。
本明細書に開示される治療剤が、併用してまたは順次のいずれかで、別の従来の抗新生
物剤と組み合わせて投与される場合、かかる治療剤は、抗新生物剤の治療効果を増強し得
る、またはかかる抗新生物剤に対する細胞の耐性を克服し得る。これは、抗新生物剤の投
薬量の減少を可能にし、それによって、望ましくない副作用を低減させ、または耐性細胞
における抗新生物剤の有効性を回復させる。
本開示によれば、本明細書に記載されるポリペプチド治療剤は、疾患の処置のために他
の組成物および手順と組み合わせて使用され得る。例えば、腫瘍は、ＴβＲＩＩポリペプ
チドと組み合わせた手術、放射線療法または化学療法で従来通りに処置され得、次いで、
ＴβＲＩＩポリペプチドが、微小転移の休眠を延長させ、任意の残留原発性腫瘍を安定化
させるために、患者に引き続いて投与され得る。
本発明のある特定の態様では、ＴβＲＩＩポリペプチドとの組合せ腫瘍治療に有用な他
の治療剤には、他のがん治療が含まれる：例えば、手術、細胞傷害剤、照射または放射性
物質の投与が関与する放射線学的処置、化学療法剤、抗ホルモン剤、成長阻害剤、抗新生
物組成物、ならびに本明細書に列挙され当該分野で公知の抗がん剤による処置、またはそ
れらの組合せ。
用語「細胞傷害剤」とは、本明細書で使用する場合、細胞の機能を阻害もしくは防止す
る、および／または細胞の破壊を引き起こす、物質を指す。この用語は、放射性同位体（
例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５
３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、およびＬｕの放射性同位体）、化学療法剤、例えば、メトトレ
キセート、アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｉｃｉｎ）、ビンカアルカロイド（ビンクリ
スチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシ
ンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他のインターカレート剤、酵素およびそれ
らの断片、例えば、核酸分解酵素、抗生物質、ならびに毒素、例えば、小分子毒素、また
はそれらの断片および／もしくはバリアントを含む、細菌、真菌、植物もしくは動物起源
の酵素的に活性な毒素、ならびに以下に開示する種々の抗腫瘍剤もしくは抗がん剤を含む
ことを意図する。他の細胞傷害剤は、以下に記載されている。殺腫瘍剤は、腫瘍細胞の破
壊を引き起こす。
「化学療法剤」は、がんの処置において有用な化学的化合物である。化学療法剤の例に
は、アルキル化剤、例えば、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファ
ミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルフ
ァン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドパ、カ
ルボコン、メツレドパおよびウレドパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエ
チレンホスホラミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレ
ンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）
およびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む、
エチレンイミンおよびメチルメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニ
ン（具体的には、ブラタシンおよびブラタシノン）；デルタ－９－テトラヒドロカンナビ
ノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ－ラパコン；ラパコー
ル；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴ
ＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））
、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、および９－アミノカンプトテシンを含む）
；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンお
よびビセレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシ
ド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラス
タチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含
む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；ナイ
トロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、シクロホスファミ
ド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミン酸化物塩酸塩
、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド
、ウラシルマスタード；ニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）、例えば、カルムスチ
ン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチン（ｒａ
ｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマ
イシン、特に、カリチアマイシンガンマールおよびカリチアマイシンオメガール（例えば
、Ａｇｎｅｗ、Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ．、３３巻：１８３～１８６頁
（１９９４年）を参照のこと）；ディネマイシンＡを含むディネマイシン；エスペラミシ
ン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連の色素タンパク質エンジイン抗生物
質発色団）、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン、
アウスラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カル
ミノマイシン、カルチノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダ
クチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロ
イシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシ
ン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシ
ドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシ
ン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、
オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシ
ン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメク
ス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗薬、例えば、メトトレキセートおよび５－フル
オロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、メトトレキセート、
プテロプテリン、トリメトレキセート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６－メ
ルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタ
ビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジ
ン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カル
ステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テス
トラクトン；抗副腎剤、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補
充剤、例えば、フォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブ
リン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキセ
ート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デメコルチン；ジアジコン；エフロルニチン（ｅｌｆｏ
ｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；
ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；マイタンシノイド、例えば、マイタンシン
およびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリ
ン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２－エチルヒド
ラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）ポリサッカライド複合体（ＪＨＳ Ｎａｔ
ｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフ
ィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロ
ロトリエチルアミン；トリコテシン（特に、Ｔ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよ
びアンギジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳ
ＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトー
ル；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；チオテパ；タキソイ
ド、例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓ
ｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（
商標）パクリタキセルのＣｒｅｍｏｐｈｏｒなしのアルブミン操作したナノ粒子製剤（Ａ
ｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅ
ｒｇ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドセタキセル（ｄｏｘｅ
ｔａｘｅｌ）（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ
）；クロラムブシル；ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））；６－チオグアニン；
メルカプトプリン；メトトレキセート；白金アナログ、例えば、シスプラチンおよびカル
ボプラチン；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；白金；エトポシド（ＶＰ－
１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商
標））；オキサリプラチン；ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）；ビノレルビン（Ｎ
ＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；エダトレキセート；ダウノマイシン；
アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ ２０００；
ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；カペシ
タビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））；上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸もし
くは誘導体；ならびに上記の２もしくはそれ超の組合せ、例えば、シクロホスファミド、
ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾロンの組合せ治療の略称ＣＨＯＰ、な
らびに５－ＦＵおよびロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ
（商標））を用いる処置レジメンの略称ＦＯＬＦＯＸが含まれる。
がんの成長を促進し得るホルモンの影響を調節、低減、遮断または阻害するように作用
し、全身性または全身処置の形態であることが多い抗ホルモン剤もまた、この定義に含ま
れる。これらは、ホルモン自体であり得る。例には、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶ
ＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ＥＶＩＳＴＡ（登録商標）ラロキシフェ
ン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフ
ェン、ＬＹｌ １７０１８、オナプリストンおよびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）トレミ
フェンを含む、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥ
ＲＭ）；抗プロゲステロン剤；エストロゲン受容体下方調節剤（ＥＲＤ）；卵巣を抑制ま
たは停止させるように機能する薬剤、例えば、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ
）アゴニスト、例えば、ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）およびＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標）酢
酸リュープロリド、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリンおよびトリプトレリン（ｔｒｉｐｔ
ｅｒｅｌｉｎ）；他の抗アンドロゲン剤、例えば、フルタミド、ニルタミドおよびビカル
タミド；ならびに副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害する
アロマターゼインヒビター、例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、Ｍ
ＥＧＡＳＥ（登録商標）酢酸メゲストロール、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメス
タン、ホルメスタン、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳ ＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥ
ＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾールおよびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾー
ルなどが含まれる。さらに、化学療法剤のかかる定義には、ビスホスホネート、例えば、
クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）もしくはＯＳＴＡＣ（登録商標）
）、ＤＩＤＲＯＣ ＡＬ（登録商標）エチドロネート、ＮＥ－５８０９５、ＺＯＭＥＴ
Ａ（登録商標）ゾレドロン酸／ゾレドロネート、ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標）アレンドロ
ネート、ＡＲＥＤＩＡ（登録商標）パミドロネート、ＳＫＥＬＩＤ（登録商標）チルドロ
ネートまたはＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標）リセドロネート；ならびにトロキサシタビン（
１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチ
ド、特に、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害する
もの、例えば、ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓおよび上皮増殖因子受容体（ＥＧ
Ｆ－Ｒ）など；ワクチン、例えば、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン、ならびに
遺伝子治療ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥ
ＣＴＩＮ（登録商標）ワクチンおよびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；ＬＵＲＴＯＴＥ
ＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１インヒビター；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒ
ｍＲＨ；二トシル酸ラパチニブ（ＧＷ５７２０１６としても公知のＥｒｂＢ－２およびＥ
ＧＦＲ二重チロシンキナーゼ小分子インヒビター）；ならびに上記のいずれかの薬学的に
許容される塩、酸または誘導体が含まれる。
「成長阻害剤」とは、本明細書で使用する場合、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖ
ｏのいずれかで細胞の成長を阻害する化合物または組成物を指す。したがって、成長阻害
剤は、Ｓ期にある細胞の百分率を顕著に低減させる薬剤であり得る。成長阻害剤の例には
、細胞周期の進行を（Ｓ期以外の場所において）遮断する薬剤、例えば、Ｇ１停止および
Ｍ期停止を誘導する薬剤が含まれる。古典的なＭ期ブロッカーには、ビンカ（ビンクリス
チンおよびビンブラスチン）、タキサン、ならびにトポイソメラーゼＩＩインヒビター、
例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシドおよびブレオマイ
シンが含まれる。ＤＮＡアルキル化剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカル
バジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５－フルオロウラシルおよ
びａｒａ－Ｃなどの、Ｇ１を停止させる薬剤はまた、Ｓ期停止まで波及する。さらなる情
報は、Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ、Ｍｅｎｄｅｌｓ
ｏｈｎおよびＩｓｒａｅｌ編、第１章、Ｍｕｒａｋａｍｉらによる表題「Ｃｅｌｌ ｃｙ
ｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ， ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ， ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌ
ａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ」（ＷＢ Ｓａｕｎｄｅｒｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、１９
９５年）、特に１３頁において見出すことができる。タキサン（パクリタキセルおよびド
セタキセル）は、共にイチイの木から誘導された抗がん薬物である。ヨーロッパイチイか
ら誘導されたドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎ
ｃ Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙ
ｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成アナログである。パクリタキセルおよびドセタキセルは
、チューブリンダイマーからの微小管のアセンブリを促進し、脱重合を防止することによ
って微小管を安定化して、細胞における有糸分裂の阻害を生じる。
なお他の実施形態では、ＴβＲＩＩポリペプチドは、線維症の処置または予防において
有用であり得る。本明細書で使用する場合、用語「線維症」とは、臓器または組織におけ
る細胞による過剰な線維性結合組織の異常な形成または発生を指す。線維症に関連するプ
ロセスは、正常な組織形成または修復の一部として生じ得るが、これらのプロセスの調節
不全は、組織または臓器の機能を進行性に損なう、変更された細胞組成および過剰な結合
組織沈着をもたらし得る。線維性組織の形成は、修復または反応性プロセスから生じ得る
。線維性障害または状態には、血管疾患、例えば、心疾患、大脳疾患および末梢血管疾患
、ならびに心臓、皮膚、腎臓、腹膜、腸および肝臓を含む組織および臓器系と関連する線
維増殖性障害（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＷｙｎｎ、２００４年、Ｎａ
ｔ Ｒｅｖ ４巻：５８３～５９４頁に開示されている）が含まれるがこれらに限定され
ない。処置され得る例示的な障害には、傷害／線維症と関連する腎症、例えば、糖尿病と
関連する慢性腎症（例えば、糖尿病性腎症）、ループス、強皮症、糸球体腎炎、巣状分節
性糸球体硬化症およびＩｇＡ腎症を含む、腎線維症；腸線維症、例えば、強皮症および放
射線誘発腸線維症；肝臓線維症、例えば、硬変、アルコール誘発性肝臓線維症、胆管傷害
、原発性胆汁性肝硬変、感染またはウイルス誘導性肝臓線維症、先天性肝線維症および自
己免疫性肝炎；ならびに他の線維性状態、例えば、嚢胞性線維症、心内膜心筋線維症、縦
隔線維症、サルコイドーシス、強皮症、脊髄傷害／線維症、骨髄線維症、血管性再狭窄、
アテローム動脈硬化症、注射線維症（これは、特に小児における筋内注射の合併症として
生じ得る）、心内膜心筋線維症、後腹膜線維症および腎性全身性線維症が含まれるがこれ
らに限定されない。
本明細書で使用する場合、用語「線維性障害」、「線維性状態」および「線維性疾患」
は、線維症を特徴とする障害、状態または疾患を指すために、相互交換可能に使用される
。線維性障害の例には、硬化性障害（例えば、強皮症、アテローム動脈硬化症、びまん性
全身性硬化症）、血管性線維症、膵臓線維症、肝臓線維症（例えば、硬変）、腎線維症、
筋骨格線維症、心線維症（例えば、心内膜心筋線維症、特発性心筋症）、皮膚線維症（例
えば、強皮症、外傷後、手術皮膚瘢痕、ケロイドおよび皮膚ケロイド形成）、眼線維症（
例えば、緑内障、眼の硬化症、結膜および角膜瘢痕、ならびに翼状片）、骨髄線維症、進
行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、慢性移植片対宿主病、ペロニー病、膀胱鏡検査後尿道狭窄
症、特発性および薬理学的に誘導された後腹膜線維症、縦隔線維症、増殖性線維症、新生
物性線維症、デュピュイトラン病、狭窄、神経瘢痕、皮膚瘢痕および放射線誘発線維症が
含まれるがこれらに限定されない。
本明細書で使用する場合、細胞の線維性応答の阻害には、肝臓（もしくは肝臓組織）内
の１もしくは複数の細胞；腎臓（もしくは腎組織）内の１もしくは複数の細胞；筋肉組織
内の１もしくは複数の細胞；心臓（もしくは心組織）内の１もしくは複数の細胞；膵臓内
の１もしくは複数の細胞；皮膚内の１もしくは複数の細胞；骨内の１もしくは複数の細胞
、脈管構造内の１もしくは複数の細胞、１もしくは複数の幹細胞、または眼内の１もしく
は複数の細胞の線維性応答の阻害が含まれるがこれらに限定されない。
本発明は、１または複数の他の治療モダリティと組み合わせたＴβＲＩＩポリペプチド
の使用を企図する。したがって、ＴβＲＩＩポリペプチドの使用に加えて、線維性障害を
処置するための１または複数の「標準的な」治療もまた、対象に投与することができる。
例えば、これらのＴβＲＩＩポリペプチドは、細胞毒、免疫抑制剤、放射性毒薬剤および
／または治療的抗体と組み合わせて（即ち、これらと一緒に）投与され得る。本発明によ
って企図される特定の共治療薬には、ステロイド（例えば、コルチコステロイド、例えば
、プレドニゾン）、免疫抑制剤および／または抗炎症剤（例えば、ガンマ－インターフェ
ロン、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキセート、ペニシラミン、シクロ
スポリン、コルヒチン、抗胸腺細胞グロブリン、ミコフェノール酸モフェチルおよびヒド
ロキシクロロキン）、細胞傷害性薬物、カルシウムチャネルブロッカー（例えば、ニフェ
ジピン）、アンジオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥ）インヒビター、パラ－アミ
ノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、ジメチルスルホキシド、トランスフォーミング増殖因子ベータ
（ＴＧＦβ）インヒビター、インターロイキン－５（ＩＬ－５）インヒビターおよび凡カ
スパーゼインヒビターが含まれるがこれらに限定されない。
ＴβＲＩＩポリペプチドと組み合わせて使用され得るさらなる抗線維性剤には、レクチ
ン（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，０２６，２
８３号に記載されている）、ならびにＷｙｎｎら（その全内容が参照により本明細書に組
み込まれる、２００７年、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１７巻：５２４～５２９頁）
によって記載される抗線維性剤が含まれるがこれらに限定されない。例えば、さらなる抗
線維性剤および治療には、種々の抗炎症性／免疫抑制／細胞傷害性薬物（コルヒチン、ア
ザチオプリン、シクロホスファミド、プレドニゾン、サリドマイド、ペントキシフィリン
およびテオフィリンを含む）、ＴＧＦβシグナル伝達修飾剤（リラキシン、ＳＭＡＤ７、
ＨＧＦおよびＢＭＰ７、ならびにＴＧＦβＩ、ＴβＲＩ、ＴβＲＩＩ、ＥＧＲ－Ｉおよび
ＣＴＧＦインヒビターを含む）、サイトカインおよびサイトカイン受容体アンタゴニスト
（ＩＬ－１β、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１３、ＩＬ－２１、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－１３
Ｒα１、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、オンコスタチンＭ、ＷＩＳＰ－ＩおよびＰＤＧＦの
インヒビター）、サイトカインおよびケモカイン（ｃｈｅｍｏｋｉｎｃ）（ＩＦＮ－γ、
ＩＦＮ－α／β、ＩＬ－１２、ＩＬ－１０、ＨＧＦ、ＣＸＣＬ１０およびＣＸＣＬ１１）
、ケモカインアンタゴニスト（ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＬ２、ＣＣ
Ｌ３、ＣＣＬ６、ＣＣＬ１７およびＣＣＬ１８のインヒビター）、ケモカイン受容体アン
タゴニスト（ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ２およびＣＸＣＲ４の
インヒビター）、ＴＬＲアンタゴニスト（ＴＬＲ３、ＴＬＲ４およびＴＬＲ９のインヒビ
ター）、血管新生アンタゴニスト（ＶＥＧＦ特異的抗体およびアデノシンデアミナーゼ補
充療法）、血圧降下薬物（ベータブロッカーならびにＡＮＧ１１、ＡＣＥおよびアルドス
テロンのインヒビター）、血管作動性物質（ＥＴ－１受容体アンタゴニストおよびボセン
タン（ｂｏｓｅｔａｎ））、コラーゲンを合成およびプロセシングする酵素のインヒビタ
ー（プロリルヒドロキシラーゼのインヒビター）、Ｂ細胞アンタゴニスト（リツキシマブ
）、インテグリン／接着分子アンタゴニスト（α１β１およびαｖβ６インテグリンを遮
断する分子、ならびにインテグリン関連キナーゼのインヒビター、ならびにＩＣＡＭ－Ｉ
およびＶＣＡＭ－Ｉに特異的な抗体）、筋線維芽細胞を標的化するアポトーシス促進性薬
物、ＭＭＰインヒビター（ＭＭＰ２、ＭＭＰ９およびＭＭＰ１２のインヒビター）、なら
びにＴＩＭＰインヒビター（ＴＩＭＰ－１に特異的な抗体）が含まれるがこれらに限定さ
れない。
ＴβＲＩＩポリペプチドおよび共治療剤または共治療は、同じ製剤中で、または別々に
、投与され得る。別々の投与の場合、このＴβＲＩＩポリペプチドは、共治療薬もしくは
共治療の前に、その後に、またはそれと同時発生的に、投与され得る。一方の薬剤は、数
分間から数週間までの範囲の間隔分、他方の薬剤の投与に先行または後続し得る。２また
はそれ超の異なる種類の治療剤が対象に別々に適用される実施形態では、標的組織または
細胞に対して有利に組み合わされた効果をこれらの異なる種類の薬剤がなおも発揮できる
ように、顕著な期間が各送達の時点の間で期限切れにならないことを一般に確実にする。
８．医薬組成物
本明細書に記載される治療剤（例えば、ＴβＲＩＩポリペプチド）は、医薬組成物に製
剤化され得る。本開示に従う使用のための医薬組成物は、１または複数の生理学的に許容
される担体または賦形剤を使用して、従来の様式で製剤化され得る。かかる製剤は、一般
に、ほとんどの規制要件に応じて、実質的に発熱物質を含まない。
ある特定の実施形態では、本開示の治療方法は、全身的に、またはインプラントもしく
はデバイスとして局所的に、組成物を投与するステップを含む。投与される場合、本開示
における使用のための治療組成物は、発熱物質を含まない、生理学的に許容される形態で
ある。これもまた上記のように組成物中に任意選択で含まれ得るＴβＲＩＩシグナル伝達
アンタゴニスト以外の治療的に有用な薬剤が、本明細書に開示される方法において、対象
化合物（例えば、ＴβＲＩＩポリペプチド）と同時にまたは順次に投与され得る。
典型的には、本明細書に開示されるタンパク質治療剤は、非経口で、特に静脈内または
皮下に投与される。非経口投与に適切な医薬組成物は、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、製剤
を意図したレシピエントの血液と等張にする溶質または懸濁化剤もしくは増粘剤を含み得
る、１または複数の薬学的に許容される無菌の等張水性もしくは非水性溶液、分散物、懸
濁物またはエマルジョン、あるいは使用の直前に無菌の注射可能な溶液もしくは分散物へ
と再構成され得る無菌粉末と組み合わせて、１または複数のＴβＲＩＩポリペプチドを含
み得る。本開示の医薬組成物において使用され得る適切な水性および非水性担体の例には
、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエ
チレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物、植物油、例えばオリーブ油、なら
びに注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルが含まれる。適切な流動性は、例
えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散物の場合には必要とされる
粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。
これらの組成物および製剤は、所望の場合、活性成分を含む１または複数の単位投薬形
態を含み得るパックまたはディスペンサーデバイス中に提示され得る。このパックは、例
えば、金属またはプラスチックのホイル、例えば、ブリスターパックを含み得る。このパ
ックまたはディスペンサーデバイスには、投与のための指示書が付随し得る。
さらに、この組成物は、標的組織部位への送達のための形態で、カプセル化または注射
され得る。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、標的組織部位に１または複数の
治療化合物（例えば、ＴβＲＩＩポリペプチド）を送達し、発生中の組織に構造を提供す
ることが可能であり、最適には身体中に吸収されることが可能な、マトリックスを含み得
る。例えば、このマトリックスは、ＴβＲＩＩポリペプチドの緩徐な放出を提供し得る。
かかるマトリックスは、他の植え込まれた医学的適用のために現在使用されている材料か
ら形成され得る。
マトリックス材料の選択は、生体適合性、生分解性、機械的特性、表面的外観および界
面特性に基づく。対象組成物の特定の適用は、適切な製剤を規定する。組成物のための潜
在的マトリックスは、生分解性かつ化学的に規定された硫酸カルシウム、リン酸三カルシ
ウム、ヒドロキシアパタイト、ポリ乳酸およびポリ酸無水物であり得る。骨または皮膚コ
ラーゲンなどの他の潜在的材料は、生分解性であり生物学的に十分規定されている。さら
なるマトリックスは、純粋なタンパク質または細胞外マトリックス構成成分から構成され
る。他の潜在的マトリックスは、非生分解性かつ化学的に規定されており、例えば、焼結
ヒドロキシアパタイト、バイオガラス、アルミネートまたは他のセラミックである。マト
リックスは、上述の型の材料のいずれかの組合せ、例えば、ポリ乳酸およびヒドロキシア
パタイトまたはコラーゲンおよびリン酸三カルシウムから構成され得る。バイオセラミッ
クは、組成、例えば、カルシウム－アルミネート－ホスフェートにおいて変更され得、ポ
アサイズ、粒子サイズ、粒子形状および生分解性を変更するために加工され得る。
ある特定の実施形態では、本発明の方法は、経口でのために、例えば、各々が活性成分
として所定の量の薬剤を含む、カプセル剤、サシェ剤、丸剤、錠剤、ロゼンジ剤（風味付
けした基礎、通常はスクロースおよびアカシアまたはトラガントを使用する）、粉末、顆
粒の形態で、または水性もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁物として、または水中
油もしくは油中水液体エマルジョンとして、またはエリキシル剤もしくはシロップ剤とし
て、またはトローチ剤（不活性基剤、例えば、ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロ
ースおよびアカシアを使用する）として、および／または口腔洗浄薬などとして、投与さ
れ得る。薬剤は、ボーラス、舐剤またはペースト剤としても投与され得る。
経口投与のための固体投薬形態（カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣錠、粉末、顆粒など）
では、本発明の１または複数の治療化合物は、１または複数の薬学的に許容される担体、
例えば、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム、および／または以下のいずれ
かと、混合され得る：（１）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スク
ロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸；（２）バインダー、例えば、
カルボキシメチルセルロース、アルジネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロ
ースおよび／またはアカシアなど；（３）保水剤、例えば、グリセロール；（４）崩壊剤
、例えば、寒天－寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン
酸、特定のシリケートおよび炭酸ナトリウム；（５）溶解遅延剤、例えばパラフィン；（
６）吸収加速剤、例えば、第四級アンモニウム化合物；（７）湿潤剤、例えば、セチルア
ルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなど；（８）吸収剤、例えば、カオリンお
よびベントナイト粘土；（９）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステ
アリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそ
れらの混合物；ならびに（１０）着色剤。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、これらの
医薬組成物は、緩衝剤もまた含み得る。同様の型の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖
などの賦形剤、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを使用するソフトおよびハ
ード充填ゼラチンカプセル剤において、充填剤としても使用され得る。
経口投与のための液体投薬形態には、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマ
ルジョン、溶液、懸濁物、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。活性成分に加えて
、この液体投薬形態は、当該分野で一般に使用される不活性希釈剤、例えば、水または他
の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、
炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコー
ル、１，３－ブチレングリコール、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、
胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアル
コール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれら
の混合物を含み得る。不活性希釈剤に加えて、これらの経口組成物は、アジュバント、例
えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、調味料、着色剤、芳香剤、ならびに防腐
剤もまた含み得る。
懸濁物は、活性化合物に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコ
ール、ポリオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステル、結晶セルロース、
アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天－寒天およびトラガント、ならびに
それらの混合物を含み得る。
本発明の組成物は、アジュバント、例えば、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤もま
た含み得る。微生物の作用の防止は、種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン
、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによって、確実にされ得る
。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを組成物中に含めることもまた、望ましい場
合がある。さらに、注射可能な医薬形態の延長された吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例
えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによって、もたらされ
得る。
投薬レジメンは、本発明の対象化合物（例えば、ＴβＲＩＩポリペプチド）の作用を修
飾する種々の因子を考慮して、担当医によって決定されることが理解される。種々の因子
には、患者の年齢、性別および食餌、重症度疾患、投与の時間、および他の臨床学的因子
が含まれるがこれらに限定されない。任意選択で、投薬量は、再構成において使用される
マトリックスの型および組成物中の化合物の型によって変動し得る。最終組成物への他の
公知の増殖因子の添加もまた、投薬量に影響し得る。進行は、骨の成長および／または修
復の周期的評価、例えば、Ｘ線（ＤＥＸＡを含む）、組織形態計測的決定およびテトラサ
イクリン標識化によって、モニタリングされ得る。
ある特定の実施形態では、本発明は、ＴβＲＩＩポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ産生の
ための遺伝子治療もまた提供する。かかる治療は、上に列挙した障害を有する細胞または
組織中へのＴβＲＩＩポリヌクレオチド配列の導入によって、その治療効果を達成する。
ＴβＲＩＩポリヌクレオチド配列の送達は、キメラウイルスなどの組換え発現ベクターま
たはコロイド分散系を使用して、達成され得る。ＴβＲＩＩポリヌクレオチド配列の治療
的送達には、標的化リポソームの使用が好ましい。
本明細書に教示される遺伝子治療に利用され得る種々のウイルスベクターには、アデノ
ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニア、または、好ましくは、レトロウイルスなどの
ＲＮＡウイルスが含まれる。好ましくは、このレトロウイルスベクターは、マウスまたは
トリのレトロウイルスの誘導体である。単一の外来遺伝子が挿入され得るレトロウイルス
ベクターの例には、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）、ハーベイマウス肉
腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳癌ウイルス（ＭｕＭＴＶ）およびラウス肉腫ウイ
ルス（ＲＳＶ）が含まれるがこれらに限定されない。いくつかのさらなるレトロウイルス
ベクターが、複数の遺伝子を取り込み得る。これらのベクターは全て、形質導入された細
胞が同定および生成され得るように、選択可能なマーカーの遺伝子を移入させ得るまたは
取り込み得る。レトロウイルスベクターは、例えば、糖、糖脂質またはタンパク質を結合
させることによって、標的特異的にされ得る。好ましい標的化は、抗体を使用することに
よって達成される。当業者は、特異的ポリヌクレオチド配列が、ＴβＲＩＩポリヌクレオ
チドを含むレトロウイルスベクターの標的特異的送達を可能にするために、レトロウイル
スゲノム中に挿入され得る、またはウイルスエンベロープと結合し得ることを認識する。
好ましい実施形態では、このベクターは、骨または軟骨へと標的化される。
あるいは、組織培養細胞は、従来のリン酸カルシウムトランスフェクションによって、
レトロウイルス構造遺伝子ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖをコードするプラスミドで直接ト
ランスフェクトされ得る。次いで、これらの細胞は、目的の遺伝子を含むベクタープラス
ミドでトランスフェクトされる。得られた細胞は、培養培地中にレトロウイルスベクター
を放出する。
ＴβＲＩＩポリヌクレオチドのための別の標的化送達系は、コロイド分散系である。コ
ロイド分散系には、高分子複合体、ナノカプセル剤、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに
水中油エマルジョン、ミセル、混合ミセルおよびリポソームを含む脂質ベースの系が含ま
れる。本発明の好ましいコロイド系は、リポソームである。リポソームは、ｉｎ ｖｉｔ
ｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで送達ビヒクルとして有用な人工膜小胞である。ＲＮＡ、ＤＮ
Ａおよびインタクトなビリオンは、水性内部内にカプセル化され得、生物学的に活性な形
態で細胞に送達され得る（例えば、Ｆｒａｌｅｙら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．
Ｓｃｉ．、６巻：７７頁、１９８１年を参照のこと）。リポソームビヒクルを使用した効
率的な遺伝子移入のための方法は、当該分野で公知であり、例えば、Ｍａｎｎｉｎｏら、
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、６巻：６８２頁、１９８８年を参照のこと。リポソームの
組成物は、通常、通常はステロイド、特にコレステロールと組み合わせた、リン脂質の組
合せである。他のリン脂質または他の脂質もまた使用され得る。リポソームの物理的特徴
は、ｐＨ、イオン強度、および二価カチオンの存在に依存する。
リポソーム産生において有用な脂質の例には、ホスファチジル化合物、例えば、ホスフ
ァチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジル
エタノールアミン、スフィンゴ脂質、セレブロシドおよびガングリオシドが含まれる。例
示的なリン脂質には、卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリンお
よびジステアロイルホスファチジルコリンが含まれる。リポソームの標的化もまた、例え
ば、臓器特異性、細胞特異性およびオルガネラ特異性に基づいて可能であり、当該分野で
公知である。
本開示は、ｐＨを調整するための酸および塩基；ならびに狭い範囲内にｐＨを維持する
ための緩衝剤を含むように変動され得る製剤を提供する。
例証
本発明はここまで一般に記載されてきたが、本発明のある特定の実施形態の例示を単に
目的として含まれ、本発明を限定することを意図しない、以下の実施例を参照して、より
容易に理解される。
（実施例１）
生物活性ＧＤＦ１５の生成
ＧＤＦ１５（マクロファージ阻害サイトカイン－１としても公知）が、任意の受容体と
直接的に結合または相互作用することは、生化学的に示されていない。出願人らは、哺乳
動物ＣＨＯ細胞において産生された市販のヒトＧＤＦ１５（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を
使用して、ＧＤＦ１５への高親和性の結合を有するネイティブ受容体を同定することを最
初に試みたが、成功しなかった。特徴的なシステインノットモチーフを含むＴＧＦβスー
パーファミリー中の他のリガンドと同様、成熟ＧＤＦ１５は、成熟ダイマーＧＤＦ１５を
生成するために正準ＲＸＸＲ部位においてフューリン様プロテアーゼによる切断によって
除去されるより大きいプロドメイン（Ｈａｒｒｉｓｏｎら、Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ
ｓ ２９巻：１７４頁、２０１１年；Ｓｈｉら、Ｎａｔｕｒｅ ４７４巻：３４３頁、２
０１１年）を有して合成される。不適当または不適切なリガンド精製は、市販のＧＤＦ１
５の不活性の潜在的な理由であり得たので、出願人らは、ＧＤＦ１５に対して異なる精製
手順を試験した。
ＣＨＯ細胞におけるＧＤＦ１５の安定な発現
出願人らは、さらなる研究のために、ヒトＧＤＦ１５（ｈＧＤＦ１５）およびマウスＧ
ＤＦ１５（ｍＧＤＦ１５）を発現するためにＣＨＯ細胞を使用した。ｈＧＤＦ１５のネイ
ティブ前駆体のアミノ酸配列は、図１に示され、対応するヌクレオチド配列（ネイティブ
配列と比較して、サイレントの単一ヌクレオチド置換を有する）は、図２に示される。ｍ
ＧＤＦ１５前駆体のネイティブアミノ酸およびヌクレオチド配列は、それぞれ図３および
４に示される。ＣＨＯ細胞での発現のために、ヒトまたはマウスのＧＤＦ１５前駆体をコ
ードするＵＣＯＥ（商標）ベースの構築物を、ＣＨＯ－ＰＡＣＥ細胞株中に安定にトラン
スフェクトした。クローンを、１０ｎＭ、２０ｎＭおよび５０ｎＭのメトトレキセートレ
ベルにおいて選択し、次いで、コロニーを形成した任意のクローン（１つのメトトレキセ
ート濃度につき１つまたは２つ）をプールした。発現の安定性を維持しつつＵＣＯＥ（商
標）プールを増幅することは困難であるので、遺伝子増幅は実施しなかった。希釈クロー
ニングの代わりに、高発現プールを同定し、ｈＧＤＦ１５およびｍＧＤＦ１５を生成する
ために使用した。
ヒトＧＤＦ１５の精製
精製を開始するために、ｈＧＤＦ１５を安定に発現するＣＨＯ細胞由来の馴化培地を、
酢酸でｐＨ４．７に調整した。周囲温度で１０分間にわたる培地のインキュベーション後
、沈殿物を遠心分離によって除去した。上清を、０．８μｍ使い捨てフィルターで濾過し
た。ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈ
ｃａｒｅ）を、緩衝液Ａ（２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．７）および緩衝液Ｂ（２０
ｍＭ酢酸ナトリウム、１Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ４．７）で平衡化した。ローディングを１０
０ｃｍ／時間で実施した。カラムを、カラムからそれ以上タンパク質が溶出されなくなる
まで、２０％のＢ（２００ｍＭ ＮａＣｌ）で洗浄し、次いで、０％のＢに洗浄し戻して
任意の残留塩を除去した。タンパク質を、カラムからそれ以上タンパク質が溶出されなく
なるまで、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、６Ｍ尿素、ｐＨ８．０で溶出させ（Ｔｒｉｓ＋尿素プー
ル）、その後、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、６Ｍ尿素、１Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ８．０で溶出させ
た（Ｔｒｉｓ＋尿素＋塩プール）。各プールを、５０ｍＭの４－モルホリンエタンスルホ
ン酸（ＭＥＳ、ｐＨ６．５）中で４℃で一晩透析した。
Ｔｒｉｓ＋尿素＋塩プール中で見出されたＧＤＦ１５は、ウエスタンブロット分析に基
づいて分解されたので、このプールを廃棄した。Ｔｒｉｓ＋尿素プールを、緩衝液Ａ（５
０ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ６．５）および緩衝液Ｂ（５０ｍＭ ＭＥＳ、１Ｍ ＮａＣｌ、ｐ
Ｈ６．５）で予め平衡化したＱ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗカラム
（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にロードした。フロースルーを収集し、カラムを、１
０％のＢ（１００ｍＭ ＮａＣｌ）で洗浄し、その後、１２０ｃｍ／時間で５カラム体積
にわたって１０～５０％のＢ勾配（１００～５００ｍＭ ＮａＣｌ）で洗浄した。ウエス
タンブロットによるフロースルーおよび洗浄画分の評価の後、タンパク質は、フロースル
ー中に主に見出された。このフロースルーを、緩衝液Ａ（水／０．１％ＴＦＡ）および緩
衝液Ｂ（アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ）を用いて、ＨＰＬＣに取り付けた逆相分取Ｃ
４カラム（Ｖｙｄａｃ）上に注入した。４．５ｍＬ／分で１時間にわたる２５～４０％の
Ｂ勾配は、最良の分解能を生じた。収集した画分を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル（Ｓｙｐｒｏ
Ｒｕｂｙ）およびウエスタンブロットによって評価して、遠心分離蒸発器中での濃縮の
ためにそれらを選択した。
マウスＧＤＦ１５の精製
馴化培地のｐＨを、酢酸でｐＨ４．７に調整した。周囲温度で１０分間にわたる培地の
インキュベーション後、沈殿物を遠心分離によって除去した。上清を、０．８μｍ使い捨
てフィルターで濾過した。ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗカラム
（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、緩衝液Ａ（２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．７）
および緩衝液Ｂ（２０ｍＭ酢酸ナトリウム、１Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ４．７）で平衡化した
。ローディングを、１００～１５０ｃｍ／時間で実施し、カラムを、カラムからそれ以上
タンパク質が溶出されなくなるまで、緩衝液Ａで洗浄した。洗浄を、３～４カラム体積に
わたって６０％のＢ（６００ｍＭ ＮａＣｌ）で実施し、その後、３～４カラム体積にわ
たって１００％のＢ（１Ｍ ＮａＣｌ）で溶出した。溶出を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、６Ｍ
尿素、ｐＨ８．０を用いて継続して、樹脂になおも結合していた任意のタンパク質を除去
した。
ＳＰカラム画分の非還元試料を、ウエスタンブロットによって分析した。ほとんどのタ
ンパク質が、Ｔｒｉｓ溶出画分において見出されたが、以前の実験は、これらの画分中で
見出されたｍＧＤＦ１５が本質的に不活性であることを示しているので、さらなる精製の
ためにこれを使用しなかった。その代り、精製を、１００％のＢ溶出（塩－溶出プール）
において見出されたタンパク質を用いて継続した。このプールを、ＨＰＬＣに取り付けた
逆相分取Ｃ４カラム（Ｖｙｄａｃ）上に注入した。緩衝液Ａは、水／０．１％ＴＦＡであ
り、緩衝液Ｂは、アセトニトリル／０．１％ＴＦＡであった。タンパク質を、４．５ｍＬ
／分で１時間にわたる２５～４０％のＢ勾配で溶出した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル（Ｓｙｐ
ｒｏ Ｒｕｂｙ）およびウエスタンブロットによる逆相カラム画分の評価後に、純粋なｍ
ＧＤＦ１５を含む画分をプールし、遠心分離蒸発器中で濃縮した。
ｈＧＤＦ１５およびｍＧＤＦ１５の正体を、各々Ｎ末端配列決定によって確認した。両
方の型の精製されたＧＤＦ１５が、２つの異なる細胞株においてＳＭＡＤ２／３のリン酸
化を刺激し、それによって、リガンド活性の確認を提供した。
（実施例２）
ＧＤＦ１５に対する高親和性の結合を有するＴＧＦβスーパーファミリー受容体の同定
活性ＧＤＦ１５タンパク質を取得したところで、ＴＧＦβスーパーファミリー受容体を
含む受容体－Ｆｃ融合タンパク質を、実施例１に記載したように生成および精製したヒト
またはマウスのＧＤＦ１５への結合についてスクリーニングした。これらの融合タンパク
質は、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインを取り込んでおり、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入した
か、社内で生成したかのいずれかであった。５つのＩＩ型受容体（ＴＧＦβ受容体ＩＩ型
、アクチビン受容体ＩＩＡ型、アクチビン受容体ＩＩＢ型、ＢＭＰ受容体ＩＩ型およびＭ
ＩＳ受容体ＩＩ型）のなかで、ＴＧＦβ受容体ＩＩ型（ＴβＲＩＩ）のみが、捕捉された
受容体－Ｆｃ融合タンパク質を用いた表面プラズモン共鳴によって決定した場合、ＧＤＦ
１５に対する検出可能な結合を示した（ｋａ＝２．９２×１０５Ｍ－１ｓ－１；ｋｄ＝０
．００１ｓ－１）。ｈＧＤＦ１５は、９．５６ｎＭの平衡解離定数（ＫＤ）で、３７℃で
、捕捉されたｈＴβＲＩＩ－Ｆｃと結合した。７つのＩ型受容体（ＡＬＫ１、ＡＬＫ２、
ＡＬＫ３、ＡＬＫ４、ＡＬＫ５、ＡＬＫ６およびＡＬＫ７）のなかには、ＧＤＦ１５（２
０ｎＭまたは２００ｎＭにおけるｍＧＤＦ１５）に対する検出可能な結合を示したものは
なかった。
ヒトＴβＲＩＩは、細胞外ドメイン（ＥＣＤ）における選択的スプライシングによって
生成される、少なくとも２つのアイソフォーム－Ａ（長）およびＢ（短）－として天然に
生じる（図５、６）。上記スクリーニングに使用したｈＴβＲＩＩ－ｈＧ１Ｆｃ融合タン
パク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）は、野生型ＴβＲＩＩ短アイソフォームを取り込む。
追跡分析において、野生型ＴβＲＩＩ長アイソフォーム（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を取
り込む融合タンパク質に対するｍＧＤＦ１５結合の親和性は、表面プラズモン共鳴によっ
て、ＴβＲＩＩ短アイソフォームを取り込む融合タンパク質ものと非常に類似しているこ
とが見出された（３７℃におけるＫＤは、それぞれ、２．７ｎＭおよび４．８ｎＭであっ
た）。ＧＤＦ１５結合に関してこれらの短および長アイソフォームの一般的な等価性が観
察されたので、出願人らは、次いで、ミニマルリンカーを介してそのＣ末端においてヒト
ＩｇＧ２ Ｆｃドメインと融合したｈＴβＲＩＩ短の野生型ＥＣＤ（配列番号７）からな
る受容体－Ｆｃ融合タンパク質を生成した。特記しない限り、ＴβＲＩＩの短および長ア
イソフォームに基づくバリアントに関するアミノ酸位置の番号付けは、それぞれ、ネイテ
ィブ前駆体配列番号５および配列番号６における対応する位置を指す。
ＧＤＦ１５に対するＴβＲＩＩの高親和性の結合を考慮して、本発明者らは、ＴβＲＩ
ＩがＧＤＦ１５のインヒビターとして使用できるかどうかを試験した。融合タンパク質ｈ
ＴβＲＩＩ短（２３～１５９）－ｈＧ２Ｆｃを、ＣＡＧＡ－１２プロモーター構築物を含
むレポーター遺伝子でトランスフェクトしたＡ５４９細胞において試験したところ、これ
は、かかる細胞におけるｈＧＤＦ１５誘導性の遺伝子活性化を、０．１５～０．５ｎＭの
ＩＣ５０で阻害することが見出された。ｈＴβＲＩＩ短ＥＣＤによるＧＤＦ１５シグナル
伝達の強力な阻害は、ＴβＲＩＩがＧＤＦ１５に対する高親和性受容体であるというさら
なる証拠を提供する。ＧＤＦ１５は、無細胞条件下でＡＬＫ５に対する検出可能な結合を
示さなかったものの、ｓｉＲＮＡ方法論による内因性ＡＬＫ５ ｍＲＮＡの抑制は、対照
処理と比較して、Ａ５４９細胞（ヒト肺上皮細胞株）におけるｍＧＤＦ１５媒介性のシグ
ナル伝達を顕著に低減させた。対照的に、ｓｉＲＮＡ方法論による他のＩ型受容体（ＡＬ
Ｋ２、ＡＬＫ３、ＡＬＫ４およびＡＬＫ７）の抑制は、Ａ５４９細胞においてＧＤＦ１５
媒介性のシグナル伝達を変更できなかった。この結果は、ＧＤＦ１５三元シグナル伝達複
合体が、そのＩ型受容体としてＡＬＫ５（ＴＧＦβ受容体Ｉ型）を含むことを示しており
、したがって、ＧＤＦ１５に対する機能的ＩＩ型受容体としてのＴβＲＩＩについての裏
付け証拠を提供する。
（実施例３）
受容体融合タンパク質バリアントの生成
ＴβＲＩＩ ＥＣＤバリアント
ＴβＲＩＩはまた、高い親和性でＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３と結合するので、ネイテ
ィブＴβＲＩＩ－Ｆｃ融合タンパク質は、これらのリガンドならびにＧＤＦ１５のシグナ
ル伝達に影響を与える。一部の治療設定では、このより広いスペクトルのリガンド結合が
有利であり得るが、他の設定では、より選択的な分子が優れている可能性がある。したが
って、出願人らは、ヒトＴβＲＩＩ ＥＣＤのバリアントを含む融合タンパク質を生成す
ることによって、ＧＤＦ１５に対する増強または低減された選択性を有するポリペプチド
を探索した。以下に示す野生型ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５９）配列（配列番号７）は、
以下に列挙する５つの受容体ＥＣＤバリアント（配列番号８～１２）についての基礎とし
て機能した。野生型ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５９）を、ＩｇＧ２のＦｃ部分に融合させ
て、新規の基礎Ｆｃ融合構築物を生成した。以下の配列番号５０、５１および５２を参照
のこと。
Figure 2024015040000001
 （１）以下に示すｈＴβＲＩＩ短（２３～１５９／Ｄ１１０Ｋ）アミノ酸配列（配列番号
８）、配列中、置換された残基に下線を付す。
Figure 2024015040000002
 （２）以下に示すＮ末端がトランケートされたｈＴβＲＩＩ短（２９～１５９）アミノ酸
配列（配列番号９）。
Figure 2024015040000003
 （３）以下に示すＮ末端がトランケートされたｈＴβＲＩＩ短（３５～１５９）アミノ酸
配列（配列番号１０）。
Figure 2024015040000004
 （４）以下に示すＣ末端がトランケートされたｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３）アミノ酸
配列（配列番号１１）。
Figure 2024015040000005
 （５）以下に示すＣ末端がトランケートされたｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３／Ｎ７０Ｄ
）アミノ酸配列（配列番号１２）、配列中、置換された残基に下線を付す。
Figure 2024015040000006
出願人らは、以下に示す野生型ｈＴβＲＩＩ長（２３～１８４）配列（配列番号１３）
に基づく５つの対応するバリアント（配列番号１４～１７）もまた想定し、配列中、２５
アミノ酸の挿入に下線を付す。スプライシングは、この挿入に対してＣ末端の隣接する位
置において保存的アミノ酸置換（Ｖａｌ→Ｉｌｅ）を生じることに留意のこと。いくつか
のｈＴβＲＩＩ短バリアントおよびそれらのｈＴβＲＩＩ長対応物の間での配列の関係性
を、図７に示す。
Figure 2024015040000007
 （１）以下に示すｈＴβＲＩＩ長（２３～１８４／Ｄ１３５Ｋ）アミノ酸配列（配列番号
１４）、配列中、置換された残基に二重下線を付す。
Figure 2024015040000008
 （２）以下に示すＮ末端がトランケートされたｈＴβＲＩＩ長（２９～１８４）アミノ酸
配列（配列番号１５）。
Figure 2024015040000009
Figure 2024015040000010
 （３）以下に示すＮ末端がトランケートされたｈＴβＲＩＩ長（６０～１８４）アミノ酸
配列（配列番号１０と同じ）。
Figure 2024015040000011
 （４）以下に示すＣ末端がトランケートされたｈＴβＲＩＩ長（２３～１７８）アミノ酸
配列（配列番号１６）。
Figure 2024015040000012
 （５）以下に示すＣ末端がトランケートされたｈＴβＲＩＩ長（２３～１７８／Ｎ９５Ｄ
）アミノ酸配列（配列番号１７）、配列中、置換された残基に二重下線を付す。
Figure 2024015040000013
さらなるＴβＲＩＩ ＥＣＤバリアントには、以下が含まれる：
（Ａ）以下に示す、Ｎ末端およびＣ末端がトランケートされたｈＴβＲＩＩ短（３５～１
５３）またはｈＴβＲＩＩ長（６０～１７８）アミノ酸配列（配列番号４７）。
Figure 2024015040000014
 （Ｂ）以下に示すＮ末端およびＣ末端がトランケートされたｈＴβＲＩＩ短（２９～１５
３）アミノ酸配列（配列番号４８）。
Figure 2024015040000015
Figure 2024015040000016
 （Ｃ）以下に示すＮ末端およびＣ末端がトランケートされたｈＴβＲＩＩ長（２９～１７
８）アミノ酸配列（配列番号４９）。
Figure 2024015040000017
上記バリアント（配列番号８～１２、１４～１７および４７～４９）のいずれかは、ｈ
ＴβＲＩＩアイソフォームＣ（Ｋｏｎｒａｄら、ＢＭＣ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ８巻：３１
８頁、２００７年）に天然に生じるような、ｈＴβＲＩＩ ＥＣＤのＣ末端の近傍に位置
するグルタミン酸残基の対（配列番号５の１５１位および１５２位、または配列番号６の
１７６位および１７７位）の間の３６アミノ酸の挿入（配列番号１８）を取り込み得る。
Figure 2024015040000018
一例として、任意選択の挿入部位に隣接する対になったグルタミン酸残基が、ｈＴβＲ
ＩＩ短（２９～１５９）バリアント（配列番号９）について以下に示される（下線）。
Figure 2024015040000019
Ｆｃドメインバリアント
上記５つのｈＴβＲＩＩ短バリアントが各々、以下のアミノ酸配列（配列番号１９）を
有するヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメインに、それらのＣ末端において（ミニマルリンカーを介
して）融合された、ｈＴβＲＩＩ－ｈＦｃ融合タンパク質を生成した：
Figure 2024015040000020
出願人らは、全長ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（ｈＧ１Ｆｃ）（配列番号２０、以下）およびＮ
末端がトランケートされたヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（ｈＧ１Ｆｃ短）（配列番号２１、以下）
を含む代替的Ｆｃドメインを含むｈＴβＲＩＩ－ｈＦｃ融合タンパク質を想定する。任意
選択で、Ｆｃドメインと無関係のポリペプチドを、Ｆｃドメインの代わりに結合させるこ
とができる。
Figure 2024015040000021
リーダー配列バリアント
以下の３つのリーダー配列を検討した：
Figure 2024015040000022
ｈＴβＲＩＩ－ｈＦｃ融合タンパク質の発現
選択されたｈＴβＲＩＩ－ｈＦｃタンパク質バリアントは、ＴＰＡリーダーを取り込み
、配列番号２５、２９、３３、３７および４１に示されるプロセシングされていないアミ
ノ酸配列を有する（実施例５を参照のこと）。これらのバリアントの対応するヌクレオチ
ド配列は、配列番号２６、３０、３４、３８および４２である。各々がＧ２Ｆｃドメイン
（配列番号１９）を有する選択されたｈＴβＲＩＩ－ｈＦｃバリアントを、ＨＥＫ－２９
３細胞において発現させ、濾過およびプロテインＡクロマトグラフィーによって馴化培地
から精製した。レポーター遺伝子アッセイのための試料の純度を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよ
びウエスタンブロット分析によって評価した。
出願人らは、配列番号２７、３１、３５、３９および４３に示されるプロセシングされ
ていないアミノ酸配列を有するさらなるｈＴβＲＩＩ－ｈＦｃタンパク質バリアント、な
らびに配列番号２８、３２、３６、４０および４４に示される対応するヌクレオチド配列
を想定する。
野生型短構築物ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５９）－ｈＧ２Ｆｃのアミノ酸配列（配列番
号５０）が、以下に示される。
Figure 2024015040000023
このタンパク質を、以下に示すような、ＴＰＡリーダー配列を含む構築物（配列番号５
２）から発現させた。点線の下線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000024
配列番号５２をコードする核酸配列を以下に示す：
Figure 2024015040000025
Figure 2024015040000026
（実施例４）
細胞ベースのアッセイにおける受容体融合タンパク質バリアントによる示差的リガンド
阻害
Ａ５４９細胞におけるレポーター遺伝子アッセイを使用して、ＧＤＦ１５、ＴＧＦβ１
、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３の活性を阻害するｈＴβＲＩＩ－ｈＦｃバリアントの能力
を決定した。このアッセイは、ｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２レポータープラスミド（Ｄｅｎ
ｎｌｅｒら、１９９８年、ＥＭＢＯ １７巻：３０９１～３１００頁）ならびにトランス
フェクション効率について制御するためのＲｅｎｉｌｌａレポータープラスミド（ｐＲＬ
ＣＭＶ）でトランスフェクトしたヒト肺癌細胞株に基づく。ＣＡＧＡモチーフは、ＴＧＦ
β応答性遺伝子（例えば、ＰＡＩ－１）のプロモーター中に存在するので、このベクター
は、ＳＭＡＤ２およびＳＭＡＤ３を介してシグナル伝達する因子のために一般に使用され
る。
アッセイの最初の日に、Ａ５４９細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）：ＣＣＬ－１８５（商標
））を、１ウェル当たり６．５×１０４細胞で４８ウェルプレート中に分配した。２日目
に、１０μｇ ｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２、１００ｎｇ ｐＲＬＣＭＶ、３０μｌ Ｘ－
ｔｒｅｍｅＧＥＮＥ ９（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）および９７０
μｌ ＯｐｔｉＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む溶液を、３０分間事前インキュベ
ートし、次いで、０．１％ＢＳＡを補充したイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ、ＡＴＣＣ
（登録商標））に添加し、これを、室温で一晩のインキュベーションにわたり、プレート
した細胞に適用した（５００μｌ／ウェル）。３日目に、培地を除去し、細胞を、以下に
記載するように調製したリガンドおよびインヒビターの混合物と共に、３７℃で一晩イン
キュベートした。
試験物品の連続希釈を、２００μｌ体積のアッセイ緩衝液（ＥＭＥＭ＋０．１％ＢＳＡ
）中で４８ウェルプレートにおいて行った。試験リガンドを含む等体積のアッセイ緩衝液
を添加して、予め決定したＥＣ５０と等しい最終リガンド濃度を得た。ヒトＧＤＦ１５お
よびマウスＧＤＦ１５は、社内で生成したが（上記を参照のこと）、ヒトＴＧＦβ１、ヒ
トＴＧＦβ２およびヒトＴＧＦβ３は、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈから取得した。試験溶液を、
３７℃で３０分間インキュベートし、次いで、２５０μｌの混合物を、全てのウェルに添
加した。各濃度の試験物品を、二連で決定した。試験溶液との一晩のインキュベーション
後に、細胞を、リン酸緩衝食塩水でリンスし、次いで、受動溶解緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ
Ｅ１９４１）で溶解させ、－７０℃で一晩貯蔵した。４日目の最終日に、プレートを、
穏やかに振盪しながら室温まで温めた。細胞溶解物を、化学発光プレート（９６ウェル）
に二連で移し、Ｄｕａｌ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙシステ
ム（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｅ１９８０）の試薬を用いてルミノメーターで分析して、正規化さ
れたルシフェラーゼ活性を決定した。
このアッセイを使用して、ＴβＲＩＩリガンドによる細胞シグナル伝達に対する潜在的
阻害効果について、受容体融合タンパク質バリアントをスクリーニングした。野生型Ｔβ
ＲＩＩ短－ＦｃおよびＴβＲＩＩ長－Ｆｃに関する以前の報告（ｄｅｌ Ｒｅら、Ｊ Ｂ
ｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９巻：２２７６５頁、２００４年）と一致して、試験したいずれ
のバリアントも、高い濃度であっても、ＴＧＦβ２を阻害できなかった。しかし、ｈＴβ
ＲＩＩ－ｈＦｃバリアントは、ＧＤＦ１５、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３によって媒介さ
れる細胞シグナル伝達の示差的阻害を、予想外に示した。野生型ＴβＲＩＩ短（２３～１
５９）－Ｇ２Ｆｃと比較すると、ＴβＲＩＩ短（２３～１５９／Ｄ１１０Ｋ）－Ｇ２Ｆｃ
バリアントは、ＧＤＦ１５の強力な阻害を示したが、ＴＧＦβ１の阻害の喪失およびＴＧ
Ｆβ３の大きく低減された阻害（約５０倍）を示した（以下の表を参照のこと）。１１０
位は、ＴβＲＩＩの「フック」領域中に位置するが（Ｒａｄａｅｖら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃ
ｈｅｍ ２８５巻：１４８０６頁、２０１０年）、認識されたＴβＲＩＩリガンドＴＧＦ
β１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３のうちで選択性を付与することは示唆されてこなかっ
た。したがって、このバリアントは、ＧＤＦ１５が最も強力に阻害され、ＴＧＦβ１が最
も弱く阻害され、ＴＧＦβ３が中間の程度まで阻害される、示差的リガンド阻害のプロフ
ァイルを示す。
Figure 2024015040000027
第２の実験では、Ｎ末端がトランケートされたＴβＲＩＩ ＥＣＤを有するバリアント
の潜在力を、全長野生型ＴβＲＩＩ ＥＣＤのものと比較した。以下の表に示すように、
ＴβＲＩＩ短（２９～１５９）－Ｇ２ＦｃおよびＴβＲＩＩ短（３５～１５９）－Ｇ２Ｆ
ｃは、ＴβＲＩＩ短（２３～１５９）－Ｇ２Ｆｃ（野生型）と比較して、ＴＧＦβ３を阻
害する大きく減退した能力を示したが、ＧＤＦ１５を阻害する減退されていない能力（Ｎ
’Δ６）またはわずかにのみ減退した能力（Ｎ’Δ１２）を示した。野生型と比較した、
ＴＧＦβ１の阻害に対するＮ末端トランケーションの影響は、大きさにおいて中間であっ
た。したがって、これら２つのバリアントは、ＧＤＦ１５が最も強力に阻害され、ＴＧＦ
β３が最も弱く阻害され、ＴＧＦβ１が中間の程度まで阻害される、示差的リガンド阻害
のプロファイルを示す。
Figure 2024015040000028
第３の実験では、本発明者らは、Ｃ末端がトランケートされたＴβＲＩＩ ＥＣＤにお
けるＮ７０Ｄ置換の潜在力に対する影響を決定した。このアスパラギン酸残基は、潜在的
グリコシル化部位を示す。以下の表に示すように、ＴβＲＩＩ短（２３～１５３／Ｎ７０
Ｄ）－Ｇ２Ｆｃは、ＴβＲＩＩ短（２３～１５３）－Ｇ２Ｆｃと比較して、ＴＧＦβ１を
阻害する大きく減退された能力およびＴＧＦβ３を阻害する事実上減退されていない能力
を示した。ＴβＲＩＩ短（２３～１５３）－Ｇ２Ｆｃおよび野生型の両方と比較した、Ｇ
ＤＦ１５の阻害に対するＮ７０Ｄ置換の影響は、大きさにおいて中間であった。したがっ
て、Ｎ７０Ｄ置換を有するＣ末端がトランケートされたバリアントは、ＴＧＦβ３が最も
強力に阻害され、ＴＧＦβ１が最も弱く阻害され、ＧＤＦ１５が中間の程度まで阻害され
る、示差的リガンド阻害のプロファイルを示す。
Figure 2024015040000029
合わせると、これらの結果は、出願人らが、大きく異なるリガンド結合プロファイルを
示すＴβＲＩＩ ＥＣＤのトランケーションおよび変異を生成したことを実証している。
特に、この実証は、適切に発現および精製されたＧＤＦ１５が、ＴβＲＩＩと直接相互作
用し、ＴβＲＩＩ ＥＣＤのバリアントを含む融合タンパク質によって示差的に阻害され
得ることを明らかにしている。これらのバリアントの活性プロファイルは、以下の表にま
とめられ得る。
Figure 2024015040000030
本発明者らは、これらのＴβＲＩＩ短ＥＣＤバリアントのＴβＲＩＩ長ＥＣＤ対応物が
、類似のリガンド選択性を示すことを予測する。さらに、Ｃ’Δ６トランケートされたＥ
ＣＤ（例えば、それぞれ、ＴβＲＩＩ短およびＴβＲＩＩ長アイソフォームについて配列
番号１１および１６）が、変異およびＮ末端トランケーションを導入するＴβＲＩＩ短ま
たはＴβＲＩＩ長についての塩基配列として使用され得る。
（実施例５）
例示的なｈＴβＲＩＩ－ｈＦｃ核酸およびタンパク質
この実施例は、細胞培養物から単離されたタンパク質を提供するために、本明細書に提
供される方法に従って、ＨＥＫ－２９３またはＣＨＯ細胞においてＴβＲＩＩ構築物を発
現させるために使用され得る核酸構築物をまとめる。各場合において、細胞培養物から単
離された成熟タンパク質は、リーダー配列（以下の各配列中の点線の下線）が除去されて
いる。
項目１は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５９／Ｄ１１０Ｋ）－ｈＧ２Ｆｃのアミノ酸配列
（配列番号２５）を示す。二重下線はＤ１１０Ｋ置換を示す。点線の下線はリーダーを示
し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000031
Figure 2024015040000032
項目２は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５９／Ｄ１１０Ｋ）－ｈＧ２Ｆｃをコードするヌ
クレオチド配列（配列番号２６）を示す。二重下線はＤ１１０Ｋ置換を示す。点線の下線
はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000033
項目３は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５９／Ｄ１１０Ｋ）－ｈＧ１Ｆｃ短のアミノ酸配
列（配列番号２７）を示す。二重下線はＤ１１０Ｋ置換を示す。点線の下線はリーダーを
示し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000034
項目４は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５９／Ｄ１１０Ｋ）－ｈＧ１Ｆｃ短をコードする
ヌクレオチド配列（配列番号２８）を示す。二重下線はＤ１１０Ｋ置換を示す。点線の下
線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000035
Figure 2024015040000036
項目５は、ｈＴβＲＩＩ短（２９～１５９）－ｈＧ２Ｆｃのアミノ酸配列（配列番号２
９）を示す。点線の下線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000037
項目６は、ｈＴβＲＩＩ短（２９～１５９）－ｈＧ２Ｆｃをコードするヌクレオチド配
列（配列番号３０）を示す。点線の下線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示す
。
Figure 2024015040000038
Figure 2024015040000039
項目７は、ｈＴβＲＩＩ短（２９～１５９）－ｈＧ１Ｆｃ短のアミノ酸配列（配列番号
３１）を示す。点線の下線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000040
項目８は、ｈＴβＲＩＩ短（２９～１５９）－ｈＧ１Ｆｃ短をコードするヌクレオチド
配列（配列番号３２）を示す。点線の下線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示
す。
Figure 2024015040000041
Figure 2024015040000042
項目９は、ｈＴβＲＩＩ短（３５～１５９）－ｈＧ２Ｆｃのアミノ酸配列（配列番号３
３）を示す。点線の下線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000043
項目１０は、ｈＴβＲＩＩ短（３５～１５９）－ｈＧ２Ｆｃをコードするヌクレオチド
配列（配列番号３４）を示す。点線の下線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示
す。
Figure 2024015040000044
Figure 2024015040000045
項目１１は、ｈＴβＲＩＩ短（３５～１５９）－ｈＧ１Ｆｃ短のアミノ酸配列（配列番
号３５）を示す。点線の下線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000046
項目１２は、ｈＴβＲＩＩ短（３５～１５９）－ｈＧ１Ｆｃ短をコードするヌクレオチ
ド配列（配列番号３６）を示す。点線の下線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを
示す。
Figure 2024015040000047
Figure 2024015040000048
項目１３は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３）－ｈＧ２Ｆｃのアミノ酸配列（配列番号
３７）を示す。点線の下線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000049
項目１４は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３）－ｈＧ２Ｆｃをコードするヌクレオチド
配列（配列番号３８）を示す。点線の下線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示
す。
Figure 2024015040000050
Figure 2024015040000051
項目１５は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３）－ｈＧ１Ｆｃ短のアミノ酸配列（配列番
号３９）を示す。点線の下線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000052
項目１６は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３）－ｈＧ１Ｆｃ短をコードするヌクレオチ
ド配列（配列番号４０）を示す。点線の下線はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを
示す。
Figure 2024015040000053
Figure 2024015040000054
項目１７は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３／Ｎ７０Ｄ）－ｈＧ２Ｆｃのアミノ酸配列
（配列番号４１）を示す。二重下線はＮ７０Ｄ置換を示す。点線の下線はリーダーを示し
、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000055
項目１８は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３／Ｎ７０Ｄ）－ｈＧ２Ｆｃをコードするヌ
クレオチド配列（配列番号４２）を示す。二重下線はＮ７０Ｄ置換を示す。点線の下線は
リーダーを示し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000056
Figure 2024015040000057
項目１９は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３／Ｎ７０Ｄ）－ｈＧ１Ｆｃ短のアミノ酸配
列（配列番号４３）を示す。二重下線はＮ７０Ｄ置換を示す。点線の下線はリーダーを示
し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000058
項目２０は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３／Ｎ７０Ｄ）－ｈＧ１Ｆｃ短をコードする
ヌクレオチド配列（配列番号４４）を示す。二重下線はＮ７０Ｄ置換を示す。点線の下線
はリーダーを示し、実線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000059
Figure 2024015040000060
項目２１は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５９／Ｄ１１０Ｋ）－ｈＧ２Ｆｃの成熟アミノ
酸配列（即ち、リーダー配列なし）（配列番号５３）を示す。二重下線はＤ１１０Ｋ置換
を示す。一本線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000061
項目２２は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５９／Ｄ１１０Ｋ）－ｈＧ１Ｆｃ短の成熟アミ
ノ酸配列（即ち、リーダー配列なし）（配列番号５４）を示す。二重下線はＤ１１０Ｋ置
換を示す。一本線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000062
Figure 2024015040000063
項目２３は、ｈＴβＲＩＩ短（２９～１５９）－ｈＧ２Ｆｃの成熟アミノ酸配列（即ち
、リーダー配列なし）（配列番号５５）を示す。一本線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000064
項目２４は、ｈＴβＲＩＩ短（２９～１５９）－ｈＧ１Ｆｃ短の成熟アミノ酸配列（即
ち、リーダー配列なし）（配列番号５６）を示す。一本線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000065
項目２５は、ｈＴβＲＩＩ短（３５～１５９）－ｈＧ２Ｆｃの成熟アミノ酸配列（即ち
、リーダー配列なし）（配列番号５７）を示す。一本線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000066
Figure 2024015040000067
項目２６は、ｈＴβＲＩＩ短（３５～１５９）－ｈＧ１Ｆｃ短の成熟アミノ酸配列（即
ち、リーダー配列なし）（配列番号５８）を示す。一本線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000068
項目２７は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３）－ｈＧ２Ｆｃの成熟アミノ酸配列（即ち
、リーダー配列なし）（配列番号５９）を示す。一本線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000069
項目２８は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３）－ｈＧ１Ｆｃ短の成熟アミノ酸配列（即
ち、リーダー配列なし）（配列番号６０）を示す。一本線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000070
Figure 2024015040000071
項目２９は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３／Ｎ７０Ｄ）－ｈＧ２Ｆｃの成熟アミノ酸
配列（即ち、リーダー配列なし）（配列番号６１）を示す。二重下線はＮ７０Ｄ置換を示
す。一本線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000072
項目３０は、ｈＴβＲＩＩ短（２３～１５３／Ｎ７０Ｄ）－ｈＧ１Ｆｃ短の成熟アミノ
酸配列（即ち、リーダー配列なし）（配列番号６２）を示す。二重下線はＮ７０Ｄ置換を
示す。一本線の下線はリンカーを示す。
Figure 2024015040000073
参照による組み込み
本明細書で言及される全ての刊行物および特許は、各個々の刊行物または特許が参照に
より組み込まれることがあたかも具体的かつ個々に示されるかのように、その全体が参照
により本明細書に組み込まれる。
主題の具体的な実施形態が議論されてきたが、上記明細書は、例示的であって限定的で
はない。多くのバリエーションが、本明細書および以下の特許請求の範囲の再検討により
、当業者に明らかとなる。本発明の全範囲は、等価物のそれらの全範囲と共に特許請求の
範囲を参照し、かかるバリエーションと共に明細書を参照することによって、決定される
べきである。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
ＴβＲＩＩの細胞外ドメイン由来の第１のアミノ酸配列と異種アミノ酸配列とを含むＴ
βＲＩＩ融合ポリペプチドであって、前記第１のアミノ酸配列が、
ａ）配列番号５の２３位～３５位のいずれかにおいて始まり配列番号５の１５３位～１
５９位のいずれかにおいて終わる配列、または
ｂ）配列番号６の２３位～６０位のいずれかにおいて始まり配列番号６の１７８位～１
８４位のいずれかにおいて終わる配列
に対して少なくとも８０％同一なアミノ酸配列からなるＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目２）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号５の２３位において始まり配列番号５の１５９位
において終わる配列からなる、項目１に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目３）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号５の２９位において始まり配列番号５の１５９位
において終わる配列からなる、項目１に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目４）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号５の３５位において始まり配列番号５の１５９位
において終わる配列からなる、項目１に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目５）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号５の２３位において始まり配列番号５の１５３位
において終わる配列からなる、項目１に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目６）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号５の２９位において始まり配列番号５の１５３位
において終わる配列からなる、項目１に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目７）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号５の３５位において始まり配列番号５の１５３位
において終わる配列からなる、項目１に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目８）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号６の２３位において始まり配列番号６の１８４位
において終わる配列からなる、項目１に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目９）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号６の２９位において始まり配列番号６の１８４位
において終わる配列からなる、項目１に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目１０）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号６の２３位において始まり配列番号６の１７８位
において終わる配列からなる、項目１に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目１１）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号６の２９位において始まり配列番号６の１７８位
において終わる配列からなる、項目１に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目１２）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号４７の３６位に対応する位置におけるＤおよび／
または配列番号４７の７６位に対応する位置におけるＫを有する配列からなる、項目１か
ら１１のいずれか一項に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目１３）
配列番号７もしくは配列番号１３の配列に対して少なくとも８０％同一な第１のアミノ
酸配列またはその活性断片と第２の異種部分とを含むＴβＲＩＩ融合ポリペプチドであっ
て、前記第１のアミノ酸配列が、配列番号４７の３６位に対応する位置におけるＤおよび
／または配列番号４７の７６位に対応する位置におけるＫを有する、ＴβＲＩＩ融合ポリ
ペプチド。
（項目１４）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号７のアミノ酸１～１２に対応する１～１２アミノ
酸または配列番号１３のアミノ酸１～３７に対応する１～３７アミノ酸のＮ末端トランケ
ーションを含む、項目１３に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目１５）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号７または配列番号１３のアミノ酸１～６に対応す
る６アミノ酸のＮ末端トランケーションを含む、項目１３または１４に記載のＴβＲＩＩ
融合ポリペプチド。
（項目１６）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号７のアミノ酸１～１２に対応する１２アミノ酸ま
たは配列番号１３のアミノ酸１～３７に対応する３７アミノ酸のＮ末端トランケーション
を含む、項目１３または１４に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目１７）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号７のアミノ酸１３７～１３２または配列番号１３
のアミノ酸１６２～１５７に対応する１～６アミノ酸のＣ末端トランケーションを含む、
項目１３から１６のいずれか一項に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目１８）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号７のアミノ酸１３２～１３７または配列番号１３
のアミノ酸１５７～１６２に対応する６アミノ酸のＣ末端トランケーションを含む、項目
１３から１７のいずれか一項に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目１９）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号４７の１１７位と１１８位に対応する残基の間に
、配列番号１８に対応する挿入を含む、項目１から１８のいずれか一項に記載のＴβＲＩ
Ｉ融合ポリペプチド。
（項目２０）
前記異種部分が、ｉｎ ｖｉｖｏ安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期、取り込み／投与、組
織局在もしくは分布、タンパク質複合体の形成、および／または精製のうちの１または複
数を増強する１または複数のポリペプチド部分を含む、項目１から１９のいずれか一項に
記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目２１）
前記異種部分が、免疫グロブリンＦｃドメインおよび血清アルブミンから選択されるポ
リペプチド部分を含む、項目１から２０のいずれか一項に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプ
チド。
（項目２２）
前記免疫グロブリンＦｃドメインが、リンカーによって前記ＴβＲＩＩポリペプチドに
接続されている、項目２１に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目２３）
前記ポリペプチドが、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミ
ノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分にコンジュゲートしたアミノ
酸、および有機誘導体化剤にコンジュゲートしたアミノ酸から選択される１または複数の
修飾されたアミノ酸残基を含む、項目１から２２のいずれか一項に記載のＴβＲＩＩ融合
ポリペプチド。
（項目２４）
前記ポリペプチドがグリコシル化されている、項目２３に記載のＴβＲＩＩ融合ポリペ
プチド。
（項目２５）
配列番号７～１７および４７～４９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９
５％同一であるアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩの細胞外ドメインの一部分からなる第１の
アミノ酸配列と第２の異種部分とを含むＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目２６）
配列番号７～１７および４７～４９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９
７％同一であるアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩの細胞外ドメインの一部分からなる第１の
アミノ酸配列と第２の異種部分とを含むＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目２７）
配列番号７～１７および４７～４９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９
８％同一であるアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩの細胞外ドメインの一部分からなる第１の
アミノ酸配列と第２の異種部分とを含むＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目２８）
配列番号７～１７および４７～４９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９
９％同一であるアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩの細胞外ドメインの一部分からなる第１の
アミノ酸配列と第２の異種部分とを含むＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目２９）
配列番号７～１７および４７～４９から選択されるアミノ酸配列であるアミノ酸配列を
含むＴβＲＩＩの細胞外ドメインの一部分からなる第１のアミノ酸配列と第２の異種部分
とを含むＴβＲＩＩ融合ポリペプチド。
（項目３０）
配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、５３、５４
、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１および６２から選択されるアミノ酸配列に
対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
（項目３１）
配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、５３、５４
、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１および６２から選択されるアミノ酸配列に
対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
（項目３２）
配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、５３、５４
、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１および６２から選択されるアミノ酸配列に
対して少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
（項目３３）
配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、５３、５４
、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１および６２から選択されるアミノ酸配列に
対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
（項目３４）
配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、５３、５４
、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１および６２から選択されるアミノ酸配列を
含むポリペプチド。
（項目３５）
配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２および４４から選択
されるヌクレオチド配列の相補体に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズす
る核酸によってコードされるアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩポリペプチド。
（項目３６）
１×１０－８Ｍ未満の平衡解離定数（ＫＤ）でヒトＧＤＦ１５に結合する、項目１から
３５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目３７）
ＣＨＯ細胞における前記ポリペプチドの発現に特徴的なグリコシル化パターンを有する
、項目１から３６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目３８）
項目１から３７のいずれかに記載の２つのポリペプチドを含むホモダイマー。
（項目３９）
項目１から３７のいずれか一項に記載のポリペプチドのコード配列を含む、単離された
ポリヌクレオチド。
（項目４０）
項目３９に記載のポリヌクレオチドに作動可能に連結したプロモーター配列を含む組換
えポリヌクレオチド。
（項目４１）
項目３５に記載の単離されたポリヌクレオチドまたは項目４０に記載の組換えポリヌク
レオチドで形質転換された細胞。
（項目４２）
哺乳動物細胞である、項目４１に記載の細胞。
（項目４３）
ＣＨＯ細胞またはヒト細胞である、項目４２に記載の細胞。
（項目４４）
項目１から３７のいずれかに記載のポリペプチドまたは項目３８に記載のホモダイマー
と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬調製物。
（項目４５）
ＴＧＦβスーパーファミリーメンバーに対する細胞の応答をモジュレートする方法であ
って、前記細胞を項目１から３７のいずれか一項に記載のポリペプチドまたは項目３８に
記載のホモダイマーに曝露するステップを含む方法。
（項目４６）
それを必要とする患者において、ＴＧＦβスーパーファミリーメンバーと関連する疾患
または状態を処置する方法であって、有効量の項目１から３７のいずれかに記載のポリペ
プチドまたは項目３８に記載のホモダイマーを前記患者に投与するステップを含む方法。
（項目４７）
前記ＴＧＦβスーパーファミリーメンバーが、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ３またはＧＤＦ１
５である、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記疾患または状態が、がんである、項目４６または４７に記載の方法。
（項目４９）
前記がんが、胃がん、腸管がん、皮膚がん、乳房がん、黒色腫、骨がんおよび甲状腺が
んから選択される、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記疾患または状態が、線維性または硬化性の疾患または障害である、項目４６または
４７に記載の方法。
（項目５１）
前記線維性または硬化性の疾患または障害が、強皮症、アテローム動脈硬化症、肝臓線
維症、びまん性全身性硬化症、糸球体腎炎、神経瘢痕、皮膚瘢痕、放射線誘発線維症、肝
線維症および骨髄線維症から選択される、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記疾患または状態が心臓疾患である、項目４６または４７に記載の方法。
（項目５３）
前記疾患または状態が、遺伝性出血性末梢血管拡張症（ＨＨＴ）、マルファン症候群、
ロイス・ディーツ症候群、家族性胸部大動脈瘤症候群、動脈蛇行症候群、子癇前症、アテ
ローム動脈硬化症、再狭窄および肥大型心筋症／うっ血性心不全から選択される、項目４
６または４７に記載の方法。
（項目５４）
ＧＤＦ１５と結合し、ＧＤＦ１５とＴβＲＩＩとの相互作用を遮断する抗体またはその
抗原結合性断片。
（項目５５）
タンパク質夾雑物に関して少なくとも９５％純粋である、配列番号１のアミノ酸配列を
含むＧＤＦ１５ポリペプチド、またはＴβＲＩＩに結合するその断片。
（項目５６）
タンパク質夾雑物に関して少なくとも９５％純粋である、配列番号１のアミノ酸配列を
含むＧＤＦ１５ポリペプチド、または項目１から３７のいずれか一項に記載のポリペプチ
ドと結合するその断片。
（項目５７）
１０－８Ｍ以下の平衡解離定数（ＫＤ）でＴβＲＩＩに結合する、項目５５に記載のＧ
ＤＦ１５ポリペプチド。
（項目５８）
１０－８Ｍ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で、項目１から３７のいずれか一項に記載のポ
リペプチドと結合する、項目５６に記載のＧＤＦ１５ポリペプチド。
（項目５９）
ＣＨＯ細胞における発現によって産生される、項目５５から５８のいずれかに記載のＧ
ＤＦ１５ポリペプチド。
（項目６０）
ＧＤＦ１５を含む試料を項目１から３７のいずれかに記載のポリペプチドと接触させる
ステップを含む、ＧＤＦ１５を濃縮または精製する方法。
（項目６１）
配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む
ポリペプチド。
（項目６２）
配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む
、項目６１に記載のポリペプチド。
（項目６３）
配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む
、項目６１に記載のポリペプチド。
（項目６４）
配列番号５０のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む、項目６１に記載のポリ
ペプチド。
（項目６５）
配列番号５０のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列からなる、項目６１に記載のポ
リペプチド。
（項目６６）
項目６１から６５のいずれかに記載のポリペプチドをコードする核酸。
（項目６７）
配列番号５１の核酸配列を含む核酸。
（項目６８）
項目６７に記載の核酸を哺乳動物細胞において発現させることによって産生されるポリ
ペプチド。
（項目６９）
前記哺乳動物細胞が、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）である、項目６
８に記載のポリペプチド。

Claims (1)

  1. 図面に記載の発明。
JP2023199004A 2013-08-22 2023-11-24 Ｔｇｆ－ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用 Pending JP2024015040A (ja)

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361868713P 2013-08-22 2013-08-22
US61/868,713 2013-08-22
US201361906270P 2013-11-19 2013-11-19
US61/906,270 2013-11-19
US201361906849P 2013-11-20 2013-11-20
US61/906,849 2013-11-20
JP2019149750A JP2019194270A (ja) 2013-08-22 2019-08-19 Ｔｇｆ−ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用
JP2021079785A JP2021112212A (ja) 2013-08-22 2021-05-10 Ｔｇｆ−ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021079785A Division JP2021112212A (ja) 2013-08-22 2021-05-10 Ｔｇｆ−ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2024015040A true JP2024015040A (ja) 2024-02-01

Family

ID=52480573

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016536456A Withdrawn JP2016528295A (ja) 2013-08-22 2014-08-21 Ｔｇｆ−ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用
JP2019149750A Withdrawn JP2019194270A (ja) 2013-08-22 2019-08-19 Ｔｇｆ−ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用
JP2021079785A Pending JP2021112212A (ja) 2013-08-22 2021-05-10 Ｔｇｆ−ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用
JP2023199004A Pending JP2024015040A (ja) 2013-08-22 2023-11-24 Ｔｇｆ－ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用

Family Applications Before (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016536456A Withdrawn JP2016528295A (ja) 2013-08-22 2014-08-21 Ｔｇｆ−ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用
JP2019149750A Withdrawn JP2019194270A (ja) 2013-08-22 2019-08-19 Ｔｇｆ−ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用
JP2021079785A Pending JP2021112212A (ja) 2013-08-22 2021-05-10 Ｔｇｆ−ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用

Country Status (8)

Country Link
US (6) US20150056199A1 (ja)
EP (2) EP3705498A1 (ja)
JP (4) JP2016528295A (ja)
CN (2) CN116655801A (ja)
AU (2) AU2014308751B2 (ja)
CA (1) CA2921805C (ja)
HK (2) HK1225740A1 (ja)
WO (1) WO2015027082A1 (ja)

Families Citing this family (61)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2658292T3 (es) 2009-11-17 2018-03-09 Acceleron Pharma, Inc. Proteínas ActRIIB y variantes y usos de las mismas con respecto a la inducción de la utrofina para el tratamiento de la distrofia muscular
CU24446B1 (es) 2013-03-13 2019-10-04 Prothena Biosciences Ltd Un anticuerpo monoclonal humanizado que se une a tau
AU2014308751B2 (en) 2013-08-22 2020-03-05 Acceleron Pharma, Inc. TGF-beta receptor type II variants and uses thereof
WO2015077540A2 (en) * 2013-11-21 2015-05-28 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Compositions and methods for treating pulmonary hypertension
WO2016019368A1 (en) * 2014-08-01 2016-02-04 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods and compositions relating to treatment of pulmonary arterial hypertension
AU2015339134B2 (en) 2014-10-30 2021-06-17 Acceleron Pharma Inc. Methods and compositions using GDF15 polypeptides for increasing red blood cells
LT3280727T (lt) 2015-04-06 2021-04-12 Acceleron Pharma Inc. Vienos atšakos i tipo ir ii tipo receptorių sulieti baltymai ir jų naudojimas
EA202190016A1 (ru) 2015-04-06 2021-08-31 Акселерон Фарма Инк. Гетеромультимеры рецепторов типа i и типа ii белков суперсемейства tgf-бета
KR101706462B1 (ko) * 2015-07-09 2017-02-14 부산대학교 산학협력단 Nag-1 억제제를 유효성분으로 포함하는 난소암 환자의 항암제 내성 억제용 약학조성물
JP7320350B2 (ja) * 2015-08-04 2023-08-03 アクセルロン ファーマ インコーポレイテッド 骨髄増殖性障害を処置するための方法
CA2996996A1 (en) * 2015-08-31 2017-03-09 National Research Council Of Canada Tgf-.beta.-receptor ectodomain fusion molecules and uses thereof
AU2017228489A1 (en) * 2016-03-04 2018-09-06 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating body weight
JP7170316B2 (ja) 2016-05-02 2022-11-14 プロセナ バイオサイエンシーズ リミテッド タウ免疫療法
EP3452508A1 (en) 2016-05-02 2019-03-13 Prothena Biosciences Limited Antibodies recognizing tau
CU24538B1 (es) 2016-05-02 2021-08-06 Prothena Biosciences Ltd Anticuerpos monoclonales que compiten por unirse a tau humano con el anticuerpo 16g7
EP3519442A4 (en) 2016-09-27 2020-06-17 EpicentRx, Inc. IMMUNOMODULATORY FUSION PROTEINS
US11267865B2 (en) 2016-10-05 2022-03-08 Acceleron Pharma Inc. Variant ActRIIB proteins and uses thereof
JOP20190100A1 (ar) * 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
US20190352373A1 (en) * 2017-01-25 2019-11-21 Tessa Therapeutics Pte. Ltd. TGF-ß DECOY RECEPTOR
MX2019010392A (es) 2017-03-02 2019-12-02 Nat Res Council Canada Moleculas de fusion de ectodominios receptores de tgf-b y sus usos.
SG11201910066QA (en) 2017-05-02 2019-11-28 Prothena Biosciences Ltd Antibodies recognizing tau
PL3628049T3 (pl) * 2017-05-04 2023-09-25 Acceleron Pharma Inc. Białka fuzyjne receptora TGF-beta typu II i ich zastosowania
AU2018264455A1 (en) 2017-05-12 2019-11-14 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Fusion protein containing TGF-beta receptor and medicinal uses thereof
TWI710377B (zh) 2017-05-23 2020-11-21 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 Ｍｉｃ－１化合物及其用途
JP2020536518A (ja) 2017-09-27 2020-12-17 エピセントアールエックス，インコーポレイテッド 免疫調節融合タンパク質
EP3720881A1 (en) 2017-12-08 2020-10-14 Elstar Therapeutics, Inc. Multispecific molecules and uses thereof
US20220211805A1 (en) * 2018-02-09 2022-07-07 Acceleron Pharma Inc. Methods for treating heterotopic ossification
EP3762421A2 (en) 2018-03-09 2021-01-13 Agenus Inc. Anti-cd73 antibodies and methods of use thereof
EP3765516A2 (en) 2018-03-14 2021-01-20 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules and uses thereof
US20210238280A1 (en) 2018-03-14 2021-08-05 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
CA3099325A1 (en) * 2018-05-03 2019-11-07 Acceleron Pharma Inc. Novel binders of tgf.beta.-superfamily ligands and uses thereof
BR112020025804A2 (pt) 2018-06-22 2021-03-23 Kite Pharma, Inc. proteínas transmembranares quiméricas e usos das mesmas
US11845797B2 (en) 2018-07-03 2023-12-19 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-TCR antibody molecules and uses thereof
EP3820496A4 (en) 2018-07-09 2022-04-20 Precigen, Inc. FUSION CONSTRUCTS AND METHODS OF USE THEREOF
CN109097461B (zh) * 2018-09-06 2021-07-30 北京中关村生命科学园生物医药科技孵化有限公司 一种心肌病相关基因检测试剂及其应用
EP3856350A1 (en) 2018-09-27 2021-08-04 Marengo Therapeutics, Inc. Csf1r/ccr2 multispecific antibodies
WO2020094122A1 (zh) 2018-11-09 2020-05-14 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种TGF-β受体融合蛋白药物组合物及其用途
CA3130508A1 (en) 2019-02-21 2020-08-27 Marengo Therapeutics, Inc. Antibody molecules that bind to nkp30 and uses thereof
WO2020172571A1 (en) 2019-02-21 2020-08-27 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to t cell related cancer cells and uses thereof
EP3927745A1 (en) 2019-02-21 2021-12-29 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to t cells and uses thereof to treat autoimmune disorders
WO2020180819A1 (en) 2019-03-03 2020-09-10 Prothena Biosciences Limited Antibodies recognizing tau
US10851157B2 (en) 2019-07-01 2020-12-01 Gensun Biopharma, Inc. Antagonists targeting the TGF-β pathway
EP4048704A4 (en) 2019-10-21 2023-11-22 Nanjing Leads Biolabs Co., Ltd. RECOMBINANT PROTEIN TARGETING PD-1 AND TGFß
BR122023021925A2 (pt) 2019-10-23 2024-02-27 Cue Biopharma, Inc Complexo de tgf-b, seus usos, um ou mais ácidos nucleicos, composição, método para produzir uma construção ou complexo de tgf-b mascarado, composição farmacêutica, método para entrega de um polipeptídeo tgf-b e opcionalmente pelo menos um polipeptídeo mod a células que expressam em sua membrana superficial um tbr
MX2022005491A (es) * 2019-11-05 2022-07-27 Acceleron Pharma Inc Tratamientos contra esclerosis sistémica.
WO2021104434A1 (en) * 2019-11-27 2021-06-03 Shanghai Epimab Biotherapeutics Co., Ltd. TGFβ/PD-L1 BISPECIFIC BINDING PROTEINS
EP4084821A4 (en) 2020-01-03 2024-04-24 Marengo Therapeutics Inc CD33-BINDING MULTIFUNCTIONAL MOLECULES AND THEIR USES
EP4139363A1 (en) 2020-04-24 2023-03-01 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to t cell related cancer cells and uses thereof
WO2021218883A1 (zh) * 2020-04-28 2021-11-04 神州细胞工程有限公司 一种TGFβR2胞外区截短分子、其与抗EGFR抗体的融合蛋白及其抗肿瘤用途
CN113754777A (zh) * 2020-06-02 2021-12-07 三生国健药业（上海）股份有限公司 一种抗PD-L1/TGF-β融合蛋白
US11028174B1 (en) 2020-07-28 2021-06-08 Lepu Biopharma Co., Ltd. Bifunctional molecules targeting PD-L1 and TGF-β
CN116249718A (zh) 2020-08-26 2023-06-09 马伦戈治疗公司 结合至钙网蛋白的多功能性分子及其用途
CA3190573A1 (en) 2020-08-26 2022-03-03 Andreas Loew Methods of detecting trbc1 or trbc2
JP2023539645A (ja) 2020-08-26 2023-09-15 マレンゴ・セラピューティクス，インコーポレーテッド Ｎｋｐ３０に結合する抗体分子およびその使用
CN112215941B (zh) * 2020-09-04 2021-06-25 北京科技大学 一种基于微分几何的主动脉扭曲的评估方法及系统
WO2022068894A1 (zh) * 2020-09-30 2022-04-07 上海齐鲁制药研究中心有限公司 同时靶向pd-l1和vegf的双功能分子及其医药用途
WO2022105751A1 (zh) * 2020-11-19 2022-05-27 信达生物制药(苏州)有限公司 TGFβRII融合蛋白以及其用途
US20240000891A1 (en) * 2020-12-08 2024-01-04 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Growth and differentiation factor 15 for treatment of proliferative vitreoretinopathy therapy
EP4351723A2 (en) * 2021-06-11 2024-04-17 Acceleron Pharma Inc. Actrii proteins and uses thereof
WO2023030408A1 (zh) * 2021-09-02 2023-03-09 广东菲鹏制药股份有限公司 TGFβRII突变体及其应用
WO2023141724A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 35Pharma Inc. Activin receptor type iib variants and uses thereof

Family Cites Families (103)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8529014D0 (en) 1985-11-25 1986-01-02 Biogen Nv Enhanced secretion of heterologous proteins
JPS63502716A (ja) 1986-03-07 1988-10-13 マサチューセッツ・インステチュート・オブ・テクノロジー 糖タンパク安定性の強化方法
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US5080891A (en) 1987-08-03 1992-01-14 Ddi Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5571714A (en) 1988-12-22 1996-11-05 Celtrix Pharmaceuticals, Inc. Monoclonal antibodies which bind both transforming growth factors β1 and β2 and methods of use
US5096815A (en) 1989-01-06 1992-03-17 Protein Engineering Corporation Generation and selection of novel dna-binding proteins and polypeptides
US5198346A (en) 1989-01-06 1993-03-30 Protein Engineering Corp. Generation and selection of novel DNA-binding proteins and polypeptides
ZA914750B (en) 1990-06-20 1992-03-25 Bristol Myers Squibb Co Methods of modulating blood pressure using tgf-beta and antagonists thereof
GB9106678D0 (en) 1991-03-28 1991-05-15 Ferguson Mark W J Wound healing
JP4124815B2 (ja) 1991-10-31 2008-07-23 ホワイトヘッド インスティチュート フォー バイオメディカル リサーチ ＴＧＦ−β型受容体ｃＤＮＡおよびその用途
US6008011A (en) 1991-10-31 1999-12-28 Whitehead Institute For Biomedical Research TGF-β type II receptor cDNAs
US5543143A (en) 1992-03-06 1996-08-06 Corixa Corporation Method for activating macrophages/monocytes
ES2174868T3 (es) * 1992-10-29 2002-11-16 Celtrix Pharma Fragmento del receptor de fijacion a tgf-beta tipoii como agente terapeutico.
US5677196A (en) 1993-05-18 1997-10-14 University Of Utah Research Foundation Apparatus and methods for multi-analyte homogeneous fluoro-immunoassays
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
DE69434934D1 (de) 1993-10-14 2007-04-12 Harvard College Verfahren zur induzierung und zur erhaltung neuronalen zellen
US5470952A (en) 1993-10-20 1995-11-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. CNTF and IL-6 antagonists
US5525490A (en) 1994-03-29 1996-06-11 Onyx Pharmaceuticals, Inc. Reverse two-hybrid method
US5541087A (en) 1994-09-14 1996-07-30 Fuji Immunopharmaceuticals Corporation Expression and export technology of proteins as immunofusins
US5814565A (en) 1995-02-23 1998-09-29 University Of Utah Research Foundation Integrated optic waveguide immunosensor
US5866323A (en) 1995-04-07 1999-02-02 Case Western Reserve University Cancer diagnosis prognosis and therapy based on mutation of receptors for transforming growth factor β and homologous growth controlling factors
NZ306767A (en) 1995-04-11 2000-03-27 Univ Johns Hopkins Method of identifying molecular interactions employing counterselection and at least two hybrid molecules or two hybrid systems
US6423501B2 (en) 1996-12-13 2002-07-23 Beth Israel Deaconess Medical Center Calcium-independent negative regulation by CD81 of receptor signaling
BR9808934A (pt) * 1997-04-18 2000-08-01 Biogen Inc Proteìnas de fusão de região constante de receptor/imunoglobulina tgf-beta do tipo ii
AU7467898A (en) 1997-04-21 1998-11-13 Arch Development Corporation Fc receptor non-binding anti-cd3 monoclonal antibodies deliver a partial cr signal and induce clonal anergy
US6294350B1 (en) 1997-06-05 2001-09-25 Dalhousie University Methods for treating fibroproliferative diseases
MY131805A (en) 1997-09-18 2007-09-28 Biogen Idec Inc Synergistic composition and methods for treating neoplastic or cancerous growths and for restoring or boosting hematopoiesis.
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
CA2330939A1 (en) 1998-06-16 1999-12-23 Biogen, Inc. Variant type ii tgf-beta receptor fusion proteins and methods
ES2146552B1 (es) 1998-11-24 2001-04-16 Inst Cientifico Tecnol Navarra Peptidos inhibidores de tgf/31
IL151369A0 (en) 2000-03-09 2003-04-10 Genzyme Corp USE OF TGF-beta ANTAGONISTS FOR PREPARATION OF A PHARMACEUTICAL COMPOSITION
US20040234967A1 (en) 2000-03-24 2004-11-25 Moskowitz David W. Diagnostic polymorphisms of tgf-beta-rii promoter
US20030028905A1 (en) 2001-07-31 2003-02-06 Petra Knaus Mutant forms of the TGF-beta type II receptor which bind all TGF-beta isoforms
US20030180301A1 (en) 2002-01-22 2003-09-25 Shaf Keshavjee Use of TGF-beta antagonists to treat or to prevent chronic transplant rejection
US7919084B2 (en) 2002-06-17 2011-04-05 St. Vincent's Hospital Sydney Limited Methods of diagnosis, prognosis and treatment of cardiovascular disease
CA2513086A1 (en) 2002-12-19 2004-07-08 Scios Inc. Treatment of obesity and associated conditions with tgf-.beta. inhibitors
WO2004098637A1 (en) 2003-04-30 2004-11-18 Genzyme Corporation Tgf-beta antagonists combined with renin-angiotensin-aldosteron-system antagonists for treating renal insufficiency
WO2005019258A2 (en) 2003-08-11 2005-03-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
JP2007502284A (ja) 2003-08-13 2007-02-08 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニヴァーシティー オブ イリノイ ｓｉＲＮＡによるＴＧＦベータＩＩ型受容体発現のサイレンシング
CN1838958A (zh) 2003-08-22 2006-09-27 贝林格尔·英格海姆药物公司 治疗慢性阻塞性肺病和肺动脉高血压的方法
US20090042780A1 (en) 2004-05-20 2009-02-12 Acceleron Pharma Inc Modified TGF-Beta Superfamily Polypeptides and Related Methods
JP5022216B2 (ja) * 2004-06-04 2012-09-12 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 自己炎症性疾患を処置するためのｉｌ−１アンタゴニストを使用する方法
US7786261B2 (en) 2004-09-02 2010-08-31 National Research Council Of Canada Coiled-coil fusion proteins comprising cell receptor domains
US7867496B2 (en) 2004-09-22 2011-01-11 Genzyme Corporation Use of TGF-β antagonists to limit nephrotoxicity of immunosuppressive agents
US7795389B2 (en) 2004-09-28 2010-09-14 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Antagonizing TGF-beta activity with various ectodomains TGF-beta receptors used in combination or as fusion proteins
JP5481028B2 (ja) 2004-10-13 2014-04-23 ザ オハイオ ステート ユニバーシティー リサーチ ファウンデーション ウイルス関連リンパ増殖性障害を処置または予防するための方法
CN104151427B (zh) 2005-02-08 2017-09-08 根茨美公司 针对TGFβ的抗体
JP5342834B2 (ja) 2008-09-05 2013-11-13 日東電工株式会社 骨髄線維症処置剤
ITMI20060181A1 (it) 2006-02-03 2007-08-04 Univ Padova Modulatori del tgf-b e loro uso
EP2230252A1 (en) 2006-03-13 2010-09-22 The Johns Hopkins University Augmentation of endothelial thromboresistance
EP2029625A2 (en) 2006-06-05 2009-03-04 Novartis AG Use of tgf-beta antagonists in treatment of parathyroid-related disorders
DK2918288T3 (da) 2006-10-03 2017-11-27 Genzyme Corp Anvendelse af TGF-beta-antagonister til behandling af spædbørn med risiko for udvikling af bronkopulmonal dysplasi
EP2140005B1 (en) 2007-03-19 2013-12-11 National Research Council of Canada Fusion proteins comprising two tgf-beta binding domains
EP2171062A1 (en) 2007-06-15 2010-04-07 Genzyme Corporation Fusion proteins containing two tgf-beta binding domains of tgf-beta type ii receptor
BRPI0815572A2 (pt) 2007-08-22 2015-02-18 Irm Llc Compostos e composições como inibidores de quinases
JP2011509676A (ja) 2008-01-18 2011-03-31 ザ ブライハム アンド ウイメンズ ホスピタル， インコーポレイテッド ヒトＴｈ１７細胞の選択的分化、同定および調節
AU2009241755B2 (en) * 2008-05-02 2015-10-01 Acceleron Pharma Inc. Methods and compositions based on ALK1 antagonists for modulating angiogenesis and pericyte coverage
WO2009143309A2 (en) 2008-05-21 2009-11-26 Trustees Of Dartmouth College Female reproductive tract and anal prophylaxes
WO2009152610A1 (en) 2008-06-20 2009-12-23 The Royal Institution For The Advancement Of Learning/Mcgill University Interleukin-2/soluble tgf-beta type ii receptor b conjugates and methods and uses thereof
WO2009158025A2 (en) * 2008-06-26 2009-12-30 Acceleron Pharma Inc. Methods for dosing an actriib antagonist and monitoring of treated patients
US20110177070A1 (en) 2008-07-02 2011-07-21 Emergent Product Development Seatlle, LLC TGF-Beta Antagonist Multi-Target Binding Proteins
EP2326670A4 (en) * 2008-09-17 2014-04-16 Nat Res Council Canada HETERO MULTIVALENT BINDING AGENT FOR ELEMENTS OF THE TGF-BETA SUPERFAMILY
US20120010178A1 (en) 2008-10-21 2012-01-12 President And Fellows Of Harvard College Methods and compounds for treatment of neurodegenerative disorders
CA2749544A1 (en) 2009-01-13 2010-07-22 Acceleron Pharma Inc. Methods for increasing adiponectin
CN102548617B (zh) * 2009-03-30 2017-11-07 阿塞勒隆制药公司 Bmp‑alk3拮抗剂和促进骨生长的用途
WO2010129515A1 (en) 2009-05-08 2010-11-11 The United Satates Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Modulation of the tgf-beta and pi3k/akt pathways in the diagnosis and treatment of squamous cell carcinoma
EP2524038A4 (en) 2010-01-12 2013-11-20 Isis Pharmaceuticals Inc MODULATION OF TRANSFORMING A GROWTH FACTOR BETA-1 EXPRESSION
EP3798237A1 (en) 2010-03-05 2021-03-31 The Johns Hopkins University Compositions and methods for targeted immunomodulatory antibodies and fusion proteins
CN101852804B (zh) * 2010-03-29 2013-06-12 中国医学科学院病原生物学研究所 Gdf15蛋白的抗体的新用途
US8080568B1 (en) 2010-06-29 2011-12-20 Ewha University - Industry Collaboration Foundation 2-pyridyl substituted imidazoles as therapeutic ALK5 and/or ALK4 inhibitors
RU2637088C2 (ru) 2010-09-01 2017-11-29 Джензим Корпорейшн Лечение инфаркта миокарда с использованием антагонистов tgf-бета
US20130287688A1 (en) 2010-11-18 2013-10-31 Xtuit Pharmaceuticals, Inc. Novel compositions and uses of anti-hypertension agents for cancer therapy
US8800906B2 (en) 2010-12-27 2014-08-12 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Use of transforming growth factor-beta neutralizing antibodies and fusion proteins thereof in treating pain
CA2823104A1 (en) 2011-01-06 2012-07-12 Glaxo Group Limited Ligands that bind tgf-beta receptor ii
CA2833747C (en) 2011-04-20 2022-10-18 Asya Grinberg Endoglin polypeptides and uses thereof
CN102850458B (zh) * 2011-06-28 2014-10-01 华博生物医药技术（上海）有限公司 新型重组双功能融合蛋白及其制法和用途
WO2013012648A1 (en) * 2011-07-15 2013-01-24 Emory University Gdf15 in diagnostic and therapeutic applications
US9468666B2 (en) 2011-08-01 2016-10-18 Tufts Medical Center, Inc. Treatment of heart failure and related conditions
WO2013059879A1 (en) 2011-10-26 2013-05-02 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Compositions and methods for the treatment of fibrosis and fibrotic diseases
CN104334573A (zh) 2012-04-30 2015-02-04 比奥孔有限公司 靶向/免疫调节性融合蛋白及其制造方法
WO2013173307A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Neil Desai Multi-target modulation for treating fibrosis and inflammatory conditions
KR102258457B1 (ko) 2013-03-11 2021-05-31 젠자임 코포레이션 조작된 항-tgf-베타 항체 및 항원-결합 단편
ES2704411T3 (es) 2013-03-12 2019-03-18 Biocon Ltd Proteínas de fusión inmunomoduladoras y procedimientos de fabricación de las mismas
US10584158B2 (en) 2013-04-17 2020-03-10 Baylor College Of Medicine Immunosuppressive TGF-β signal converter
AU2014308751B2 (en) 2013-08-22 2020-03-05 Acceleron Pharma, Inc. TGF-beta receptor type II variants and uses thereof
WO2015077540A2 (en) 2013-11-21 2015-05-28 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Compositions and methods for treating pulmonary hypertension
BR112016014952A2 (pt) 2014-02-10 2017-09-19 Merck Patent Gmbh Inibição direcionada de tgfbeta
WO2015179227A1 (en) 2014-05-18 2015-11-26 Children's Medical Center Corporation Methods and compositions relating to exosomes
EP3154559B1 (en) 2014-06-13 2021-09-01 Novartis AG Use of serelaxin to reduce gdf-15
WO2016019368A1 (en) 2014-08-01 2016-02-04 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods and compositions relating to treatment of pulmonary arterial hypertension
EA202190016A1 (ru) 2015-04-06 2021-08-31 Акселерон Фарма Инк. Гетеромультимеры рецепторов типа i и типа ii белков суперсемейства tgf-бета
JP7320350B2 (ja) 2015-08-04 2023-08-03 アクセルロン ファーマ インコーポレイテッド 骨髄増殖性障害を処置するための方法
CA2996996A1 (en) 2015-08-31 2017-03-09 National Research Council Of Canada Tgf-.beta.-receptor ectodomain fusion molecules and uses thereof
WO2017134592A1 (en) 2016-02-03 2017-08-10 Biocon Limited Anti-cd20/immunomodulatory fusion proteins and methods for making same
SG11201901126UA (en) 2016-08-12 2019-03-28 Merck Patent Gmbh Combination therapy for cancer
EP3519442A4 (en) 2016-09-27 2020-06-17 EpicentRx, Inc. IMMUNOMODULATORY FUSION PROTEINS
JP2020514290A (ja) 2017-01-07 2020-05-21 メルク パテント ゲーエムベーハー 標的ｔｇｆ−β阻害のための投薬計画及び投薬形態
MX2019010392A (es) 2017-03-02 2019-12-02 Nat Res Council Canada Moleculas de fusion de ectodominios receptores de tgf-b y sus usos.
PL3628049T3 (pl) 2017-05-04 2023-09-25 Acceleron Pharma Inc. Białka fuzyjne receptora TGF-beta typu II i ich zastosowania
US20220211805A1 (en) 2018-02-09 2022-07-07 Acceleron Pharma Inc. Methods for treating heterotopic ossification

Also Published As

Publication number Publication date
EP3705498A1 (en) 2020-09-09
US20210230252A1 (en) 2021-07-29
US10316076B2 (en) 2019-06-11
EP3036262A1 (en) 2016-06-29
US20190284257A1 (en) 2019-09-19
CN116655801A (zh) 2023-08-29
EP3036262A4 (en) 2017-03-01
JP2019194270A (ja) 2019-11-07
WO2015027082A1 (en) 2015-02-26
JP2021112212A (ja) 2021-08-05
HK1225740A1 (zh) 2017-09-15
CA2921805A1 (en) 2015-02-26
AU2014308751A1 (en) 2016-03-17
JP2016528295A (ja) 2016-09-15
AU2020203514B2 (en) 2022-06-16
US20160376341A1 (en) 2016-12-29
US20180179261A1 (en) 2018-06-28
US20200157182A1 (en) 2020-05-21
HK1225742A1 (zh) 2017-09-15
US10981973B2 (en) 2021-04-20
AU2014308751B2 (en) 2020-03-05
US11008377B2 (en) 2021-05-18
US20150056199A1 (en) 2015-02-26
CA2921805C (en) 2023-03-07
US9809637B2 (en) 2017-11-07
CN105658672A (zh) 2016-06-08
AU2020203514A1 (en) 2020-06-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2024015040A (ja) Ｔｇｆ－ベータ受容体ｉｉ型変異体およびその使用
US20220296708A1 (en) Alk1 receptor and ligand antagonists and uses thereof
US20210388104A1 (en) Methods and compositions for modulating angiogenesis and pericyte composition
US9452197B2 (en) Antagonists of BMP9, BMP10, ALK1 and other ALK1 ligands, and uses thereof
EP3060235B1 (en) Endoglin peptides to treat fibrotic diseases
CA2724525A1 (en) Antagonists of bmp9, bmp10, alk1 and other alk1 ligands, and uses thereof
US20220017600A1 (en) Methods and compositions for modulating angiogenesis and pericyte composition

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20231127

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20231128