JP2024010026A - 医薬製剤及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】エタネルセプト医薬組成物の製剤、緩衝液の除去方法、及びエタネルセプト医薬組成物の製剤方法を提供する。【解決手段】７５ｍＭ～１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭ～１００ｍＭのアルギニン、０．５％～２％（ｗ／ｖ）スクロース、及び４０ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬのエタネルセプトを含む医薬組成物であって、前記医薬組成物は、２．０ｍＭ未満の全追加緩衝剤を含み、かつ前記組成物のｐＨは、６．１～６．５である、医薬組成物とする。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本願は２０１６年１０月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／４１１，４５８号の利益を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本発明は、エタネルセプト医薬組成物の製剤に関する。本発明はまた、緩衝液を除去する方法、及びエタネルセプト医薬組成物の製剤方法に関する。

タンパク質薬剤の製剤は、製薬科学者に多くの課題を提示することができる。タンパク質薬剤を安定化し、タンパク質の分解、凝集、ミスフォールディングなどによる劣化に耐性を有する製剤を見出されなければならない。特に、既知のタンパク質と実質的に異なる改変タンパク質については、適切な安定条件を見出すことが課題となり得る。また、タンパク質薬剤を、患者にとって便利な形式にすることも望ましい。所望の特性には、周囲温度及び冷蔵温度での安定性、長期保存に対する適合性、適切な投薬回数及び量、ならびに投与時の不快感の最小化が含まれる。

エタネルセプトは、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に連結されたヒト７５キロダルトン（ｐ７５）腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）の細胞外リガンド結合部分からなる二量体融合タンパク質である。エタネルセプトのＦｃ成分は、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びヒンジ領域を含むが、ＣＨ１ドメインは含まない。哺乳動物細胞中で発現されると、それは、ＴＮＦ受容体の２つのドメインとホモ二量体複合体を形成する。したがって、それは、抗体及び可溶性ＴＮＦ受容体のいずれとも異なる人工タンパク質であり、それ故、どちらとも異なる劣化経路を辿る。エタネルセプトはＥＮＢＲＥＬ（登録商標）（Ａｍｇｅｎ Ｉｎｃ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）として市販されており、中等度から重度の活動性関節リウマチ、２歳以上の患者の中等度から重度の活動性多関節性若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、成人における慢性の中等度から重度のプラーク乾癬（ＰｓＯ）、成人の乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、及び活動性強直性脊椎炎（ＡＳ）の治療が認められている。エタネルセプトが最初に入手できたのは、注射の直前に再構成する必要のある凍結乾燥製剤としてであった。

凍結乾燥製品を注射用水で再構成したとき、この製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬで、１０ｍＭのトリスＨＣｌ、４％のマンニトール、１％のスクロースであり、ｐＨは７．４である。しかしながら、この製剤は貯蔵に対して安定ではない。エタネルセプトの液体製剤は、タンパク質を安定化するためにアルギニンを使用して達成できることが見出された（米国特許第７，６４８，７０２号明細書を参照されたい）。例示的な液体製剤は、５０ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト、２５ｍＭのリン酸緩衝液、２５ｍＭのＬ－アルギニン塩酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロースの、ｐＨ６．３の水溶液からなる。

本明細書では、エタネルセプトの、新規で改良された製剤が提供される。特に、本発明は、安定であり、追加の緩衝剤が存在しなくても、制御された室温（ＣＲＴ）で長期間、液体として便利に保存することができるエタネルセプトを含有する医薬組成物を提供する。さらに、本発明の医薬組成物を対象に注射するとき、それらはまた、市販の従来の製剤と比較して、注射痛をかなりの程度減少させることを示した。したがって、これらの医薬組成物は患者にとってより便利であり、有利である。

本発明の別の態様は、エタネルセプトの医薬調製物を所望のｐＨで、しかし最終製剤中に追加の緩衝剤が存在しない状態で製剤化する方法を提供する。

別の態様では、本発明はエタネルセプト、ＮａＣｌ、アルギニン、及びスクロースを含む医薬組成物であって、実質的に追加の緩衝剤を含まず、かつｐＨが６．１～６．５である組成物を提供する。一実施形態では、制御された室温（ＣＲＴ）で２週間保存すると、医薬組成物はｐＨを６．１～６．５に維持することができる。別の実施形態では、エタネルセプト濃度は４０ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬである。別の実施形態では、医薬組成物は等張である。別の実施形態では、医薬組成物は、２０ｍＭから１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭから１００ｍＭのアルギニン、及び０．５％から２％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む。別の実施形態では、医薬組成物は界面活性剤を含む。別の実施形態では、界面活性剤はポリソルベート２０、ポリソルベート８０、又はポロキサマー１８８である。別の実施形態では、界面活性剤は０．００１％～０．１％の濃度（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０である。別の実施形態では、界面活性剤は０．００１％～０．１％の濃度（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０である。別の実施形態では、界面活性剤は０．０１％～０．３％の濃度（ｗ／ｖ）のポリソルベート１８８である。別の実施形態では、医薬組成物は、約２５℃で保存すると、少なくとも２週間は５．８～６．７のｐＨを維持し、かつサイズ排除クロマトグラフィーを使用して評価すると、全エタネルセプトの６％未満が高分子量形態で凝集している。別の実施形態では、医薬組成物は約６．１～約６．５のｐＨを維持する。別の実施形態では、疎水性相互作用クロマトグラフィーを使用して評価すると、エタネルセプトの全量の２８％未満はミスフォールド形態である。別の実施形態では、医薬組成物は実質的に、約４０～１００ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト、約１２０ｍＭのＮａＣｌ、約２５ｍＭのアルギニン、約１％のスクロース、及び水からなる。別の実施形態では、医薬組成物は実質的に、約４０～１００ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト、約１２０ｍＭのＮａＣｌ、約２５ｍＭのアルギニン、約１％のスクロース、約０．０１％のポリソルベート２０及び水からなる。

別の態様では、本発明は、追加の緩衝剤を除去し、かつｐＨを６．１～６．５に維持するための、エタネルセプト医薬組成物の製剤方法であって、エタネルセプト製剤をｐＨ６．１～６．５の追加の緩衝剤を含む製剤に製剤化する工程と、追加の緩衝剤を含む製剤を、追加の緩衝剤を含まない、ｐＨが５．６～６．５の製剤と交換する工程と、得られた医薬製剤を回収する工程とを含む方法を提供する。一実施形態では、交換工程は透析ろ過を使用する。別の実施形態では、追加の緩衝剤を含まない製剤は等張である。別の実施形態では、追加の緩衝剤を含まない製剤は、スクロース、アルギニン及びＮａＣｌを含有する。別の実施形態では、追加の緩衝剤を含まない製剤は、２０ｍＭ～１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭ～１００ｍＭのアルギニン、及び０．５％～２％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む。別の実施形態では、追加の緩衝剤を含まない製剤は、実質的に、約１２０ｍＭのＮａＣｌ、約２５ｍＭのアルギニン、約１％のスクロース、及び水からなる。別の実施形態では、エタネルセプト医薬組成物を製剤化する方法は、ポリソルベートを添加する工程をさらに含む。別の実施形態では、ポリソルベートは０．００１％～０．１％の濃度（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０である。別の実施形態では、エタネルセプト医薬組成物を製剤化する方法は、医薬組成物をろ過する工程をさらに含む。別の実施形態では、エタネルセプト医薬組成物を製剤化する方法は、医薬組成物を薬剤製品形態へと等分する工程をさらに含む。

別の態様では、本発明は薬剤製品形態の上記エタネルセプト医薬組成物と、保存及び使用のための説明書とを含むキットを提供する。

別の態様では、本発明はエタネルセプト、ＮａＣｌ、アルギニン、スクロース、リン酸緩衝液及びベンジルアルコールを含む医薬組成物であって、ｐＨが６．１～６．５である組成物を提供する。一実施形態では、ベンジルアルコールは０．１％～５．０％の濃度（ｖ／ｖ）である。別の実施形態では、ベンジルアルコールの濃度は約０．９％である。別の実施形態では、エタネルセプトを含む医薬組成物は０．００１％～０．１％の濃度（ｗ／ｖ）でポリソルベート２０をさらに含む。別の実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は約０．００４％である。別の実施形態では、エタネルセプトを含む医薬組成物は、実質的に、約４０～１００ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト、約２５ｍＭのアルギニン、約１００ｍＭの塩化ナトリウム、約１％の濃度（ｗ／ｖ）のスクロース、約２５ｍＭのリン酸緩衝液、及び約０．９％の濃度（ｖ／ｖ）のベンジルアルコールからなる。別の実施形態では、エタネルセプトを含む医薬組成物は、実質的に、約４０～１００ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト、約２５ｍＭのアルギニン、約１００ｍＭの塩化ナトリウム、約１％の濃度（ｗ／ｖ）のスクロース、約２５ｍＭのリン酸緩衝液、約０．９％の濃度（ｖ／ｖ）のベンジルアルコール、及び約０．００４％の濃度（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０からなる。

別の態様では、本発明は上記のエタネルセプトを含む医薬組成物を含有する単一用量容器を提供する。一実施形態では、医薬組成物は実質的に、約４０～１００ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト、約２５ｍＭのアルギニン、約１００ｍＭの塩化ナトリウム、約１％の濃度（ｗ／ｖ）のスクロース、約２５ｍＭのリン酸緩衝液、及び約０．９％の濃度（ｖ／ｖ）のベンジルアルコールからなる。別の実施形態では、医薬組成物は実質的に、約４０～１００ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト、約２５ｍＭのアルギニン、約１００ｍＭの塩化ナトリウム、約１％の濃度（ｗ／ｖ）のスクロース、約２５ｍＭのリン酸緩衝液、約０．９％の濃度（ｖ／ｖ）のベンジルアルコール、及び約０．００４％の濃度（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０からなる。別の実施形態では、単一用量容器はバイアル、シリンジ、又は自己注射器である。別の実施形態では、単一用量容器は、５０．０ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト、１２０ｍＭの塩化ナトリウム、２５ｍＭのＬ－アルギニン、１．０％（ｗ／ｖ）のスクロースからなる水性製剤を含む。

別の態様では、本発明は上記のエタネルセプトを含む医薬組成物を含有する単一用量容器を調製する方法であって、無菌条件下でほぼ単一用量の医薬組成物を単一用量容器に充填する工程を含む方法を提供する。

図１は、実施例３のエタネルセプトの安定性分析で、ＳＥＣによって検出されたパーセントＨＭＷ（ピークＢ）を示す。 図２は、実施例３のエタネルセプトの安定性分析で、ｄＳＥＣによって検出されたパーセントＬＭＷを示す。 図３は、実施例３のエタネルセプトの安定性分析で、ＨＩＣによって検出されたパーセントピーク３を示す。 図４は、実施例４のステンレス鋼製冷凍容器貯蔵エタネルセプトの安定性分析で、ＨＩＣによって検出されたパーセントピーク３を示す。 図５は、実施例４のステンレス鋼製冷凍容器貯蔵エタネルセプトの安定性分析で、ｄＳＥＣによって検出されたパーセントＬＭＷを示す。 図６は、実施例４のステンレス鋼製冷凍容器貯蔵エタネルセプトの安定性分析で、ＳＥＣによって検出されたパーセントピークＢを示す。 図７は、実施例４の凍結融解エタネルセプトの安定性分析で、ＳＥＣによって検出されたパーセントピークＢを示す。 図８は、実施例６の分析で、調整したＡＥＸ中間体プールの、制御された室温（ＣＲＴ）でのｐＨの安定性を示す。 図９は、実施例６の分析で、ＵＦ／ＤＦプールのｐＨ（Ａ）及び導電率（Ｂ）のＣＲＴでの安定性を示す。 図１０は、実施例６の分析で、ＳＡＳ溶液中で製剤化されたエタネルセプトのｐＨ（Ａ）及び導電率（Ｂ）の安定性を示す。

本発明は、エタネルセプトの改良された医薬組成物を提供する。本明細書では、「医薬組成物」という語句は、それを必要とする患者への注射及び／又は投与に適したポリペプチド製剤を指すものと理解される。より詳しくは、医薬組成物は実質的に無菌であり、レシピエントに対して過度な毒性又は感染性を有するいかなる薬剤も含まない。エタネルセプトは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン（ＴＮＦＲ：Ｆｃ）に融合したｐ７５ＴＮＦ受容体の可溶性形態である。市販のエタネルセプトは、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）（Ｉｍｍｕｎｅｘ Ｉｎｃ．，Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ，ＣＡ）として知られている。エタネルセプトは、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）哺乳動物細胞発現系において組換えＤＮＡ技術によって生産される。これは９３４のアミノ酸からなり、約１５０キロダルトンの見掛け分子量を有する（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，２００２，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｉｎｃ．）。ＣＨＯ細胞で発現された完全配列を以下に示す。しかしながら、あまり重要でない改変及び欠失を（１０％まで）この配列に施すことは可能であり得、そして本発明の範囲内で使用できることを理解すべきである。

本発明はエタネルセプトを含むが、追加の緩衝剤は実質的に含まない医薬組成物を提供する。「追加の緩衝剤」という語句は、エタネルセプト自体以外のエタネルセプト組成物又は製剤の成分であって、組成物又は製剤の緩衝能に有意に寄与する成分を指す。エタネルセプト自体、下記の条件下で、ｐＨを６．１～６．５、特に約６．２～６．３に維持するのに必要な全ての緩衝作用を提供することが本明細書で示されている。下記実施例１で示すように、このｐＨ範囲は、エタネルセプト製剤の所望の安定特性（６％未満の高分子量凝集体及び２８％未満のミスフォールド及びクリップされた種）を維持するのに有効であることがわかった。

「追加の緩衝剤を実質的に含まない」という語句は、エタネルセプト以外の緩衝剤が０．５ｍＭ未満であることを意味する。「全追加緩衝剤」という語句は、エタネルセプト自体以外の、組成物又は製剤の緩衝能に有意に寄与する、エタネルセプト組成物又は製剤の全ての成分を集合的に指す。いくつかの実施形態では、本発明による医薬組成物は、２．０ｍＭ未満の全追加緩衝剤、１．５ｍＭ未満の全追加緩衝剤、１．０ｍＭ未満の全追加緩衝剤、０．５ｍＭ未満の全追加緩衝剤、０．２５ｍＭ未満の全追加緩衝剤、０．１ｍＭ未満の全追加緩衝剤、又は０．０５ｍＭ未満の全追加緩衝剤を含む。典型的な医薬組成物では、追加の緩衝剤を、多くの場合５．０ｍＭ以上の濃度で使用して、ｐＨを所望の範囲に維持する。種々のよく知られている追加の緩衝剤は、ヒスチジン、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム又はクエン酸カリウム、マレイン酸、酢酸アンモニウム、トリス－（ヒドロキシメチル）－アミノメタン（トリス）、様々な形態の酢酸塩及びジエタノールアミンである。緩衝能がｐＨ６．２又はその近傍であるという理由で、１つの一般的な緩衝剤はリン酸ナトリウムである。リン酸ナトリウムは、エタネルセプトの現在市販の液体製剤で使用されている緩衝剤である（液体製剤の所望のｐＨが６．３であるので）。本明細書に記載の発明では、エタネルセプト医薬製剤中に、リン酸ナトリウムを実質的に含まない。驚くべきことに、いかなる追加の緩衝剤も実質的に含まれていないにもかかわらず、本発明の医薬組成物のｐＨは、長期保存後でさえも、６．１～６．５の間に維持される。さらに驚くべきことに、対象（例えば、ヒト対象又は患者）に注射するとき、追加の緩衝剤を実質的に含まない医薬組成物は、現在の市販の緩衝製剤よりも有意に痛みの軽減をもたらす。リン酸塩は中性に近いｐＨ緩衝能を有すること、及び（例えば、クエン酸緩衝液と比較して）痛みの少ない緩衝成分の１つと考えられることから、医薬組成物の緩衝剤としてしばしば選択されるが、本発明者らはｐＨ６．３付近のリン酸緩衝液は注射時に痛みをもたらすと断定した。

それが使用される文脈から別の意味であることが明らかでない限り、「製剤溶液」又は「製剤緩衝液」は、それ自体はエタネルセプトを含まず、エタネルセプトを含む製剤を作るために使用される溶液又は緩衝液である。

典型的には、本発明の医薬組成物中のエタネルセプト濃度は、水性製剤（例えば、溶媒としての水）中、約４０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬである。より好ましくは、エタネルセプト濃度は、約４０ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬ、より一層好ましくは約４０ｍｇ／ｍＬ～約７５ｍｇ／ｍＬ、及び任意選択により約５０ｍｇ／ｍＬである。

本発明の医薬組成物はまた、アルギニンを含む。アルギニンは、液体製剤中でエタネルセプトの安定化に実質的に寄与することが示されている（参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，６４８，７０２号明細書を参照されたい）。薬学的に適切な形態のアルギニンが市販されている。一般的には、Ｌ－アルギニン（例えば、Ｌ－アルギニンＨＣｌ又はＬ－アルギニン塩基）が、医薬製剤に使用されるアルギニンである。６．０～６．６のｐＨ範囲内、特に約６．２～６．３のｐＨでは、アルギニンは製剤の緩衝能に有意に寄与しないと認識されている。したがって、それは、本発明のエタネルセプト製剤又は組成物中で、追加の緩衝剤ではない。本発明の組成物中のアルギニンの濃度は、好ましくは約１ｍＭ～約１Ｍ、より好ましくは約１０ｍＭ～約２００ｍＭ、あるいは約５ｍＭ～約１００ｍＭ、より好ましくは約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、より一層好ましくは約１５ｍＭ～約７５ｍＭ、さらにより一層好ましくは約２５ｍＭである。したがって、本発明の一態様では、医薬組成物は約５０ｍｇ／ｍＬ～７５ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト及び約２５ｍＭのアルギニンを含み、この医薬組成物は追加の緩衝剤を実質的に含まず、組成物のｐＨは６．０～６．６である。本明細書では、「約」という用語は、記載された製剤の成分濃度に、所与の値の１０％まで（１０％を含む）の変動があり得ることを意味すると理解される。例えば、製剤が約１０ｍｇ／ｍＬのポリペプチドを有する場合、これは、製剤が記載されたポリペプチドを９～１１ｍｇ／ｍＬ有し得ることを意味すると理解される。

医薬組成物は、賦形剤が追加の緩衝剤でなく、特にリン酸塩緩衝剤でない限り、追加の賦形剤を含有し得る。本発明の追加の賦形剤の例には、スクロース、ラクトース、グリセロール、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、マルトース、イノシトール、トレハロース、グルコースなどの糖／ポリオール；血清アルブミン（ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒトＳＡ又は組換えＨＡ）、デキストラン、ＰＶＡ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリエチレンイミン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）などのポリマー；多価アルコール、（例えば、ＰＥＧ、エチレングリコール及びグリセロール）ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）及びジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などの非水性溶媒；プロリン、Ｌ－セリン、アラニン、グリシン、塩酸リシン、サルコシン及びガンマ－アミノ酪酸などのアミノ酸、ならびに界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。

本発明のいくつかの好ましい実施形態では、賦形剤は、ＮａＣｌ及び／又はスクロースを含む。ＮａＣｌは医薬組成物中に約５ｍＭ～約２００ｍＭ、より好ましくは約２０ｍＭ～約１５０ｍＭ、より一層好ましくは約８０ｍＭ～約１４０ｍＭの濃度で存在し得る。スクロースは、約０．５％～約２％（ｗ／ｖ）のスクロース、より好ましくは約０．８％～約１．２％（ｗ／ｖ）のスクロース、さらにより好ましくは約１％（ｗ／ｖ）のスクロース濃度まで添加し得る。

医薬組成物の重量オスモル濃度は、活性成分の安定性を最大にし、また投与時に患者に与える不快感を最小にするよう調節することが好ましい。医薬組成物が血清と等張であること、すなわち、同一又は類似の重量オスモル濃度を有することが一般に好ましく、これは、浸透圧調節剤の添加によって達成される。血清は、キログラム当たり約３００＋／－５０ミリ重量モル浸透圧／キログラムであり、したがって、等張医薬組成物の重量オスモル濃度は、約１８０～約４２０ミリ重量モル浸透圧であると考えられる。いくつかの実施形態では、この範囲は約２５０～約３５０ミリ重量モル浸透圧であろう。

浸透圧調節剤は、溶液の重量オスモル濃度に寄与する分子であると理解される。重量オスモル濃度を調節するのに適した浸透圧調節剤の例としては、アミノ酸（例えば、アルギニン、システイン、ヒスチジン及びグリシン）、塩（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム及びクエン酸ナトリウム）及び／又は糖類（例えば、スクロース、グルコース及びマンニトール）が挙げられるが、これらに限定されない。製剤中の浸透圧調節剤の濃度は、好ましくは約１ｍＭ～１Ｍ、より好ましくは約１０ｍＭ～約２００ｍＭである。いくつかの実施形態では、ＮａＣｌ及びスクロースの濃度は、等張医薬組成物を生成するよう調節される。下で例として示すいくつかの実施形態では、医薬組成物は、約４０～１００ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト、約１２０ｍＭのＮａＣｌ、約２５ｍＭのアルギニン、約１％のスクロース、及び水を含有する。特に、医薬組成物は、実質的に、約５０～１００ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト、約１２０ｍＭのＮａＣｌ、約２５ｍＭのアルギニン、約１％のスクロース、約０．０１％のポリソルベート２０及び水からなり得る。

任意選択により、本発明の医薬組成物は、界面活性剤を含み得る。界面活性剤は、溶液／表面に誘導された応力を低減する薬剤である。界面活性剤の例としては、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、及びポリソルベート８０などのポリソルベート（例えば、ＴＷＥＥＮ－２０（登録商標）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）又はＴＷＥＥＮ－８０（登録商標）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ポリオキシエチレンコポリマー、ポロキソマー１８８（例えば、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ－６８（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））、又はポロキソマー４０７（例えば、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ－１２７（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））などのポロキサマー、ＣＨＡＰＳ、モノラウレート、あるいは上記の任意の組み合わせが挙げられる。好ましい界面活性剤はポリソルベート２０である。例えば、ポリソルベート２０は、約０．００１％～約０．０３％の濃度（ｗ／ｖ）で医薬組成物に含めることができる。例として下に示す特定の実施形態では、ポリソルベート２０は、０．０１％又は約０．００４％の濃度（ｗ／ｖ）で医薬製剤に含めることができる。

医薬組成物の試験
下記の実施例は、製剤がｐＨを所望の範囲に維持することができるかどうかを、当業者がどのようにして決定することができるかを説明する。基本的には、医薬組成物は試験容器（ガラスバイアル、ガラスシリンジ、プラスチックシリンジ、ステンレス鋼製容器、又は医薬組成物に適した任意の様式の滅菌デバイスであり得る）中で製剤化して保存し、ｐＨを時間０で評価し、その後、必要に応じて、示された時間で評価する。通常、試験条件は医薬組成物の貯蔵の必要性を予測し、それらの条件に重点を置くであろう。例えば、本発明の製剤は、制御された室温（ＣＲＴ）下で、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも８週間、少なくとも１２週間、及び少なくとも２４週間、所望のｐＨを維持することができる。ＣＲＴはＵＳＰによって定義され、２０℃～２５℃（６８°Ｆ～７７°Ｆ）の通常の慣用の作業環境を包含し；２５℃以下であると計算される平均動力学的温度をもたらし；かつ、薬局、病院、及び倉庫で経験される１５℃～３０℃（５９°Ｆ～８６°Ｆ）の間の偏位を許可する、サーモスタットで維持された温度を有する。

一態様では、本発明の医薬組成物は特定の品質特性を示す。これらの品質特性の試験についても、実施例として下で説明する。例えば、本発明の医薬組成物は、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて評価した場合、高分子量形態に凝集したエタネルセプトの含有量が、全エタネルセプトの６％未満である。別の例を挙げれば、本発明の医薬組成物は、疎水性相互作用クロマトグラフィーを使用して評価した場合、ミスフォールド形態のエタネルセプトの含有量が、エタネルセプトの全量の２８％未満である。

本発明の医薬組成物は、ｐＨ及び／又は他の注目すべき品質特性（最小の高分子量形態及び最小のミスフォールド形態）を、以下の温度及び延長された期間、すなわち（１）－３０℃（凍結）で少なくとも４週間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、及び少なくとも３６ヶ月間、（２）１回の凍結／融解サイクル、２回までの凍結／融解サイクル、３回までの凍結／融解サイクル、及び５回までの凍結／融解サイクルで、（３）４℃（冷蔵温度）で、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも８週間、少なくとも１２週間、少なくとも２４週間、及び少なくとも５２週間、（４）２５℃（室温）で、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも８週間、少なくとも１２週間、少なくとも２４週間、及び（５）４０℃（加速安定性試験）で少なくとも２週間維持することによって、安定性を保持することができる。

本発明の医薬組成物はまた、対象者への注射の際に、痛みを軽減するという驚くべき結果を示す。この特性は、Ｇａｌｌａｇｈｅｒ ｅｔ ａｌ，２００２，Ａｍ．Ｊ．Ｅｍ．Ｍｅｄ．ｖ２０；ｉ４：２８７－２９０によって確証された、ビジュアルアナログスケール（ＶＡＳ）を用いて評価することができる。熟練した医療専門家が注射により薬剤を投与し、各注射後３０秒以内に、対象者が１００ｍｍのビジュアルアナログスケール（ＶＡＳ）を用いて注射痛の程度を評価した。ＶＡＳの１３～１６ｍｍの差は、臨床的に意味があるとみなされる。この手法を用いて、リン酸塩を含まないプラセボ製剤は、ｐＨ６．３のリン酸塩を含有するプラセボ製剤、ならびにｐＨ６．３のエタネルセプト及びリン酸塩の両方を含有する現在の市販製剤よりも、痛みを有意に軽減することが実証された。

本発明の医薬組成物及び方法で使用されるエタネルセプトの製造及び精製は、任意の標準的な方法によって行うことができる。一般に、エタネルセプトはＣＨＯ細胞中で組換えにより発現され、培地中に分泌される。培地を回収し、ろ過し、例えば種々のクロマトグラフィー手法を用いて精製する。例えば、プロテインＡは、エタネルセプトなどのＦｃドメイン含有ポリペプチドの精製に使用することができ、最初の処理工程として有利である。イオン交換カラムによる分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカによるクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥＴ（商標）によるクロマトグラフィー、アニオン又はカチオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラムなど）によるクロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及びアフィニティークロマトグラフィー、ならびに既知の、又は今後発見される精製手法の任意の組み合わせなどの、ポリペプチド精製の他の手法。有用な製造及び精製手法の例は、米国特許第７，２９４，４８１号明細書（Ｆｕｎｇ）、同第７，４５２，６９５号明細書（Ｖａｎ Ｎｅｓｓ ｅｔ ａｌ．）、同第７，１２２，６４１号明細書（Ｖｅｄａｎｔｈａｍ ｅｔ ａｌ．）、同第７，１５７，５５７号明細書（Ｓａｓｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．）、同第７，３００，７７３号明細書（Ｄｒａｐｅａｕ ｅｔ ａｌ．）、同第８，１６３，５２２号明細書（Ｂｒｏｃｋｈａｕｓ ｅｔ ａｌ．）、及び同第７，６４８，７０２号明細書（Ｇｏｍｂｏｔｚ ｅｔ ａｌ．）に見出すことができる。

本発明の方法
本発明はまた、緩衝液を除去し、かつｐＨを標的範囲に維持するための、エタネルセプト医薬組成物を製剤化する方法であって、標的範囲の緩衝製剤形態にエタネルセプトを製剤化する工程と、緩衝製剤を、その標的範囲内の、又は標的範囲のすぐ下の非緩衝製剤に交換する工程と、得られたエタネルセプトの医薬製剤を回収する工程とを含む方法を提供する。下に例示する好ましい実施形態では、本方法は、緩衝液を除去し、かつｐＨを６．０～６．６に維持するための、エタネルセプト医薬組成物を製剤化する方法であって、エタネルセプト製剤をｐＨ６．０～６．６で緩衝製剤形態に製剤化する工程と、緩衝製剤をｐＨ５．６～６．５の非緩衝製剤に交換する工程と、得られた医薬製剤を回収する工程とを含む方法を提供する。ｐＨを６．１～６．５に維持するエタネルセプトの非緩衝組成物を得るには、出発の緩衝エタネルセプト製剤と非緩衝製剤の両方のｐＨの調整を確実に行うことが重要である。例えば、出発の緩衝エタネルセプト製剤がｐＨ７．２である場合、それは、ＨＣｌなどの強酸で６．１～６．５の範囲内に調整されるであろう。同様に、交換に使用される非緩衝製剤は、ｐＨ５．６～６．５に滴定されるべきである。交換用に使用される非緩衝製剤は、緩衝剤を有しないので、滴定の間、注意を払うべきである。

緩衝製剤を非緩衝製剤と交換するために、当業者は、当該技術分野でよく知られている様々な緩衝液交換手法を使用することができる。透析は、比較的大きなタンパク質製剤から不要な比較的小さな分子を除去するために、半透膜を介した選択的拡散を利用する。一実施形態では、不要分子の濃度が所望の倍数に減少するまで、連続的に平衡化を行う。例えば、１，０００，０００倍以上の濃度減少を達成するために、各回１００倍以上の希釈で、３回の連続平衡を行うことができる。限外ろ過及び透析ろ過は、半透膜を使用する点で透析と同様である。しかし、透析の受動的拡散とは異なり、限外ろ過及び透析ろ過は、種々の手法を使用して溶液を強制的に膜に通すことを含む。圧力及び遠心分離が一般に使用される。緩衝液交換のさらに別の方法は、ゲルろ過又はサイズ排除クロマトグラフィーを使用して実施することができる。例えばイオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、及び混合モードクロマトグラフィーなど、多くの他のクロマトグラフィー技術があり、これらもまた十分に当業者の技能の範囲内で、緩衝液交換を達成するために使用することができる。

緩衝製剤が非緩衝製剤に交換された後、本発明の方法は、得られた医薬製剤を回収する工程を含む。この時点で、全ての緩衝液が実質的に除去されているが、ｐＨは依然として所望のレベルに維持されている。エタネルセプトを含有する医薬組成物では、ｐＨは６．０～６．６に維持される。

医薬製剤は、必要に応じてさらに処理し得る。例えば、界面活性剤を加えることができる。別の例では、粒子を除去することが望ましい場合、医薬組成物をろ過することができる。あるいは、又はさらに、本発明の方法はまた、医薬組成物を薬剤製品形態に等分することを含む。このような薬剤製品形態は、患者又は医療提供者による最終使用のために流通される。本発明の医薬組成物は非経口投与、すなわち、皮下、筋肉内、静脈内、腹腔内、脳脊髄内、関節内、滑液嚢内、及び／又は髄腔内投与に特に有用である。非経口投与は、ボーラス注射又は持続注入により行うことができる。注射用の医薬組成物は、単位用量形態、例えば、アンプル又は多用量容器で提供され得る。医薬組成物は、所望であれば、活性成分を含有する１つ以上の単位用量形態を含有し得るバイアル、パック又はディスペンサー装置に入れて提供され得る。一実施形態では、ディスペンサー装置は、注射の準備が整った、単一用量の液体製剤を有する注射器を含むことができる。別の実施形態では、医薬組成物は、再使用可能な自己注射器と共に使用するために、カセット成分に等分される。本発明のさらに別の態様では、医薬組成物は、装着型注射装置内に、又は装着型注射装置と共にパッケージ化して提供することができる。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、無針注射装置に適した薬剤製品形態に等分することができる。

医薬組成物はまた、デポー製剤として好適なフォーマットに等分することができる。そのような長期作用性製剤は埋め込み（例えば、皮下又は筋肉内）によって、又は筋肉内注射によって投与され得る。したがって、例えば、製剤は、好適なポリマーもしくは疎水性材料（例えば、許容可能な油中のエマルジョンとして）、又はイオン交換樹脂により改変することができ、あるいは難溶性誘導体、例えば、難溶性塩として変えることができる。

別の実施形態では、本発明は本発明の医薬組成物を含むキット又は容器に関する。キットはまた、医薬組成物の保存及び使用のための説明書を伴うことができる。容器は例えば、使い捨て容器、すなわち、本発明の単一用量の製剤を入れる容器であり得る。使い捨て容器は、容器から規定量の単一用量を確実に患者に投与することができるように、単一用量に加えて十分な余分を含み得るが、容器が第２の用量を投与するために使用できるほどの余分はないことは認識されている。本発明のいくつかの態様での使用に適した容器の例（それらが使い捨て容器又は繰り返し使用の容器であるかどうかにかかわらず）として、バイアル、シリンジ、及び自己注射器が挙げられる。好適な自己注射器の例としては、米国特許第８，１７７，７４９号明細書、同第８，０５２，６４５号明細書及び同第８，９２０，３７４号明細書、米国特許出願第１２／９９３１６３号明細書、同第１３／２６９７５０号明細書、同第１３／４５４５３１号明細書、同第１４／１１２４７９号明細書、同第１４／７７７２５５号明細書及び同第１４／７７７２５９号明細書、ならびに国際公開第２０１４／００８９３９３号パンフレット、同第２０１６／０３３４９６号パンフレット及び同第２０１６／０３３５０７号パンフレット（これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に見出されるものが挙げられる。

本発明のエタネルセプト含有組成物及び製剤、ならびに本明細書に記載のシリンジ、自己注射器、キットなどは、エタネルセプト治療が有効な病気の患者の治療に使用することができる。このような病気の例としては、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、及び乾癬が挙げられる。エタネルセプトによる患者の治療方法は、例えば、米国特許第７，９１５，２２５号明細書、同第８，１１９，６０５号明細書、同第８，４１０，０６０号明細書、同第８，７２２，６３１号明細書及び同第８，１１９，６０４号明細書（これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

本発明は、以下の実施例を参照することにより、より完全に理解されるであろう。しかしながら、実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

実施例１：各種製剤の安定性試験
この実施例は５０ｍｇ／ｍＬのエタネルセプトに対するｐＨ及び緩衝液の影響を実証し、リン酸緩衝液を添加しない高濃度（１００ｍｇ／ｍＬ）溶液の安定性を評価する。以下の製剤を試験した。

材料：５０ｍｇ／ｍＬのＥｎｂｒｅｌ原薬を含有するＰＡＳＳ（２５ｍＭのリン酸緩衝液、２５ｍＭのＬ－アルギニン、１００ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース）を、この研究に使用した。酢酸塩及び緩衝液を含まない製剤については、材料を透析して新しい製剤（ポリソルベートなし）とし、１０，０００ＭＷＣＯのｃｅｎｔｒｉｐｒｅｐを用いて５０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。５０＿ＳＡＳ＿１００ＮａＣｌの試料も１００ｍｇ／ｍＬに濃縮した（１００＿ＳＡＳ＿１００ＮａＣｌ）。ベンジルアルコールを、現在の製剤に加えて最終濃度を０．９％にした。ポリソルベート２０の１％ストック溶液を新たに調製し、全ての製剤に加えて最終濃度を０．００４％とした。全ての製剤を、１ｍＬの長いＢＤガラスシリンジに、０．５ｍＬの容量まで手動で満たし、その後、ＡＳＰＵバキュームストッパー装置を使用して栓をした。

方法：Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｉｎｌａｂ ＭｉｃｒｏＰｒｏｂｅと組み合わせたＭｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＳｅｖｅｎＥａｓｙ ｐＨメーターを用いてｐＨを測定した。測定前に、試料を室温にまで温めた。重量オスモル濃度は、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ Ｍｏｄｅｌ ３９００を用いて測定した。各測定は２５０μＬの試料を用いて行い、２９０重量オスモル濃度標準を試験して、システムが適切に動作していることを確認した。Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎ ７．２ソフトウェアと共に、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣを使用してサイズ排除ＨＰＬＣを実施した。Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎ ７．２ソフトウェアと共に、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣを使用して変性サイズ排除ＨＰＬＣを実施した。

結果：全ての製剤のｐＨを２４週間にわたって維持した。

結論：２５℃及び４０℃での長期保存の間、比較的低いｐＨの製剤、Ａ４５ＳｕＴ、Ａ５２ＳｕＴ、及びＡ５８ＳｕＴは、変性サイズ排除クロマトグラフィーを用いて分析したところ、望ましくないレベルの、低分子量の、分解又はクリップされた種を示した。２５℃と４０℃で保存した高濃度製剤１００＿ＳＡＳＴ＿１００ＮａＣｌは、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて分析したところ、高分子量凝集体の増加を示し始めたが、４℃では、現在の市販製剤と類似の挙動であった。ＰＡＳＳＴ＋ＢｅＯＨ（これは０．００４％ポリソルベート２０と０．９％ベンジルアルコールの添加によって改変した現在の市販製剤である）は、４℃と２５℃の両方で現在の市販製剤と類似の挙動であったが、４０℃の高温で保存した場合、その後期の時点では、ＳＥ－ＨＰＬＣの分析により高分子量種の増加を示した。しかしながら、５０＿ＳＡＳＴ＿１００ＮａＣｌ製剤は、リン酸緩衝液の非存在下でさえ、全ての温度で、現在の市販製剤と同等の高分子量及び低分子量種の濃度を維持した。

実施例２：疼痛研究
この試験は、単施設、無作為化、一重盲検、クロスオーバーデザインであり、これには４８人の健康な男性及び女性が６種の溶液の単回ＳＣ注射を受けた。

各群に無作為に割り付けた８人の被験者からなる６つの固有の群に、熟練した医療専門家によって試験製剤（以下の表９に詳述する）を投与した。前腹壁の各四半部に注射を施し、約１時間おいて投与した。各注射後３０秒以内に、被験者は１００ｍｍのビジュアルアナログスケール（ＶＡＳ）を用いて注射痛の程度を評価した。最初の注射の開始から最初の注射の３０日後まで、有害事象を収集した。２日目（６回目の注射の２４時間後）及び３１日目（±２日）に、安全性のフォローアップのための電話をかけた。

統計的方法：全ての分析は、少なくとも１種の溶液を受けた全ての被験者からなる安全性分析セットについて行った。溶液間の１５ｍｍの差（α＝０．０５、両側）を検出するための９３．４％の検出力を提供するために、４８人の被験者（１群当たり８人）の標本サイズを選択した。ＶＡＳの１３～１６ｍｍの差は、臨床的に意味があるとみなされる（Ｇａｌｌａｇｈｅｒ ｅｔ ａｌ，２００２，Ａｍ．Ｊ．Ｅｍ．Ｍｅｄ．ｖ２０；ｉ４：２８７－２９０）。

要約統計量（平均、ＳＤ、標準誤差［ＳＥ］、中央値、最小値、最大値）を、溶液別のＶＡＳスコアについて計算した。分散分析（ＡＮＯＶＡ）モデルを用いてＶＡＳスコアを分析したが、これには独立変数として群、溶液、及び期間が含まれ、変量効果として群内の被験者が含まれた。多重比較のための調整は行わなかった。

一次及び二次比較のＶＡＳスコアの平均差、対応する９５％信頼区間（９５％ＣＩ）、及びｐ値を得た。

結論：溶液Ｃ（ベンジルアルコールを含む非製品の特定のプラセボ）及び溶液Ｄ（リン酸ナトリウムを含まない非製品の特定のプラセボ）の両者は、溶液Ｂ（エタネルセプトプラセボ；ｐ＜０．００１）よりも有意に低い平均ＶＡＳスコアを有し、これらの２つの溶液で比較的低い注射部位疼痛を示した。溶液ＣとＤとの間、溶液Ｂ（エタネルセプトプラセボ）と溶液Ｆ（活性エタネルセプト）との間、又は異なる注射容量（０．５１及び１．０ｍＬ）の間で、平均ＶＡＳスコアに有意差は見られなかった。溶液Ａ（陰性疼痛対照）は、他の全ての溶液と比較して、疼痛は最小であった。７人の被験者に１件以上の有害事象が認められた。全ての有害事象は、ＣＴＣＡＥグレード１の重篤でない注射部位反応であった。

実施例３：製剤候補の長期安定性試験
いくつかの新しい製剤候補中のエタネルセプトの安定性を観察するために、５０ｍｇ／ｍＬで長期研究を行った。４℃、２５℃及び４０℃で貯蔵した後、ＳＥ－ＨＰＬＣ、ＨＩＣ ＨＰＬＣ、ｄＳＥＣ ＨＰＬＣ、及び粒子状物質（ＨＩＡＣ）を使用して、１ｍＬのステークガラス針シリンジ（ｓｔａｋｅｄ ｇｌａｓｓ ｎｅｅｄｌｅ ｓｙｒｉｎｇｅ）中の１ｍＬ充填物について安定性を評価した。重量オスモル濃度及びタンパク質濃度を時刻ゼロでのみ試験し、ｐＨは、ｐＨドリフトがないことを確認するために、時刻ゼロ及び１２週間の貯蔵後に試験した。研究の結果、試験した製剤は、４０℃の加速温度で１２週後に、また２～８℃の推奨貯蔵及び２５℃の加速温度で２４週後に、現在の市販製剤との類似性を維持していることが示された。

材料：５０ｍｇ／ｍＬのＥｎｂｒｅｌ原薬を含有するＰＡＳＳ（２５ｍＭリン酸緩衝液、２５ｍＭのＬ－アルギニン、１００ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース）をこの研究に使用した。５０ｍｇ／ｍＬの材料をＰＡＳＳ及びＳＡＳ＿１００ＮａＣｌ（２５ｍＭのＬ－アルギニン、１００ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース）中に透析ろ過し、その後約７５ｍｇ／ｍＬまで限外ろ過した。ＵＦ／ＤＦ後のＰＡＳＳ及びＳＡＳ材料を対応する溶液で希釈することによって、５０ｍｇ／ｍＬ製剤を調製した。濃縮ＮａＣｌストック溶液を使用して７５ｍｇ／ｍＬのＳＡＳ材料を希釈して、最終濃度を１２０ｍＭ ＮａＣｌとすることにより、ＳＡＳＴ＿１２０ＮａＣｌを調製した。ポリソルベート２０の１％ストック溶液を新たに調製し、全ての製剤に加えて最終濃度を０．０１０％とした。全ての製剤を、１ｍＬの長いＢＤガラスシリンジに、１ｍＬの容量まで手動で満たし、その後、ＡＳＰＵバキュームストッパー装置を使用して栓をした。

方法：Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｉｎｌａｂ ＭｉｃｒｏＰｒｏｂｅと組み合わせたＭｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＳｅｖｅｎＥａｓｙ ｐＨメーターを用いてｐＨを測定した。測定前に、試料を室温にまで温めた。全ての試料について、２８０ｎＭの吸光度によるタンパク質の濃度測定を、ＤｒｏｐＳｅｎｓｅ９６ ＵＶ／Ｖｉｓ Ｌａｂ Ｃｈｉｐ ＤＳシステムを使用して室温で行った。各試料を、製剤溶液がブランクの場合を含めて、少なくとも３回（それぞれ３μＬ）反復して、何も加えずに測定した。Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ Ｍｏｄｅｌ ３９００を使用して重量オスモル濃度を測定した。各測定は２５０μＬの試料を用いて行い、２９０ｍＯｓｍの重量オスモル濃度標準を試験して、システムが適切に動作していることを確認した。Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎ ７．２ソフトウェアと共に、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣを使用してサイズ排除ＨＰＬＣを実施した。Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎ ７．２ソフトウェアと共に、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣを使用し、２１５ｎｍの吸収で疎水性相互作用ＨＰＬＣを実施した。Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎ ７．２ソフトウェアと共に、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣを使用して変性サイズ排除ＨＰＬＣを実施した。ＨＲＬＤ－１５０レーザー及びＰｈａｒｍ Ｓｐｅｃソフトウェアを装備したＨＡＣＨ ＨＩＡＣ／Ｒｏｙｃｏ粒子カウンターシステムを使用して、サブビジブル粒子の分析を行った。全ての試料をＰＡＳＳ製剤緩衝液で２５ｍｇ／ｍＬにまで希釈した。試料を完全に混合し、キャップを外し、分析前に７５ｔｏｒｒで２時間脱気した。各１．０ｍＬ（風袋容量なし）の４回の分析を行い、最初の分析を廃棄し、残りの３回の分析を平均した。２、５、１０、及び２５μｍの粒子径データは、全ての時点で収集した。結果は希釈を反映しており、１ミリリットル当たりの累積カウントとして報告する。

結果及び考察：全ての製剤のｐＨを、全ての温度で、時刻ゼロ及び１２週後に測定した。時間又は貯蔵温度の関数として、いかなる傾向も観察されなかった。全ての試料について測定されたｐＨ値を表１２に示す。４℃で５２週間の貯蔵、２５℃で２４週間の貯蔵、又は４０℃で１２週間の貯蔵の後、ｐＨのドリフトは観察されなかった；全ての試料は、６．３の標的ｐＨから＋／－０．２ｐＨ単位の許容基準を満たした。

全ての製剤のタンパク質濃度を時刻ゼロで試験した。全ての試料のタンパク質濃度の結果を表１３に示す。全ての試料は許容基準を満たした。

重量オスモル濃度を、時刻ゼロでのみ試験した。全ての試料の重量オスモル濃度の結果を表１４に示す。全ての製剤は、それらの標的重量オスモル濃度であった。緩衝液濃度及び賦形剤濃度に違いがあるので、重量オスモル濃度が、各種の製剤間で同じであるとは予想されなかった。

ＳＥ－ＨＰＬＣを行い、製剤条件、時間及び温度の関数として凝集レベルを観察した。ピークＢは、生成した高分子量種（凝集体）の量である。結果は、４℃及び２５℃で、ＰＡＳＳＴ対照と緩衝液を含まない製剤との間でピークＢに差異を示さず、４０℃、１２週後にわずかな差異が観察された（図１）。ピークＢは、これらの製剤のＳＥ－ＨＰＬＣによって検出された全凝集体を表す。４℃で５２週間の貯蔵、２５℃で２４週間の貯蔵、及び４０℃で１２週間の貯蔵後、全ての試料は許容可能範囲に留まった（ピークＢ≦６％）。

変性ＳＥ－ＨＰＬＣを使用してクリップ種ＬＭＷを測定した。結果は、５２週後の製剤間の、ＨＭＷ種、主ピーク、ＬＭＷに関して同様の傾向を示した（図２）。

ミスフォールドした凝集体の変化を、ＨＩＣ ＨＰＬＣにより観察した。試験した全ての温度での結果は、ＰＡＳＳＴ対照と緩衝剤を含まない製剤との間でピーク３に差異を示さなかった（図３）。４℃で５２週間の貯蔵、２５℃で２４週間の貯蔵、及び４０℃で１２週間の貯蔵後、全ての試料は許容可能な範囲（ピーク１≦５％、ピーク２≧７０％、ピーク３≦２８％）に留まった。

光遮蔽粒子計数法（ＨＩＡＣ）により、サブビジブル粒子を測定した。結果は過去のＰＦＳデータと一致し、１２週後の全温度で、製剤間の結果は類似していた。各時点で３つのプールされたシリンジを含む単一のバイアルが使用され、シリコーン油滴への寄与に関して高いレベルのシリンジ間変動性が存在するので、このデータセットからは傾向を確立することができなかった。

結論：いくつかの新しい改質候補及び現在の市販製剤にポリソルベートを添加したものの長期安定性を、４℃、２５℃及び４０℃で評価した。ＳＥ－、ｄＳＥＣ、又はＨＩＣ ＨＰＬＣ分析によって、及び光遮蔽によって、４℃で５２週間後及び２５℃で２４週間後の製剤間に有意差は観察されなかったが、４０℃で１２週間後には、ＨＰＬＣ分析によってわずかな差が観察された。ｐＨのドリフトは観察されず、全ての製剤は許容範囲内に留まった。研究の結果は、５０ｍｇ／ｍＬのＳＡＳＴ＿１２０ＮａＣｌ及びＳＡＳＴ＿１００ＮａＣｌ製剤は、２℃～８℃の推奨貯蔵温度で１２週後も安定であり、現在の市販製剤と類似していることを示した。

実施例４：ステンレス鋼製容器中のトップの改質候補の凍結／融解及び長期安定性
３種の新しい製剤候補中のエタネルセプトの安定性を観察するために、５０ｍｇ／ｍＬで凍結／融解のサイクル研究を行った。現在市販の製剤ＰＡＳＳ（２５ｍＭのリン酸緩衝液、２５ｍＭのＬ－アルギニン、１００ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース）と比較した製剤は、ＳＡＳＴ＿１００ＮａＣｌ（２５ｍＭのＬ－アルギニン、１００ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース、０．０１０％のポリソルベート２０）、ＳＡＳ＿１２０ＮａＣｌ（２５ｍＭのＬ－アルギニン、１２０ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース）、及びＳＡＳＴ＿１２０ＮａＣｌ（２５ ｍＭのＬ－アルギニン、１２０ ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース ０．０１０％のポリソルベート２０）であった。５５ｍＬステンレス鋼製凍結容器中で、－３０℃～４℃のサイクルを行った場合の凝集に対する安定性を、ＳＥ－ＨＰＬＣを用いて凍結／融解サイクル５回まで評価した。

さらに、ある新しい製剤候補中のエタネルセプトの安定性を観察するために、５０ｍｇ／ｍＬで長期研究を行った。現在市販の製剤ＰＡＳＳ（２５ｍＭのリン酸緩衝液、２５ｍＭのＬ－アルギニン、１００ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース）と比較した製剤は、ＳＡＳＴ＿１２０ＮａＣｌ（２５ｍＭのリン酸緩衝液、２５ｍＭのＬ－アルギニン、１００ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース、０．０１０％のポリソルベート２０）であった。１０ｍＬ及び５５ｍＬのステンレス鋼製凍結容器に保存した場合の安定性を、ＳＥ－ＨＰＬＣ、ＨＩＣ ＨＰＬＣ、ｄＳＥＣ ＨＰＬＣ、及び粒子状物質（ＨＩＡＣ）を使用して評価した。貯蔵温度及び時点は、３６ヶ月までは－３０℃であり、１２ヶ月までは４℃であった。５２週目の結果を本明細書に示す。

結果：全ての製剤のｐＨは、５２週の時点で、及び５サイクルの凍結／融解を通して、一貫性を維持した。

ＳＡＳＴ＿１２０ＮａＣｌ製剤中で、＞２及び＞５μｍ粒子にわずかな増加があったが、＞１０μｍ粒子については、ＨＩＡＣによって傾向は観察されなかった。図４、図５、及び図６に示すように、ＨＩＣ、ｄＳＥＣ、又はＳＥＣによって、製剤間に有意差は観察されなかった。５回の凍結融解サイクルに曝露した後で、製剤間の有意な変化はＳＥＣで観察されなかった。図７を参照されたい。

結論：これまでの研究の結果は、－３０℃及び４℃のステンレス鋼製冷凍容器中で５２週間貯蔵した後も、試験した新しい製剤が現在の市販製剤との類似性を維持することを示した。

実施例５：ＳＡＳ及びＰＡＳＳ溶液への交換
これらの実施例の目的は、ＴＭＳ（トリス、マンニトール、スクロース）中のエタネルセプトの異なる調製物を試験製剤（Ｌ－アルギニン、スクロース、ＮａＣｌ）中に透析し、最終ｐＨを標的ｐＨと比較することであった。

材料：エタネルセプト：２５ｍｇ／ｍＬ、ＴＭＳ（１０ｍＭのトリスＨＣｌ、４％のマンニトール、１％のスクロース、ｐＨ７．４）中；透析のためのＳＡＳ＿１００ＮａＣｌ溶液（１００ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのＬ－アルギニンＨＣｌ、１％のスクロース、ｐＨ６．３）；ＰＡＳＳ緩衝液（２５ｍＭのリン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのＬ－アルギニンＨＣｌ、１％のスクロース、ｐＨ６．３）；１０，０００ＭＷＣＯのｃｅｎｔｒｉｐｒｅｐ；３～１２ｍＬのＳｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット、１０，０００ＭＷＣＯ；Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＭＰ２２０ ｐＨメーター、及びＭｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＩｎＬａｂ ＭｉｃｒｏＰｒｏｂｅ。

方法：ＵＦ／ＤＦの例を挙げれば、ＴＭＳ中の２５ｍｇ／ｍＬのエタネルセプトを、３０Ｋ ＭＷＣＯのＰｅｌｌｉｃｏｎ ３カセットを使用した、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ－２ ｍｉｎｉ ｓｙｓｔｅｍによる限外ろ過によって約５０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。その後、この材料を、ＳＡＳ＿１００ＮａＣｌ又はＰＡＳＳ溶液に対して７ダイアボリュームで透析ろ過し、続いて、限外ろ過によって１００ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。透析の例を挙げれば、１０，０００ＭＷＣＯのｃｅｎｔｒｉｐｒｅｐを用い、ＴＭＳ中の２５ｍｇ／ｍＬのエタネルセプトを５０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。ＳＡＳ透析溶液の場合と同様に、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＭＰ２２０ｐＨメーター及びＩｎＬａｂ ＭｉｃｒｏＰｒｏｂｅを使用して、ＴＭＳ中の５０ｍｇ／ｍＬ試料のｐＨを測定した。その後、１０，０００ＭＷＣＯのｓｌｉｄｅ－ａ－ｌｙｚｅｒ透析カセットを使用してこの材料を透析した。ＴＭＳ中の５０ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト９．５ｍＬをカセットに加え、１０００ｍＬのＳＡＳ１００と交換した。３回の交換を行い、１，０００，０００倍の交換を達成した。１日目の午後５時に最初の交換を行い、一晩継続した。２回目の１，０００ｍＬ交換は、２日目の午前８時３０分であった。３回目の最終交換は、２日目の午後１２時３０分であった。２日目の午後５時に、タンパク質を透析カセットから取り出し（１１ｍＬを取り出し）、同じくＭｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＭＰ２２０ｐＨメーターでｐＨを測定した。測定されたｐＨは６．９８であった。

結果：
結果の要約を下記の表１７に示す。

結論：ｐＨ７．５６の交換前溶液から、ＰＡＳＳ緩衝液中へ試料を限外ろ過／透析ろ過すると、目標ｐＨである６．３４が達成された。しかし、ＳＡＳ＿１００ＮａＣｌ溶液中へ試料を限外ろ過／透析ろ過した場合、達成された透析後材料のｐＨは６．９８であり、これは予想よりも高く、最終目標のｐＨ６．３に近くはなかった。ＳＡＳ＿１００ＮａＣｌへの交換法として透析を使用しても、同じ結果が得られた。

実施例６：ＵＦ／ＤＦプール
はじめに：この研究後に選択された製剤溶液は、ＳＡＳ（１２０ｍＭの塩化ナトリウム、２５ｍＭのＬ－アルギニン、１％のスクロース、ｐＨ６．３）と名付けられ、リン酸緩衝液は添加されていない。前の実施例で、ｐＨ７．５６の試料中のエタネルセプトから出発する場合、透析するか、又はＵＦ／ＤＦを使用するかでは、標的ｐＨ６．３の達成は困難であると示されたことから、ＳＡＳ製剤への交換の異なる方法が必要であった。異なる最終ＵＦ／ＤＦ出発材料を利用した以下の２つの方法を評価した：１）出発材料としてカラム３（ＡＥＸ）中間体プール、及び２）出発材料としてＰＡＳＳ製剤緩衝液（ＰＡＳＳ ＤＳ中間体プール）中のＥｎｂｒｅｌ原薬。それぞれの方法は以下に記載され、５０ｇ／ＬのＳＡＳ製剤化エタネルセプトを製造するための、最終ＵＦ／ＤＦ単位操作工程の開発を、ＳＡＳ製剤溶液の調製、最終ＵＦ／ＤＦの負荷調整及び処理を含めて要約する。

方法：ＳＡＳ製剤溶液は、１２０ｍＭの塩化ナトリウム、２５ｍＭのＬ－アルギニン、１％のスクロース、ｐＨ６．３から構成される。１０ＮのＮａＯＨを用い、ＳＡＳ製剤溶液をｐＨ６．３にまで滴定した。特定のｐＨ範囲に達するのに必要な滴定液の容量は、４．４μＬ／Ｌ－ＳＡＳ製剤溶液であった。ＳＡＳ最終ＵＦ／ＤＦ単位操作の実行中、膜をＳＡＳ製剤溶液１０Ｌ／ｍ^２で平衡化した後、透過液のｐＨは、ＳＡＳ製剤溶液のｐＨよりも、ＷＦＩのｐＨに近い値を維持した。特定の理論に束縛されるものではないが、これはＳＡＳ製剤溶液の緩衝能が低いためであると考えられる。ＳＡＳ製剤溶液調製の範囲から予測した透過液の、膜平衡後の導電率範囲は、１２～１６ｍＳ／ｃｍである。平衡後ｐＨがＳＡＳ製剤溶液のｐＨよりも高いことは、予想されることであり、膜が平衡化されていないことを懸念すべきではなく、又はそのことを示すべきものでもない。

ＡＥＸ中間体プール出発材料：ＡＥＸ中間体プールをＵＦ／ＤＦタンクの不透過成分タンクに移す前に、２ＭのＨＣｌを使用して、プールを目標ｐＨ６．３（許容範囲６．２～６．４）に調整した。特定のｐＨ範囲に達するのに必要な滴定液の容量は、約２．８ｍＬ／ＬのＡＥＸ中間体プールであった。

出発材料としてＡＥＸ中間体プールを使用し、ＳＡＳ最終ＵＦ／ＤＦ単位操作工程の開発中に実施した８つの例を表１８に示す。調整したＡＥＸ中間体プールのｐＨ及びＳＡＳ製剤溶液のｐＨの、２つのパラメータを調べた。最初の３回の実験は、ｐＨ、導電率、重量オスモル濃度、タンパク質濃度、及び生成物品質について分析した。実験４～７は、製剤溶液ｐＨの影響、及びＵＦ／ＤＦプールのｐＨに対する負荷ｐＨの影響を決定するために、ｐＨ、導電率、重量オスモル濃度、及びタンパク質濃度についてのみ測定した。

結果：出発材料としてＡＥＸ中間体プールを用いて生成した、最終ＳＡＳ ＵＦ／ＤＦプールについての生成物品質結果を表１９に示す。実験１の工程収率は許容基準外であったが、これはベンチスケール処理の不自然な結果である可能性が最も高く、研究の結論にとって重要ではないと考えられた。上述したように、３つ全ての最終ＵＦ／ＤＦ ＳＡＳ実験も、ＳＥＣ及びＨＩＣ分析を使用して、生成物品質の許容基準に適合した。

調整ＡＥＸ中間体プールの安定性
調整したＡＥＸ中間体プールは、制御された室温（ＣＲＴ）で５２．６時間まで保管することができる。保管中のプールのｐＨを図８に示す。

ＵＦ／ＤＦプールの安定性
ＡＥＸ中間体プールを出発材料として使用して生成された最終ＵＦ／ＤＦ ＳＡＳプールは、ＣＲＴで９６．３時間まで保管することができる。保管中のｐＨ及び導電率を図９Ａ及びＢに示す。９６．３時間の保管中、ｐＨ及び導電率は許容範囲内に留まる。

ＰＡＳＳ ＤＳ中間体プール出発材料：ＰＡＳＳ ＤＳ中間体プールは既に許容可能なｐＨ範囲内にあるので、ＰＡＳＳ ＤＳ中間体プールをＵＦ／ＤＦの不透過成分タンクに移す前に調整する必要はない。さらに、出発材料は５０ｍｇ／ｍＬのＰＡＳＳ製剤化Ｅｎｂｒｅｌ ＤＳであり、既に透析ろ過を行うのに正しい濃度であるので、プールを５０ｇ／Ｌに濃縮する必要はない。

出発材料源を評価するために、ＳＡＳ最終ＵＦ／ＤＦ単位操作工程の開発中に行われた一例を表２０に示す。この例は出発材料としてＤＳ ＰＡＳＳ中間体プールを利用し、ｐＨ、導電率、重量オスモル濃度、タンパク質濃度、及び生成物品質について分析した。

結果：出発材料としてＰＡＳＳ ＤＳ中間体プールを用いて生成した、最終ＳＡＳ ＵＦ／ＤＦプールについての生成物品質結果を表２１に示す。実験１の工程収率は許容基準外であったが、これはベンチスケール処理の不自然な結果である可能性が最も高く、研究の結論にとって重要ではないと考えられた。上述したように、最終ＳＡＳ ＵＦ／ＤＦプールも、ＳＥＣ及びＨＩＣ分析を使用して、生成物品質の許容基準に適合した。

ＰＡＳＳ ＤＳ中間体プールの安定性
この中間体プールは既に目標ｐＨ（６．３）にあるので、ＳＡＳ溶液によるＵＦ／ＤＦ処理の前に、このＰＡＳＳプールを調整する必要はない。プールの状態はＥｎｂｒｅｌ ＰＡＳＳ ＤＳから変えられなかったので、この中間体プールではプール保管研究を実施しなかった。プールは２５℃で９６時間まで保管することができる。

ＵＦ／ＤＦプールの安定性
ＰＡＳＳ ＤＳ中間体プールを出発材料として生成された、最終ＵＦ／ＤＦ ＳＡＳプールは、ＣＲＴで９６．３時間まで保管することができる。保管中のｐＨ及び導電率を図９Ａ及びＢに示す。９６．３時間の保管中、ｐＨ及び導電率は許容範囲内に留まる。

ＳＡＳ製剤溶液の安定性
ＳＡＳ製剤溶液は、ＣＲＴで２８日間まで保管することができる。ｐＨ及び導電率を図１０Ａ及びＢに示す。非常に小さなヘッドスペースを有する小規模ステンレス鋼製安定性チャンバ内で４２日間保管した場合、ＳＡＳ製剤溶液はｐＨを５．６～６．５内に維持することが示された。３５日目及び４２日目の時点で沈殿が観察された。２１日目の時点の測定値５．０９は、その後の時点では提案された許容基準内にあるという事実によって、外れ値のようである。

結論：最終的なＵＦ／ＤＦの単位操作は、５０ｇ／ＬのＳＡＳ製剤製品を製造することができ、以下のプロセス推奨の下で、現在市販のＰＡＳＳ製剤製品と比較して、一貫した製品品質を達成することができる：１）出発材料としてＡＥＸ中間体プール又はＰＡＳＳ ＤＳ中間体プールを利用し、２）ＳＡＳ溶液はＣＲＴで少なくとも２８日間保管することができ、ｐＨを５．６～６．５に保ち、３）調整ＡＥＸ中間体プールは、ＣＲＴで少なくとも５２．６時間保管することができ、ｐＨを６．３±０．１に保ち、４）ＳＡＳ製剤化ＵＦ／ＤＦプールは、ＣＲＴで少なくとも９６．３時間保管することができ、ｐＨを６．１～６．５に保ち、導電率を１０～１４ｍＳ／ｃｍＳに保つ。

実施例７：等張代替製剤
この実施例の目的は、４０℃、７５ｍｇ／ｍＬでエタネルセプト安定性に対するアルギニン、スクロース又は塩化ナトリウムの増加した濃度が凝集に与える影響を決定することである。リン酸緩衝液を添加せずに、等張製剤を維持するために、これらの賦形剤の濃度をそれぞれ増加させた。さらに、ヒスチジンを、リン酸塩置換用緩衝液として評価した。試験した製剤を表２２に要約する。

材料５０ｍｇ／ｍＬのＰＡＳＳ（２５ｍＭのリン酸緩衝液、２５ｍＭのＬ－アルギニン、１００ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース）中のＥｎｂｒｅｌ原薬をこの研究に使用した。材料を透析して新しい製剤（ポリソルベートなし）とし、３０，０００ＭＷＣＯのｃｅｎｔｒｉｐｒｅｐを用い、７５ｍｇ／ｍＬを使用することにまで濃縮した。ポリソルベート２０の１％ストック溶液を新たに調製し、全ての製剤に加えて最終濃度を０．０１％とした。全ての製剤を、１ｍＬの長いＢＤガラスシリンジに、１．０ｍＬの容量まで手動で満たし、その後、ＡＳＰＵバキュームストッパー装置を使用して栓をした。

方法：Ｍｅｔｔｌｅｒ ＭｉｃｒｏＰｒｏｂｅと組み合わせたＭｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ｐＨメーターを用いてｐＨを測定した。測定前に、試料を室温にまで温めた。重量オスモル濃度は、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ Ｍｏｄｅｌ ３９００を用いて測定した。各測定は２５０μＬの試料を用いて行い、２９０重量オスモル濃度標準を試験して、システムが適切に動作していることを確認した。Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎ ７．２ソフトウェアと共に、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣを使用してサイズ排除ＨＰＬＣを実施した。

結果：濃度、ｐＨ及び重量オスモル濃度を表２３に示す。表２４に示すように、リン酸塩を含まない全ての製剤の、４０℃、７５ｍｇ／ｍＬにおける凝集速度は、市販製剤組成物と類似しており、Ｌ－アルギニン、スクロース及びＮａＣｌの濃度は増加した。さらに、緩衝液としてリン酸塩の代わりにヒスチジンを使用すると、４０℃での凝集速度が増加した。

実施例８：各種濃度のポリソルベート２０を有する製剤の安定性
ＳＡＳ製剤中、ポリソルベート２０が、０、０．００５、０．０１及び０．０１５％の場合に、５０ｍｇ／ｍＬのエタネルセプトの安定性を観察するために長期研究を行った。さらに、１００ｍｇ／ｍＬの、エタネルセプトのＳＡＳＴ高濃度製剤を試験した。４℃、２５℃及び４０℃で貯蔵後、ＳＥ－ＨＰＬＣ、ｄＳＥＣ ＨＰＬＣ、及びの粒子状物質（ＨＩＡＣ）を使用して、１ｍＬのステークガラス針シリンジ中の１ｍＬ充填物について安定性を評価した。時刻ゼロでのみ、重量オスモル濃度、ｐＨ、及びタンパク質濃度を試験した。試験の結果は、試験した５０ｍｇ／ｍＬ製剤が、推奨される２～８℃、ならびに２５℃及び４０℃の加速温度で２４週間後に、現在の市販製剤との類似性を維持したことが示された。１００ｍｇ／ｍＬのＳＡＳＴ製剤は、ｐＨ及びサブビジブル粒子に関して５０ｍｇ／ｍＬ製剤と同等の挙動を示した；ＳＥＣによる凝集レベルの差異はタンパク質濃度に起因すると考えられた。

材料：ＴＭＳ（１０ｍＭのトリス緩衝液、４％のマンニトール、１％のスクロース）中の、２５ｍｇ／ｍＬのＥｎｂｒｅｌ原薬をこの研究に使用した。ＳＡＳ製剤に使用したバルクをｐＨ６．３に滴定した。材料を約５０ｍｇ／ｍＬのエタネルセプトに限外ろ過し、その後、ＰＡＳＳ（２５ｍＭのリン酸塩、２５ｍＭのＬ－アルギニン、１２０ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース）又はＳＡＳ（２５ｍＭのＬ－アルギニン、１２０ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース）に対して、５０ｍｇ／ｍＬのエタネルセプトで透析ろ過を行った。次いで、高濃度群用の材料を１００ｍｇ／ｍＬのエタネルセプトに限外ろ過した。ポリソルベート２０の１％ストック溶液を新たに調製し、表２５に示す最終濃度まで製剤に加えた。全ての製剤を、１ｍＬの長いＢＤガラスシリンジに、１ｍＬの容量まで手動で満たし、その後、ＡＳＰＵバキュームストッパー装置を使用して栓をした。

結果と考察：時刻ゼロ、４０℃で１２週間後、ならびに４℃及び２５℃で２４週間後に全ての製剤のｐＨを測定した。時間又は貯蔵温度の関数としての傾向は観察されなかった。全ての試料について測定したｐＨを表２６に示す。４０℃で１２週間の貯蔵、又は４℃及び２５℃で２４週間の貯蔵の後、ｐＨのドリフトは観察されず、全ての試料は、６．３の標的ｐＨ±０．２ｐＨ単位の許容基準を満たした。全ての製剤のタンパク質濃度及び重量オスモル濃度を時刻ゼロで試験した。全ての試料のタンパク質濃度及び重量オスモル濃度の結果を表２６に示す。

ＳＥ－ＨＰＬＣを行い、製剤条件、時間及び温度の関数として凝集レベルを観察した。ピークＢは、生成した高分子量種（凝集体）の量である。結果は、全ての温度、それぞれのタンパク質濃度で、ＰＡＳＳ対照と緩衝剤を含まない製剤の間でピークＢに差がないことを示した（表２７～２９）。ピークＢは、これらの製剤のＳＥ－ＨＰＬＣによって検出された全凝集体を表す。４℃及び２５℃で２４週間の貯蔵後、ならびに４０℃で２週間の貯蔵後、全ての５０ｍｇ／ｍＬ試料は許容可能性を維持した（ピークＢ≦６％）。

光遮蔽粒子計数法（ＨＩＡＣ）により、サブビジブル粒子を測定した。結果は過去のＰＦＳデータと一致し、２４週後の全温度にわたる製剤間で類似していた（表３０）。

結論：０～０．０１５％のポリソルベート濃度を有する５０ｍｇ／ｍＬエタネルセプトでの改質候補、及び現在の市販製剤の長期安定性を、４℃、２５℃及び４０℃で評価し、１００ｍｇ／ｍＬエタネルセプトの高濃度群もＳＡＳ０１０Ｔ製剤について試験した。ＳＥ－、ｄＳＥＣ、又はＨＩＣ ＨＰＬＣ分析及び光遮蔽によって、２４週間後の、それぞれのタンパク質濃度の製剤間に有意差は観察されなかった。ｐＨのドリフトは観察されず、全ての製剤は許容範囲内に留まった。研究の結果は、５０ｍｇ／ｍＬのＳＡＳＴ＿１２０ＮａＣｌ製剤は、２℃～８℃の推奨貯蔵温度で２４週間後も安定であり、現在の市販製剤と類似していることを示した。

実施例９：プラスチックシリンジ中の製剤の安定性
ＣＯＰプラスチック製の、シリコーン油を含まないプレフィルドシリンジシステム中における、５０ｍｇ／ｍＬエタネルセプトのＰＡＳＳ及びＳＡＳ製剤中のエタネルセプト安定性を、ガラス製のシリコーン処理したプレフィルドシリンジと比較して観察するために、長期研究を行った。４℃、２５℃及び４０℃で貯蔵後、ＳＥ－ＨＰＬＣ、ｐＨ、及びの粒子状物質（ＨＩＡＣ）を使用して、各種シリンジシステム中の１ｍＬ充填物について安定性を評価した。時刻ゼロでのみ、タンパク質濃度を試験した。

材料：２５ｍｇ／ｍＬエタネルセプトで、エタネルセプト原薬を含有するＴＭＳ（１０ｍＭのトリス緩衝液、４％のマンニトール、１％のスクロース）をこの研究に使用した。ＳＡＳ製剤に使用したバルクをｐＨ６．３に滴定した。材料を約５０ｍｇ／ｍＬのエタネルセプトに限外ろ過し、その後、ＰＡＳＳ（２５ｍＭのリン酸塩、２５ｍＭのＬ－アルギニン、１２０ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース）又はＳＡＳ（２５ｍＭのＬ－アルギニン、１２０ｍＭのＮａＣｌ、１％のスクロース）に対して、５０ｍｇ／ｍＬのエタネルセプトで透析ろ過を行った。全ての製剤を、１ｍＬの長いＢＤガラス製シリンジ又は１ｍＬのＣＯＰプラスチック製のシリコーン油を含まないシリンジ（ＣＯＰ＿Ａ及びＣＯＰ＿Ｂ）に、１ｍＬの容量まで手動で満たし、その後、バキュームストッパー装置を使用して栓をした。

方法：Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｉｎｌａｂ ＭｉｃｒｏＰｒｏｂｅと組み合わせたＭｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＳｅｖｅｎＥａｓｙ ｐＨメーターを用いてｐＨを測定した。測定前に、試料を室温にまで温めた。全ての試料に対する、２８０ｎＭの吸光度を用いたタンパク質の濃度測定は、Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐシステムを使用して室温で行った。Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎ ７．２ソフトウェアと共に、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣを使用してサイズ排除ＨＰＬＣを実施した。ＨＲＬＤ－１５０レーザー及びＰｈａｒｍ Ｓｐｅｃソフトウェアを装備した、ＨＡＣＨ ＨＩＡＣ／Ｒｏｙｃｏ粒子カウンターシステムを使用して、サブビジブル粒子の分析を行った。全ての試料をＰＡＳＳ製剤緩衝液で２５ｍｇ／ｍＬにまで希釈した。試料を完全に混合し、キャップを外し、分析前に７５ｔｏｒｒで２時間脱気した。各１．０ｍＬ（風袋容量なし）の４回の分析を行い、最初の分析を廃棄し、残りの３回の分析を平均した。２、５、１０、及び２５μｍの粒子径データは、全ての時点で収集した。結果は希釈を反映しており、１ｍＬ当たりの累積カウントとして報告される。

結果と考察：プラスチック製のシリコーン油を含まないシリンジ中の安定性は、ガラス製のシリコーン処理したシリンジ中の安定性と類似している。全ての製剤のタンパク質濃度を時刻ゼロで試験した。全製剤のｐＨは、時刻ゼロで測定し、４０℃で１２週間後に、４℃及び２５℃で２４週間後に測定した。時間又は貯蔵温度の関数として、何らの傾向も観察されず、全ての試料は、６．３の標的ｐＨ±０．２ｐＨ単位の許容基準を満たした。全ての試料に対するタンパク質濃度、及びｐＨの測定値を表３１に示す。

ＳＥ－ＨＰＬＣを行い、製剤条件、時間及び温度の関数として凝集レベルを観察した。ピークＢは、生成した高分子量種（凝集体）の量である。結果は、ガラス製シリンジとＣＯＰプラスチック製のシリコーンオイルを含まないシリンジとの間で、ピークＢの差異を示さなかった（表３２～３４）。ピークＢは、これらの製剤のＳＥ－ＨＰＬＣによって検出された全凝集体を表す。４℃及び２５℃で２４週間保存した後、全ての試料は許容可能性を維持した（ピークＢ≦６％）。

光遮蔽粒子計数法（ＨＩＡＣ）により、サブビジブル粒子を測定した。ＢＤガラスシリンジに充填された製剤の結果は、過去のＰＦＳデータと一致したが、サブビジブル粒子はシリコーン油を含まないプラスチック製シリンジで減少した（表３５）。

結論：ガラス製のシリコーン処理したシリンジ及びＣＯＰシリコーン油を含まないシリンジに保存された、５０ｍｇ／ｍＬエタネルセプトのＳＡＳ製剤及び現在の市販エタネルセプト製剤の長期安定性を、４℃、２５℃及び４０℃で評価した。２４週間後のシリンジタイプの関数としての製剤間に、ＳＥ－ＨＰＬＣによる有意差は観察されなかった。ｐＨのドリフトは観察されず、全ての製剤は許容範囲内に留まった。サブビジブル粒子は、ＣＯＰシリコーン油を含まないプラスチック製シリンジ中で減少し、ガラス製シリンジ中に保存された場合には、過去のＰＦＳ結果と一致した。研究の結果は、５０ｍｇ／ｍＬエタネルセプトのＳＡＳ製剤は、各種シリンジ中で、２℃～８℃の推奨貯蔵温度で２４週間後も安定であり、現在の市販製剤と類似していることを示した。

Claims (42)

1. ７５ｍＭ～１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭ～１００ｍＭのアルギニン、０．５％～２％（ｗ／ｖ）スクロース、及び４０ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬのエタネルセプトを含む医薬組成物であって、前記医薬組成物は、２．０ｍＭ未満の全追加緩衝剤を含み、かつ前記組成物のｐＨは、６．１～６．５である、医薬組成物。
2. １．５ｍＭ未満の全追加緩衝剤を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
3. １．０ｍＭ未満の全追加緩衝剤を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
4. ０．５ｍＭ未満の全追加緩衝剤を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
5. ０．２５ｍＭ未満の全追加緩衝剤を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
6. ０．１ｍＭ以下の全追加緩衝剤を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
7. 前記アルギニンは、Ｌ－アルギニンである、請求項１に記載の医薬組成物。
8. 前記Ｌ－アルギニンは、Ｌ－アルギニン塩酸塩である、請求項７に記載の医薬組成物。
9. 前記Ｌ－アルギニンは、Ｌ－アルギニン塩基である、請求項７に記載の医薬組成物。
10. 制御された室温（ＣＲＴ）で２週間保存されたとき、６．１～６．５のｐＨを維持する、請求項１に記載の医薬組成物。
11. 制御された室温（ＣＲＴ）で２週間保存されたとき、約６．２～約６．３のｐＨを維持する、請求項１０に記載の医薬組成物。
12. 約２５℃で保存されたとき、少なくとも２週間は５．８～６．７のｐＨを維持し、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して評価すると、前記全エタネルセプトの６％未満が高分子量形態で凝集する、請求項１に記載の医薬組成物。
13. 約２５℃での前記貯蔵の間、少なくとも２週間は、約６．１～約６．５のｐＨを維持する、請求項１に記載の医薬組成物。
14. 約２５℃での前記貯蔵の間、少なくとも２週間は、約６．２～約６．４のｐＨを維持する、請求項１に記載の医薬組成物。
15. 約２５℃で２週間の貯蔵後、疎水性相互作用クロマトグラフィーを用いて評価すると、前記エタネルセプトの全量の２８％未満がミスフォールド形態である、請求項１に記載の医薬組成物。
16. 約１８０～約４２０ミリ重量モル浸透圧の重量オスモル濃度を有する、請求項１に記載の医薬組成物。
17. 約２５０～約３５０ミリ重量モル浸透圧の重量オスモル濃度を有する、請求項１６に記載の医薬組成物。
18. 約２９０～約３１０ミリ重量モル浸透圧の重量オスモル濃度を有する、請求項１７に記載の医薬組成物。
19. 約３００～約３１０ミリ重量モル浸透圧の重量オスモル濃度を有する、請求項１８に記載の医薬組成物。
20. 約５０ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト、約１２０ｍＭのＮａＣｌ、約２５ｍＭのＬ－アルギニン塩酸塩、約１％（ｗ／ｖ）のスクロース及び水から実質的になる、請求項１に記載の医薬組成物。
21. 約５０ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト、約１２０ｍＭのＮａＣｌ、約２５ｍＭのＬ－アルギニン塩酸塩、約１％（ｗ／ｖ）のスクロース及び水からなる、請求項１に記載の医薬組成物。
22. ポリソルベート２０をさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
23. 前記ポリソルベート２０の濃度（ｗ／ｖ）は、約０．００１％～約０．１％である、請求項２２に記載の医薬組成物。
24. 前記ポリソルベート２０の濃度（ｗ／ｖ）は約０．００５％、約０．０１％又は約０．０１５％である、請求項２３に記載の医薬組成物。
25. 追加の緩衝剤を含まず、６．１～６．５のｐＨを有するエタネルセプト医薬組成物の製造方法であって、追加の緩衝剤を含むエタネルセプト製剤を、追加の緩衝剤を含まない溶液に交換する工程を含み、得られる医薬組成物は４０ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬのエタネルセプトを含み、前記追加の緩衝剤を含むエタネルセプト製剤及び前記追加の緩衝剤を含まない溶液は、それぞれ６．１～６．５のｐＨを有する、方法。
26. 前記交換工程は透析ろ過を使用する、請求項２５に記載の方法。
27. 前記追加の緩衝剤を含まない溶液は、等張である、請求項２５に記載の方法。
28. 前記追加の緩衝剤を含まない溶液は、スクロース、アルギニン及びＮａＣｌを含有する、請求項２５に記載の方法。
29. 前記追加の緩衝剤を含まない溶液は、７５ｍＭ～１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭ～１００ｍＭのアルギニン及び０．５％～２％（ｗ／ｖ）のスクロースを含有する、請求項２８に記載の方法。
30. 前記追加の緩衝剤を含まない溶液は、約１２０ｍＭのＮａＣｌ、約２５ｍＭのアルギニン、約１％のスクロース、及び水から実質的になる、請求項２８に記載の方法。
31. 前記医薬組成物をろ過する工程をさらに含む、請求項２５に記載の方法。
32. 前記医薬組成物を薬剤製品形態へと等分する工程をさらに含む、請求項２５に記載の方法。
33. 前記追加の緩衝剤を含むエタネルセプト製剤は、７５ｍＭ～１５０ｍＭのＮａＣｌを含み、前記追加の緩衝剤を含まない溶液は、７５ｍＭ～１５０ｍＭのＮａＣｌを含み、前記医薬組成物は、７５ｍＭ～１５０ｍＭのＮａＣｌを含み、前記方法はＮａＣｌ除去工程を含まない、請求項２５に記載の方法。
34. 前記追加の緩衝剤を含むエタネルセプト製剤は、約１２０ｍＭのＮａＣｌを含み、前記追加の緩衝剤を含まない溶液は、約１２０ｍＭのＮａＣｌを含み、前記医薬組成物は約１２０ｍＭのＮａＣｌを含む、請求項３３に記載の方法。
35. 塩除去工程を含まない、請求項２５に記載の方法。
36. ７５ｍＭ～１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭ～１００ｍＭのアルギニン、０．５％～２％（ｗ／ｖ）スクロース、及び４０ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬのエタネルセプトを含む医薬組成物であって、２．０ｍＭ未満の全追加緩衝剤を含み、前記組成物のｐＨは、６．１～６．５であり、前記医薬組成物は請求項２５に記載の方法を使用して製造される医薬組成物。
37. 薬剤製品形態の請求項１に記載の医薬組成物と、保存及び使用のための説明書とを含むキット。
38. 請求項１に記載の医薬組成物を含有する単一用量容器。
39. バイアル、シリンジ、又は自己注射器である、請求項３８に記載の単一用量容器。
40. ５０．０ｍｇ／ｍＬのエタネルセプト、１２０ｍＭの塩化ナトリウム、２５ｍＭのＬ－アルギニン塩酸塩及び１．０％（ｗ／ｖ）のスクロースからなる水性製剤を含む、請求項３８に記載の単一用量容器。
41. 単一用量容器の調製方法であって、約単一用量の請求項１に記載の医薬組成物を、無菌条件下で前記単一用量容器に充填する工程を含む方法。
42. 関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、又は乾癬を有する患者の治療方法であって、前記患者に請求項１に記載の医薬製剤を投与することを含む方法。

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