JP2023539484A - ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末、その製造方法及び用途 - Google Patents

Abstract

本発明はニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末、その製造方法及び用途を開示する。製造方法は、第１培地、第２培地及び第３培地を調製するステップと、酵母菌を第１培地に播種して発酵させ、第１発酵液を得るステップと、第１発酵液を第２培地に播種して発酵させ、第２発酵液を得るステップと、第２発酵液を第３培地に播種して発酵させ、第３発酵液を得るステップと、第３発酵液を遠心分離して発酵物を得て、且つ発酵物を乾燥させた後に酵母粉末を得るステップと、を含む。第１培地、第２培地及び第３培地の組成成分はニコチンアミド、トリプトファン及びニコチン酸を含む。酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチドの含有量は少なくとも５０００ｐｐｍより大きい。

Description

本発明は、酵母粉末に関し、特に、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富み且つ多種の用途を有する酵母粉末の製造方法及びこの製造方法で製造された酵母粉末に関する。

研究によると、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ａｄｅｎｉｎｅ Ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ＮＡＤ^＋）は、抗細胞老化に関係し、そして、ＮＡＤ^＋は、主要な生理機能が９５％以上の生命活動エネルギーの発生、損傷ＤＮＡの修復、サーチュインのプライミング等を含み、且つ体内でミトコンドリア活性を維持する成分である。

しかしながら、食事からＮＡＤ^＋を直接得ることができず、且つ人間の年齢が高くなるにつれて、体内で自然に生成されるＮＡＤ^＋含有量が低くなる。従って、体内のＮＡＤ^＋含有量を補充し且つ維持するために、ＮＡＤ^＋の前駆体を摂取することで体内のＮＡＤ^＋含有量を増加可能であることが研究によって見出されている。

例えば、ニコチンアミドモノヌクレオチド（Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ＮＭＮ）を摂取すると、ニコチンアミドモノヌクレオチドは血液を介して体内でＮＡＤ^＋に変換し、且つ体内に蓄積された老化物質の除去を促進することができる。

植物（例えば、ブロッコリー、アボカド等）中に含まれる天然ニコチンアミドモノヌクレオチドは含有量が非常に低く且つ抽出されにくいため、現在、多くの市販ニコチンアミドモノヌクレオチドは化学合成処方によるものである。しかし、ニコチンアミドモノヌクレオチドを化学合成するプロセスにおいて、ニコチンアミドモノヌクレオチド製品に存在する副生成物の発生が伴うことがあり、そして、このようなニコチンアミドモノヌクレオチド製品が人体に摂取されると、これらの副生成物は人体の肝臓代謝負担になりやすい。

これに鑑み、本発明は、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末の製造方法及びこの製造方法で製造された酵母粉末を提供し、且つ肌の調子の改善、ヘアケア、抗炎症、心血管ヘルスケア、抗酸化、抗老化及び／又は身体疲労度の改善等のための、該製造方法で製造された酵母粉末の用途を提供する。

いくつかの態様では、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末の製造方法は、第１培地、第２培地及び第３培地を調製するステップと、酵母菌を第１培地に播種して発酵させ、第１発酵液を得るステップと、第１発酵液を第２培地に播種して発酵させ、第２発酵液を得るステップと、第２発酵液を第３培地に播種して発酵させ、第３発酵液を得るステップと、第３発酵液を遠心分離して発酵物を得て、且つ発酵物を乾燥させた後に酵母粉末を得るステップと、を含む。第１培地、第２培地及び第３培地の組成成分は、ニコチンアミド（Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ，ＮＡＭ）、トリプトファン（Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ）及びニコチン酸（Ｎｉａｃｉｎ）を含む。酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチド（Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ＮＭＮ）の含有量は少なくとも５０００ｐｐｍより大きい。

いくつかの態様では、酵母菌は５体積％の播種量で第１培地に播種され、第１発酵液は６体積％の播種量で第２培地に播種され、及び第２発酵液は１０体積％の播種量で第３培地に播種される。

いくつかの態様では、ニコチンアミドの濃度は０．０１重量％～０．３重量％で、トリプトファンの濃度は０．１重量％～０．５重量％で、及びニコチン酸の濃度は０．０１重量％～０．０６重量％である。

いくつかの態様では、ニコチンアミドの濃度は０．１重量％で、トリプトファンの濃度は０．２重量％で、及びニコチン酸の濃度は０．０３６９重量％である。

いくつかの態様では、第１培地、第２培地及び第３培地の体積比は３：５０：５００である。

いくつかの態様では、第１培地、第２培地及び第３培地の組成成分は、バナナ果皮抽出物、チョコベリー抽出物、ブラックトマト抽出物のうちのいずれか１つの抽出物をさらに含む。

いくつかの態様では、酵母粉末は、請求項１の製造方法で製造され、そして、酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチド（Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ＮＭＮ）の含有量は少なくとも５０００ｐｐｍである。

いくつかの態様では、肌の調子の改善、ヘアケア、抗炎症、心血管ヘルスケア、抗酸化、抗老化及び／又は身体疲労度の改善用の組成物を製造するための、酵母粉末の用途は、酵母粉末が請求項１の製造方法で製造され、酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチド（Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ＮＭＮ）の含有量が少なくとも５０００ｐｐｍである。

いくつかの態様では、肌の調子の改善は、肌の引き締めを高めること、シワを減らすこと、肌荒れを低減すること、又はそれらの組合せである。

いくつかの態様では、ヘアケアは、脱毛を低減すること、又は薄毛の程度を低下させることである。

いくつかの態様では、酵母粉末はＱ_１０生合成タンパク質（ＣＯＱタンパク質）をさらに含む。

いくつかの態様では、酵母粉末は血中脂質を調節するためのものである。

いくつかの態様では、酵母粉末は検体のＣ－反応タンパク質（ＣＲＰ）の発現量を低下させるためのものである。

いくつかの態様では、酵母粉末は、抗老化関連遺伝子の発現量を調整制御し、ミトコンドリアを活性化し又は脳年齢を低下させることによって抗老化を達成する。

いくつかの態様では、抗老化関連遺伝子は、ＣＣＴ遺伝子、ＰＡＲＰ２遺伝子、Ｐａｒｋｉｎ遺伝子、Ａｔｇ遺伝子、ＦＯＸＯ遺伝子、ＳＩＲＴ１遺伝子、ＮＡＤＳＹＮ遺伝子、ＭＲＰＳ５遺伝子、ＳＯＤ３遺伝子又はそれらの組合せを含む。

いくつかの態様では、酵母粉末は、活性酸素物質（ＲＯＳ）による傷害を低減することによって抗酸化機能を達成する。

いくつかの態様では、酵母粉末の１日用量は１００ｍｇである。

以上より、いずれか１つの態様のニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末の製造方法によれば、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末を製造することができ、この酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチドの含有量は少なくとも５０００ｐｐｍである。従来のニコチンアミドモノヌクレオチドは化学合成によってのみしか得られず、有害な副生成物が生成されるという問題が解決されるとともに、従来のニコチンアミドモノヌクレオチドが食用できず、外用しかできないという技術的ボトルネックも解決される。そして、いずれか１つの態様のニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末の製造方法で製造された酵母粉末は、肌の調子の改善（例えば、肌の引き締めを高め、シワを減らし、肌荒れを低減する等の機能）、ヘアケア（例えば、脱毛を低減し、又は薄毛の程度を低下させる等の功能）、抗炎症、心血管ヘルスケア、抗酸化、抗老化及び／又は身体疲労度の改善等の機能を有し、且つ、上記機能を有する組成物として製造するために利用可能である。いくつかの態様では、酵母粉末はＱ_１０生合成タンパク質（ＣＯＱタンパク質）をさらに含む。いくつかの態様では、酵母粉末は、血中脂質を調節し、検体のＣ－反応タンパク質（ＣＲＰ）の発現量を低下させ、抗老化関連遺伝子（例えば、ＣＣＴ遺伝子、ＰＡＲＰ２遺伝子、Ｐａｒｋｉｎ遺伝子、Ａｔｇ遺伝子、ＦＯＸＯ遺伝子、ＳＩＲＴ１遺伝子、ＮＡＤＳＹＮ遺伝子、ＭＲＰＳ５遺伝子、ＳＯＤ３遺伝子又はそれらの組合せ）の発現量を調整制御し、ミトコンドリアを活性化し又は脳年齢を低下させることによってアンチエイジングを達成し、活性酸素物質（ＲＯＳ）による傷害を低減することによって抗酸化機能を達成する等の１つ又は任意の組合せの機能を有する。

以下において、図面及び具体的な実施例を参照しながら本発明を詳細に説明するが、それらは本発明を限定するものではない。

ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末の製造フローチャートである。 異なる菌種によるＮＭＮ収量分析の実験結果図である。 異なる発酵培地成分によるＮＭＮ収量分析の実験結果図である。 植物抽出物及び化合物によるＮＭＮ収量分析の実験結果図である。 相対的ＲＯＳ生成量の実験結果図である。 ミトコンドリア活性テストの実験結果図である。 ＰＡＲＰ２遺伝子の相対発現量の実験結果図である。 ＣＣＴ関連遺伝子の相対発現量の実験結果図である。 抗老化関連遺伝子の相対発現量の実験結果図である。 ＮＡＤＳＹＮ遺伝子及びＭＲＰＳ５遺伝子の相対発現量の実験結果図である。 ０週目及び８週目の抗老化関連遺伝子の相対発現量の実験結果図である。 ０週目及び８週目のＣ－反応タンパク質含有量の実験結果図である。 ０週目及び８週目の低密度コレステロール含有量の実験結果図である。 ０週目及び８週目の低密度コレステロール／高密度コレステロール比率の実験結果図である。 ０週目及び８週目のシワパーセンテージの実験結果図である。 ０週目及び８週目の肌テクスチャパーセンテージの実験結果図である。 ０週目及び８週目の脳年齢の実験結果図である。 ０週目及び８週目の身体状態総合評価の実験結果図。

以下の実施形態の説明において、特に断らない限り、記号「％」は重量パーセントを意味し、記号「体積％」は体積パーセント濃度を意味する。また、以下の「第１」、「第２」、「第３」…等の番号用語は、その示すコンポーネントを区別するためのものであり、その示すコンポーネントを順序付けし又はそれらの違いを限定するためのものではなく、且つ本発明の範囲を限定するためのものでもない。

図１を参照する。まず、第１培地、第２培地及び第３培地を調製する（ステップＳ１００）。ここで、第１培地、第２培地及び第３培地は組成成分が同じであり、且つ基礎培地、ニコチンアミド（Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ，ＮＡＭ）、トリプトファン（Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ）及びニコチン酸（Ｎｉａｃｉｎ）等の組成成分を含む。例として、第１培地、第２培地及び第３培地は発酵を行うための発酵培地であり、その組成成分は、酵母ペプトン（Ｙｅａｓｔ ｐｅｐｔｏｎｅ）、酵母抽出物（ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ）、リン酸二水素カリウム（ＫＨ_２ＰＯ_４，Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、リン酸水素二カリウム（Ｋ_２ＨＰＯ_４，Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ，Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ ｓｕｌｐｈａｔｅ－７ｈｙｄｒａｔｅ）、グルコース（Ｇｌｕｃｏｓｅ）、クエン酸（Ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ）、酢酸ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ）、グルコン酸マンガン（ｍａｎｇａｎｅｓｅ ｇｌｕｃｏｎａｔｅ）、システイン（Ｃｙｓｔｅｉｎｅ）、脱イオン蒸留水（ｄｄＨ_２Ｏ）及び消泡剤からなる基礎培地、及びニコチンアミド、トリプトファン、ニコチン酸等の他の組成成分を含む。いくつかの実施形態では、グルコースは、基礎培地の組成成分の１つであるが、発酵培地に菌株を接種する前に他の組成成分と別に滅菌され、且つ菌株を接種する前に他の組成成分と混合されて滅菌後の発酵培地を形成する。

いくつかの実施形態では、第１培地、第２培地及び第３培地の組成成分は、基礎培地以外に、０．０１％～０．３％のニコチンアミド、０．１～０．５％のトリプトファン及び０．００１～０．０６％のニコチン酸を含む。好ましくは、第１培地、第２培地及び第３培地の組成成分は、基礎培地以外に０．１％のニコチンアミド、０．２％のトリプトファン及び０．０３６９％のニコチン酸を含む。これらに基づくと、発酵培地にニコチンアミドモノヌクレオチド合成の前駆体であるニコチンアミド、トリプトファン及びニコチン酸が含まれる場合、酵母菌によるニコチンアミドモノヌクレオチド合成に有利である。

いくつかの実施形態では、第１培地、第２培地及び第３培地の組成成分は、バショウ属植物抽出物、アロニア属植物抽出物、ナス属植物抽出物のいずれか１つ又は複数の抽出物をさらに含む。ここで、バショウ属植物抽出物はバナナ果皮抽出物であってもよく、アロニア属植物抽出物はチョコベリー抽出物であってもよく、ナス属植物抽出物はブラックトマト抽出物であってもよい。例として、発酵培地の組成成分に、基礎培地、ニコチンアミド、トリプトファン及びニコチン酸以外に、０．０５％のバナナ果皮抽出物、０．０８５％のチョコベリー抽出物又は０．０５％のブラックトマト抽出物が追加されている場合、いずれも発酵液に含有されるニコチンアミドモノヌクレオチド含有量の向上に有利である。

いくつかの実施形態では、バナナ果皮抽出物については、バナナ（Ｍｕｓａ ｓｐｐ．）の果皮と果肉を分離し、且つバナナ果皮を以下のように処理して、バナナ果皮抽出物を提供してもよい。１． バナナ果皮を抽出溶剤と混合し（バナナ果皮と抽出溶剤の体積比は１：６であり、該抽出溶剤系は、クエン酸：水＝１：１００の体積比用量で提供されるものである）、８５℃で抽出し、０．５時間かけて、粗抽出液を提供する。２． ステップ１の粗抽出物を、５０００ ｒｐｍ．の回転速度で遠心分離し、１０分間かけて、上澄み液を取った後、４００メッシュの濾過網で濾過し、濾液を提供する。３． ５５±５℃で、ステップ２の濾液を減圧濃縮し、濃縮抽出液を提供する。４． ステップ３の濃縮抽出液を凍結乾燥して、乾燥物（即ち、前述したバナナ果皮抽出物）を提供する。いくつかの実施形態では、チョコベリー抽出物はブラックチョークベリー（チョコベリーとも呼ばれ、学名はＡｒｏｎｉａ ｍｅｌａｎｏｃａｒｐａで、英名はＢｌａｃｋ ｃｈｏｋｅｂｅｒｒｙである）の果実から搾り取られた汁を濃縮したものである。いくつかの実施形態では、ブラックトマト抽出物については、ブラックトマト（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ ‘Ｋｕｍａｔｏ’）をブロックに切り且つ均質に粉砕してブラックトマト均質物を形成した後、４０℃～６０℃でブラックトマト均質物を水で０．５時間～２時間抽出したものであり、水とブラックトマト均質物の液固比が５～２０：１～５である。

いくつかの実施形態では、第１培地、第２培地及び第３培地の体積比は３：５０：５００である。

ステップＳ１００から続く。酵母菌を第１培地に播種して発酵させ、第１発酵液を得る（ステップＳ２００）。ここで、使用される酵母菌は、出芽酵母菌（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）であってもよい。例として、出芽酵母菌は、市販の出芽酵母菌又は出芽酵母ＴＣＩ９０７（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＴＣＩ９０７）であってもよい。出芽酵母ＴＣＩ９０７は、生ビールから分離された出芽酵母の菌株である。出芽酵母ＴＣＩ９０７は、寄託番号ＢＣＲＣ ９２０１１８で財団法人食品工業発展研究所に寄託され、寄託番号ＤＳＺ３３４８０でドイツ微生物保存センターに寄託される。出芽酵母ＴＣＩ９０７は好気性の酵母であり、卵形である。出芽酵母ＴＣＩ９０７のコロニーは不透明な乳白色状であり、そのコロニーの表面が滑らかで、縁が整っている。出芽酵母ＴＣＩ９０７の成長温度は２８℃から３７℃である。そして、酸塩基値（ｐＨ値）が３から７の環境下で生存することができる。いくつかの実施形態では、出芽酵母ＴＣＩ９０７は胃酸胆塩に耐える機能を有する。例として、出芽酵母ＴＣＩ９０７は、胃シミュレーション環境（ｐＨ値３～４）での生存率が９９．４％であり、腸シミュレーション環境（ｐＨ値７）での生存率が９９．８％である。

いくつかの実施形態では、酵母菌は５体積％の播種量で該第１培地に播種される。例として、酵母菌を播種する前に、まず３Ｌの第１培地を調製し且つ１２１℃で３０分間高温滅菌する。そして、第１培地に含まれる組成成分が完全に溶解し且つ降温したと判定した後、さらに５体積％（１５０ｍＬに相当）の酵母菌を第１培地内に播種して、後続の発酵を行う。ここで、播種用の酵母菌のＯＤ_６００は６～８である。

いくつかの実施形態では、第１発酵液の発酵中に、発酵温度は３０±１℃で、酸塩基値（ｐＨ値）は６．５±０．１で、溶存酸素（ＤＯ，ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｏｘｙｇｅｎ）値は４０ｍｇ／Ｌ～５０ｍｇ／Ｌに維持される。そして、第１発酵液のｐＨ値は１０Ｎ水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）で調整制御される。

そして、第１発酵液は発酵槽内で発酵する。例として、３Ｌの第１培地と１５０ｍＬの酵母菌は５Ｌの発酵槽内で発酵することができる。いくつかの実施例では、第１発酵液の発酵中に設定された通気量は３Ｌ／ｍｉｎで、撹拌速度は２５０ｒｐｍに設定され、それにより、発酵中に酸素環境下で発酵することを保証する。また、発酵を開始する前に、３Ｌ／ｍｉｎの通気量、２５０ｒｐｍの撹拌速度で第１培地を撹拌して、その溶存酸素量が４０％より大きくなってから初めて植菌を行うことができる。

いくつかの実施形態では、第１発酵液に必要な発酵時間は４時間～５時間であり、発酵完了後の第１発酵液中の酵母菌のＯＤ_６００は４．０～５．０である。

ステップＳ２００から続く。第１発酵液を第２培地に播種して発酵させ、第２発酵液を得る（ステップＳ３００）。

いくつかの実施形態では、第１発酵液は６体積％の播種量で第２培地に播種される。例として、第１発酵液を播種する前に、まず、５０Ｌの第２培地を調製し且つ１２１℃で２５分間～３０分間高温滅菌する。そして、第２培地に含まれる組成成分が完全に溶解し且つ降温したと判定した後、さらに６体積％（３Ｌに相当）の第１発酵液を第２培地内に播種して、後続の発酵を行う。

いくつかの実施形態では、第２発酵液の発酵中に、発酵温度は３０±１℃で、酸塩基値（ｐＨ値）は６．５±０．１で、溶存酸素（ＤＯ，ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｏｘｙｇｅｎ）値は４０ｍｇ／Ｌ～５０ｍｇ／Ｌに維持される。そして、第２発酵液のｐＨ値は１０Ｎ水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）で調整制御される。

そして、第２発酵液は発酵槽内で発酵する。例として、５０Ｌの第２培地及び３Ｌの第１発酵液は７５Ｌの発酵槽内で発酵することができる。いくつかの実施形態では、第２発酵液の発酵中に設定された通気量は５０Ｌ／ｍｉｎであり、撹拌速度は２００ｒｐｍに設定され且つ発酵槽内槽圧の圧力値は０．３±０．１ｋｇ／ｃｍ^２であり、それにより、発酵中に酸素環境下で発酵することを保証する。また、発酵を開始する前に、まず３０Ｌ／ｍｉｎの通気量、２００ｒｐｍの撹拌速度で第２培地を撹拌して、その溶存酸素量が４０％より大きくなってから初めて植菌を行うことができる。

いくつかの実施形態では、第２発酵液に必要な発酵時間は４時間～５時間であり、発酵完了後の第２発酵液中の酵母菌のＯＤ_６００は４．０～５．０である。

ステップＳ３００から続く。第２発酵液を第３培地に播種して発酵させ、第３発酵液を得る（ステップＳ４００）。

いくつかの実施形態では、第２発酵液は１０体積％の播種量で第３培地に播種される。例として、第２発酵液を播種する前に、まず５００Ｌの第２培地を調製し且つ１２１℃で３０分間高温滅菌する。そして、第３培地に含まれる組成成分が完全に溶解し且つ降温したと判定した後、さらに１０体積％（５０Ｌに相当）の第２発酵液を第３培地内に播種して、後続の発酵を行う。

いくつかの実施形態では、第３発酵液の発酵中に、発酵温度は３０±１℃で、酸塩基値（ｐＨ値）は６．５±０．１で、溶存酸素（ＤＯ，ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｏｘｙｇｅｎ）値は４０ｍｇ／Ｌ～６０ｍｇ／Ｌに維持される。そして、第３発酵液のｐＨ値は１０Ｎ水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）で調整制御される。

そして、第３発酵液は発酵槽内で発酵する。例として、５００Ｌの第３培地及び５０Ｌの第２発酵液は７５０Ｌの発酵槽内で発酵することができる。いくつかの実施形態では、第３発酵液の発酵中に設定された通気量は５００Ｌ／ｍｉｎであり、撹拌速度は１００ｒｐｍに設定され且つ発酵槽内槽圧の圧力値は０．３±０．１ｋｇ／ｃｍ^２であり、それにより、発酵中に酸素環境下で発酵することを保証する。また、発酵を開始する前に、まず１００Ｌ／ｍｉｎの通気量、２００ｒｐｍの撹拌速度で第３培地を撹拌して、その溶存酸素量が４０％より大きくなってから初めて植菌を行うことができる。

いくつかの実施形態では、第３発酵液に必要な発酵時間は１２時間～１４時間であり、発酵完了後の第３発酵液中の酵母菌のＯＤ_６００は４８．０～５３．０である。

ステップＳ４００から続く。第３発酵液を遠心分離して発酵物を得る（ステップＳ５００）。いくつかの実施形態では、遠心分離機を用いて第３発酵液から発酵物を分離し、この発酵物のＯＤ_６００は５００であり、且つその固形分率は６５％より大きく、且つ８０％より小さい。

いくつかの実施形態では、遠心分離中の酸塩基値（ｐＨ値）は６．５±０．１である。いくつかの実施形態では、７５０Ｌ容量の遠心分離機の槽圧は１．０ｋｇ／ｃｍ^２であり、且つその設定された流量は０．３ｍ^３／ｈである。

ここで、前記「発酵物」は、酵母菌の発酵物であり、酵母菌菌体、酵母菌自身のタンパク質（製造工程で破砕された少数の酵母に由来する）、及び酵母菌の代謝産物を含有する発酵液（培地を含む）を含む。酵母菌の代謝産物は、酵母菌が培養中に発酵培地に分泌された物質、例えば、ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）及び補酵素Ｑ_１０等の複数の化合物である。例として、発酵物には、ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）、Ｑ_１０生合成タンパク質（ＣＯＱタンパク質）及び補酵素Ｑ_１０等の複数の化合物が含まれる。

ステップＳ５００から続く。発酵物を乾燥させた後に酵母粉末を得る（ステップＳ６００）。得られた酵母粉末には、少なくとも１．０×１０^９ＣＦＵ／ｇの酵母菌が含まれる。乾燥方式は、例として、凍結乾燥、低温乾燥、脱水乾燥等を含む。

いくつかの実施形態では、粗発酵物を凍結乾燥させ且つ粉砕した後に発酵物を得る。そして、凍結乾燥のステップを行う際に、凍結乾燥保護剤を加え、粗発酵物中の菌体を破壊から保護する。凍結乾燥保護剤は、例として、脱脂粉乳、マルトデキストリン、スクロース及びグリセリンを含む。

ここで、得られた酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）の含有量は少なくとも５０００ｐｐｍより大きく、好ましくは、５０００ｐｐｍ～１００００ｐｐｍである。例として、酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチドの含有量は５２６４．１５ｐｐｍである。

いくつかの実施形態では、酵母粉末にはＱ_１０生合成タンパク質（ＣＯＱタンパク質）がさらに含まれる。Ｑ_１０生合成タンパク質は酵母菌によるＱ_１０タンパク質合成を助けることができるため、Ｑ_１０生合成タンパク質の含有量が向上すると、酵母菌中の合成された補酵素Ｑ_１０の含有量も向上できる。これに基づくと、酵母粉末には補酵素Ｑ_１０が含まれてもよい。

いくつかの実施形態では、上記製造フローで製造された酵母粉末は、ニコチンアミド、トリプトファン及びニコチン酸等の組成成分を含む発酵培地（即ち第１培地、第２培地及び第３培地）によって、ニコチンアミド、トリプトファン及びニコチン酸を含まない発酵培地によって製造された酵母粉末に比べて、ニコチンアミドモノヌクレオチド含有量を少なくとも２倍向上させることができる。

いくつかの実施形態では、発酵培地（即ち第１培地、第２培地及び第３培地）中のニコチンアミド（ＮＡＭ）の含有量は０．１％であり、酵母菌は好ましいニコチンアミドモノヌクレオチドの収率を有する。そして、発酵培地に含まれるニコチンアミドの含有量が１．１％より大きくなると、酵母菌のニコチンアミドモノヌクレオチドの収率は、ニコチンアミドが添加されていない培地によるニコチンアミドモノヌクレオチドの収率以下に低下する。

いくつかの実施形態では、発酵培地においてナス属植物抽出物（例えば、ブラックトマト抽出物）、アロニア属植物抽出物（例えば、チョコベリー抽出物）、バショウ属植物抽出物（例えば、バナナ果皮抽出物）のいずれか１つ又は複数の植物抽出物が添加されている場合、製造された酵母粉末中のニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）含有量の向上に有利である。例として、バナナ果皮抽出物がさらに含まれる発酵培地で製造された酵母粉末は、酵母粉末中のニコチンアミドモノヌクレオチドの含有量を少なくとも１．１倍向上させることができる。いくつかの実施例では、チョコベリー抽出物がさらに含まれる発酵培地で製造された酵母粉末は、酵母粉末中のニコチンアミドモノヌクレオチドの含有量を少なくとも１．４７倍向上させることができる。いくつかの実施形態では、ブラックトマト抽出物がさらに含まれる発酵培地で製造された酵母粉末は、酵母粉末中のニコチンアミドモノヌクレオチドの含有量を少なくとも１．１９倍向上させることができる。

これらに基づくと、いずれか１つの実施形態の製造方法で製造されたニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）に富む酵母粉末は、ニコチンアミドモノヌクレオチドの含有量を確実に向上させることに加えて、以下の複数の実施例はさらに、該ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末が、肌の調子の改善、ヘアケア、抗炎症、心血管ヘルスケア、抗酸化、抗老化及び／又は身体疲労度の改善に用いることができ、そして、肌調子の改善、ヘアケア、抗炎症、心血管ヘルスケア、抗酸化、抗老化及び／又は身体疲労度の改善用の組成物を製造するために用いることもできることを示している。

いくつかの実施形態では、酵母粉末は、検体の肌の引き締めを高め、シワを減らし、検体の肌荒れを低減し、又はそれらの組合せに用いられて、検体の肌の調子を改善することができる。例として、検体が酵母粉末を服用すると、検体の肌のシワと肌のテクスチャを減らし、検体の肌の引き締め度を高め、検体の肌を滑らかにし、弾力性を持たせ、さらに肌全体の調子を改善することができる。これらに基づくと、酵母粉末は肌の調子を改善する機能を有する。

いくつかの実施形態では、酵母粉末は、検体の脱毛を低減し又は／及び検体の薄毛の程度を低下させて、ヘアケアの効果を達成することができる。例として、検体が酵母粉末を服用すると、検体の脱毛状況を軽減し、検体の薄毛の程度を低下させることができる。これに基づくと、酵母粉末は、ヘアケアの機能を有する。

いくつかの実施形態では、酵母粉末は、細胞中の活性酸素物質（Ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ。以下、ＲＯＳという）の含有量を低下させることができる。例として、検体が酵母粉末を服用すると、検体の細胞を細胞酸化ストレスに抵抗させ、さらに抗酸化効果を達成することができる。

いくつかの実施形態では、酵母粉末はミトコンドリア活性を活性化することができる。例として、検体が酵母粉末を服用すると、検体の細胞のミトコンドリア活性を活性化して、さらに抗酸化及び／又はアンチエイジングの効果を達成することができる。

いくつかの実施形態では、酵母粉末は、検体の抗老化関連遺伝子の発現量を調整制御し、ミトコンドリアを活性化し又は脳年齢を低下させることによってアンチエイジングを達成することができる。例として、抗老化遺伝子は、ＣＣＴ遺伝子、ＰＡＲＰ２遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：１００３８）、Ｐａｒｋｉｎ遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：５０７１）、Ａｔｇ遺伝子、ＦＯＸＯ遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：２３０８）、ＳＩＲＴ１遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：２３４１１）、ＮＡＤＳＹＮ遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：５５１９１）、ＭＲＰＳ５遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：６４９６９）、ＳＯＤ３遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：６６４９）又はそれらの組合せを含む。ここで、ＣＣＴ遺伝子は、ＣＣＴ５遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：２２９４８）、ＣＣＴ６Ａ遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：９０８）、ＣＣＴ７遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：１０５７４）及びＣＣＴ８遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：１０６９４）を含む。Ａｔｇ遺伝子は、Ａｔｇ１遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：８４０８）及びＡｔｇ８遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：１１３４５）を含む。

いくつかの実施形態では、検体が酵母粉末を服用すると、ＣＣＴ遺伝子、Ｐａｒｋｉｎ遺伝子、Ａｔｇ遺伝子、ＦＯＸＯ遺伝子、ＳＩＲＴ１遺伝子、ＮＡＤＳＹＮ遺伝子、ＭＲＰＳ５遺伝子、ＳＯＤ３遺伝子又はそれらの組合せの発現量を向上させることができ、ＰＡＲＰ２遺伝子の発現量を抑えることができる。例として、フォールドタンパク質（Ｃｈａｐｅｒｏｎｉｎ）であるＣＣＴ遺伝子の発現量を向上させることで、ミスフォールドしたタンパク質の修正を促進し、且つ修復に成功しなかったタンパク質をタンパク質加水分解酵素複合体（Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ）に送って加水分解し、細胞機能の衰退及び細胞の老化と死滅の加速を避け、抗老化の細胞調節効果を奏する。Ｐａｒｋｉｎ遺伝子の発現量を向上させると、成熟細胞の若い細胞への回復を促進することができる。ＰＡＲＰ２遺伝子の発現量を抑えることで、テロメラーゼの活性及び細胞の若返りを促進し、且つＤＮＡ末端が複製時にテロメラーゼを欠損しないことを確保し、細胞老化の確率を下げることができる。Ａｔｇ遺伝子及びＭＲＰＳ５遺伝子の発現量を向上させることで、細胞の抗老化能力を向上させ、細胞寿命を延長することができる。ＦＯＸＯ遺伝子の発現量を向上させることで、老化した細胞を除去して若い細胞を保護することができる。ＳＩＲＴ１遺伝子の発現量を向上させることで、体の重要な代謝機能を調整制御することができる。ＮＡＤＳＹＮ遺伝子の発現量を向上させることで、抗酸化効果を奏する。

いくつかの実施形態では、検体が酵母粉末を服用した後にニコチンアミドモノヌクレオチドを補充することにより、検体の血中のニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ^＋）の下流調節遺伝子（例えば、ＳＩＲＴ１遺伝子及びＳＯＤ３遺伝子）の発現量が向上し、酵母粉末は検体細胞のミトコンドリアを活性化でき、抗老化能力を有することが示されている。

いくつかの実施形態では、酵母粉末は、検体のＣ－反応タンパク質（ＣＲＰ）の発現量を低下させるためのものである。身体組織の損傷、慢性炎症等の状況でいずれも血中のＣ－反応タンパク質の量が上昇することがあるため、Ｃ－反応タンパク質は炎症反応と心血管疾患のリスク指標とすることができる。例として、検体が酵母粉末を服用すると、その血中のＣ－反応タンパク質の含有量を低下させることができ、検体が心血管疾患に罹患するリスクが低下することが示されている。これに基づくと、酵母粉末は抗炎症機能を有する。

いくつかの実施形態では、酵母粉末は、血中脂質を調節するために用いることができる。血中脂質を調節することは、低密度コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）の含有量を抑え及び低密度コレステロール／高密度コレステロール比率（Ｔ．ＣＨＯＬ／ＨＤＬ）を低下させることである。例として、検体が酵母粉末を服用した後にニコチンアミドモノヌクレオチドを補充することにより、検体の血中の低密度コレステロールの含有量が低下し、且つその低密度コレステロール／高密度コレステロール比率が低下し、これは検体が冠動脈硬化に罹患するリスクが低下することを示している。これに基づくと、酵母粉末は血中脂質を調節するために用いることができ、且つ心血管ヘルスケアの機能を有する。

いくつかの実施形態では、酵母粉末は脳年齢を低下させることができる。例として、検体が酵母粉末を服用すると、脳の検出年齢を少なくとも１０歳下げることができ、脳の年齢を検出する時、検体の精神的明晰さが向上し、その脳の検出年齢が比較的に若いことが示されている。これに基づくと、酵母粉末は抗老化機能を有する。

いくつかの実施形態では、酵母粉末は検体の身体疲労度を改善するために用いることができる。例として、検体が酵母粉末を服用すると、体の疲労感を効果的に下げることができる。

いくつかの実施形態では、酵母粉末は分解緩衝液（Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ）で再溶解し、且つ濃度が１μｇ／ｍＬのＤＮａｓｅで１０分間反応させ、酵母粉末のＤＮＡを分解することができる。次に、高圧滅菌機によって、順に１平方インチあたり２５キロポンド力（Ｋｐｓｉ）、３０Ｋｐｓｉ及び３２Ｋｐｓｉの圧力値で３回滅菌して、酵母菌抽出物（ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ）を形成する。酵母菌抽出物は、少なくとも５０００ｐｐｍのニコチンアミドモノヌクレオチドを含有する。いくつかの実施形態における酵母菌抽出物には、Ｑ_１０生合成タンパク質（ＣＯＱタンパク質）及び補酵素Ｑ_１０がさらに含まれる。そして、酵母抽出物の原料が酵母粉末であるため、酵母抽出物も前述した酵母粉末が有する肌調子の改善、ヘアケア、抗炎症、心血管ヘルスケア、抗酸化、アンチエイジング及び／又は身体疲労度の改善等の機能を有する。

ここで、前記「酵母菌抽出物」とは、酵母菌の自己タンパク質及びその原料（酵母粉末）に含まれる物質を指し、原料（酵母粉末）に別に含まれる物質は酵母菌の代謝産物及び培地であってもよい。

これらに基づくと、いずれか１つの実施形態の製造方法で製造されるニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末及び／又は酵母粉末で製造された酵母抽出液は、肌の調子の改善、ヘアケア、抗炎症、心血管ヘルスケア、抗酸化、抗老化及び／又は身体疲労度の改善用の組成物を製造するために用いることができる。組成物は少なくとも５０００ｐｐｍのニコチンアミドモノヌクレオチドを含有する。いくつかの実施形態では、組成物はＱ_１０生合成タンパク質（ＣＯＱタンパク質）をさらに含む。

いくつかの実施形態では、組成物は固体（例えば、粉末、錠剤、カプセル等）であってもよい。いくつかの実施形態では、酵母粉末の１日用量は１００ｍｇである。つまり、組成物の使用量は１００ｍｇの酵母粉末／日である。

いくつかの実施形態では、前述したいずれか１つの組成物は医薬品であってもよい。言い換えれば、この医薬品は有効含有量の酵母粉末及び／又は酵母粉末で製造された酵母抽出液を含む。

いくつかの実施形態では、前述した医薬品は、当業者によく知られている技術を利用して、経腸的、非経腸的（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｌｙ）、経口投与、又は局所（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ）投与に適する剤形に製造することができる。

いくつかの実施形態では、経腸的又は経口投与剤形は、錠剤（ｔａｂｌｅｔ）、トローチ（ｔｒｏｃｈｅ）、ロゼンジ（ｌｏｚｅｎｇｅ）、ピル剤（ｐｉｌｌ）、カプセル（ｃａｐｓｕｌｅ）、分散性粉末（ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ ｐｏｗｄｅｒ）又は細粒剤（ｇｒａｎｕｌｅ）、溶液、懸濁液（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）、乳剤（ｅｍｕｌｓｉｏｎ）、シロップ（ｓｙｒｕｐ）、エリキシル（ｅｌｉｘｉｒ）、スラリー（ｓｌｕｒｒｙ）又は類似物であり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、非経腸的又は局所投与剤形は、注射品（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、無菌粉末（ｓｔｅｒｉｌｅ ｐｏｗｄｅｒ）、外用製剤（ｅｘｔｅｒｎａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）又は類似物であり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、注射品の投与方式は、皮下注射（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、表皮内注射（ｉｎｔｒａｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、皮内注射（ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）又は病巣内注射（ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）であってもよい。

いくつかの実施形態では、前述した医薬品は、医薬製造技術に広く使用されている医薬上許容される担体（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ ｃａｒｒｉｅｒ）を含んでもよい。いくつかの実施形態では、医薬上許容される担体は、溶剤（ｓｏｌｖｅｎｔ）、緩衝液（ｂｕｆｆｅｒ）、乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒ）、懸濁剤（ｓｕｓｐｅｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、分解剤（ｄｅｃｏｍｐｏｓｅｒ）、崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、分散剤（ｄｉｓｐｅｒｓｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、結合剤（ｂｉｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、賦形剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）、安定剤（ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、キレート剤（ｃｈｅｌａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、希釈剤（ｄｉｌｕｅｎｔ）、ゲル化剤（ｇｅｌｌｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、防腐剤（ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ）、湿潤剤（ｗｅｔｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、潤滑剤（ｌｕｂｒｉｃａｎｔ）、吸収遅延剤（ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｄｅｌａｙｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、リポソーム（ｌｉｐｏｓｏｍｅ）及び類似物という担体のうちの１つ又は複数であってもよい。選択された担体の種類及び数については、当業者の専門的な素養と通常の技術の範疇内にあるものである。いくつかの実施形態では、医薬上許容される担体の溶剤としては、水、生理食塩水（ｎｏｒｍａｌ ｓａｌｉｎｅ）、リン酸塩緩衝生理食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ，ＰＢＳ）、又はアルコール含有水性溶液（ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａｌｃｏｈｏｌ）であってもよい。

いくつかの実施形態では、前述したいずれか１つの組成物は食用製品であってもよい。言い換えれば、食用製品は特定の含有量の酵母粉末及び／又は酵母粉末で製造された酵母抽出液を含む。いくつかの実施形態では、食用製品は、一般食品、健康食品又は食事補充品であってもよい。

いくつかの実施形態では、前述した食用製品は、当業者によく知られている技術を利用して、経口投与に適する剤形に製造することができる。いくつかの実施例では、前述した一般食品は食用製品そのものであってもよい。いくつかの実施例では、一般食品は、飲料（ｂｅｖｅｒａｇｅｓ）、発酵食品（ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｆｏｏｄｓ）、ベーカリー製品（ｂａｋｅｒｙ ｐｒｏｄｕｃｔｓ）又は調味料であり得るが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、得られた酵母粉末及び／又は酵母粉末で製造された酵母抽出液はさらに、酵母粉末及び／又は酵母粉末で製造された酵母抽出液を含有する食品組成物を製造するための食品添加物（ｆｏｏｄ ａｄｄｉｔｉｖｅ）としてもよい。ここで、従来の方法によって、原料製造時にいずれか１つの実施例の酵母粉末を添加するか、又は食品の製造過程においていずれか１つの実施例の酵母粉末を添加して、いずれか１つの可食性材料と共にヒトと非ヒト動物が摂食する食用製品（即ち食品組成物）として配合することができる。

例１ 発酵プロセス－ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）に富む酵母粉末の製造
発酵培地を準備し、発酵順序に従って第１培地、第２培地及び第３培地に分ける。ここで、発酵培地は基礎培地及びニコチンアミド、トリプトファン、ニコチン酸で構成され、その組成成分は、２．０％の酵母ペプトン（英商品名：Ｙｅａｓｔ ｐｅｐｔｏｎｅ ＧＬＳ；メーカー：上鼎生技有限公司）、２．０％の酵母抽出物９０２（英商品名：Ａｎｇｅｌ ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ９０２；メーカー：徳恩生医株式会社）、０．５％のリン酸二水素カリウム（メーカー：シグマアルドリッチ社）、０．５％のリン酸水素二カリウム（メーカー：協明化工株式会社）、０．０５％の硫酸マグネシウム（メーカー：京聯実業有限公司）、１０％のグルコース（メーカー：裕元興業株式会社）、０．１７％のクエン酸（メーカー：新和食品株式会社）、０．５％の酢酸ナトリウム（メーカー：新和食品株式会社）、０．０１６％のグルコン酸マンガン（メーカー：美隆貿易株式会社）、０．１％のシステイン（メーカー：裕元興業株式会社）、０．０５％の消泡剤（メーカー：迦康実業株式会社）、０．１％のニコチンアミド（メーカー：シグマアルドリッチ社）、０．２％のトリプトファン（メーカー：シグマアルドリッチ社）及び０．０３６９％のニコチン酸（メーカー：シグマアルドリッチ社）であり、且つ脱イオン蒸留水で１００％にメスアップする。グルコースは他の組成成分とは別に滅菌している。ここで、第１培地の体積は３Ｌで、第２培地の体積は５０Ｌで及び第３培地の体積は５００Ｌである。

３Ｌの滅菌後の第１培地を５Ｌの発酵槽に入れ、第１培地の溶存酸素量が４０％より大きくなってから初めて後続の植菌を行うことができる。そして、出芽酵母ＴＣＩ９０７はそのＯＤ_６００が６～８となるように活性化した後に、５体積％の播種量（即ち１５０ｍＬ）で酸素含有量が４０％より大きい第１培地に播種し、１回目発酵して第１発酵液を形成し、発酵時間は４時間～５時間である。第１発酵液の発酵中に、発酵温度は３０±１℃で、酸塩基値（ｐＨ値）は６．５±０．１で、溶存酸素値は４０ｍｇ／Ｌ～５０ｍｇ／Ｌの区間に維持される。

第１発酵液の発酵が完了すると、そのＯＤ_６００は４．０～５．０になる。次に、第１発酵液を６体積％の播種量（即ち３Ｌ）で５０Ｌの第２培地を入れた７５Ｌの発酵槽に播種し、２回目発酵して第２発酵液を形成し、発酵時間は４時間～５時間である。第２培地の溶存酸素量は４０％より大きくなければならない。そして、第２発酵液の発酵中に、発酵温度は３０±１℃で、酸塩基値（ｐＨ値）は６．５±０．１で、溶存酸素値は４０ｍｇ／Ｌ～５０ｍｇ／Ｌの区間に維持される。

第２発酵液の発酵が完了すると、そのＯＤ_６００は４．０～５．０になる。次に、第２発酵液を１０体積％の播種量（即ち５０Ｌ）で５００Ｌの第３培地を入れた７５０Ｌの発酵槽に播種し、３回目発酵して第３発酵液を形成し、発酵時間は１２時間～１４時間である。第３培地の溶存酸素量は４０％より大きくなければならない。そして、第３発酵液の発酵中に、発酵温度は３０±１℃で、酸塩基値（ｐＨ値）は６．５±０．１で，溶存酸素値は４０ｍｇ／Ｌ～５０ｍｇ／Ｌの区間に維持される。

第３発酵液発酵の発酵が完了すると、そのＯＤ_６００は４８．０～５３．０になる。次に、第３発酵液を遠心分離机に移した後、固形分率が６５％より大きく、且つ８０％より小さく、ＯＤ_６００が５００より大きい発酵物を得る。そして、１キログラム当たりの発酵物にそれぞれ４０ｇの脱脂粉乳、１２０ｇのマルトデキストリン、８０ｇのスクロース及び４０ｇのグリセリンを凍結乾燥保護剤として添加し、凍結乾燥及び粉砕処理を行った後、酵母粉末を得る。

例２ 発酵プロセス－酵母菌菌種テスト
ここでは、酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）を判断指標とする。

実験群は例１で製造された酵母粉末とし、その使用する酵母菌菌種は出芽酵母ＴＣＩ９０７である。

対照群の酵母粉末は、例１に使用される菌種を交換した以外に例１の製造フローに従って製造された酵母粉末である。つまり、対照群の製造フローと例１の製造フローとの違いは、使用される酵母菌菌種がトルラ酵母（Ｃｙｂｅｒｌｉｎｄｎｅｒａ ｊａｄｉｎｉｉ）（中国台湾の財団法人食品工業発展研究所の生物資源保存及び研究センターから購入し、寄託番号はＢＣＲＣ２０３２５である）であることである。

実験群及び対照群の酵母粉末をそれぞれ１グラム秤量し、９グラムの水にそれぞれ溶解して酵母溶液を形成し、氷上で細胞破砕機（メーカー：尚偉株式会社）で酵母菌細胞をシャタリングする。次に、実験群及び対照群の細胞破砕処理を経た酵母溶液、反応溶液をそれぞれ９６ウェルプレートに入れ、氷上で２分間反応させた後に８８％のギ酸（ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ；市販品を使用）を添加し、３７℃で１０分間さらに反応させて被験溶液を得る。ここで、反応溶液は、ＤＭＳＯに可溶な２０％アセトフェノン（ａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅ；市販品を使用）、２Ｍの水酸化カリウム（市販品を使用）を含む。

市販ＮＭＮ（メーカー：無錫西瑪生物科技有限公司）を用いて、０．０４ｍＭ～０．０００６２５ｍＭ等複数の異なる濃度のＮＭＮサンプルにそれぞれ連続希釈し、後続のＮＭＮ濃度基準線の作成のために、それぞれ２５０μＬ取って９６ウェルプレートに入れる。

次に、実験群及び対照群の被験溶液、並びに上記複数の異なる濃度のＮＭＮサンプルを、マイクロプレート検出器（Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ；メーカー：サーモフィッシャーサイエンティフィック社）によって３８２ｎｍの励起波長で４４５ｎｍにおいてＵＶ線を測定して対応する読み取り値を得て、そして、図２に示すように、複数の異なる濃度のＮＭＮサンプルにより作成されたＮＭＮ濃度基準線により、補間法で実験群及び対照群のＮＭＮ含有量を換算する。

図２を参照されたい。実験群のニコチンアミドモノヌクレオチド含有量は０．００８４５ｍＭであり、対照群のニコチンアミドモノヌクレオチド含有量は０．００５６５ｍＭである。言い換えれば、対照群に比べて、実験群において出芽酵母で製造された酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチド含有量は１．５倍である。

このことから分かるように、出芽酵母で発酵すると、酵母粉末中のニコチンアミドモノヌクレオチド含有量を向上させることができる。

例３ 発酵プロセス－発酵培地テスト
ここでは、酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）を判断指標とする。

実験群は例１で製造された酵母粉末とし、その使用する発酵培地の組成成分は、９９．６６３１％の基礎培地、０．１％のニコチンアミド（ＮＡＭ）、０．２％のトリプトファン（Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ）及び０．０３６９％のニコチン酸（Ｎｉａｃｉｎ）で構成される。基礎培地の組成成分は、２．０％の酵母ペプトンＧＬＳ、２．０％の酵母抽出物９０２、０．５％のリン酸二水素カリウム（ＫＨ_２ＰＯ_４）、０．５％のリン酸水素二カリウム（Ｋ_２ＨＰＯ_４）、０．０５％の硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ）、１０％のグルコース（Ｇｌｕｃｏｓｅ）、０．１７％のクエン酸（Ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ）、０．５％の酢酸ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ）、０．０１６％のグルコン酸マンガン（ｍａｎｇａｎｅｓｅ ｇｌｕｃｏｎａｔｅ）、０．１％のシステイン（Ｃｙｓｔｅｉｎｅ）、０．０５％の消泡剤及び脱イオン蒸留水（９９．６６３１％にメスアップ）である。

対照群の酵母粉末は、例１に使用される発酵培地を交換した以外に例１の製造フローに従って製造された酵母粉末である。つまり、対照群の製造フローと例１の製造フローとの違いは、使用される発酵培地が基礎培地であり、且つ基礎培地の組成成分が２．０％の酵母ペプトンＧＬＳ、２．０％の酵母抽出物９０２、０．５％のリン酸二水素カリウム（ＫＨ_２ＰＯ_４）、０．５％のリン酸水素二カリウム（Ｋ_２ＨＰＯ_４）、０．０５％の硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ）、１０％のグルコース（Ｇｌｕｃｏｓｅ）、０．１７％のクエン酸（Ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ）、０．５％の酢酸ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ）、０．０１６％のグルコン酸マンガン（ｍａｎｇａｎｅｓｅ ｇｌｕｃｏｎａｔｅ）、０．１％のシステイン（Ｃｙｓｔｅｉｎｅ）、０．０５％の消泡剤及び脱イオン蒸留水（１００％にメスアップ）であることである。

実験群及び対照群の酵母粉末をそれぞれ１グラム秤量し、９グラムの水にそれぞれ溶解して酵母溶液を形成し、氷上で細胞破砕機（メーカー：尚偉株式会社）で酵母菌細胞をシャタリングする。次に、実験群及び対照群の細胞破砕処理を経た酵母溶液、反応溶液をそれぞれ９６ウェルプレートに入れ、氷上で２分間反応させた後に８８％のギ酸（ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ；市販品を使用）を添加し、３７℃で１０分間さらに反応させて被験溶液を得る。反応溶液は、ＤＭＳＯに可溶な２０％アセトフェノン（ａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅ；市販品を使用）、２Ｍの水酸化カリウム（市販品を使用）を含む。

市販ＮＭＮ（メーカー：無錫西瑪生物科技有限公司）を用いて、０．０４ｍＭ～０．０００６２５ｍＭ等複数の異なる濃度のＮＭＮサンプルにそれぞれ連続希釈し、後続のＮＭＮ濃度基準線の作成のために、それぞれ２５０μＬ取って９６ウェルプレートに入れ、且つ濃度をｐｐｍに換算する。

次に、実験群及び対照群の被験溶液、並びに上記複数の異なる濃度のＮＭＮサンプルを、マイクロプレート検出器（Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ；メーカー：サーモフィッシャーサイエンティフィック社）によって３８２ｎｍの励起波長で４４５ｎｍにおけるＵＶ線を測定して対応する読み取り値を得て、そして、図３に示すように、複数の異なる濃度のＮＭＮサンプルにより作成されたＮＭＮ濃度基準線により、補間法で実験群及び対照群のＮＭＮ含有量を換算する。

図３を参照されたい。実験群のニコチンアミドモノヌクレオチド含有量は５２６４．１５ｐｐｍであり、対照群のニコチンアミドモノヌクレオチド含有量は２５２６．３８ｐｐｍである。言い換えれば、対照群に比べて、実験群において出芽酵母で製造された酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチド含有量は２．１倍である。

このことから分かるように、ニコチンアミド（ＮＡＭ）、トリプトファン（Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ）及びニコチン酸（Ｎｉａｃｉｎ）の発酵培地を用いて発酵すると、酵母粉末中のニコチンアミドモノヌクレオチド含有量を向上させることができる。

例４ 発酵プロセス－発酵培地テスト（植物抽出物及び化合物）
ここでは、酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）を判断指標とし、且つ例１の酵母菌に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチド含有量を指標基礎として各群のニコチンアミドモノヌクレオチド相対含有量比率（以下、ＮＭＮ相対含有量比率という）を判断する。

コントロール群は例１で製造された酵母粉末とし、その使用する発酵培地の組成成分は、９９．６６３１％の基礎培地、０．１％のニコチンアミド、０．２％のトリプトファン及び０．０３６９％のニコチン酸で構成される。基礎培地の組成成分は、例１及び例２に記載されたとおりであるため、詳細な説明を省略する。

実験群はそれぞれバナナ果皮抽出物群、チョコベリー抽出物群及びブラックトマト抽出物群である。実験群の酵母粉末は、例１に使用される発酵培地を交換した以外に例１の製造フローに従って製造された酵母粉末である。つまり、実験群の製造フローと例１の製造フローとの違いは、使用される発酵培地に０．１％のニコチンアミド、０．２％のトリプトファン、０．０３６９％のニコチン酸及び対応するパーセンテージの植物抽出物組成を含有することである。そして、バナナ果皮抽出物群に使用される植物抽出物は０．０５％％のバナナ果皮抽出物で、チョコベリー抽出物群に使用される植物抽出物は０．０８５％のチョコベリー抽出物で、且つブラックトマト抽出物群に使用される植物抽出物は０．０５％のブラックトマト抽出物で、残量は基礎培地で１００％にメスアップする。

ここで、バナナ果皮抽出物群に使用されるバナナ果皮抽出物については、バナナ（Ｍｕｓａ ｓｐｐ．）の果皮と果肉を分離し、且つバナナ果皮を以下のように操作処理して、バナナ果皮抽出物を提供する。１． バナナ果皮を抽出溶剤と混合し（バナナ果皮と抽出溶剤の体積比は１：６であり、該抽出溶剤系は、クエン酸：水＝１：１００の体積比用量で提供されるものである）、８５℃で抽出し、０．５時間かけて、粗抽出液を提供する。２． ステップ１の粗抽出物を、５０００ｒｐｍ．の回転速度で遠心分離し、１０分間かけて、上澄み液を取った後、４００メッシュの濾過網で濾過し、濾液を提供する。３． ５５±５℃で、ステップ２の濾液を減圧濃縮し、濃縮抽出液を提供する。４． ステップ３の濃縮抽出液を凍結乾燥して、乾燥物（即ち、バナナ果皮抽出物）を提供する。チョコベリー抽出物群に使用されるチョコベリー抽出物については、ブラックチョークベリー（Ａｒｏｎｉａ ｍｅｌａｎｏｃａｒｐａ）の果実をブロックに切り且つ均質に粉砕してブラックチョークベリー均質物を形成した後、４０℃～６０℃でブラックチョークベリー均質物を水で０．５時間～２時間抽出したものであり、水とブラックチョークベリー均質物の液固比が５～２０：１～５である。ブラックトマト抽出物群に使用されるブラックトマト抽出物については、ブラックトマト（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ ‘Ｋｕｍａｔｏ’）をブロックに切り且つ均質に粉砕してブラックトマト均質物を形成した後、４０℃～６０℃でブラックトマト均質物を水で０．５時間～２時間抽出したものであり、水とブラックトマト均質物の液固比が５～２０：１～５である。

対照群はそれぞれタンニン酸群、甘草抽出物群及びトケイソウ抽出物群である。対照群の酵母粉末は、例１に使用される発酵培地を交換し体外に例１の製造フローに従って製造された酵母粉末である。つまり、対照群の製造フローと例１の製造フローとの違いは、使用される発酵培地が０．１％のニコチンアミド、０．２％のトリプトファン、０．０３６９％のニコチン酸及び対応するパーセンテージの植物抽出物又は化合物組成を含有することである。そして、タンニン酸群に使用される化合物は、５μＭのタンニン酸（メーカー：シグマアルドリッチ社）で、甘草抽出物群に使用される植物抽出物は０．５％の甘草抽出物で、且つトケイソウ抽出物群に使用される植物抽出物は４％のトケイソウ抽出物で、残量は基礎培地で１００％にメスアップする。

甘草抽出物群に使用される甘草抽出物は、甘草を細かく刻み、固体：液体比が１：２から１：１０の比で細かく刻んだ後の甘草をそれぞれ、０．５％から２％のクエン酸を含有する水溶液と均一に混和し、且つ混和後の溶液を５０℃から１００℃で３０分間から１２０分間抽出する。次に、室温まで冷却させ、２００ミクロンの濾過網で濾過して、甘草抽出物を得る。トケイソウ抽出物群に使用されるトケイソウ抽出物については、パッションフルーツ（Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａ ｅｄｕｌｉｓ；トケイソウ属（Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａ ｓｐｐ．）植物）の種子を洗浄して乾燥させた後に均質機で粗砕してトケイソウ種子均質物を形成し、且つトケイソウ種子均質物と水とを、材料と水との比（重量）が１：５であるように混合した後、５５℃で１時間抽出してから８５℃で１時間抽出して製造される。

コントロール群、実験群及び対照群の酵母粉末をそれぞれ１グラム秤量し、９グラムの水にそれぞれ溶解して酵母溶液を形成し、氷上で細胞破砕機（メーカー：尚偉株式会社）で酵母菌細胞をシャタリングする。次に、コントロール群、実験群及び対照群の細胞破砕処理を経た酵母溶液、反応溶液をそれぞれ９６ウェルプレートに入れ、氷上で２分間反応させた後に８８％のギ酸（ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ；市販品を使用）を添加し、３７℃で１０分間さらに反応させて被験溶液を得る。反応溶液は、ＤＭＳＯに可溶な２０％アセトフェノン（ａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅ；市販品を使用）、２Ｍの水酸化カリウム（市販品を使用）を含む。

市販ＮＭＮ（メーカー：無錫西瑪生物科技有限公司）を用いて、０．０４ｍＭ～０．０００６２５ｍＭ等複数の異なる濃度のＮＭＮサンプルにそれぞれ連続希釈し、後続のＮＭＮ濃度基準線の作成のために、それぞれ２５０μＬ取って９６ウェルプレートに入れる。

次に、コントロール群、実験群及び対照群の被験溶液、並びに上記複数の異なる濃度のＮＭＮサンプルを、マイクロプレート検出器（Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ；メーカー：サーモフィッシャーサイエンティフィック社）によって３８２ｎｍの励起波長で４４５ｎｍにおけるＵＶ線を測定して対応する読み取り値を得て、そして、複数の異なる濃度のＮＭＮサンプルにより作成されたＮＭＮ濃度基準線により、補間法でコントロール群、実験群及び対照群のＮＭＮ含有量を換算する。ここで、図４に示すように、コントロール群で得られた読み取り値を１として実験群及び対照群のＮＭＮ相対含有量比率を換算する。

図４を参照されたい。コントロール群のＮＭＮ相対含有量比率を１．０とする。コントロール群に比べて、対照群のうちタンニン酸群のＮＭＮ相対含有量比率が０．９で、甘草抽出物群のＮＭＮ相対含有量比率が０．６２で、及びトケイソウ抽出物群のＮＭＮ相対含有量比率が０．７４である。コントロール群に比べて、実験群のうちバナナ果皮抽出物群のＮＭＮ相対含有量比率が１．１で、チョコベリー抽出物群のＮＭＮ相対含有量比率が１．４７で、及びブラックトマト抽出物群のＮＭＮ相対含有量比率が１．１９である。言い換えれば、コントロール群及び対照群に比べて、発酵培地に０．０５％のバナナ果皮抽出物、０．０８５％のチョコベリー抽出物及び０．０５％のブラックトマト抽出物がそれぞれ添加されて製造された各群の酵母粉末は、全て高いニコチンアミドモノヌクレオチド含有量を有する。そして、発酵培地に０．０８５％のチョコベリー抽出物が添加されていると、製造された酵母粉末にほぼ１．５倍のニコチンアミドモノヌクレオチド含有量を持たせることができる。また、対照群の実験結果から分かるように、植物抽出物は全てで酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチド含有量を向上させることができるわけではない。

このことから分かるように、発酵培地にバナナ果皮抽出物、チョコベリー抽出物及びブラックトマト抽出物が添加されている場合、それらで製造された酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチドの含有量を向上させることができる。

例５ 細胞実験－ＲＯＳ生成の抑制（過酸化水素水処理）
ここでは、蛍光プローブＤＣＦＨ－ＤＡをフローサイトメトリー（Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）と組み合せて、マウス脳神経母細胞（Ｍｏｕｓｅ ｂｒａｉｎ ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ，Ｎｅｕｒｏ２ａ）をニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）の含有する酵母粉末で処理した後、その活性酸素物質（ＲＯＳ）含有量の変化を測定する。

使用される培地は、１０体積％のウシ血清アルブミン（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ，ＦＢＳ；ブランド：Ｇｉｂｃｏ）及び１体積％のペニシリン－ストレプトマイシン（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ／ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ，ブランド：Ｇｉｂｃｏ）が添加されているＤＭＥＭ培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ；ブランド：Ｇｉｂｃｏ）であり、以下、細胞培地という。使用されるＤＣＦＨ－ＤＡ溶液は、ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート（２，７－ｄｉｃｈｌｏｒｏ－ｄｉｈｙｄｒｏ－ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ，ＤＣＦＨ－ＤＡ；製品番号ＳＩ－Ｄ６８８３，Ｓｉｇｍａから購入）をジメチルスルホキシド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ，ＤＭＳＯ。Ｓｉｇｍａから購入、製品番号ＳＩ－Ｄ６８８３－５０ＭＧ）に溶解して調製された反応溶液である。

まず、２×１０^５個のマウス神経母細胞腫細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－１３１；以下、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞という）を各ウェルに２ｍＬの細胞培地が含まれる６ウェル細胞培養プレートに入れ、３７℃で２４時間培養する。

各ウェルのＮｅｕｒｏ２ａ細胞がそれぞれ６ウェル細胞培養プレートの底部に貼り付けた後、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞をブランク群、コントロール群、対照群及び実験群に分ける。次に、各群の細胞培地を実験培地に交換し、続いて３７℃で２４時間連続培養する。ブランク群、コントロール群の実験培地は単純な細胞培地である。対照群の実験培地は、体積１０μＬで濃度２００ｍＭの化学合成ニコチンアミドモノヌクレオチド（メーカー：シグマアルドリッチ社）が添加されている細胞培地である。実験群の実験培地は、例１で製造されたＮＭＮに富む酵母粉末を０．２５体積％含有する細胞培地である。

次に、各群において２μＬの５μｇ／ｍＬのＤＣＦＨ－ＤＡ溶液を各ウェルの実験培地に添加した後にＮｅｕｒｏ２ａ細胞を１５分間処理する。ＤＣＦＨ－ＤＡ溶液が反応した後、１０μＬの２００ｍＭの過酸化水素水（シグマアルドリッチ社）を各群の実験培地に添加し、３７℃で１時間反応させる。

次に、各群の実験培地を除去した後、１ｍＬの１Ｘ ＰＢＳ溶液で各群のＮｅｕｒｏ２ａ細胞を２回潤洗する。続いて、２００μＬのトリプシンを各ウェルに添加して５分間反応させる。反応後、各ウェルに１ｍＬの細胞培地を添加して反応を終了する。各ウェル中のＮｅｕｒｏ２ａ細胞及び細胞培地を、個別に対応する１．５ｍＬの微量遠心分離管内に集め、且つＮｅｕｒｏ２ａ細胞及び細胞培地を含有する微量遠心分離管を４００ｘｇで５分間遠心分離する。遠心分離後、各群の微量遠心分離管中の上澄み液を除去し、さらに１Ｘ ＰＢＳ溶液でＮｅｕｒｏ２ａ細胞の沈殿物を新たに再溶解し、４００ｘｇで５分間遠心分離する。再度、遠心分離後に各群の微量遠心分離管中の上澄み液を除去し、暗所に１遠心分離管あたり２００μＬの１Ｘ ＰＢＳ溶液でＮｅｕｒｏ２ａ細胞を再度懸濁させ、各群の被験細胞液を得る。

フローサイトメトリー（Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；メーカー：Ｂｅｃｋｍａｎ；Ｃａｔａｌｏｇ Ｎｏ．６６０５１９）を用いて、各群の被験細胞液中のＤＣＦＨ－ＤＡの蛍光信号を検出する。使用される蛍光検出の励起波長は４５０～４９０ｎｍで、発光波長は５１０～５５０ｎｍである。ＤＣＦＨ－ＤＡがＮｅｕｒｏ２ａに入るとまずＤＣＦＨ（ジクロロジヒドロフルオレセイン）に加水分解され、さらに活性酸素物質（ＲＯＳ）により、緑色蛍光を発し得るＤＣＦ（ジクロロフルオレセイン）に酸化されるため、ＤＣＦＨ－ＤＡ処理されたＮｅｕｒｏ２ａ細胞の蛍光強度は、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞内の活性酸素物質（ＲＯＳ）含有量を示すことができ、且つこれにより、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞内の活性酸素物質（ＲＯＳ）が高度に発現する細胞数が原細胞数に占める割合を知ることができる。実験は２回繰り返し行われ、各群の２回繰り返しの実験の測定結果を平均して平均値を取得し、続いて図５に示すように、ブランク群の平均値を１００％の相対ＲＯＳ生成量として、コントロール群、対照群及び実験群の平均値を相対ＲＯＳ生成量に換算する。そして、蛍光顕微鏡（Ｂｅｃｋｍａｎ）で各群のＮｅｕｒｏ２ａ細胞の発現を観察する。

図５を参照されたい。ブランク群の細胞は、過酸化水素水処理されておらず、その相対ＲＯＳ生成量が１００％の参考基準とされており、蛍光顕微鏡下では、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞は青色を呈しており、青色は、細胞酸化ストレスが誘導されないことを示す。コントロール群は、過酸化水素水処理された後、その相対ＲＯＳ生成量（高蛍光発現）がブランク群よりも４８７．６％まで大幅に増加しており、蛍光顕微鏡下では、そのＮｅｕｒｏ２ａ細胞は蛍光緑を呈しており、これは、過酸化水素水処理により、細胞内にＲＯＳが発生し、さらにＮｅｕｒｏ２ａ細胞に対して後続の傷害を与えることが確実であることを示す。対照群は、過酸化水素水処理された後、その相対ＲＯＳ生成量がブランク群よりも４５２．５％まで増加しているが、コントロール群に対して３５．１％低下した。そして、蛍光顕微鏡下では、対照群のＮｅｕｒｏ２ａ細胞は青緑交錯を呈するが緑色の方が明らかであり、これは、細胞培地中の化学合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドが、過酸化水素水による細胞酸化ストレスへのＮｅｕｒｏ２ａ細胞の抵抗にわずかに協力していることを示す。実験群は、過酸化水素水処理された後、その相対ＲＯＳ生成量がブランク群よりも４１１．２％まで増加しているが、コントロール群に対して７６．４％低下した。そして、蛍光顕微鏡では、そのＮｅｕｒｏ２ａ細胞は青色を主とするがまだ少しの緑色があるように呈しており、これは、細胞培地中の天然のニコチンアミドモノヌクレオチドが、活性酸素物質（ＲＯＳ）の細胞内での発生又は蓄積を効果的に減少させ、さらに過酸化水素水による細胞酸化ストレスへのＮｅｕｒｏ２ａ細胞の抵抗によく協力することができることを示す。そして、対照群に比べて、実験群のＮｅｕｒｏ２ａ細胞の相対ＲＯＳ生成量が有意に低下し（約２．１７倍）、これは、酵母粉末中の天然のニコチンアミドモノヌクレオチドが、化学合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドに比べて、活性酸素物質（ＲＯＳ）の細胞内での発生又は蓄積をより効果的に減少させ、細胞のＲＯＳ傷害への抵抗を助けることができ、抗酸化及び抗老化の能力を有することを示す。

言い換えれば、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末は、活性酸素物質除去剤とすることができる。即ち、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末は、細胞内の活性酸素物質（ＲＯＳ）含有量を低下させることで、活性酸素物質等による細胞の酸化傷害を減少させることができる。

これらに基づくと、検体がニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末を服用すると、ＲＯＳ傷害に効果的に抵抗し、さらに抗酸化及びアンチエイジングの効果を達成することができる。

例６ 細胞実験－ミトコンドリア活性
ここで、フローサイトメトリー（Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）によって、マウス脳神経母細胞（Ｍｏｕｓｅ ｂｒａｉｎ ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ，Ｎｅｕｒｏ２ａ）がニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）の含有する酵母粉末で処理された後、そのミトコンドリア活性の変化を評価する。

使用される培地は、１０体積％のウシ血清アルブミン（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ，ＦＢＳ；ブランド：Ｇｉｂｃｏ）及び１体積％のペニシリン－ストレプトマイシン（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ／ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ，ブランド：Ｇｉｂｃｏ）が添加されているＤＭＥＭ培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ；ブランド：Ｇｉｂｃｏ）であり、以下、細胞培地という。使用されるミトコンドリア活性テスト方法では、ミトコンドリア膜電位検出セット（ＢＤＴＭ ＭｉｔｏＳｃｒｅｅｎ （ＪＣ－１） ｋｉｔ，型番５５１３０２）を利用してミトコンドリアの膜電位を測定し、且つミトコンドリア活性分析を行う。ミトコンドリア膜電位検出セットは、ＪＣ－１染料（凍結乾燥）及び１０×分析緩衝液を有する。使用前に、１×ＰＢＳで１０×分析緩衝液を１０倍希釈して、１×分析緩衝液を形成する。１３０μＬのＤＭＳＯをＪＣ－１染剤（凍結乾燥）に添加して、ＪＣ－１ストック溶液を形成する。続いて、さらに１×分析緩衝液でＪＣ－１ストック溶液を希釈して、ＪＣ－１作業試薬（ＪＣ－１ ｗｏｒｋｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ；即ちＪＣ－１ミトコンドリア特異的染剤）を形成する。ＪＣ－１ストック溶液と１×分析緩衝液の希釈倍率は１：１００である。

まず、１×１０^５個のマウス神経母細胞腫細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－１３１；以下、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞という）を各ウェルに２ｍＬの細胞培地が含まれる６ウェル細胞培養プレートに入れ、３７℃で２４時間培養する。

各ウェルのＮｅｕｒｏ２ａ細胞がそれぞれ６ウェル細胞培養プレートの底部に貼り付けた後、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞を実験群、対照群及びコントロール群に分ける。次に、各群の細胞培地を実験培地に交換し、続いて３７℃で２４時間連続培養する。実験群の実験培地は、０．２５体積％の例１で製造される酵母粉末の細胞培地である。対照群の実験培地は、０．２５体積％の化学合成ニコチンアミドモノヌクレオチド（メーカー：シグマアルドリッチ社）が添加されている細胞培地である。コントロール群の実験培地は、単純な細胞培地である。

次に、各群の実験培地を除去した後、１ｍＬの１×ＤＰＢＳ溶液で各群のＮｅｕｒｏ２ａ細胞を２回潤洗する。続いて、２００μＬのトリプシンを各ウェルに添加して５分間反応させる。反応後、各ウェルに１ｍＬの細胞培地を添加して反応を終了する。各ウェル中のＮｅｕｒｏ２ａ細胞及び細胞培地を、個別に対応する１．５ｍＬの微量遠心分離管内に集め、且つＮｅｕｒｏ２ａ細胞及び細胞培地を含有する微量遠心分離管を４００ｘｇで５分間遠心分離する。遠心分離後、各群の微量遠心分離管中の上澄み液を除去し、さらに１×ＰＢＳ溶液でＮｅｕｒｏ２ａ細胞の沈殿物を新たに再溶解し、４００ｘｇで５分間遠心分離する。再度、遠心分離後に各群の微量遠心分離管中の上澄み液を除去し、且つ１００μＬのＪＣ－１作業試薬を各微量遠心分離管に添加し、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞の沈殿物をＪＣ－１作業試薬と均一に混合した後に１５分間遮光静置する。１５分間静置した後、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞及びＪＣ－１作業試薬の含有する微量遠心分離管を、４００ｘｇで５分間遠心分離する。次に、各群の微量遠心分離管中の上澄み液を除去し、１×分析緩衝液を添加してＮｅｕｒｏ２ａ細胞の沈殿物を新たに再溶解し、さらに４００ｘｇで５分間遠心分離し、２回繰り返す。各群の微量遠心分離管中の上澄み液を除去し、２体積％のウシ血清アルブミンを含有する１×ＤＰＢＳ溶液でＮｅｕｒｏ２ａ細胞の沈殿物を再懸濁させて、被験細胞液を得る。

フローサイトメトリー（Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；メーカー：Ｂｅｃｋｍａｎ；Ｃａｔａｌｏｇ Ｎｏ．６６０５１９）によって、各群の被験細胞液中の細胞ミトコンドリアの膜電位を測定して、ミトコンドリア活性分析を行う。フローサイトメトリーに設定された励起光の波長は４８８ｎｍで、散乱光の波長は５２７ｎｍ及び５９０ｎｍである。実験は３回繰り返し行われるため、各群の３回繰り返しの実験の結果を平均して平均値を得て、続いて図６に示すように、コントロール群の平均値を１００％の相対ＪＣ－１累積量として、実験群及び対照群の平均相対ＪＣ－１集積量を換算する。図６では、「＊＊」は、コントロール群に比べて、そのｐ値が０．０１より小さいことを表す。そして、蛍光顕微鏡（Ｂｅｃｋｍａｎ）で各群のＮｅｕｒｏ２ａ細胞のミトコンドリア発現を観察し、緑色蛍光は非活性化細胞ミトコンドリアを表し、赤色蛍光は活性化細胞ミトコンドリアを表す。

図６を参照されたい。コントロール群の相対ＪＣ－１累積量は１００％である。蛍光顕微鏡下では、コントロール群のＮｅｕｒｏ２ａ細胞内のミトコンドリアは、緑色蛍光を主とする赤緑色蛍光交錯を呈しており、これは、コントロール群のＮｅｕｒｏ２ａ細胞内のミトコンドリアが、部分的に活性化されているが、ほとんどが活性化されていない状態であることを表す。対照群の相対ＪＣ－１累積量は４２．９３％であり、蛍光顕微鏡下では、対照群のＮｅｕｒｏ２ａ細胞内のミトコンドリアは緑色蛍光を主として呈しており、これは、対照群のＮｅｕｒｏ２ａ細胞内のミトコンドリアのほとんどが活性化されていない状態であることを表す。実験群の相対ＪＣ－１累積量は１０８．８９％であり、蛍光顕微鏡下では、実験群のＮｅｕｒｏ２ａ細胞内のミトコンドリアは赤色蛍光を主として呈しており、これは、対照群のＮｅｕｒｏ２ａ細胞内のミトコンドリアのほとんどが活性化されている状態であることを表す。言い換えれば、対照群に比べて、実験群のＮｅｕｒｏ２ａ細胞のミトコンドリア活性が有意に向上する（約１．０９倍）。ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末は神経細胞のミトコンドリア活性を向上させて、神経細胞の活性を向上させるという効果を達成することができることが示されている。また、図６から分かるように、化学合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドは、神経細胞のミトコンドリア活性を活性化することができない。

これらに基づくと、検体がニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末を服用すると、神経細胞のミトコンドリア活性をより効果的に向上させて、神経細胞活性の向上及びアンチエイジングの効果を達成することができる。

例７ 細胞実験－抗老化関連遺伝子
ここで、検出された抗老化関連遺伝子は、抗老化遺伝子であり、ＣＣＴ５遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：２２９４８）、ＣＣＴ６Ａ遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：９０８）、ＣＣＴ７遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：１０５７４）、ＣＣＴ８遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：１０６９４）、ＰＡＲＰ２遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：１００３８）、Ｐａｒｋｉｎ遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：５０７１）、Ａｔｇ１遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：８４０８）、Ａｔｇ８遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：１１３４５）、ＦＯＸＯ遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：２３０８）、ＳＩＲＴ１遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：２３４１１）、ＮＡＤＳＹＮ遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：５５１９１）及びＭＲＰＳ５遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：６４９６９）を含む。

使用される培地は、１０体積％のウシ血清アルブミン（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ，ＦＢＳ；ブランド：Ｇｉｂｃｏ）及び１体積％のペニシリン－ストレプトマイシン（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ／ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ，ブランド：Ｇｉｂｃｏ）が添加されているＸ－ＶＩＶＯＴＭ １５無血清造血細胞培地（Ｘ－ＶＩＶＯＴＭ １５ Ｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｍｅｄｉｕｍ；メーカー：Ｌｏｎｚａ；品番：０４－４１８Ｑ）であり、以下、細胞培地という。

まず、１×１０^６個のヒト末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ、人体から分離する；ＡＴＣＣから購入、型番ＰＣＳ－２００－０１０^ＴＭ；以下、ＰＢＭＣ細胞という）を各ウェルに２ｍＬの細胞培地が含まれる６ウェル細胞培養プレートに入れ、３７℃で２４時間培養する。

ＰＢＭＣ細胞を実験群、対照群及びコントロール群に分ける。各群の細胞培地を除去し且つ各ウェルの２ｍＬ実験培地に交換し、続いて３７℃でそれぞれ２４時間連続培養する。実験群の実験培地は、０．２５体積％の例１で製造された酵母粉末の細胞培地である。対照群の実験培地は、０．２５体積％の化学合成ニコチンアミドモノヌクレオチド（メーカー：シグマアルドリッチ社）が添加されている細胞培地である。コントロール群の実験培地は単純な細胞培地である。

各群のＰＢＭＣ細胞を収集し、ＲＮＡ抽出試薬キット（Ｇｅｎｅａｉｄ社から購入、中国台湾、Ｌｏｔ Ｎｏ． ＦＣ２４０１５－Ｇ）で各群のＲＮＡを抽出する。次に、各群について、１０００ｎｇのＲＮＡをテンプレートとして取り、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標） ＩＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｅ社、米国、番号１８０８０－０５１）によって、ＲＮＡを対応するｃＤＮＡに逆転写する。さらに、ＡＢＩ ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓＴＭリアルタイムＰＣＲシステム（ＡＢＩ ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、米国））、ＫＡＰＡ ＳＹＢＲ ＦＡＳＴ（Ｓｉｇｍａ社から購入、米国、番号３８２２０００００００）及び表１のプライマー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１からＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）によって、各群のｃＤＮＡに対して定量的なリアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）を行い、ＰＢＭＣ細胞内の抗老化関連遺伝子の発現量を観察する。定量的なリアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応の機器設定条件は、９５℃で２０秒反応し、次に９５℃で３秒反応し、６０℃で３０秒反応し、且つ４０サイクル繰り返すことであり、そして、図７から図１０に示すように、２－ΔＣｔ方法を用いて遺伝子定量を行う。ｃＤＮＡによって定量的なリアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応を行うことで、遺伝子のｍＲＮＡ発現量を間接的に定量し、さらに遺伝子がコードするタンパク質の発現量を推定することができる。

特に説明すべきことは、図７から図１０における遺伝子発現は相対発現倍率で表され、ＥｘｃｅｌソフトウェアのＳＴＤＥＶ公式を用いて標準偏差を計算し、且つ各群間の統計学的有意差は、スチューデントｔ検定によって統計的に分析される点である。図７から図１０において、「＊」は、コントロール群に比べて、そのｐ値が０．０５より小さいことを表し、「＊＊」は、コントロール群に比べて、そのｐ値が０．０１より小さいことを表し、「＊＊＊」は、コントロール群に比べて、そのｐ値が０．００１より小さいことを表す。

表１において、Ｆは順方向プライマー（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）であり、Ｒは逆方向プライマー（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）である。

図７を参照されたい。コントロール群の各群のＰＡＲＰ２遺伝子の相対発現倍率を１．００とする（即ち、コントロール群の各群の遺伝子の発現量は１００％である）。コントロール群に比べて、実験群のＰＡＲＰ２遺伝子の相対発現倍率は０．４７であり、対照群のＰＡＲＰ２遺伝子の相対発現倍率は０．６７である。そして、対照群に比べて、実験群のＰＡＲＰ２遺伝子の発現量が有意に低下し、これは、天然に合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末が、化学合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドに比べて、ＰＡＲＰ２遺伝子の発現量をより効果的に抑えることができることを表す。言い換えれば、天然に合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末を検体が服用すると、ＰＡＲＰ２遺伝子の発現量を効果的に抑え、さらに細胞の若返り及びテロメラーゼ活性を促進し、抗老化機能を達成することができる。

図８を参照されたい。コントロール群の各群のＣＣＴ遺伝子の相対発現倍率を１．００とする（即ち、コントロール群の各群のＣＣＴ遺伝子の発現量は１００％である）。コントロール群に比べて、実験群のＣＣＴ５遺伝子の相対発現倍率は１．７７で、ＣＣＴ６Ａ遺伝子の相対発現倍率は１．６８で、ＣＣＴ７遺伝子の相対発現倍率は１．０７３６で（図８では１．０７と表記）及びＣＣＴ８遺伝子の相対発現倍率は１．８５である。対照群のＣＣＴ５遺伝子の相対発現倍率は１５５で、ＣＣＴ６Ａ遺伝子の相対発現倍率は１．６２で、ＣＣＴ７遺伝子の相対発現倍率は１．０６７２で（図８では１．０７と表記）及びＣＣＴ８遺伝子の相対発現倍率は１．７２である。このことから分かるように、実験群のＣＣＴ遺伝子の発現量が対照群のＣＣＴ遺伝子の発現量よりも顕著に高く、これは、天然に合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末が、化学合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドに比べて、ＣＣＴ遺伝子の発現をより効果的に向上させ、さらに成熟細胞を若い細胞に回復させ、アンチエイジング効果を達成することができることを表す。言い換えれば、検体が天然に合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末を服用すると、ＣＣＴ遺伝子の発現量を効果的に向上させ、さらに細胞の若返りを促進し、抗老化機能を達成することができる。

図９を参照されたい。コントロール群の各群の抗老化関連遺伝子（ここでは、Ｐａｒｋｉｎ遺伝子、Ａｔｇ１遺伝子、Ａｔｇ８遺伝子、ＦＯＸＯ遺伝子、ＳＩＲＴ１遺伝子を指す）の相対発現倍率を１．００とする（即ちコントロール群の各群の遺伝子の発現量は１００％である）。コントロール群に比べて、実験群のＰａｒｋｉｎ遺伝子の相対発現倍率は１．６８で、Ａｔｇ１遺伝子の相対発現倍率は１．２８で、Ａｔｇ８遺伝子の相対発現倍率は１．３３で、ＦＯＸＯ遺伝子の相対発現倍率は１．３１で、及びＳＩＲＴ１遺伝子の相対発現倍率は５．５２であるが、対照群のＰａｒｋｉｎ遺伝子の相対発現倍率は１．６１で、Ａｔｇ１遺伝子の相対発現倍率は１．２５で、Ａｔｇ８遺伝子の相対発現倍率は１．０２で、ＦＯＸＯ遺伝子の相対発現倍率は０．７９で、及びＳＩＲＴ１遺伝子の相対発現倍率は４．３０である。そして、対照群に比べて、実験群の抗老化関連遺伝子の発現量が有意に向上し、これは、天然に合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末が、化学合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドに比べて、Ｐａｒｋｉｎ遺伝子、Ａｔｇ１遺伝子、Ａｔｇ８遺伝子、ＦＯＸＯ遺伝子、ＳＩＲＴ１遺伝子の発現量をより効果的に促進することができることを表す。言い換えれば、検体が天然に合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末を服用すると、Ｐａｒｋｉｎ遺伝子、Ａｔｇ１遺伝子、Ａｔｇ８遺伝子、ＦＯＸＯ遺伝子及びＳＩＲＴ１遺伝子の発現量を効果的に向上させ、さらに細胞の若返りを促進し、抗老化機能を達成することができる。

図１０を参照されたい。コントロール群の各グループのＮＡＤＳＹＮ遺伝子及びＭＲＰＳ５遺伝子の相対発現倍率を１．００とする（即ちコントロール群の各グループのＮＡＤＳＹＮ遺伝子及びＭＲＰＳ５遺伝子の発現量は１００％である）。コントロール群に比べて、実験群のＮＡＤＳＹＮ遺伝子の相対発現倍率は７．３１で、及びＭＲＰＳ５遺伝子の相対発現倍率は１．１０であるが、対照群のＮＡＤＳＹＮ遺伝子の相対発現倍率は５．８４で、及びＭＲＰＳ５遺伝子の相対発現倍率は０．８０である。このことから分かるように、実験群のＮＡＤＳＹＮ遺伝子及びＭＲＰＳ５遺伝子の発現量が対照群のＮＡＤＳＹＮ遺伝子及びＭＲＰＳ５遺伝子の発現量よりも有意に高く、これは、天然に合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末が、化学合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドに比べて、ＮＡＤＳＹＮ遺伝子及びＭＲＰＳ５遺伝子の発現をより効果的に向上させ、さらに細胞の抗老化及び抗酸化の能力を向上させることができることを表す。言い換えれば、検体が天然に合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末を服用すると、ＮＡＤＳＹＮ遺伝子及びＭＲＰＳ５遺伝子の発現量を効果的に向上させ、さらに抗酸化及び抗老化の機能を達成し、細胞の若返りを促進することができる。

また、図９及び図１０をさらに参照されたい。対照群のＦＯＸＯ遺伝子及びＭＲＰＳ５遺伝子の発現量はいずれもコントロール群よりも低く、これは、化学合成されたニコチンアミドモノヌクレオチドがＦＯＸＯ遺伝子及びＭＲＰＳ５遺伝子の発現量を抑えることを表す。言い換えれば、ニコチンアミドモノヌクレオチドは全てで抗老化遺伝子の発現を促進できるわけではない。

例８ 人体試験
ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）に富む酵母粉末の人体への影響をさらに確認するために、１個あたりに例１で製造された酵母粉末を１００ｍｇ含有するカプセルを、８人の被験者に提供し、１人１日、１個のカプセルを服用し、８週間連続服用する。８人の被験者は５０歳～７５歳の健康な男性、女性である。

８人の被験者がそれぞれ、酵母粉末を含有するカプセルを服用する前（０週目とみなす）及び酵母粉末を含有するカプセルを服用した８週間後（８週目とみなす）に、被験者の血液採取と分析、肌質検出、脳年齢検出及び体感アンケートを行う。血液の検査項目は、血中の抗老化関連遺伝子の発現、血中の炎症指標（Ｃ－反応タンパク質（ＣＲＰ）含有量）、血中の低密度コレステロール含有量及び低密度コレステロール／高密度コレステロール比率を含む。肌質の検査項目は、肌シワ分析及び肌テクスチャ（粗さ）分析を含む。体感アンケートは、肌質、脱毛状況及び疲労感を含む。

特に説明すべきことは、０週目と８週目の測定結果間の統計学的有意差は、スチューデントｔ検定によって統計的に分析される点である。

例８－１． 人体試験－血液分析
８人の被験者に対して、酵母粉末を服用する前（即ち０週目）に及び酵母粉末を服用した後（即ち８週目）に、それぞれＥＤＴＡ抗凝固剤を含む紫色キャップ採血管によって、その静脈血をそれぞれ６ｍＬ採取し、血中の抗老化関連遺伝子発現分析、血中の炎症指標分析、血中の低密度コレステロール含有量及び低密度コレステロール／高密度コレステロール比率分析を行う。

例８－１－１． 血中の抗老化関連遺伝子発現分析
ここで検出された抗老化関連遺伝子は、ＳＩＲＴ１遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：２３４１１）及びＳＯＤ３遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：６６４９）である。

まず、採取された静脈血を回転速度３００ｘｇで１５分間遠心分離する。遠心分離された静脈血から２ｍＬのバッフィーコート（ｂｕｆｆｙ ｃｏａｔ）の白血球層を取り、白血球層を２ｍＬのリン酸緩衝液（１×ＰＢＳ；以下、１×ＰＢＳ緩衝液という）で４ｍＬに希釈し、次に、希釈後の白血球層を３ｍＬの細胞分離液（Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ 細胞分離液）が入った遠心分離管にゆっくりと添加する。添加中に、希釈後の白血球層と細胞分離液は混合されず、層別状態でなければならない。次に、層状の希釈後の白血球層及び細胞分離液を入れた遠心分離管を４００ｘｇで４０分間遠心分離し、遠心分離後に上澄み液を除去し、上記遠心分離後に遠心分離管内の中間層内の末梢血単核細胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ，ＰＢＭＣ；以下、ＰＢＭＣという）を２ｍＬから３ｍＬ取る。ＰＢＭＣを３倍体積の１×ＰＢＳ緩衝液で潤洗した後、前述した１×ＰＢＳ緩衝液と均一に混合してＰＢＭＣ混合液を形成する。次に、ＰＢＭＣ混合液を回転速度３００ｘｇで１０分間遠心分離してＰＢＭＣ上澄み液及びＰＢＭＣ沈殿物を形成し、ＰＢＭＣ沈殿物を６００μＬのＲＮＡ分解緩衝液で分解した後にＲＮＡを抽出する。次に、例７のステップのように、抽出されたＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した後、図１１に示すように、表２中の２グループのプライマー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）によって、ｃＤＮＡに対して定量的なリアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応をそれぞれ行い、０週目及び８週目の血中のＳＩＲＴ１遺伝子及びＳＯＤ３遺伝子の発現量を観察する。

表２において、Ｆは順方向プライマー（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）で、Ｒは逆方向プライマー（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）である。

特に説明すべきことは、図１１中の遺伝子発現は相対発現パーセンテージで表され、ＥｘｃｅｌソフトウェアのＳＴＤＥＶ公式を用いて標準偏差を計算し、且つ各群間の統計学的有意差は、スチューデントｔ検定によって統計的に分析される点である。図１１において、「＊」は、コントロール群に比べて、そのｐ値が０．０５より小さいことを表す。

図１１を参照されたい。０週目の８人の被験者のＳＩＲＴ１遺伝子及びＳＯＤ３遺伝子の相対遺伝子発現パーセンテージを１００％とすると、８週目のＳＩＲＴ１遺伝子の相対遺伝子発現パーセンテージは１６２．６％で、ＳＯＤ３遺伝子の相対遺伝子発現パーセンテージは２５９．０％である。このことから分かるように、被験者が１００ｍｇの酵母粉末を毎日服用し且つ８週間連続服用すると、被験者の血中のＳＩＲＴ１遺伝子及びＳＯＤ３遺伝子の発現量が向上し、これは、ＳＩＲＴ１遺伝子及びＳＯＤ３遺伝子がコードするタンパク質の発現量が向上することを表す。そして、ＳＩＲＴ１遺伝子及びＳＯＤ３遺伝子はＮＡＤ^＋の下流遺伝子として、ミトコンドリアの活性に関係し、血中のＳＩＲＴ１遺伝子及びＳＯＤ３遺伝子が上昇すると、血中のＮＡＤ^＋含有量が上昇するこが示されており、ミトコンドリアを活性化し、さらに抗老化機能を達成することができる。言い換えれば、酵母粉末を服用することで血中のＳＩＲＴ１遺伝子及びＳＯＤ３遺伝子の発現量が向上し、これは、酵母粉末がミトコンドリアを活性化し、抗老化の潜在力を持つことを表すことができる。

例８－１－２． 血中の炎症程度分析
本実験は、８人の被験者に対して、０週目及び８週目に採血し、例１で製造された酵母粉末を１００ｍｇ含有するカプセルを服用する前後の炎症程度の変化を検出する。Ｃ－反応タンパク質（ＣＲＰ，Ｃ－Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ）は、肝臓から生成される特殊なタンパク質であり、急性期且つ非特異的な反応タンパク質（ａｃｕｔｅ ｐｈａｓｅ ｒｅａｃｔａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）であり、急性炎症反応過程における組織破壊の指針である。酵素連結免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）を用いて測定し、得られた血中のＣ－反応タンパク質の含有量が高いほど、体内の抗炎症反応がより深刻であることを示し、本実施例では、被験者の血中のＣ－反応タンパク質の含有量は立人検査所（中国台湾）に委託して測定される。

Ｃ－反応タンパク質含有量は、ＥｘｃｅｌソフトウェアのＳＴＤＥＶ公式を用いて標準偏差を計算し、各群間の統計学的有意差は、スチューデントｔ検定によって統計的に分析され、そして、「＊」は、コントロール群に比べて、そのｐ値が０．０５より小さいことを表す。

図１２を参照されたい。０週目の８人の被験者の平均血中Ｃ－反応タンパク質（ＣＲＰ）含有量は０．０９１ｍｇ／ｄＬであり、８週目の平均血中Ｃ－反応タンパク質（ＣＲＰ）含有量は０．０７０ｍｇ／ｄＬであり、０．０２１ｍｇ／ｄＬ低下する（２３．１％低下）。つまり、酵母粉末を服用することで、血中のＣ－反応タンパク質（ＣＲＰ）含有量が低下し、これは、酵母粉末が抗炎症の潜在力を持つことを表すことができる。

これらに基づくと、検体が１００ｍｇの酵母粉末を毎日服用すると、炎症指標（Ｃ－反応タンパク質（ＣＲＰ）含有量）を有意に低下させ、さらに慢性で再発性の不快症状を軽減させることができる。

例８－１－２． 血中の血中脂質分析
低密度脂質コレステロールは内皮細胞を侵襲し、細胞を酸化させ、心血管疾患のリスクを高めることがあるため、一般に、低密度脂質コレステロールの含有量を低下させることが望ましい。逆に、高密度脂質コレステロールは心血管疾患の発生を抑えることができ、高密度脂質タンパク質粒子内のコレステロールは全て体の心血管系の健康を保護する因子と見なされるため、一般に、高密度脂質コレステロールの含有量を向上させることが望ましい。

血中脂質分析は、低密度コレステロール含有量及び低密度コレステロール／高密度コレステロール比率の検出を含み、立人検査所（中国台湾）に委託して測定される。

８人の被験者の０週目及び８週目に採取された血液に対して、図１３及び図１４に示すように、低密度コレステロール含有量及び低密度コレステロール／高密度コレステロール比率をそれぞれ検出する。そして、図１３における低密度コレステロール含有量及び図１４における低密度コレステロール／高密度コレステロール比率は、ＥｘｃｅｌソフトウェアのＳＴＤＥＶ公式を用いて標準偏差を計算し、各群間の統計学的有意差は、スチューデントｔ検定によって統計的に分析され、そして、「＊」は、コントロール群に比べて、そのｐ値が０．０５より小さいことを表す。

図１３を参照されたい。０週目の８人の被験者の平均血中低密度コレステロール含有量は１３１．３ｍｇ／ｄＬであるが、８週目の平均血中低密度コレステロール含有量は１１６．２ｍｇ／ｄＬである。このことから分かるように、被験者が８週服用した後、血中低密度コレステロール含有量は１５．１ｍｇ／ｄＬ低下し、これは、８週目の８人の被験者の平均血中低密度コレステロール含有量が０週目の８人の被験者の平均血中低密度コレステロール含有量に対して１１．５％低下することを表す。つまり、酵母粉末を服用することで、血中低密度コレステロール含有量が低下し、低密度脂質タンパク質の酸化作用による動脈硬化が予防され、これは、酵母粉末が血中脂質の調節及び心血管ヘルスケアの潜在力を持つことを表すことができる。

図１４を参照されたい。０週目の８人の被験者の平均血中低密度コレステロール／高密度コレステロール比率は２．２２であるが、８週目の平均血中低密度コレステロール／高密度コレステロール比率は１．８５であり、０．３７（１６．７％）低下する。低密度コレステロール／高密度コレステロール比率が高いほど、冠動脈硬化のリスクが高くなることを表すため、低密度コレステロール／高密度コレステロール比率の低下は、冠動脈硬化のリスクが低くなることを表す。つまり、酵母粉末を服用することで、血中の低密度コレステロール／高密度コレステロール比率が調節されて低下し、これは、酵母粉末が血中脂質調節、冠動脈硬化のリスク低下、心血管ヘルスケアの潜在力を持つことを表すことができる。

これらに基づくと、検体が１００ｍｇの酵母粉末を毎日服用すると、炎症指標（Ｃ－反応タンパク質（ＣＲＰ）含有量）を有意に低下させ、冠動脈硬化のリスクを低下させ、さらに心血管疾患に罹患するリスクを低下させ、及び心血管ヘルスケア機能を達成することができる。

例８－２． 人体試験－肌質分析
ここでは、ＶＩＳＩＡ高次デジタル肌質検出器（ＶＩＳＩＡ Ｃｏｍｐｌｅｘｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ （Ｃａｎｆｉｅｌｄ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ））によって肌の状態の分析を行う。肌シワについては、同じ被験者が酵母粉末を服用する前と酵母粉末を服用した後の顔の肌を高解像度のカメラレンズで撮影し、標準的な白色光を照射し、皮膚の影の変化を検出することにより、テクスチャの位置を検出し、皮膚の滑らかさ、肌テクスチャを表す値を得ることができる。肌テクスチャについては、同じ被験者が酵母粉末を服用する前と酵母粉末を服用した後の顔の肌を検出し、その原理は、可視光で高解像度の肌画像を撮影し、内蔵ソフトウェアによって皮膚の凹凸に基づいて粗さ分析を行うことである。測定値が高いほど、肌が荒れることを示す。

図１５を参照されたい。８人の被験者が酵母粉末を服用する前（０週目）に、ＶＩＳＩＡ高次デジタル肌質検出器により検出された平均肌シワパーセンテージを１００％とする。被験者は８週間連続服用した後、その平均肌シワパーセンテージが８９．７％まで低下した。言い換えれば、酵母粉末を服用する前（０週目）に比べて、１００ｍｇの酵母粉末の含有するカプセルを８週間連続服用した後、これらの被験者の肌シワパーセンテージを１０．３％低下させることができる。このことから分かるように、ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）に富む酵母粉末を長期にわたって服用すると、検体の肌シワを減少させ、被験者の肌の調子を改善することができ、即ち、酵母粉末は、小じわを平らにする効果を有する。

そして、被験者の１人は、酵母粉末を服用する前（０週目）に、ＶＩＳＩＡ高次デジタル肌質検出器により撮影されたシワＷＫ－０が、数が多くて密集していたが、酵母粉末を服用した前（８週目）に撮影されたシワＷＫ－８は、数が低下し且つ疎である。これに基づくと、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末を長期にわたって服用すると、検体の顔のシワ数を減らすことができる。

図１６を参照されたい。８人の被験者が酵母粉末を服用する前（０週目）にＶＩＳＩＡ高次デジタル肌質検出器により検出された平均肌テクスチャパーセンテージを１００％とする。被験者は８週間連続服用した後、その平均肌テクスチャパーセンテージが９２．０％まで低下した。言い換えれば、酵母粉末を服用する前（０週目）に比べて、１００ｍｇの酵母粉末の含有するカプセルを８週間連続服用した後、これらの被験者の肌テクスチャパーセンテージを８．０％低下させることができる。このことから分かるように、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末を長期にわたって服用すると、検体の肌テクスチャを減少させ、検体の肌荒れを低減し、被験者の肌の調子を改善する効果を達成することができ、即ち、酵母粉末は、肌をきめ細かくする効果を有する。

そして、被験者の１人は、酵母粉末を服用する前（０週目）に、ＶＩＳＩＡ高次デジタル肌質検出器により撮影された凹凸部位Ｔ－０が、数が多く密集していたが、酵母粉末を服用した後（８週目）に撮影された凹凸部位Ｔ－８は、数が低下し且つ疎である。これに基づくと、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末を長期にわたって服用すると、検体の顔の凹凸を減らし、さらに肌荒れを低減して検体の肌をきめ細かくすることができる。

例８－３． 人体試験－脳年齢分析
ここでは、酵母粉末を服用する前（０週目）及び酵母粉末を服用した後（８週目）に、「Ｔｅｓｔ Ｙｏｕｒ Ｂｒａｉｎ Ａｇｅ」ソフトウェアを用いて８人の被験者の脳年齢をテストする。具体的には、「Ｔｅｓｔ Ｙｏｕｒ Ｂｒａｉｎ Ａｇｅ」ソフトウェアは、被験者全体の正解率と回答速度に基づいて被験者の脳年齢を計算するものであり、テスト項目は、画面に表示される数字が消える前に、小さい順に画面に表示される数字をクリックすることを含む。

「Ｔｅｓｔ Ｙｏｕｒ Ｂｒａｉｎ Ａｇｅ」ソフトウェアサイト：ｈｔｔｐｓ：／／ａｐｐｓ．ａｐｐｌｅ．ｃｏｍ／ｔｗ／ａｐｐ／ｔｅｓｔ－ｙｏｕｒ－ｂｒａｉｎ－ａｇｅ／ｉｄ９６９４５５９９８。

図１７を参照されたい。８人の被験者は、酵母粉末を服用する前（０週目）の平均脳年齢が４２歳である。被験者は８週間連続服用した後、その平均脳年齢が３０歳まで低下した。言い換えれば、酵母粉末を服用する前（０週目）に比べて、１００ｍｇの酵母粉末の含有するカプセルを８週間連続服用した後、これらの被験者の平均脳年齢を１２歳低下させることができ、これは、被験者が酵母粉末を８週間連続服用した後、その精神的明晰さが向上し、回答速度も向上することを表す。

このことから分かるように、ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）に富む酵母粉末を長期にわたって服用すると、精神的明晰さを向上させて、検体の脳検出年齢を低下させ、さらにアンチエイジング効果を達成することができ、即ち酵母粉末は、精神的明晰さ向上及びアンチエイジングの効果を有する。

例８－４． 人体試験－体感アンケート
ここでは、被験者は０週目及び８週目に、身体状態総合評価を含む体感アンケートをそれぞれ回答した。被験者は、表３に示すように、体調（例えば、全体的な肌の調子の悪さ、脱毛状況、薄毛状況、体の疲労感等）に対して深刻度の評価を行う。

表３において、「なし」は１点を表し、「軽微」は２点を表し、「明らか」は３点を表し、「深刻」は４点を表し、「非常に深刻」は５点を表す。各点数を合計して各テスト項目の深刻度を統計する。

図１８を参照されたい。８人の被験者が酵母粉末を服用する前（０週目）の「全体的な肌調子の悪さ」の平均深刻度を１００％とする。８週間連続服用した後（即ち８週目）に、その「全体的な肌調子の悪さ」の平均深刻度が８３．３％まで低下した。言い換えれば、服用前（０週目）に比べて、酵母粉末の含有するカプセルを８週間連続服用した後、８人の被験者の「全体的な肌調子の悪さ」に対する感覚を１６．７％低下させることができ、これは、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉が検体の肌の調子を改善できることを表す。

８人の被験者が酵母粉末を服用する前（０週目）の「脱毛状況」の平均深刻度を１００％とする。８週間連続服用した後（即ち８週目）に、その「脱毛状況」の平均深刻度が７５．０％まで低下した。言い換えれば、服用前（０週目）に比べて、酵母粉末の含有するカプセルを８週間連続服用した後、８人の被験者の「抜け毛」感を２５．０％低下させることができ、これは、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末が検体の脱毛を低減できることを表す。

８人の被験者が酵母粉末を服用する前（０週目）の「薄毛状況」の平均深刻度を１００％とする。８週間連続服用した後（即ち８週目）に、その「薄毛状況」の平均深刻度が７３．３％まで低下する。言い換えれば、服用前（０週目）に比べて、酵母粉末を含有するカプセルを８週間連続服用した後、８人の被験者の「薄毛」感を２６．７％低下させることができ、これは、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末が、検体の薄毛を軽減し、検体の毛髪密度を向上させることができることを表す。

８人の被験者が酵母粉末を服用する前（０週目）の「体の疲労感」の平均深刻度を１００％とする。８週間連続服用した後（即ち８週目）に、その「体の疲労感」の平均深刻度が５０．０％まで低下した。言い換えれば、服用前（０週目）に比べて、酵母粉末の含有するカプセルを８週間連続服用した後、８人の被験者の「体の疲労感」に対する感覚を５０．０％低下させることができ、これは、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末が、検体の体の疲労感を低減し、検体の精神をよくして、検体をより活力的にすることができることを表す。

これらのことから分かるように、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末を長期にわたって使用すると、検体の全体的な肌の調子、脱毛状況及び疲労感を改善することができる。

例９． ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末中のペプチドの配列決定分析
例１で製造されたニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末を適切に希釈した後、遠心分離（１３０００ｒｐｍ、２ｍｉｎ）によって２００μｌの上澄み液を吸引し、Ｃ１８－ＺｉｐＴｉｐ（Ｍｉｌｌｐｏｒｅ）で脱塩濃縮し、サンプルを再溶解した後、体積の１／２を取り、以下の条件でＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行う。ＭＳ／ＭＳスペクトルは、Ｍａｓｃｏｔ分析プログラムを用いてリポジトリ検索分析を行い、分析結果を得て、さらに前述した酵母粉末に含まれるペプチドのタンパク質配列及びアイデンティティ同定情報を得る。

反応条件は以下のとおりである。

質量分析計：ＬＴＱ ＸＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）

ＬＣ システム：Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ

緩衝溶液Ａ：ｄｄＨ２Ｏ／０．１％ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ

緩衝溶液Ｂ：１００％ＡＣＮ／０．１％ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ

分析カラム：Ｃ１８ ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｌｕｍｎ

勾配：０．００分にＢは５％で、１０．０２分にＢは５％で、１０．０５分にＢは５％で、４５．００分にＢは４０％で、５０．００分にＢは８５％で、６０．００分にＢは８５％で、６３．００分にＢは５％で、７５．０２分にＢは５％で、７５．０５分にＢは５％で、９０．００分にＢは５％である。

分析結果：前述したニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末に含まれるペプチドのタンパク質アイデンティティ同定情報はＱ_１０生合成タンパク質であり、分析したペプチドのタンパク質配列は、ＭＶＡＫＡＨＳＫＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２７）である。このことから分かるように、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末にはＱ_１０生合成タンパク質のペプチド断片が含まれる。

以上より、本発明のいずれか１つの実施形態のニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末の製造方法によれば、少なくとも５０００ｐｐｍのニコチンアミドモノヌクレオチドを含有する酵母粉末を製造することができ、従来のニコチンアミドモノヌクレオチドは化学合成しか得られず、そしてプロセスにおいて有害な副生成物が生成されるという問題が解決されるとともに、従来のニコチンアミドモノヌクレオチドが食用できず、外用しかできないという技術的ボトルネックも解決される。いずれか１つの実施形態の製造方法に使用される発酵培地の組成成分はニコチンアミド、トリプトファン及びニコチン酸を含む。そして、いずれか１つの実施形態の製造方法に使用される発酵培地の組成成分は、ナス属植物抽出物、アロニア属植物抽出物、バショウ属植物抽出物のいずれか１つ又は複数の抽出物をさらに含む。いずれか１つの実施形態の製造方法で製造された酵母粉末は、肌の調子の改善、ヘアケア、抗炎症、心血管ヘルスケア、抗酸化、抗老化及び／又は身体疲労度の改善用の組成物を製造するために用いることができる。言い換えれば、前述した組成物は、細胞酸化ストレスに抵抗し、細胞のミトコンドリア活性を向上させ、抗老化関連遺伝子を調整制御し（即ち、ＰＡＲＰ２遺伝子を抑え、ＣＣＴ遺伝子、Ｐａｒｋｉｎ遺伝子、Ａｔｇ１遺伝子、Ａｔｇ８遺伝子、ＦＯＸＯ遺伝子、ＳＩＲＴ１遺伝子、ＮＡＤＳＹＮ遺伝子、ＭＲＰＳ５遺伝子及びＳＯＤ３遺伝子を向上させる）、肌シワ及び肌テクスチャを減らし、脳を若くして（脳年齢を低下させる）、脱毛状況を軽減し、薄毛状況を低減し、体の疲労感を低減する機能のうちの１つ又は複数を有する。そして、いずれか１つの実施例の酵母粉末はＱ_１０生合成タンパク質をさらに含む。

本発明の技術内容は既に好ましい実施例により以上のように開示されているが、本発明を限定するためのものではなく、当業者であれば、本発明の精神を逸脱することなく行ったわずかな変更と修飾は、全て本発明の範疇内に含まれるものとするため、本発明の保護範囲は後に添付される特許出願の範囲によって規定されているものを基準とする。

当然ながら、本発明は他の多種の実施形態を有してもよく、本発明の主旨及びその本質から逸脱することなく、当業者であれば、本発明に従って種々の対応する変更及び変形を行うことができ、これらの対応する変更及び変形は、全て本発明の特許出願の範囲の保護範囲に属するものとする。

生体材料寄託

財団法人食品工業発展研究所（中国台湾）；２０１９年１０月２４日；寄託番号：ＢＣＲＣ ９２０１１８。

ドイツ微生物保存センター（ドイツ）；２０２０年３月２７日；寄託番号：ＤＳＭ３３４８０。

本発明は、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末、その製造方法及び用途を開示する。前記製造方法は、第１培地、第２培地及び第３培地を調製するステップと、酵母菌を第１培地に播種して発酵させ、第１発酵液を得るステップと、第１発酵液を第２培地に播種して発酵させ、第２発酵液を得るステップと、第２発酵液を第３培地に播種して発酵させ、第３発酵液を得るステップと、第３発酵液を遠心分離して発酵物を得て、且つ発酵物を乾燥させた後に酵母粉末を得るステップと、を含む。第１培地、第２培地及び第３培地の組成成分はニコチンアミド、トリプトファン及びニコチン酸を含む。酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチドの含有量は少なくとも５０００ｐｐｍより大きい。

Claims (18)

1. 第１培地、第２培地及び第３培地を調製するステップであって、該第１培地、該第２培地及び該第３培地の組成成分がニコチンアミド、トリプトファン及びニコチン酸を含むステップと、
   酵母菌を前記第１培地に播種して発酵させ、第１発酵液を得るステップと、
   前記第１発酵液を前記第２培地に播種して発酵させ、第２発酵液を得るステップと、
   前記第２発酵液を前記第３培地に播種して発酵させ、第３発酵液を得るステップと、
   前記第３発酵液を遠心分離して発酵物を得て、該発酵物を乾燥させた後に酵母粉末を得るステップであって、該酵母粉末に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチドの含有量が少なくとも５０００ｐｐｍより大きいステップと、を含むことを特徴とする、ニコチンアミドモノヌクレオチドに富む酵母粉末の製造方法。
2. 前記酵母菌は５体積％の播種量で前記第１培地に播種され、前記第１発酵液は６体積％の播種量で前記第２培地に播種され、前記第２発酵液は１０体積％の播種量で前記第３培地に播種されることを特徴とする、請求項１に記載の製造方法。
3. 前記ニコチンアミドの濃度は０．０１重量％～０．３重量％で、前記トリプトファンの濃度は０．１重量％～０．５重量％で、前記ニコチン酸の濃度は０．００１重量％～０．０６重量％であることを特徴とする、請求項１に記載の製造方法。
4. 前記第１培地、前記第２培地及び前記第３培地の体積比は３：５０：５００であることを特徴とする、請求項１に記載の製造方法。
5. 前記酵母粉末はＱ_１０生合成タンパク質をさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の製造方法。
6. 前記第１培地、前記第２培地及び前記第３培地の組成成分は、ナス属植物抽出物、アロニア属植物抽出物、バショウ属植物抽出物のいずれか１つ又は複数の抽出物をさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の製造方法。
7. 請求項１の製造方法で得られ、且つ含まれるニコチンアミドモノヌクレオチドの含有量が少なくとも５０００ｐｐｍであることを特徴とする、酵母粉末。
8. Ｑ１０生合成タンパク質をさらに含むことを特徴とする、請求項７に記載の酵母粉末。
9. 肌の調子の改善、ヘアケア、抗炎症、心血管ヘルスケア、抗酸化、抗老化及び／又は身体疲労度の改善用の組成物を製造するための、酵母粉末の用途であって、
   該酵母粉末が請求項１の製造方法で得られ、含まれるニコチンアミドモノヌクレオチドの含有量が少なくとも５０００ｐｐｍであることを特徴とする、用途。
10. 前記酵母粉末はＱ１０生合成タンパク質をさらに含むことを特徴とする、請求項９に記載の用途。
11. 前記肌の調子の改善は、肌の引き締めを高めること、シワを減らすこと、肌荒れを低減すること、又はそれらの組合せであることを特徴とする、請求項９に記載の用途。
12. 前記ヘアケアは、脱毛を低減すること、又は薄毛の程度を低下させることであることを特徴とする、請求項９に記載の用途。
13. 前記酵母粉末は血中脂質を調節するためのものであることを特徴とする、請求項９に記載の用途。
14. 前記酵母粉末は検体のＣ－反応タンパク質の発現量を低下させるためのものであることを特徴とする、請求項１３に記載の用途。
15. 前記酵母粉末は、抗老化関連遺伝子の発現量を調節し、ミトコンドリアを活性化し又は脳年齢を低下させることによって抗老化を達成することを特徴とする、請求項９に記載の用途。
16. 前記抗老化関連遺伝子は、ＣＣＴ遺伝子、ＰＡＲＰ２遺伝子、Ｐａｒｋｉｎ遺伝子、Ａｔｇ遺伝子、ＦＯＸＯ遺伝子、ＳＩＲＴ１遺伝子、ＮＡＤＳＹＮ遺伝子、ＭＲＰＳ５遺伝子、ＳＯＤ３遺伝子又はそれらの組合せを含むことを特徴とする、請求項１５に記載の用途。
17. 前記酵母粉末は、活性酸素物質による傷害を低減することによって抗酸化機能を達成することを特徴とする、請求項９に記載の用途。
18. 前記酵母粉末の１日用量は１００ｍｇであることを特徴とする、請求項９に記載の用途。