TWI589296B - 預防糖尿性白內障之桑黃液態培養菌絲體及其應用 - Google Patents

Description

預防糖尿性白內障之桑黃液態培養菌絲 體及其應用

本發明是有關於一種桑黃液態培養菌絲體之用途及基於此用途的組合物，特別是一種桑黃液態培養菌絲體應用於預防糖尿性白內障之用途，以及預防糖尿性白內障的組合物。

全世界罹患糖尿病的人口有不斷增加的趨勢，根據國際糖尿病聯盟2013年底公佈最新數據，全球罹患糖尿病的人數已高達3.82億人，且台灣糖尿病人數僅次中國及印度為全球第三大國，糖尿病更高居國人十大死因第五位。另外，糖尿病與癌症、腦、心臟血管疾病、腎臟疾病及高血壓等慢性疾病的發生有非常密切的關係。因此，糖尿病及其相關併發症之防治顯然是我國亟需重視的公共衛生議題之一。

部分糖尿病的併發症或許可藉由藥物的治療而延緩發生，但因糖尿病而併發的白內障甚至是失明，卻是最 常見且最難預防的併發症，失明不僅造成個人生活極度不便，也增加國家醫療保健支出與造成國家社會福利沉重的負擔。糖尿病患得到白內障的機率比非患者高出2到4倍，比起一般老年性白內障，糖尿病患者之白內障惡化速度更快且更嚴重。因此，糖尿病所造成的白內障不容小覷，如何及早預防及延緩糖尿性白內障之發生相形重要。

臨床上，治療糖尿性白內障包括控制血糖、血壓及血脂並進行眼科處置，但這些處置有其限制，例如侵入式的治療或藥物治療所產生的副作用，尤其多數患者合併糖尿病腎病變，因此應盡量降低藥物對患者腎功能的影響。為了病患福祉，藉由補充營養素或天然素材的營養保健成分來預防或延緩糖尿病性眼部病變成為首要考量。因此，研究開發有關預防或延緩糖尿病性白內障之天然素材為當務之急。

本發明之一態樣是在提供一種桑黃(Inonotus linteus)液態培養菌絲體之用途，其係用於製備預防糖尿性白內障之藥物。桑黃液態培養菌絲體係由下述步驟所製得：提供一基質，基質係由0.5~5%重量比之葡萄糖、0.1~1%重量比之酵母萃出物以及99.4~94%重量比之水所組成。接著進行液態培養步驟，係於基質中接種桑黃菌株，並於一液態培養溫度下培養一液態培養時間，以獲得一液態培養物質，其中所述桑黃菌株之寄存編號為BCRC 930181。最後進行分離步驟，係將液態培養物質分離為固體部分和液體部 分，其中固體部份包含桑黃液態培養菌絲體。

依據前述之桑黃液態培養菌絲體之用途，其中液態培養溫度可為25℃。

依據前述之桑黃液態培養菌絲體之用途，其中液態培養時間可為7天。

依據前述之桑黃液態培養菌絲體之用途，其中預防糖尿性白內障之藥物可為調節血糖代謝之藥物。

依據前述之桑黃液態培養菌絲體之用途，其中調節血糖代謝之藥物可為降低高血糖值之藥物。

依據前述之桑黃液態培養菌絲體之用途，其中延緩糖尿病腎病變之藥物可為降低糖化終產物濃度之藥物。

依據前述之桑黃液態培養菌絲體之用途，其中延緩糖尿病腎病變之藥物可為降低醛醣還原酶活性之藥物。

本發明之另一態樣是在提供一種預防糖尿性白內障之組合物，組合物包含一有效劑量之桑黃液態培養菌絲體。

依據前述之預防糖尿性白內障之組合物，其中桑黃液態培養菌絲體的有效劑量為200mg/kg BW至1000mg/kg BW。

依據前述之預防糖尿性白內障之組合物，其係呈一選自以下群組之形式：醫藥組合物、飼料組合物、飲料組合物、營養補充組合物、食用組合物以及保健食用組合物。

藉此，本發明之桑黃液態培養菌絲體藉由降低高血糖值調節血糖代謝，並可降低糖化終產物的濃度和降低 醛醣還原酶活性，達到預防糖尿性白內障之功效，故本發明之桑黃液態培養菌絲體可用於製備預防糖尿性白內障之藥物。而包含有效劑量的桑黃液態培養菌絲體之組合物可作為預防糖尿性白內障之醫藥組合物、飼料組合物、飲料組合物、營養補充組合物、食用組合物以及保健食用組合物上，具有運用於生醫保健市場之潛能。

上述發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。

100‧‧‧桑黃液態培養菌絲體之製備方法

110、120、130‧‧‧步驟

為讓本發明之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：第1圖繪示本發明之桑黃液態培養菌絲體之製備步驟流程圖；第2圖為試驗12週後試驗大鼠的水晶體照片圖；第3圖為桑黃液態培養菌絲體對糖尿病大鼠水晶體糖化終產物影響之量化圖；第4圖為桑黃液態培養菌絲體對糖尿病大鼠水晶體醛醣還原酶活性影響之量化圖；第5圖為桑黃液態培養菌絲體對糖尿病大鼠水晶體麩胱甘肽濃度影響之量化圖。

本說明書揭露內容提出桑黃液態培養菌絲體的新穎用途，以糖尿病大鼠體內試驗評估桑黃液態培養菌絲體預防糖尿性白內障的功效，並進一步驗證桑黃液態培養菌絲體的預防糖尿性白內障的功效，係為藉由降低高血糖值以調節血糖代謝，並降低糖尿病大鼠的糖化終產物濃度和醛醣還原酶活性以改善糖尿性白內障。本說明書揭露內容提出的桑黃液態培養菌絲體為潛在的預防糖尿性白內障物質，可用以製備預防糖尿性白內障的藥物。

本說明書中所述之「桑黃(Inonotus linteus)」，是一種寄生於桑樹的多年生蕈類，為中國古代使用的中草藥之一，早在李時珍之本草綱目裡即有記載，性寒，味微苦，能利五臟，宣腸氣，排毒氣，壓丹石，人熱發，止血等功效。

茲以下列具體試驗例進一步示範說明本發明，用以有利於本發明所屬技術領域通常知識者，可在不需過度解讀的情形下完整利用並實踐本發明，而不應將這些試驗例視為對本發明範圍的限制，但用於說明如何實施本發明的材料及方法。

<試驗例> 一、製備桑黃液態培養菌絲體

請參照第1圖，其係桑黃液態培養菌絲體之製備步驟流程圖。第1圖中，桑黃液態培養菌絲體之製備方法100包含步驟110、步驟120和步驟130。

步驟110是提供一基質，基質係由0.5~5%重量比之葡萄糖、0.1~1%重量比之酵母萃出物以及99.4~94%重量比之水所組成。較佳地，基質係由2%重量比之葡萄糖、0.5%重量比之酵母萃出物以及97.5%重量比之水所組成。以提供碳源、氮源及水份讓後續桑黃菌株能進行液態培養。

步驟120是進行一液態培養步驟，係於基質中加入桑黃菌株進行一液態培養步驟，以獲得液態培養物質，其中液態培養步驟係於25℃培養7天。更進一步的說，在進行培養步驟前，先將桑黃進行平板繼代培養和液態種菌培養。平板繼代培養係使用GMA平板培養基(葡萄糖2%，麥芽抽出物0.5%，瓊脂2%)，於25℃培養7天可以長滿菌絲，使用GMA平板培養基時，菌絲生長較快，而使用PDA平板培養基(馬鈴薯抽出物20%，葡萄糖2%，瓊脂2%)、GYA平板培養基(葡萄糖2%，酵母萃出物0.5%，瓊脂2%)或GSPA平板培養基(葡萄糖2%，大豆蛋白腖0.5%，瓊脂2%)時，菌絲生長較慢。在液態種菌培養上，使用500mL血清瓶進行磁石攪拌培養，內裝200mL GSP培養基(葡萄糖2%，大豆蛋白腖0.5%)，接種8塊0.5cm x 0.5cm之菌絲塊，於25℃培養7天，使用GSP液體培養基可以獲得菌絲型態為細絲狀之種菌，較有利於接種與後續之培養。使用PDB液體培養基(馬鈴薯抽出物20%，葡萄糖2%)、GM液體培養基(葡萄糖2%，麥芽抽出物0.5%)、GY液體培養基(葡萄糖2%，酵母萃出物0.5%)，菌絲型態為菌球狀，較不利於 接種與後續之培養。然後進行液態培養步驟，將液態種菌以10%接種量接種於基質中，液態培養溫度為25℃，培養7天後即可獲得液態培養物質，使用GY液體培養基可以獲得較大量的菌絲體，使用PDB、GM、GSP液體培養基，菌絲體產量較少。因此，在培養過程之不同階段使用不同之培養基，以有利於桑黃菌絲體之培養。所使用之菌株為桑黃Inonotus linteus PLEN為佳，其寄存編號為BCRC 930181。

步驟130是進行一分離步驟，係將液態培養物質分離為固體部分和液體部分，其中固體部分包含桑黃液態培養菌絲體。在液態培養步驟完成後，因液態培養物質中已充滿桑黃菌絲體，因此將液態培養物質中的液體部分和固體部分分離後，即可於固體部分中獲得桑黃菌絲體，而分離方式可為過濾方式、離心方式或上述方式之組合。分離後的桑黃液態培養菌絲體再經過冷凍乾燥和磨粉，即可得桑黃菌絲體乾燥粉末。

二、桑黃液態培養菌絲體對糖尿病大鼠血糖代謝之影響 1.動物實驗模式

本試驗選用60隻四週齡之Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠(購買於樂斯科生物科技股份有限公司)，體重為80-100克，飼養於溫度21±2℃、濕度55-60%、明暗週期為12小時(8：00-20：00)的動物房內，給予一般粒狀飼料採自由攝食使其適應新環境。當大鼠飼養達體重200克時，將其禁食9小時後進行糖尿病誘發。當中隨機挑選10隻 大鼠以腹腔注射0.9%生理食鹽水作為健康對照組(Normal control group,NC)，其餘50隻以腹腔注射Streptozotocin(50mg STZ/kg BW)誘發糖尿病，並於誘發後一週，禁食6小時後，以尾巴採血的方式收集血液樣本測血糖，若血糖值≧200mg/dL，則視為糖尿病誘發成功鼠。將糖尿病誘發成功鼠平均分為四組：糖尿病對照組(Diabetic control group,DC)、桑黃液態培養菌絲體高劑量組(High-dose diabetic group,HD)、桑黃液態培養菌絲體中劑量組(Middle-dose diabetic group,MD)和桑黃液態培養菌絲體低劑量組(Low-dose diabetic group,LD)，加上健康對照組，試驗大鼠共分為五組。

接著進行桑黃液態培養菌絲體介入。桑黃液態培養菌絲體粉末依不同劑量將桑黃菌絲體乾燥粉末溶於去離子水中，再以管灌方式給予，其中桑黃液態培養菌絲體高劑量組之劑量為1000mg/kg BW，桑黃液態培養菌絲體中劑量組之劑量為500mg/kg BW，以及桑黃液態培養菌絲體低劑量組之劑量為200mg/kg BW，而健康對照組和糖尿病對照組則管餵去離子水。

試驗介入為期12週，試驗開始後每天記錄大鼠體重、攝食量和飲水量，每周更換兩次新鮮飲水並記錄飲水量，並在第0週和第12週時，以剪尾採血方式採集血液樣品，血液樣品靜置兩小時後，以離心力3000xg離心15分鐘，取上清液(25μL)來測定大鼠禁食血糖值(禁食時間為6小時)。老鼠於第12週進行犧牲，採集水晶體分析糖尿病性 白內障相關生化值與抗氧化酵素濃度。

2.糖尿病大鼠之禁食血糖值

本試驗使用葡萄糖乳酸分析儀(YSI 2300,YSI,USA)測定血糖，大鼠禁食6小時後，以尾巴採血的方式採集適當之血液量，於離心管內靜置2小時後，以離心力3000xg離心15分鐘，取上清液(25μL)來測量血清葡萄糖濃度(血糖值)，單位以mg/dL表示。

請參照下表一，為桑黃液態培養菌絲體對STZ誘發之糖尿病大鼠禁食血糖值之影響。其中NC為健康對照組、DC為糖尿病對照組、LD為桑黃液態培養菌絲體低劑量組、MD為桑黃液態培養菌絲體中劑量組以及HD為桑黃液態培養菌絲體高劑量組。數據結果以mean±SD值表示，每組之大鼠個數為9。其中上標之a至c表示標示不同字母的組別之間存在統計上之顯著差異(p<0.05)。

結果顯示，在給予桑黃液態培養菌絲體介入前，健康對照組的平均禁食血糖在正常範圍內，而其他各組的平均禁食血糖皆高於200mg/dL，且顯著性的高於健康 對照組(p<0.05)，顯示誘發糖尿病成功。給予桑黃液態培養菌絲體介入12週後，桑黃液態培養菌絲體高劑量組之平均禁食血糖值顯著的較糖尿病對照組低(p<0.05)。桑黃液態培養菌絲體低劑量組、桑黃液態培養菌絲體中劑量組與糖尿病對照組相比，雖無顯著的差異，但有下降的趨勢。因此得知，桑黃液態培養菌絲體具有降低糖尿病大鼠血糖的功效，特別是高劑量的桑黃液態培養菌絲體具有顯著降低糖尿病大鼠血糖的功效。

三、桑黃液態培養菌絲體對糖尿病大鼠白內障之影響

於前述試驗結果，已知給予糖尿病大鼠桑黃液態培養菌絲體後確實降低糖尿病大鼠的血糖值，本試驗例進一步探討給予桑黃液態培養菌絲體對糖尿性白內障的影響。

1.糖尿病大鼠水晶體之混濁度

水晶體之採集，係將試驗12週後的大鼠眼球根部先以彎頭鑷固定住，接著利用手術刀片在眼球表面割開一個長約5mm切口，隨即將整個水晶體取下，取下後的水晶體拍照觀察。拍照後將水晶體浸入液態氮急速冷凍30秒後，再移放置-80℃保存。

請參照第2圖，為試驗12週後試驗大鼠的水晶體照片圖。其中NC為健康對照組、DC為糖尿病對照組、LD為桑黃液態培養菌絲體低劑量組、MD為桑黃液態培養菌絲體中劑量組以及HD為桑黃液態培養菌絲體高劑量組。

由第2圖各組水晶體之照片可以看到，糖尿病對 照組明顯比健康對照組混濁不透光，而給予桑黃液態培養菌絲體介入後，桑黃液態培養菌絲體低劑量組到桑黃液態培養菌絲體高劑量組水晶體之混濁度有逐漸清澈的趨勢，尤其是桑黃液態培養菌絲體高劑量組的水晶體清澈度近似健康對照組。由上述數據可知，糖尿病大鼠會使水晶體形成白濁之圓體，而給予桑黃液態培養菌絲體，可以改善糖尿病大鼠水晶體之混濁程度而變為透亮。

2.糖尿病大鼠水晶體之糖化終產物濃度測定

糖化終產物(Advanced Glycation End Products,AGEs)是糖類與蛋白質經由梅納反應(Maillard reaction)所形成的最終產物。糖尿病患者，當血液在高濃度葡萄糖狀況下，血液中葡萄糖(Glucose)的羰基會與蛋白質、核酸或脂肪上的精氨酸(Arginine)或賴氨酸(Lysine)之氨基結合，直接進行糖化反應，產生糖化終產物。而糖化終產物會引發體內細胞產生有害的自由基及釋放誘發過敏反應的物質，導致發炎進而引起組織或器官的病變，目前認為是糖尿病併發症產生的主要因素。於前述試驗結果，已知給予糖尿病大鼠桑黃液態培養菌絲體後確實降低糖尿病大鼠的血糖值和改善糖尿病大鼠水晶體之混濁程度，本試驗例進一步探討給予桑黃液態培養菌絲體後，對糖尿病大鼠水晶體內糖化終產物濃度的影響。

本試驗及下述試驗，係先製備水晶體均質液後，再進行水晶體生化分析。水晶體均質液之製備為先將冷凍之水晶體至於冰上解凍，然後將同組每2隻老鼠的水晶體 匯集一起，加入十倍體積約1250μL之100mM磷酸鹽緩衝溶液(pH 7.4)均質，再以離心力15,000xg於4℃下離心30分鐘後，取上清液並儲放於-80℃冷凍直到分析。

水晶體總蛋白濃度係利用商業檢測分析套組(Bio-Rad protein assay,Bio-Rad,USA)。先利用BSA(bovine serum albumin)配置不同濃度作為標準曲線，Coomassie® Brilliant Blue G-250染劑先以1：4的比例稀釋，取10μL樣品和標準溶液加入96孔盤，再加入200μL稀釋染劑作用10分鐘後，於波長595nm測定吸光值，最後再比照標準曲線算出待測樣品中總蛋白濃度。單位以mg/mL表示。

水晶體糖化終產物濃度使用商業檢驗分析套組(OxiSelectTM Advanced Glycation End Product ELISA kit,Cell Biolabs Inc.,USA)測定，其係利用ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)原理，先將大鼠糖化終產物之特異性抗體固定於96孔盤上，待測樣品中的糖化終產物抗原會與盤中抗體結合，再加入二次抗體(Secondary Anti-body-HRP Conjugate)，之後加入受質溶液與HRP溶液反應呈色後，於波長450nm測吸光值，對照標準曲線後算出水晶體糖化終產物濃度。

請參照第3圖，為桑黃液態培養菌絲體對糖尿病大鼠水晶體糖化終產物影響之量化圖。其中NC為健康對照組、DC為糖尿病對照組、LD為桑黃液態培養菌絲體低劑量組、MD為桑黃液態培養菌絲體中劑量組以及HD為桑黃液 態培養菌絲體高劑量組。數據結果以mean±SD值表示，每組之大鼠個數為9。其中上標之a至c表示標示不同字母的組別之間存在統計上之顯著差異(p<0.05)。

結果顯示，與健康對照組相比，糖尿病對照組的水晶體糖化終產物有顯著的較健康對照組高(p<0.05)。而桑黃液態培養菌絲體低劑量組、桑黃液態培養菌絲體高劑量組的水晶體糖化終產物濃度，皆顯著的低於糖尿病對照組(p<0.05)，桑黃液態培養菌絲體中劑量組則有降低的趨勢。由上述數據可知，糖尿病大鼠會增加水晶體糖化終產物濃度，而給予桑黃液態培養菌絲體可以抑制糖尿病大鼠水晶體之糖化現象。

3.糖尿病大鼠水晶體之醛醣還原酶活性測定

糖尿性白內障發生機制尚無最後定論，但實驗性糖尿病性白內障動物模型進行深入研究發現，晶狀體內存在糖代謝紊亂，是白內障形成的重要生化和病理基礎。糖尿病患者由於血糖增加，晶狀體的葡萄糖含量增加，致其醛醣還原酶(aldose reductase,AR)活性增加，葡萄糖被轉化為山梨醇，山梨醇在晶狀體內堆積，使滲透壓增加，晶狀體吸收水分，形成纖維腫脹和變性最后產生混濁。於前述試驗結果，已知給予糖尿病大鼠桑黃液態培養菌絲體後可以改善糖尿病大鼠水晶體之混濁程度，本試驗例進一步探討給予桑黃液態培養菌絲體後，對糖尿病大鼠醛醣還原酶活性的影響。

於本試驗中水晶體醛醣還原酶活性測定，係利用醛醣還原酶將還原態的烟鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (NADPH)氧化成烟鹼胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP⁺)的特性，以DL-甘油醛(DL-glyceraldehyde)當受質，加入濃度0.1mM的NADPH與樣品中的醛醣還原酶作用，觀察NADPH濃度的減少來計算出水晶體醛醣還原酶活性，單位以IU/mg protein表示。

試驗步驟如下：先配製含有50mM磷酸鉀緩衝溶液、0.4M硫酸鋰、10mM DL-甘油醛、0.1mM NAPDH的反應溶液，將配製好的反應溶液加入石英管內，再加入待測樣品，反應溶液和待測樣品的總體積為1mL。加入待測樣品後使用雙光源分光光度計(U3000,Hitachi,Japan)，於37℃每一分鐘測量一次波長340nm的吸光值，時間共五分鐘，最後以Lambert-Beerlaw公式計算NADPH的減少量，以每分鐘減少1μmol的NADPH為一酶活性單位(IU)，得知水晶體醛醣還原酶活性。

請參照第4圖，為桑黃液態培養菌絲體對糖尿病大鼠水晶體醛醣還原酶活性影響之量化圖。其中NC為健康對照組、DC為糖尿病對照組、LD為桑黃液態培養菌絲體低劑量組、MD為桑黃液態培養菌絲體中劑量組以及HD為桑黃液態培養菌絲體高劑量組。數據結果以mean±SD值表示，每組之大鼠個數為9。其中上標之a和b表示標示不同字母的組別之間存在統計上之顯著差異(p<0.05)。

結果顯示，與健康對照組相比，糖尿病對照組的水晶體醛醣還原酶活性有顯著的較健康對照組高(p<0.05)。而桑黃液態培養菌絲體低劑量組、桑黃液態培 養菌絲體中劑量組和桑黃液態培養菌絲體高劑量組的水晶體醛醣還原酶活性，皆顯著的低於糖尿病對照組(p<0.05)。由上述數據顯示，糖尿病大鼠會造成水晶體醛醣還原酶活性的上升，而給予桑黃液態培養菌絲體可以降低糖尿病大鼠水晶體醛醣還原酶活性，而減少水晶體的滲透性傷害。

4.糖尿病大鼠水晶體之麩胱甘肽濃度測定

麩胱甘肽(glutathione,GSH)為動物細胞內的抗氧化酵素，具有極佳的抗氧化效果，而病情無法控制的糖尿病患者，幾乎嚴重缺乏麩胱甘肽而處於氧化壓力下。於前述試驗結果，已知給予糖尿病大鼠桑黃液態培養菌絲體後確實能降低糖尿病大鼠的血糖值和改善糖尿性白內障，本試驗例進一步探討給予桑黃液態培養菌絲體後，對於糖尿病大鼠體內麩胱甘肽含量的影響。

本試驗中水晶體麩胱甘肽濃度使用商業檢驗分析套組(Glutathione Assay Kit,Cayman Chemical Company,Ann Arbor,MI,USA)來測定，其係利用麩胱甘肽還原酶(Glutathione reductase)來定量麩胱甘肽，麩胱甘肽的硫氫基與DTNB(5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid))反應會產生黃色的TNB(5-thio-2-nitrobenzoic acid)和GSTNB，GSTNB再經由麩胱甘肽還原酶還原成麩胱甘肽與更多的TNB，故TNB產生的速率與樣本中的麩胱甘肽濃度成一比例，於405-414nm波長下測定吸光值，對照標準曲線後可計算出樣品中水 晶體麩胱甘肽含量。

試驗步驟如下：先去除待測樣品中過多的蛋白，將5g偏磷酸(metaphosphoric acid)溶入50mL的水，加入與待測樣品等量的偏磷酸試劑混合後，室溫下放置5分鐘，然後再離心力2000xg離心2分鐘，然後取上清液待測。將配好4M三乙醇胺(Triethanolamine)試劑以1：20比例加入上述待測上清液中混合，即完成去除過多蛋白質步驟。取50μL樣品至96孔盤中，再配置好Assay cocktail(10分鐘內使用完畢)，加入150μL Assay cocktail後於震盪器上避光培養25分鐘，最後在波長405-414nm測定吸光值，再對照標準曲線推算出水晶體麩胱甘肽濃度。單位以μM/mg protein表示。

請參照第5圖，為桑黃液態培養菌絲體對糖尿病大鼠水晶體麩胱甘肽濃度影響之量化圖。其中NC為健康對照組、DC為糖尿病對照組、LD為桑黃液態培養菌絲體低劑量組、MD為桑黃液態培養菌絲體中劑量組以及HD為桑黃液態培養菌絲體高劑量組。數據結果以mean±SD值表示，每組之大鼠個數為9。其中上標之a和b表示標示不同字母的組別之間存在統計上之顯著差異(p<0.05)。

結果顯示，與健康對照組相比，糖尿病對照組的水晶體麩胱甘肽濃度顯著地低於健康對照組(p<0.05)。而桑黃液態培養菌絲體低劑量組、桑黃液態培養菌絲體中劑量組、桑黃液態培養菌絲體高劑量組與糖尿病對照組相比，水晶體麩胱甘肽濃度並無顯著差異。由上述數據可知，糖尿 病大鼠會降低水晶體抗氧化酵素麩胱甘肽之濃度，而給予桑黃液態培養菌絲體無法改善此現象。

綜上所述，糖尿病之高血糖狀態會誘發滲透性傷害與糖化作用而造成水晶體產生白濁現象，低、中與高劑量桑黃液態培養菌絲體之補充，可以降低糖尿病大鼠禁食血糖值、降低糖化終產物的濃度、降低醛醣還原酶活性，以及改善糖尿病大鼠水晶體的混濁程度而變為透亮，故本發明所揭露之桑黃液態培養菌絲體，可有效抑制高血糖所誘發之滲透性傷害與糖化作用，進而改善糖尿病鼠水晶體白濁之現象，達到預防糖尿性白內障之功效。而包含有效劑量的桑黃液態培養菌絲體之組合物，可作為預防糖尿性白內障的醫藥組合物、飼料組合物、飲料組合物、營養補充組合物、食用組合物以及保健食用組合物，其有效劑量為200mg/kg BW至1000mg/kg BW，具有運用於生醫保健市場之潛能。

然本發明已以實施方式揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明的精神和範圍內，當可作各種的更動與潤飾，因此本發明的保護範圍當視後附的申請專利範圍所界定者為準。

【生物材料寄存】

國內寄存資訊【請依寄存機構、日期、號碼順序註記】

食品工業發展研究所2016年05月04日BCRC 930181

100‧‧‧桑黃液態培養菌絲體之製備方法

110、120、130‧‧‧步驟

Claims (7)

1. 一種桑黃(Inonotus linteus)液態培養菌絲體之用途，其係用於製備預防糖尿性白內障之藥物，其中該桑黃液態培養菌絲體係由下述步驟所製得：提供一基質，其中該基質係由0.5~5%重量比之葡萄糖、0.1~1%重量比之酵母萃出物以及99.4~94%重量比之水所組成；進行一液態培養步驟，該液態培養步驟係於該基質中接種一桑黃菌株，並於一液態培養溫度下培養一液態培養時間，以獲得一液態培養物質，其中該桑黃菌株之寄存編號為BCRC 930181；以及進行一分離步驟，該分離步驟係將該液態培養物質分離為一固體部分和一液體部分，其中該固體部份包含該桑黃液態培養菌絲體。
2. 如申請專利範圍第1項所述之桑黃液態培養菌絲體之用途，其中該液態培養溫度為25℃。
3. 如申請專利範圍第1項所述之桑黃液態培養菌絲體之用途，其中該液態培養時間為7天。
4. 如申請專利範圍第1-3項任一項所述之桑黃液態培養菌絲體之用途，其中該預防糖尿性白內障之藥物為一調節血糖代謝之藥物。
5. 如申請專利範圍第4項所述之桑黃液態培養菌絲體之用途，其中該預防糖尿性白內障之藥物為一降低高血糖值之藥物。
6. 如申請專利範圍第1-3項任一項所述之桑黃液態培養菌絲體之用途，其中該預防糖尿性白內障之藥物為一降低糖化終產物濃度之藥物。
7. 如申請專利範圍第1-3項任一項所述之桑黃液態培養菌絲體之用途，其中該預防糖尿性白內障之藥物為一降低醛醣還原酶活性之藥物。