WO2016010182A1 - 세리포리아 락세라타 배양액 추출물 유래의 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는 간기능 개선용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 세리포리아 락세라타 (Ceriporia lacerata) 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체 (exopolysaccharide)를 유효성분으로 함유하는, 간기능 개선, 간질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체는 우수한 간기능 개선 효과에 의해, 간질환 예방 또는 치료용 조성물뿐만 아니라 관련식품의 소재로서 응용될 수 있을 것이다.
Description
명세서 세리포리아 락세라타 배양액 추출물 유래의 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는 간기능 개선용 조성물 발명의 분야 본 발명은 세리포리아 락세라타 r/j r/a lacerata) 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는 간기능 개선, 또는 간질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 배경기술 간은 외부로부터 들어온 독성물질로부터 전신을 방어하고 생체외 물질의 대사를 담당하는 중요한 기능을 담당하는 장기로서, 섭취한 각종 영양소를 생체에 필요한 형태로 전환시키고， 알부민과 같은 생명유지에 필요한 각종 물질을 합성하며， 생체이물질을 체외로 배설하기 쉬운 상태로 전환시키기도 하는 등 매우 다양한 기능을 수행한다. 생체 내로 들어온 생체외 물질은 일단 간을 통과하기 때문에， 간은 영양소 외에도 많은 독성물질에 노출될 위험이 높고 다른 장기보다 손상될 가능성이 크다. 간은 재생능력이 우수한 장기로 약간의 손상에는 충분히 회복된다. 그러나 과도한 스트레스， 흡연， 환경오염에 의한 화학물질에의 노출, 음주 및 바이러스 감염， 담즙 분비정지 등에 의해 지속적 손상을 받게 되면 기능이 저하될 뿐만 아니라 간 조직의 일부가 완전히 파괴되고 손상부분은 정상으로 회복되지 못하는 결과가 초래된다. 결국 간 섬유화를 거쳐서 치명적인 간경화가 일어날 수 있고， 간경화는 간암으로 발전될 수 있다.또한, 간질환은 초기단계에서는 통증이나 자각증세가 나타나지 않고， 말기에 이르러서야 발견되기 때문에 적절한 시기에 치료받기가 어렵고 그에 따른 사망률도 높은 질환이다. 이처럼, 간질환의 심각성에도 불구하고
아직까지 효과적인 간질환 치료제가 없는 실정이다.
간염 바이러스에 의한 간질환의 경우에는 항바이러스 약물이 사용되고 있으나 그 부작용이 심각하다는 문제점이 있고， 최근 환경오염으로 늘어나고 있는 독성물질에 의한 간질환의 경우에는 아직 효과적인 치료방법이 없는 실정이다. 이에, 간 손상을 치료 및 예방할 수 있는 약물개발이 절실히 필요한 실정이다.
현재 임상적으로 널리 쓰이는 간질환 치료제로는 밀크씨슬 ( 5//y 77 /z/ar/a/JMz?)에서 분리한 실리마린, 오미자의 성분인 쉬잔드린 ( schi zandr in)과 유사한 인공합성물질인 디메틸 디메록시 비페닐레이트 (dimethyl dimethoxy biphenyl ate) , 우르소데옥시콜린산 (ursodeoxy cho l i c ac i d) 및 비타민 B복합군 등이며 그 질환의 심각성에 비해 치료제의 종류가 많지 않고 부작용도 빈번히 보고되고 있다. 이와 관련하여 볼 때, 천연물의 경우 오래 전부터 임상적 효능이 입증되어 왔고 일반적으로 화학물질보다 부작용이 적으므로 천연물로부터의 간질환 치료제의 개발은 그 의의가 매우 크다고 할 수 있다. 세리포리아 락세라타 /"7 ^/3 lacerata)는 백색 부후균의 일종으로서, 생태계에서 샐를로오스， 헤미 셀를로오스， 기타 다당류 및 글리세를 등의 탄소원을 이용하기 위하여 리그닌 분해라는 공동대사를 수행하는 것으로 알려져 있다. 그러나， 세리포리아 락세라타의 존재가 2002년 처음으로 학계에 보고된 이후 이의 산업화에 대한 연구는 아직 미미한 실정이다.구체적으로,본 발명자들에 의하여 출원된 "당뇨병 질환의 예방 및 치료를 위한 세리포리아 락세라타 배양액 추출물의 제조방법 및 이에 따른 세리포리아 락세라타 배양액 추출물 "에 관한 대한민국 특허 제 10-1031605호에 세리포리아 락세라타 배양액 추출물의 당뇨에 대한 치료 효과가 공개되어 있는 정도이다.
이에， 본 발명자들은 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 추출물을 대상으로 예의 연구를 계속한 결과， 세리포리아 락세라타 배양액 추출물 유래의 세포외다당체 (exopo lysacchar i de ; EPS)가 간기능 개선 효과를 갖는 것을 발견함으로써 본 발명을 완성하였다.
발명의 요약
따라서， 본 발명의 목적은 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 추출물 유래의 천연물질을 유효성분으로 함유하여 간기능을 개선시키거나， 간질환을 예방 또는 치료하는 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 추출물 유래의 천연물질을 함유하는， 간기능 개선용 식품을 제공하는 것이다. 상기 목적올 달성하기 위하여 본 발명은 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는, 간기능 개선용 조성물을 제공한다.
상기 다른 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는， 간질환 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
상기 세포외다당체는 약 40~60 중량 %의 당과 약 30~40 중량 %의 단백질을 포함하고 약 100-150 kDa의 분자량을 갖는 것일 수 있다.
상기 간질환은 간 섬유화, 간경화증， 간염 또는 간암일 수 있다.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체를 함유하는, 간기능 개선용 식품을 제공한다. 본 발명에 따른 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는 조성물은 간기능 개선， 또는 간질환 예방또는 치료에 매우 효과적으로 이용될 수 있다.
도면의 간단한 설명 본 발명의 상기 및 다른 목적과 특징들은 첨부된 도면과 함께 하기 본
발명의 설명으로부터 명확해질 것이다:
도 1은 배양물 정제에 따른 EPS의 분자량을 측정한 그래프이다. 발명의 상세한 설명 이하 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다. 본 발명은 세리포리아 락세라타 ( < r//wr/a lacerata) 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체 (exopolysacchar i de ; EPS)를 유효성분으로 함유하는, 간기능 개선용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 세리포 '리아 락세라타 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는， 간질환 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다. _
본 발명에 따른 조성물에 있어서，상기 세포외다당체는 약 40-60중량 ¾>의 당과 약 30~40중량 %의 단백질, 약 40~50중량 %의 당과 약 32~38증량 ¾의 단백질 또는 약 43~47 중량 %의 당과 약 33-36 중량 %의 단백질올 포함할 수 있고， 바람직하게는 약 45 중량 ¾의 당과 약 34 중량 %의 단백질을 포함할 수 있다. 상기 당은 만노오스, 갈락토오스 및 글루코오스를 함유할 수 있다.
상기 세포외다당체는 약 100~150 kDa , 약 1 KL40 kDa 또는 약 115~125 kDa 의 분자량을 가질 수 있고， 바람직하게는 약 120 kDa 의 분자량을 가질 수 있다.
바람직한 하나의 구체예로서， 상기 세포외다당체는， (a) 세리포리아 락세라타 균사체를 액체 배양하여 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 제조하는 단계， (b)세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 건조시켜 분말화하는 단계, 및 (c) 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 분말을 용매로 추출한 후 이를 여과하고 감압농축하는 단계를 포함하는 제조방법에 의하여 제조될 수 있다.
상기 (a) 단계에서의 세리포리아 락세라타 균사체의 액체 배양을 위한 배지는 설탕， 포도당, 전분， 수수분 대맥분， 대두분, 황산마그네슘 (MgS04), 1 인산칼륨 (K¾P04), 2 인산칼륨 (K2HP04) 및 물을 포함하고， 수소이온농도가 ρΗ 4.5-6.0인 것일 수 있다.
바람직한 하나의 구체예로서, 상기 배지는, 설탕 1~2 증량 포도당
0.2-1중량 %， 전분 0.2~1중량 %， 수수분 0.1-0.5중량 %， 대맥분 0.1-0.5중량 %， 대두분 0.2-4중량 ¾, 황산마그네슘 (MgS04) 0.05-0.25중량 ¾>， 1인산칼륨 (K¾P ) 0.05-0.25중량 ， 2인산칼륨 (Κ2ΗΡ04) 0.05~0.25중량 %및 물 92~98중량 %를 포함할 수 있다.
상기 (a)단계에서의 액체 배양은 청색 LED광원 하에서 수행될 수 있고 이산화탄소의 농도를 l,000~2,000ppm으로 유지하여 수행될 수 있다.
' 이때， 액체 배양은 20~25°C에서， 수소이온농도 (pH) 4.5-6.0, 광원은 청색 LED, 조도는 0.5 LUX 를 유지하며 공기는 0.5~1.5 kgf/cm2 으로 주입하고 이산화탄소의 농도는 1，000~2,000 ppm 으로 유지하면서 8~13 일간 수행될 수 있고， 22°C, PH5, 1.0 kgf/cm2, 1,500 ppm 조건에서 10 일간 수행되는 것이 세포외다당체의 함량이 높으므로 바람직하다.
상기 (a) 단계에서의 모균주는 PDA(Potato dextrose agar) 배지 상태로 4 에 보관중인 우량균주 1 개를， 삼각플라스크에 PDB(Potato dextrose broth) 배지를 사용하여 진탕배양기에서 25°C의 항온을 유지하며 7~9 일간 배양과정올 거친 것을 사용할 수 있다. 이때 접종원으로 투입될 균사체의 양은 배양할 용액의 양을 기준으로 0.5% 정도인 것이 바람직하다. 균사체량(%/10( 11)이 높다고 세포외다당체의 함량도 같이 높아지는 것이 아니므로 배지 조성은 균사체의 성장에 가장 양호한 영양 비율 및 환경조건이 아닌， 세포외다당체의 함량을 가장 높게 형성시키는 선택적 배양조건을 적용하는 것이 바람직하다. 상기 배양액은 균사체와 수용액으로 분리 정제할 수 있다. 상기 분리 정제는 원심분리기로 균사체를 제거한 용액을 다중필터프레스 (Multi-Sheet
Filter Press)와 진동원심막분리기 (PALLSEP)로 반복하여 정제한 후 1 분간 자외선 (UV)을 조사할 수 있다. 또한, 산소를 제거한 후 밀봉 보관하는 것이
필요한데, 이는 용액속에 균사가 존재할 경우 균사의 성장으로 유효성분의 함량에 변화를 가.져오기 때문이다.
상기 (b) 단계에서는 상기 (a) 단계에서 제조된 균사체 배양액을 진공건조 또는 동결건조시켜 분말화할 수 있다. 상기의 건조는 유효물질의 소멸을 방지하기 위해 40°C 이하의 저온， 바람직하게는 30°C 이하의 온도에서 48~96 시간 동안 수행되는 것이 바람직하다. 그리고， (b) 단계에서의 건조는 증발온도를 상대적으로 높게 설정하는 진공건조기보다 진공동결건조기를 사용하는 것이 유효물질 함량 변화가 최소화되므로 바람직하다.
상기 (c) 단계에서는 (b) 단계에서 얻은 균사체 배양액 건조물을 용매로 추출하여 본 발명에 따른 조성물의 유효성분인 세포외다당체를 분리， 제조한다. 상기 과정은 건조 분말 5g에 증류수 100 mL을 첨가하여 잘 현탁한 후， 원심분리 (8 , 000 rpm , 20 min)하여 이의 상둥액에 그 양의 2~3배에 해당하는 차가운 알코올을 첨가하고 넁장고 (4°C )에 넣어 12시간 정치시킬 수 있다. 상기의 정치물에서 상등액만을 다시 원심분리 (8 , 000 rpm, 20 i n)한 후， 침전물을 회수하여 조 (crude) 세포외다당체를 제조할 수 있다. 상기 추출물은 30 °C 이하에서 진공동결건조하는 것이 바람직하다. 본 발명에 따른 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는 간기능 개선 및 간질환 예방 또는 치료용 조성물에는 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제가 더 포함될 '수 있다.
상기 세포외다당체는 조성물 총 중량에 대하여 0. 1 내지 80 중량 %， 바람직하게는 0. 1 내지 50 증량 %로 포함될 수 있다. 그러나， 가장 바람직한 추출물의 유효 함량은 조성물의 사용방법 및 목적에 따라 적절히 조절될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 제형화하여 사용될 수 있다. 적합한 제형으로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 당의정， 경질 또는 연질의 캡슐제， 용액제, 현탁제 또는 유화액제,주사제， 좌제 등이 있으나 이에
한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 조성물은 약학적으로 블활성인 유기 또는 무기 담체를 이용하여 적합한 제형으로 제조할 수 있다. 즉， 제형이 정제, 코팅된 정제ᅳ 당의정 및 경질 캡슐제인 경우 락토스, 수크로스， 전분 또는 그 유도체， 탈크, 칼슴 카보네이트， 젤라틴， 스테아르산 또는 그 염을 사용할 수 있다. 또한, 제형이 연질 캡술제의 경우에는 식물성 오일， 왁스， 지방， 반고체 및 액체의 폴리올이 사용 가능하다. 또한, 제형이 용액 또는 시럽 형태의 경우에는 물， 폴리올 글리세를， 및 식물성 오일 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 상기의 담체외에도 보존제, 안정화제， 습윤제, 유화제 , 용해제, 감미제, 착색제, 삼투압조절제， 산화방지제 등을 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물의 투여방법은 제형에 따라 용이하게 선택될 수 있으며, 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 투여량은 환자의 나이 성별， 체중， 병증의 정도， 투여경로에 따라 달라질 수 있으나， 일반적으로 5 내지 500mg/kg의 양， 바람직하게는 100 내지 250mg/kg의 양을 1일 1회 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명에 따른 조성물은 우수한 간기능 개선 효과를 제공할 뿐만 아니라 약물에 의한 독성 및 부작용도 거의 없어 간질환의 치료 목적뿐만 아니라 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다.
상기 간질환은 간 섬유화， 간경화증， 간염 또는 간암일 수 있으며， 이에 한정되는 것은 아니다. 또한， 본 발명은 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체를 함유하는, 간기능 개선용 식품을 제공한다.
본 발명에 따른 식품은 분말， 과립， 정제 캡슐 또는 음료의 형태일 수 있고， 캔디, 초콜릿， 음료， 껌， 차, 비타민복합체, 건강보조식품 또는 건강기능식품일 수 있다.
이때, 상기 식품 중의 본 발명에 따른 세포외다당체는 일반적으로 전체 식품 중량의 0.01내지 50중량 바람직하게는 0. 1내지 20중량 ¾으로 포함될 수 있고， 건강 음료 조성물의 경우 100ml를 기준으로 0.02내지 10g , 바람직하게는 0.3 내지 lg의 비율로 포함할 수 있다.
상기 식품은 본 발명의 세포외다당체와 함께 식품학적으로 허용가능한 식품 보조 첨가제를 더 포함할 수 있다. 이하, 본 발명을 하기 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단， 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐， 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
[실시예] . 제조예 1. 세리포리아 락세라타 배양액 추출물 유래의 세포외다당체의 제조
1. 1 세리포리아 락세라타 배양액의 제조 경북 상주시에서 채취한 참나무 ' 변제부 속에서 분리한 세리포리아 락세라타를 계대배양을 통해 육성한 모균을 -8CTC에 넁동보관 하였고， 보관중인 균주를 PD Potato dextrose agar) 배지 (87플라스틱 배양구; Di fco ,
Becton Di ckinson and Company) 에서 2~3회 계대 후 층분한 수량의 완전한 균주만을 4°C 넁장고에 보관하여 사용하였다. 그리고， 삼각플라스크에
PDB(Potato dextrose broth)배지 (Di fco ; Becton Dickinson and Company) 600ml를 조성한 후, PDA 배양균주 1개를 넣고 8일간 진탕배양하였다. 그리고， 설탕
1.5중량%， 포도당 0.5중량%ᅳ 감자전분 0.5중량¾；， 수수분 0.25중량 ¾>, 대맥분
0.25중량 대두분 0.75중량 %, 황산마그네슘 (MgS04) 0.05중량 %,
1인산칼륨 (KH2P04) 0.05중량；， 2인산칼륨 (K2HP04 ) 0.05중량 %및 물 96.85중량 %를
포함하는 액체 배양 배지를 800L 발효조에서 121°C, 1.5 kgf/cm2로 20분간 살균한 후， 23°C로 넁각한 상태에서 스타터로 사용할 PDB 배양균주 600ml를 접종하고， 공기를 0.5~1.5 kgf/cm2로 통기시키면서, 이산화탄소의 농도는 l,000~2,000pptn으로 세리포리아 락세라타 균사체를 23°C의 항온에서 10일간 액체 배양함으로써 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 제조하였다.
1.2 세리포리아 락세라타 배양액 추출물로부터 EPS의 제조 제조된 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 진공동결건조기를 이용하여 25°C의 저온에서 72시간 동안 동결건조시켜 분말화하였다. 건조 분말 5g에 증류수 100ml 를 첨가하여 잘 현탁한후, 원심분리 (8,000rpmᅳ 20분)하여 이의 상등액에 그 양의 2~3 배에 해당하는 차가운 알코올을 첨가하고 넁장고 (4°C)에 넣어 12 시간 정치시켰다. 상기의 정치물에서 상등액만을 다시 원심분리 (8,000rpm, 20 분)한 후， 침전물을 회수하여 조 (crude) EPS 를 추출하였다. 조 EPS 를 동결건조기에서 72 시간 건조시켜 완전한 EPS 를 획득하였다. 실시예 1. EPS의 특성 평가 1.1 겔투과 크로마토그래피 (Gel Permeation Chromatography, GPC)를 이용한 EPS의 분자량 측정 제조예 1 에서 제조한 EPS 를 0.1 M Na2S04/0.05 M NaN3 (빙초산 (glacial acetic acid)으로 pH 를 4 로 조정) 용액에 1% 되도록 녹인 다음， 원심분리 후 상층액 만을 0.45 m 시린지 필터 (syringe filter)로 여과하여 GPC 로 분석하였다.
분석조건은 검출기로 굴절지수를 이용하였으며 , GPC칼럼은 OHpak SB 805
HQCShodex, Japan)를 이용하여 이동상을 0.1 M Na2S04/0.05 M NaN3(빙초산으로
pH를 4로 조정 )로 유속은 1.0 mL/min의 속도로 흘려주었다. 표준곡선은 각기 다른 분자량 (130， 400, 770, 1200 kDa)을 가진 덱스트란 (American Polymer Corporation, USA)을 이용하여 작성하였으며， 굴절지수 (refract ive index, RI) 측정기 Knauer K-2310 (Germany)를 이용하여 EPS의 분자량을 측정하였다 (표 1).
[표 1]
그 결과， EPS의 분자량은 약 120 kDa인 것으로 나타났다 (도 1).
.2 EPS의 당 및 단백질 함량 측정
EPS 를 2 차 정제하고 단백질 가수분해 효소를 처리하여 당 및 단백질 함량을 측정하였다.
구체적으로 1차 정제된 EPS를 다시 증류수에 녹이고 원심분리 (8,000rpm, 20 분)하여 상등액을 분리한 후, 분리된 상등액에 그 양의 2~3 배에 해당하는 차가운 알코올을 첨가하고 넁장고 (4°C)에 넣어 12 시간 정치시켰다. 상기의 정치물에서 상등액만을 다시 원심분리 (8,000rpm, 20 분)한 후， 침전물을 회수하여 2 차 정제된 EPS 를 획득하였다. 다음으로, 단백질 가수분해 효소인 알칼레이즈 (alcalase)를 0.5%의 농도로 50°C에서 30분간 처라하였다.
당 함량은 페놀-황산법 (phenol— sulfuric acid method)에 의해 측정하였다. 농도별로 회석한 시료 1 mL 에 80% 페놀을 25 uL 첨가한 후 황산을 2.5 mL 첨가하여 실온에서 넁각하고 465 nm 에서 흡광도를 측정하여 계산하였다. 단백질 함량은 BCA 방법 (Smith PK, et al. , Analytical Biochemistry,
150(1)：76-85 ( 1985) 참고)에 의해 측정되었고 표준품으로 소혈청 알부민을 사용하였다.
그 결과, 아래 표 2 와 같이, 당 함량은 45~51 중량 %이고 단백질 함량은 33~34 중량 %인 것으로 나타났다.
[표 2] 수율 (%) 총 당 함량 (%) ^
EPS 1.22+0.03 45.32+1.41 34.17+0.73
2차 정제된 EPS 0.78+0.01 50.49±0.52 33.50+2.79 효소 처리된 EPS* 0.24+0.06 51.39±1.32 34.61+1.51
*효소 처리: 알칼레이즈 0.5%, 50°C, 30분.
각수치는 평균 ±SE (n≥3)임.
또한， EPS의 당 구성 분석 결과, EPS는 주로 만노오스, 갈락토오스 및 글루코오스를 함유하고 있는 것으로 나타났다. 실시예 2. EPS의 간기능 개선 효과 검증 세리포리아 락세라타 배양액 추출물 유래의 EPS의 간기능 개선 효과를 조사하기 위하여， 상기 제조예 1에서 제조된 EPS 및 동물모델인
C57BL/Rsj (BL/Ls) homozygous di abet i c (db/db)마우스를 사용하였다.본 연구에 사용한 db/db마우스는 30~40 g정도의 6주령 수컷이었으며， Japan SIX Inc .에서 생산하여 중앙실험동물 (주)를 통하여 공급받았으며 , 약 7일간의 검역순화 및 적웅기간 후 체중과 혈당을 측정하여 시험실시에 적합하고 일반증상에 이상이 없는 건강한 동물 30마리를 선별하였다.
실험동물은 음성 대조군 ( "DM그룹 " )， EPS저용량군 ( 150 mg/kg , "DM-EX0150 그룹 " )， EPS 고용량군 (300 mg/kg, "DM-EX0300 그룹 " ) 및
양성대조군 (메트포르민 (metformin)-300mg/kg, "DM-MET300그룹 ")등 4군의 혈당 및 체중이 균등하도록 랜덤으로 나누어 6주 동안 사육하였다. 또한 정상 대조군 ("NC 그룹")도 6마리를 동일한 조건에 6주 동안 사육하였다. 모든 시험물질 및 양성 대조물질은 매일 동일한 시간에 경구투여하였으며， 정상 대조군 및 음성 대조군은 물을 경구투여하였다. 실험동물의 식이는 시판용 실험동물 고형사료 (Samtaco co. ltd., Korea)를 공급하였고， 물은 자유 섭취시켰다. 동물 사육실의 사육조건은 12시간 명암주기 (오전 8시〜오후 8시 조명)， 온도 23±3°C, 상대습도 50±10%가 되도록 조절하였다. EPS 투여 6주 후의 db/db 마우스의 간 손상 정도를 조사하기 위하여
ALT와 AST 함량을 측정하였다 (Ji-Eun Kim, et al . , Food Science and Biotechnology 21(6)： 1685-1693 (2012) 참고). 일반적으로 독소 투여 , 간경화， 간염 및 간암과 같은 간의 대사적 변화로 인해 증가되는 것으로 알려져 있는 알라닌 트랜스아미나아제 (Alanine transaminase, ALT)와 아스파르테이트 트랜스아미나아제 (Aspartate transaminase, AST)는 이들의 함량에 따라 간 손상 정도를 결정하는데 있어 마커로서 사용될 수 있다.
[표 3]
ALT AST
그룹
(IU/mL) (IU/mL)
NC 12.58±2.31 59.78±2.23
DM 123.33+10.04+†† 106.87+9.01†† *
DM-EXO150 96.00+3.28** 92.01+9.33
DM-EXO300 92.81+3.73*** 92.30± 10.41
DM-MET300 50.00±4.63*" 84.68±6.90*
각 값은 평균 ±SE임.
t + t： p<Wl vs. NC.
* "*' *"： p<.05, .01, .001 vs. DM (각 그룹당 n=6).
그 결과， ALT와 AST는 EPS를 300 mg/kg 투여한 DM-EX0300 그룹이 음성 대조군인 DM 그룹보다 각각 약 25와 14% 정도 현저히 감소되는 것으로 나타났다 (표 3) . 이를 통해, EPS가 db/db 마우스에서 간을 보호함을 확인할 수 있었다.
Claims
1 . 세리포리아 락세라타 O /wr/a Jacerata) 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체 ( exopolysacchar i de)를 유효성분으로 함유하는， 간기능 개선용 조성물.
2. 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는， 간질환 예방 또는 치료용 조성물.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서 ,
상기 세포외다당체는 40~60 중량 ¾의 당과 30-40 중량 %의 단백질을 포함하고 10CKL50 kDa의 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
4. 제 3 항에 있어서 ,
상기 세포외다당체는 43-47 중량 %의 당과 33~36 중량 %의 단백질을 포함하고 115~125 kDa의 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
5. 제 3 항에 있어서,
상기 당은 만노오스， 갈락토오스 및 글루코오스를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
6 . 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 세포외다당체는， (a) 세리포리아 락세라타 균사체를 액체 배양하여 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 제조하는 단계, (b) 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 건조시켜 분말화하는 단계， 및 (c )세리포리아 락세라타 균사체 배양액 분말올 용매로 추출한 후 이를 여과하고 감압농축하는 단계를 포함하는 제조방법에 의하며 제조된 것을 특징으로
하는 조성물.
7. 제 6 항에 있어서，
상기 액체 배양을 위한 배지는 설탕， 포도당， 전분， 수수분, 대맥분， 대두분, 황산마그네슘 (MgS04) , 1인산칼륨 (KH2P04) , 2인산칼륨 (K2HP04) 및 물을 포함하고, 수소이온농도가 pH 4.5~6.0인 것을 특징으로 하는 조성물.
8. 제 6 항에 있어서，
상기 액체 배양은 청색 LED 광원 하에서 수행되고， 이산화탄소의 농도를 1， 000-2 , 000ppm으로 유지하여 수행되는 것을 특징으로 하는 조성물.
9. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서，
상기 세포외다당체는 조성물 총 중량에 대하여 0. 1 내지 80 중량 %로 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
10. 제 2 항에 있어서，
상기 간질환은 간 섬유화， 간경화증， 간염 또는 간암인 것을 특징으로 하는 조성물.
11. 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 추출물 유래의 세포외다당체를 함유하는， 간기능 개선용 식품.
12. 제 11 항에 있어서，
상기 식품은 분말， 과립， 정제， 캡술 또는 음료의 형태인 것을 특징으로 하는, 간기능 개선용 식품.
O 2016/010182
13. 제 11 항에 있어서，
상기 식품은 캔디， 초콜릿, 음료， 껌， 차， 비타민복합체 건강보조식품 또는 건강기능식품인 것을 특징으로 하는, 간기능 개선용 식품.
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Free format text: NOTING OF LOSS OF RIGHTS PURSUANT TO RULE 112(1) EPC (EPO FORM 1205A DATED 03/05/2017) |
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| 122 | Ep: pct application non-entry in european phase |
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