CN114931625A - 尿苷酸、腺苷酸和酵母肽组合物在抗衰老方面的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了尿苷酸、腺苷酸和酵母肽组合物在抗衰老方面的应用，属于医药保健技术领域。所述组合物包括5’‑尿苷酸、5’‑腺苷酸和酵母肽，具有抗衰老的功能。本发明提供了包含5’‑尿苷酸、5’‑腺苷酸、酵母肽三种成分的组合物在抗衰老方面的应用，三种成分可以在肠道内彼此促进吸收，5’‑尿苷酸和5’‑腺苷酸与酵母肽在细胞和组织中可发挥协同作用，可高效清除DPPH和OH‑自由基，修复损伤细胞，提升抗氧化酶的活性，达到延缓衰老和抗衰老的目的。
Description
技术领域
本发明属于医药保健技术领域，具体涉及尿苷酸、腺苷酸和酵母肽组合物在抗衰老方面的应用。
背景技术
伴随着人口老龄化的加深，延缓衰老逐渐成为当前情势下迫切解决的之一。
延缓衰老在字面上可以理解为延缓机体的老化，包括细胞、组织，器官等的老化。可随着人们认知的发展，对于延缓衰老已经有了更加全面的认识，凡是有利于人体健康的，提高生活质量的，都可以认定为延缓衰老。延缓衰老的主要方式为非药物与药物两个方面，其中非药物的方法为坚持科学的生活规律，保持良好的生活习惯。而药物的方法分类就比较多，其中大多数是服用保健类药品或食品，其作用效果也是最显著的。
核苷酸是核糖核酸及脱氧核糖核酸的基本组成单位，是体内合成核酸的前身物。核苷酸随着核酸分布于生物体内各器官、组织、细胞的核及胞质中，并作为核酸的组成成分参与生物的遗传、发育、生长等基本生命活动。
发明内容
本发明的目的在于提供一种尿苷酸、腺苷酸和酵母肽组合物在抗衰老方面的应用。本发明经过长期研究，不同的核苷酸有不同的功能，搭配添加酵母肽后可以高效清除体内自由基，延缓细胞老化，恢复年轻态。本发明为核苷酸类营养品在提高人体健康水平、人们生活质量的应用方面提供了一种新思路。所得的成品具有延缓机体衰老、恢复年轻态等作用。
本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：
一种尿苷酸、腺苷酸和酵母肽的组合物，所述组合物包括5’-尿苷酸、5’ -腺苷酸和酵母肽，具有抗衰老的功能。
进一步地，上述技术方案中，所述组合物包括如下重量配比的组分：5’- 尿苷酸14-63％、5’-腺苷酸9-50％、酵母肽1.5-77％。
进一步地，上述技术方案中，所述组合物包括如下重量配比的组分：5’- 尿苷酸40-60％、5’-腺苷酸25-50％、酵母肽10-30％。
进一步地，上述技术方案中，所述组合物包括如下重量配比的组分：5’- 尿苷酸41.5％、5’-腺苷酸41.5％、酵母肽17％；或者5’-尿苷酸52％、5’- 腺苷酸26％、酵母肽22％。
进一步地，上述技术方案中，所述组合物中5’-尿苷酸、5’-腺苷酸以5’ -单磷酸核苷酸或者钠盐形式存在，5’-腺苷酸与5’-尿苷酸的重量比为1:1-1:2。
进一步地，上述技术方案中，所述组合物的成品状态包括粉剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液、胶囊。
本发明还提供了上述的尿苷酸、腺苷酸和酵母肽的组合物在制备抗衰老药品、保健品或营养食品中的应用。
进一步地，上述技术方案中，所述药品、保健品或营养食品具有清除体内自由基、抗氧化、对损伤细胞良好的保护和修复、延缓机体衰老、恢复年轻态的作用。
本发明相对于现有技术具有的有益效果如下：
本发明提供了包含5’-尿苷酸、5’-腺苷酸、酵母肽三种成分的组合物在抗衰老方面的应用。首先，本发明所使用的酵母肽是一种全营养酵母发酵产物，含500-2000Da以下短肽(5-20个氨基酸组成的肽)40％以上，还含有多糖、各种氨基酸和多种维生素矿物质以及膳食纤维补充衰老机体所缺各类营养成分。经过研究发现5’-尿苷酸、5’-腺苷酸可提升胃肠道益生菌存活率，改善肠道环境，促进大分子蛋白质分解，加速短肽的吸收与转运，与此同时短肽自身也可加速核苷酸、氨基酸、矿物质的吸收，并将其运输到人体组织所需处，二者互相促进。根据实验结果可以推测，核苷酸对酵母肽中氨基酸和多肽类物质抗氧化有调控作用，因此组合物加强了抗氧化作用并且减少氧化损伤引起的衰老。
附图说明
图1为本发明所述尿苷酸、腺苷酸和酵母肽的组合物对D-半乳糖小鼠血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量的影响。图中：#表示与模型组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)；*表示与空白组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。
图2为本发明所述尿苷酸、腺苷酸和酵母肽的组合物对D-半乳糖小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响。图中：#表示与模型组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)；*表示与空白组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。
图3为本发明所述尿苷酸、腺苷酸和酵母肽的组合物对D-半乳糖小鼠血清中丙二醛(MDA)含量的影响。图中：#表示与模型组比较，差异有统计学意义(P ＜0.05)。
图4为本发明所述尿苷酸、腺苷酸和酵母肽的组合物对衰老小鼠寿命的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的作进一步解释说明，这些实施例应被理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。下述实施例中，如无特殊说明，所使用的实验方法均为常规方法，所用材料、试剂等均可从生物或化学公司购买。
实施例1
按照重量配比为5’-尿苷酸14％、5’-腺苷酸14％、酵母肽72％在洁净区称取原料，用混合机混合均匀，得到粉剂。成品按质量标准的规定取样进行各项指标的检验，检验合格后保存备用。
实施例2
按照重量配比为5’-尿苷酸41.5％、5’-腺苷酸41.5％、酵母肽17％在洁净区称取原料，用混合机混合均匀，得到粉剂。成品按质量标准的规定取样进行各项指标的检验，检验合格后保存备用。
实施例3
按照重量配比为5’-尿苷酸49.25％、5’-腺苷酸49.25％、酵母肽1.5％在洁净区称取原料，用混合机混合均匀，得到粉剂。成品按质量标准的规定取样进行各项指标的检验，检验合格后保存备用。
实施例4
按照重量配比为5’-尿苷酸18％、5’-腺苷酸9％、酵母肽73％在洁净区称取原料，用混合机混合均匀，得到粉剂。成品按质量标准的规定取样进行各项指标的检验，检验合格后保存备用。
实施例5
按照重量配比为5’-尿苷酸52％、5’-腺苷酸26％、酵母肽22％在洁净区称取原料，用混合机混合均匀，得到粉剂。成品按质量标准的规定取样进行各项指标的检验，检验合格后保存备用。
实施例6尿苷酸、腺苷酸和酵母肽的组合物的抗氧化性能
将实施例1制备的粉剂，准备称重后溶解于去离子水和乙醇的混合溶液中 (体积比为1:1)，制得浓度为1mg/mL的母液，进行DPPH自由基清除率的测定和OH-自由基清除率的测定。
1.DPPH自由基清除率的测定：
将母液分别稀释100，50，25，10，1倍制备成浓度为10μg/mL，20μg/mL， 40μg/mL，100μg/mL，500μg/mL的梯度稀释液。
分别取上述浓度150μL样品和150μL浓度为60mg/L的DPPH溶液(无水乙醇稀释)置于96孔板中，混合均匀，30℃避光保存，30min后使用酶标仪测量519nm 下吸光度值。DPPH自由基清除率公式如下：
式中，A空白为150μL去离子水乙醇溶液和150μL DPPH溶液的吸光度，A 样品为150μL样品和150μL DPPH溶液的吸光度；IC50为DPPH自由基清除率达到50％时样品的浓度。
2.OH-自由基清除率的测定：
(1)将母液分别稀释100，50，25，10，1倍制备成浓度为10μg/mL，20μg/mL， 40μg/mL，100μg/mL，500μg/mL的梯度稀释液。
(2)分别取上述浓度50μL样品和50μL浓度为6mmol/L的FeSO4溶液，加入50μL浓度为6mmol/L的乙醇-水杨酸溶液，置于96孔板中，混合均匀后，加入50μL浓度为6mmol/L的H2O2溶液，混合均匀。
(3)在37℃条件下反应30min后将96孔板放入酶标仪测量510nm下吸光度值(A样品)。OH-自由基清除率公式如下：
式中，A空白为用DMSO代替体系中的样品的吸光度，A样品为50μL样品的吸光度。IC50为OH-自由基清除率达到50％时样品的浓度。
实施例2-5制备的粉剂样品参照上述方法检测DPPH自由基清除率和OH-自由基清除率。对照组1：单组份5’-尿苷酸，对照组2：单组份5’-腺苷酸，对照组3：单组份酵母肽，对照组4：5’-尿苷酸和5’-腺苷酸按重量比1:1复配，对照组5：5’-鸟苷酸41.5％、5’-胞苷酸41.5％、酵母肽17％复配的组合物。实验数据以均值±标准偏差表示，实验结果如表1所示。
表1尿苷酸、腺苷酸和酵母肽的组合物的抗氧化性能
结果表明，与对照组1-5相比，实施例1-5的组合物均具有较高的抗氧化性能，表现出更强的清除DPPH自由基和OH-自由基的能力，尿苷酸、腺苷酸和酵母肽复配后抗氧化性能呈现显著增强的效果，实施例1-5的组合物能够更有效的清除机体的自由基，其中，以实施例2效果为最优。
本发明将尿苷酸、腺苷酸和酵母肽复配制备的组合物相较于单组份尿苷酸、单组份腺苷酸、单组份酵母肽、两种核苷酸复配(5’-尿苷酸和5’-腺苷酸按重量比1:1复配)或5’-鸟苷酸、5’-胞苷酸和酵母肽复配的混合物均具有显著的清除自由基的能力，清除DPPH自由基以及清除OH-自由基的能力得到成倍提升。同时可以增强生物体中抗氧化酶的活性，达到延缓衰老的目的。
实施例7尿苷酸、腺苷酸和酵母肽的组合物体外延缓衰老性能
以人脐静脉内皮细胞、PC-12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)为模型，采用H2O2造模，对实施例1-5的组合物进行细胞内ROS水平的评价。对照组1：单组份5’-尿苷酸，对照组2：单组份5’-腺苷酸，对照组3：单组份酵母肽，对照组4：5’-尿苷酸和5’-腺苷酸按重量比1:1复配，对照组5：5’-鸟苷酸41.5％、5’-胞苷酸41.5％、酵母肽17％复配的组合物。
H2O2作用细胞后产生大量ROS，攻击细胞膜、蛋白质及核酸，导致细胞损伤。将对数生长期的细胞消化成单细胞悬液，调节细胞浓度为105个/mL，接种于96 孔细胞培养板，每孔100μL，每组6个平行孔。接种24小时后，细胞贴壁生长，弃上清，加入终浓度200μmol/L的H2O2的培养基培养4h，然后替换为终浓度分别为50μg/mL的实施例1-5的组合物培养液继续培养24小时。实验同时设置不加H2O2的空白对照和只加H2O2的模型组，用活性氧检测试剂盒进行细胞内活性氧的状况评价：每孔加入10μmol/L的DCFH-DA母液(DMSO溶解)，终浓度为1μmol/L。继续培养2小时后，弃去上清，每孔加PBS 100μL洗涤2次，离心后使用200μL的PBS重悬细胞，使用荧光酶标仪于激发波长485nm，发射波长为525nm条件下测定各孔荧光强度，计算细胞的活性氧含量。实验数据以均值±标准偏差表示，实验结果如表2所示。
表2人脐静脉内皮细胞和PC-12细胞内的活性氧含量
| 人脐静脉内皮细胞荧光强度 | PC-12细胞荧光强度 | |
| 模型组 | 20492±239 | 17783±148 |
| 实施例1 | 4672±151 | 4195±192 |
| 实施例2 | 3572±190 | 3551±170 |
| 实施例3 | 4408±171 | 4090±165 |
| 实施例4 | 4855±108 | 4363±149 |
| 实施例5 | 3861±137 | 3994±186 |
| 对照组1 | 14755±124 | 13498±174 |
| 对照组2 | 14872±168 | 13874±140 |
| 对照组3 | 16331±195 | 16004±108 |
| 对照组4 | 13072±164 | 12986±199 |
| 对照组5 | 13915±192 | 13080±167 |
上述结果表明，和模型组以及对照组1-5的组合物相比，实施例1-5的组合物能够显著降低模型细胞内的活性氧，实施例1-5的组合物对氧化损伤的细胞具有良好的保护和修复作用，其中，以实施例2效果为最优。
本发明将尿苷酸、腺苷酸和酵母肽复配制备的组合物相较于单组份尿苷酸、单组份腺苷酸、单组份酵母肽或两种核苷酸复配(5’-尿苷酸和5’-腺苷酸按重量比1:1复配)均具有显著的降低H2O2损伤的细胞内活性氧含量的能力，有助于使衰老氧化损伤的细胞得以修复，降低细胞内活性氧含量的能力得到成倍提升。
实施例8尿苷酸、腺苷酸和酵母肽的组合物对D-半乳糖诱导小鼠的作用
5周大的BALB/c小鼠，饲养一周后，其中20只用50mg/kg的D-半乳糖腹腔注射30天，30天后，以10只为一组。实验组：分别按照实施例1-5的组合物灌胃共28天，并同时腹腔注射D-半乳糖。对照组1：灌胃与组合物相同体积的5’-尿苷酸共28天，并同时腹腔注射D-半乳糖。对照组2：灌胃与组合物相同体积的5’-腺苷酸共28天，并同时腹腔注射D-半乳糖。对照组3：灌胃与组合物相同体积的酵母肽共28天，并同时腹腔注射D-半乳糖。对照组4：灌胃与组合物相同体积的5’-尿苷酸和5’-腺苷酸按重量比1:1复配的组合物共28天，并同时腹腔注射D-半乳糖。对照组5：灌胃与组合物相同体积的5’-鸟苷酸 41.5％、5’-胞苷酸41.5％、酵母肽17％复配的组合物共28天，并同时腹腔注射D-半乳糖。模型组：灌胃与组合物相同体积的PBS缓冲液。空白组：腹腔注射与D-半乳糖同等剂量的生理盐水，30天后灌胃与组合物相同体积的PBS缓冲液，同时持续腹腔注射，共28天。灌胃结束的第二天，眼眶采血后，用于后续实验。
实验结果如图1-图3所示，血清中氧化酶SOD和GSH-PX的含量均增加，丙二醛减少，说明本发明所述组合物能缓解D-半乳糖对小鼠的氧化损伤。与对照组1-4相比，实施例1-5所述的组合物均表现出更强的抗氧化损伤的能力，尿苷酸和腺苷酸与酵母肽协同作用，效果显著。
实施例9尿苷酸、腺苷酸和酵母肽的组合物对自然衰老小鼠衰老的延缓作用
8周大的BALB/c小鼠，随机分为两组，每组10只，实验组：分别按照实施例1-5的组合物灌胃至小鼠衰老自然死亡。空白组：灌胃同等提及的生理盐水至小鼠衰老自然死亡。对照组1：灌胃与组合物相同体积的5’-尿苷酸至小鼠衰老自然死亡。对照组2：灌胃与组合物相同体积的5’-腺苷酸至小鼠衰老自然死亡。对照组3：灌胃与组合物相同体积的酵母肽至小鼠衰老自然死亡。对照组4：灌胃与组合物相同体积的5’-尿苷酸和5’-腺苷酸按重量比1:1复配的组合物至小鼠衰老自然死亡。对照组5：灌胃与组合物相同体积的5’-鸟苷酸41.5％、5’- 胞苷酸41.5％、酵母肽17％复配的组合物至小鼠衰老自然死亡。
分别统计各组小鼠的生长寿命，结果如图4所示，本发明所述组合物可以有效延缓小鼠自然衰老。
对于任何熟悉本领域的技术人员而言，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可利用上述揭示的技术内容对本发明技术方案作出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均应仍属于本发明技术方案保护的范围内。
Claims (8)
1.一种尿苷酸、腺苷酸和酵母肽的组合物，其特征在于，所述组合物包括5’-尿苷酸、5’-腺苷酸和酵母肽，具有抗衰老的功能。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括如下重量配比的组分：5’-尿苷酸14-63％、5’-腺苷酸9-50％、酵母肽1.5-77％。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括如下重量配比的组分：5’-尿苷酸40-60％、5’-腺苷酸25-50％、酵母肽10-30％。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括如下重量配比的组分：5’-尿苷酸41.5％、5’-腺苷酸41.5％、酵母肽17％；或者5’-尿苷酸52％、5’-腺苷酸26％、酵母肽22％。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物中5’-尿苷酸、5’-腺苷酸以5’-单磷酸核苷酸或者钠盐形式存在，5’-腺苷酸与5’-尿苷酸的重量比为1:1-1:2。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的成品状态包括粉剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液、胶囊。
7.权利要求1-6中任一项所述的尿苷酸、腺苷酸和酵母肽的组合物在制备抗衰老药品、保健品或营养食品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药品、保健品或营养食品具有清除体内自由基、抗氧化、对损伤细胞良好的保护和修复、延缓机体衰老、恢复年轻态的作用。
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