JP2023089298A5 - - Google Patents
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Claims (19)
- アデノ随伴ウイルス(AAV)を精製する方法であって、
(a)AAVを含む溶液を、AAVを標的としたアフィニティ樹脂に、前記溶液中のAAVと前記アフィニティ樹脂との間の結合を可能にする条件下でロードすること、
(b)少なくとも2つの洗浄ステップを行うこと、
(c)前記アフィニティ樹脂からAAVを溶出させること、および
(d)AAVを含む溶液を前記アフィニティ樹脂にロードする前に、AAVを含む溶液を陰イオン交換体と接触させること、および前記陰イオン交換体からAAVを含む溶液を溶出させること
を含み、
第1の洗浄ステップは、約50~約200mMの酢酸ナトリウムおよび0.05~0.2%(w/w)のポリソルベート80を含む第1の緩衝液を前記アフィニティ樹脂に適用することを含み、前記第1の緩衝液のpHは約5.2~約6.8であり、
第2の洗浄ステップは、約25~約100mMのTrisHClおよび約50~200mMの塩を含む第2の緩衝液を前記アフィニティ樹脂に適用することを含み、前記第2の緩衝液のpHは約7.5~約9.2であり、
第1の溶出ステップの前に精製水での洗浄が行われ、
前記アフィニティ樹脂の支持マトリックスは架橋ポリ[スチレン-ジビニルベンゼン]である、方法。 - 前記第1の洗浄ステップの前に行われる洗浄ステップをさらに含み、該洗浄ステップは、約10mM~約30mMのTrisHClおよび約75mM~約250mMのNaClを含む緩衝液を前記アフィニティ樹脂に適用することを含み、該緩衝液のpHは約6.5~約8.0である、請求項1に記載の方法。
- 前記第1の緩衝液は、約100mMの酢酸ナトリウム、約0.1%(w/w)のポリソルベート80を含み、該第1の緩衝液のpHは約6.0である、請求項1または2に記載の方法。
- 前記第2の緩衝液は、約50mMのTrisHCl、および約125mMのNaClを含み、該第2の緩衝液のpHは約8.5である、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- 溶出させることが、前記アフィニティ樹脂を、エチレングリコール、塩、および緩衝液を含む溶出緩衝液と接触させることを含み、前記溶出緩衝液のpHは少なくとも7.0である、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記溶出緩衝液において、前記塩はNaClである、および/または前記緩衝液はTrisHClである、請求項5に記載の方法。
- 前記溶出緩衝液において、前記塩の濃度は約750mMであり、前記緩衝液の濃度は約50mMであり、エチレングリコールは約50~60%(w/w)である、請求項5または6に記載の方法。
- 溶出させることが、前記アフィニティ樹脂を、約2mMの塩化マグネシウム、約50mMのアルギニン-HCl、約750mM~約1000mMのNaCl、および少なくとも約55%(w/w)のスクロースを含む溶出緩衝液と少なくとも約8.0のpHで接触させることを含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 溶出させることが、
(a)前記アフィニティ樹脂を、約20mM~約100mMのアルギニン-HClおよび約75mM~約250mMのNaClを含み、かつ約7.5~約8.5のpHを有する緩衝液と接触させること、および
(b)前記アフィニティ樹脂を、約20mM~約100mMのアルギニン-HCl、約40%(w/w)~約60%(w/w)のグリセロール、および約500mM~1000mMの塩を含み、かつ約7.5~約8.5のpHを有する第2の溶出緩衝液と接触させること
をさらに含む、請求項8に記載の方法。 - 前記ステップが連続して実行される、請求項9に記載の方法。
- 溶出させることが、前記アフィニティ樹脂を、約2mMの塩化マグネシウム、約50mMのアルギニン-HCl、約750mM~約1000mMのNaCl、および少なくとも約50%(w/w)のグリセロールを含む溶出緩衝液と少なくとも約8.0のpHで接触させることを含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 溶出させることが、前記アフィニティ樹脂を、約2mMの塩化マグネシウム、約50mMのタウリン、約600mM~約1000mMのNaCl、約0.05~約0.2%のオクチルグリコピラノシド、および少なくとも約60%(w/w)のエチレングリコールを含む溶出緩衝液と少なくとも約7.8のpHで接触させることを含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 溶出させることが、前記アフィニティ樹脂を、約20%(w/w)のスクロース、約10%(w/w)のソルビトール、約5%(w/w)のマンニトールまたは約5%(w/w)のスクロース、約15%(w/w)のグリセロール、約50mMのヒスチジン、および約750mM~約1000mMのNaClを含む溶出緩衝液と少なくとも約7.8のpHで接触させることを含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 溶出させることが、前記アフィニティ樹脂を、約100mMのグリシン-HClおよび約200mMのNaClを含む溶出緩衝液と約2.5のpHで接触させることを含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 0~100%の勾配で20~50mMの塩酸/0.5~2.0mMの塩酸中の800~1200mMのNaClを適用することによる溶出をさらに含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 溶出させることが、前記アフィニティ樹脂を、約1mMのHClを含む溶出溶液と約3.2のpHで接触させることを含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 溶出させることが、前記アフィニティ樹脂を、約30~約70mMのTrisHCl、約700~約900mMのNaCl、および約40%~60%(w/w)のDMSOを含む溶出緩衝液と約7.5~約8.5のpHで接触させることを含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 溶出させることが、前記アフィニティ樹脂を、約2MのMgCl 2 および約50mMのTrisHClを含む溶出緩衝液と約7.4のpHで接触させることを含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アフィニティ樹脂がPOROS(商標)CaptureSelect(商標)AAVXである、請求項1~18のいずれか一項に記載の方法。
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