JP2002520338A5 - - Google Patents

Description

【特許請求の範囲】
【請求項１】 ａ）ヘモグロビン溶液を陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに負荷する工程；および
ｂ）該カラムのｐＨよりも低いｐＨを有するトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸緩衝液の少なくとも１種を該カラムにインジェクトし、それにより該カラムから精製ヘモグロビン産物を溶出する工程
を含む、精製ヘモグロビン産物の製造方法。
【請求項２】 それぞれ異なるｐＨを有するトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸緩衝液の少なくとも２種を逐次的にカラムにインジェクトし、それにより該カラムを段階的ｐＨグラジエントに供する、請求項１記載の方法。
【請求項３】 ヘモグロビン産物の溶出前に、該トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸緩衝液の少なくとも１種を用いてカラムを平衡化する、請求項２記載の方法。
【請求項４】 約８．２〜約８．６の範囲のｐＨにカラムを平衡化する、請求項３記載の方法。
【請求項５】 該緩衝液をインジェクトする前に、約８．７を超えるｐＨに最初にカラムを平衡化する、請求項４記載の方法。
【請求項６】 トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸緩衝液を用いて最初に該カラムを平衡化する、請求項５記載の方法。
【請求項７】 最初の平衡化のｐＨが、約８．７〜約１０．０の範囲である、請求項６記載の方法。
【請求項８】 該カラム平衡化の間、少なくとも約１１カラムボイドボリュームの緩衝液をカラムにインジェクトする、請求項４記載の方法。
【請求項９】 該平衡化が、約８．２〜約８．４の範囲のｐＨにおけるものである、請求項８記載の方法。
【請求項１０】 約６．５〜約７．５の範囲のｐＨの緩衝液を用いてヘモグロビン産物を溶出する、請求項９記載の方法。
【請求項１１】 ａ）ヘモグロビン溶液を陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに負荷し、該負荷カラムを最初に約８．７よりも高いｐＨに平衡化する工程；および
ｂ）約８．２よりも低いｐＨを有する緩衝液の少なくとも１種を該カラムにインジェクトし、それにより該カラムから精製ヘモグロビン産物を溶出する工程
を含む、精製ヘモグロビン産物の製造方法。
【請求項１２】 該最初の平衡化が、約８．７〜約１０．０の範囲のｐＨにおけるものである、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】 トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸を用いて最初に該カラムを平衡化する、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】 ヘモグロビン溶液を該カラムに負荷するｐＨと該カラムから精製ヘモグロビンが溶出する最終ｐＨとの間のｐＨを有し、約８．６未満のｐＨを有するトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸緩衝液の少なくとも１種を該カラムにインジェクトし、それにより該カラムを段階的ｐＨグラジエントに供する工程をさらに含む、請求項１１記載の方法。
【請求項１５】 ヘモグロビン産物の溶出前に、該トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸緩衝液の少なくとも１種を用いて該カラムを平衡化する、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】 該トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸緩衝液を用いて約８．２〜約８．６の範囲のｐＨにカラムを平衡化する、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】 該カラム平衡化の間、少なくとも約１１カラムボイドボリュームの該緩衝液をカラムにインジェクトする、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】 該トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸を用いる該平衡化が、約８．２〜約８．４の範囲のｐＨにおけるものである、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】 約６．５〜約７．５の範囲のｐＨでヘモグロビン産物を溶出する、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】 ａ）ヘモグロビン溶液を陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに負荷する工程；
ｂ）約８．２〜約８．６の範囲のｐＨを有する少なくとも１１カラムボイドボリュームの平衡化用緩衝液をカラムにインジェクトする工程；および
ｃ）平衡化用緩衝液のｐＨよりも低いｐＨを有するトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸緩衝液をカラムにインジェクトし、それにより該カラムから精製ヘモグロビン産物が溶出する工程
を含む、精製ヘモグロビン産物の製造方法。
【請求項２１】 平衡化用緩衝液が、約８．３のｐＨを有する、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】 それぞれ異なるｐＨを有するトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸緩衝液の少なくとも２種を逐次的にカラムにインジェクトし、それにより該カラムを段階的ｐＨグラジエントに供する、請求項２０記載の方法。
【請求項２３】 該緩衝液をインジェクトする前に、約８．７を超えるｐＨに最初にカラムを平衡化する、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】 トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸緩衝液を用いて最初に該カラムを平衡化する、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】 最初の平衡化のｐＨが、約８．７〜約１０．０の範囲である、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】 約６．５〜約７．５の範囲のｐＨでヘモグロビン産物を溶出する、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】 ａ）陰イオン交換クロマトグラフィーカラムにヘモグロビン溶液を負荷し、該負荷カラムを最初に約８．７よりも高いｐＨに平衡化する工程；
ｂ）約８．２〜約８．６の範囲のｐＨを有する少なくとも１１カラムボイドボリュームのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸の平衡化用緩衝液を該カラムにインジェクトする工程；および
ｃ）約８．２よりも低いｐＨを有するトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸緩衝液の少なくとも１種をカラムにインジェクトし、それにより該カラムから精製ヘモグロビン産物が溶出する工程
を含む、精製ヘモグロビン産物の製造方法。
【請求項２８】 トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン酢酸緩衝液を用いて最初に該カラムを平衡化する、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】 最初の平衡化のｐＨが、約８．７〜約１０．０の範囲である、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】 該平衡化用緩衝液が、約８．２〜約８．４の範囲のｐＨを有する、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】 約６．５〜約７．５の範囲のｐＨの緩衝液を用いてヘモグロビン産物を溶出する、請求項３０記載の方法。
【請求項３２】 クロマトグラフィーカラムが、陰イオン交換担体で充填されたものである、請求項２７記載の方法。
【請求項３３】 陰イオン交換担体が、アミンもしくはアンモニウム含有シリカゲル、アルミナゲル、チタニアゲル、架橋デキストラン、アガロース、ポリアクリルアミド、ポリヒドロキシエチルメタクリレートまたはスチレンジビニルベンゼンからなる群より選ばれたものである、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】 陰イオン交換担体が、アミンまたはアンモニウム含有シリカゲルである、請求項３３記載の方法。