JP2022535794A - Rip-1キナーゼ阻害剤としての二環式化合物およびその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2019年05月31日に出願されたCN201910471672.3、2019年11月08日に出願されたCN201911089490.6および2020年05月20日に出願されたCN202010432710.7に基づく優先権を主張する。
本発明は、式(I)で表われる化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩二関し、さらに、RIP-1(受容体共役タンパク質)キナーゼに関連する疾患を治療するための医薬の調製におけるそれらの使用に関する。
T1はNとCR1tから選択され;
T2はNとCR2tから選択され;
T3はNとCR3tから選択され;
T4はNとCR4tから選択され;
E1はC(R1e)2、O、C(=O)、SおよびNR2eから選択され;
環Aは、1,2,4-トリアゾリル、1,2,3-トリアゾリル、イミダゾリル、イソキサゾリル、1,3,4-オキサジアゾリル、
環Bは、フェニルおよび
Lは、単結合、O、C(=O)、S、NHおよびC1-3アルキルからなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRaで置換されていてもよく;
R1は、HおよびC1-3アルキルから選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRbで置換されていてもよく;
R1t、R2t、R3tおよびR4tは、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2、C1-3アルキル、COOHおよび-C(=O)NH2からなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRcで置換されていてもよく;
R1eは、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2およびC1-3アルキルからなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRdで置換されていてもよく;
R2eは、HおよびC1-3アルキルから選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のReで置換されていてもよく;
R2は、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3アルキル、およびC1-3アルコキシからなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルおよびC1-3アルコキシが、1個、2個または3個のRfで置換されていてもよく;
nは1、2、3、4または5であり;
Ra、Rb、Rc、Rd、ReおよびRfは、それぞれ独立して、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2およびDからなる群から選択される。
T1はNとCR1tから選択され;
T2はNとCR2tから選択され;
T3はNとCR3tから選択され;
T4はNとCR4tから選択され;
E1はC(R1e)2、O、C(=O)、SおよびNR2eから選択され;
環Aは、1,2,4-トリアゾリル、1,2,3-トリアゾリル、イミダゾリル、イソキサゾリル、1,3,4-オキサジアゾリル、および
環Bはフェニルであり;
Lは、単結合、O、C(=O)、S、NHおよびC1-3アルキルからなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRaで置換されていてもよく;
R1は、HおよびC1-3アルキルから選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRbで置換されていてもよく;
R1t、R2t、R3tおよびR4tは、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2およびC1-3アルキルからなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRcで置換されていてもよく;
R1eは、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2およびC1-3アルキルからなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRdで置換されていてもよく;
R2eは、HおよびC1-3アルキルから選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のReで置換されていてもよく;
R2は、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CNおよびC1-3アルキルからなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRfで置換されていてもよく;
nは1、2、3、4または5であり;
Ra、Rb、Rc、Rd、ReおよびRfは、それぞれ独立して、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2およびDからなる群から選択される。
T1はNまたはCR1tであり;
T2はNまたはCR2tであり;
T3はNまたはCR3tであり;
T4はNまたはCR4tであり;
E1はC(R1e)2、O、C(=O)、SまたはNR2eであり;
環Aは、C1-3アルキルで置換されていてもよい5員ヘテロアリールであり;
環Bは、フェニルまたは6員ヘテロアリールであり;
Lは、O、C(=O)、S、NHまたはC1-3アルキルであり、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRaで置換されていてもよく;
R1は、HおよびC1-3アルキルから選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRbで置換されていてもよく;
R1t、R2t、R3tおよびR4tは、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2およびC1-3アルキルからなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRcで置換されていてもよく;
R1eは、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2およびC1-3アルキルからなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRdで置換されていてもよく;
R2eは、HおよびC1-3アルキルから選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のReで置換されていてもよく;
R2は、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CNおよびC1-3アルキルからなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRfで置換されていてもよく;
nは1、2、3、4または5であり;
Ra、Rb、Rc、Rd、ReおよびRfは、それぞれ独立して、F、Cl、Br、I、OH、CNおよびNH2からなる群から選択される。
n、T1、T2、T3、R1、R2およびRは本発明で定義した通りであり;
「*」が付いた炭素原子はキラル炭素原子であり、単一の(R)または(S)エナンチオマーまたは1つのエナンチオマーが豊富な混合物の形で存在する。
n、T1、T2、T3、R1、R2およびRは本発明で定義した通りであり。
特に明記しない限り、本明細書で使用される以下の用語は、以下の意味を有することを意図している。特定の用語は、特定の定義がない場合に、不定または不明瞭と見なされるべきではないが、通常の意味で理解されるべきである。本明細書に商品名が記載される場合、その対応する商品またはその活性成分を指す。
予備乾燥した100mLフラスコに、BB-1-1(2.60g,17.31mmol,1.00eq)および溶媒EtOH(11.25mL)とイソプロピルエーテル(37.50mL)を加え、撹拌しながら、BB-1-2(2.59g,17.83mmol,1.03eq)をゆっくりと加えた。反応を20℃で12時間撹拌し、濾過し、得られたフィルターケーキをイソプロピルエーテル(30mL*3)で洗浄し、化合物BB-1-3を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ=9.95(s,1H),9.90(s,1H),7.39-7.08(m,6H),4.21-4.19(m,2H),3.82(s,2H),1.27-1.23(m,3H);LCMS m/z=250.1[M+H]+。
予備乾燥した250mLフラスコに、化合物BB-1-3(7.00g,28.08mmol,1.00eq)およびキシレン(100.00mL)を加え、Dean-Starkトラップを取り付けた。反応系を180℃で10時間反応させた。反応系に100mLのイソプロピルエーテルを加え、氷水浴で30分間撹拌し、濾過し、得られたフィルターケーキを50mLのn-ヘキサンで洗浄し、化合物BB-1-4を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ=14.44(br s,1H),7.42-7.14(m,4H),4.29(q,J=6.5Hz,2H),4.13(br s,2H),1.28(br t,J=7.0Hz,3H);LCMS m/z=232.2[M+H]+。
サムボトル(thumb bottle)に、化合物BB-1-4(4.10g,17.73mmol,1.00eq)、テトラヒドロフラン(1.00mL)および水(200.00μL)を加えた後、水酸化リチウム一水和物(1.74g,41.49mmol,2.34eq)を加え、該溶液を20℃で12時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、撹拌しながら、系のpHが2になるまで25Mlの1N塩酸水溶液を滴下し、吸引濾過した後に、化合物BB-1を得た。LCMS m/z=202.1[M-H]-。
23℃でBB-2-1(2.5g,15.51mmol,2.94mL,1eq)のジクロロメタン溶液(40mL)に、メタノール(4.97g,155.13mmol,6.28mL,10eq)を加えた後、TMSCHN2(2M,9.31mL,1.2eq)を加え、さらに2時間撹拌した。TLC(石油エーテル:酢酸エチル=5:1)によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングした。反応液に0.1mLの氷酢酸を添加し、減圧濃縮してBB-2-2を得た。
BB-2-2(3g,17.12mmol,1eq)のメタノール(30mL)に、ヒドラジン水和物(3.21g,51.37mmol,3.12mL,80%純度,3eq)を加えた後、70℃の油浴で2時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液を減圧濃縮して溶媒を除去し、さらに50mLの酢酸エチルを添加し、30mLの飽和食塩水で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、BB-2-3を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=9.25(br s,1H),7.66-7.74(m,2H),7.45-7.65(m,2H),4.24(s,2H),3.43(s,2H);LCMS m/z=176.1[M+H]+。
予備乾燥した三つ口フラスコに、BB-1-2(2.07g,14.27mmol,1eq)およびエタノール(10mL)、イソプロピルエーテル(20mL)を加えた後、BB-2-3(2.5g,14.27mmol,1eq)を加え、25℃で5時間反応させた。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液を濾過し、フィルターケーキを50mLの石油エーテルで洗浄し、BB-2-4を得た。LCMS m/z=275.2[M+H]+。
BB-2-4(0.5g,1.82mmol,1eq)、モレキュラーシーブ(4Å,0.05g)及びキシレン(15mL)をマイクロ波反応管に加え、密閉した後、マイクロ波反応装置内、150℃で4時間撹拌した。LCMSによってモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液に30mLのアセトニトリルを添加し、濾過し、濾液を減圧濃縮してBB-2-5を得た。LCMS m/z=257.1[M+H]+。
21℃の条件下で、BB-2-5(1g,3.90mmol,1eq)のテトラヒドロフラン溶液(50mL)に、水酸化リチウム一水和物(654.96mg,15.61mmol,4eq)の水溶液(15mL)を加え、さらに12時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液に15mLの水を添加し、酢酸エチル(30mL)で抽出し、得られた水相を2N塩酸水溶液でpHが約3になるまで調整し、凍結乾燥してBB-2を得た。LCMS m/z=227.0[M-H]-。
BB-3-2(20.00g,97.46mmol,1.00eq)をDMF(50mL)に溶解させ、NaH(8.19g,204.67mmol,60%純度,2.10eq)のDMF懸濁液(150mL)に滴下した。その後、化合物BB-3-1(13.75g,97.46mmol,10.26mL,1.00eq)を滴下した。該反応液を20℃で16時間撹拌した後、反応液に酢酸エチル(200mL)および水(200mL)を添加し、塩酸でpHが約1になるまで水相を調整し、酢酸エチル(200mL)で抽出し、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、化合物BB-3-3を得た。LCMS m/z=227.1[M-100+H]+。
水素雰囲気下(15psi)で化合物BB-3-3(20.00g,61.29mmol,1.00eq)と湿ったPd/C(5.00g,5%純度)とのメタノール溶液(200.00mL)を20℃で5時間撹拌した。反応終了後、反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮して化合物BB-3-4を得た。LCMS m/z=297.1[M+H]+。
化合物BB-3-4(10.00g,33.75mmol,1.00eq)とN,N-ジイソプロピルエチルアミン(4.36g,33.75mmol,5.89mL,1.00eq)とのDMSO(100.00mL)溶液に、HATU(12.83g,33.75mmol,1.00eq)を加えた。反応を20℃で2時間撹拌した。反応終了後、反応液に水(200mL)および酢酸エチル(200mL)を添加し、分液し、有機相を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1~1:1)により精製して、化合物BB-3-5を得た。LCMS m/z=223.1[M-56+H]+。
乾燥した250mL三つ口フラスコに、化合物BB-3-5(6.00g,21.56mmol,1.00eq)、DMF(60.00mL)および炭酸セシウム(10.54g,32.34mmol,1.50eq)を加えた後、ヨードメタン(3.06g,21.56mmol,1.34mL,1.00eq)を滴下し、内部温度を20℃未満に制御し、該反応を16℃で16時間撹拌した。反応終了後、水(100mL)、酢酸エチル(100mL)を系に添加し、分液し、有機相を飽和食塩水(100mL*2)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物BB-3-6を得た。LCMS m/z=237.1[M-56+H]+。
20℃で五硫化二リン(760.35mg,3.42mmol,363.80μL,5eq)のTHF(10mL)に炭酸ナトリウム(362.57mg,3.42mmol,5eq)を加えた後、さらに0.5時間撹拌し、BB-3-6(0.2g,684.16μμmol,1eq)を加え、反応を70℃の油浴で9.5時間撹拌した。LCMSによってモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液に20mLの酢酸エチルを添加し、濾過し、得られた濾液を減圧濃縮して化合物BB-3-7を得た。LCMS m/z=253.1[M-56+H]+。
BB-3-7(630.84mg,2.05mmol,1eq)を塩酸の酢酸エチル溶液(4M,20.00mL,39.11eq)に加え、23℃で1時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液を減圧濃縮して粗生成物を得た。その後、30mLの炭酸水素ナトリウム飽和水溶液を添加し、酢酸エチル(15mL*3)で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物BB-3を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=7.21-7.32(m,3H),7.15-7.19(m,1H),4.40(dd,J=9.92,6.62Hz,1H),4.10(dd,J=11.36,9.81Hz,1H),3.77-3.94(m,4H);LCMS m/z=209.1[M+H]+。
BB-3-2(13.13g,63.98mmol,1eq)のDMF(100mL)に、NaH(5.12g,127.96mmol,60%純度,2eq)を0℃で加え、さらに1時間撹拌した後、BB-4-1(10g,70.38mmol,1.1eq)を加え、28℃で9時間撹拌した。LCMSによってモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液を1000mLの水に注ぎ、酢酸エチル(300mL*4)で抽出し、得られた水相を2N塩酸でpHが約5になるまで調整し、その後、酢酸エチル(300mL*5)で抽出し、有機相を合わせ、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、化合物BB-4-2を得た。LCMS m/z=326.0[M-H]-。
23℃の条件下で、BB-4-2(20.00g,61.11mmol,1eq)のメタノール溶液(200mL)に、湿ったPd/C(10g,30.55mmol,5%純度)を加え、水素雰囲気下(15psi)で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液を濾過し、得られた濾液を減圧濃縮して、化合物BB-4-3を得た。LCMS m/z=298.1[M+H]+。
23℃でBB-4-3(16.00g,53.82mmol,1eq)の酢酸エチル溶液(400mL)に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(20.87g,161.45mmol,28.12mL,3eq)、トリ-n-ブチルリン酸無水物(68.49g,107.63mmol,64.01mL,50%純度の酢酸エチル溶液,2eq)を加えた後、さらに2時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。飽和食塩水で反応液(200mL*2)を洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1~1:1)により分離して、化合物BB-4-4を得た。LCMS m/z=224.1[M-56+H]+。
20℃で、BB-4-4(1g,3.58mmol,1eq)のDMF(30mL)に、炭酸セシウム(1.40g,4.30mmol,1.2eq)、ヨードメタン(609.86mg,4.30mmol,267.48μL,1.2eq)を加えた後、さらに1時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液を100mLの水に注ぎ、酢酸エチル(30mL*5)で抽出し、有機相を合わせ、50mLの飽和食塩水で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、化合物BB-4-5を得た。LCMS m/z=238.1[M-56+H]+。
20℃で、五硫化二リン(3.79g,17.05mmol,10eq)のテトラヒドロフラン溶液(30mL)に、炭酸ナトリウム(1.81g,17.05mmol,10eq)を加えた後、さらに0.5時間撹拌し、その後、BB-4-5(0.5g,1.70mmol,1eq)を加え、反応を70℃の油浴で9.5時間撹拌した。LCMSによって、原料がほぼ完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液を濾過して濾液をを得た。濾液に50mLの酢酸エチルを添加し、30mLの飽和食塩水で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1~1:1)により分離して、化合物BB-4-6を得た。LCMS m/z=310.3[M+H]+。
BB-4-6(0.6g,1.94mmol,1eq)に、塩酸の酢酸エチル溶液(4M,20mL,41.25eq)を加え、23℃で1時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液を減圧濃縮して粗生成物を得た。30mLの飽和炭酸水素ナトリウム溶液を添加し、酢酸エチル(20mL*3)で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物BB-4を得た。LCMS m/z=210.1[M+H]+。
25℃で、BB-4-4(0.1g,358.05μmol,1eq)のテトラヒドロフラン(5mL)に、重水素化ヨードメタン(101.64mg,716.10μmol,43.62μL,2eq)、炭酸セシウム(349.98mg,1.07mmol,3eq)を加えた後、さらに2時間撹拌した。反応液に酢酸エチル(20mL)を添加し、飽和食塩水(10mL)で洗浄し、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をメチルtert-ブチルエーテル(5mL)でスラリー化し、精製して化合物BB-5-1を得た。LCMS m/z=297.2[M+H]+。
30℃で、五硫化二リン(2.25g,10.12mmol,1.08mL,10eq)のテトラヒドロフラン(10mL)に、炭酸ナトリウム(1.07g,10.12mmol,10eq)を加え、0.5時間撹拌した後、BB-5-1(0.3g,1.01mmol,1eq)を加え、70℃の油浴で10時間撹拌した。反応液に酢酸エチル(20mL)を添加し、セライトで濾過し、濾液を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1~1:1)により分離し、精製して化合物BB-5-2を得た。LCMS m/z=312.9[M+H]+。
28℃で、BB-5-2(0.12g,384.12μmol,1eq)をHCl/EtOAc(4M,5.69mL,59.27eq)に加え、1時間撹拌した。反応液を減圧濃縮して化合物BB-5を得た。LCMS m/z=213.1[M+H]+。
25℃の条件下で、BB-6-1(2g,14.27mmol,1eq)とCs2CO3(5.11g,15.70mmol,1.1eq)とのDMF溶液(20mL)に、臭化ベンジル(2.44g,14.27mmol,1.70mL,1eq)を加えた後、さらに3時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的MSが現れた。反応液を水(100mL)に注ぎ、酢酸エチル(30mL*5)で抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1~1:1)により分離して、BB-6-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=7.58(d,J=1.00Hz,1H),7.55(s,1H),7.33-7.40(m,3H),7.14-7.20(m,2H),5.13(s,2H),4.34(q,J=7.20Hz,2H),1.36(t,J=7.20Hz,3H);LCMS m/z=231.1[M+1]+。
28℃の条件下で、BB-6-2(1.50g,6.51mmol,1eq)のテトラヒドロフラン溶液(26mL)に、水酸化リチウム一水和物(2.19g,52.11mmol,8eq)の水溶液(26mL)を加えた後、さらに12時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的MSが現れた。反応液を減圧濃縮して、溶媒を除去した後、水(20mL)を添加し、2N塩酸でpHが約2になるまで調整し、析出した固体を濾過してBB-6を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=7.87(d,J=2.20Hz,2H),7.27-7.43(m,5H),5.24(s,2H);LCMS m/z=201.1[M-1]-。
0℃の条件下で、BB-7-1(5g,29.65mmol,1eq)のトルエン溶液(70mL)に、シュウ酸ジエチル(4.77g,32.62mmol,4.45mL,1.1eq)、ナトリウムエトキシド(2.62g,38.55mmol,1.3eq)を加え、20℃で12時間反応した。LCMS分析によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的ピークが現れた。反応液を減圧濃縮して、酢酸エチル(200mL)で希釈し、飽和食塩水(200mL)で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。精製せずに次の工程でそのまま使用した。化合物BB-7-2を得た。1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ=6.87-7.19(m,4H),5.78(br s,1H),4.04(br s,2H),2.92-3.44(m,2H),1.18(br s,3H);LCMS m/z=269.1[M+1]+。
BB-7-2(7g,26.05mmol,1eq)のエタノール溶液(200mL)に、塩酸ヒドロキシルアミン(1.81g,26.05mmol,1eq)を加え、80℃で12時間反応した。LCMS分析によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的ピークが現れた。反応液を減圧濃縮してBB-7-3を得た。1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ=7.33(m,2H); 7.20(m,2H),6.35(s,1H),4.41-4.47(m,2H),4.13(q,J=7.20Hz,2H),1.30-1.33(t,3H);LCMS m/z=266.1[M+1]+。
BB-7-3(4g,15.06mmol,1eq)のエタノール溶液(100mL)に、Pd/C(4g,5%純度)を加え、H2雰囲気下(30psi)、30℃で12時間反応した。LCMS分析によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的ピークが現れた。反応液をセライトで濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ジクロロメタン:メタノール=10:1)により分離して、化合物BB-7-4を得た。LCMS m/z=232.1[M+1]+。
BB-7-4(0.5g,2.16mmol,1eq)のテトラヒドロフラン(15mL)と水との溶液(5mL)に、水酸化リチウム一水和物(453.17mg,10.80mmol,5eq)を加え、30℃で2時間反応した。TLC(石油エーテル:酢酸エチル=5:1)によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、新しいスポットが現れた。反応液を減圧濃縮して有機溶媒を除去し、2M塩酸溶液でpHを2程度になるまで調整し、析出した白色固体を濾過し、フィルターケーキを回収して、BB-7を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=7.24-7.41(m,5H),6.57(s,1H),4.22(s,2H)。
BB-8-1(2g,15.74mmol,1eq)のDMF(32mL)に、炭酸セシウム(6.67g,20.46mmol,1.3eq)、臭化ベンジル(3.23g,18.88mmol,2.24mL,1.2eq)を加え、該反応を20℃で2時間撹拌した。LCMS分析によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的ピークが現れた。反応液に水(30mL)および酢酸エチル(30mL)を添加し、分液し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1-3:1)により分離して、BB-8-2を得た。1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ=8.11(s,1H),7.34-7.43(m,3H),7.27-7.33(m,2H),5.43(s,2H),4.00(s,3H);LCMS m/z=218.1[M+1]+。
BB-8-2(0.3g,1.38mmol,1eq)を、テトラヒドロフラン(12mL)および水(4mL)に溶解させ、水酸化リチウム一水和物(173.85mg,4.14mmol,3eq)を加え、該反応を25℃で12時間撹拌した。LCMS分析によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的ピークが現れた。反応液に酢酸エチル(10mL)を添加し、水相を1M塩酸でpH=3-4に調整し、析出した固体を濾過してBB-8を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=13.25(br s,1H),8.78(s,1H),7.27-7.40(m,5H),5.47(s,2H);LCMS m/z=204.1[M+1]+。
0℃で、NaNO2(662.86mg,9.60mmol,1.5eq)を、BB-9-1(1g,6.40mmol,1eq)のH2SO4(1M,12.80mL,2eq)と水との溶液(10mL)に加え、0℃で0.5時間撹拌し、CuCl2(1.72g,12.80mmol,2eq)を濃塩酸(15mL)に溶解させ、上記の混合液に加え、さらに0℃で1.5時間撹拌した。LCMS分析によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的ピークが現れた。反応液に酢酸エチル(10mL)を添加し、水相を酢酸エチル(15mL*2)で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1~1:2)により分離し、精製してBB-9-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3)=4.46(q,J=21.60Hz,2H),1.38(t,J=14.40Hz,3H);LCMS m/z=176.0[M+1]+。
BB-9-2(760.78mg,4.33mmol,1eq)のDMF(5mL)に、炭酸セシウム(1.84g,5.63mmol,1.3eq)、3-シアノベンジルブロミド(889.31mg,5.20mmol,617.58μL,1.2eq)を加え、該反応を20℃で2時間撹拌した。LCMS分析によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的ピークが現れた。反応液に水(10mL)を添加し、酢酸エチル(10mL*2)で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=20:1~2:1)により分離して、BB-9-3を得た。LCMS m/z=291.0[M+1]+。
BB-9-3(0.08g,301.10μmol,1eq)をテトラヒドロフラン(6mL)と水(2mL)に溶解させ、水酸化リチウム一水和物(37.90mg,903.29μmol,3eq)を加え、2℃で12時間反応した。LCMS分析によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的ピークが現れた。反応液に酢酸エチル(5mL)を添加し、水相を1M塩酸でpHが約6になるまで調整し、凍結乾燥してBB-9を得た。LCMS m/z=263.1[M+1]+。
BB-1-1(3g,19.98mmol,1eq)のジクロロメタン溶液(90mL)に、トリエチルアミン(6.06g,59.93mmol,8.34mL,3eq)を加え、クロロオキソ酢酸エチル(3.55g,25.97mmol,2.91mL,1.3eq)を加え、25℃で5時間撹拌した。LCMS分析によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的ピークが現れた。反応液を水(60mL)でクエンチし、ジクロロメタン(60mL*3)で抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル: 酢酸エチル=5:1-1:1)により精製して、BB-10-1を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ=10.73(br s,1H),10.30(br s,1H),7.22-7.34(m,5H),4.26(q,J=7.00Hz,2H),3.51(s,2H),1.27(t,J=7.10Hz,3H);LCMS m/z=251.1[M+1]+。
BB-10-1(529.69mg,2.12mmol,1eq)のアセトニトリル溶液(15mL)に、オキシ塩化リン(486.82mg,3.17mmol,295.04μL,1.5eq)を加え、該反応を90℃で2時間撹拌した。反応液を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(20mL)に注ぎ、5分間激しく撹拌し、酢酸エチル(20mL)で2回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮してBB-10を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=7.23-7.10(m,5H),4.36-4.29(m,2H),4.12(s,2H),1.34-1.23(m,3H);LCMS m/z=233.1[M+1]+。
BB-11-1(5g,26.01mmol,1eq)の氷酢酸(39mL)とテトラヒドロフラン(150mL)に、カルバジン酸tert-ブチル(17.19g,130.07mmol,5eq)を加え、55℃で12時間反応した。室温(25℃)まで冷却し、NaBH3CN(8.17g,130.07mmol,5eq)をバッチで加え、55℃に昇温し、さらに12時間反応した。室温まで冷却し、反応液に飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えてpH=7~8に調整し、酢酸エチル(150mL*2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮してBB-11-2を得た。LCMS m/z=221.1[M-56+1]+。
11-2(7g,25.33mmol,1eq)をHCl/EtOAc(4M,60mL)に加え、25℃で2時間反応した。反応液を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えてpH=7~8に調整し、酢酸エチル(50mL*2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物BB-11-3を得た。LCMS m/z=177.1[M+1]+。
BB-11-3(4g,22.70mmol,1eq)のエタノール(50mL)溶液に2-エトキシ-2-イミノ酢酸エチル(16.47g,113.50mmol,5eq)を加え、85℃で12時間反応した。反応液を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー(ジクロロメタン:メタノール=10:0~5:1)により分離し、精製してBB-11-4を得た。LCMS m/z=276.2[M+1]+。
25℃で、BB-11-4(1.3g,4.72mmol,1eq)をオキシ塩化リン(30mL)に加え、120℃で3時間反応した。反応液を室温まで冷却し、温水(150mL)にゆっくりと注ぎ、飽和炭酸水素ナトリウムでpH=7~8に調整し、酢酸エチル(100mL*2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー(ジクロロメタン:メタノール=10:0~10:1)により分離し、精製してBB-11-5を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ=7.34-7.43(m,3H),7.21-7.28(m,2H),5.58(br t,J=7.12Hz,1H),4.27(br dd,J=6.80, 5.04Hz,2H),2.88-3.28(m,4H),1.26(br t,J=7.12Hz,3H)。LCMS m/z=258.2[M+1]+。
化合物BB-11を超臨界流体クロマトグラフィー(Chiralcel AD-3 3μm, 0.46cm id x 15m L;移動相:A for SFC CO2 and B for MeOH(0.05%IPAm);Gradient: B in A from 10% to 40% in 6 minutes;Flow rate:4.0mL/min;Wavelength: 220nm)により分析した。BB-11AおよびBB-11Bの保持時間は、それぞれ2.217min、2.427minであり;超臨界流体クロマトグラフィー(カラム:DAICEL CHIRALPAK AD(250mm*50mm,10μm);移動相:[0.1%NH3H2O MEOH];MeOH%:30%-30%,2.56min)により分離してBB-11AおよびBB-11Bを得た。化合物BB-11Aを超臨界流体クロマトグラフィー(Chiralcel AD-3 3μm,0.46cm id x 15m L;移動相:Aは超臨界二酸化炭素であり、Bはメタノール(0.05%IPAmを含む)であり;グラジエント:Bの比例は10%から40%になり、合計6分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)の分析により、BB-11Aの保持時間が2.235minであり、BB-11Bの保持時間が2.439minであることが分かった。
25℃で、BB-12-1のエタノール(100mL)溶液に、I2(11.40g,44.92mmol,9.05mL,1eq)、Ag2SO4(14.01g,44.92mmol,7.61mL,1eq)を加え、さらに12時間撹拌した。反応をセライトで濾過し、濾液に水(150mL)および酢酸エチル(150mL)を添加し、分液し、水相を酢酸エチル(50mL*2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を酢酸エチルに溶解させ、塩酸/酢酸エチル(4M)を添加して常温で0.5h撹拌し、濾過し、フィルターケーキを回収し、フィルターケーキに酢酸エチル(50mL)を添加し、飽和炭酸水素ナトリウムを加えてpH=8~9に調整し、分液し、水相を酢酸エチル(25mL*2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮(水ポンプ、45℃)して粗生成物を得た。カラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1~1:1)精製し、BB-12を得た。1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ=7.22(dt,J=7.68, 2.37Hz,1H),6.83(ddd,J=10.85,8.22,2.76Hz,1H),3.97(br s,2H)。
BB-9-2(760.78mg,4.33mmol,1eq)のDMF(5mL)に、炭酸セシウム(1.84g,5.63mmol,1.3eq)、臭化ベンジル(889.31mg,5.20mmol,617.58μL,1.2eq)を加え、該反応を20℃で2時間撹拌した。LCMS分析によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的ピークが現れた。反応液に水(10mL)を添加し、酢酸エチル(10mL*2)で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=20:1~2:1)により分離して、BB-13-1を得た。1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ=7.34-7.41(m,3H),7.29-7.34(m,2H),5.42(s,2H),4.47(q,J=22.40Hz,2H),1.43(t,J=15.60Hz,3H);LCMS m/z=266.0[M+1]+。
BB-13-1(0.08g,301.10μmol,1eq)をテトラヒドロフラン(6mL)および水(2mL)に溶解させ、水酸化リチウム一水和物(37.90mg,903.29μmol,3eq)を加え、25℃で12時間反応した。LCMS分析によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的ピークが現れた。反応液に5mLの酢酸エチルを添加し、水相を1M塩酸でpHが約6になるまで調整し、凍結乾燥してBB-13を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=7.32-7.42(m,3H),7.25-7.30(m,2H),5.48(s,2H);LCMS m/z=238.1[M+1]+。
化合物BB-3(0.58g,2.78mmol,1eq)、化合物BB-1(849mg,4.18mmol,1.5eq)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(1.26g,9.75mmol,1.70mL,3.5eq)を酢酸エチル(10mL)に溶解させた後、トリ-n-ブチルリン酸無水物(4.43g,6.96mmol,4.14mL,50%純度の酢酸エチル溶液、2.5eq)を滴下し、その後、25℃で12時間撹拌した。反応液に20mLの水を添加し、酢酸エチル(5mL*2)で抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水(10mL)で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムで精製し、SFC(Chiralcel OJ-3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:Aは超臨界二酸化炭素であり、Bはメタノール(0.05% IPAmを含む)であり;グラジエント:Bの比例は10%から40%になり、合計5分間;流量:4.0mL/min;波長h:220nm)で分離し、化合物WX001を得た。1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ=8.71(d,J=7.53Hz,1H),7.20-7.38(m,9H),5.15-5.25(m,1H),4.67(dd,J=6.53,9.54Hz,1H),4.29(dd,J=9.79,10.79Hz,1H),4.21(s,2H),3.89(s,3H);LCMS m/z=394.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A :CO2 ,B:MeOH(0.05%IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)の分析により、ee%=96.36%である。
BB-3(0.06g,288.07μmol,1eq)およびBB-2(131.48mg,576.15μmol,2eq)のDMF溶液(10mL)に、トリ-n-ブチルリン酸無水物(458.30mg,720.19μmol,428.32μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(111.69mg,864.22μmol,150.53μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液に20mLの酢酸エチルを添加し、15mLの飽和食塩水で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 150mm*25mm*5μm;移動相:[水(10mM NH4HCO3)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,10.5min)により分離し、精製して、化合物WX002を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.60(br d,J=8.16Hz,1H),7.69-7.81(m,2H),7.51-7.65(m,3H),7.36-7.46(m,2H),7.25-7.33(m,1H),4.97(dt,J=10.58,7.72Hz,1H),4.35-4.52(m,2H),4.21(s,2H),3.79(s,3H);LCMS m/z=419.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2 ,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(60mg,286.71μmol,1eq)およびBB-1(87.39mg,430.07μmol,1.5eq)のDMF溶液(10mL)に、トリ-n-ブチルリン酸無水物(456.13mg,716.78μmol,426.29μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(111.16mg,860.13μmol,149.82μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液に30mLの酢酸エチルを添加し、20mLの飽和食塩水で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 150mm*25mm*5μm;移動相:[水(10mM NH4HCO3)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,10.5min)により分離し、精製して、化合物WX003を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.63(br s,1H),8.46(dd,J=4.63,1.54Hz,1H),7.79(d,J=7.94Hz,1H),7.48(dd,J=8.05,4.74Hz,1H),7.23-7.37(m,5H),5.01(dt,J=10.80,7.28Hz,1H),4.43-4.72(m,2H),4.14(br s,2H),3.80(s,3H);LCMS m/z=395.2[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A :CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=96.3%である。
BB-4(60mg,286.71μmol,1eq)およびBB-2(130.86mg,573.43μmol,2eq)のDMF溶液(10mL)に、トリ-n-ブチルリン酸無水物(456.13mg,716.78μmol,426.29μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(111.16mg,860.14μmol,149.82μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液に30mLの酢酸エチルを添加し、20mLの飽和食塩水で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 15mm*25mm*5μm;移動相:[水(10mM NH4HCO3)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,10.5min)により分離し、精製して、化合物WX004を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.73(br s,1H),8.46(d,J=4.85Hz,1H),7.69-7.86(m,3H),7.44-7.65(m,3H),5.01(dt,J=11.08,7.14Hz,1H),4.48-4.68(m,2H),4.22(s,2H),3.80(s,3H);LCMS m/z=420.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-5(100mg,471.06μmol,1eq)およびBB-1(130.86mg,573.43μmol,1.2eq)のDMF溶液(10mL)に、トリ-n-ブチルリン酸無水物(599.53mg,942.12μmol,560.31μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(182.64mg,1.41mmol,246.15μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液に酢酸エチル(30mL)を添加し、飽和食塩水(20mL)で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX005を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.62(br s,1H),8.46(dd,J=1.75, 4.82Hz,1H),7.79(dd,J=1.32,7.89Hz,1H),7.48(dd,J=4.82,7.89Hz,1H),7.20-7.37(m,5H),5.01(td,J=7.34, 11.18Hz,1H),4.60(br s,1H),4.49-4.55(m,1H),4.14(br s,2H);LCMS m/z=398.2[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)およびBB-1(11.60mg,57.34μmol,1.2eq)のDMF溶液(1mL)に、トリ-n-ブチルリン酸無水物(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液をそのまま分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX006を得た。1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ=9.01(br s,1H),8.34-8.46(m,2H),7.51-7.64(m,2H),7.43(br s,3H),7.28-7.31(m,2H),7.22-7.26(m,1H),5.29(br s,2H),5.20(br d,J=7.02Hz,1H),4.58-4.69(m,2H),3.91(s,3H);LCMS m/z=394.2[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)およびBB-7(11.65mg,57.35μmol,1.2eq)のDMF溶液(1mL)に、トリ-n-ブチルリン酸無水物(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液をそのまま分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX007を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.98(d,J=8.33Hz,1H),8.46(dd,J=1.32,4.82Hz,1H),7.77(dd,J=1.75,7.89Hz,1H),7.47(dd,J=4.60,8.11Hz,1H),7.22-7.40(m,5H),6.54(s,1H),5.00(td,J=7.45,11.40Hz,1H),4.59-4.70(m,1H),4.48-4.56(m,1H),4.22(s,2H),3.79(s,3H);LCMS m/z=395.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)およびBB-8(15.06mg,57.35μmol,1.2eq)のDMF溶液(1mL)に、トリ-n-ブチルリン酸無水物(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液をそのまま分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX008を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.85(d,J=7.89Hz,1H),8.46(d,J=3.07Hz,1H),7.75-7.89(m,3H),7.61(d,J=4.82Hz,2H),7.48(dd,J=4.82,7.89Hz,1H),5.58(s,2H),4.94-5.06(m,1H),4.65(t,J=10.74Hz,1H),4.45-4.57(m,1H),3.80(s,3H);LCMS m/z=454.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)およびBB-9(11.65mg,57.35μmol,1.2eq)のDMF溶液(1mL)に、トリ-n-ブチルリン酸無水物(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液をそのまま分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX009を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.84(s,1H),8.71(d,J=7.89Hz,1H),8.46(dd,J=1.53,4.60Hz,1H),7.79(dd,J=1.53,8.11Hz,1H),7.48(dd,J=4.82,7.89Hz,1H),7.26-7.42(m,5H),5.49(s,2H),4.94-5.08(m,1H),4.48-4.63(m,2H),3.80(s,3H);LCMS m/z=395.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)およびWX010-1(11.65mg,57.35μmol,1.2eq)のDMF溶液(1mL)に、トリ-n-ブチルリン酸無水物(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液をそのまま分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX010を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.75(d,J=8.33Hz,1H),8.69(s,1H),8.46(dd,J=1.53,4.60Hz,1H),7.79(dd,J=1.53,8.11Hz,1H),7.48(dd,J=4.82,7.89Hz,1H),7.30-7.41(m,5H),5.65(s,2H),4.97-5.10(m,1H),4.58-4.68(m,1H),4.47-4.57(m,1H),3.80(s,3H);LCMS m/z=395.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)およびBB-13(14.76mg,62.13μmol,1.2eq)のDMF溶液(1mL)に、トリ-n-ブチルリン酸無水物(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液をそのまま分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX011を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.83(d,J=7.89Hz,1H),8.41-8.49(m,1H),7.77(dd,J=1.32, 7.89Hz,1H),7.46(dd,J=4.82,7.89Hz,1H),7.30-7.42(m,3H),7.26(d,J=7.02Hz,2H),5.48(s,2H),4.98(td,J=7.13,11.62Hz,1H),4.59-4.67(m,1H),4.49(dd,J=6.80, 9.87Hz,1H),3.78(s,3H);LCMS m/z=429.0[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(15mg,71.68μmol,1eq)およびBB-10(33.29mg,143.36μmol,2eq)のトルエン溶液(3mL)に、トリメチルアルミニウム(2M,53.76μL,1.5eq)を加えた後、25℃で1時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液をそのまま分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX012を得た。LCMS m/z=396.2[M+H]+。
LiOH・H2O(245.59mg,5.85mmol,3eq)を、BB-11B(501.93mg,1.95mmol,1eq)のテトラヒドロフラン(9mL)と水(3mL)との溶液に加え、25℃で2時間反応させた。反応液に水(10mL)および酢酸エチル(10mL)を添加し、分液し、水相を酢酸エチル(10mL*2)で抽出し、水相を1M HClでpH=5~6に調整し、酢酸エチル(10mL*2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮(水ポンプ、45℃)してWX013-1を得た。LCMS m/z=230.2[M+1]+。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=12.75-13.57(m,1H),7.33-7.44(m,3H),7.18-7.28(m,2H),5.57(dd,J=7.97,6.21Hz,1H),3.06-3.22(m,2H),2.94-3.03(m,1H),2.53-2.61(m,1H)。
N,N-ジイソプロピルエチルアミン(23.16mg,179.20μmol,31.21μL,2.5eq)、WX013-1(24.65mg,107.52μmol,1.5eq)を、BB-1(15mg,71.68μmol,1eq)のDMF(1.5mL)溶液に加え、さらにプロピルホスホン酸無水物(T3P,68.42mg,107.52μmol,63.94μL,50% purity, 1.5eq)を加え、25℃で1時間反応させ、反応液を濾過し、濾液を回収した。分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離して、WX013を得た。LCMS m/z=421.1[M+1]+。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.68(d,J=8.04Hz,1H),8.46(dd,J=4.72,1.32Hz,1H),7.78(dd,J=8.04,1.38Hz,1H),7.47(dd,J=8.04,4.64Hz,1H),7.32-7.43(m,3H),7.24(br d,J=6.65Hz,2H),5.44-5.68(m,1H),5.00(dt,J=11.40,7.40Hz,1H),4.42-4.68(m,2H),3.79(s,3H),2.90-3.23(m,4H)。
WX014-1をTHF(100mL)とMeOH(100mL)との溶液に溶解させ、反応フラスコを氷水浴(0℃)に入れ、反応フラスコに、トリメチルシリルジアゾメタン(2M,47.89mL,2.1eq)を加え、25℃まで自然に昇温し、2時間撹拌した。反応液が淡黄色になるまで氷酢酸を滴下し、減圧濃縮して化合物WX014-2を得た。
25℃の条件下、トリフェニルホスフィン(14.30g,54.53mmol,1.2eq)およびイミダゾール(3.71g,54.53mmol,1.2eq)をジクロロメタン(120mL)に溶解させ、I2(13.84g,54.53mmol,10.98mL,1.2eq)を上記の混合溶液にゆっくりと添加し、10分間撹拌し、WX014-2のDCM(80mL)溶液を上記の溶液に添加し、25℃で12時間反応した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1~1:1)により分離して、精製し、WX014-3を得た。LCMS m/z=244.1[M-100+1]+。1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ=5.10(br d,J=4.82Hz,1H),4.35(br d,J=3.96Hz,1H),3.77(s,3H),3.18(t,J=7.46Hz,2H),2.30-2.49(m,1H),2.18(dq,J=14.32,7.22Hz,1H),1.43-1.47(m,9H)。
1,2-ジブロモエタン(82.12mg,437.12μmol,32.98μL,0.3eq)を亜鉛粉末(285.83mg,4.37mmol,3eq)のDMF(2mL)に加え、60℃で30分間撹拌し、室温(25℃)まで冷却し、反応フラスコに、トリメチルクロロシラン(9.50mg,87.42μmol,11.10μL,0.06eq)を加え、25℃で30分間撹拌し、WX014-2のDMF(2mL)溶液を上記の溶液に加え、25℃で30分間反応した。30分間静置させ、上部のエマルジョンを取り出し、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(44.08mg,48.14μmol,0.05eq)、トリ-o-メチルフェニルホスフィン(58.61mg,192.55μmol,0.2eq)およびBB-12のDMF(2mL)溶液にゆっくりと加え、20℃で1時間反応させた。反応液に水(5mL)およびメチルtert-ブチルエーテル(5mL)を添加し、分液し、水相をメチルtert-ブチルエーテル(5mL*2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮してWX014-4を得た。LCMS m/z=289.1[M-56+1]+。
LiOH・H2O(219.33mg,5.23mmol,3eq)を、WX014-4のテトラヒドロフラン(15mL)と水(15mL)との溶液に加え、25℃で2時間反応させた。反応液に、10mLの水および10mLの酢酸エチルを添加し、分液し、水相を酢酸エチル(10mL*2)で抽出し、水相を1M HClでpH=5~6に調整し、酢酸エチル(10mL*2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮してWX014-5を得た。LCMS m/z=275.1[M-56+1]+。
プロピルホスホン酸無水物(895.80mg,1.41mmol,837.20μL,50%purity,1.5eq)を、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(303.22mg,2.35mmol,408.65μL,2.5eq)、WX014-5のDMF(20mL)溶液に加え、25℃で2時間反応させた。反応液に、水(15mL)および酢酸エチル(15mL)を添加し、分液し、水相を酢酸エチル(15mL*2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1~1:1)により精製して、WX014-6を得た。1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ=7.40(br s,1H),6.76-6.87(m,2H),5.46(br d,J=7.46Hz,1H),4.22-4.37(m,2H),2.88-3.03(m,1H),2.63-2.73(m,2H),1.42(s,9H)。
20℃で、ローソン試薬(77.70mg,192.12μmol,1.5eq)をWX014-6(40mg,128.08μmol,1eq)のトルエン(5mL)溶液に加え、70℃で12時間反応させ、反応液を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1~1:1)により分離し、精製して、WX014-7を得た。LCMS m/z=273.1[M-56+1]+。
HCl/EtOAc(4M,2mL)を、WX014-7の酢酸エチル(3mL)溶液に加え、25℃で2時間反応させた。反応液を減圧濃縮(水ポンプ、40℃)して粗生成物WX014-8を得た。LCMS m/z=229.2[M+1]+。
DIPEA(18.31mg,141.66μmol,24.67μL,2.5eq)、T3P(54.09mg,84.99μmol,50.55μL,50% purity,1.5eq)を、WX014-8(15mg,56.66μmol,1eq,HCl)、BB-1(14.97mg,73.66μmol,1.3eq)のDMF(2mL)に加え、25℃で2時間反応させた。反応液に水(5mL)および酢酸エチル(5mL)を添加し、分液し、水相を酢酸エチル(5mL*2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離して、WX014を得た。LCMS m/z=414.2[M+1]+。1H NMR(400 MHz,CD3OD) δ=7.21-7.37(m,5H),6.97-7.13(m,2H),4.71(br d,J=4.14Hz,1H),4.18(br s,2H),2.84-2.96(m,1H),2.64-2.83(m,2H),2.17(td,J=11.67,7.78Hz,1H)。
N,N-ジメチルホルムアミド(10mL)を入れた丸底フラスコに、BB-3(20mg,96.02μmol,1.1eq)、DIPEA(23.69mg,183.32μmol,31.93μL,2.1eq)を加えて溶解させた後、BB-14(21.24mg,87.30μmol,1eq)、T3P(55.55mg,87.30μmol,51.92μL,50%純度,1eq)をさらに加え、25℃で撹拌しながら12時間反応させた。LCMSによって、原料がほぼ完全に消費されたことをモニタリングした。反応液を5mL程度まで減圧濃縮し、HPLC(カラム:Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,8min)により分離して、精製して、生成物WX015を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.78(br d,J=7.5Hz,1H),7.43-7.35(m,5H),7.35-7.26(m,4H),5.82(s,2H),5.21(td,J=6.9,11.0Hz,1H),4.71(dd,J=6.5,9.5Hz,1H),4.33-4.21(m,1H),3.87(s,3H);LCMS m/z=395.1[M+1]+。
丸底フラスコに、DMSO(10mL)を加えた後、WX016-1(1.31g,8.44mmol,1eq)、K2CO3(1.40g,10.13mmol,1.2eq)および臭化ベンジル(1.59g,9.29mmol,1.10mL,1.1eq)をゆっくりと加え、25℃で12時間連続的に撹拌した。反応終了後、反応液に水(50mL)を添加し、酢酸エチル(30mL×2)で2回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(5mL×2)で洗浄し、減圧濃縮して粗生成物を得た。カラムクロマトグラフィー(石油エーテル酢酸エチル=100:1~1:1)により分離して、精製して、WX016-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=7.39-7.30(m,3H),7.19(dd,J=1.8,7.6Hz,2H),5.39(s,2H),4.49(q,J=7.1Hz,2H),2.43(s,3H),1.44(t,J=7.1Hz,3H);LCMS m/z=246.1[M+1]+。
丸底フラスコに、THF(7.5mL)およびH2O(2.5mL)を加えた後、WX016-2(1g,4.08mmol,1eq)およびLiOH・H2O(513.26mg,12.23mmol,3eq)をゆっくりと加え、25℃で撹拌しながら2時間反応させ、反応液を減圧濃縮し、2N塩酸を滴下してpH酸性に調整し、濾過してフィルターケーキを回収し、目的化合物WX016-3を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=7.42-7.28(m,3H),7.25-7.19(m,2H),5.40(s,2H),2.56(s,3H);LCMS m/z=217.9[M+1]+。
丸底フラスコに、N,N-ジメチルホルムアミド(1mL)、WX016-3(80mg,368.28μmol,1eq)およびBB-4(77.07mg,368.28μmol,1eq)を加えた後、T3P(351.54mg,552.43μmol,328.55μL,50%純度,1.5eq)およびDIPEA(142.79mg,1.10mmol,192.45μL,3eq)を加え、25℃で5時間連続的に撹拌した。濃縮した後、粗生成物を分取HPLC(カラム:Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,8min)により分離し、化合物WX016を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.72(br d,J=7.3Hz,1H),8.37(dd,J=1.4, 4.6Hz,1H),7.56(dd,J=1.3, 8.0Hz,1H),7.38-7.27(m,4H),7.18(br d,J=6.0Hz,2H),5.36(s,2H),5.23(td,J=6.8, 11.0Hz,1H),4.78(dd,J=6.5, 9.5Hz,1H),4.32(dd,J=9.8, 11.0Hz,1H),3.93(s,3H),2.41(s,3H);LCMS m/z=409.1[M+1]+。
25℃で、反応フラスコに、水素化アルミニウムリチウム(629.99mg,16.60mmol,2eq)、THF(5mL)を加え、その後、WX017-1(1.08g,8.30mmol,1eq)のTHF(5mL)溶液をゆっくりと滴下し、35℃に昇温し、1時間連続的に撹拌した。6mLの飽和Na2SO4水溶液で反応をクエンチし、濾過し、酢酸エチル(10mL×3回)で洗浄し、有機相を合わせ、無水MgSO4で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~5:1)により精製して、化合物WX017-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=3.84(s,2H),2.01(d,J=2.5Hz,6H)。
反応フラスコに、WX017-2、DCM(10mL)、ピリジン(1.40g,17.70mmol,1.43mL,4.11eq)を加えた後、p-トルエンスルホニルクロリド(1.23g,6.46mmol,1.5eq)をゆっくりと加え、40℃に昇温し、24時間反応させた。TLC(石油エーテル:酢酸エチル=5:1)によって、新しいスポット(Rf=0.7)が現れた。反応液をそのまま減圧濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~30:1)により精製して、化合物WX017-3を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=7.78(d,J=8.3Hz,2H),7.35(d,J=8.0Hz,2H),4.24(s,2H),2.46(s,3H),1.99(d,J=2.3Hz,6H)。
25℃で、ナス型フラスコに、アセトニトリル(10mL)、WX017-3(500mg,1.85mmol,1.1eq)およびBB-8-1(213.72mg,1.68mmol,1eq)を加え、その後、K2CO3(278.88mg,2.02mmol,1.2eq)を加え、70℃に昇温し、48時間反応させた。反応液を濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラム(溶離液が石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:2)により分離し、精製して、化合物WX017-4を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.12(s,1H),4.57(s,2H),4.01(s,3H),2.05(d,J=2.5Hz,6H)。
25℃で、THF(2mL)を入れた丸底フラスコにWX017-4(100mg,444.01μmol,1eq)を加えて溶解させた後、LiOH・H2O(55.90mg,1.33mmol,3eq)のMeOH(1mL)溶液を滴下し、25℃で5時間反応させた。減圧濃縮した後、テトラヒドロフラン(5mL)で溶解させ、1Nの希塩酸でpH4に調整し、トルエン(5mL)を添加し、均一に混合し、溶媒を減圧下で蒸発乾固させて、WX017-5の粗生成物を得た。生成物を精製せずに次の工程でそのまま使用した。
25℃で、反応フラスコに、酢酸エチル(10mL)、WX017-5(207mg,588.09μmol,1eq)およびBB-4(143.52mg,588.09μmol,1eq)を加えて溶解させ、T3P(1.12g,1.76mmol,1.05mL,50% purity,3eq)およびDIPEA(228.02mg,1.76mmol,307.30μL,3eq)を加え、25℃で8時間反応させた。反応終了後、酢酸エチル(10mL)を添加し、水(10mL×3回)で洗浄し、飽和食塩水(10mL×1回)で洗浄し、減圧濃縮して粗生成物を得た。さらに、分取HPLC(カラム:Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm;移動相:[水(0.05%NH3H2O)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,8min)により分離して、化合物WX017を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.83(br d,J=6.8Hz,1H),8.37(dd,J=1.4, 4.6Hz,1H),8.08(s,1H),7.57(dd,J=1.3,8.0Hz,1H),7.29(dd,J=4.8,8.0Hz,1H),5.20(td,J=6.7,11.2Hz,1H),4.80(dd,J=6.4,9.4Hz,1H),4.54(s,2H),4.33(dd,J=9.8,11.0Hz,1H),3.94(s,3H),2.05(d,J=2.3Hz,6H);LCMS m/z=403.2[M+1]+。
N,N-ジメチルホルムアミド(10mL)を入れた丸底フラスコに、BB-4(200mg,955.71μmol,1.1eq)、DIPEA(235.80mg,1.82mmol,317.80μL,2.1eq)を加えて溶解させた後、BB-14(210.50mg,868.83μmol,1eq)、T3P(552.89mg,868.83μmol,516.72μL,50%純度,1eq)をさらに加え、25℃で撹拌しながら12時間反応させ、反応液を5mL程度まで減圧濃縮し、HPLC(カラム:Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,8min)により分離し、精製して、化合物WX018を得た。1HNMR(400MHz,CDCl3) δ=8.86(br d,J=6.8Hz,1H),8.38(dd,J=1.6, 4.6Hz,1H),7.69-7.27(m,7H),5.83(s,2H),5.20(td,J=6.7, 11.2Hz,1H),4.78(dd,J=6.3, 9.5Hz,1H),4.33(dd,J=9.7, 11.2Hz,1H),3.93(s,3H);LCMS m/z=396.1[M+1]+。
N,N-ジメチルホルムアミド(10mL)を入れた丸底フラスコに、BB-15(156.11mg,745.97μmol,1.1eq)、BB-4(150mg,678.16μmol,1eq)、T3P(431.55mg,678.16μmol,403.32μL,50%純度,1eq)、DIPEA(184.06mg,1.42mmol,248.06μL,2.1eq)を加えた後、25℃で撹拌しながら12時間反応させた。反応終了後、反応液を5mL程度まで減圧濃縮し、HPLC(カラム:Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,8min)により分離し、精製して、生成物WX019を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.81(br d,J=7.3Hz,1H),8.37(dd,J=1.5, 4.8Hz,1H),8.14(s,1H),7.56(dd,J=1.5, 8.0Hz,1H),7.41-7.27(m,3H),7.21-7.06(m,2H),5.45(s,2H),5.20(td,J=6.7, 11.2Hz,1H),4.78(dd,J=6.5, 9.5Hz,1H),4.31(dd,J=9.5, 11.0Hz,1H),3.93(s,3H);19F NMR(376MHz,CDCl3) δ= -109.59~-130.05(m,1F);LCMS m/z=413.1[M+1]+。
アセトニトリル(15mL)に、WX020-1(3g,23.60mmol,1eq)、2,6-ジフルオロベンジルブロミド(5.37g,25.96mmol,1.1eq)、K2CO3(3.91g,28.32mmol,1.2eq)を加えた後、撹拌しながら、50℃で12時間反応させた。TLCによって反応終了をモニタリングした後、反応液を濾過してK2CO3を除去し、フィルターケーキを酢酸エチル(15mL)で3回洗浄し、濾液に飽和食塩水(50mL)を添加し、有機相を抽出し、水相をEA(30mL)でさらに抽出し、有機相を合わせ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラム(溶離液が石油エーテル:酢酸エチル=100:1~100:100)により分離し、精製して、化合物WX020-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.17(s,1H),7.46-7.33(m,1H),7.04-6.91(m,2H),5.51(s,2H),4.13-3.85(m,3H)。
THF(30mL)を入れた丸底フラスコに、WX020-2(1g,3.95mmol,1eq)を加えて溶解させた後、LiOH・H2O(331.43mg,7.90mmol,2eq)のH2O(5mL)溶液をさらに加え、20℃で撹拌しながら2時間反応させた。反応液を1Mの希塩酸でpH6に調整し、さらに減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物WX020-3を得た。LCMS m/z=239.9[M+1]+。
N,N-ジメチルホルムアミド(10mL)を入れた丸底フラスコに、BB-4(192.49mg,919.82μmol,1.1eq)、WX020-3(200mg,836.20μmol,1eq)、T3P(532.12mg,836.20μmol,497.31μL,50%純度,1eq)、DIPEA(226.95mg,1.76mmol,305.86μL,2.1eq)を加えた後、25℃で撹拌しながら12時間反応させ、反応液を5mL程度まで減圧濃縮し、分取HPLC(カラム:Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,8min)により分離して、精製し、化合物WX020を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.79(br d,J=7.0Hz,1H),8.36(dd,J=1.5,4.8Hz,1H),8.14(s,1H),7.55(dd,J=1.5,8.0Hz,1H),7.43-7.26(m,2H),6.97(t,J=7.9Hz,2H),5.49(s,2H),5.19(td,J=6.7,11.1Hz,1H),4.77(dd,J=6.3,9.5Hz,1H),4.30(dd,J=9.7,10.9Hz,1H),3.92(s,3H);19F NMR(376MHz,CDCl3) δ=-104.74~-120.36(m,1F);LCMS m/z =431.1[M+1]+。
DCM(20mL)を入れた丸底フラスコに、BB-3-4(2g,6.73mmol,1eq)を加えた後、40℃で撹拌し、NCS(988.11mg,7.40mmol,1.1eq)をゆっくりと加え、40℃で継続的に撹拌しながら5時間反応させ、反応液を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラム(溶離液がDCM:MeOH=100:1~100:10)により分離し、精製して、化合物WX021-1を得た。1H NMR(400MHz,CD3OD) δ= 7.54(d,J=1.5Hz,1H),7.34(d,J=1.8Hz,1H),6.95-6.77(m,1H),5.49(s,2H),4.70-4.60(m,2H),4.53(br dd,J=4.3, 9.5Hz,1H),4.39-4.26(m,1H),1.46(s,9H)。LCMS m/z=331.9[M+1]+。
DCM(10mL)を入れた丸底フラスコに、WX021-1(1.60g,4.82mmol,1eq)、T3P(6.14g,9.65mmol,5.74mL,50%純度,2eq)、DIPEA(1.87g,14.47mmol,2.52mL,3eq)を加え、20℃で3時間反応させた。反応液を飽和食塩水(300mL)に注ぎ、分離して有機相を得た。水相を酢酸エチル(100mL)で2回抽出し、有機相を合わせ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラム(石油エーテル:酢酸エチル=100:20~100:100)により分離し、精製して、化合物WX021-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.22(br s,1H),8.04(d,J=2.0Hz,1H),7.41(d,J=2.3Hz,1H),5.59(br s,1H),4.71-4.46(m,2H),4.23-4.05(m,1H),1.46(s,9H);LCMS m/z=257.8[M-56+1]+。
N,N-ジメチルアセトアミド(10mL)を入れた丸底フラスコに、WX021-2(200mg,637.48μmol,1eq)、ヨードメタン(1.17g,8.24mmol,513.16μL,12.93eq)、炭酸セシウム(415.41mg,1.27mmol,2eq)を加え、窒素ガス保護下、25℃で撹拌しながら1時間反応させた。反応終了後、反応液を飽和食塩水(20mL)に注ぎ、酢酸エチル(15mL)で3回抽出し、有機相を合わせ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を酢酸エチル(2mL)で溶解させ、分取TLC(石油エーテル:酢酸エチル=3:1)により分離し、精製して、生成物WX021-3を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.23(d,J=2.3Hz,1H),7.47(d,J=2.0Hz,1H),5.55(br s,1H),4.82-4.49(m,2H),4.35-4.14(m,1H),3.47(s,3H),1.41(s,9H)。
25℃で、トルエン(10mL)を入れた丸底フラスコに、WX021-3(177mg,540.02μmol,1eq)、ローソン試薬(327.63mg,810.04μmol,1.5eq)を加えた後、110℃にゆっくりと昇温し、12時間反応させ、反応液を飽和食塩水(100mL)に注ぎ、酢酸エチル(30mL)で3回抽出し、有機相を合わせ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取TLC(石油エーテル:酢酸エチル=3:1)により分離し、精製して、化合物WX021-4を得た。LCMS m/z=287.8[M-56+1]+。
25℃で、ジクロロメタン(5mL)を入れた丸底フラスコに、WX021-4(35mg,101.80μmol,1eq)を加え、撹拌しながら、トリフルオロ酢酸(174.10mg,1.53mmol,113.06μL,15eq)を滴下し、さらに2時間反応させ、反応液を減圧下で蒸発乾固させて、WX021-5粗生成物を得た。そのまま次の工程で使用した
N,N-ジメチルアセトアミド(5mL)を入れた丸底フラスコに、WX021-5(20mg,82.06μmol,1eq)、BB-8(16.68mg,82.06μmol,1eq)、T3P(52.22mg,82.06μmol,48.81μL,50%純度,1eq)、DIPEA(22.27mg,172.33μmol,30.02μL,2.1eq)を加え、25℃で5時間反応させ、飽和食塩水(30mL)を添加し、酢酸エチル(30mL×3)で抽出し、有機相を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をHPLC(ギ酸系)(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:40%-70%,8min)により分離して、精製して、化合物WX021を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.77(br d,J=7.3Hz,1H),8.32(d,J=2.3Hz,1H),8.04(s,1H),7.57(d,J=2.0Hz,1H),7.44-7.34(m,3H),7.32-7.27(m,2H),5.40(s,2H),5.26-5.16(m,1H),4.77(dd,J=6.3,9.5Hz,1H),4.39-4.27(m,1H),3.90(s,3H);LCMS m/z=429.0[M+1]+。
N,N-ジメチルアセトアミド(5mL)に、WX021-5(20mg,82.06μmol,1eq)、BB-15(18.15mg,82.06μmol,1eq)、T3P(52.22mg,82.06μmol,48.81μL,50%純度,1eq)、DIPEA(22.27mg,172.33μmol,30.02μL,2.1eq)を加え、25℃で5時間反応させ、30mLの飽和食塩水を添加し、酢酸エチル(30mL×3)で抽出して有機相を得た。減圧濃縮して、粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN]; アセトニトリル%:42%-72%,8min)により分離し、精製して、化合物WX022を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.77(br d,J=6.5Hz,1H),8.32(d,J=2.0Hz,1H),8.14(s,1H),7.57(d,J=2.3Hz,1H),7.41-7.31(m,2H),7.20-7.07(m,2H),5.45(s,2H),5.30-5.08(m,1H),4.76(dd,J=6.3,9.5Hz,1H),4.32(t,J=10.3Hz,1H),3.93-3.87(m,1H); 19F NMR(376MHz,CDCl3) δ= -110.66~-127.90(m,1F);LCMS m/z=447.1[M+1]+。
25℃で、DCM(30mL)にBB-4-3(3.00g,10.09mmol,1eq)およびN-ブロモスクシンイミド(1.98g,11.10mmol,1.1eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を25℃でさらに12時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、ジクロロメタン(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を得た。減圧濃縮して粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ジクロロメタン:メタノール=100:1~100:5)により精製して、化合物WX023-1を得た。
25℃で、丸底フラスコに、酢酸エチル(100mL)を加え、WX023-1(5.60g,14.89mmol,1eq)、T3P(14.21g,22.33mmol,13.28mL,50%純度,1.5eq)およびDIPEA(3.85g,29.77mmol,5.19mL,2eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を25℃でさらに1時間撹拌した。反応液を水(200mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(200mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(200mL)、飽和食塩水(200mL)で順次に洗浄し、有機相を得た。減圧濃縮して粗生成物をシリカゲルカラム(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:1)により精製して、化合物WX023-2を得た。
25℃で、丸底フラスコに、N,N-ジメチルホルムアミド(10mL)を加え、WX023-2(1.80g,5.03mmol,1eq)、ヨードメタン(5.71g,40.23mmol,2.50mL,8.01eq)および炭酸セシウム(3.60g,11.06mmol,2.2eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を25℃でさらに1時間撹拌し、反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮して粗生成物を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~3:1)により精製して、化合物WX023-3を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.32(d,J=2.0Hz,1H),7.61(d,J=2.3Hz,1H),5.55(brd,J=4.8Hz,1H),4.79-4.44(m,2H),4.34-4.11(m,1H),3.46(s,3H),1.40(s,9H)。
25℃で、丸底フラスコに、トルエン(50mL)を加え、WX023-3(1.35g,3.63mmol,1eq)およびローソン試薬(2.20g,5.44mmol,1.5eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を110℃でさらに11時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:1)により精製して、化合物WX023-4を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.38(d,J=2.0Hz,1H),7.65(d,J=2.3Hz,1H),6.10(br d,J=7.3Hz,1H),4.81-4.67(m,1H),4.58(dd,J=6.1,9.4Hz,1H),4.23(dd,J=9.5,11.3Hz,1H),3.87(s,3H),1.41(s,9H)。
25℃で、丸底フラスコに、ジクロロメタン(40mL)を加え、WX023-4(980mg,2.52mmol,1eq)およびトリフルオロ酢酸(6.16g,54.02mmol,4,21.40eq)をゆっくりと加え、反応液を25℃でさらに11時間撹拌した。反応液を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(100mL)にゆっくりと注ぎ、ジクロロメタン(100mL×2)で2回抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を合わせ、減圧濃縮して化合物WX023-5の粗生成物を得た。精製せず、そのまま次の工程で使用した。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.32(d,J=2.0Hz,1H),7.59(d,J=2.3Hz,1H),4.40(dd,J=6.3,10.0Hz,1H),4.10(t,J=10.8Hz,1H),3.88-3.71(m,4H)。
25℃で、丸底フラスコに、N,N-ジメチルアセトアミド(5mL)を加え、WX023-5(288mg,999.43μmol,1eq)、T3P(954.00mg,1.50mmol,891.59μL,50%純度,1.5eq)、BB-8(406.16mg,2.00mmol,2eq)およびDIPEA(387.50mg,3.00mmol,522.24μL,3eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を25℃でさらに2時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm; 移動相:[水(0.225%FA)-ACN]; アセトニトリル%:42%-72%,8min)により分離して、化合物WX023を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.77(br d,J=7.0Hz,1H),8.42(d,J=2.0Hz,1H),8.04(s,1H),7.71(d,J=2.0Hz,1H),7.45-7.33(m,3H),7.33-7.27(m,2H),5.40(s,2H),5.21(td,J=6.7,11.3Hz,1H),4.77(dd,J=6.3,9.5Hz,1H),4.33(dd,J=9.8,11.0Hz,1H),3.90(s,3H);LCMS m/z =475.0[M+1]+。
丸底フラスコに、THF(100mL)を加えた後、WX024-1(10g,50.22mmol,1eq)、BB-3-2(11.34g,55.24mmol,1.1eq)および炭酸セシウム(29.45g,90.39mmol,1.8eq)をゆっくりと加え、65℃でさらに16時間攪拌し、反応液を水(300mL)に注ぎ、2M希塩酸を滴下してpH3に調整し、酢酸エチル(500mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(50mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮して、化合物WX024-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.46(d,J=1.8Hz,1H),8.20(dd,J=2.0,8.8Hz,1H),7.12(d,J=8.8Hz,1H),5.62(br d,J=8.0Hz,1H),4.83-4.61(m,2H),4.45(dd,J=3.0,9.3Hz,1H),3.93(s,3H),1.45(s,10H)。
水素化用フラスコにMeOH(300mL)を加えた後、WX024-2(25.8g,67.13mmol,1eq)、パラジウム炭素触媒(2.6g,26.02mmol,10%純度)をゆっくりと加え、アルゴンガスで3回置換し、H2(40Psi)雰囲気下、30℃でさらに24時間撹拌した。TLC(石油エーテル:酢酸エチル:醋酸=1:1:0.1)によってモニタリングし、新しいスポットが現れた。反応液をセライトで濾過し、濾液を減圧濃縮して化合物WX024-3を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=7.50-7.44(m,1H),7.39(br s,1H),6.70(d,J=8.5Hz,1H),6.53(br s,2H),6.00(br d,J=7.5Hz,1H),4.73(br d,J=7.0Hz,1H),4.43(br d,J=8.5Hz,1H),4.31-4.24(m,1H),3.85(s,3H),1.41(s,9H)。
丸底フラスコに、酢酸エチル(200mL)を加えた後、WX024-3、T3P(33.67g,52.91mmol,31.47mL,50%純度,1.5eq)、DIEA(13.68g,105.83mmol,18.43mL,3eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌し、反応液に水(200mL)を添加し、抽出して分離し、水相を酢酸エチル(200mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(100mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:1)により精製して、化合物WX024-4を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.15(br s,1H),7.80(dd,J=2.0, 8.5Hz,1H),7.73(d,J=2.0Hz,1H),7.13(d,J=8.3Hz,1H),5.62(br d,J=5.3Hz,1H),4.71-4.59(m,2H),4.33-4.23(m,1H),3.95-3.89(m,3H),1.43(s,9H)。
丸底フラスコに、N,N-ジメチルホルムアミド(200mL)を加えた後、WX024-4(17g,50.54mmol,1eq)、炭酸セシウム(49.40g,151.63mmol,3eq)およびヨードメタン(21.52g,151.63mmol,9.44mL,3eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌し、反応液に水(300mL)を添加し、酢酸エチル(300mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(100mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮して、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:1)により精製して、化合物WX024-5を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 7.92-7.83(m,2H),7.18(d,J=8.4Hz,1H),5.50(br d,J=6.1Hz,1H),4.72-4.52(m,2H),4.28-4.17(m,1H),3.92(s,3H),3.42(s,3H),1.38(s,9H)。
丸底フラスコに、トルエン(40mL)を加え後、WX024-5(4.01g,11.45mmol,1eq)、ローソン試薬(5.09g,12.59mmol,1.1eq)およびBoc2O(10.60g,48.55mmol,11.15mL,4.24eq)をゆっくりと加え、110℃に昇温し、12時間撹拌し、反応液を飽和食塩水(30mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(30mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮して粗生成物を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:1)により精製して、化合物WX024-6を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 7.99-7.92(m,2H),7.21(d,J=8.3Hz,1H),6.02(br d,J=7.8Hz,1H),4.80-4.69(m,1H),4.53(dd,J=6.3,9.5Hz,1H),4.22(dd,J=9.5,11.3Hz,1H),3.94(s,3H),3.86(s,3H),1.46-1.33(m,9H)。
丸底フラスコに、酢酸エチル(10mL)を加えた後、WX024-6(500mg,1.36mmol,1eq)およびHCl/酢酸エチル(4M,10mL,29.31eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌し、反応液を減圧濃縮して、化合物WX024-7を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.04-7.89(m,2H),7.28(br s,1H),4.93(br s,1H),4.63(br s,1H),4.44(br s,1H),3.93(s,3H),3.88-3.85(m,1H),3.81(s,3H)。
丸底フラスコに、N,N-ジメチルホルムアミド(5mL)を加えた後、WX024-7(245mg,809.18μmol,1eq,HCl)、BB-8(164.42mg,809.18μmol,1eq)、HATU(461.51mg,1.21mmol,1.5eq)およびDIPEA(313.74mg,2.43mmol,422.83μL,3eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌し、反応液を水(20mL)に注ぎ、酢酸エチル(20mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(5mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:100)により精製して、化合物WX024-8を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.70(br d,J=7.3Hz,1H),8.02-7.94(m,3H),7.42-7.34(m,3H),7.31-7.28(m,2H),5.39(s,2H),5.20(td,J=6.8,11.0Hz,1H),4.72(dd,J=6.5,9.4Hz,1H),4.31(t,J=10.3Hz,1H),3.95(s,3H),3.89(s,3H)。
丸底フラスコに、THF(4mL)およびH2O(1mL)を加え後、WX024-8(50mg,110.74μmol,1eq)およびLiOH・H2O(4.65mg,110.74μmol,12.79μL,1eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌し、反応液をHPLC(カラム:Phenomenex Gemini-NX 80*40mm*3μm;移動相:[水(0.05% NH3・H2O+10mM NH4HCO3)-ACN];アセトニトリル%:11%-31%,8min)により分離して、化合物WX024を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.78(br s,1H),8.18-7.82(m,3H),7.36(br s,5H),5.64-5.32(m,2H),5.26(br s,1H),4.72(br s,1H),4.32(br s,1H),3.86(br s,3H);LCMS m/z=438.1[M+1]+。
0℃、窒素ガス保護下で、NaH(2.78g,69.38mmol,60%純度,2.2eq)を、BB-3-2(7.12g,34.69mmol,1.1eq)のN,N-ジメチルホルムアミド(80mL)溶液に加え、2時間反応させた。反応を氷水浴に入れ、WX025-1(5g,31.54mmol,1eq)を上記の溶液に加え、反応液を25℃に昇温し、12時間反応させた。反応液を氷水(100mL)にゆっくりと加え、酢酸エチル(150mL×2)で抽出し、水相を1M HClでpH=5~6に調整し、酢酸エチル(150mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物WX025-2を得た。LCMS m/z=328.1[M+1]+。
Pd/C(3g,5%純度)をWX025-2(9g,27.50mmol,1eq)の酢酸エチル(60mL)とメタノール(30mL)との溶液に加え、H2で3回置換した後、H2(15psi)雰囲気下、25℃で12時間反応させた。反応液をセライトで濾過し、濾液を減圧濃縮して化合物WX025-3を得た。LCMS m/z=298.1[M+1]+。
T3P(20.87g,32.79mmol,19.50mL,50%純度,1.5eq)を、DIPEA(7.06g,54.66mmol,9.52mL,2.5eq)、WX025-3(6.5g,21.86mmol,1eq)のN,N-ジメチルホルムアミド(200mL)溶液に加え、25℃で3時間反応させた。冰浴で反応液に水(200mL)を添加し、酢酸エチル(200mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1~1:2)により分離し、精製して、化合物WX025-4を得た。1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ=8.37(br s,1H),8.20-8.31(m,2H),6.97(d,J=5.70Hz,1H),5.69(br d,J=4.38Hz,1H),4.54-4.71(m,2H),4.22-4.35(m,1H),1.45-1.52(m,9H);LCMS m/z=280.1[M+1]+。
ヨードメタン(384.21mg,2.71mmol,168.51μL,1.05eq)を、WX025-4(0.72g,2.58mmol,1eq)、炭酸セシウム(1.01g,3.09mmol,1.2eq)のテトラヒドロフラン溶液(14mL)に加え、20℃で12時間反応させた。反応液に水(25mL)および酢酸エチル(25mL)を添加し、分液し、水相を酢酸エチル(25mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー(ジクロロメタン:メタノール=10:0~10:1)により分離し、精製して、化合物WX025-5を得た。1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ=8.50(s,1H),8.39(d,J=5.27Hz,1H),7.06(d,J=5.40Hz,1H),5.54(br d,J=6.02Hz,1H),4.56-4.73(m,2H),4.25-4.37(m,1H),3.47(s,3H),1.41(s,9H);LCMS m/z=294.1[M+1]+。
20℃で、ローソン試薬(110.32mg,272.74μmol,0.8eq)を、WX025-5(0.1g,340.93μmol,1eq) のトルエン溶液(2mL)に加え、90℃で12時間反応させた。反応液に酢酸エチル(5mL)を添加し、濾過し、濾液を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1~1:2)により分離し、精製して、化合物WX025-6を得た。LCMS m/z=310.1[M+1]+。
HCl/酢酸エチル(3mL)を、WX025-6(53mg,171.31μmol,1eq)の酢酸エチル(3mL)に加え、25℃で2時間反応させた。反応を減圧濃縮して化合物WX025-7を得た。LCMS m/z=210.1[M+1]+。
DIPEA(77.82mg,602.10μmol,104.87μL,3eq)、T3P(127.72mg,401.40μmol,119.36μL,2eq)を、WX025-7(42mg,200.70μmol,1eq)、BB-8(61.17mg,301.05μmol,1.5eq)のN,N-ジメチルホルムアミド(3mL)に加え、25℃で2時間反応させた。反応液に水(5mL)および酢酸エチル(5mL)を添加し、分液し、水相を酢酸エチル(5mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN]; アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離して、化合物WX025を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.83(d,J=8.16Hz,2H),8.64-8.65(m,1H),8.67(d,J=7.72Hz,1H),8.54(d,J=5.28Hz,1H),7.26-7.42(m,6H),5.49(s,2H),5.04(dt,J=11.24,6.84Hz,1H),4.44-4.64(m,2H),3.83(s,3H);LCMS m/z=395.2[M+1]+。
WX026-1(1g,4.63mmol,1eq)およびフェノール(871.27mg,9.26mmol,814.27μL,2eq)のN,N-ジメチルホルムアミド溶液(10mL)に、炭酸カリウム(1.28g,9.26mmol,2eq)、臭化第一銅(66.40mg,462.89μmol,14.10μL,0.1eq)、アセチルアセトン(23.17mg,231.45μmol,23.77μL,0.05eq)を加え、90℃でさらに10時間撹拌した。反応液に水(100mL)を添加し、酢酸エチル(30mL×3)で抽出し、有機相を合わせ、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物WX026-2を得た。LCMS m/z=230.2[M+1]+。
WX026-2(0.45g,1.96mmol,1eq)のテトラヒドロフラン(5mL)に、LiOH・H2O(164.76mg,3.93mmol,2eq)の水溶液(1mL)を加え、18℃で1時間撹拌した。反応液に酢酸エチル(20mL)を加え、2N塩酸でpH=2に調整し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物WX026-3を得た。LCMS m/z=216.1[M+1]+。
18℃で、BB-4(0.3g,679.40μmol,1eq)のN,N-ジメチルホルムアミド(2mL)に、WX026-3(153.52mg,713.37μmol,1.05eq)、DIPEA(263.42mg,2.04mmol,355.01μL,3eq)、T3P(648.52mg,1.02mmol,606.09μL,50%純度,1.5eq)を加え、1時間撹拌した。反応液をHPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm; 移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX026を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.84(s,1H),8.60(d,J=7.89Hz,1H),8.36(dd,J=1.32,4.82Hz,1H),7.70(dd,J=1.53,8.11Hz,1H),7.25-7.46(m,5H),5.49(s,2H),4.85(td,J=7.67,11.40Hz,1H),4.63-4.75(m,1H),4.51(dd,J=7.45,9.65Hz,1H),4.03(br s,3H);LCMS m/z=407.1[M+1]+。
25℃で、丸底フラスコに、N,N-ジメチルアセトアミド(5mL)を加えた後、BB-4(20mg,45.29μmol,1eq)、T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50%純度,1.5eq)、BB-16(15.85mg,67.94μmol,1.5eq)およびDIPEA(17.56mg,135.88μmol,23.67μL,3eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を25℃でさらに2時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm; 移動相:[水(0.225%FA)-ACN]; アセトニトリル%:42%-72%,8min)により分離し、化合物WX027を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.78(br d,J=7.0Hz,1H),8.47-8.25(m,1H),8.08(s,1H),7.60-7.50(m,1H),7.35(t,J=7.9Hz,1H),7.32-7.26(m,2H),6.96(t,J=7.4Hz,1H),6.91(d,J=8.0Hz,1H),5.38(s,2H),5.20(td,J=6.7, 11.4Hz,1H),4.77(dd,J=6.3, 9.5Hz,1H),4.38-4.23(m,1H),3.92(s,3H),3.84(s,3H);LCMS m/z =425.1[M+1]+。
丸底フラスコに、MeCN(80mL)を加えた後、WX028-1(4g,17.63mmol,1eq)をゆっくりと加えて溶解させ、2-(2-ブロモエトキシ)テトラヒドロピラン(4.42g,21.16mmol,3.21mL,1.2eq)およびDIPEA(2.51g,19.40mmol,3.38mL,1.1eq)を加え、90℃に昇温し、さらに3時間撹拌した。反応液に水(100mL)を添加し、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(30mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:1)により精製して、化合物WX028-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 4.55(br s,1H),4.34(t,J=5.3Hz,2H),4.12-4.06(m,1H),3.79(td,J=5.4,10.8Hz,1H),3.64-3.53(m,1H),3.50-3.41(m,1H),1.76-1.58(m,2H),1.57-1.43(m,4H)。
丸底フラスコに、THF(50mL)を加えた後、WX028-2(4.99g,14.06mmol,1eq)をゆっくりと加え、-78℃に冷却し、n-ブチルリチウム(2.5M,6.75mL,1.2eq)を加え、1時間撹拌し、ベンズアルデヒド(2.98g,28.11mmol,2.84mL,2eq)をゆっくりと加え、-78℃で0.5時間撹拌し、-50℃に昇温して、さらに0.5時間撹拌した。反応終了後、反応液を飽和塩化アンモニウム(200mL)と酢酸エチル(200mL)との混合溶液に注ぎ、分液し、水相を酢酸エチル(200mL)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(50mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:1)により精製して、化合物WX028-3を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 7.45-7.29(m,5H),6.09(d,J=5.8Hz,1H),4.51(br s,1H),4.34(ddq,J=3.5,5.5,7.2Hz,1H),4.26-4.15(m,1H),4.07-3.97(m,1H),3.78-3.56(m,2H),3.47(dt,J=5.9,10.7Hz,1H),1.85-1.64(m,2H),1.52(br d,J=6.3Hz,4H) 。
丸底フラスコに、トルエン(50mL)を加えた後、WX028-3(4.7g,12.30mmol,1eq)およびTsOH・H2O(3.04g,15.98mmol,1.3eq)をゆっくりと加え、110℃でさらに5時間撹拌し、反応液に水(50mL)を添加し、酢酸エチル(50mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(20mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮して、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:1)により精製して、化合物WX028-4を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 7.45-7.34(m,5H),5.87(s,1H),4.33-4.27(m,2H),4.19-4.06(m,2H)。
オートクレーブにEtOH(20mL)を加えた後、WX028-4(500mg,1.78mmol,1eq)、Pd(dppf)Cl2(261.21mg,356.99μmol,0.2eq)およびTEA(1.81g,17.85mmol,2.48mL,10eq)をゆっくりと加え、アルゴンガスで3回置換し、CO(1MPa)保護下、100℃でさらに24時間撹拌した。反応液に水(50mL)を添加し、酢酸エチル(50mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(10mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN]; アセトニトリル%:42%-72%,8min)により分離して、化合物WX028-5を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=7.47-7.31(m,5H),6.02-5.93(m,1H),4.54-4.38(m,4H),4.34-4.25(m,1H),4.19-4.10(m,1H),1.42(t,J=7.1Hz,3H)。
丸底フラスコに、THF(4mL)およびH2O(1mL)を加えた後、WX028-5(260mg,951.38μmol,1eq)およびLiOH・H2O(119.77mg,2.85mmol,3eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに1時間撹拌した。反応液を減圧濃縮して、THFを濃縮乾固し、1MのHCl水溶液を滴下してpH3に調整し、濾過して生成物WX028-6を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ= 7.40(s,5H),6.00(s,1H),4.50-4.40(m,1H),4.40-4.29(m,2H),4.26-4.11(m,1H)。
丸底フラスコに、N,N-ジメチルホルムアミド(1mL)を加えた後、WX028-6(30mg,122.33μmol,1eq)、BB-4(54.02mg,122.33μmol,1eq)、T3P(116.77mg,183.50μmol,109.13μL,50%純度,1.5eq)およびDIPEA(47.43mg,366.99μmol,63.92μL,3eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,8min)により分離して、化合物WX028のラセミ体を得た。さらに、SFCキラル分離(カラム:DAICEL CHIRALCEL OD(250mm*30mm,10μm);移動相:[Neu-ETOH];エタノール%:45%-45%,min)によって、活性異性体WX028を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.65(br d,J=7.1Hz,1H),8.37(br d,J=3.3Hz,1H),7.56(br d,J=7.8Hz,1H),7.48-7.36(m,5H),7.32-7.27(m,1H),5.99(s,1H),5.33-5.16(m,1H),4.74(dd,J=6.4,9.5Hz,1H),4.40(br d,J=4.3Hz,2H),4.36-4.24(m,2H),4.19-4.07(m,1H),3.92(s,3H);LCMS m/z=437.1[M+1]+。
25℃で、丸底フラスコにMeCN(20mL)を加えた後、WX029-1(2.02g,15.89mmol,1eq)、K2CO3(4.39g,31.79mmol,2eq)および3-フルオロベンジルクロリド(2.76g,19.07mmol,2.28mL,1.2eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を60℃でさらに12時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:20~100:75)により精製して、化合物WX029-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.14(s,1H),7.36(dt,J=5.9,8.0Hz,1H),7.11-7.03(m,2H),6.99(br d,J=9.0Hz,1H),5.42(s,2H),4.14-3.89(m,3H)。
25℃で丸底フラスコにTHF(14mL)およびH2O(2mL)を加えた後、WX029-2およびLiOH・H2O(642.21mg,15.31mmol,3eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、25℃で反応液をさらに1時間撹拌した。反応液を希塩酸(1M)でpH6~7に調整し、濾過し、析出物を乾燥させ、化合物WX029-3を得た。
25℃で丸底フラスコにN,N-ジメチルアセトアミド(5mL)を加えた後、WX029-3(15.03mg,67.94umol,1.5eq)、T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50%純度,1.5eq)、BB-4(15.03mg,67.94μmol,1.5eq)およびDIPEA(17.56mg,135.87μmol,23.67μL,3eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下でさらに2時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN]; アセトニトリル%:35%-65%, 8min)により精製して、生成物WX029を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.83(br d,J=7.0Hz,1H),8.37(d,J=3.8Hz,1H),8.10(s,1H),7.57(d,J=8.0Hz,1H),7.40-7.27(m,2H),7.15-6.87(m,3H),5.40(s,2H),5.29-5.07(m,1H),4.79(dd,J=6.3, 9.3Hz,1H),4.32(t,J=10.3Hz,1H),3.93(s,3H);19F NMR(376MHz,CDCl3) δ=-111.33(s,1F);LCMS m/z =413.0[M+1]+。
25℃で丸底フラスコにMeCN(20mL)を加えた後、WX030-1(2.04g,16.05mmol,1eq)、K2CO3(4.44g,32.10mmol,2eq)および4-メトキシベンジルクロリド(3.02g,19.26mmol,2.62mL,1.2eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、60℃で反応液をさらに12時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:20~100:75)により精製して、化合物WX030-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.05(s,1H),7.27(d,J=8.8Hz,2H),6.98-6.87(m,2H),5.43-5.26(m,2H),4.03-3.97(m,3H),3.82(s,3H)。
25℃で丸底フラスコにTHF(14mL)およびH2O(2mL)を加えた後、WX030-2(1.5g,6.07mmol,1eq)およびLiOH・H2O(763.68mg,18.20mmol,3eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、25℃下で反応液をさらに1時間撹拌し、反応液を希塩酸(1M)でpH6~7に調整し、濾過し、析出物を乾燥させ、化合物WX030-3を得た。
25℃で丸底フラスコにN,N-ジメチルアセトアミド(5mL)を加えた後、WX030-3(15.84mg,67.94μmol,1.5eq)、T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50%純度,1.5eq)、BB-4(15.84mg,67.94μmol,1.5eq)およびDIPEA(17.56mg,135.87μmol,23.67μL,3eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、25℃で反応液をさらに2時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm; 移動相:[水(0.225% FA)- ACN] ; アセトニトリル%:35%-65%, 8min)により分離して生成物WX030を得た。 1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.80(br s,1H),8.37(br s,1H),7.98(br s,1H),7.56(brs,1H),7.38-7.28(m,1H),7.26(br s,2H),6.91(br s,2H),5.41-5.10(m,3H),4.78(br s,1H),4.31(br s,1H),3.98-3.73(m,6H);LCMS m/z =425.1[M+1]+。
丸底フラスコにMeCN(20mL)を加えた後、WX031-1(1.5g,11.80mmol,1eq)、K2CO3(2.45g,17.70mmol,1.5eq)および4-フルオロベンジルクロリド(1.88g,12.98mmol,1.55mL,1.1eq)を加え、50℃でさらに12時間撹拌した。反応を水(50mL)に注ぎ、酢酸エチル(50mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(10mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:100)により精製して、化合物WX031-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.09(s,1H),7.30(dd,J=5.3,8.3Hz,2H),7.08(t,J=8.5Hz,2H),5.39(s,2H),4.00(s,3H)。
丸底フラスコにTHF(8mL)およびH2O(2mL)を加えた後、WX031-2(1.06g,4.52mmol,1eq)およびLiOH・H2O(569.16mg,13.56mmol,3eq)を加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液を減圧濃縮して、THFを除去し、pHを3未満に調整するように反応液に1Mの希塩酸溶液を滴下し、濾過して化合物WX031-3を得た。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ= 8.79(s,1H),7.39(dd,J=5.5,8.8Hz,2H),7.25-7.17(m,2H),5.47(s,2H)。
丸底フラスコにN,N-ジメチルホルムアミド(1mL)を加えた後、WX031-3(18.03mg,81.53μmol,1.2eq)、BB-4(30mg,67.94μmol,1eq)、DIPEA(26.34mg,203.82μmol,35.50μL,3eq)およびT3P(64.85mg,101.91μmol,60.61μL,50% purity, 1.5eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液をそのままHPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:40%-70%,8min)により分離して、化合物WX031を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.81(br d,J=7.3Hz,1H),8.37(dd,J=1.4,4.6Hz,1H),8.06(s,1H),7.56(dd,J=1.4,7.9Hz,1H),7.33-7.27(m,3H),7.07(t,J=8.5Hz,2H),5.37(s,2H),5.20(td,J=6.7,11.2Hz,1H),4.78(dd,J=6.4,9.4Hz,1H),4.32(dd,J=9.7,10.9Hz,1H),3.93(s,3H);LCMS m/z=413.1[M+1]+。
MeCN(20mL)に、WX032-1(1.5g,11.80mmol,1eq)、3-クロロメチルベンゾニトリル(1.97g,12.98mmol,1.72mL,1.1eq)およびK2CO3(2.45g,17.70mmol,1.5eq)を加え、反応液を50℃でさらに12時間撹拌した。反応液に水(50mL)を添加し、酢酸エチル(50mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(20mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:100)により精製して、化合物WX032-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.21(s,1H),7.67(t,J=4.3Hz,1H),7.58(s,1H),7.52(d,J=4.8Hz,2H),5.47(s,2H),4.01(s,3H)。
丸底フラスコにTHF(8mL)およびH2O(2mL)を加えた後、WX032-2(1.4g,5.78mmol,1eq)およびLiOH・H2O(727.53mg,17.34mmol,3eq)を加えた。反応液を25℃でさらに2時間撹拌した。反応液を減圧濃縮して、THFを除去し、pHを3未満に調整するように反応液に1Mの希塩酸溶液を滴下し、濾過して目的化合物WX032-3を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ= 8.83-8.80(m,1H),7.86-7.80(m,2H),7.68-7.57(m,2H),5.59-5.52(m,2H)。
丸底フラスコにN,N-ジメチルホルムアミド(1mL)を加えた後、WX032-3(15.50mg,67.94μmol,1eq)、BB-4(30mg,67.94μmol,1eq)、DIPEA(26.34mg,203.82μmol,35.50μL,3eq)およびT3P(64.85mg,101.91μmol,60.61μL,50%純度,1.5eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間攪拌し、反応液をそのままHPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,8min)により分離して、化合物WX032を得た。 1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.85(br d,J=7.3Hz,1H),8.37(d,J=3.3Hz,1H),8.17(s,1H),7.65(br d,J=2.8Hz,1H),7.60-7.55(m,2H),7.53-7.47(m,2H),7.29(dd,J=4.6,7.9Hz,1H),5.45(s,2H),5.26-5.15(m,1H),4.79(dd,J=6.3, 9.5Hz,1H),4.38-4.28(m,1H),3.93(s,3H);LCMS m/z=420.1[M+1]+。
丸底フラスコにMeCN(20mL)を加えた後、WX033-1(1.5g,11.80mmol,1eq)、3-メチルベンジルクロリド(1.83g,12.98mmol,1.72mL,1.1eq)およびK2CO3(2.45g,17.70mmol,1.5eq)を加え、50℃でさらに12時間撹拌し、反応液に水(50mL)を添加し、酢酸エチル(50mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(20mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:100)により精製して、化合物WX033-2を得た。 1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.08(s,1H),7.33-7.27(m,1H),7.18(d,J=7.6Hz,1H),7.10(br d,J=1.8Hz,2H),5.38(s,2H),4.05-3.97(m,3H),2.38-2.31(m,3H)。
丸底フラスコにTHF(8mL)およびH2O(2mL)を加えた後、WX033-2(1.6g,6.92mmol,1eq)およびLiOH・H2O(870.95mg,20.76mmol,3eq)を加え、25℃でさらに2時間撹拌し、反応液を減圧濃縮して、THFを除去し、pHを3未満に調整するように反応液に1Mの希塩酸溶液を滴下し、濾過して化合物WX033-3を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ= 13.28(br s,1H),8.79(s,1H),7.30-7.23(m,1H),7.17-7.07(m,3H),5.43(s,2H),2.29(s,3H)。
丸底フラスコにN,N-ジメチルホルムアミド(1mL)を加えた後、WX033-3(17.71mg,81.53μmol,1.2eq)、BB-4(30mg,67.94μmol,1eq)、DIPEA(26.34mg,203.82μmol,35.50μL,3eq)およびT3P(64.85mg,101.91μmol,60.61μL,50%純度,1.5eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液をそのままHPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:37%-67%,8min)により分離して、化合物WX033を得た。 1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.81(br d,J=7.0Hz,1H),8.37(d,J=3.3Hz,1H),8.03(s,1H),7.57(d,J=6.8Hz,1H),7.31-7.27(m,2H),7.20-7.15(m,1H),7.11-7.07(m,2H),5.36(s,2H),5.22(td,J=6.8,11.5Hz,1H),4.79(dd,J=6.4,9.4Hz,1H),4.36-4.27(m,1H),3.93(s,3H),2.34(s,3H);LCMS m/z=409.1[M+1]+。
1つ口フラスコにMeCN(20mL)を加えた後、1-クロロメチル-3,5-ジフルオロベンゼン(2.11g,12.98mmol,573.45μL,1.1eq)、WX034-1(1.5g,11.80mmol,1eq)およびK2CO3(2.45g,17.70mmol,1.5eq)を加え、50℃でさらに12時間撹拌した。TLC(石油エーテル:酢酸エチル=1:2)によってモニタリングし、新しいスポットが現れた。反応液に水(50mL)を添加し、酢酸エチル(50mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(20mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:100)により精製して、化合物WX034-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.22(s,1H),6.92-6.77(m,3H),5.50-5.38(m,2H),4.11-3.99(m,3H)。
丸底フラスコにTHF(8mL)およびH2O(2mL)を加えた後、WX034-2(1g,3.95mmol,1eq)およびLiOH・H2O(497.15mg,11.85mmol,3eq)を加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液を減圧濃縮して、THFを除去し、pHを3未満に調整するように残留液に1Mの希塩酸溶液を滴下し、濾過して化合物物WX034-3を得た。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ= 8.80(s,1H),7.24(br t,J=9.4Hz,1H),7.07(br d,J=6.3Hz,2H),5.52(s,2H)。
丸底フラスコにN,N-ジメチルホルムアミド(1mL)を加えた後、WX034-3(19.50mg,81.53μmol,1.2eq)、BB-4(30mg,67.94μmol,1eq)、DIPEA(26.34mg,203.82μmol,35.50μL,3eq)およびT3P(64.85mg,101.91μmol,60.61μL,50%純度, 1.5eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液をそのままHPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:37%-67%,8min)により分離して、化合物WX034を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.85(br d,J=7.0Hz,1H),8.37(dd,J=1.5,4.6Hz,1H),8.16(s,1H),7.57(dd,J=1.5,8.0Hz,1H),7.29(dd,J=4.7,7.9Hz,1H),6.85-6.73(m,3H),5.38(s,2H),5.21(td,J=6.6,11.2Hz,1H),4.79(dd,J=6.4,9.5Hz,1H),4.33(dd,J=9.6,11.0Hz,1H),3.93(s,3H);LCMS m/z=431.1[M+1]+。
MeCN(20mL)に、WX035-1(1.5g,11.80mmol,1eq)、1-クロロメチル-2-トルエン(1.83g,12.98mmol,1.72mL,1.1eq)およびK2CO3(2.45g,17.70mmol,1.5eq)を加えた後、50℃でさらに12時間撹拌した。反応液に水(50mL)を添加し、酢酸エチル(50mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(20mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:100)により精製して、化合物WX035-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 7.89(s,1H),7.36-7.29(m,1H),7.26-7.16(m,3H),5.42(s,2H),4.00(s,3H),2.27(s,3H)。
丸底フラスコにTHF(8mL)およびH2O(2mL)を加えた後、WX035-2(1.6g,6.92mmol,1eq)およびLiOH・H2O(870.95mg,20.76mmol,3eq)を加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液を減圧濃縮して、THFを除去し、pHを3未満に調整するように残留液に1Mの希塩酸溶液を滴下し、濾過してWX035-3を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ= 13.28(br s,1H),8.79(s,1H),7.30-7.23(m,1H),7.17-7.07(m,3H),5.43(s,2H),2.29(s,3H)。
丸底フラスコにN,N-ジメチルホルムアミド(1mL)を加えた後、WX035-3(17.71mg,81.53μmol,1.2eq)、BB-4(30mg,67.94μmol,1eq)、DIPEA(26.34mg,203.82μmol,35.50μL,3eq)およびT3P(64.85mg,101.91μmol,60.61μL,50% purity,1.5eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液をそのままHPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:37%-67%,8min)により分離して、化合物WX035を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.81(br d,J=7.0Hz,1H),8.37(d,J=4.5Hz,1H),7.86(s,1H),7.57(d,J=7.8Hz,1H),7.34-7.27(m,2H),7.26-7.15(m,3H),5.40(s,2H),5.22(td,J=6.7,11.2Hz,1H),4.79(dd,J=6.4,9.4Hz,1H),4.38-4.26(m,1H),3.93(s,3H),2.29(s,3H);LCMS m/z=409.1[M+1]+。
25℃で、丸底フラスコにMeCN(20mL)を加えた後、WX036-1(2.02g,15.89mmol,1eq)、K2CO3(4.39g,31.79mmol,2eq)および1-クロロ-3-クロロメチルベンゼン(3.07g,19.07mmol,2.42mL,1.2eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を60℃でさらに12時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:20~100:75)により精製して、化合物WX036-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.15(s,1H),7.35-7.26(m,3H),7.17(d,J=6.8Hz,1H),5.40(s,2H),4.04-3.93(m,3H)。
25℃で、丸底フラスコにTHF(14mL)およびH2O(2mL)を加えた後、WX036-2(1.80g,7.15mmol,1eq)およびLiOH・H2O(900.33mg,21.46mmol,3eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を25℃でさらに1時間撹拌した。反応液を希塩酸(1M)でpH6~7に調整し、析出物を濾過して化合物WX036-3を得た。
25℃で、丸底フラスコにN,N-ジメチルアセトアミド(5mL)を加えた後、BB-4(20mg,45.29μmol,1eq)、T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50%純度,1.5eq)、WX036-3(16.14mg,67.94μmol,1.5eq)およびDIPEA(17.56mg,135.87μmol,23.67μL,3eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を25℃でさらに2時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,8min)により分離して、化合物WX036を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.95-8.69(m,1H),8.37(br d,J=3.1Hz,1H),8.10(s,1H),7.68-7.47(m,1H),7.38-7.27(m,3H),7.26-7.20(m,1H),7.16(br d,J=7.0Hz,1H),5.38(s,2H),5.26-5.10(m,1H),4.79(dd,J=6.5, 9.4Hz,1H),4.41-4.20(m,1H),3.93(s,3H);LCMS m/z =429.0[M+1]+。
25℃で、丸底フラスコにMeCN(20mL)を加えた後、WX037-1(2.03g,15.97mmol,1eq)、K2CO3(4.41g,31.94mmol,2eq)および1-ブロモ-3-クロロメチルベンゼン(3.94g,19.17mmol,241.82μL,1.2eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を60℃でさらに12時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:20~100:75)により精製して、化合物WX037-2を得た。 1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.14(s,1H),7.59-7.38(m,2H),7.30-7.26(m,1H),7.25-7.20(m,1H),5.39(s,2H),4.01(s,3H)。
25℃で、丸底フラスコにTHF(14mL)およびH2O(2mL)を加えた後、WX037-2(2.0g,6.75mmol,1eq)およびLiOH・H2O(850.20mg,20.26mmol,3eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を25℃でさらに1時間撹拌した。反応液を希塩酸(1M)でpH6~7に調整し、析出物を濾過して化合物WX037-3を得た。
25℃で、丸底フラスコにN,N-ジメチルアセトアミド(5mL)を加えた後、BB-4(20mg,45.29μmol,1eq)、T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50%純度,1.5eq)、WX037-3(19.16mg,67.94μmol,1.5eq)およびDIPEA(17.56mg,135.87μmol,23.67μL,3eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を25℃でさらに2時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,8min)により分離して、化合物WX037を得た。 1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.83(br d,J=6.4Hz,1H),8.37(br d,J=4.5Hz,1H),8.10(s,1H),7.66-7.27(m,4H),7.25-7.15(m,2H),5.37(s,2H),5.26-5.06(m,1H),4.79(br dd,J=6.5,9.1Hz,1H),4.33(br t,J=10.3Hz,1H),3.93(s,3H);LCMS m/z =474.8[M+1]+。
丸底フラスコにMeCN(20mL)を加えた後、1-クロロメチル-4-トリフルオロメトキシベンゼン(2.73g,12.98mmol,517.03μL,1.1eq)、WX038-1(1.5g,11.80mmol,1eq)およびK2CO3(2.45g,17.70mmol,1.5eq)を加え、50℃でさらに12時間撹拌し、反応液に水(50mL)を添加し、酢酸エチル(50mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(20mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:100)により精製して、化合物WX038-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.17(s,1H),7.36(d,J=8.5Hz,2H),7.27-7.23(m,2H),5.50-5.40(m,2H),4.08-3.96(m,3H)。
丸底フラスコにTHF(16mL)およびH2O(4mL)を加えた後、WX038-2(1.9g,6.31mmol,1eq)およびLiOH・H2O(794.01mg,18.92mmol,3eq)を加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液を減圧濃縮して、THFを除去し、pHを3未満に調整するように残留液に1Mの希塩酸溶液を滴下し、析出物を濾過して化合物WX038-3を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ= 8.81(s,1H),7.51-7.33(m,4H),5.53(s,2H)。
丸底フラスコにN,N-ジメチルホルムアミド(1mL)を加えた後、WX038-3(23.41mg,81.53μmol,1.2eq)、BB-4(30mg,67.94μmol,1eq)、DIPEA(26.34mg,203.82μmol,35.50μL,3eq)およびT3P(64.85mg,101.91μmol,60.61μL,50%純度,1.5eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液をそのままHPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:40%-70%,8min)により分離して、化合物WX038を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.84(br d,J=7.3Hz,1H),8.38(dd,J=1.5, 4.5Hz,1H),8.11(s,1H),7.58(dd,J=1.5, 8.0Hz,1H),7.34(d,J=8.8Hz,2H),7.32-7.29(m,1H),7.27(s,5H),7.26-7.22(m,2H),5.42(s,2H),5.28-5.15(m,1H),4.80(dd,J=6.5,9.5Hz,1H),4.37-4.29(m,1H),3.94(s,3H);LCMS m/z=479.1[M+1]+。
25℃で、丸底フラスコにMeCN(20mL)を加えた後、WX039-1(2.0g,15.74mmol,1eq)、K2CO3(4.35g,31.48mmol,2eq)および1-クロロメチル-4-メチルベンゼン(2.66g,18.89mmol,2.48mL,1.2eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を60℃でさらに12時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:20~100:75)により精製して、化合物WX039-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.04(s,1H),7.23-7.17(m,4H),5.37(s,2H),4.00(s,3H),2.47-2.25(m,3H)。
25℃で、丸底フラスコにTHF(14mL)およびH2O(2mL)を加えた後、WX039-2(1.5g,6.49mmol,1eq)およびLiOH・H2O(816.52mg,19.46mmol,3eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を25℃でさらに1時間撹拌した。反応液を希塩酸(1M)でpH6~7に調整し、濾過し、析出物を回収して化合物WX039-3を得た。
25℃で、N,N-ジメチルアセトアミド(5mL)に、BB-4(20mg,45.29μmol,1eq)、T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50%純度,1.5eq)、WX039-3(14.76mg,67.94μmol,1.5eq)およびDIPEA(17.56mg,135.87μmol,23.67μL,3eq)を加え、窒素ガス保護下、反応液を25℃でさらに2時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:40%-70%,8min)により分離して、生成物WX039を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.80(br d,J=7.3Hz,1H),8.37(dd,J=1.5,4.5Hz,1H),8.00(s,1H),7.56(dd,J=1.5,7.8Hz,1H),7.28(dd,J=4.8,8.0Hz,1H),7.19(s,4H),5.35(s,2H),5.21(td,J=6.8,11.0Hz,1H),4.78(dd,J=6.4,9.4Hz,1H),4.32(dd,J=9.7,11.2Hz,1H),3.93(s,3H),2.63-2.13(m,3H);LCMS m/z =409.1[M+1]+。
丸底フラスコにTHF(100mL)を加えた後、WX040-1(10g,50.22mmol,1eq)、BB-3-2(11.34g,55.24mmol,1.1eq)および炭酸セシウム(29.45g,90.39mmol,1.8eq)をゆっくりと加え、65℃でさらに16時間撹拌した。TLC(石油エーテル:酢酸エチル:醋酸=1:1:0.1)によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングした。反応液を水(300mL)に注いだ後、pHが約3に調整するように2MのHClを滴下し、酢酸エチル(500mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(50mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮してWX040-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.46(d,J=1.8Hz,1H),8.20(dd,J=2.0, 8.8Hz,1H),7.12(d,J=8.8Hz,1H),5.62(br d,J=8.0Hz,1H),4.83-4.61(m,2H),4.45(dd,J=3.0,9.3Hz,1H),3.93(s,3H),1.45(s,10H)。
水素化用フラスコにMeOH(300mL)を加えた後、WX040-2(25.8g,67.13mmol,1eq)およびPd/C(2.6g,26.02mmol,10%純度)をゆっくりと加え、アルゴンガスで3回置換した後、H2(40Psi)保護下、30℃でさらに24時間撹拌した。TLC(石油エーテル:酢酸エチル:醋酸=1:1:0.1)によってモニタリングし、新しいスポットが現れた。反応液をセライトで濾過し、濾液を減圧濃縮して化合物WX040-3を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=7.50-7.44(m,1H),7.39(br s,1H),6.70(d,J=8.5Hz,1H),6.53(br s,2H),6.00(br d,J=7.5Hz,1H),4.73(br d,J=7.0Hz,1H),4.43(br d,J=8.5Hz,1H),4.31-4.24(m,1H),3.85(s,3H),1.41(s,9H)。
丸底フラスコに酢酸エチル(200mL)を加えた後、WX040-3(12.5g,35.28mmol,1eq)、T3P(33.67g,52.91mmol,31.47mL,50% purity,1.5eq)およびDIPEA(13.68g,105.83mmol,18.43mL,3eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液に水(200mL)を添加し、分液させ、水相を酢酸エチル(200mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(100mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル从100:1~1:1)により精製して、化合物WX040-4を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.15(br s,1H),7.80(dd,J=2.0,8.5Hz,1H),7.73(d,J=2.0Hz,1H),7.13(d,J=8.3Hz,1H),5.62(br d,J=5.3Hz,1H),4.71-4.59(m,2H),4.33-4.23(m,1H),3.95-3.89(m,3H),1.43(s,9H)。
丸底フラスコにN,N-ジメチルホルムアミド(200mL)を加えた後、WX040-4(17g,50.54mmol,1eq)、炭酸セシウム(49.40g,151.63mmol,3eq)およびヨードメタン(21.52g,151.63mmol,9.44mL,3eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液に水(300mL)を添加し、酢酸エチル(300mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水(100mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:1)により精製して、化合物WX040-5を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 7.92-7.83(m,2H),7.18(d,J=8.4Hz,1H),5.50(br d,J=6.1Hz,1H),4.72-4.52(m,2H),4.28-4.17(m,1H),3.92(s,3H),3.42(s,3H),1.38(s,9H)。
トルエン(40mL)に、WX040-5(4.01g,11.45mmol,1eq)、ローソン試薬(5.09g,12.59mmol,1.1eq)およびBoc2O(10.60g,48.55mmol,11.15mL,4.24eq)をゆっくりと加え、110℃に昇温してさらに12時間撹拌した。反応液を飽和食塩水(30mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、有機相を飽和食塩水(30mL×2)で洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1~1:1)により精製して、化合物WX040-6を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 7.99-7.92(m,2H),7.21(d,J=8.3Hz,1H),6.02(br d,J=7.8Hz,1H),4.80-4.69(m,1H),4.53(dd,J=6.3,9.5Hz,1H),4.22(dd,J=9.5,11.3Hz,1H),3.94(s,3H),3.86(s,3H),1.46-1.33(m,9H)。
丸底フラスコにTHF(8mL)およびH2O(2mL)を加えた後、WX040-6(800mg,2.18mmol,1eq)およびLiOH・H2O(183.23mg,4.37mmol,2eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌した。pH<3になるように反応液に希塩酸を滴下し、濾過し、析出物を回収して化合物WX040-7を得た。 1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=7.89-7.79(m,1H),7.25-7.20(m,1H),7.02-6.95(m,1H),6.17-6.02(m,1H),4.88-4.74(m,1H),4.56(dd,J=6.4,9.7Hz,1H),4.31-4.17(m,1H),3.85(s,3H),1.41(s,9H)。
丸底フラスコにN,N-ジメチルホルムアミド(5mL)を加えた後、WX040-7(200mg,567.53μmol,1eq)、NH4Cl(91.07mg,1.70mmol,3eq)、HATU(647.37mg,1.70mmol,253.15μL,3.00eq)およびDIPEA(366.75mg,2.84mmol,494.27μL,5eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液をそのままHPLC(カラム:Xtimate C18 100*30mm*3μm;移動相:[水(0.225%FA)-ACN];アセトニトリル%:30%-60%,8min)により分離して、化合物WX040-8を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 7.82(s,1H),7.64(br d,J=8.3Hz,1H),7.22(d,J=8.3Hz,1H),6.98(s,2H),5.01(br s,1H),4.86-4.66(m,1H),4.52(dd,J=6.3,9.5Hz,1H),4.30-4.11(m,1H),3.86(s,3H),1.40(s,9H)。
丸底フラスコに酢酸エチル(10mL)を加えた後、WX040-8(40mg,113.82μmol,1eq)およびHCl/酢酸エチル(4M,10.00mL,351.42eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間撹拌した。反応液を減圧濃縮して化合物WX040-9を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ= 8.16-8.04(m,2H),7.91(d,J=8.5Hz,1H),7.57(s,1H),7.37(d,J=8.3Hz,1H),4.62-4.41(m,3H),3.82(s,3H)。
DMSO(1mL)にWX040-9(30mg,119.38μmol,1eq, HCl)、BB-8(24.26mg,119.38μmol,1eq)、HATU(68.09mg,179.07μmol,1.5eq)およびDIEA(46.28mg,358.13μmol,62.38μL,3eq)をゆっくりと加え、25℃でさらに2時間攪拌し、反応液をそのままHPLC(カラム:Phenomenex Gemini-NX 80*30mm*3μm;移動相:[水(10mM NH4HCO3)-ACN];アセトニトリル%:28%-58%,9min)により分離して、化合物WX040を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.70(br d,J=7.3Hz,1H),8.04(s,1H),7.69(s,1H),7.39-7.36(m,1H),7.31-7.28(m,7H),5.39(s,2H),5.20(td,J=6.8,11.0Hz,1H),4.72(dd,J=6.5,9.4Hz,1H),4.31(t,J=10.3Hz,1H),3.89(s,3H);LCMS m/z=437.1[M+1]+。
25℃で、丸底フラスコにMeCN(20mL)を加えた後、WX041-1(2.68g,21.09mmol,1eq)、K2CO3(5.83g,42.17mmol,2eq)および4-クロロメチルトリフルオロトルエン(4.92g,25.30mmol,3.73mL,1.2eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を60℃でさらに12時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:20-100:75)により精製して、化合物WX041-2を得た。 1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.17(s,1H),7.65(d,J=8.0Hz,2H),7.40(d,J=8.0Hz,2H),5.49(s,2H),4.08-3.91(m,3H)。
25℃で、丸底フラスコにTHF(20mL)およびH2O(4mL)を加えた後、WX041-2(2.40g,8.41mmol,1eq)およびLiOH・H2O(1.06g,25.24mmol,3eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を25℃でさらに1時間撹拌し、反応液を希塩酸(1M)でpH6-7に調整し、濾過し、析出物を回収して化合物WX041-3を得た。
25℃で、丸底フラスコにN,N-ジメチルアセトアミド(5mL)を加えた後、BB-4(20mg,45.29μmol,1eq)、T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50%純度,1.5eq)、WX041-3(18.42mg,67.94μmol,1.5eq)およびDIPEA(17.56mg,135.87μmol,23.67μL,3eq)をゆっくりと加え、窒素ガス保護下、反応液を25℃でさらに2時間撹拌した。反応液を水(100mL)にゆっくりと注ぎ、酢酸エチル(100mL×2)で抽出し、有機相を合わせ、水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で順次に洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物を分取HPLC(カラム:Phenomenex Gemini-NX 80*30mm*3μm;移動相:[水(10mM NH4HCO3)-ACN])により分離して、化合物WX041を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ=8.77(br d,J=7.5Hz,1H),8.31(br d,J=3.6Hz,1H),8.07(s,1H),7.65-7.45(m,3H),7.33(br d,J=8.0Hz,2H),7.22(dd,J=4.8,7.9Hz,1H),5.40(s,2H),5.23-4.97(m,1H),4.72(dd,J=6.5,9.4Hz,1H),4.25(t,J=10.3Hz,1H),3.87(s,3H);19F NMR(377MHz,CDCl3) δ=-43.60(s,1F);LCMS m/z =463.1[M+1]+。
MeCN(20mL)に、WX042-1(2g,15.74mmol,1eq)、3-クロロメチルアニソール(2.46g,15.74mmol,2.14mL,1eq)、K2CO3(2.61g,18.88mmol,1.2eq)を加え、50℃で12時間反応させた。反応液を濾過してK2CO3を除去し、酢酸エチル(15mL×3)でフィルターケーキを洗浄し、飽和食塩水(50mL)で濾液を洗浄し、有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=100:1-100:100)により精製して、化合物WX042-2を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.10-8.01(m,1H),7.30-7.21(m,1H),6.91-6.80(m,2H),6.77(s,1H),5.34(s,2H),3.96(s,3H),3.75(s,3H)。
THF(30mL)にWX042-2(2.5g,10.11mmol,1eq)を加えた後、LiOH・H2O(509.17mg,12.13mmol,1.2eq)のH2O(3mL)溶液を加え、25℃で撹拌しながら3時間反応させた。TLC(石油エーテル:酢酸エチル=1:1)によって、原料が完全に消費されたことをモニタリングした。反応液を1Mの希塩酸でpH6に調整し、減圧濃縮して溶媒を除去し、残留液にトルエン(10mL)を添加してさらに減圧濃縮し、トルエンを除去して化合物WX042-3を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 7.19(s,4H),7.21-7.17(m,1H),4.65(s,2H),3.79(s,3H);LCMS m/z=233.9[M+1]+。
N,N-ジメチルホルムアミド(5mL)に、BB-4(94.67mg,214.39μmol,1eq)、WX042-3(50mg,214.39μmol,1eq)、T3P(163.71mg,257.26μmol,153.00μL,50%純度,1.2eq)、DIPEA(41.56mg,321.58μmol,56.01μL,1.5eq)を加え、25℃で2時間反応させ、LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングした。反応液を5mL程度まで減圧濃縮し、HPLC(ギ酸系)により分離し、精製して、化合物WX042を得た。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ= 8.81(br d,J=7.0Hz,1H),8.37(dd,J=1.6,4.6Hz,1H),8.04(s,1H),7.57(dd,J=1.6,7.9Hz,1H),7.33-7.27(m,2H),7.00-6.69(m,3H),5.36(s,2H),5.22(td,J=6.7,11.1Hz,1H),4.79(dd,J=6.3,9.5Hz,1H),4.32(dd,J=9.5,11.0Hz,1H),3.93(s,3H),3.79(s,3H)。
CULTURPLATE-384 +LID /50W 商標PerkinElmer cat#6007680
Envision plate reader(Perkin Elmer,Cat#2104-0010)
1×DPSB:10×DPBS 100mLに脱イオン水900mLを加えた。
1640完全培地:RPMI-1640培地89mLに10mLのFBS、1mLのペニシリン/ストレプトマイシンを添加した。
1. U937細胞を遠心分離した後、培地を廃棄した。細胞を1640完全培地に再懸濁させ、カウントした。細胞濃度を5×105細胞/mLに調整し、試験する化合物に従って細胞を配置した。
2. 調製したU937細胞の再懸濁液に、最終濃度25μMのQVD-OPhおよび最終濃度100ng/mLのTNF-αを添加した後、混合物を穏やかに混合した。
3. 384ウェルプレートに、25μMのQVD-OPhおよび最終濃度100ng/mLのTNF-αを含むU937細胞液を、30μL/ウェルで添加し、同時に、QVD-OPhおよびTNF-αを含まないブランクコントロールウェルを設置した。
4. 投与群に10μLの試験化合物を設定濃度の4倍で加え、ブランクコントロールウェルに対応する濃度のDMSOを添加した。
5. 384ウェルプレートを、37℃、5%CO2細胞培養インキュベーターに置いて24時間インキュベートした。
6. 24時間後、384ウェルプレートを取り出し、室温で20分間平衡化した。
7. 40μLのCTGを各ウェルに加え、プレートをシェーカーで暗所、2分間振とうした。
8.プレートを暗所、室温で10分間インキュベートした後、Envision plate readerを使用して読み取った。
上記の表から、本発明化合物は、TNFα/QVD-OPhによって誘導されるプログラム細胞壊死(ネクロトーシス)を阻害する細胞活性アッセイにおいて良好な阻害活性を示すことが分かる。
マイクロプレートリーダー(Perkin Elmer、Envision)
L929細胞完全培地:EMEM+10%ウマ血清(体積比)+1%ダブル抗生物質(体積比)
1. 培養したL929細胞をトリプシンで消化し、遠心分離し、完全培地に再懸濁してカウントした。次に、細胞濃度を完全培地で1×105/mLに希釈した。
2. 細胞懸濁液をウェルあたり100μLで96ウェルプレートに添加し、37℃、5%CO2の条件下で24時間インキュベートした。
3. 異なる濃度の試験化合物を各ウェルに加え、ジメチルスルホキシドを対照群に添加した。37℃、5%CO2の条件下でプレートを1時間インキュベートした。
4. 各ウェルに、最終濃度50ng/mLのTNF-αおよび最終濃度50μMのQ-VDを添加し、プレートを37℃、5%CO2の条件下で24時間インキュベートした。
5. 各ウェルに50μLのCellTiter Glo蛍光細胞を添加し、暗所でプレートを10分間振とうした。
6. プレートをマイクロプレートリーダーで読み取った。
上記の表から、本発明化合物は、TNFα/QVD-OPhによって誘導されるプログラム細胞壊死(ネクロトーシス)を阻害するマウスL929細胞活性アッセイにおいて良好な阻害活性を示すことが分かる。
実験手順
8匹の健康な成体C57BL/6マウス(6~9週齢、Shanghai Lingchang Biotechnology社から購入)を選択し、各群に4匹のマウス(n=2、交差採血(cross blood sampling))がいるように、ランダムに2つの群に分けた。一方の群では静脈内注射により0.5mg/kgの試験化合物を投与し、もう一方の群では強制経口投与により1mg/kgの試験化合物を投与した。投与された後、0.083、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、24時間で、静脈内投与群および強制経口投与群の動物からそれぞれ血漿サンプルを採取した。LC-MS/MS法で薬の血中濃度を測定した。WinNonlin(商標) Version 6.3(Pharsight、Mountain View、CA)の薬物動態ソフトウェアによって、ノンコンパートメントモデルおよび線形対数台形法を使用して、関連する薬物動態パラメータを算出した。AUC0-lastは、ゼロ時点から最後の検出可能な濃度の時点までの血中濃度-時間曲線下面積を表す。Cmaxは、最高血中濃度を表す。Tmaxは、最高血中濃度到達時間を表す。T1/2は半減期を表す。CLはクリアランスを表す。Tlastは、最後の定量化可能な時点を表す。p.o.は経口投与を表す。i.v.は静脈内注射を表す。F%は経口投与バイオアベイラビリティを表す。
本発明化合物は、良好な薬物動態特性、インビボ曝露(in vivo exposure)、およびバイオアベイラビリティを有する。
1)電子天秤:商標 Changzhou Tianzhiping Instrument Equipment Co., Ltd., モデル JY20002
2)肛門体温計:商標 PHYSITEMP、モデルBAT-12
1)TNF-α:蓋を開ける前に、TNF-αをすばやく遠心分離した(10000rmp、30秒)。1本のTNF-α(1mg)を1mLの滅菌水に溶解し、1mg/mLの濃度の母液を調製した。母液は4℃で保存され、1週間保存することができる。1000μLの母液を秤量して5667μLの滅菌水に加え、さらに333mgのトレハロースを加えて溶解させ、作業溶液を調製した。
2)zVAD:20mgのzVADを秤量し、480μLのDMSOに加え、混合物をボルテックスし、超音波処理し、37℃で加熱した後、さらに15.52mLの生理食塩水を添加した。1.25mg/mLの濃度の作業溶液を調製した。
1)マウスを3日間適応的に飼育した後、ケージにランダムで群分けし、各ケージに5匹のマウスを入れた。耳札をカットした。
2)まず、マウスに体重に応じて強制経口投与することにより、対応する化合物を投与した。次に、マウスあたり250μgの用量でzVADを腹腔内注射した。zVADの腹腔内注射後、肛門温度を直ちに測定(0時間)し、時間を記録した。マウスにzVADを投与した時間は、0時間目(0h)と定義された。
3)15分後、マウス1匹あたり200μLの用量でTNF-αを尾静脈から注射し、15分後(0.5時間)に肛門温度を測定した。
4)1時間後、マウス1匹あたり125μgの用量でzVADを腹腔内注射した後、直ちに肛門温度を測定(1時間)した。肛門温度は、2時間、3時間および4時間で再度測定された。
本発明化合物は、TNF-α/zVADによって誘導される全身性炎症反応症候群(SIRS)を阻害するマウスモデルにおいて非常に良好な保護効果を示し、マウスの体温の低下幅が大幅に低下し、動物の生存率は0%から100%に増加した。
細胞の培養
細胞の培養には、2mMのL-グルタミン、10%のウシ胎児血清(FBS)、100U/mLのペニシリン-G、および100μg/mLのストレプトマイシンを添加したMEM(最小必須培地)を使用した。細胞培養の条件は、37±1℃、5%CO2、飽和湿度であった。細胞が80~90%のコンフルエントまで増殖したら、トリプシン(0.05%、w/v)/EDTA(0.02%、w/v)消化液を添加して、細胞を消化した後、播種した。BD FalconのTranswell-96ウェルプレートに、1×105細胞/cm2の播種密度で細胞を播種した。細胞を二酸化炭素インキュベーターで22日間培養した後、輸送アッセイに使用した。
このアッセイでは、10mMのHEPESを含むHank’s平衡塩緩衝液(pH 7.40±0.05)を輸送緩衝液として使用した。試験化合物と陽性薬物であるジゴキシンの2μM濃度での双方向輸送を、それぞれ2つの並列サンプルで試験した。頂端から基底端(A-B)へのフェノテロールおよびプロプラノロールの輸送を試験した。インキュベーションシステム中のDMSOの濃度を1%未満に制御し、サンプルを加えた後、細胞プレートを、37±1℃、5%CO2、飽和湿度の条件下で120分間インキュベートした。すべてのサンプルをボルテックスした後、3220rpm、20℃で20分間遠心分離した。コントロールおよび試験用のサンプルを超純水で1:1(v:v)に希釈した後、4℃で保存した。液体クロマトグラフィータンデム質量分析(LC/MS/MS)を使用して分析を行った。
このアッセイでは、液体クロマトグラフィータンデム質量分析(LC/MS/MS)を使用して、開始溶液、受容液および投与ウェルの上清における試験化合物、対照物質であるフェノテロール、プロプラノロールおよびジゴキシンの内部標準に対するピーク面積比を半定量的に分析した。
以下の式を使用して、見かけの透過係数(Papp、cm/s)、流出速度(efflux rate)および回収率を算出した。
以下の式を使用して、見かけの透過係数(Papp、cm/s)を算出した。
Papp=(dCr/dt)×Vr/(A×C0)
ここで、dCr/dtは、単位時間あたりの受ける側での化合物の累積濃度(μM/s)であり;Vrは、受ける側の溶液の体積(頂端と基底端の溶液の体積は、それぞれ0.075mLと0.250mLであった)であり;Aは細胞単層の相対表面積(0.0804cm2)であり;C0は、投与側の試験物質の初期濃度(nM)または対照物質のピーク面積比である。
流出速度=Papp(BA)/Papp(AB)
回収率は、以下の式を使用して算出された。
%回収率=100×[(Vr×Cr)+(Vd×Cd)]/(Vd×C0)
ここで、C0は、投与側の試験物質の初期濃度(nM)または対照物質のピーク面積比であり;Vdは、投与側での体積(頂端は0.075mL、基底端は0.250mLであった)であり;CdとCrは、それぞれ投与側と受ける側での試験物質の最終濃度(nM)または対照物質のピーク面積比である。
本発明化合物は、透過性が高く、流出速度が低い化合物である。
ヒト、SDラットおよびCD-1マウスから採取した796μLのブランク血漿(BioreclamationIVTから購入した血漿)を秤量し、血漿サンプルにおける試験化合物およびワルファリンの最終濃度がともに2μMになるように、試験化合物作業溶液またはワルファリン作業溶液を加えた。サンプルを十分に混合した。有機相中のDMSOの最終濃度は0.5%であった。試験化合物とワルファリンの血漿サンプル50μLをサンプル受容プレートに移し、各サンプルウェルの最終体積が100μLになるように、対応するブランク血漿または緩衝液を対応する容量で直ちに添加した。血漿:透析緩衝液の体積比は1:1であった。次に、これらのサンプルに停止溶液を加えた。これらのサンプルは、T0サンプルとして、回収率および安定性の測定に使用された。試験化合物およびワルファリンの血漿サンプルを各透析ウェルの投与側に添加し、ブランク透析緩衝液を透析ウェルの対応する受ける側に添加した。次に、透析プレートを気体透過膜で密封し、湿った5%CO2インキュベーターに入れ、37℃、100rpmで4時間振とうしながらインキュベートした。透析が終了した後、50μLの透析した緩衝液サンプルおよび透析した血漿サンプルを、新しいサンプル受容プレートに移した。各サンプルウェルの最終容量が100μLになるように、対応するブランク血漿または緩衝液を、対応する容量でサンプルに加え、血漿:透析緩衝液の体積比が1:1であった。すべてのサンプルに対して、タンパク質沈殿を行い、LC/MS/MSで分析し、次の式により、化合物の遊離率(%Unbound)、結合率(%Bound)および回収率(%Recovery)を算出した。
%Unbound=100*FC/TC、
%Bound=100-%Unbound、
%Recovery=100*(FC+TC)/T0。
ここで、FCは、透析プレートの緩衝液側での化合物の濃度である。TCは、透析プレートの血漿側での化合物の濃度である。T0は、ゼロ時点での血漿サンプル中の化合物の濃度である。
本発明化合物は、ヒト、ラットおよびマウスにおいて合理的な血漿タンパク結合率を有し、ヒト血漿中の非結合状態の薬物は5.7%である。
4匹の健康な成体ビーグル犬を選択し、ランダムに2つの群に分けた。一方の群では静脈内注射により試験化合物を投与し、もう一方の群では強制経口投与により試験化合物を投与した。投与された後0.083、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、24時間で、静脈内投与群および強制経口投与群の動物からそれぞれ血漿サンプルを採取した。LC-MS/MS法で薬の血中濃度を測定した。WinNonlin(商標) Version 6.3(Pharsight、Mountain View、CA)の薬物動態ソフトウェアによって、ノンコンパートメントモデルおよび線形対数台形法を使用して、関連する薬物動態パラメータを算出した。AUC0-lastは、ゼロ時点から最後の検出可能な濃度の時点までの血中濃度-時間曲線下面積を表す。Cmaxは、最高血中濃度を表す。Tmaxは、最高血中濃度到達時間を表す。T1/2は半減期を表す。CLはクリアランスを表す。Vdssは、見かけの分布容積を表す。p.o.は経口投与を表す。i.v.は静脈内注射を表す。F%は経口投与バイオアベイラビリティを表す。
本発明化合物は、イヌにおいて良好な薬物動態特性を有し、インビボ曝露(in vivo exposure)が高く、特に、その半減期が理想的な時間である5時間程度に達する。
このアッセイの目的は、様々なキナーゼに対するWX009のインビトロ阻害活性を検出することであった。このアッセイで使用されたキナーゼには413種類のキナーゼが含まれ、活性検出法はEurofins Pharma Discovery Service社によって提供された。アッセイにおいて、33P放射性標識キナーゼ活性を検出する方法を利用した。WX009の濃度は1μMであり、ATPの濃度は10μMであった。アッセイの結果を表8に示す。
表8 WX009のキナーゼプロファイルアッセイの結果
本発明化合物は、高度に特異的なキナーゼ選択性を有し、ほとんどRIP1のみに対して高い活性で阻害効果を示すため、他のキナーゼ標的へオフターゲットするリスクが低い。
23℃でBB-4-3(16.00g,53.82mmol,1eq)の酢酸エチル溶液(400mL)に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(20.87g,161.45mmol,28.12mL,3eq)、2,4,6-トリブチル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン-2,4,6-トリオキシド(68.49g,107.63mmol,64.01mL,50%純度の酢酸エチル溶液,2eq)を加えた後、さらに2時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。飽和食塩水で反応液(200mL*2)を洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1~1:1)により分離して、化合物BB-4-4を得た。LCMS m/z=224.1[M-56+H]+。
化合物BB-3(0.58g,2.78mmol,1eq)、化合物BB-1(849mg,4.18mmol,1.5eq)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(1.26g,9.75mmol,1.70mL,3.5eq)を酢酸エチル(10mL)に溶解させた後、2,4,6-トリブチル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン-2,4,6-トリオキシド(4.43g,6.96mmol,4.14mL,50%純度の酢酸エチル溶液、2.5eq)を滴下し、その後、25℃で12時間撹拌した。反応液に20mLの水を添加し、酢酸エチル(5mL*2)で抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水(10mL)で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムで精製し、SFC(Chiralcel OJ-3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:Aは超臨界二酸化炭素であり、Bはメタノール(0.05% IPAmを含む)であり;グラジエント:Bの比例は10%から40%になり、合計5分間;流量:4.0mL/min;波長h:220nm)で分離し、化合物WX001を得た。1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ=8.71(d,J=7.53Hz,1H),7.20-7.38(m,9H),5.15-5.25(m,1H),4.67(dd,J=6.53,9.54Hz,1H),4.29(dd,J=9.79,10.79Hz,1H),4.21(s,2H),3.89(s,3H);LCMS m/z=394.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A :CO2 ,B:MeOH(0.05%IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)の分析により、ee%=96.36%である。
BB-3(0.06g,288.07μmol,1eq)およびBB-2(131.48mg,576.15μmol,2eq)のDMF溶液(10mL)に、2,4,6-トリブチル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン-2,4,6-トリオキシド(458.30mg,720.19μmol,428.32μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(111.69mg,864.22μmol,150.53μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液に20mLの酢酸エチルを添加し、15mLの飽和食塩水で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 150mm*25mm*5μm;移動相:[水(10mM NH4HCO3)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,10.5min)により分離し、精製して、化合物WX002を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.60(br d,J=8.16Hz,1H),7.69-7.81(m,2H),7.51-7.65(m,3H),7.36-7.46(m,2H),7.25-7.33(m,1H),4.97(dt,J=10.58,7.72Hz,1H),4.35-4.52(m,2H),4.21(s,2H),3.79(s,3H);LCMS m/z=419.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2 ,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(60mg,286.71μmol,1eq)およびBB-1(87.39mg,430.07μmol,1.5eq)のDMF溶液(10mL)に、2,4,6-トリブチル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン-2,4,6-トリオキシド(456.13mg,716.78μmol,426.29μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(111.16mg,860.13μmol,149.82μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液に30mLの酢酸エチルを添加し、20mLの飽和食塩水で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 150mm*25mm*5μm;移動相:[水(10mM NH4HCO3)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,10.5min)により分離し、精製して、化合物WX003を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.63(br s,1H),8.46(dd,J=4.63,1.54Hz,1H),7.79(d,J=7.94Hz,1H),7.48(dd,J=8.05,4.74Hz,1H),7.23-7.37(m,5H),5.01(dt,J=10.80,7.28Hz,1H),4.43-4.72(m,2H),4.14(br s,2H),3.80(s,3H);LCMS m/z=395.2[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A :CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=96.3%である。
BB-4(60mg,286.71μmol,1eq)およびBB-2(130.86mg,573.43μmol,2eq)のDMF溶液(10mL)に、2,4,6-トリブチル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン-2,4,6-トリオキシド(456.13mg,716.78μmol,426.29μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(111.16mg,860.14μmol,149.82μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液に30mLの酢酸エチルを添加し、20mLの飽和食塩水で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(カラム:Xtimate C18 15mm*25mm*5μm;移動相:[水(10mM NH4HCO3)-ACN];アセトニトリル%:35%-65%,10.5min)により分離し、精製して、化合物WX004を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.73(br s,1H),8.46(d,J=4.85Hz,1H),7.69-7.86(m,3H),7.44-7.65(m,3H),5.01(dt,J=11.08,7.14Hz,1H),4.48-4.68(m,2H),4.22(s,2H),3.80(s,3H);LCMS m/z=420.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-5(100mg,471.06μmol,1eq)およびBB-1(130.86mg,573.43μmol,1.2eq)のDMF溶液(10mL)に、2,4,6-トリブチル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン-2,4,6-トリオキシド(599.53mg,942.12μmol,560.31μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(182.64mg,1.41mmol,246.15μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液に酢酸エチル(30mL)を添加し、飽和食塩水(20mL)で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX005を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.62(br s,1H),8.46(dd,J=1.75, 4.82Hz,1H),7.79(dd,J=1.32,7.89Hz,1H),7.48(dd,J=4.82,7.89Hz,1H),7.20-7.37(m,5H),5.01(td,J=7.34, 11.18Hz,1H),4.60(br s,1H),4.49-4.55(m,1H),4.14(br s,2H);LCMS m/z=398.2[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)およびBB-1(11.60mg,57.34μmol,1.2eq)のDMF溶液(1mL)に、2,4,6-トリブチル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン-2,4,6-トリオキシド(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液をそのまま分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX006を得た。1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ=9.01(br s,1H),8.34-8.46(m,2H),7.51-7.64(m,2H),7.43(br s,3H),7.28-7.31(m,2H),7.22-7.26(m,1H),5.29(br s,2H),5.20(br d,J=7.02Hz,1H),4.58-4.69(m,2H),3.91(s,3H);LCMS m/z=394.2[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)およびBB-7(11.65mg,57.35μmol,1.2eq)のDMF溶液(1mL)に、2,4,6-トリブチル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン-2,4,6-トリオキシド(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液をそのまま分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX007を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.98(d,J=8.33Hz,1H),8.46(dd,J=1.32,4.82Hz,1H),7.77(dd,J=1.75,7.89Hz,1H),7.47(dd,J=4.60,8.11Hz,1H),7.22-7.40(m,5H),6.54(s,1H),5.00(td,J=7.45,11.40Hz,1H),4.59-4.70(m,1H),4.48-4.56(m,1H),4.22(s,2H),3.79(s,3H);LCMS m/z=395.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)およびBB-8(15.06mg,57.35μmol,1.2eq)のDMF溶液(1mL)に、2,4,6-トリブチル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン-2,4,6-トリオキシド(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液をそのまま分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX008を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.85(d,J=7.89Hz,1H),8.46(d,J=3.07Hz,1H),7.75-7.89(m,3H),7.61(d,J=4.82Hz,2H),7.48(dd,J=4.82,7.89Hz,1H),5.58(s,2H),4.94-5.06(m,1H),4.65(t,J=10.74Hz,1H),4.45-4.57(m,1H),3.80(s,3H);LCMS m/z=454.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)およびBB-9(11.65mg,57.35μmol,1.2eq)のDMF溶液(1mL)に、2,4,6-トリブチル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン-2,4,6-トリオキシド(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液をそのまま分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX009を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.84(s,1H),8.71(d,J=7.89Hz,1H),8.46(dd,J=1.53,4.60Hz,1H),7.79(dd,J=1.53,8.11Hz,1H),7.48(dd,J=4.82,7.89Hz,1H),7.26-7.42(m,5H),5.49(s,2H),4.94-5.08(m,1H),4.48-4.63(m,2H),3.80(s,3H);LCMS m/z=395.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)およびWX010-1(11.65mg,57.35μmol,1.2eq)のDMF溶液(1mL)に、2,4,6-トリブチル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン-2,4,6-トリオキシド(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液をそのまま分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX010を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.75(d,J=8.33Hz,1H),8.69(s,1H),8.46(dd,J=1.53,4.60Hz,1H),7.79(dd,J=1.53,8.11Hz,1H),7.48(dd,J=4.82,7.89Hz,1H),7.30-7.41(m,5H),5.65(s,2H),4.97-5.10(m,1H),4.58-4.68(m,1H),4.47-4.57(m,1H),3.80(s,3H);LCMS m/z=395.1[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)およびBB-13(14.76mg,62.13μmol,1.2eq)のDMF溶液(1mL)に、2,4,6-トリブチル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン-2,4,6-トリオキシド(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50%純度の酢酸エチル溶液,2.5eq)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)を加えた後、25℃で10時間撹拌した。LCMSによって、原料が完全に消費されたことをモニタリングし、目的シグナルが現れた。反応液をそのまま分取HPLC(カラム:Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm;移動相:[水(0.05%HCl)-ACN];アセトニトリル%:20%-50%,12min)により分離し、精製して、化合物WX011を得た。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6) δ=8.83(d,J=7.89Hz,1H),8.41-8.49(m,1H),7.77(dd,J=1.32, 7.89Hz,1H),7.46(dd,J=4.82,7.89Hz,1H),7.30-7.42(m,3H),7.26(d,J=7.02Hz,2H),5.48(s,2H),4.98(td,J=7.13,11.62Hz,1H),4.59-4.67(m,1H),4.49(dd,J=6.80, 9.87Hz,1H),3.78(s,3H);LCMS m/z=429.0[M+H]+。超臨界流体クロマトグラフィー(キラルカラム:カラム:Chiralpak OD -3, 3μm,0.46cm id x 5cm L;移動相:A:CO2,B:MeOH(0.05% IPAm);グラジエント:B/A=10%-40%,3分間;流量:4.0mL/min;波長:220nm)分析により、ee%=100%である。
Claims (17)
- 式(I)で表われる化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩であって、
T1はNとCR1tから選択され;
T2はNとCR2tから選択され;
T3はNとCR3tから選択され;
T4はNとCR4tから選択され;
E1はC(R1e)2、O、C(=O)、SおよびNR2eから選択され;
環Aは、1,2,4-トリアゾリル、1,2,3-トリアゾリル、イミダゾリル、イソキサゾリル、1,3,4-オキサジアゾリル、
環Bは、フェニルおよび
Lは、単結合、O、C(=O)、S、NHおよびC1-3アルキルからなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRaで置換されていてもよく;
R1は、HおよびC1-3アルキルから選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRbで置換されていてもよく;
R1t、R2t、R3tおよびR4tは、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2、C1-3アルキル、COOHおよび-C(=O)NH2からなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRcで置換されていてもよく;
R1eは、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2およびC1-3アルキルからなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のRdで置換されていてもよく;
R2eは、HおよびC1-3アルキルから選択され、ここで、前記C1-3アルキルが、1個、2個または3個のReで置換されていてもよく;
R2は、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3アルキル、およびC1-3アルコキシからなる群から選択され、ここで、前記C1-3アルキル、およびC1-3アルコキシが、1個、2個または3個のRfで置換されていてもよく;
nは1、2、3、4または5であり;
Ra、Rb、Rc、Rd、ReおよびRfは、それぞれ独立して、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2およびDからなる群から選択される、
式(I)で表われる化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩。 - R1がHおよびCH3から選択され、ここで、前記CH3が、1個、2個または3個のRbで置換されていてもよい、
請求項1に記載の化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩。 - R1がH、CH3およびCD3から選択される、
請求項2に記載の化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩。 - R1t、R2t、R3tおよびR4tが、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2、CH3、COOHおよび-C(=O)NH2からなる群から選択され、ここで、前記CH3が、1個、2個または3個のRcで置換されていてもよい、
請求項1に記載の化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩。 - R1t、R2t、R3tおよびR4tが、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2およびCH3からなる群から選択される、
請求項4に記載の化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩。 - R1eが、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2およびCH3からなる群から選択される、
請求項1に記載の化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩。 - R2eがHおよびCH3から選択される、
請求項1に記載の化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩。 - E1がCH2、O、C(=O)、SまたはNHからなる群から選択される、
請求項1、6または7のいずれか1項に記載の化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩。 - R2が、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3およびOCH3からなる群から選択され、ここで、前記CH3およびOCH3が、1個、2個または3個のRfで置換されていてもよい、
請求項1に記載の化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩。 - R2が、それぞれ独立して、H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、OCH3、CF3およびOCF3からなる群から選択される、
請求項9に記載の化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩。 - Lが単結合、-CH2-および-O-から選択される、
請求項1に記載の化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩。 - RIP-1キナーゼに関する疾患を治療するための医薬品の調製における、請求項1~16のいずれか1項に記載の化合物、その異性体またはその薬学的に許容される塩の使用。
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