CN112601746B - 吡唑并嘧啶衍生物及其作为pi3k抑制剂的应用 - Google Patents
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- CN112601746B CN112601746B CN201980052343.3A CN201980052343A CN112601746B CN 112601746 B CN112601746 B CN 112601746B CN 201980052343 A CN201980052343 A CN 201980052343A CN 112601746 B CN112601746 B CN 112601746B
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Abstract
涉及一种吡唑并嘧啶衍生物,及其在制备治疗与PI3K相关疾病的药物中的应用。具体公开了式(Ι)所示衍生化合物、其互变异构体或其药学上可接受的组合物。
Description
本申请主张如下优先权:
CN201810960230.0,申请日2018.08.21;
CN201811184709.6,申请日2018.10.11;
CN201910412148.9,申请日2019.05.17;
CN201910755701.9,申请日2019.08.15。
技术领域
本发明涉及一系列吡唑并嘧啶衍生物,及其在制备治疗与PI3K相关疾病的药物中的应用。具体涉及式(I)所示衍生化合物、其互变异构体或其药学上可接受的组合物。
背景技术
磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)为一种由调节亚单位p85或p101,以及催化亚单位p110(又分为p110a,p110b,p110g,p110d四种亚型)组成的脂激酶,通过催化磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate,PIP2)的肌醇环3’-OH磷酸化为磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸(phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate,PIP3)而激活下游的Akt等从而对细胞的增殖、生存和代谢等起关键作用。在肿瘤细胞中,PI3K过度表达,从而导致肿瘤细胞的快速增殖和生长。
肿瘤抑制基因PTEN(phosphatase,tension homolog deleted on chromosometen)使PIP3去磷酸化生成PIP2,从而导致PI3K信号通路的负反馈调节,抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。PI3K基因突变和扩增在癌症中屡有发生,以及PTEN基因在癌症中缺失等都提示PI3K的过度表达与肿瘤发生密切相关。
TGR-1202是由TG Therapeutic公司开发的第二代PI3Kδ抑制剂,在临床试验中较第一代PI3Kδ抑制剂能显著降低肝及胃肠道毒副反应,并且大B细胞淋巴瘤病人也对TGR-1202有部分应答。专利WO2014006572中公开了TGR-1202的结构。ACP-196是已经被FDA批准上市的第二代BTK抑制剂,有文献报道(PLoS ONE 12(2):e0171221.),PI3Kδ抑制剂与BTK抑制剂联用能够从两个方面共同抑制BCR信号通路,从而起到协同作用。
发明内容
本发明提供了式(I)所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐,
其中,
R1分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN和任选被1、2或3个Rc取代的C1-3烷基;
R2和R3分别独立地选自H和任选被1、2或3个Ra取代的C1-3烷基;
R4分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷氨基、C3-6环烷基和C3-6环烷基-O-,所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷氨基、C3-6环烷基和C3-6环烷基-O-任选被1、2或3个Rb取代;
或者,两个R4和它们相连的原子共同构成5-8元杂环烯基;
环B选自苯基和5~6元杂芳基;
m选自1、2和3;
n选自1、2和3;
Ra、Rb和Rc分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、CH3、CH2CH3和OCH3;
带“*”碳原子为手性碳原子,以(R)或(S)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在;
所述5~6元杂芳基包含1、2、3或4个独立选自-NH-、-O-、-S-和N的杂原子或杂原子团。
本发明的一些方案中,上述R1分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN和任选被1、2或3个Rc取代的CH3,其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中,上述R1分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN和CH3,其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中,上述R2和R3分别独立地选自H和任选被1、2或3个Ra取代的CH3,其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中,上述R2和R3分别独立地选自H和CH3,其他变量如本发明所定义,其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中,R4分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、C1-3烷基、C1-3烷氨基、C1-3烷硫基、C3-4环烷基-O-和C1-3烷氧基,其中所述C1-3烷基、C1-3烷氨基、C1-3烷硫基、C3-4环烷基-O-和C1-3烷氧基任选被1、2或3个Rb取代,其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中,上述R4分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、CH3、CH(CH3)2、CH2CH3、NHCH3、SCH3、OCH3、OCH2CH3、所述CH3、CH(CH3)2、CH2CH3、NHCH3、SCH3、OCH3、OCH2CH3、任选被1、2或3个Rb取代,其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中,上述R4分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、CH3、CH2F、CHF2、CF3、CH2CH3、CH(CH3)2、C(CH3)3、CH2CF3、NHCH3、N(CH3)2、SCH3、CH2OCH3、OCH3、OCH(CH3)2、OCH2CHF2、OCH2CF3、OCH2CH2OCH3、其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中,上述环B选自苯基、噻唑基、吡嗪基、咪唑基、嘧啶基、哒嗪基、吡唑基和吡啶基,其他变量如本发明所定义。
本发明还有一些方案由上述变量任意组合而来。
本发明的一些方案中,上述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐,其选自
其中,
R1如本发明所定义;
R2和R3如本发明所定义;
带“*”碳原子为手性碳原子,以(R)或(S)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在;
R4如本发明所定义。
本发明的一些方案中,上述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐,其选自
其中,
R1和R4如本发明所定义。
本发明还提供了下式所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐,所述化合物选自
本发明的一些方案中,上述化合物,其选自
本发明还提供了上述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐在制备治疗与PI3K相关疾病的药物中的应用。
本发明的一些方案中,上述药物是用于慢性淋巴细胞白血病、小淋巴细胞淋巴瘤、边缘带淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤治疗的药物。
定义和说明
除非另有说明,本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的,而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时,意在指代其对应的商品或其活性成分。
这里所采用的术语“药学上可接受的”,是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言,它们在可靠的医学判断的范围之内,适用于与人类和动物的组织接触使用,而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症,与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐,由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时,可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时,可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐,所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸,碳酸氢根,磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等;以及有机酸盐,所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸;还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐,以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团,从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下,这样的盐的制备方法是:在水或有机溶剂或两者的混合物中,经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物,包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体,及其外消旋混合物和其他混合物,例如对映异构体或非对映体富集的混合物,所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物,均包括在本发明的范围之内。
除非另有说明,术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
除非另有说明,术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。
除非另有说明,术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心,并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
除非另有说明,“(D)”或者“(+)”表示右旋,“(L)”或者“(-)”表示左旋,“(DL)”或者“(±)”表示外消旋。
本发明的化合物可以存在特定的。除非另有说明,术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指在室温下,不同官能团异构体处于动态平衡,并能很快的相互转化。若互变异构体是可能的(如在溶液中),则可以达到互变异构体的化学平衡。例如,质子互变异构体(proton tautomer)(也称质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化,如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键异构体(valencetautomer)包括一些成键电子的重组来进行的相互转化。其中酮-烯醇互变异构化的具体实例是戊烷-2,4-二酮与4-羟基戊-3-烯-2-酮两个互变异构体之间的互变。
除非另有说明,术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100%,并且,该异构体或对映体的含量大于等于60%,或者大于等于70%,或者大于等于80%,或者大于等于90%,或者大于等于95%,或者大于等于96%,或者大于等于97%,或者大于等于98%,或者大于等于99%,或者大于等于99.5%,或者大于等于99.6%,或者大于等于99.7%,或者大于等于99.8%,或者大于等于99.9%。
除非另有说明,术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如,其中一种异构体或对映体的含量为90%,另一种异构体或对映体的含量为10%,则异构体或对映体过量(ee值)为80%。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体,可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备,其中将所得非对映体混合物分离,并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者,当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时,与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐,然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分,然后回收得到纯的对映体。此外,对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的,所述色谱法采用手性固定相,并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如,可用放射性同位素标记化合物,比如氚(3H),碘-125(125I)或C-14(14C)。又例如,可用重氢取代氢形成氘代药物,氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固,相比于未氘化药物,氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换,无论放射性与否,都包括在本发明的范围之内。
“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的,并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代,可以包括重氢和氢的变体,只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即=O)时,意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代,也可以不被取代,除非另有规定,取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时,其在每一种情况下的定义都是独立的。因此,例如,如果一个基团被0-2个R所取代,则所述基团可以任选地至多被两个R所取代,并且每种情况下的R都有独立的选项。此外,取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个连接基团的数量为0时,比如-(CRR)0-,表示该连接基团为单键。
当其中一个变量选自单键时,表示其连接的两个基团直接相连,比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。
当一个取代基为空缺时,表示该取代基是不存在的,比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时,这种取代基可以通过其任何原子相键合,例如,吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。当所列举的连接基团没有指明其连接方向,其连接方向是任意的,例如,中连接基团L为-M-W-,此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
除非另有规定,环上原子的数目通常被定义为环的元数,例如,“5-7元环”是指环绕排列5-7个原子的“环”。
除非另有规定,术语“C1-6烷基”用于表示直链或支链的由1至6个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C1-6烷基包括C1-5、C1-4、C1-3、C1-2、C2-6、C2-4、C6和C5烷基等;其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C1-6烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)、丁基(包括n-丁基,异丁基,s-丁基和t-丁基)、戊基(包括n-戊基,异戊基和新戊基)、己基等。
除非另有规定,术语“C1-3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C1-3烷基包括C1-2和C2-3烷基等;其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C1-3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)等。
除非另有规定,术语“C1-6烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至6个碳原子的烷基基团。所述C1-6烷氧基包括C1-4、C1-3、C1-2、C2-6、C2-4、C6、C5、C4和C3烷氧基等。C1-6烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)、丁氧基(包括n-丁氧基、异丁氧基、s-丁氧基和t-丁氧基)、戊氧基(包括n-戊氧基、异戊氧基和新戊氧基)、己氧基等。
除非另有规定,术语“C1-3烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C1-3烷氧基包括C1-2、C2-3、C3和C2烷氧基等。C1-3烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)等。
除非另有规定,本发明术语“5-6元杂芳环”和“5-6元杂芳基”可以互换使用,术语“5-6元杂芳基”表示由5至6个环原子组成的具有共轭π电子体系的单环基团,其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子,其余为碳原子。其中氮原子任选地被季铵化,氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p,p是1或2)。5-6元杂芳基可通过杂原子或碳原子连接到分子的其余部分。所述5-6元杂芳基包括5元和6元杂芳基。所述5-6元杂芳基的实例包括但不限于吡咯基(包括N-吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基等)、吡唑基(包括2-吡唑基和3-吡唑基等)、咪唑基(包括N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基和5-咪唑基等)、噁唑基(包括2-噁唑基、4-噁唑基和5-噁唑基等)、三唑基(1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基、1H-1,2,4-三唑基和4H-1,2,4-三唑基等)、四唑基、异噁唑基(3-异噁唑基、4-异噁唑基和5-异噁唑基等)、噻唑基(包括2-噻唑基、4-噻唑基和5-噻唑基等)、呋喃基(包括2-呋喃基和3-呋喃基等)、噻吩基(包括2-噻吩基和3-噻吩基等)、吡啶基(包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基等)、吡嗪基或嘧啶基(包括2-嘧啶基和4-嘧啶基等)。
除非另有规定,术语“5-8元杂环烯基”本身或者与其他术语联合分别表示包含至少一个碳-碳双键的由5至8个环原子组成的部分不饱和的环状基团,其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子,其余为碳原子,其中氮原子任选地被季铵化,氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p,p是1或2)。其包括单环、双环和三环体系,其中双环和三环体系包括螺环、并环和桥环,此体系的任意环都是非芳香性的。此外,就该“5-8元杂环烯基”而言,杂原子可以占据杂环烯基与分子其余部分的连接位置。所述5-8元杂环烯基包括5-7元、5-6元、4-5元、4元、5元和6元杂环烯基等。5-8元杂环烯基的实例包括但不限于除非另有规定,Cn-n+m或Cn-Cn+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况,例如C1-12包括C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、和C12,也包括n至n+m中的任何一个范围,例如C1-12包括C1-3、C1-6、C1-9、C3-6、C3-9、C3-12、C6-9、C6-12、和C9-12等;同理,n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个,例如3-12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、和12元环,也包括n至n+m中的任何一个范围,例如3-12元环包括3-6元环、3-9元环、5-6元环、5-7元环、6-7元环、6-8元环、和6-10元环等。
术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如,代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯;氯、溴、碘;磺酸酯基,如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等;酰氧基,如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。
术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于:甲酰基;酰基,例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基);烷氧基羰基,如叔丁氧基羰基(Boc);芳基甲氧羰基,如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc);芳基甲基,如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1-二-(4′-甲氧基苯基)甲基;甲硅烷基,如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于:烷基,如甲基、乙基和叔丁基;酰基,例如链烷酰基(如乙酰基);芳基甲基,如苄基(Bn),对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基,DPM);甲硅烷基,如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备,包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式,优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词:aq代表水;HATU代表O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐;EDC.HCl代表N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐;m-CPBA代表3-氯过氧苯甲酸;eq代表当量、等量;CDI代表羰基二咪唑;DCM代表二氯甲烷;PE代表石油醚;DIAD代表偶氮二羧酸二异丙酯;DMF代表N,N-二甲基甲酰胺;DMSO代表二甲亚砜;EtOAc代表乙酸乙酯;EtOH代表乙醇;MeOH代表甲醇;CBz代表苄氧羰基,是一种胺保护基团;BOC代表叔丁氧羰基是一种胺保护基团;HOAc代表乙酸;NaCNBH3代表氰基硼氢化钠;r.t.代表室温;O/N代表过夜;THF代表四氢呋喃;Boc2O代表二-叔丁基二碳酸酯;TFA代表三氟乙酸;DIPEA代表二异丙基乙基胺;SOCl2代表氯化亚砜;CS2代表二硫化碳;TsOH代表对甲苯磺酸;NFSI代表N-氟-N-(苯磺酰基)苯磺酰胺;NBS代表N-溴代丁二酰亚胺;-Bu4NF代表氟化四丁基铵;iPrOH代表2-丙醇;mp代表熔点;LDA代表二异丙基胺基锂;PPA代表多聚磷酸;PPh3代表三苯基膦;Pd(PPh3)4代表四(三苯基膦)钯;Pd(dppf)Cl2代表[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯;Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2代表[1,1’-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯·二氯甲烷;TMEDA代表N,N,N,N-四甲基乙二胺;n-BuLi代表正丁基锂。
技术效果:
本发明化合物能够很好的抑制PI3K激酶活性,同时对PI3Kα/β/γ有较高的亚型选择性;在细胞中也能够很好地抑制PI3K下游Akt的磷酸化水平。本发明化合物在小鼠体内表现出了高暴露量,低清除率,以及良好的口服生物利用度。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述,但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明,其中也公开了其具体实施例方式,对本领域的技术人员而言,在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
参考例1:片段BB-1
合成路线:
步骤1:化合物BB-1-3的合成
向BB-1-1(23g,205.17mmol,1eq)的多聚磷酸(23g,17.84mmol)溶液中,加入BB-1-2(43.90g,266.71mmol,1.3eq)。反应液于氮气保护下,125℃下搅拌5小时。反应完成后,向反应液中加入水(300mL)淬灭反应,有固体析出,直接过滤得到滤饼。滤饼再用水(100mL)洗涤一次,然后经柱层析(PE∶EA=1∶1)纯化,得到目标化合物BB-1-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.94(br s,1H),7.68(br d,J=5.3Hz,2H),6.65(s,1H),4.51(s,2H)。
步骤2:化合物BB-1-4的合成
向BB-1-3(21.02g,98.87mmol,1eq)的冰醋酸(210mL)溶液中,加入NBS(19.36g,108.75mmol,1.1eq)。反应液于氮气保护下,25℃下搅拌1小时。反应完成后,向反应液中加入水(200mL)淬灭反应,有固体生成,过滤得到滤饼。用水(30mL*3)洗涤三次后,滤饼用二氯甲烷(100mL)溶解,无水硫酸钠干燥,浓缩,再用甲基叔丁基醚(50mL)打浆一次,过滤收集滤饼,得到目标化合物BB-1-4批次一。水相用二氯甲烷(100mL*3)萃取并与甲基叔丁基醚洗涤得到的母液合并,再经柱经柱层析(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1,目标产物Rf=0.43)纯化,得到目标化合物BB-1-4批次二。两批次用二氯甲烷溶解合并,旋干得到目标化合物BB-1-4。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.93(dd,J=1.3,3.1Hz,1H),7.80-7.69(m,2H),4.74(s,2H)。
步骤3:化合物BB-1-5的合成
向BB-1-4(3g,10.29mmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液中,加入醋酸钾(1.52g,15.44mmol,1.5eq)。反应液于氮气保护下,40℃下搅拌3.5小时。反应完成后,向反应液中加入水(60mL)淬灭反应,有大量固体生成,过滤,得到滤饼。滤饼用二氯甲烷(100mL)溶解,无水硫酸钠干燥,浓缩,得到目标化合物BB-1-5批次一。水相用甲基叔丁基醚(100mL*3)萃取,得到有机相,无水硫酸钠干燥,浓缩,得到BB-1-5批次二,将两批次合并得到。直接用于下一步的反应。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.07-8.88(m,1H),7.71(dd,J=1.7,5.8Hz,2H),5.31-5.26(m,2H),2.22(s,3H)。
步骤4:化合物BB-1-6的合成
向BB-1-5(3.77g,11.96mmol,1eq)的二氧六环(37mL)溶液中,加入盐酸(12M,3.49mL,3.5eq)。反应液于氮气保护下,40℃下搅拌3.5小时。反应完成后,将反应液浓缩,加入水(2mL),用氨水调pH=9,过滤收集滤饼。用二氯甲烷(100mL)溶解后,用无水硫酸钠干燥,浓缩,得到目标化合物BB-1-6。直接用于下一步的反应。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.95(dd,J=2.9,4.6Hz,1H),8.15(dd,J=2.6,7.0,9.6Hz,1H),7.86(dd,J=5.3,9.6Hz,1H),5.35(t,J=5.9Hz,1H),4.58(d,J=6.1Hz,2H)。
步骤5:化合物BB-1-7的合成
向BB-1-6(2.6g,9.52mmol,1eq)和3-氟苯硼酸(2.66g,19.04mmol,2eq)的乙腈/水(12.5mL,体积比:3/1)溶液中,加入碳酸钠(5.05g,47.61mmol,5eq)和Pd(PPh3)4(550.15mg,476.09μmol,0.05eq)。反应液于氮气保护下,85℃下搅拌4小时。反应完成后,向反应液中加入二氯甲烷(50mL),再缓慢加入水(5mL)淬灭反应,再用二氯甲烷(50mL*3)萃取。合并有机相,无水硫酸钠干燥,浓缩,经柱层析(石油醚∶乙酸乙酯=0∶1)纯化,得到BB-1-7。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.94(dd,J=3.1,4.8Hz,1H),8.12(ddd,J=2.6,7.1,10.0Hz,1H),7.84(dd,J=5.3,10.1Hz,1H),7.62(s,1H),7.27-7.15(m,3H),5.25(t,J=5.9Hz,1H),4.28(d,J=5.7Hz,2H)。
步骤6:化合物BB-1-8的合成
于三口瓶中,-78℃下,向草酰氯(1.85g,14.57mmol,1.28mL,3eq)的二氯甲烷(20mL)溶液中,加入DMSO(2.28g,29.14mmol,2.28mL,6eq)。反应液于氮气保护下,-78℃下搅拌1小时。加入BB-1-7(1.4g,4.86mmol,1eq)的二氯甲烷(20mL)溶液,-78℃下搅拌1小时。加入三乙胺(4.91g,48.57mmol,6.76mL,10eq),-78℃下搅拌1小时后,反应液升至25℃搅拌1小时。反应完成后,0℃下,向反应液中加入二氯甲烷(20mL),再缓慢加入水(10mL)淬灭反应,再用二氯甲烷(30mL*3)萃取。合并有机相,无水硫酸钠干燥,浓缩,得到目标化合物BB-1-8。LCMS,m/z=287.0[M+1],Rt=1.030min。
步骤7:化合物BB-1的合成
于三口瓶中,0℃下,向BB-1-8(1.9g,6.64mmol,1eq)的四氢呋喃(50mL)溶液中,加入甲基溴化镁(3M,5.53mL,2.5eq)。反应液于氮气保护下,25℃下搅拌5小时。反应完成后,0℃下,向反应液中缓慢加入水(10mL)淬灭反应,再用二氯甲烷(10mL*3)萃取。合并有机相,无水硫酸钠干燥,浓缩,经制备高效液相色谱(柱:Phenomenex Luna C18 200*40mm*10μm;流动相:[水(0.1%TFA)-乙腈];B%:15%-35%,10min)纯化(B为乙腈),得到BB-1。
实施例1:WX001、WX002
合成路线:
步骤1:化合物WX001-2的合成
向WX001-1(2g,10.47mmol,1eq)和碳酸钾(4.34g,31.41mmol,3eq)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中,加入2-碘丙烷(3.56g,20.94mmol,2.09mL,2eq)。反应液于氮气保护下,90℃下搅拌12小时。反应完成后,向反应液中加入水(20mL)淬灭反应,再用甲基叔丁基醚(10mL*3)萃取。合并有机相,无水硫酸钠干燥,浓缩,经柱层析(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1)纯化,得到目标化合物WX001-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.23(dd,J=2.4,10.6Hz,1H),7.16(td,J=1.9,8.8Hz,1H),6.85(t,J=8.7Hz,1H),4.49(spt,J=6.1Hz,1H),1.35(d,J=6.1Hz,6H)。
步骤2:化合物WX001-3的合成
向WX001-2(2g,8.58mmol,1eq)的二氧六环(20mL)溶液中,加入双联频哪醇硼酸酯(2.40g,9.44mmol,1.1eq),醋酸钾(1.68g,17.16mmol,2eq)和Pd(dppf)Cl2(627.87mg,858.09μmol,0.1eq)。反应液于氮气保护下,90℃下搅拌3小时。反应完成后,向反应液中加入水(20mL)淬灭反应,再用二氯甲烷(30mL*3)萃取。合并有机相,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗产品经柱层析(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1)纯化,得到目标化合物WX001-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54-7.44(m,2H),6.95(t,J=8.1Hz,1H),4.60(spt,J=6.1Hz,1H),1.37(s,3H),1.36(s,3H),1.33(s,12H)。
步骤3:化合物WX001-5的合成
向WX001-3(2.65g,9.46mmol,1eq)和WX001-4(2.47g,9.46mmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺/乙醇/水(265mL,体积比:2/1/1)溶液中,加入Pd(PPh3)4(546.55mg,472.97μmol,0.05eq)和碳酸钠(3.01g,28.38mmol,3eq)。反应液于氮气保护下,80℃下搅拌12小时。反应完成后,将反应液趁热过滤(80℃)得到母液,母液旋干后,再加入二氯甲烷(30mL)和水(30mL),有大量不溶物生成,过滤后经制备高效液相色谱纯化,得到目标化合物WX001-5。LCMS,m/z=288.1[M+1],Rt=0.87min。
步骤4:化合物WX001-6的合成
25℃下,向BB-1(230mg,760.90μmol,1eq),WX001-5(218.60mg,760.90μmol,1eq)和PPh3(299.36mg,1.14mmol,1.5eq)的四氢呋喃(50mL)溶液中,加入偶氮二甲酸二异丙酯(230.79mg,1.14mmol,221.91uL,1.5eq)。反应液于氮气保护下,45℃下搅拌5小时。反应完成后,反应液直接浓缩,经制备薄层层析板(二氯甲烷∶甲醇=15∶1)纯化,得到异构体混合物WX001-6。
步骤5:化合物WX001和WX002的合成
WX001-6经超临界流体色谱(色谱柱:DAICEL CHIRALPAK AD-H(250mm*30mm,5μm);流动相:[0.1%氨水的乙醇];B%:22%-22%,8min)纯化(B为0.1%氨水的乙醇),得到WX001(保留时间为2.29min)和WX002(保留时间为2.62min)。WX001:1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.95(br s,1H),8.03(s,1H),8.00-7.92(m,1H),7.91-7.82(m,1H),7.42-7.29(m,2H),7.27-7.09(m,1H),7.22(br t,J=8.6Hz,1H),6.96-6.71(m,2H),6.20(q,J=6.6Hz,1H),4.68(td,J=6.1,11.9Hz,1H),1.91(d,J=7.0Hz,3H),1.36(d,J=5.7Hz,6H),LCMS,m/z=572.2[M+1]。WX002:1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.94(br s,1H),8.03(s,1H),7.99-7.91(m,1H),7.90-7.83(m,1H),7.39-7.28(m,2H),7.21(br t,J=8.3Hz,2H),6.93-6.71(m,2H),6.20(q,J=6.9Hz,1H),4.78-4.55(m,1H),1.90(d,J=6.6Hz,3H),1.36(d,J=6.1Hz,6H),LCMS,m/z=572.2[M+1]。
实施例2:WX003、WX004
合成路线:
步骤1:化合物WX003-3的合成
将WX003-1(0.2g,925.60μmol,1eq),WX003-2(0.24g,945.11μmol,1.02eq),Pd(dppf)Cl2(0.034g,46.47μmol,5.02e-2eq),醋酸钾(0.182g,1.85mmol,2eq)溶于二氧六环(6mL)中,置换氮气三次,在80℃下反应16小时。反应完成后,将反应液旋干,向其中加入水(50mL)进行稀释,用二氯甲烷(50*3mL)进行萃取,有机相旋干,经制备薄层层析板(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1)纯化得到目标化合物WX003-3。LCMS:m/z=181.9[M+1]。
步骤2:化合物WX003-5的合成
将WX003-3(0.13g,494.03μmol,1eq),WX001-4(0.13g,498.04μmol,1.01eq),碳酸钠(0.16g,1.51mmol,3.06eq)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL),乙醇(2mL)和水(2mL)中,在氮气保护下加入Pd(PPh3)4(0.03g,25.96μmol,5.25e-2eq),在100℃下搅拌16小时。反应完成后,向其中加入水(50mL)进行稀释,用二氯甲烷(50×3mL)进行萃取,有机相旋干,经制备薄层层析板(二氯甲烷∶甲醇=10∶1)纯化来得到目标化合物WX003-5,LCMS:m/z=271.0[M+1]。
步骤3:化合物WX003-6的合成
将WX003-5(0.05g,178.99μmol,1eq,BB-1(0.09g,281.78μmol,1.57eq),PPh3(70.00mg,266.88μmol,1.49eq)溶于四氢呋喃(4mL)中,置换氮气三次。再加入偶氮二甲酸二异丙酯(52.00mg,257.16μmol,50.00μL,1.44eq),在45℃下搅拌16小时。反应完成后,将反应液旋干,经制备薄层层析板(二氯甲烷∶甲醇=10∶1)纯化得到目标化合物WX003-6。
步骤4:化合物WX003和WX004的合成
WX003-6经过超临界流体色谱分离(色谱柱:DAICEL CHIRALCEL OD-H(250mm*30mm,5μm);流动相:[0.1%氨水的乙醇];B%:45%-45%)(B为0.1%氨水的乙醇),得到目标化合物WX003(保留时间为1.729min)和WX004(保留时间为2.213min)。WX003:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.31(d,J=6.27Hz,6H)1.86(d,J=7.03Hz,3H)5.28(br t,J=5.90Hz,2H)6.12(q,J=6.78Hz,1H)6.74(d,J=8.53Hz,1H)6.83(br t,J=7.53Hz,2H)6.97(brd,J=7.28Hz,1H)7.53-7.68(m,2H)7.77(dd,J=8.53,226Hz,1H)8.14(s,1H)8.35(d,J=1.76Hz,1H)8.87(br d,J=2.76Hz,1H),LCMS:m/z=555.1[M+1]。WX004:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.31(d,J=6.27Hz,6H)1.87(d,J=6.78Hz,3H)5.22-5.34(m,1H)5.50(br s,1H)6.13(q,J=7.03Hz,1H)6.74(d,J=8.53Hz,1H)6.84(brt,J=7.53Hz,2H)6.92-7.02(m,1H)7.53-7.67(m,2H)7.76(dd,J=8.53,2.26Hz,1H)8.13(s,1H)8.35(d,J=2.26Hz,1H)8.83-8.93(m,1H),LCMS:m/z=555.1[M+1]。
实施例3:WX005、WX006
合成路线:
步骤1:化合物WX005-2的合成
将BB-1(0.6g,1.98mmol,1eq),WX001-4(0.67g,2.57mmol,1.29eq),PPh3(0.78g,2.97mmol,1.5eq)加入到四氢呋喃(40mL)中,然后将偶氮二甲酸二异丙酯(520.00mg,2.57mmol,0.5mL,1.30eq)滴加到上述体系中,45℃反应16小时。反应完成后,将反应液过滤,滤液旋干,经层析柱(甲醇∶二氯甲烷=0%~5%)纯化,得到目标化合物WX005-2,LCMS:m/z=545.9[M+1];1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.96(dd,J=3.9,2.6Hz,1H),8.18(s,1H),7.65-7.68(m,1H),7.53-7.61(m,1H),7.29-7.35(m,1H),7.06(d,J=7.8Hz,1H),6.93-7.02(m,2H),6.11(q,J=7.0Hz,1H),5.85(br s,2H),1.90(d,J=7.0Hz,3H)。
步骤2:化合物WX005-6的合成
将WX005-4(5g,23.47mmol,1eq),WX003-2(8.94g,35.21mmol,1.5eq),Pd(dppf)Cl2(1.72g,2.35mmol,0.1eq),醋酸钾(6.91g,70.41mmol,3eq)加入到二氧六环(100mL)中,体系100℃反应40分钟。反应完成后,将反应液旋干,用水(100mL)稀释,用二氯甲烷(100mL)萃取,有机相旋干,得到目标化合物WX005-6,直接用于下步反应,没有进一步的纯化。LCMS:m/z=178.9[M-81]。
步骤3:化合物WX005-3的合成
将WX005-2(0.13g,188.41μmol,1eq),WX005-6(0.1g,384.47μmol,2.04eq),Pd(PPh3)4(0.043g,37.21μmol,1.97e-1eq),碳酸钠(0.059g,556.66μmol,2.95eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(4mL),乙醇(2mL)和水(2mL)中,体系用氨气置换3次,然后100℃反应3小时。反应完成后,将反应液旋干,用水(50mL)稀释,用二氯甲烷(50mL*2)萃取,有机相旋干,经制备薄层层析板(二氯甲烷∶甲醇=15∶1)纯化,再经制备高效液相(色谱柱:Boston PrimeC18 150*30mm 5μm;流动相:[水(0.05%氢氧化铵v/v)-乙腈];B%:47%-77%,8min)纯化(B为乙腈),得到目标化合物WX005-3。LCMS:m/z=552.0[M+1]。
步骤4:化合物WX005、WX006的合成
化合物WX005-3经超临界流体色谱柱(色谱柱:DAICEL CHIRALPAK AS-H(250mm*30mm,5μm);流动相:[0.1%氨水的甲醇];B%:40%-40%)拆分(B为0.1%氨水的甲醇),得到WX005(保留时间为1.713min)和WX006(保留时间为1.945min)。WX005:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90-8.97(m,1H),8.56(d,J=2.3Hz,1H),8.36(d,J=2.0Hz,1H),8.09-8.16(m,1H),8.06(s,1H),7.85(dd,J=9.8,5.3Hz,1H),7.27(br d,J=6.3Hz,1H),6.93-7.02(m,3H),6.11(q,J=6.5Hz,1H),4.07(s,3H),1.81(br d,J=6.8Hz,3H);LCMS:m/z=552.0[M+1]。WX006:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90-8.97(m,1H),8.56(d,J=2.3Hz,1H),8.36(d,J=2.0Hz,1H),8.09-8.16(m,1H),8.06(s,1H),7.85(dd,J=9.8,5.3Hz,1H),7.27(br d,J=6.3Hz,1H),6.93-7.02(m,3H),6.11(q,J=6.5Hz,1H),4.07(s,3H),1.81(brd,J=6.8Hz,3H);LCMS:m/z=552.0[M+1]。
实施例4:WX007、WX008
合成路线:
步骤1:化合物WX007-2的合成
将WX007-1(10g,86.84mmol,1eq),NBS(20.09g,112.89mmol,1.3eq)加入到二氯甲烷(80mL)中,体系15℃反应16小时。反应完成后,将反应液旋干,再经硅胶层析柱(EA∶PE=0%~5%)纯化,得到目标化合物WX007-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.90-7.03(m,1H),3.92-4.01(m,3H).LCMS:m/z=195.8[M+1]。
步骤2:化合物WX007-4的合成
将WX007-2(0.2g,1.03mmol,1eq),WX003-2(392.00mg,1.54mmol,1.5eq),Pd(dppf)Cl2(76.00mg,103.87μmol,1.01e-1eq),醋酸钾(304.00mg,3.10mmol,3.01eq)加入到二氧六环(5mL)中,体系氮气置换3次,然后100℃反应30分钟。反应完成后,将反应液旋干,得到目标化合物WX007-4,直接用于下一步反应。
步骤3:化合物WX007-5的合成
将WX005-2(0.2g,209.25μmol,1eq),WX007-4(300.00mg,1.24mmol,5.95eq),Pd(PPh3)4(48.00mg,41.54μmol,1.99e-1eq),碳酸钠(66.00mg,622.71μmol,2.98eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(6mL),乙醇(3mL),水(3mL)中,体系用氮气置换3次,然后100℃反应2.5小时。反应完成后,将反应液旋干,用水(50mL)稀释,用二氯甲烷(50mL)萃取,有机相旋干,经硅胶层析柱(甲醇∶二氯甲烷=0%~10%)纯化,再经制备高效液相色谱(色谱柱:BostonPrime C18 150*30mm 5μm;流动相:[水(0.05%氢氧化铵v/v)-乙腈];B%:50%-58%,9min)纯化(B为乙腈),得到目标化合物WX007-5。LCMS:m/z=532.9[M+1]。
步骤4:化合物WX007、WX008的合成
化合物WX007-5经超临界流体色谱(色谱柱:DAICEL CHIRALPAK AS(250mm*30mm,10μm);流动相:[0.1%氨水的乙醇];B%:30%-30%)拆分(B为0.1%氨水的乙醇),得到WX007(保留时间为2.194min)和WX008(保留时间为2.413min)。WX007:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(dd,J=4.5,2.8Hz,1H),8.12(ddd,J=9.9,7.1,2.9Hz,1H),8.06(s,1H),7.81(dd,J=9.8,5.3Hz,1H),7.44(s,1H),7.28(br d,J=6.5Hz,1H),6.99(br t,J=7.4Hz,3H),6.05(q,J=6.6Hz,1H),4.08(s,3H),1.78(d,J=7.0Hz,3H);LCMS:m/z=533.1[M+1]。WX008:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(dd,J=4.5,2.8Hz,1H),8.12(ddd,J=9.9,7.2,2.8Hz,1H),8.06(s,1H),7.81(dd,J=9.8,5.3Hz,1H),7.44(s,1H),7.28(br d,J=7.0Hz,1H),6.99(br t,J=7.8Hz,3H),6.05(q,J=6.8Hz,1H),4.08(s,3H),1.78(d,J=6.8Hz,3H);LCMS:m/z=533.1[M+1]。
实施例5:WX009、WX010
步骤1:化合物WX009-3的合成
WX009-1(2g,7.93mmol,1eq)溶解在二氧六环(30mL)中,加入WX003-2(2.12g,8.33mmol,1.05eq),醋酸钾(3.11g,31.73mmol,4eq),氮气保护下加入[1,1’-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯·二氯甲烷(323.95mg,396.68μmol,0.05eq),加热至80℃搅拌反应3小时。反应完成后,将反应液过滤,收集滤液,加水(100mL)淬灭反应,旋干有机溶剂,用乙酸乙酯萃取(3*100mL),合并有机相,用无水硫酸钠干燥、过滤,经硅胶层析柱(石油醚∶乙酸乙酯=20∶1)分离得到目标化合物WX009-3。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.52(s,1H),7.38(dd,J=1.3,11.8Hz,1H),7.19-7.02(m,1H),3.97-3.89(m,3H),1.37-1.30(m,12H)。
步骤2:化合物WX009-4的合成
化合物WX005-2(50mg,91.70μmol,1eq),WX009-3(23.12mg,91.70μmol,1eq)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)以及乙醇(2.5mL),水(2.5mL)的混合溶剂中,加入碳酸钾(38.02mg,275.09μmol,3.0eq),氮气保护下加入Pd(PPh3)4(21.19mg,18.34μmol,0.2eq),加热至100℃搅拌2小时。反应完成后,将反应液旋干,加水(10mL),用二氯甲烷萃取(3*10mL),合并有机相,用无水硫酸钠干燥、过滤,经硅胶层析柱(二氯甲烷∶甲醇=10∶1)分离,再经制备高效液相色谱分离得到目标化合物WX009-4。
步骤3:化合物WX009、WX010的合成
化合物WX009-4经超临界流体色谱(色谱柱:Chiralcel OD-3 100mm×4.6mmI.D.,3μm;流动相:A:CO2 B:乙醇(0.05%DEA),洗脱梯度:4.5min内流动相B比例从5%到40%,并且维持40%比例2.5min,随后5%的流动相B:乙醇;流速:2.8mL/min柱温:40℃)分离,得到WX009(保留时间为4.939min)和WX010(保留时间为4.631min)。WX009:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.87(dd,J=2.9,3.9Hz,1H),8.12(s,1H),7.84-7.51(m,2H),7.47-7.26(m,2H),7.19-7.13(m,1H),7.10-6.91(m,2H),6.82(m,2H),6.12(q,J=7.0Hz,1H),5.72-5.11(m,2H),3.88(s,3H),1.86(d,J=7.0Hz,3H);LCMS:m/z=544.1[M+1]。WX010:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.87(dd,J=2.8,4.0Hz,1H),8.12(s,1H),7.82-7.49(m,2H),7.47-7.27(m,2H),7.22-7.20(m,1H),7.11-6.90(m,2H),6.82(m,2H),6.12(q,J=7.0Hz,1H),5.41(m,2H),3.88(s,3H),1.86(d,J=6.8Hz,3H);LCMS:m/z=544.1[M+1]。
实施例6:WX011、WX012
合成路线:
步骤1:化合物WX011-3的合成
将WX011-1(1g,5.32mmol,689.66uL,1eq),WX003-2(1.35g,5.32mmol,1eq),Pd(dppf)Cl2(0.195g,266.50μmol,5.01e-2eq),醋酸钾(1.04g,10.64mmol,2eq)溶于二氧六环(10mL)中,置换氮气三次,在80℃下反应16小时。反应完成后,将反应液旋干,经硅胶柱层析(乙酸乙酯∶石油醚=2%-8%)纯化,得到目标化合物WX011-3。LCMS:m/z=153.8[M+1]。
步骤2:化合物WX011-4的合成
将WX005-2(0.2g,209.25μmol,1eq),WX011-3(40.03mg,261.76μmol,1.25eq),碳酸钠(0.08g,754.80μmol,3.61eq)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL),乙醇(2mL)和水(2mL)中,在氮气保护下加入Pd(PPh3)4(40.00mg,34.62μmol,1.65e-1eq),在100℃下搅拌16小时。反应完成后,将反应液旋干,经制备薄层层析板(二氯甲烷∶甲醇=10∶1)纯化,得到目标化合物WX011-4。
步骤3:化合物WX011、WX012的合成
化合物WX011-4经超临界流体色谱分离(色谱柱:DAICEL CHIRALCEL OD-H(250mm*30mm,5μm);流动相:[0.1%氨水的乙醇];B%:55%-55%)(B为0.1%氨水的乙醇),得到WX011(保留时间为0.728min)和WX012(保留时间为1.660min)。WX011:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.82-1.91(m,3H)3.92(s,3H)5.41(br s,2H)6.12(q,J=6.86Hz,1H)6.73-6.88(m,3H)6.94-7.01(m,1H)7.52-7.66(m,2H)7.80(dd,J=8.53,2.26Hz,1H)8.13(s,1H)8.37(d,J=2.01Hz,1H)8.81-8.93(m,1H);LCMS:m/z=527.1[M+1]。WX012:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.86(d,J=7.03Hz,3H)3.88-3.97(m,3H)5.42(br s,2H)6.13(q,J=6.94Hz,1H)6.77-6.88(m,3H)6.90-7.04(m,1H)7.51-7.69(m,2H)7.80(dd,J=8.53,2.26Hz,1H)8.13(s,1H)8.37(d,J=2.26Hz,1H)8.87(dd,J=4.02,2.76Hz,1H);LCMS:m/z=527.1[M+1]。
实施例7:WX013
步骤1:化合物WX013-2的合成
在预先干燥过的反应瓶中加入WX013-1(9g,80.28mmol,1eq),BB-1-2(17.18g,104.37mmol,1.3eq),随后加入多聚磷酸(110mL)。反应在125℃搅拌12小时。反应结束后,趁热将反应液到入1.5L的水中,再用2.5M的氢氧化钠和饱和碳酸氢钠调PH=10,用乙酸乙酯萃取(500mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(1000mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩后得到目标化合物WX013-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.78(d,J=7.3Hz,1H),7.50-7.40(m,1H),7.04(dt,J=4.6,7.4Hz,1H),6.68(s,1H),4.51(s,2H)。
步骤2:化合物WX013-3的合成
在预先干燥过的反应瓶中加入WX013-2(12g,56.44mmol,1eq),随后加入冰醋酸(120mL),接着加入NBS(11.05g,62.09mmol,1.1eq)。反应在20℃并搅拌1小时。反应结束后,向反应液中加入100mL的水,过滤收集滤饼得到目标化合物WX013-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(td,J=1.2,7.3Hz,1H),7.48(dt,J=1.3,8.1Hz,1H),7.12(dt,J=4.5,7.5Hz,1H),4.78-4.66(m,2H)。
步骤3:化合物WX013-4的合成
在反应瓶中加入WX013-3(10.5g,36.02mmol,1eq),用N,N-二甲基甲酰胺(120mL)溶解,接着加入醋酸钾(5.30g,54.03mmol,1.5eq)。反应液于氮气保护下,20℃下搅拌12小时。反应完成后,向反应体系中加入100mL水/100mL乙酸乙酯稀释,分液后收集有机相,水相用乙酸乙酯萃取(50mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(200mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩得到目标化合物WX013-4,直接用于下一步。
步骤4:化合物WX013-5的合成
在预先干燥过的反应瓶中加入WX013-4(4.1g,13.01mmol,1eq),随后加入四氢呋喃(40mL)。将该反应降到0℃,随后加入一水合氢氧化锂(1.64g,39.04mmol,3eq)的水溶液(30mL)。反应在20℃并搅拌1小时。反应完成后,向反应体系中加入10mL水/10mL乙酸乙酯稀释,用1N的盐酸调PH=3,分液后收集有机相,水相用乙酸乙酯萃取(5mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(20mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩,再用乙酸乙酯∶二氯甲烷=20∶1(20ml)打浆,过滤收集滤饼得到WX013-5。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.85(td,J=1.2,7.3Hz,1H),7.60-7.48(m,1H),7.19-7.10(m,1H),4.71(s,2H),4.07-3.79(m,1H)。
步骤5:化合物WX013-7的合成
在预先干燥过的反应瓶中加入WX013-5(0.7g,2.28mmol,1eq),WX013-6(700.73mg,5.01mmol,2.2eq)和醋酸钾(670.22mg,6.83mmol,3eq),随后加入二氧六环(7mL)和水(0.7mL)。置换氮气3次,加入Pd(dppf)Cl2(166.57mg,227.64μmol,0.1eq)。反应在70℃并搅拌12小时。反应完成后,向反应体系中加入10mL水/10mL乙酸乙酯稀释,分液后收集有机相,水相用乙酸乙酯萃取(5mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(20mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩,再通过薄层层析硅胶板(二氯甲烷∶甲醇=20∶1),纯化得到WX013-7。LCMS:m/z=289.0[M+1]。
步骤6:化合物WX013-8的合成
在反应瓶中,-78℃下,向草酰氯(976.18mg,7.69mmol,673.22μL,3eq)的二氯甲烷(15mL)溶液中,加入DMSO(1.20g,15.38mmol,1.20mL,6eq)。反应液于氮气保护下,-78℃下搅拌1小时。加入WX013-7(738.94mg,2.56mmol,1eq)的二氯甲烷(15mL)溶液,-78℃下搅拌1小时。加入三乙胺(2.59g,25.64mmol,3.57mL,10eq),-78℃下搅拌1小时后,反应液升至20℃搅拌0.5小时。反应完成后,向反应体系中加入10mL水/10mL乙酸乙酯稀释,分液后收集有机相,水相用乙酸乙酯萃取(5mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(20mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩得到WX013-8,直接用于下一步。
步骤7:化合物WX013-9的合成
在预先干燥过的反应瓶中加入WX013-8(624.81mg,2.18mmol,1eq),随后加入四氢呋喃(7mL),接着在0℃下加入甲基溴化镁(3M,2.18mL,3eq)。反应在0℃搅拌1小时。反应完成后,向反应体系中加入10mL饱和氯化铵/10mL乙酸乙酯稀释,分液后收集有机相,水相用乙酸乙酯萃取(5mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(20mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩,再通过薄层层析硅胶板(PE∶EA=1∶1),纯化得到目标化合物WX013-9。MS:m/z=303.0[M+1].
步骤8:化合物WX013-10的合成
在预先干燥过的反应瓶中加入三苯基膦(329.73mg,1.26mmol,2eq),随后加入溶剂四氢呋喃(10mL)溶解。将该反应降到0℃,接着加入偶氮二甲酸二异丙酯(254.20mg,1.26mmol,244.43μL,2eq)。反应在0℃搅拌0.5小时,溶液变浑浊,然后在0℃下,加入WX013-9(190mg,628.57μmol,1eq)和WX001-5(270.87mg,942.85μmol,1.5eq)的四氢呋喃(10mL)混合溶液。反应液在20℃搅拌3小时。反应完成后,向反应体系中加入10mL水/10mL乙酸乙酯稀释,分液后收集有机相,水相用乙酸乙酯萃取(5mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(20mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩,再通过薄层层析硅胶板(二氯甲烷∶甲醇=20∶1),纯化得到WX013-10。MS:m/z=572.1[M+1]。
步骤9:化合物WX013的合成
将化合物WX013-10(130mg,227.45μmol,1eq)送超临界流体色谱分离(分离方法:色谱柱:DAICEL CHIRALPAK AD-H(250mm*30mm,5μm);流动相:[0.1%氨水的异丙醇];B%:40%-40%,7min:60min)(B为0.1%氨水的异丙醇),得到目标化合物WX013(保留时间为2.31min)及其对映异构体(保留时间为2.87min)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.81(br d,J=7.1Hz,1H),8.03(s,1H),7.74(br t,J=8.4Hz,1H),7.35(s,1H),7.38-7.27(m,3H),7.27-7.17(m,2H),6.92-6.75(m,2H),6.23(q,J=6.9Hz,1H),4.72-4.65(m,1H),1.93(d,J=7.1Hz,3H),1.36(dd,J=1.0,6.1Hz,6H);MS,m/z=572.1[M+1].
实施例8:WX014、WX015
步骤1:化合物WX014-3的合成
在预先干燥过的反应瓶中加入WX014-1(10g,68.24mmol,1eq),BB-1-2(14.60g,88.71mmol,1.3eq),随后加入多聚磷酸(120mL)。反应在125℃搅拌12小时。反应完成后,趁热将反应液到入1500mL水中,用2.5N的氢氧化钠和饱和碳酸氢钠调PH=10,用二氯甲烷萃取(300mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(1000mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩得到目标化合物WX014-3,直接用于下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.85(dd,J=2.8,4.1Hz,1H),7.81(dd,J=2.8,6.7Hz,1H),6.69(s,1H),4.53(s,2H)。
步骤2:化合物WX014-4的合成
在预先干燥过的反应瓶中加入WX014-3(13.5g,54.64mmol,1eq),随后加入冰醋酸(130mL)。接着加入NBS(10.70g,60.11mmol,1.1eq)。反应在20℃搅拌1小时。反应完成后,加入100mL水,过滤收集滤饼得到目标化合物WX014-4,直接用于下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.91(dd,J=2.6,4.4Hz,1H),7.90(dd,J=2.6,7.0Hz,1H),4.79(s,2H)。
步骤3:化合物WX014-5的合成
在预先干燥过的反应瓶中加入WX014-4(12g,36.82mmol,1eq),随后加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL),接着加入醋酸钾(5.42g,55.22mmol,1.5eq)。反应在20℃搅拌12小时。反应完成后,向反应体系中加入10mL水/10mL乙酸乙酯稀释,分液后收集有机相,水相用乙酸乙酯萃取(5mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(20mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩后,用乙酸乙酯∶甲基叔丁基醚=1∶10(150mL)打浆,过滤收集滤饼,得到目标化合物WX014-5。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.85(dd,J=2.7,4.3Hz,1H),7.82(dd,J=2.7,6.7Hz,1H),5.28-5.16(m,2H),2.26-2.15(m,3H)。
步骤4:化合物WX014-6的合成
在预先干燥过的反应瓶中加入WX014-5(9g,25.75mmol,1eq),随后加入二氧六环(90mL)溶解。随后在0℃下,加入盐酸(12M,15.02mL,7eq)。反应在50℃搅拌12小时。反应完成后,向反应体系中加入10mL水/10mL乙酸乙酯稀释,分液后收集有机相,水相用乙酸乙酯萃取(5mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(20mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩后,通过乙酸乙酯∶二氯甲烷=10∶1(15mL)打浆,过滤收集滤饼得到目标化合物WX014-6。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.98(dd,J=2.6,4.2Hz,1H),7.95(dd,J=2.8,6.7Hz,1H),7.26(s,1H),4.78(s,2H)。
步骤5:化合物WX014-8的合成
在预先干燥过的反应瓶中加入WX014-6(3g,9.76mmol,1eq),WX013-6(1.64g,11.71mmol,1.2eq)和醋酸钾(2.87g,29.27mmol,3eq),随后加入二氧六环(30mL)和水(3mL)。置换氮气3次,加入Pd(dppf)Cl2(713.86mg,975.60μmol,0.1eq)。反应在50℃搅拌3小时。补加WX013-6(1.64g,11.71mmol,1.2eq),反应在50℃搅拌12小时。反应完成后,向反应体系中加入10mL水/10mL乙酸乙酯稀释,分液后收集有机相,水相用乙酸乙酯萃取(5mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(20mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩后,通过硅胶柱层析分离(二氯甲烷∶甲醇=500∶1至50∶1),纯化得到目标化合物WX014-8。
步骤6:化合物WX014-9的合成
于反应瓶中,-78℃下,向草酰氯(1.67g,13.17mmol,1.15mL,3eq)的二氯甲烷(20mL)溶液中,加入DMSO(2.06g,26.34mmol,2.06mL,6eq)。反应液于氮气保护下,-78℃下搅拌1小时。加入WX014-8(1.42g,4.39mmol,1eq)的二氯甲烷(20mL)溶液,-78℃下搅拌1小时。加入三乙胺(4.44g,43.90mmol,6.11mL,10eq),-78℃下搅拌1小时后,反应液升至20℃搅拌0.5小时。反应完成后,向反应体系中加入10mL水/10mL乙酸乙酯稀释,分液后收集有机相,水相用乙酸乙酯萃取(5mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(20mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩,得到目标化合物WX014-9,直接用于下一步。
步骤7:化合物WX014-10的合成
在预先干燥过的反应瓶中加入WX014-9(1.35g,4.21mmol,1eq),随后加入四氢呋喃(20mL)。将该反应降到0℃,随后将甲基溴化镁(3M,4.21mL,3eq)溶液缓慢加入。反应在0℃搅拌1小时。反应完成后,向反应体系中加入50mL饱和氯化铵/50mL乙酸乙酯稀释,分液后收集有机相,水相用乙酸乙酯萃取(15mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(20mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩,再通过薄层层析硅胶板(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1),纯化得目标化合物WX014-10。
步骤8:化合物WX014-11的合成
在预先干燥过的反应瓶中加入PPh3(525.02mg,2.00mmol,2eq),随后加入溶剂四氢呋喃(4mL)溶解。置换氮气三次,将该反应降到0℃,接着加入偶氮二甲酸二异丙酯(404.76mg,2.00mmol,389.19uL,2eq)。反应在0℃搅拌0.5小时,溶液变浑浊,然后在0℃下,加入WX014-10(337mg,1.00mmol,1eq)和WX001-5(431.30mg,1.50mmol,1.5eq)的四氢呋喃(4mL)混合溶液。反应液在20℃搅拌3小时。反应完成后,向反应体系中加入10mL水/10mL乙酸乙酯稀释,分液后收集有机相,水相用乙酸乙酯萃取(5mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(20mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩,再通过薄层层析硅胶板(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)分离纯化,再经制备高效液相色谱分离(色谱柱:Xbridge Prep OBD C18 150*40mm,10μm;流动相:[水(10mM NH4HCO3)-乙腈];B%:40%-70%,11min)(B为乙腈)得到目标化合物WX014-11。
步骤9:化合物WX014、WX015的合成
化合物WX014-11经超临界流体色谱分离(分离方法:色谱柱:DAICEL CHIRALPAKAD-H(250mm*30mm,5μm);流动相:[0.1%氨水的异丙醇];B%:40%-40%,10min)(B为0.1%氨水的异丙醇)得到WX014(保留时间为1.61min)和WX015(保留时间为2.33min)。WX014:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.94-8.83(m,1H),8.21(s,1H),7.82(dd,J=2.2,6.6Hz,1H),7.40(brd,J=11.4Hz,1H),7.34(br d,J=8.3Hz,1H),7.26-7.24(m,1H),7.10(t,J=8.6Hz,1H),7.04(d,J=7.9Hz,1H),6.95-6.83(m,2H),6.27(q,J=6.9Hz,1H),5.39(br s,2H),4.62(td,J=6.2,12.1Hz,1H),1.97(d,J=7.0Hz,3H),1.40(d,J=6.1Hz,6H);LCMS:m/z=606.0[M+1]。WX015:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.90-8.82(m,1H),8.21(s,1H),7.82(dd,J=2.6,7.0Hz,1H),7.40(d,J=11.4Hz,1H),7.34(br d,J=9.2Hz,1H),7.23(br s,1H),7.10(t,J=8.3Hz,1H),7.04(d,J=7.5Hz,1H),6.94-6.82(m,2H),6.27(q,J=6.7Hz,1H),5.41(brs,2H),4.62(quin,J=6.0Hz,1H),1.97(d,J=7.0Hz,3H),1.40(d,J=6.1Hz,6H);LCMS:m/z=606.0[M+1]。
实施例9:WX016、WX017
合成路线:
步骤1:化合物WX016-2的合成。
将WX016-1(5g,20.58mmol,1eq)溶于乙醇(50mL),然后在0℃氮气保护下缓慢滴加甲硫醇钠(40.68g,116.09mmol,36.98mL,5.64eq),反应液在20℃下搅拌2小时。反应完后,缓慢加入水(150mL)和乙酸乙酯(100mL*3)萃取,收集合并有机相并使用饱和食盐水(200mL*2)洗涤,使用无水硫酸钠干燥,过滤后将滤液旋干得到粗品WX016-2.
步骤2:化合物WX016-4的合成。
将WX016-2(3.26g,13.91mmol,1eq)(纯度:89.646%)和WX016-3(10.35g,55.64mmol,11.35mL,4eq)溶于四氢呋喃(120mL),在氮气保护-78℃下缓慢加入正丁基锂(2.5M,16.69mL,3eq),反应液在-78℃下搅拌2小时。反应完后,在-78℃下,缓慢加入甲醇(10mL)淬灭,将液体旋干得到粗品WX016-4。
步骤3:化合物WX016-5的合成。
将WX005-2(1.5g,2.75mmol,1eq)和WX016-4(17g,66.10mmol,24.03eq)(粗品)溶于二氧六环(60mL)和水(30mL),加入醋酸钾(1.08g,11.00mmol,4eq),然后在氮气保护下加入[1,1’-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(450.00mg,615.00umol,2.24e-1eq),混合物加热至70℃搅拌2小时。反应完后,将反应液减压旋蒸(水泵)去除溶剂,然后加入水(200mL)和二氯甲烷(100mL*3)萃取,收集合并有机相并使用饱和食盐水(200mL)洗涤,然后有机相旋干。粗品经硅胶层析柱分离纯化(乙酸乙酯/石油醚=0%~80%~90%),得到WX016-5。
步骤4:化合物WX016-6的合成。
将WX016-5(600mg,1.03mmol,1eq)(纯度:89.675%)溶于四氢呋喃(15mL)和甲醇(15mL),然后加入单过硫酸氢钾(2.7M,3.07mL,8.03eq),反应液在20℃下搅拌16小时。反应完后,将反应液减压旋蒸(水泵)去除溶剂,加入水(100mL)和二氯甲烷(50mL*3)萃取,收集合并有机相并使用饱和食盐水(100mL)洗涤,使用无水硫酸钠干燥,过滤后将滤液旋干得到WX016-6。
步骤5:化合物WX016-8的合成。
将WX016-6(200mg,344.48umol,1eq)(粗品)和WX016-7(140mg,1.71mmol,66.59uL,4.95eq)溶于四氢呋喃(2mL)和水(1mL),然后加入氢氧化钾(100.00mg,1.78mmol,5.17eq),反应液在20℃下搅拌16小时。反应完后,在反应液中加入水(20mL)和二氯甲烷(10mL*3)萃取,收集合并有机相并使用饱和食盐水(30mL)洗涤,使用无水硫酸钠干燥,过滤后将滤液旋干得到粗品,经制备高效液相色谱分离(色谱柱:Phenomenex Gemini-NX 150*30mm*5um;流动相:[水(0.04%氨水+10mM NH4HCO3)-乙腈];B%:38%-68%,8min)(B为乙腈)纯化,得到WX016-8。
步骤6:化合物WX016和WX017的合成
WX016-8经超临界流体色谱分离(分离方法:色谱柱:DAICEL CHIRALPAK AD(250mm*50mm,10um);流动相:[0.1%氨水的异丙醇];B%:45%-45%(B为0.1%氨水的异丙醇),得到WX016(保留时间为1.895min)和WX017(保留时间为2.277min)。WX016:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.78(3H,d,J=7.03Hz)4.77(2H,td,J=15.06,3.01Hz)6.06(1H,q,J=6.94Hz)6.33~6.60(1H,t,J=25.4Hz)6.99(3H,br t,J=7.53Hz)7.09(2H,br s)7.28(1H,q,J=7.11Hz)7.47(1H,s)7.77-7.84(1H,m)8.07(1H,s)8.08-8.15(1H,m)8.92(1H,dd,J=4.64,2.89Hz),MS,m/z=583.0[M+1]。WX017:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.84(3H,d,J=7.03Hz)4.82(2H,td,J=15.00,3.14Hz)6.11~6.52(1H,t,J=25.4Hz)6.65(1H,t,J=3.01Hz)7.04(3H,brt,J=7.53Hz)7.14(2H,br s)7.28-7.39(1H,m)7.52(1H,s)7.86(1H,dd,J=9.79,5.27Hz)8.12(1H,s)8.17(1H,ddd,J=9.79,7.03,2.76Hz)8.97(1H,dd,J=4.52,2.76Hz),MS,m/z=583.0[M+1]。
实施例10:WX018、WX019
合成路线:
步骤1:化合物WX018-3的合成
将化合物WX016-6(100mg,168.90umol,1eq)(纯度:98.059%)和WX018-2(64.26mg,844.48umol,66.59uL,5eq)。溶于四氢呋喃(2mL)和水(1mL),然后加入氢氧化钾(50mg,891.18umol,5.28eq),反应液在20℃下搅拌16小时。反应液中加入水(20mL),再加入二氯甲烷(10mL*3)萃取,收集合并有机相并使用饱和食盐水(20mL)洗涤,使用无水硫酸钠干燥,过滤后将滤液旋干。得到目标化合物WX018-3。
步骤2:化合物WX018和WX019的合成
将化合物WX018-3(100mg,160.12umol,1eq)(纯度:92.32%)经过超临界流体色谱分离(色谱柱:DAICEL CHIRALPAK AD(250mm*50mm,10um);流动相:[0.1%氨水的异丙醇];B%:45%-45%,min)(B为0.1%氨水的异丙醇),得到WX018(保留时间为2.136min)和WX019(保留时间为2.479min)。WX018:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.78(3H,d,J=7.03Hz)3.31(3H,s)3.67-3.73(2H,m)4.50-4.58(2H,m)6.05(1H,q,J=6.94Hz)6.99(3H,br t,J=7.53Hz)7.02-7.20(2H,m)7.28(1H,br d,J=7.03Hz)7.43(1H,s)7.81(1H,dd,J=9.79,5.52Hz)8.06(1H,s)8.12(1H,ddd,J=9.85,7.09,2.89Hz)8.93(1H,dd,J=4.52,2.76Hz);LCMS:m/z=577.0[M+1]。WX019:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.78(3H,d,J=7.03Hz)3.31(3H,s)3.67-3.74(2H,m)4.52-4.59(2H,m)6.05(1H,q,J=7.03Hz)6.92-7.02(3H,m)7.03-7.19(2H,m)7.24-7.33(1H,m)7.43(1H,s)7.81(1H,dd,J=9.91,5.40Hz)8.06(1H,s)8.12(1H,ddd,J=9.85,7.09,2.89Hz)8.93(1H,dd,J=4.64,2.89Hz);LCMS:m/z=577.0[M+1]。
实施例11:WX020、WX021
合成路线:
步骤1:化合物WX020-3的合成
将WX016-6(200mg,344.48μmol,1eq)(粗品)和WX020-2(186.17mg,1.72mmol,5eq)溶于四氢呋喃(4mL)和水(2mL),然后加入氢氧化钾(100.69mg,1.79mmol,5.21eq),反应液在20℃下搅拌16小时。反应完后,在反应液中加入水(20mL),再加入二氯甲烷(20mL*3)萃取,收集合并有机相并使用饱和食盐水(50mL)洗涤,使用无水硫酸钠干燥,过滤后将滤液旋干得到粗品。粗品经制备高效液相色谱分离(色谱柱:Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm;流动相:[水(0.04%氨水+10mM NH4HCO3)-乙腈];B%:28%-58%,7.5min(B为乙腈)得到目标化合物WX020-3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.78(3H,d,J=7.03Hz)2.84-2.97(2H,m)3.16-3.28(2H,m)5.22(1H,br dd,J=8.28,4.52Hz)6.05(1H,q,J=6.69Hz)6.91-7.02(3H,m)7.02-7.19(2H,m)7.28(1H,br d,J=6.53Hz)7.45(1H,s)7.81(1H,dd,J=9.79,5.27Hz)8.06(1H,s)8.12(1H,ddd,J=9.85,7.09,2.89Hz)8.93(1H,dd,J=4.52,3.01Hz)。
步骤2:化合物WX020、WX021的合成
化合物WX020-3由经超临界流体色谱分离(分离方法:色谱柱:DAICEL CHIRALCELOD-H(250mm*30mm,5um);流动相:[0.1%氨水的乙醇];B%:45%-45%,min)(B为0.1%氨水的乙醇)得到体WX020(保留时间为1.882min)和WX021(保留时间为2.481min)。WX020:1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.78(3H,d,J=7.03Hz)2.84-2.97(2H,m)3.16-3.28(2H,m)5.22(1H,br dd,J=8.28,4.52Hz)6.05(1H,q,J=6.69Hz)6.91-7.02(3H,m)7.02-7.19(2H,m)7.28(1H,br d,J=6.53Hz)7.45(1H,s)7.81(1H,dd,J=9.79,5.27Hz)8.06(1H,s)8.12(1H,ddd,J=9.85,7.09,2.89Hz)8.93(1H,dd,J=4.52,3.01Hz);LCMS:m/z=609.0[M+1]。WX021:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.78(3H,d,J=7.03Hz)2.84-2.97(2H,m)3.19-3.27(2H,m)5.17-5.27(1H,m)6.05(1H,q,J=7.03Hz)6.93-7.02(3H,m)7.08(2H,br s)7.28(1H,brd,J=5.77Hz)7.45(1H,s)7.81(1H,dd,J=9.79,5.27Hz)8.06(1H,s)8.12(1H,ddd,J=9.85,7.09,2.89Hz)8.93(1H,dd,J=4.64,2.89Hz);LCMS:m/z=609.0[M+1]。
实施例12:WX022、WX023
合成路线:
步骤1:化合物WX022-2的合成
WX022-1(3g,26.51mmol,1eq)溶解在二氯甲烷(30mL)之中,加入碳酸钾(2.65g,19.20mmol,7.24e-1eq)以及溴素(4.24g,26.51mmol,1.37mL,1eq)的二氯甲烷(10mL)溶液;混合物在室温(约28℃)搅拌3小时,反应完,加水(约200mL)淬灭反应,用二氯甲烷(100mL*3)萃取,合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩得到WX022-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.55(s,3H),2.28(s,3H)。
步骤2:化合物WX022-3的合成
WX022-2(5g,26.03mmol,1eq)(粗品)以及WX016-3(14.53g,78.09mmol,15.93mL,3eq)溶解在四氢呋喃(150mL)中,-78℃下加入正丁基锂(2.5M,31.24mL,3eq),混合物在-78℃下搅拌1小时,然后在30℃下搅拌1.5小时。反应完后,加甲醇(约100mL)淬灭反应,浓缩得到粗品WX022-3。粗品直接用于下一步反应。
步骤3:化合物WX022、WX023的合成
WX022-3(0.4g,733.56μmol,1eq)(粗品),WX005-2(175.43mg,733.56μmol,1eq)溶解在N,N,-二甲基甲酰胺(15mL)以及乙醇(8mL),水(8mL)的混合溶剂中,加入碳酸钾(304.16mg,2.20mmol,3.0eq),氮气保护下加入四三苯基膦钯(169.54mg,146.71umol,0.2eq)后加热至100℃搅拌2小时。反应完后,旋干有机溶剂,加水(约20mL)淬灭反应,二氯甲烷萃取(20mL*3),合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩后,经硅胶柱分离,再经制备高效液相色谱分离(色谱柱:Xtimate C18 150*25mm*5um;流动相:[水(0.225%FA)-乙腈];B%:32%-52%,7min)(B为乙腈)纯化分离。然后经超临界流体色谱分离(分离方法:色谱柱:DAICEL CHIRALPAK AS(250mm*50mm,10um);流动相:[0.1%氨水的乙醇];B%:30%-30%,min)(B为0.1%氨水的乙醇),得到WX022(保留时间为3.411min)和WX023(保留时间为3.978min)。WX022:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.97-8.69(m,1H),8.19-8.04(m,1H),7.57(dd,J=1.5,5.8Hz,2H),7.23(m,1H),7.06-6.81(m,3H),6.13(q,J=6.9Hz,1H),5.37(br s,2H),2.66(s,3H),2.40-2.27(m,3H),1.84(d,J=7.0Hz,3H);LCMS:m/z=531.3[M+1]。WX023:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.00-8.67(m,1H),8.13(s,1H),7.57(dd,J=1.6,5.9Hz,2H),7.23(m,1H),7.14-6.76(m,3H),6.13(q,J=7.0Hz,1H),5.40(br s,2H),2.66(s,3H),2.34(s,3H),1.84(d,J=7.0Hz,3H);LCMS:m/z=531.3[M+1]。
实施例13:WX024、WX025
合成路线:
步骤1:化合物WX024-3的合成
将WX024-1(1.64g,8.24mmol,1eq)和WX024-2(1.03g,8.38mmol,787μL,1.02eq)溶于N,N,-二甲基甲酰胺(30mL),然后加入碳酸铯(5.38g,16.51mmol,2eq),反应液在80℃下搅拌1小时。反应完后,反应液过滤,将滤液旋干,加入水(20mL),再加入二氯甲烷(20mL*3)萃取,收集合并有机相并使用饱和食盐水(50mL)洗涤,使用无水硫酸钠干燥,过滤后将滤液旋干得到粗品。粗品经硅胶层析柱分离纯化(二氯甲烷),得到WX024-3。
步骤2:化合物WX024-4的合成
将WX024-3(950mg,3.94mmol,1eq)和双联频哪醇硼酸酯(1.10g,4.34mmol,1.1eq)溶于二氧六环(5mL),然后加入醋酸钾(1.16g,11.81mmol,3eq),在氮气保护下加入[1,1’-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯.二氯甲烷(323.00mg,395.53μmol,0.1eq),反应液在80℃下搅拌16小时。反应完后,将反应液减压旋蒸去除溶剂,加入二氯甲烷(20mL),过滤后在滤液中加入水(20mL)萃取,水相中加入二氯甲烷(20mL*2)萃取,收集合并有机相并使用饱和食盐水(60mL)洗涤,使用无水硫酸钠干燥,过滤后将滤液旋干得到粗品。粗品经硅胶层析柱分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯=1∶0~20∶1),得到WX024-4。
步骤3:化合物WX024、WX025的合成
WX005-2(200mg,366.78μmol,1eq)(粗品),WX024-4(310mg,1.08mmol,2.93eq)溶于二氧六环(20mL)和水(2.5mL),加入醋酸钾(110.00mg,1.12mmol,3.06eq),置换氮气,升温至70℃,加入[1,1’-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(60.00mg,82.00umol,2.24e-1eq),置换氮气,反应液在70℃下反应16小时。反应完后,将反应液减压旋蒸去除溶剂。粗品经硅胶层析柱分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯=1∶0~1∶4),再经超临界流体色谱分离(分离方法:色谱柱:DAICEL CHIRALCEL OD(250mm*30mm,10um);流动相:[0.1%氨水的乙醇];B%:55%-55%,min(B为0.1%氨水的乙醇)得到WX024(保留时间为1.978min)和WX025(保留时间为1.585min)。WX024:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.39(6H,d,J=6.27Hz)1.81(3H,d,J=6.78Hz)5.44(1H,dt,J=12.36,6.24Hz)6.11(1H,q,J=6.86Hz)6.91-7.07(4H,m)7.26(1H,br d,J=7.28Hz)7.85(1H,dd,J=9.66,5.40Hz)8.05(1H,s)8.12(1H,ddd,J=9.91,7.28,2.89Hz)8.31(1H,d,J=2.26Hz)8.54(1H,d,J=2.26Hz)8.92(1H,dd,J=4.52,3.01Hz);LCMS:m/z=580.4[M+1]。WX025:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.39(6H,d,J=6.27Hz)1.81(3H,d,J=6.78Hz)5.44(1H,quin,J=6.21Hz)6.11(1H,q,J=6.78Hz)6.92-7.07(4H,m)7.21-7.31(1H,m)7.84(1H,dd,J=9.91,5.40Hz)8.05(1H,s)8.12(1H,ddd,J=9.79,7.03,2.76Hz)8.31(1H,d,J=2.51Hz)8.53(1H,d,J=2.26Hz)8.92(1H,dd,J=4.64,2.89Hz);LCMS:m/z=580.4[M+1]。
实施例14:WX026、WX027
合成路线:
步骤1:化合物WX026-2的合成
将化合物WX026-1(0.3g,1.55mmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中,置换氮气,将反应液降温至-25℃,然后加入氢化钠(534.16mg,13.36mmol,60%纯度,8.64eq),在-25℃下搅拌20分钟。然后将碘甲烷(1.32g,9.28mmol,577.46μL,6eq)滴加到反应瓶中,在-25℃下搅拌15分钟。反应液中加入15mL水淬灭反应,用乙酸乙酯(15mL*3)萃取,收集有机相,有机相用水(15mL)洗涤,然后再用饱和食盐水(15mL)洗涤,有机相中加入无水硫酸钠(20g)干燥,过滤,有机相用旋蒸(45℃,水泵)减压浓缩,得到目标化合物WX026-2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.85(s,1H),4.68(s,2H),3.39(s,3H)。
步骤2:化合物WX026-4的合成
将化合物WX026-2溶于无水四氢呋喃(7mL),然后将WX016-3(1.32g,7.11mmol,1.45mL,4eq)和TMEDA(268.64mg,2.31mmol,348.88μL,1.3eq)加入反应瓶中,氮气抽换气三次之后,将反应降温至-65℃下,然后将n-BuLi(2.5M,2.13mL,3eq)缓慢滴加至反应瓶中,-65℃下搅拌2小时,升温至15℃,搅拌0.5小时。反应液中加入甲醇(10mL)淬灭反应,体系用旋蒸(水泵,45℃)减压浓缩。得到目标化合物WX026-4。
步骤3:化合物WX026-5的合成
将化合物WX005-2(0.42g,770.24umol,1eq)和WX026-4(133.25mg,770.24umol,1eq),然后加入1.4-二氧六环(28mL)和水(14mL),再将碳酸钾(226.78mg,2.31mmol,3eq)加入反应瓶中,置换氮气,将Pd(dppf)Cl2(169.08mg,231.07umol,0.3eq)加入反应瓶中,再次置换氮气,将反应瓶置于70℃油浴中,搅拌5小时。反应液中加入水(42mL)稀释反应液,体系中加入二氯甲烷(50mL*3)萃取,收集有机相,有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤,有机相用旋蒸(水泵,55℃)减压浓缩。粗产品通过快速柱层析分离(硅胶目数:100-200目;二氯甲烷∶甲醇=100∶1至10∶1),纯化得到产物粗品。粗品大板分离:粗产品通过薄层层析硅胶板(二氯甲烷∶甲醇=20∶1),纯化得到产物粗品。粗产品通过高效液相色谱分离(色谱柱:水sXbridge 150*25mm 5μm;流动相:[水(10mM NH4HCO3)-乙腈];B%:20%-50%,10min)(B为乙腈)得到目标化合物WX026-5。
步骤4:化合物WX026和WX027的合成
将化合物WX026-5(0.11g,201.26μmol,1eq)经过超临界流体色谱分离(色谱柱:DAICEL CHIRALPAK AD-H(250mm*30mm,5um);流动相:[0.1%氨水的异丙醇];B%:50%-50%,10min)(B为0.1%氨水的异丙醇),得到WX026(保留时间为2.04min)和WX027(保留时间为2.45min)。WX026:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(dd,J=4.82,2.63Hz,1H),8.12(ddd,J=9.98,7.13,2.63Hz,1H),8.07(s,1H),7.96(s,1H),7.81(dd,J=9.87,5.48Hz,1H),7.27(br d,J=6.58Hz,1H),6.98(br d,J=8.77Hz,2H),6.08(q,J=6.87Hz,1H),4.74(s,2H),3.44(s,3H),1.79(d,J=7.02Hz,3H);LCMS:m/z=547.1[M+1]。WX027:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(dd,J=4.60,2.85Hz,1H),8.11(ddd,J=9.76,7.13,2.85Hz,1H),8.06(s,1H),7.96(s,1H),7.81(dd,J=10.09,5.26Hz,1H),7.26(br d,J=7.89Hz,1H),6.98(br d,J=8.33Hz,2H),6.07(q,J=6.87Hz,1H),4.74(s,2H),3.43(s,3H),1.79(d,J=7.02Hz,3H);LCMS:m/z=547.1[M+1]。
实施例15:WX028、WX029
合成路线:
步骤1:化合物WX028-1的合成
在预先干燥的反应瓶中加入2,5-二溴噻唑(10g,41.17mmol,1eq)和乙醇(100mL),置换氮气三次,置于0℃下,缓慢加入甲硫醇钠(43.28g,123.50mmol,39.34mL,20%纯度,3eq),移至25℃下搅拌2小时。将该反应液倒入100mL水中,加入100mL乙酸乙酯稀释,然后水相用乙酸乙酯萃取(100mL*3)。合并有机相,依次用饱和食盐水洗涤(100mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩得到WX028-1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.68(s,3H)7.52(s,1H);LCMS:m/z=209.9[M+1]。
步骤2:化合物WX028-2的合成
在预先干燥的反应瓶中加入WX028-1(8.3g,39.50mmol,1eq)和四氢呋喃(84mL),甲醇(84mL),0℃下加入硫酸氢钾(48.57g,79.00mmol,2eq),醋酸钠(16.20g,197.51mmol,5eq)和水(84mL),0℃下搅拌1小时,29℃搅拌15小时。将反应液中加入水(100mL)终止反应,乙酸乙酯萃取水相(150mL*3),合并有机相,饱和食盐水洗涤(150mL*2),收集有机相,无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩得粗产品。粗产品经硅胶层析柱分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯=1∶0转20∶1转10∶1转5∶1)得到WX028-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.31(s,3H)7.94(s,1H);LCMS:m/z=241.9[M+1]。
步骤3:化合物WX028-3的合成
在预先干燥的反应瓶中加入2,2,2-三氟乙醇(619.79mg,6.20mmol,445.89μL,1.5eq)和四氢呋喃(10mL),0℃下缓慢加入钠氢(330.39mg,8.26mmol,60%纯度,2eq),升温至25℃搅拌1小时,然后加入WX028-2(1g,4.13mmol,1eq),25℃搅拌3小时。加入水(50mL)终止反应,二氯甲烷萃取水相(50mL*3),合并有机相,饱和食盐水洗涤(50mL*2),收集有机相,无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩得粗产品。粗产品薄层层析硅胶板纯化(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1)得到目标化合物WX028-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.79(q,J=8.19Hz,2H)7.08(s,1H);LCMS:m/z=262.0[M+1]。
步骤4:化合物WX028-4的合成
在预先干燥的反应瓶中加入WX028-3(610mg,2.33mmol,1eq),WX016-3(1.73g,9.31mmol,1.90mL,4eq)和四氢呋喃(15mL),N,N,N′,N′-四甲基乙-二胺(351.66mg,3.03mmol,456.70μL,1.3eq)和四氢呋喃(15mL),置换氮气三次,置于-78℃下滴加入n-BuLi(2.5M,2.79mL,3eq)。-78℃下搅拌2小时,自然升温至25℃搅拌1小时。直接向反应液中加入甲醇(5mL)终止反应。将反应液旋干得到WX028-4。LCMS:m/z=310.0[M+1]。
步骤5:化合物WX028-5的合成
在预先干燥的反应瓶中加入WX028-4(308.39mg,679.36μmol,1.5eq),WX005-2(246.96mg,452.91μmol,1eq)和二氧六环(10mL),水(5mL),加入碳酸钾(187.79mg,1.36mmol,3eq)。置换氮气三次,加入Pd(dppf)Cl2(66.28mg,90.58μmol,0.2eq),再次置换氮气三次,置于70℃下搅拌16小时。将反应液经硅藻土过滤,滤液加入水(10mL),二氯甲烷萃取水相(10mL*3),合并有机相,饱和食盐水洗涤(10mL*2),收集有机相,无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩得粗产品。粗产品经薄层层析硅胶板纯化(石油醚∶乙酸乙酯=0∶1)得到产物纯品。产物纯品经制备高效液相色谱分离(色谱柱:水s Xbridge Prep OBD C18 150*40mm 10μm;流动相:[水(10mM NH4HCO3)-乙腈];B%:35%-55%,11min)(B为乙腈)得到WX028-5。LCMS:m/z=601.0[M+1]。
步骤6:化合物WX028和WX029的合成
将预先干燥的小瓶中加入WX028-5(100mg,166.52umol,1eq)送超临界色谱分离((分离方法:DAICEL CHIRALPAK AS(250mm*30mm,10um);流动相:[0.1%氨水的异丙醇];B%:40%-40%,)(B为0.1%氨水的异丙醇)得到目标化合物WX028和WX029。WX028在SFC中保留时间是1.59min。WX029在SFC中保留时间是1.74min。WX028:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.78(d,J=6.97Hz,3H)5.20(q,J=8.80Hz,2H)6.05(q,J=6.81Hz,1H)6.95-7.17(m,5H)7.28(br d,J=7.46Hz,1H)7.49(s,1H)7.80(dd,J=9.84,5.32Hz,1H)8.05-8.15(m,2H)8.92(dd,J=4.65,2.69Hz,1H),LCMS:m/z=601.1[M+1];WX029:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.78(d,J=6.97Hz,3H)5.20(q,J=8.72Hz,2H)6.05(q,J=7.34Hz,1H)6.94-7.15(m,5H)7.28(br d,J=7.58Hz,1H)7.49(s,1H)7.80(dd,J=10.03,5.26Hz,1H)8.05-8.15(m,2H)8.89-8.96(m,1H);LCMS:m/z=601.1[M+1]。
实施例16:WX030、WX031
合成路线:
步骤1:化合物WX030-2的合成
向预先干燥好的投库瓶(40毫升)中依次加入WX030-1(1g,4.13mmol,1eq),环丙醇(359.82mg,6.20mmol,1.5eq)和四氢呋喃(10mL),置换氮气后,将反应液降温至0℃,然后加入氢化钠(330.39mg,8.26mmol,60%纯度,2eq)。缓慢升温至25℃搅拌3小时,反应完后,反应液用3mL甲醇淬灭后减压浓缩得到粗品。粗产品经硅胶层析柱分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯=20∶1至1∶1),纯化得到目标化合物WX030-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.14(s,1H),4.21(tt,J=3.0,6.0Hz,1H),0.98-0.88(m,2H),0.88-0.78(m,2H)。
步骤2:化合物WX030-3的合成
向干燥的投库瓶(40mL)中加入WX030-2(0.6g,2.73mmol,1eq),WX016-3(2.03g,10.90mmol,2.22mL,4eq),正丁基锂(2.5M,3.27mL,3eq)和四氢呋喃(6mL),置换氮气后降温至-78℃,缓慢加入N,N,N,N,-四甲基乙二胺(411.85mg,3.54mmol,534.88uL,1.3eq),-78℃下搅拌1小时后升温至25℃搅拌1小时。反应完后,将反应液用6mL甲醇缓慢淬灭后减压蒸出溶剂得到粗品WX030-3,粗品没有纯化直接用于下一步。
步骤3:化合物WX030-4的合成
向干燥的投库瓶(8mL)中,加入WX030-3(0.9g,2.70mmol,2eq),化合物WX005-2(734.80mg,1.35mmol,1eq),碳酸钾(558.73mg,4.04mmol,3eq)和溶剂二氧六环(1.5mL),水(0.15mL),置换氮气后,加入[1,1’-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(197.20mg,269.51umol,0.2eq),再次置换氮气后加热至70℃搅拌16小时。反应完后,将反应液降温后减压蒸出溶剂得到粗品。粗品通过薄层层析硅胶板(二氯甲烷∶甲醇=1∶0~100∶1)纯化,得到1g粗品,再通过制备高效液相色谱分离(色谱柱:Xtimate C18 10u 250mm*80mm;流动相:[水(10mM NH4HCO3)-乙腈];B%:20%-55%,20min)(B为乙腈)得到目标化合物WX030-4。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.95-8.92(m,1H),8.22(s,1H),7.66(s,1H),7.66(d,J=11.3Hz,1H),7.46(s,1H),7.05(d,J=7.3Hz,1H),7.00-6.88(m,2H),6.15(q,J=7.0Hz,1H),5.52(s,2H),4.30-4.25(m,1H),3.92(s,1H),1.91(d,J=7.1Hz,3H),1.01-0.93(m,2H),0.93-0.87(m,2H)。
步骤4:化合物WX030、WX031的合成
化合物WX030-4由经超临界流体色谱分离(分离方法:色谱柱:DAICEL CHIRALPAKAD-H(250mm*30mm,5μm));流动相:[纯异丙醇];B%:50%-50%(B为纯异丙醇),8min得到WX030(保留时间为2.09min)和WX031(保留时间为2.39min)。WX030:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ=8.93(dd,J=2.9,4.6Hz,1H),8.12(ddd,J=2.8,7.1,9.9Hz,1H),8.06(s,1H),7.81(dd,J=5.3,9.8Hz,1H),7.50(s,1H),7.33-7.23(m,1H),7.08-6.92(m,4H),6.06(q,J=6.8Hz,1H),4.34(tt,J=3.0,5.9Hz,1H),1.79(d,J=6.8Hz,3H),0.93-0.85(m,4H);MS,m/z=559.0[M+1]。WX031:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(dd,J=2.9,4.6Hz,1H),8.11(ddd,J=2.8,7.2,9.8Hz,1H),8.05(s,1H),7.80(dd,J=5.3,9.7Hz,1H),7.49(s,1H),7.34-7.20(m,1H),7.07-6.92(m,4H),6.05(q,J=6.9Hz,1H),4.34(tt,J=3.1,5.9Hz,1H),1.78(d,J=7.0Hz,3H),0.94-0.85(m,4H);MS,m/z=559.0[M+1]。
实施例17:WX032、WX033
合成路线:
步骤1:化合物WX032-3的合成
在预先干燥的反应瓶中加入WX032-1(2.5g,21.33mmol,1eq),WX032-2(6.70g,85.32mmol,5.49mL,4eq)和乙醇(40mL),然后加入醋酸(2.56g,42.66mmol,2.44mL),置换氮气三次,50℃下反应1小时,然后缓慢升温至80℃,反应15小时。反应完成后,将反应液真空浓缩,然后将粗品在0℃下用饱和碳酸氢钠调至中性,用二氯甲烷(20mL*3)萃取,收集有机相用饱和食盐水(30mL*1)洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压旋干,所得残留物经硅胶层析柱分离纯化(洗脱剂:乙酸乙酯/石油醚=0~1%)得到目标化合物WX032-3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.37(s,9H)7.55(d,J=3.31Hz,1H)7.68(d,J=3.31Hz,1H)。
步骤2:化合物WX032-4的合成
在预先干燥的反应瓶中加入WX032-3(1.2g,4.25mmol,1eq)和乙腈(25mL),然后加入溴代丁二酰亚胺(1.51g,8.50mmol,2eq),置换氮气三次,25℃下反应16小时。反应完成后将反应体系真空浓缩,得到粗品。粗产品经硅胶层析柱分离纯化(洗脱剂:乙酸乙酯/石油醚=0~1%)得到目标化合物WX032-4。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.35(s,9H)7.73(s,1H)。
步骤3:化合物WX032-5的合成
在预先干燥的反应瓶中加入WX032-4(900mg,4.09mmol,1eq)和四氢呋喃(20mL),加入WX016-3(3.04g,16.35mmol,3.34mL,4eq)和N,N,N′,N′-四甲基乙二胺(617.66mg,5.32mmol,802.16uL,1.3eq),置换氮气三次,降温至-78℃。缓慢滴加正丁基锂(2.5M,4.91mL),-78℃下反应2小时,自然升温至25℃后继续搅拌1小时。反应完成后,用甲醇淬灭反应,真空泵浓缩,得到WX032-5。
步骤4:化合物WX032-6的合成
在预先干燥的反应瓶中加入WX005-2(100mg,183.39umol,1eq)和WX032-5(196.00mg,366.78umol,2eq),然后加入二氧六环(3mL),水(1.5mL),加入醋酸钾(53.99mg,550.17umol,3eq),置换氮气三次,加入1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(40.26mg,55.02umol,0.3eq),再次置换氮气三次,70℃反应16小时。反应完成后将反应体系冷却至室温,然后真空泵浓缩,将粗品用二氯甲烷(10mL)溶解,然后加入水(10mL)萃取,水相用二氯甲烷(20mL)萃取2次,收集有机相,然后用饱和食盐水(10mL)洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩得到残余物。粗品经制备高效液相色谱分离(色谱柱:Xtimate C18 150*40mm*10um;流动相:[水(10mM NH4HCO3)-乙腈];B%:50%-70%,7min)(B为乙腈)得到WX032-6。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.50(s,9H)1.93(s,2H)5.57(s,2H)6.18(q,J=7.16Hz,1H)6.90-6.99(m,2H)7.07(d,J=7.89Hz,1H)7.48(dd,J=7.45,3.07Hz,1H)7.66-7.69(m,2H)7.89(s,1H)8.23(s,1H)8.93-8.97(m,1H)。
步骤5:化合物WX032、WX033的合成
将WX032-6(171mg,306.12μmol,1eq)送超临界色谱拆分。经SFC(分离方法:色谱柱DAICEL CHIRALPAK AS(250mm*30mm,10μm);流动相:[0.1%氨水的异丙醇];B%:48%-48%,9min)(B为0.1%氨水的异丙醇)分离,得到WX032(保留时间为2.98min)和WX033(保留时间为3.26min)。WX032:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.50(s,9H)1.92(d,J=6.97Hz,3H)5.66(br s,2H)6.18(q,J=6.97Hz,1H)6.88-7.00(m,2H)7.07(d,J=7.58Hz,1H)7.27-7.31(m,1H)7.61-7.74(m,2H)7.89(s,1H)8.22(s,1H)8.95(dd,J=3.79,2.69Hz,1H);LCMS:m/z=559.1[M+1]。WX033:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.50(s,9H)1.92(d,J=6.97Hz,3H)5.66(br s,2H)6.18(q,J=6.97Hz,1H)6.88-7.00(m,2H)7.07(d,J=7.58Hz,1H)7.27-7.31(m,1H)7.61-7.74(m,2H)7.89(s,1H)8.22(s,1H)8.95(dd,J=3.79,2.69Hz,1H);LCMS:m/z=559.1[M+1]。
实施例18:WX034、WX035
合成路线:
步骤1:化合物WX034-2的合成
将WX034-1(3g,11.54mmol,1eq),二氯甲烷(30mL)加入到反应瓶中,而后加入吡啶(5.48g,69.24mmol,5.59mL,6eq),逐滴滴加乙酸酐(1.30g,12.69mmol,1.19mL,1.1eq),并将反应在30℃油浴中反应1小时。反应完成后,反应液中加入1N盐酸(30mL),二氯甲烷(90mL),而后分液,收集有机相,有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,滤液旋干得粗品WX034-2。
步骤2:化合物WX034-3的合成
将WX034-2(3.6g,16.28mmol,1eq),N,N,-二甲基甲酰胺(30mL),加入到反应瓶中,而后加入碳酸钾(5.63g,40.71mmol,2.5eq)搅拌0.5小时,而后加入碘甲烷(9.25g,65.14mmol,4.05mL,4eq),而后在30℃油浴中搅拌11.5小时。反应完后,将反应液旋干,而后加入乙酸乙酯(150mL)搅拌0.2小时,过滤,滤液旋干得粗品。粗品通过硅胶柱层析分离(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1至2∶1),纯化得到目标化合物WX034-3。
步骤3:化合物WX034-4的合成
将WX034-3(0.8g,3.40mmol,1eq),二氧六环(5mL),四三苯基膦钯(589.82mg,510.42μmol,0.15eq)加入到反应瓶中,而后滴加三正丁基氢锡(4.95g,17.01mmol,4.50mL,5eq),氮气置换三次,而后在80℃油浴的条件下反应3小时。反应完后,反应液旋干得粗品,粗品再通过薄层层析硅胶板(石油醚∶乙酸乙酯=3∶1)纯化,得目标化合物WX034-4。
步骤4:化合物WX034-5的合成
于40mL干燥的投库瓶中,加入化合物WX005-2(350.00mg,641.87μmol,1eq),化合物WX034-4(371.53mg,834.43μmol,1.3eq)和二氧六环(21mL),置换氮气后加入四三苯基膦钯(74.17mg,64.19μmol,0.1eq),反应加入至100℃搅拌8小时。反应完后,将反应液降温后减压蒸出溶剂得到粗品。粗产品经硅胶层析柱分离纯化(二氯甲烷∶甲醇=1∶0至100∶1)纯化,得到WX034-5。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.97(br s,1H),8.05(s,1H),8.02-7.94(m,1H),7.91-7.84(m,1H),7.73(s,1H),7.20(br s,1H),6.84(br t,J=9.0Hz,2H),6.20(br d,J=7.0Hz,1H),3.75(s,3H),2.44(s,3H),1.91(d,J=7.0Hz,3H)。
步骤5:化合物WX034-6的合成
在预先干燥的40mL投库瓶中加入WX034-5(0.4g,697.38μmol,1eq)和甲醇(8mL),然后加入碳酸钾(192.77mg,1.39mmol,2eq),反应液缓加热至40℃搅拌10小时。反应完后,将反应液降温后减压蒸出溶剂得到粗品。粗品通过制备高效液相色谱分离(色谱柱:Xtimate C18 150*40mm*10um;流动相:[水(10mM NH4HCO3)-乙腈];B%:40%-60%,7min)(B为乙腈)得到目标化合物WX034-6. 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(dd,J=2.8,4.6Hz,1H),8.11(ddd,J=2.9,7.1,9.8Hz,1H),8.03-8.00(m,1H),7.81(dd,J=5.2,9.8Hz,1H),7.76(q,J=4.6Hz,1H),7.34-7.30(m,1H),7.29-7.20(m,1H),7.02-6.90(m,4H),6.01(q,J=7.0Hz,1H),2.86(d,J=4.8Hz,3H),1.77(d,J=7.0Hz,3H)。
步骤6:化合物WX034、WX035的合成
化合物WX034-6由经超临界流体色谱分离(分离方法:色谱柱:DAICEL CHIRALPAKAD(250mm*50mm,10μm);流动相:[纯异丙醇];B%:50%-50%,4.5min(B为纯异丙醇)得到WX034(保留时间为3.48min)和WX035(保留时间为4.18min)。WX034:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(dd,J=2.8,4.6Hz,1H),8.11(ddd,J=2.9,7.1,9.8Hz,1H),8.03-8.00(m,1H),7.81(dd,J=5.2,9.8Hz,1H),7.76(q,J=4.6Hz,1H),7.34-7.30(m,1H),7.29-7.20(m,1H),7.02-6.90(m,4H),6.01(q,J=7.0Hz,1H),2.86(d,J=4.8Hz,3H),1.77(d,J=7.0Hz,3H);MS:m/z=531.9[M+1]。WX035:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(dd,J=2.8,4.6Hz,1H),8.11(ddd,J=2.9,7.1,9.8Hz,1H),8.03-8.00(m,1H),7.81(dd,J=5.2,9.8Hz,1H),7.76(q,J=4.6Hz,1H),7.34-7.30(m,1H),7.29-7.20(m,1H),7.02-6.90(m,4H),6.01(q,J=7.0Hz,1H),2.86(d,J=4.8Hz,3H),1.77(d,J=7.0Hz,3H);MS:m/z=531.9[M+1]。
实施例19:WX036、WX037
步骤1:化合物WX036-2的合成
WX036-1(4g,20.79mmol,1eq)在20%(w/w)甲硫醇钠水溶液(44.00g,125.55mmol,40.00mL,6.04eq)和N,N,-二甲基甲酰胺(80mL)的溶液在100℃下搅拌反应16小时。反应完毕后,浓缩,悬浮于水(40mL)中,并用乙酸乙酯(30mL*2)萃取。有机相浓缩得WX036-2。
步骤2:化合物WX036-3的合成
氮气保护下,WX036-2(2g,9.80mmol,1eq),WX003-2(3.00g,11.81mmol,1.21eq),[1,1’-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(800.00mg,1.09mmol,1.12e-1eq)和乙酸钾(2.00g,20.38mmol,2.08eq)在二氧六环(100mL)中,100℃下搅拌反应16个小时。反应完毕后,浓缩,粗品经硅胶层析柱分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯=1∶0-20∶1)得到WX036-3。
步骤3:化合物WX036、WX037的合成
氮气保护下,WX005-2(0.25g,458.48μmol,1eq),WX036-3(150.00mg,597.25μmol,1.30eq),[1,1’-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(50.00mg,68.33μmol,1.49e-1eq)和碳酸钾(150.00mg,1.09mmol,2.37eq)在二氧六环(20mL)和水(5mL)的混合液中,在100℃下搅拌16个小时。反应完毕后,加入水,用乙酸乙酯萃取,有机相浓缩,粗品经硅胶层析柱分离纯化(乙酸乙酯/石油醚=1∶1-1∶0转二氯甲烷/甲醇=20∶1)纯化。再经过超临界流体色谱分离(分离方法:色谱柱:DAICEL CHIRALPAKAS-H(250mm*30mm,5um);流动相:[0.1%氨水的乙醇];B%:45%-45%,min)(B为0.1%氨水的乙醇),得到WX036(保留时间为4.438min)和WX037(保留时间为4.953min)。WX036:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.87(dd,J=3.89,2.64Hz,1H)8.65(d,J=1.76Hz,1H)8.15(s,1H)7.72(dd,J=8.28,2.26Hz,1H)7.51-7.66(m,2H)7.23-7.27(m,1H)7.19(s,1H)6.98(d,J=7.53Hz,1H)6.78-6.90(m,2H)6.13(q,J=7.03Hz,1H)5.31(br s,2H)2.54(s,3H)1.87(d,J=7.03Hz,3H);LCMS:m/z=543.1[M+1]。WX037:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.96(dd,J=3.76,2.76Hz,1H)8.74(d,J=1.51Hz,1H)8.24(s,1H)7.81(dd,J=8.41,2.38Hz,1H)7.57-7.76(m,2H)7.33(d,J=8.28Hz,1H)7.25-7.28(m,1H)7.07(d,J=7.78Hz,1H)6.84-6.98(m,2H)6.22(q,J=6.94Hz,1H)5.37(br s,2H)2.64(s,3H)1.96(d,J=7.03Hz,3H)。LCMS:m/z=543.1[M+1]。
实施例20:WX038、WX039
合成路线:
步骤1:化合物WX038-3的合成。
将碳酸铯(15.00g,46.04mmol,2.98eq)加入到WX038-1(3g,15.46mmol)和WX038-2(3.60g,29.27mmol,2.75mL)的乙腈(100mL)溶液中。反应液在80℃搅拌反应16小时。反应完毕后,加入乙酸乙酯(100mL),过滤。滤液浓缩,得WX038-3。
步骤2:化合物WX038和WX039的合成
氮气保护下,将WX005-2(0.3g,550.17μmol),WX038-3(225.00mg,952.92μmol),[1,1’-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(75.00mg,102.50μmol,1.86e-1eq),碳酸钾(300.00mg,2.17mmol,3.95eq)加入反应瓶中,然后加入水(10mL)和二氧六环(50mL)。溶液在100℃下搅拌反应2小时。反应完毕后,浓缩除去二氧六环,用乙酸乙酯(30mL*2)萃取,浓缩有机相,粗品经硅胶层析柱分离纯化(乙酸乙酯/石油醚=1∶1-1∶0转二氯甲烷/甲醇=20∶1)得到粗品化合物。粗品经超临界流体色谱分离(分离方法:色谱柱:Phenomenex-Amylose-1(250mm*30mm,5um);流动相:[0.1%氨水的乙醇];B%:35%-35%,min(B为0.1%氨水的乙醇)得到WX038(保留时间为4.723min)和WX039(保留时间为5.470min)。WX038:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.96(dd,J=4.02,2.76Hz,1H)8.20(s,1H)7.63-7.85(m,4H)7.40-7.58(m,1H)7.04(br d,J=7.28Hz,1H)6.92(br t,J=7.53Hz,2H)6.18(q,J=7.03Hz,1H)5.49(s,2H)4.49-4.67(m,1H)1.94(d,J=7.03Hz,3H)1.50-1.61(m,6H);MS:m/z=528.2[M+1]。WX039:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.87(dd,J=4.02,2.76Hz,1H)8.10(s,1H)7.71(d,J=3.51Hz,2H)7.48-7.66(m,2H)7.17(br s,1H)6.95(br d,J=7.53Hz,1H)6.82(br t,J=7.78Hz,2H)6.09(q,J=7.03Hz,1H)5.55(br s,2H)4.49(spt,J=6.69Hz,1H)1.85(d,J=7.03Hz,3H)1.50(d,J=6.78Hz,6H);MS:m/z=528.2[M+1]。
实施例21:WX040、WX041
合成路线:
步骤1:化合物WX040-3的合成
将化合物WX040-1(3g,27.74mmol,1eq),化合物BB-1-2(7g,42.53mmol,1.53eq)溶于多聚磷酸(40mL)中,在125℃下反应16小时。向反应液中加入水(200mL),用氢氧化钠调节PH=8,有固体析出,加入二氯甲烷(100mL*3)萃取,取有机相旋干得到目标化合物WX040-3。
步骤2:化合物WX040-4的合成
将化合物WX040-3(3.2g,14.27mmol,1eq)(纯度:93.06%),NBS(2.58g,14.52mmol,1.02eq)溶于乙腈(60mL)中,在10℃下搅拌16小时。将反应旋干,加入水(100mL),用二氯甲烷(100*3mL)进行萃取,取有机相旋干得到目标化合物WX040-4。
步骤3:化合物WX040-5的合成
将化合物WX040-4(3.5g,12.17mmol,1eq)(粗品),醋酸钾(1.80g,18.34mmol,1.51eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中,在40℃下搅拌3.5小时。将反应液用油泵拉干除去N,N-二甲基甲酰胺,加入水(100mL),用二氯甲烷(100*3mL)进行萃取,有机相旋干得到目标化合物WX040-5。
步骤4:化合物WX040-6的合成
将化合物WX040-5(3.5g,11.25mmol,1eq)(粗品),盐酸(12M,3.50mL,3.73eq)溶于1,4-二氧六环(60mL)中,在70℃下反应3小时。将反应液旋干,用水打浆,收集滤液,用二氯甲烷(100*3mL)进行萃取,有机相旋干,得到目标化合物WX040-6。
步骤5:化合物WX040-8的合成
将WX040-6(2.2g,8.18mmol,1eq)(纯度:87,24%),WX013-6(2.28g,16.28mmol,1.99eq),Pd(dppf)Cl2(0.3g,410.00umol,5.01e-2eq),碳酸钾(4.33g,40.88mmol,5eq)溶于乙腈(60mL)与水(20mL)中,置换氮气三次,在100℃下反应1小时。将反应液旋干,加入水(200mL)进行稀释,用二氯甲烷(200*3mL)进行萃取,取有机相旋干。经硅胶层析柱分离纯化(甲醇∶乙酸乙酯=0%-6%)得到目标化合物WX040-8。
步骤6:化合物WX040-9的合成
将DMSO(1.70g,21.76mmol,1.7mL,6.19eq)溶于二氯甲烷(10mL)中,向其中加入草酰氯(1.45g,11.42mmol,1mL,3.25eq),在-78℃下搅拌1小时,将WX040-8(1g,3.52mmol,1eq)(粗品)溶于二氯甲烷(20mL)加入反应液中,在-78℃下搅拌1小时,再向其中加入三乙胺(3.64g,35.92mmol,5mL,10.21eq),在-78℃下搅拌1消失,再升温到15℃下搅拌1小时。向反应液中加入水(40mL)进行稀释,用二氯甲烷(40mL*3)进行萃取,有机相旋干,得到目标化合物WX040-9。
步骤7:化合物WX040-10的合成
将WX040-9(1.1g,3.90mmol,1eq)溶于四氢呋喃(10mL)中,氮气保护下在0℃将甲基溴化镁(3M,2.62mL,2.02eq)加入到溶液中,在10℃下反应5小时。向反应液中加水淬灭,旋干得到粗品。经硅胶层析柱分离纯化(甲醇∶二氯甲烷=0%-6%)得到目标化合物WX040-10。
步骤8:化合物WX040-12的合成
将WX040-10(0.3g,1.01mmol,1eq)(粗品),WX001-4(240.00mg,919.46μmol,9.14e-1eq),偶氮二甲酸二异丙酯(312.00mg,1.54mmol,300.00uL,1.53eq)溶于四氢呋喃(6mL)中,置换氮气3次。再加入三苯基膦(420.00mg,1.60mmol,1.59eq),在45℃下搅拌3.5小时。将反应液旋干得到粗品。经硅胶层析柱分离纯化(甲醇∶二氯甲烷=0%-6%)得到目标化合物WX040-12。
步骤9:化合物WX040和WX041的合成
将WX040-12(0.1g,184.73μmol,1eq)(粗品),WX001-3(99.88mg,356.53μmol,1.93eq)(粗品),碳酸钠(97.90mg,923.65μmol,5eq)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(4mL),乙醇(2mL)和水(2mL)中,在氮气保护下加入Pd(PPh3)4(0.025g,21.63μmol,1.17e-1eq),在100℃下搅拌16小时。将反应液旋干。粗品经硅胶层析柱分离纯化(甲醇∶二氯甲烷=0%-10%)。并经常规制备高效液相色谱分离(色谱柱:Boston Prime C18150*30mm 5μm;流动相:[水(0.05%氨水v/v)-乙腈];B%:58%-88%,8min)(B为乙腈)。再经过超临界流体色谱分离(色谱柱:DAICEL CHIRALPAKAD(250mm*30mm,10μm);流动相:[0.1%氨水的乙醇];B%:35%-35%,min(B为0.1%氨水的乙醇)得到WX040(保留时间为3.360)和WX041(保留时间为3.687)。WX040:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.33(d,J=6.02Hz,6H)1.84(d,J=7.03Hz,3H)2.93(s,3H)3.65(q,J=7.03Hz,1H)4.55(spt,J=6.11Hz,1H)5.41(br s,1H)6.02(q,J=6.94Hz,1H)6.58-6.65(m,1H)6.77(br dd,J=8.41,6.90Hz,2H)6.93(br d,J=7.53Hz,1H)7.03(t,J=8.41Hz,1H)7.11-7.17(m,1H)7.28(br d,J=8.28Hz,1H)7.32-7.39(m,3H)8.12(s,1H);WX041:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.33(d,J=6.02Hz,6H)1.84(d,J=7.03Hz,3H)2.93(s,3H)4.55(spt,J=6.07Hz,1H)5.42(br s,2H)6.02(q,J=7.03Hz,1H)6.55-6.63(m,1H)6.72-6.82(m,2H)6.93(br d,J=7.53Hz,1H)7.03(t,J=8.41Hz,1H)7.09-7.18(m,1H)7.28(br d,J=8.28Hz,1H)7.32-7.41(m,3H)8.12(s,1H)。
实施例22:WX042、WX043
合成路线:
步骤1:目标化合物WX042-2合成
将WX042-1(5g,26.45mmol,1eq)溶解在乙二醇二甲醚(21mL)和乙醇(6mL),水(2.1mL),甲苯(12.6mL)的混合溶液中,加入双联频哪醇硼酸酯(15.25g,60.05mmol,2.27eq),醋酸钾(7.81g,79.61mmol,3.01eq),氮气保护下加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(4.32g,5.29mmol,0.2eq),混合物加热至85℃反应6小时。旋干有机溶剂,加水(约20mL),二氯甲烷萃取(20mL*3),合并有机相,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。粗品经快速硅胶柱(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1),分离得到目标化合物WX042-2。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.90-8.67(s,2H),4.05(s,3H),1.11(s,12H)。
步骤2:化合物WX042和WX043的合成
将WX005-2(1.5g,2.75mmol,1eq),WX042-2(649.41mg,2.75mmol,1eq)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)以及乙醇(50mL),水(50mL)的混合溶剂中,加入碳酸钾(1.14g,8.25mmol,3.0eq),氮气保护下加入Pd(PPh3)4(635.76mg,550.17μmol,0.2eq)后加热至100℃搅拌2小时。反应液直接旋干有机溶剂,加水(约100mL),二氯甲烷萃取(100mL*3),合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。粗品经制备薄层层析板(二氯甲烷∶甲醇=15∶1)分离纯化;打浆(石油醚/二氯甲烷=100mL/10mL),经过超临界流体色谱分离(色谱柱:XtimateC18 150*25mm*5μm;流动相:[水(0.225%FA)-乙腈];B%:32%-52%,7min)(B为乙腈)得到WX042(保留时间为2.078)和WX043(保留时间为2.558)。WX042:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.97-8.95(m,1H),8.83(s,2H),8.28(s,1H),7.88-7.55(m,2H),7.33-7.31(m 1H),7.11-7.09(m,1H),6.98-6.94(m,2H),6.25-6.19(q,J=7.1Hz,1H),5.32-5.28(m,2H),4.18(s,3H),1.96(d,J=7.0Hz,3H).WX043:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.97(br d,J=3.5Hz,1H),8.85(s,2H),8.28(s,1H),7.97-7.60(m,2H),7.32-7.31(m,1H),7.11(d,J=7.5Hz,1H),7.04-6.80(m,2H),6.22(q,J=7.1Hz,1H),5.28(m,2H),4.12(s,3H),1.96(d,J=7.0Hz,3H)。
实施例23:WX044、WX045
合成路线:
步骤1:目标化合物WX044-3的合成
将WX044-1(3g,23.34mmol,1eq),BB-1-2(4.99g,30.34mmol,1.3eq)与多聚磷酸(30mL)混合,加热至125℃反应6小时。向反应瓶中加水(约100mL)得到较澄清溶液,加入氢氧化钠(约20g)调节至pH=8,有小颗粒固体析出,溶液变成糊状;抽滤收集滤饼,滤饼和甲苯(约20mL)混合后再旋干得到目标化合物WX044-3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(d,J=2.0Hz,1H),8.04(dd,J=2.3,9.3Hz,1H),7.73(d,J=9.5Hz,1H),6.60(s,1H),4.67(s,2H)。
步骤2:目标化合物WX044-4的合成
将WX044-3(3.6g,15.72mmol,1eq)(粗品)溶解在醋酸(90mL)中,加入NBS(3.08g,17.29mmol,1.1eq),混合物在20℃下搅拌5小时。向反应瓶中加水(约100mL)即可有固体析出,抽滤收集滤饼,滤饼和甲苯(约20mL)混合后再旋干得到土黄色固体。得到目标化合物WX044-4。
步骤3:目标化合物WX044-5的合成
将WX044-4(4g,12.99mmol,1eq)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中,加入醋酸钾(1.91g,19.48mmol,1.5eq),混合物加热至40℃搅拌反应3.5小时。向反应瓶中加水(约100mL),抽滤,滤饼和甲苯(约20mL)混合后再旋干得到目标化合物WX044-5。
步骤4:目标化合物WX044-6的合成
将WX044-5(4g,12.06mmol,1eq)(粗品)溶解在1,4-二氧六环(30mL)中,加入浓盐酸(12M,4.00mL,3.98eq),混合物加热至70℃搅拌反应3小时。向反应瓶中加水(约100mL)即可有固体析出,抽滤,滤饼再旋干得目标化合物WX044-6。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.94(d,J=2.0Hz,1H),8.07(dd,J=2.1,9.4Hz,1H),7.77(d,J=9.5Hz,1H),4.57(br s,2H)。
步骤5:目标化合物WX044-8的合成
WX044-6(1.8g,6.22mmol,1eq),WX013-6(869.93mg,6.22mmol,1.0eq)(粗品)溶解在乙腈(50mL)和水(15mL)的混合溶液中,加入碳酸钠(2.64g,24.87mmol,4eq),氮气保护下加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(1.02g,1.24mmol,0.2eq),混合物加热至70℃搅拌反应1小时。旋干有机溶剂,加水(约100mL),二氯甲烷萃取(100mL*3),合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。粗品经快速硅胶柱(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)分离得到目标化合物产物WX044-8。
步骤6:目标化合物WX044-9的合成
氮气保护,将戴斯马丁试剂(1.39g,3.28mmol,1.02mL,2eq)加入WX044-8(in76.85纯度)的DMSO(20mL)溶液,室温(25℃)搅拌1小时。反应液从浑浊变为澄清溶液。旋干有机溶剂,加水(约10mL)淬灭反应,二氯甲烷萃取(10mL*3),合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩(不加热)得到粗品。粗品经石油醚(约20mL)洗涤得到目标产物WX044-9。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.82(s,1H),9.02(d,J=2.0Hz,1H),8.12(dd,J=2.3,9.5Hz,1H),7.93(d,J=9.5Hz,1H),7.53-7.47(m,2H),7.34-7.23(m,4H)。
步骤7:目标化合物WX044-10的合成
WX044-9(0.4g,1.32mmol,1eq)溶解在四氢呋喃(10mL)中,0℃下滴加甲基溴化镁(3M,2.20mL,5eq),混合物搅拌1小时。旋干有机溶剂,加水(约100mL)淬灭反应,二氯甲烷萃取(100mL*3),合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。粗品经制备薄层层析板(二氯甲烷∶甲醇=30∶1)纯化得到目标化合物WX044-10。
步骤8:目标化合物WX044、WX045的合成
WX001-5(90.14mg,313.75μmol,1eq)以及WX044-10(0.1g,313.75μmol,1eq)溶解在四氢呋喃(3mL)中,加入三苯基膦(125.08mg,476.89μmol,1.52eq),混合物50℃搅拌5分钟,氮气保护下加入偶氮二甲酸二异丙酯(96.43mg,476.89μmol,92.72μL,1.52eq),混合物加热至60℃搅拌12小时。旋干有机溶剂,加水(约10mL)淬灭反应,二氯甲烷萃取(10mL*3),合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。粗品经制备薄层层析板(二氯甲烷∶甲醇=15∶1)纯化;然后经制备高效液相色谱分离(色谱柱:Boston Prime C18 150*30mm 5um;流动相:[水(0.05%氨水v/v)-乙腈];B%:50%-80%,9min)(B为乙腈),得到WX044(保留时间为4.229)和WX045(保留时间为9.398)。WX044:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.04(dd,J=0.9,2.1Hz,1H),8.19(s,1H),7.75-7.60(m,2H),7.40(dd,J=2.3,11.5Hz,1H),7.34(dd,J=1.1,8.4Hz,1H),7.10(t,J=8.4Hz,1H),7.06-6.97(m,1H),6.90(br dd,J=6.9,8.2Hz,2H),6.17(q,J=7.1Hz,1H),5.47(br s,2H),4.72-4.51(m,1H),1.92(d,J=7.0Hz,3H),1.40(d,J=6.0Hz,6H);WX045:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.04(d,J=1.5Hz,1H),8.19(s,1H),7.81-7.57(m,2H),7.40(dd,J=2.0,11.5Hz,1H),7.34(br d,J=8.5Hz,1H),7.14-6.99(m,2H),6.91(br t,J=7.9Hz,2H),6.16(q,J=7.1Hz,1H),5.50(br s,2H),4.75-4.43(m,1H),1.92(d,J=7.0Hz,3H),1.40(d,J=6.0Hz,6H)。
实施例24:WX046、WX047
合成路线:
步骤1:目标化合物WX046-2的合成
将WX046-1(2g,8.23mmol,1eq)在二甲胺(2M,40.00mL,9.72eq)的甲醇溶液中50℃搅拌反应16小时。反应完毕后,浓缩,悬浮于水(40mL)中,并用乙酸乙酯(30mL*2)萃取。有机相浓缩得到目标化合物WX046-2。
步骤2:目标化合物WX046-4的合成
在-78℃,氮气保护下,正丁基锂(2.5M,12.75mL,3eq)滴加到WX046-2(2.2g,10.62mmol,1eq)和WX016-3(5.94g,31.93mmol,6.51mL,3.01eq)的四氢呋喃(60mL)中。并在该温度下继续搅拌1小时。然后反应升温至30℃,继续搅拌反应1.5小时。用甲醇(20mL)淬灭,浓缩得到目标化合物WX046-4。
步骤3:目标化合物WX046、WX047的合成
氮气保护下,Pd(PPh3)4(120.00mg,103.85μmol,1.42e-1eq)加入到WX005-2(0.4g,733.56μmol,1eq),碳酸钠(320.00mg,3.86mmol,5.26eq)和WX046-4(560.00mg,2.20mmol,3eq)的乙醇(10mL),水(10mL)和N,N-二甲基甲酰胺(20mL)的混合溶液中。反应在100℃下搅拌反应2小时。反应完毕后,浓缩,经硅胶层析柱分离(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1-0∶1转乙酸乙酯∶甲醇=9∶1)得粗品。然后粗品经过制备高效液相色谱分离(色谱柱:水s Xbridge 150*25mm 5μm;流动相:[水(10mM NH4HCO3)-乙腈];B%:27%-53.25%,7min)(B为乙腈)和经超临界流体色谱分离(色谱柱:DAICEL CHIRALPAKAS-H(250mm*30mm,5μm);流动相:[0.1%氨水的异丙醇];B%:50%-50%,min)(B为0.1%氨水的异丙醇)得到WX046(保留时间为1.661)和WX047(保留时间为2.976)。WX046;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.87(br s,1H)8.11(s,1H)7.50-7.70(m,2H)7.34(s,1H)7.12-7.18(m,1H)6.73-7.00(m,3H)6.07(br d,J=7.00Hz,1H)5.56(br s,2H)3.09(s,6H)1.84(br d,J=6.88Hz,3H);WX047:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.77-9.04(m,1H)7.93-8.30(m,1H)7.46-7.71(m,2H)7.27-7.40(m,1H)7.27-7.40(m,1H)7.11-7.19(m,1H)6.95(br d,J=7.50Hz,1H)6.75-6.90(m,1H)6.75-6.90(m,1H)6.07(q,J=6.92Hz,1H)5.65(br s,2H)2.96-3.17(m,1H)2.96-3.17(m,5H)1.84(d,J=7.00Hz,3H)。
实施例25:WX048、WX049
合成路线:
步骤1:化合物WX048-2的合成。
在预先干燥好得单口瓶中加入WX048-1(3g,12.35mmol,1eq)溶于DMF(15mL)和异丙醇(60mL)的混合溶液中,降温0℃后,缓慢加入钠氢(1.98g,49.40mmol,60%纯度,4eq),0℃下,搅拌反应0.5小时,升温至20℃后,继续搅拌反应4小时。将反应液用水(100mL)淬灭,乙酸乙酯(50mL*3)萃取,合并有机相,将有机相用饱和食盐水洗涤(50mL*5),无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩。粗品经硅胶层析柱分离(石油醚∶乙酸乙酯=20∶1-0∶1)纯化,得到标化合物WX048-2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.31-1.37(d,6H)5.03-5.12(m,1H)7.27(s,1H)。
步骤2:化合物WX048-3的合成。
在预先干燥的反应瓶中加入WX048-2(0.3g,1.35mmol,1eq)和四氢呋喃(6mL),加入WX016-3(1.01g,5.40mmol,1.10mL,4eq)和TMEDA(204.06mg,1.76mmol,265.01uL,1.3eq),置换氮气三次,降温至-78℃。缓慢滴加正丁基锂(2.5M,1.62mL,3eq),-78℃下反应2小时。25℃下搅拌0.5小时。用甲醇(10mL)淬灭反应,将反应液减压浓缩得到标化合物WX048-3。
步骤3:化合物WX048-4的合成。
在预先干燥的反应瓶中加入WX005-2(282.59mg,518.24μmol,1eq),WX048-3和1,4-二氧六环(10mL),水(5mL),加入醋酸钾(152.58mg,1.55mmol,3eq),置换氮气三次,加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(84.64mg,103.65μmol,0.2eq),再次置换氮气三次,70℃下搅拌16小时。加入水(10mL)终止反应,二氯甲烷萃取水相(10mL*3),合并有机相,饱和食盐水洗涤(10mL*2),收集有机相,无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩得粗产品。粗产品经薄层层析硅胶板纯化(石油醚∶乙酸乙酯=0∶1)得到WX048-4。LCMS:m/z=561.0[M+1]+。
步骤4:化合物WX048、WX049的合成。
将WX048-4(150mg,267.58μmol,1eq)送超临界色谱分离(色谱柱:DAICELCHIRALPAK AY-H(250mm*30mm,5μm);流动相:甲exane-乙醇];B%:%-%,40min)(B为乙醇),未分开,送制备高效液相色谱分离(色谱柱色谱柱:HUAPU C8 Extreme BDS 150*305u;流动相:[水(10mM NH4HCO3)-ACN];B%:40%-60%,10min)。之后经超临界色谱分离(色谱柱:DAICEL CHIRALPAK AD-H(250mm*30mm,5μm);流动相:[0.1%氨水异丙醇];B%:45%-45%,8min)(B为异丙醇)得到WX048(保留时间为5.81min)和WX049(保留时间为8.07min)。。WX048:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.45(d,J=6.24Hz,6H)1.92(d,J=6.97Hz,3H)5.24(dt,J=12.38,6.22Hz,1H)5.53(s,2H)6.15(q,J=7.01Hz,1H)6.89-6.97(m,2H)7.05(d,J=7.70Hz,1H)7.36(s,1H)7.61-7.72(m,2H)8.22(s,1H)8.94(dd,J=3.73,2.63Hz,1H);LCMS:m/z=561.0[M+1];WX049:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.45(d,J=6.24Hz,6H)1.92(d,J=6.97Hz,3H)5.19-5.29(m,1H)5.53(s,2H)6.15(q,J=7.05Hz,1H)6.89-6.98(m,2H)7.05(d,J=7.70Hz,1H)7.36(s,1H)7.62-7.71(m,2H)8.22(s,1H)8.94(dd,J=3.73,2.63Hz,1H);LCMS:m/z=561.0[M+1]+。
实施例26:WX050、WX051
合成路线:
步骤1:目标化合物WX050、WX051的合成
WX050-1(0.3g,550.17μmol,1eq)(粗品),WX050-2(124.96mg,550.17μmol,1eq)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)以及乙醇(5mL),水(5mL)的混合溶剂中,加入碳酸钾(228.12mg,1.65mmol,3.0eq),氮气保护下加入Pd(PPh3)4(127.15mg,110.03μmol,0.2eq)后加热至100℃搅拌2小时。旋干有机溶剂,加水(约10mL)淬灭反应,二氯甲烷萃取(10mL*3),合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩。粗品经制备高效液相色谱分离(水sXbridge 150*255u;流动相:[水(10mMNH4HCO3)-乙腈];B%:27%-53.25%,7min)(B为乙腈)分离得到产物;经超临界流体色谱分离(色谱柱:DAICEL CHIRALPAKAD(250mm*30mm,10μm);流动相:[0.1%氨水乙醇];B%:455%-45%)(B为乙醇)得到WX050(保留时间:2.656min)和WX051(保留时间:4.410min)。WX050:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.00-8.75(m,1H),8.14(s,1H),7.78(s,1H),7.59-7.57(m,2H),7.25-7.19(m,1H),6.98(d,J=7.6Hz,1H),6.94-6.75(m,2H),6.09(q,J=7.0Hz,1H),5.51(br s,2H),2.67(s,3H),1.85-1.79(d,J=7.0Hz,3H);WX051:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.04-8.71(m,1H),8.14(s 1H),7.78(s,1H),7.69-7.53(m,2H),7.23-7.20(m,1H),6.98(d,J=7.5Hz,1H),6.93-6.68(m,2H),6.09(q,J=7.0Hz,1H),5.52(br s,2H),2.70(s,3H),1.85-1.79(d,J=7.0Hz,3H)。
实施例27:WX052、WX053
合成路线:
步骤1:化合物WX052-3的合成
在预先干燥的反应瓶中加入WX052-1(10g,71.89mmol,8.00mL,1eq),WX052-2(8.93g,71.89mmol,1eq)和DMF(160mL),加入钠氢(5.75g,143.78mmol,60%纯度,2eq),在25℃下搅拌0.5小时。用水(50mL)淬灭反应,二氯甲烷萃取水相(100mL*3),收集水相,水相用浓盐酸调节pH至2左右,有固体析出,过滤得到WX052-3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.95(td,J=8.04,4.71Hz,1H)7.38-7.63(m,2H)。
步骤2:化合物WX052-4的合成
在预先干燥的反应瓶中加入WX052-3(2.5g,18.23mmol,1eq)和乙腈(75mL),加入NBS(3.25g,18.23mmol,1eq),25℃下搅拌1小时。用饱和碳酸钠溶液(50mL)淬灭反应。二氯甲烷萃取水相(50mL*2),收集水相,水相用浓盐酸调节pH至2左右,二氯甲烷萃取水相(50mL*1),收集有机相,减压浓缩得到WX052-4。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.15-8.23(m,1H)8.29(dd,J=10.58,2.38Hz,1H)12.29(br s,1H)。
步骤3:化合物WX052-5的合成
在预先干燥的反应瓶中加入WX052-4(3.8g,17.59mmol,1eq)和DMF(150mL),0℃下加入钠氢(1.41g,35.18mmol,60%纯度,2eq),升温25℃搅拌0.5小时,加入碘甲烷(4.99g,35.18mmol,2.19mL,2eq),室温25℃搅拌15.5小时。用水(100mL)淬灭反应,有固体生成,过滤得到WX052-5。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.06(d,J=2.81Hz,3H)7.93-7.97(m,1H)8.04(dd,J=11.62,2.32Hz,1H)。
步骤4:化合物WX052-6的合成
在预先干燥的反应瓶中加入WX052-5(0.3g,1.30mmol,1eq),WX016-3(970.58mg,5.22mmol,1.06mL,4eq)和四氢呋喃(6mL),加入TMEDA(197.01mg,1.70mmol,255.86uL,1.3eq),置换氮气三次,置于-78℃下,缓慢滴加正丁基锂(2.5M,1.56mL,3eq),-78℃下反应2小时。25℃下继续搅拌0.5小时。用甲醇(10mL)淬灭反应,减压浓缩得到WX052-6。
步骤5:化合物WX052-7的合成
在预先干燥的反应瓶中加入WX005-2(217.97mg,399.75μmol,1eq),WX052-6(360mg,519.67μmol,1.3eq)和1,4-二氧六环(10mL),水(1mL),加入醋酸钾(117.70mg,1.20mmol,3eq),置换氮气三次,加入Pd(dppf)Cl2(65.29mg,79.95μmol,0.2eq),再次置换氮气三次,70℃下搅拌16小时。水(10mL)淬灭反应,二氯甲烷萃取水相(10mL*3),合并有机相,饱和食盐水洗涤(10mL*2),收集有机相,无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩得粗产品。粗产品经薄层层析硅胶板纯化(石油醚∶乙酸乙酯=0∶1)得到WX052-7。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.80(d,J=6.97Hz,3H)4.11(d,J=2.69Hz,3H)6.10(q,J=6.93Hz,1H)6.92-7.01(m,3H)7.25(br d,J=6.36Hz,1H)7.53-7.64(m,1H)7.68-7.76(m,2H)7.80-7.90(m,2H)8.05(s,1H)8.11(ddd,J=9.81,7.00,2.87Hz,1H)8.92(dd,J=4.77,2.81Hz,1H);LCMS:m/z=569.0[M+1]+。
步骤6:化合物WX052、WX053的合成
将WX052-7(280mg,384.16μmol,1eq)送超临界色谱分离(色谱柱:DAICELCHIRALPAK AD-H(250mm*30mm,5um);流动相:[0.1%氨水的异丙醇];B%:40%-40%,8min)(B为0.1%氨水的异丙醇)。将拆分后的两个旋干,并送制备高效液相色谱分离(色谱柱:水sXbridge 150*255u;流动相:[水(10mMNH4HCO3)-乙腈];B%:35%-65%,10min)得到WX052和WX053。WX052在SFC中的保留时间为6.2min;WX053在SFC中的保留时间为11.4min。WX052:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.93(d,J=6.97Hz,3H)4.22(d,J=3.18Hz,3H)5.30(s,2H)6.20(q,J=6.97Hz,1H)6.90-6.99(m,1H)6.90-6.99(m,1H)7.09(d,J=7.58Hz,1H)7.29-7.36(m,1H)7.63-7.76(m,4H)8.25(s,1H)8.95(ddd,J=4.49,2.35,1.10Hz,1H),LCMS:m/z=569.1[M+1]+;WX053:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.93(d,J=6.97Hz,3H)4.22(d,J=3.18Hz,3H)5.35(br s,2H)6.20(q,J=6.89Hz,1H)6.90-7.00(m,2H)7.09(d,J=7.58Hz,1H)7.31(br d,J=6.36Hz,1H)7.62-7.70(m,4H)8.25(s,1H)8.94-8.98(m,1H),LCMS:m/z=569.0[M+1]+。
实施例28:WX054、WX055
合成路线:
步骤1:目标化合物WX054-2的合成
将WX054-1(10g,92.47mmol,1eq),BB-1-2(22.83g,138.71mmol,1.5eq)加入到多聚磷酸(50mL)中,125℃反应16小时。反应液用水(1000mL)稀释,用氢氧化钠调pH=10,然后过滤,滤并旋干,得到目标化合物WX054-2。
步骤2:目标化合物WX054-3的合成
将WX054-2(20g,95.86mmol,1eq)(粗品),NBS(18.77g,105.44mmol,1.1eq)加入到醋酸(150mL)中,体系15℃反应16小时。反应液旋干,用水(300mL)稀释,过滤,滤并旋干,得到目标化合物WX054-3。
步骤3:目标化合物WX054-4的合成
将WX054-3(27g,93.90mmol,1eq)(粗品),醋酸钾(13.78g,140.43mmol,1.5eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(150mL)中,体系40℃反应3小时。反应液旋干,用水(500mL)稀释,过滤,滤并旋干,得到目标化合物WX054-4。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.82(br d,J=0.8Hz,1H),7.89-8.03(m,1H),7.70(d,J=9.0Hz,1H),5.19(s,2H),2.44(s,3H),2.16(s,3H)。
步骤4:目标化合物WX054-5的合成
将WX054-4(5g,16.07mmol,1eq),浓盐酸(12M,4.59mL,3.43eq)加入到1,4-二氧六环(100mL)中,体系70℃反应2小时。反应液旋干,加入水(100mL)稀释,用氢氧化钠调pH=11,然后过滤,滤饼旋干,得到目标化合物WX054-5。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.94(s,1H),7.66-7.78(m,2H),4.76(br d,J=3.0Hz,2H),4.13(br s,1H),2.51(s,3H)。
步骤5:目标化合物WX054-6的合成
将WX054-5(3.4g,12.63mmol,1eq),WX013-6(3.54g,25.27mmol,2eq),Pd(dppf)Cl2(0.924g,1.26mmol,9.99e-2eq),碳酸钠(6.66g,62.87mmol,4.98eq)加入到乙腈(45mL)和水(15mL)中,体系氮气置换3次,然后100℃反应40分钟。反应液旋干,用水(50mL)稀释,用二氯甲烷(50mL)萃取,有机相旋干。经硅胶层析柱分离纯化(甲醇∶二氯甲烷=0%~10%)纯化,得到目标化合物WX054-6。
步骤6:目标化合物WX054-7的合成
将草酰氯(2.27g,17.87mmol,1.56mL,2.99eq)溶于二氯甲烷(17mL)中,向其中加入DMSO(2.80g,35.87mmol,2.80mL,6eq),在-78℃下搅拌1小时;将WX054-6(1.7g,5.98mmol,1eq)溶于二氯甲烷(17mL)加入反应液中,在-78℃下继续搅拌1小时;再向其中加入三乙胺(6.06g,59.85mmol,8.33mL,10.01eq),-78℃继续搅拌1小时;然后升温到15℃搅拌1小时。反应液用水(100mL)稀释,用二氯甲烷(100mL)萃取,有机相在20℃下旋干,得到目标化合物WX054-7。
步骤7:目标化合物WX054-8的合成
将WX054-7(1.7g,6.02mmol,1eq)(粗品)溶于四氢呋喃(20mL)中,氮气保护下,0℃加入甲基溴化镁(3M,4mL,1.99eq),体系15℃反应16小时。反应液用水(10mL)淬灭,旋干,经层析柱(甲醇∶二氯甲烷=0%~10%)纯化。送制备高效液相色谱分离(色谱柱:BostonPrime C18 150*30mm 5um;流动相:[水(0.05%氨水v/v)-乙腈];B%:35%-65%,8min)(B为乙腈)纯化,得到目标化合物WX054-8。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.91(s,1H),7.62-7.73(m,2H),7.46(td,J=7.8,6.3Hz,1H),7.06-7.18(m,3H),4.77-4.90(m,1H),4.06(d,J=8.5Hz,1H),2.49(d,J=1.0Hz,3H),1.27(d,J=6.5Hz,3H)
步骤8:目标化合物WX054、WX055的合成
将WX054-8(0.35g,1.11mmol,1eq)(94.48%),WX001-5(0.35g,1.22mmol,1.1eq),三苯基膦(0.436g,1.66mmol,1.5eq)加入到四氢呋喃(20mL)中,然后将偶氮二甲酸二异丙酯(291.20mg,1.44mmol,280.00uL,1.3eq)加入到上述体系中,体系40℃反应3小时。反应液旋干。经层析柱(EA∶PE=0%~80%)纯化,再送制备高效液相色谱(色谱柱:AgelaDuraShell 150mm_25mm_5um;流动相:[水(0.04%氨水+10mM NH4HCO3)-乙腈];B%:44%-74%,8.5min)(B为乙腈)纯化,然后经超临界流体色谱分离(色谱柱:DAICEL CHIRALCEL OD(250mm*30mm,10um);流动相:[0.1%氨水的乙醇];B%:40%-40%,min)(B为0.1%氨水的乙醇)拆分,得到WX054(保留时间为1.848min)和WX055(保留时间为2.231min)。WX054:1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,1H),8.03(s,1H),7.89(dd,J=9.2,1.9Hz,1H),7.68(d,J=9.0Hz,1H),7.18-7.39(m,4H),6.83-7.01(m,3H),6.07(q,J=7.0Hz,1H),4.70(quin,J=6.0Hz,1H),2.42(s,3H),1.79(d,J=6.8Hz,3H),1.33(d,J=6.0Hz,6H);WX055:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,1H),8.03(s,1H),7.89(dd,J=9.0,2.0Hz,1H),7.68(d,J=9.0Hz,1H),7.18-7.39(m,4H),6.85-7.02(m,3H),6.07(q,J=6.8Hz,1H),4.70(quin,J=6.0Hz,1H),2.42(s,3H),1.79(d,J=6.8Hz,3H),1.33(d,J=6.0Hz,6H)。
实施例29:WX056、WX057
合成路线:
步骤1:目标化合物WX056、WX057的合成
将WX056-1(50mg,231.45umol,1eq),双联频哪醇硼酸酯(64.65mg,254.59μmol,1.1eq),Pd(dppf)Cl2(16.94mg,23.14μmol,0.1eq)和醋酸钾(45.43mg,462.89μmol,2eq)加入到溶剂四氢呋喃(2mL)中。反应在110℃下搅拌1小时,得到WX056-2的反应液。向该反应液中加入WX005-2(100.96mg,185.15μmol,0.8eq),醋酸钾(22.71mg,231.44μmol,1eq),和Pd(dppf)Cl2(16.93mg,23.14umol,0.1eq),随后加入四氢呋喃(2mL)和水(0.5mL)。反应在90℃下搅拌3小时。向反应体系中加入10毫升水/10毫升乙酸乙酯稀释,分液后收集有机相,水相用乙酸乙酯萃取(5mL*3)。合并有机相,用饱和食盐水洗涤(20mL),无水硫酸钠干燥,减压浓缩得到粗品。粗产品通过薄层层析硅胶板(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)纯化,再通过制备高效液相色谱(色谱柱:Welch Xtimate C18 150*30mm*5μm;流动相:[水(10mM NH4HCO3)-乙腈];B%:25%-55%,3min)(B为乙腈)纯化。最后经超临界流体色谱分离(色谱柱:DAICELCHIRALPAK AD(250mm*50mm,10μm);流动相:[0.1%氨水的乙醇];B%:50%-50%,min)(B为0.1%氨水的乙醇)得到WX056(保留时间为1.96min)和WX057(保留时间为2.19min)。WX056:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.96(dd,J=2.94,4.06Hz,1H),8.23(s,1H),8.13(d,J=2.00Hz,1H),7.63-7.73(m,2H),7.52(d,J=2.00Hz,1H),7.30(br s,1H),7.07(d,J=7.63Hz,1H),6.89-6.99(m,2H),6.21(q,J=6.88Hz,1H),5.39(br s,2H),4.50-4.54(m,2H),4.32-4.36(m,2H),1.95(d,J=7.00Hz,3H);LCMS:m/z=555.3[M+1]+。WX057:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.96(dd,J=2.94,4.06Hz,1H),8.23(s,1H),8.13(d,J=2.00Hz,1H),7.63-7.73(m,2H),7.52(d,J=2.00Hz,1H),7.30(br s,1H),7.07(d,J=7.63Hz,1H),6.89-6.99(m,2H),6.21(q,J=6.88Hz,1H),5.39(br s,2H),4.50-4.54(m,2H),4.32-4.36(m,2H),1.95(d,J=7.00Hz,3H);LCMS:m/z=555.3[M+1]+。
实验例1:体外评价
1.体外酶活性测试
脂激酶反应通过在合适的底物及ATP的条件下进行,随后通过两个步骤用ADP-GloTM试剂盒来检测激酶的活性。第一步:终止激酶反应,其中残留的ATP彻底清除,仅保留ADP;第二步:加入激酶检测试剂将ADP转化为ATP,并伴随荧光素/荧光素酶的反应。最终通过荧光数值输出值来转化为激酶活性。测试PI3K酶活性的条件如表1。
表1 测试PI3K酶活性的条件
实验材料及设备:
1)酶:PI3K alpha Millipore#14-602-K
PI3K beta Promega#V1751
PI3K delta Millipore#14-604-K
PI3K gamma Millipore#14-558-K
2)试剂盒:ADP-GloTM脂激酶及PIP2:3PS试剂盒(Promega#V1792)
试剂盒包含:1mM PIP2:3PS,10×脂质稀释缓冲液,1M氯化镁,10mM ATP,10mMADP,ADP-Glo试剂,检测缓冲液及检测底物。
3)反应孔板:OptiPlate-384,白色透明(PerkinElmer#6007299)
试剂准备:
1)10×反应缓冲液:500mMHEPES(4-羟乙基哌嗪乙磺酸),pH 7.5,500mM NaCl,9mMMgCl2;BSA:10%储备液,自制
2)最终测试体系条件:1×反应体系:50mM HEPES,50mM NaCl,3mM MgCl2,0.01%BSA(实验当天新鲜配制),1%DMSO(v/v)+/-化合物
3)反应体系:3μL酶和底物混合物(1∶1)+2μL ATP/MgCl2混合物+5μL ADP-Glo试剂+10μL检测试剂。
具体实验操作如下:
1)化合物稀释:用Echo将50nL 100×化合物/DMSO转移至测试孔板中
-对于PI3Kα,化合物从最高浓度0.111mM三倍稀释,共10个浓度。
-对于PI3Kβ/PI3Kδ/PI3Kγ,化合物从最高浓度1.11mM三倍稀释,共10个浓度。
2)激酶反应:
(1)准备待测化合物,并加入50nL 100加化合物溶液或者DMSO至相应孔板中
(2)准备3.33×反应缓冲液
(3)准备3.33×PIP2:3PS,在使用前涡旋解冻PIP2:3PS至少1分钟
(4)准备含5.25mM MgCl2的ATP溶液
(5)准备3.33×PI3Kα/PI3Kβ/PI3Kδ/PI3Kγ溶液
(6)将脂激酶溶液和PIP2:3PS溶液按体积比1∶1混合
(7)将3.33×脂激酶缓冲液与PIP2:3PS溶液按体积比1∶1混合
(8)将3μL反应缓冲液和PIP2:3PS的混合溶液加入到孔板的第1列和第2列中
(9)将3μL酶和PIP2:3PS的混合溶液加入到孔板中除第1列和第2列外的孔中,离心10s(1000rpm)。23℃孵育20min
(10)加入2μL ATP溶液,1000rpm并摇匀
(11)盖上孔板并摇匀约30s,随后孔板在23℃孵育2h
(12)加入5μL含有10mM MgCl2的ADP-Glo试剂
(13)1000rpm离心10s,盖上孔板并摇晃约30s,在23℃孵育60min
(14)加入10μL激酶检测试剂
(15)1000rpm离心10s,随后在23℃孵育60min
(16)在Envision仪器上测量荧光数值。
2.体外细胞活性测试
<1>Jeko-1细胞活性测试
1)用DMSO将化合物粉末配置成10mM的母液,储存在-20℃的冰箱中。
2)用DMEM培养基(Invitrogen,Cat#11965126)稀释化合物到10μM(1mL培养基+1μl10mM化合物母液),并且依次4倍体积稀释,稀释8个梯度(40μl上个梯度的溶液+120μl稀释梯度的溶液)。
3)经过24小时的无血清饥饿处理,移除无血清培养基,加入对应的稀释好的化合物100μL/孔,37℃2h。
4)加入人重组蛋白IgM(sigma Cat#I2386)6μg/mL 5μL/孔,37℃ CO2 10min。
5)用排枪移除化合物,加入50μl/孔的裂解液,放到震荡器上震荡30min。
6)待细胞完全裂解后,取16μl裂解液到384孔板上,加入4μl/孔试剂盒中配置好的AC+D2。(AC:Eu3+-cryptate抗体结合到磷酸化的AKT上,而D2结合到非磷酸化的AKT上),室温孵育4h。
7)孵育后,在EnVingen上选取620and 665nm的激发光读数。
<2>TMD-8细胞活性测试
1)细胞培养
将肿瘤细胞系按表2所示的培养条件在37℃,5%CO2的培养箱中进行培养。定期传代,取处于对数生长期的细胞用于铺板。
2)细胞铺板
(1).用台盼兰进行细胞染色并计数活细胞。
(2).将细胞浓度调整至7000个细胞/孔
(3).在培养板中每孔加入90μL细胞悬液,在空白对照空中加入不含细胞的培养液。
(4).将培养板在37℃,5%CO2,及100%相对湿度的培养箱中培养过夜。
3)化合物存储板制备
(1).制备400×化合物存储板:将化合物用DMSO从最高浓度梯度稀释至最低浓度。
4)10×化合物工作液的配制及化合物处理细胞
(1).10×化合物工作液的配制:在V形底的96孔板中加入78μL细胞培养液,从400X化合物存储板中吸取2μL化合物加入96孔板的细胞培养液中。在溶媒对照和空白对照中加入2μL DMSO。加入化合物或DMSO后用排枪吹打混匀。
(2).加药:取10μL的10X化合物工作液按表1所示加入到细胞培养板中。在溶媒对照和空白对照中加入10μL DMSO-细胞培养液混合液。DMSO终浓度为0.25%。
(3).将96孔细胞板放回培养箱中培养72h。
5)CellTiter-Glo发光法细胞活性检测
以下步骤按照Promega CellTiter-Glo发光法细胞活性检测试剂盒(Promega-G7573)的说明书来进行。
(1).将CellTiter-Glo缓冲液融化并放置至室温。
(2).将CellTiter-Glo底物放置至室温。
(3).在一瓶CellTiter-Glo底物中加入CellTiter-Glo缓冲液以溶解底物,从而配制CellTiter-Glo工作液。
(4).缓慢涡旋震荡使充分溶解。
(5).取出细胞培养板放置30分钟使其平衡至室温。
(6).在每孔中加入50μL(等于每孔中细胞培养液一半体积)的CellTiter-Glo工作液。用铝箔纸包裹细胞板以避光。
(7).将培养板在轨道摇床上振摇2分钟以诱导细胞裂解。
(8).培养板在室温放置10分钟以稳定发光信号。
(9).在2104EnVision读板器上检测发光信号。
结果见表2。
表2 本发明化合物体外筛选试验结果
“-”:表示未进行测试
结论:本发明化合物能够很好的抑制PI3K激酶活性,同时对PI3Kα/β/γ有较高的亚型选择性。此外,在细胞中也能够很好地抑制PI3K下游Akt的磷酸化水平。
实验例2:体内研究
1.体内DMPK研究
实验目的:以雌性Balb/c小鼠为受试动物,单次给药后测定化合物血药浓度并评估药代动力学行为。
实验操作:选择健康成年雌性Balb/e小鼠8只,4只为静注组,4只为口服组。待测化合物与适量静注组溶媒(DMSO/PEG200/水(5∶45∶50 v/v/v))混合,涡旋并超声,制备得到1.0mg/mL澄清溶液,微孔滤膜过滤后备用;口服组溶媒为0.5%MC/0.2%Tween 80,待测化合物与溶媒混合后,涡旋并超声,制备得到1.0mg/mL均一混悬液备用。小鼠1mg/kg静脉给药或3mg/kg口服给药后,收集一定时间的全血,制备得到血浆,以LC-MS/MS方法分析药物浓度,并用Phoenix WinNonlin软件(美国Pharsight公司)计算药代参数。结果见表3。
表3 本发明化合物小鼠体内药物代谢动力学性质研究结果
“-”:表示未进行测试
注:PPB%:血浆蛋白结合率;口服方式给药药代动力学参数(Cmax:药物在体内的最高浓度,F%:口服生物利用度,OralDNAUC:剂量归一化曲线下面积);静脉注射方式给药药代动力学参数(Vd:表观分布容积;Cl:清除率;T1/2:半衰期)。
结论:本发明化合物较TGR-1202有更低的血浆蛋白结合率,即在体内游离药物更多,并且在小鼠体内表现出了高暴露量,低清除率,以及良好的口服生物利用度。
2.体内药效研究
实验目的:研究受试药化合物对人淋巴癌TMD-8细胞皮下异种移植瘤在CB-17SCID小鼠模型体内药效进行评估。
实验操作:
(1)细胞培养
人淋巴癌TMD-8细胞(上海君瑞-UFBN1682)体外单层培养,培养条件为RPMI 1640培养基中加10%胎牛血清,100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素,37℃ 5%CO2培养。一周两次用胰酶-EDTA进行常规消化处理传代。当细胞饱和度为80%-90%时,收取细胞,计数,接种
(2)肿瘤细胞接种
将0.2mL(1×107个)TMD-8细胞(加基质胶,体积比为1∶1)皮下接种于每只小鼠的右后背肿瘤平均体积达到99mm3时分组给药。
(3)受试物的配制
溶媒组:0.5%MC/0.2%Tween 80/99.3%水。
待测化合物组:称量定量的受试化合物于棕色配药瓶内,加入相应体积的溶媒后涡旋,得到均匀混悬液或澄清溶液。
实验指标是考察肿瘤生长是否被抑制、延缓或治愈。每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为:V=0.5a×b2,a和b分别表示肿瘤的长径和短径。
化合物的抑瘤疗效用TGI(%)评价。TGI(%),反映肿瘤生长抑制率。TGI(%)的计算:TGI(%)=【1-(某处理组给药结束时平均瘤体积-该处理组开始给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积-溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)】×100%。
表4 本发明化合物对TMD-8小鼠异植瘤模型的抑瘤效果
结论:本发明化合物与第二代BTK抑制剂ACP-196联用,在TMD-8小鼠皮下异植瘤模型中展示了显著的肿瘤消退的作用。
Claims (14)
1.式(Ⅰ)所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐,
其中,
R1分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和C1-3烷基;
R2和R3分别独立地选自H和C1-3烷基;
R4分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷氨基、C3-6环烷基和C3-6环烷基-O-,所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷氨基、C3-6环烷基和C3-6环烷基-O-任选被1、2或3个Rb取代;
环B选自苯基、噻唑基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基和吡啶基;
m选自1、2和3;
n选自1、2和3;
Rb选自F、Cl、Br、I、CN、CH3、CH2CH3和OCH3;
带“*”碳原子为手性碳原子,以(R)或(S)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在。
2.根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐,其中,R1分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和CH3。
3.根据权利要求1所述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐,其中,R2和R3分别独立地选自H和CH3。
4.根据权利要求1所述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐,其中,R4分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、C1-3烷基、C1-3烷氨基、C1-3烷硫基、C3-4环烷基-O-和C1-3烷氧基,其中所述C1-3烷基、C1-3烷氨基、C1-3烷硫基、C3-4环烷基-O-和C1-3烷氧基任选被1、2或3个Rb取代。
13.根据权利要求1~12任意一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐在制备治疗与PI3K相关疾病的药物中的应用。
14.根据权利要求13所述的应用,其特征在于,所述药物是用于慢性淋巴细胞白血病、小淋巴细胞淋巴瘤、边缘带淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤治疗的药物。
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