CN114008038B - 作为rip-1激酶抑制剂的双并环类化合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

一种式(1)所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其在制备治疗与RIP‑1(受体相互作用蛋白)激酶相关疾病药物中的应用。

Description

作为RIP-1激酶抑制剂的双并环类化合物及其应用
本申请主张如下优先权：
CN201910471672.3，申请日2019-05-31；
CN201911089490.6，申请日2019-11-08；
CN202010432710.7，申请日2020-05-20。
技术领域
本发明涉及式(Ⅰ)所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，并涉及其在制备治疗与RIP-1(受体相互作用蛋白)激酶相关疾病药物中的应用。
背景技术
RIP1是调控细胞坏死和凋亡的重要上游激酶，同时也参与多种炎症信号通路，能够接受TNF和TLR家族配体刺激引发炎症反应(Weinlich,R.Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.2017,18,127；Pasparakis M.et al.Nature 2015,517,311；Berger,S.B.Cell DeathDiscovery,2016,2,e16056)。通过TNF受体1，RIP1驱动多条炎症信号通路[Fas配体、TNF相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosisinducingligand,TRAIL)、TLR3及TLR4](LukensJ.R.,et al.Nature,2013,498,224)。抑制RIP1的活性可以作为多种炎症疾病的治疗手段。
发明内容
本发明提供了式(Ⅰ)化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，
Figure GDA0003377327420000011
其中，
T1选自N和CR1t；
T2选自N和CR2t；
T3选自N和CR3t；
T4选自N和CR4t；
E1选自C(R1e)2、O、C(＝O)、S和NR2e；
环A选自1,2,4-三唑基、1,2,3-三唑基、咪唑基、异噁唑基、1,3,4-噁二唑基、
Figure GDA0003377327420000021
四唑基、吡啶基和
Figure GDA0003377327420000022
所述1,2,4-三唑基、1,2,3-三唑基、咪唑基、异噁唑基、1,3,4-噁二唑基、
Figure GDA0003377327420000023
四唑基、吡啶基和
Figure GDA0003377327420000024
任选被1、2或3个卤素或C1-3烷基取代；
环B选自苯基和
Figure GDA0003377327420000025
L选自单键、O、C(＝O)、S、NH和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Ra取代；
R1选自H和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Rb取代；
R1t、R2t、R3t和R4t分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2、C1-3烷基、COOH和-C(＝O)NH2，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Rc取代；
R1e分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Rd取代；
R2e选自H和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Re取代；
R2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、C1-3烷基和C1-3烷氧基，其中所述C1-3烷基和C1-3烷氧基任选被1、2或3个Rf取代；
n为1、2、3、4或5；
Ra、Rb、Rc、Rd、Re和Rf分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和D。
本发明提供了式(Ⅰ)化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，
Figure GDA0003377327420000031
其中，
T1选自N和CR1t；
T2选自N和CR2t；
T3选自N和CR3t；
T4选自N和CR4t；
E1选自C(R1e)2、O、C(＝O)、S和NR2e；
环A选自1,2,4-三唑基、1,2,3-三唑基、咪唑基、异噁唑基、1,3,4-噁二唑基和
Figure GDA0003377327420000032
所述1,2,4-三唑基、1,2,3-三唑基、咪唑基、异噁唑基、1,3,4-噁二唑基和
Figure GDA0003377327420000033
任选被1、2或3个卤素或C1-3烷基取代；
环B选自苯基；
L选自单键、O、C(＝O)、S、NH和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Ra取代；
R1选自H和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Rb取代；
R1t、R2t、R3t和R4t分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Rc取代；
R1e分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Rd取代；
R2e选自H和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Re取代；
R2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Rf取代；
n为1、2、3、4或5；
Ra、Rb、Rc、Rd、Re和Rf分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和D。
本发明提供了式(Ⅰ)化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，
Figure GDA0003377327420000041
其中，
T1为N或CR1t；
T2为N或CR2t；
T3为N或CR3t；
T4为N或CR4t；
E1为C(R1e)2、O、C(＝O)、S或NR2e；
环A为任选被C1-3烷基取代的5元杂芳基；
环B为苯基或6元杂芳基；
L为O、C(＝O)、S、NH或C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Ra取代；
R1选自H和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Rb取代；
R1t、R2t、R3t和R4t分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Rc取代；
R1e分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Rd取代；
R2e选自H和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Re取代；
R2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Rf取代；
n为1、2、3、4或5；
Ra、Rb、Rc、Rd、Re和Rf分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、CN和NH2。
本发明的一些方案中，上述R1选自H和CH3，其中所述CH3任选被1、2或3个Rb取代，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R1选自H、CH3和CD3，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R1选自H和CH3，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R1t、R2t、R3t和R4t分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2、CH3、COOH和-C(＝O)NH2，其中所述CH3任选被1、2或3个Rc取代，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R1t、R2t、R3t和R4t分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和CH3，其中所述CH3任选被1、2或3个Rc取代，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R1t、R2t、R3t和R4t分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和CH3，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R1e分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和CH3，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R2e选自H和CH3，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述E1为CH2、O、C(＝O)、S或NH，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3和OCH3，其中所述CH3和OCH3任选被1、2或3个Rf取代，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CH3、OCH3、CF3和OCF3，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2和CN，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述环环A选自
Figure GDA0003377327420000051
Figure GDA0003377327420000052
Figure GDA0003377327420000053
所述
Figure GDA0003377327420000054
Figure GDA0003377327420000055
任选被1、2或3个卤素或C1-3烷基取代，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述环A选自
Figure GDA0003377327420000061
Figure GDA0003377327420000062
本发明的一些方案中，上述环A为吡咯基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基或1,3,4噻二唑基，吡咯基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基或1,3,4噻二唑基任选被C1-3烷基取代，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述L选自单键、-CH2-和-O-，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述L选自单键和-CH2-，其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述环A为
Figure GDA0003377327420000063
其他变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述环B为苯基或吡啶基，其他变量如本发明所定义。
本发明还有一些方案是由上述各变量任意组合而来。
本发明的一些方案中，上述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其选自
Figure GDA0003377327420000064
其中，
n、T1、T2、T3、R1、R2和R如本发明所定义；
带“*”碳原子为手性碳原子，以(R)或(S)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在。
本发明的一些方案中，上述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其选自
Figure GDA0003377327420000071
其中，
n、T1、T2、T3、R1、R2和R如本发明所定义。
本发明还提供了下式化合物、其异构体或其药学上可接受的盐：
Figure GDA0003377327420000072
Figure GDA0003377327420000081
Figure GDA0003377327420000091
本发明的一些方案中，上述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其选自
Figure GDA0003377327420000092
Figure GDA0003377327420000101
Figure GDA0003377327420000111
本发明还提供了上述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐在制备治疗RIP-1激酶相关疾病的药物中的应用。
技术效果
作为新型的RIP-1激酶抑制剂，本发明化合物对TNFα/QVD-OPh所诱导U937细胞的程序性细胞坏死(Necroptosis)具有良好的抑制效果；在TNFα诱导的系统炎症应答综合症(TNF-driven systemic inflammatory response syndrome)模型中取得很好地抑制小鼠体温降低的效果。
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
除非另有说明，术语“异构体”意在包括几何异构体、顺反异构体、立体异构体、对映异构体、旋光异构体、非对映异构体和互变异构体。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。
除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
除非另有说明，“(D)”或者“(+)”表示右旋，“(L)”或者“(-)”表示左旋，“(DL)”或者“(±)”表示外消旋。
除非另有说明，用楔形实线键
Figure GDA0003377327420000131
和楔形虚线键
Figure GDA0003377327420000132
表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键
Figure GDA0003377327420000133
和直形虚线键
Figure GDA0003377327420000134
表示立体中心的相对构型，用波浪线
Figure GDA0003377327420000135
表示楔形实线键
Figure GDA0003377327420000136
或楔形虚线键
Figure GDA0003377327420000137
或用波浪线
Figure GDA0003377327420000138
表示直形实线键
Figure GDA0003377327420000139
和直形虚线键
Figure GDA00033773274200001310
除非另有说明，当化合物中存在双键结构，如碳碳双键、碳氮双键和氮氮双键，且双键上的各个原子均连接有两个不同的取代基时(包含氮原子的双键中，氮原子上的一对孤对电子视为其连接的一个取代基)，如果该化合物中双键上的原子与其取代基之间用波浪线
Figure GDA00033773274200001311
连接，则表示该化合物的(Z)型异构体、(E)型异构体或两种异构体的混合物。例如下式(A)表示该化合物以式(A-1)或式(A-2)的单一异构体形式存在或以式(A-1)和式(A-2)两种异构体的混合物形式存在；下式(B)表示该化合物以式(B-1)或式(B-2)的单一异构体形式存在或以式(B-1)和式(B-2)两种异构体的混合物形式存在。下式(C)表示该化合物以式(C-1)或式(C-2)的单一异构体形式存在或以式(C-1)和式(C-2)两种异构体的混合物形式存在。
Figure GDA0003377327420000141
本发明的化合物可以存在特定的。除非另有说明，术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指在室温下，不同官能团异构体处于动态平衡，并能很快的相互转化。若互变异构体是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键异构体(valencetautomer)包括一些成键电子的重组来进行的相互转化。其中酮-烯醇互变异构化的具体实例是戊烷-2,4-二酮与4-羟基戊-3-烯-2-酮两个互变异构体之间的互变。
除非另有说明，术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或者大于等于99.9％。
除非另有说明，术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如，其中一种异构体或对映体的含量为90％，另一种异构体或对映体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
术语“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR)0-，表示该连接基团为单键。
当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。
当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。
当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。
当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，
Figure GDA0003377327420000161
中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成
Figure GDA0003377327420000162
也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成
Figure GDA0003377327420000163
所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。
除非另有规定，术语“C1-3烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C1-3烷氧基包括C1-2、C2-3、C3和C2烷氧基等。C1-3烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)等。
除非另有规定，术语“C1-3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C1-3烷基包括C1-2和C2-3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C1-3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)等。
除非另有规定，本发明术语“5-6元杂芳环”和“5-6元杂芳基”可以互换使用，术语“5-6元杂芳基”表示由5至6个环原子组成的具有共轭π电子体系的单环基团，其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子，其余为碳原子。其中氮原子任选地被季铵化，氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。5-6元杂芳基可通过杂原子或碳原子连接到分子的其余部分。所述5-6元杂芳基包括5元和6元杂芳基。所述5-6元杂芳基的实例包括但不限于吡咯基(包括N-吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基等)、吡唑基(包括2-吡唑基和3-吡唑基等)、咪唑基(包括N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基和5-咪唑基等)、噁唑基(包括2-噁唑基、4-噁唑基和5-噁唑基等)、三唑基(1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基、1H-1,2,4-三唑基和4H-1,2,4-三唑基等)、四唑基、异噁唑基(3-异噁唑基、4-异噁唑基和5-异噁唑基等)、噻唑基(包括2-噻唑基、4-噻唑基和5-噻唑基等)、呋喃基(包括2-呋喃基和3-呋喃基等)、噻吩基(包括2-噻吩基和3-噻吩基等)、吡啶基(包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基等)、吡嗪基或嘧啶基(包括2-嘧啶基和4-嘧啶基等)。
除非另有规定，Cn-n+m或Cn-Cn+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况，例如C1-12包括C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、和C12，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C1-12包括C1-3、C1-6、C1-9、C3-6、C3-9、C3-12、C6-9、C6-12、和C9-12等；同理，n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个，例如3-12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、和12元环，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如3-12元环包括3-6元环、3-9元环、5-6元环、5-7元环、6-7元环、6-8元环、和6-10元环等。
术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等。
术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构，如果本发明涉及化合物的绝对构型，则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如单晶X射线衍射法(SXRD)，把培养出的单晶用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数据，光源为CuKα辐射，扫描方式：
Figure GDA0003377327420000181
扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(Shelxs97)解析晶体结构，便可以确证绝对构型。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。
本发明采用下述缩略词：aq代表水；NaNO2代表压硝酸钠；H2SO4代表硫酸；CuCl2代表氯化铜；LiOH·H2O代表一水合氢氧化锂；NaBH3CN代表氰基硼氢化钠；HCl/EtOAc代表盐酸乙酸乙酯溶液；HCl代表盐酸；CO2代表二氧化碳；ACN代表乙腈；FA代表甲酸；H2O代表水；NH3H2O代表氨水；Na2SO4代表硫酸钠；MgSO4代表硫酸镁；NCS代表N-氯代丁二酰亚胺；NH4HCO3代表碳酸氢铵；Pd/C代表钯碳；psi代表压力单位；MeCN代表乙腈；TsOH·H2O代表对甲苯磺酸一水合物；Pd(dppf)Cl2代表[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯；Neu代表中性；HPLC代表高效液相色谱；HATU代表O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐；K2CO3代表碳酸钾；EDC代表N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐；m-CPBA代表3-氯过氧苯甲酸；eq代表当量、等量；T3P代表丙烷膦酸酐；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二异丙酯；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；CBz代表苄氧羰基，是一种胺保护基团；BOC代表叔丁氧羰基是一种胺保护基团；HOAc代表乙酸；NaCNBH3代表氰基硼氢化钠；r.t.代表室温；O/N代表过夜；THF代表四氢呋喃；Boc2O代表二-叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；SOCl2代表氯化亚砜；CS2代表二硫化碳；TsOH代表对甲苯磺酸；NFSI代表N-氟-N-(苯磺酰基)苯磺酰胺；n-Bu4NF代表氟化四丁基铵；iPrOH代表2-丙醇；mp代表熔点；LDA代表二异丙基胺基锂；IPAm代表异丙胺；DIPEA代表N,N-二异丙基乙胺；Xantphos代表4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽；t-Bu Xphos代表2-二-叔丁膦基-2',4',6'-三异丙基联苯；DPPP代表1,3-双(二苯膦)丙烷；Et3SiH代表三乙基硅烷；DMAP代表4-二甲氨基吡啶；Py代表吡啶；DPBS代表Dulbecco's磷酸盐缓冲液；TNF-α代表肿瘤坏死因子；IC50代表半抑制浓度；mg代表毫克，kg代表千克；HEPES代表羟乙基哌秦乙硫磺酸缓冲液。
化合物依据本领域常规命名原则或者使用
Figure GDA0003377327420000193
软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
参考例1：片段BB-1
Figure GDA0003377327420000191
合成路线：
Figure GDA0003377327420000192
步骤1：化合物BB-1-3的合成
在预先干燥过100mL烧瓶中加入BB-1-1(2.60g,17.31mmol,1.00eq)和溶剂EtOH(11.25mL)异丙醚(37.50mL)，在搅拌下缓慢加入BB-1-2(2.59g,17.83mmol,1.03eq)。反应在20℃下搅拌12小时，过滤，所得滤饼用异丙醚洗涤(30mL*3)，得到化合物BB-1-3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.95(s,1H),9.90(s,1H),7.39-7.08(m,6H),4.21-4.19(m,2H),3.82(s,2H),1.27-1.23(m,3H)；LCMS m/z＝250.1[M+H]+。
步骤2：化合物BB-1-4的合成
在预先干燥过的250mL烧瓶中加入化合物BB-1-3(7.00g,28.08mmol,1.00eq)和二甲苯(100.00mL)装上Dean-Stark分水器。反应体系在180℃下反应10小时。向反应体系中加入100mL异丙醚并在冰水浴下搅拌30分钟，过滤，所得滤饼用50mL正己烷洗涤，得到化合物BB-1-4。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝14.44(br s,1H),7.42-7.14(m,4H),4.29(q,J＝6.5Hz,2H),4.13(br s,2H),1.28(br t,J＝7.0Hz,3H)；LCMS m/z＝232.2[M+H]+。
步骤3：化合物BB-1的合成
在拇指瓶中加入化合物BB-1-4(4.10g,17.73mmol,1.00eq)、四氢呋喃(1.00mL)和水(200.00μL)，然后加入一水合氢氧化锂(1.74g,41.49mmol,2.34eq)，该溶液20℃下搅拌12小时。减压旋出溶剂，在搅拌下滴加25mL 1N盐酸水溶液至体系的pH为2，抽滤后得到化合物BB-1。LCMS m/z＝202.1[M-H]-。
参考例2：片段BB-2
Figure GDA0003377327420000201
合成路线：
Figure GDA0003377327420000202
步骤1：化合物BB-2-2的合成
在23℃下向BB-2-1(2.5g,15.51mmol,2.94mL,1eq)的二氯甲烷溶液中(40mL)加入甲醇(4.97g,155.13mmol,6.28mL,10eq)，然后加入TMSCHN2(2M,9.31mL,1.2eq)，继续搅拌2小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)监测原料反应完全。向反应液加入0.1mL冰醋酸，减压浓缩得到BB-2-2。
步骤2：化合物BB-2-3的合成
向BB-2-2(3g,17.12mmol,1eq)的甲醇中(30mL)加入水合肼(3.21g,51.37mmol,3.12mL,80％纯度,3eq)，然后于70℃油浴中搅拌2小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。将反应液减压浓缩除去溶剂，再向其中加入50mL乙酸乙酯，用30mL饱和食盐水洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，得到BB-2-3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.25(br s,1H),7.66-7.74(m,2H),7.45-7.65(m,2H),4.24(s,2H),3.43(s,2H)；LCMS m/z＝176.1[M+H]+。
步骤3：化合物BB-2-4的合成
在预先干燥过的三口瓶中加入BB-1-2(2.07g,14.27mmol,1eq)和乙醇(10mL)，异丙醚(20mL)，随后加入BB-2-3(2.5g,14.27mmol,1eq)，反应在25℃下反应5小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。将反应液过滤，滤饼经50mL石油醚洗涤，得到BB-2-4。LCMS m/z＝275.2[M+H]+。
步骤4：化合物BB-2-5的合成
将BB-2-4(0.5g,1.82mmol,1eq)，分子筛(
Figure GDA0003377327420000212
0.05g)和二甲苯(15mL)加入到微波管中，封口后于微波反应器在150℃下搅拌4小时。LCMS监测有目标信号。向反应液加入30mL乙腈，过滤，滤液经减压浓缩得到BB-2-5。LCMS m/z＝257.1[M+H]+。
步骤5：化合物BB-2的合成
在21℃条件下，向BB-2-5(1g,3.90mmol,1eq)的四氢呋喃溶液中(50mL)加入一水合氢氧化锂(654.96mg,15.61mmol,4eq)的水溶液(15mL)，然后继续搅拌12小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。向反应液加入15mL水，用乙酸乙酯萃取(30mL)，所得水相经2N盐酸水溶液调节pH约3，经冻干得到BB-2。LCMS m/z＝227.0[M-H]-。
参考例3：片段BB-3
Figure GDA0003377327420000211
合成路线：
Figure GDA0003377327420000221
步骤1：化合物BB-3-3的合成
将BB-3-2(20.00g,97.46mmol,1.00eq)溶于DMF(50mL)，滴加到NaH(8.19g,204.67mmol,60％纯度,2.10eq)的DMF的悬浊液中(150mL)。随后向其中滴加化合物BB-3-1(13.75g,97.46mmol,10.26mL,1.00eq)。该反应液在20℃下搅拌16小时。然后向反应液中加入乙酸乙酯(200mL)和水(200mL)，用盐酸调水相pH约1，用乙酸乙酯萃取(200mL)，有机相经无水硫酸镁干燥、过滤、减压浓缩，得到化合物BB-3-3。LCMS m/z＝227.1
[M-100+H]+。
步骤2：化合物BB-3-4的合成
在氢气环境下(15psi)，将化合物BB-3-3(20.00g,61.29mmol,1.00eq)和湿Pd/C(5.00g,5％纯度)的甲醇溶液(200.00mL)于20℃搅拌5小时。待反应完成后，将反应液过滤，滤液经减压浓缩得到化合物BB-3-4。LCMS m/z＝297.1[M+H]+。
步骤3：化合物BB-3-5的合成
向化合物BB-3-4(10.00g,33.75mmol,1.00eq)和N,N-二异丙基乙胺(4.36g,33.75mmol,5.89mL,1.00eq)的DMSO(100.00mL)溶液中，加入HATU(12.83g,33.75mmol,1.00eq)。反应在20℃下搅拌2小时。待反应完成后，向反应液中加入水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，分液，有机相减压浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1～1：1)分离纯化，得到化合物BB-3-5。LCMS m/z＝223.1[M-56+H]+。
步骤4：化合物BB-3-6的合成
在干燥的250mL三口瓶中加入化合物BB-3-5(6.00g,21.56mmol,1.00eq)，DMF(60.00mL)和碳酸铯(10.54g,32.34mmol,1.50eq)，然后滴加碘甲烷(3.06g,21.56mmol,1.34mL,1.00eq)，控制内温低于20℃，该反应在16℃搅拌16小时。待反应完成后，将水(100mL)，乙酸乙酯(100mL)加入到体系中，分液，有机相用饱和食盐水(100mL*2)洗涤，载经硫酸镁干燥、过滤、减压浓缩，得到化合物BB-3-6。LCMS m/z＝237.1[M-56+H]+。
步骤5：化合物BB-3-7的合成
在20℃下向五硫化二磷(760.35mg,3.42mmol,363.80μL,5eq)的THF中(10mL)加入碳酸钠(362.57mg,3.42mmol,5eq)，然后继续搅拌0.5小时，然后加入BB-3-6(0.2g,684.16μmol,1eq)，反应置于70℃油浴中搅拌9.5小时。LCMS监测有目标信号。向反应液中加入20mL乙酸乙酯，过滤，所得滤液经减压浓缩，得到化合物BB-3-7。LCMS m/z＝253.1[M-56+H]+。
步骤6：化合物BB-3的合成
向BB-3-7(630.84mg,2.05mmol,1eq)加入盐酸的乙酸乙酯溶液(4M,20.00mL,39.11eq)，于23℃下搅拌1小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。将反应液减压浓缩得到粗品，然后加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取(15mL*3)，合并有机相，经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，得到化合物BB-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.21-7.32(m,3H),7.15-7.19(m,1H),4.40(dd,J＝9.92,6.62Hz,1H),4.10(dd,J＝11.36,9.81Hz,1H),3.77-3.94(m,4H)；LCMS m/z＝209.1[M+H]+。
参考例4：片段BB-4
Figure GDA0003377327420000231
合成路线：
Figure GDA0003377327420000241
步骤1：化合物BB-4-2的合成
在0℃下向BB-3-2(13.13g,63.98mmol,1eq)的DMF(100mL)中加入NaH(5.12g,127.96mmol,60％纯度,2eq)，继续搅拌1小时后，向其中加入BB-4-1(10g,70.38mmol,1.1eq)，于28℃下搅拌9小时。LCMS监测有目标信号。将反应液加入到1000mL水中，用乙酸乙酯萃取(300mL*4)，所得水相经2N盐酸调节pH约5，然后用乙酸乙酯萃取(300mL*5)，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，得到化合物BB-4-2。LCMS m/z＝326.0[M-H]-。
步骤2：化合物BB-4-3的合成
在23℃条件下，向BB-4-2(20.00g,61.11mmol,1eq)的甲醇溶液中(200mL)加入湿Pd/C(10g,30.55mmol,5％纯度)，在氢气环境下(15psi)搅拌10小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。将反应液过滤，所得滤液经减压浓缩，得到化合物BB-4-3。LCMS m/z＝298.1[M+H]+。
步骤3：化合物BB-4-4的合成
在23℃下向BB-4-3(16.00g,53.82mmol,1eq)的乙酸乙酯溶液中(400mL)加入N,N-二异丙基乙胺(20.87g,161.45mmol,28.12mL,3eq)，2,4,6-三丁基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(68.49g,107.63mmol,64.01mL,50％纯度的乙酸乙酯溶液,2eq)，然后继续搅拌2小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。用饱和食盐水洗涤反应液(200mL*2)，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1～1：1)分离，得到化合物BB-4-4。LCMS m/z＝224.1[M-56+H]+。
步骤4：化合物BB-4-5的合成
在20℃下向BB-4-4(1g,3.58mmol,1eq)的DMF中(30mL)加入碳酸铯(1.40g,4.30mmol,1.2eq)，碘甲烷(609.86mg,4.30mmol,267.48μL,1.2eq)，然后继续搅拌1小时。LCMS监测原料反应完全，有目标信号。将反应液加入到100mL水中，用乙酸乙酯萃取(30mL*5)，合并有机相，用50mL饱和食盐水洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，得到化合物BB-4-5。LCMS m/z＝238.1[M-56+H]+。
步骤5：化合物BB-4-6的合成
在20℃下向五硫化二磷(3.79g,17.05mmol,10eq)的四氢呋喃溶液中(30mL)加入碳酸钠(1.81g,17.05mmol,10eq)，然后继续搅拌0.5小时，然后加入BB-4-5(0.5g,1.70mmol,1eq)，反应置于70℃油浴中搅拌9.5小时。LCMS监测原料基本反应完，有目标信号。反应液经过滤得到滤液，向滤液中加入50mL乙酸乙酯，用30mL饱和食盐水洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1～1：1)分离得到化合物BB-4-6。LCMS m/z＝310.3[M+H]+。
步骤6：化合物BB-4的合成。
向BB-4-6(0.6g,1.94mmol,1eq)中加入盐酸的乙酸乙酯溶液(4M,20mL,41.25eq)，于23℃下搅拌1小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。反应液经减压浓缩得到粗品，向其中加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取(20mL*3)，合并有机相，经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，得到化合物BB-4。LCMS m/z＝210.1[M+H]+。
参考例5：片段BB-5
Figure GDA0003377327420000251
合成路线：
Figure GDA0003377327420000261
步骤1：化合物BB-5-1的合成
在25℃下向BB-4-4(0.1g,358.05μmol,1eq)的四氢呋喃中(5mL)加入氘代碘甲烷(101.64mg,716.10μmol,43.62μL,2eq)，碳酸铯(349.98mg,1.07mmol,3eq)，然后继续搅拌2小时。向反应液加入乙酸乙酯(20mL)，然后用饱和食盐水(10mL)洗涤、过滤、减压浓缩得到粗品。粗品经甲基叔丁基醚(5mL)打浆纯化得到化合物BB-5-1。LCMS m/z＝297.2[M+H]+。
步骤2：化合物BB-5-2的合成
在30℃下向五硫化二磷(2.25g,10.12mmol,1.08mL,10eq)的四氢呋喃中(10mL)加入碳酸钠(1.07g,10.12mmol,10eq)，搅拌0.5小时后，然后向其中加BB-5-1(0.3g,1.01mmol,1eq)，然后于70℃油浴中搅拌10小时。向反应液加入乙酸乙酯(20mL)，硅藻土过滤，滤液经减压浓缩得到粗品。粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1～1：1)分离纯化得到化合物BB-5-2。LCMS m/z＝312.9[M+H]+。
步骤3：化合物BB-5的合成
在28℃下向BB-5-2(0.12g,384.12μmol,1eq)加入HCl/EtOAc(4M,5.69mL,59.27eq)，搅拌1小时。将反应液减压浓缩得到化合物BB-5。LCMS m/z＝213.1[M+H]+。
参考例6：片段BB-6
Figure GDA0003377327420000262
合成路线：
Figure GDA0003377327420000263
步骤1：化合物BB-6-2的合成
在25℃条件下，向BB-6-1(2g,14.27mmol,1eq)和Cs2CO3(5.11g,15.70mmol,1.1eq)的DMF溶液中(20mL)加入溴化苄(2.44g,14.27mmol,1.70mL,1eq)，然后继续搅拌3小时。LCMS监测原料反应完全，有目标MS。将反应液加入到水(100mL)中，用乙酸乙酯萃取(30mL*5)，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，粗品经快速硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1～1：1)分离，得到BB-6-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.58(d,J＝1.00Hz,1H),7.55(s,1H),7.33-7.40(m,3H),7.14-7.20(m,2H),5.13(s,2H),4.34(q,J＝7.20Hz,2H),1.36(t,J＝7.20Hz,3H)；LCMS m/z＝231.1[M+1]+。
步骤2：化合物BB-6的合成
在28℃条件下，向BB-6-2(1.50g,6.51mmol,1eq)的四氢呋喃溶液中(26mL)加入一水合氢氧化锂(2.19g,52.11mmol,8eq)的水溶液(26mL)，然后继续搅拌12小时。LCMS监测原料反应完全，有目标MS。将反应液减压浓缩，除去溶剂后，加入水(20mL)，然后用2N盐酸调节pH约2，然后过滤析出的固体，得到BB-6。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.87(d,J＝2.20Hz,2H),7.27-7.43(m,5H),5.24(s,2H)；LCMS m/z＝201.1[M-1]-。
参考例7：片段BB-7
Figure GDA0003377327420000271
合成路线：
Figure GDA0003377327420000272
步骤1：化合物BB-7-2的合成
在0℃条件下，向BB-7-1(5g,29.65mmol,1eq)的甲苯溶液中(70mL)加入乙二酸二乙酯(4.77g,32.62mmol,4.45mL,1.1eq)，乙醇钠(2.62g,38.55mmol,1.3eq)，在20℃反应12小时。经LCMS分析，原料反应完全，有目标信号峰出现。将反应液减压浓缩，用乙酸乙酯(200mL)稀释，用饱和食盐水(200mL)洗，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。无需纯化，直接投入下一步。得到化合物BB-7-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝6.87-7.19(m,4H),5.78(br s,1H),4.04(br s,2H),2.92-3.44(m,2H),1.18(br s,3H)；LCMS m/z＝269.1[M+1]+。
步骤2：化合物BB-7-3的合成
向BB-7-2(7g,26.05mmol,1eq)的乙醇溶液中(200mL)加入盐酸羟胺(1.81g,26.05mmol,1eq)，在80℃反应12小时。经LCMS分析，原料反应完全，有目标信号峰出现。将反应液减压浓缩得到BB-7-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.33(m,2H)；7.20(m,2H),6.35(s,1H),4.41-4.47(m,2H),4.13(q,J＝7.20Hz,2H),1.30-1.33(t,3H)；LCMS m/z＝266.1[M+1]+。
步骤3：化合物BB-7-4的合成
向BB-7-3(4g,15.06mmol,1eq)的乙醇溶液中(100mL)加入Pd/C(4g,5％纯度)，在H2环境下(30psi)于30℃反应12小时。经LCMS分析，原料反应完全，有目标信号峰出现。将反应液用硅藻土过滤，减压浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱层析法分离(二氯甲烷：甲醇＝10：1)，得到化合物BB-7-4。LCMS m/z＝232.1[M+1]+。
步骤4：化合物BB-7的合成
向BB-7-4(0.5g,2.16mmol,1eq)的四氢呋喃(15mL)和水溶液中(5mL)加入一水合氢氧化锂(453.17mg,10.80mmol,5eq)，在30℃反应2小时。经TLC(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)监测原料反应完全，有新点生成。将反应液减压浓缩除去有机溶剂，加入2M盐酸溶液调节pH值至2左右，析出白色固体，过滤，收集滤饼，得BB-7。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.24-7.41(m,5H),6.57(s,1H),4.22(s,2H)。
参考例8：片段BB-8
Figure GDA0003377327420000281
合成路线：
Figure GDA0003377327420000282
步骤1：化合物BB-8-2的合成
向BB-8-1(2g,15.74mmol,1eq)的DMF(32mL)中加入碳酸铯(6.67g,20.46mmol,1.3eq)，溴化苄(3.23g,18.88mmol,2.24mL,1.2eq)，该反应在20℃搅拌2小时；经LCMS分析，原料反应完全，有目标信号峰出现；向反应液中加入水(30mL)和乙酸乙酯(30mL)，分液，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品。粗品经快速硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1-3：1)分离得到BB-8-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.11(s,1H),7.34-7.43(m,3H),7.27-7.33(m,2H),5.43(s,2H),4.00(s,3H)；LCMS m/z＝218.1[M+1]+。
步骤2：化合物BB-8的合成
将BB-8-2(0.3g,1.38mmol,1eq)溶于四氢呋喃(12mL)和水中(4mL)，加入一水合氢氧化锂(173.85mg,4.14mmol,3eq)，该反应在25℃下搅拌12小时；经LCMS分析，原料反应完全，有目标信号峰出现；向反应液中加入乙酸乙酯(10mL)，水相用1M盐酸调节pH＝3-4，有固体析出，过滤得到BB-8。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝13.25(br s,1H),8.78(s,1H),7.27-7.40(m,5H),5.47(s,2H)；LCMS m/z＝204.1[M+1]+。
参考例9：片段BB-9
Figure GDA0003377327420000291
合成路线：
Figure GDA0003377327420000292
步骤1：化合物BB-9-2的合成
在0℃下，将NaNO2(662.86mg,9.60mmol,1.5eq)加入至BB-9-1(1g,6.40mmol,1eq)的H2SO4(1M,12.80mL,2eq)、水溶液中(10mL)，在0℃搅拌0.5小时，将CuCl2(1.72g,12.80mmol,2eq)溶于浓盐酸(15mL)，加入上述混合液中，0℃继续搅拌1.5小时；经LCMS分析，原料反应完全，有目标信号峰出现；向反应液中加入乙酸乙酯(10mL)，水相用乙酸乙酯(15mL*2)萃取，有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，粗品经快速硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1～1：2)，得到BB-9-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)＝4.46(q,J＝21.60Hz,2H),1.38(t,J＝14.40Hz,3H)；LCMS m/z＝176.0[M+1]+。
步骤2：化合物BB-9-3的合成
向BB-9-2(760.78mg,4.33mmol,1eq)的DMF(5mL)中加入碳酸铯(1.84g,5.63mmol,1.3eq)，3-氰基溴化苄(889.31mg,5.20mmol,617.58μL,1.2eq)，该反应在20℃搅拌2小时；经LCMS分析，原料反应完全，有目标信号峰出现；向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL*2)，有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，粗品经快速硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20：1～2：1)分离，得到BB-9-3。LCMS m/z＝291.0[M+1]+。
步骤3：化合物BB-9的合成
将BB-9-3(0.08g,301.10μmol,1eq)溶于四氢呋喃(6mL)和水中(2mL)，加入一水合氢氧化锂(37.90mg,903.29μmol,3eq)，在2℃反应12小时；经LCMS分析，原料反应完全，有目标信号峰出现；向反应液中加入乙酸乙酯(5mL)，水相用1M盐酸调节pH约6，冻干得到BB-9。LCMS m/z＝263.1[M+1]+。
参考例10：片段BB-10
Figure GDA0003377327420000301
合成路线：
Figure GDA0003377327420000302
步骤1：化合物BB-10-1的合成
向BB-1-1(3g,19.98mmol,1eq)的二氯甲烷溶液中(90mL)加入三乙胺(6.06g,59.93mmol,8.34mL,3eq)，加入氯草酰单乙酯(3.55g,25.97mmol,2.91mL,1.3eq)，25℃搅拌5小时。经LCMS分析，原料反应完全，有目标信号峰出现。向反应液中加入水(60mL)淬灭，用二氯甲烷萃取(60mL*3)，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，粗品经快速硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5：1-1：1)得到BB-10-1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.73(br s,1H),10.30(br s,1H),7.22-7.34(m,5H),4.26(q,J＝7.00Hz,2H),3.51(s,2H),1.27(t,J＝7.10Hz,3H)；LCMS m/z＝251.1[M+1]+。
步骤2：化合物BB-10的合成
向BB-10-1(529.69mg,2.12mmol,1eq)的乙腈溶液中(15mL)，加入氧氯化磷(486.82mg,3.17mmol,295.04μL,1.5eq)，该反应在90℃搅拌2小时。将反应液加入到饱和碳酸氢钠溶液(20mL)中，剧烈搅拌5分钟，用乙酸乙酯(20mL)萃取2次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到BB-10。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.23-7.10(m,5H),4.36-4.29(m,2H),4.12(s,2H),1.34-1.23(m,3H)；LCMS m/z＝233.1[M+1]+。
参考例11：片段BB-11A、BB-11B
Figure GDA0003377327420000311
合成路线：
Figure GDA0003377327420000312
步骤1：化合物BB-11-2的合成
向BB-11-1(5g,26.01mmol,1eq)的冰乙酸(39mL)和四氢呋喃(150mL)中加入肼基甲酸叔丁酯(17.19g,130.07mmol,5eq)，在55℃反应12小时；冷却至室温(25℃)，分批加入NaBH3CN(8.17g,130.07mmol,5eq)，升温至55℃，继续反应12小时；冷却至室温，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH＝7～8，用乙酸乙酯(150mL*2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到BB-11-2。LCMS m/z＝221.1[M-56+1]+。
步骤2：化合物BB-11-3的合成
将11-2(7g,25.33mmol,1eq)加入至HCl/EtOAc(4M,60mL)中，在25℃反应2小时。反应液减压浓缩得到粗品，向粗品中加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH＝7～8，用乙酸乙酯(50mL*2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品BB-11-3。LCMS m/z＝177.1[M+1]+。
步骤3：化合物BB-11-4的合成。
向BB-11-3(4g,22.70mmol,1eq)的乙醇(50mL)溶液中加入2-乙氧基-2-亚胺乙酸乙酯(16.47g,113.50mmol,5eq)，在85℃反应12小时；反应液减压浓缩得到粗品；粗品经柱层析分离纯化(二氯甲烷：甲醇＝10：0至5：1)得到BB-11-4。LCMS m/z＝276.2[M+1]+。
步骤4：化合物BB-11-5的合成
25℃下，将BB-11-4(1.3g,4.72mmol,1eq)加入氧氯化磷(30mL)的中，在120℃反应3小时；反应液冷却至室温，缓慢倒入至温水(150mL)中，用饱和碳酸氢钠调节pH＝7～8，用乙酸乙酯(100mL*2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，粗品经柱层析分离纯化(二氯甲烷：甲醇＝10：0至10：1)得到BB-11-5。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.34-7.43(m,3H),7.21-7.28(m,2H),5.58(br t,J＝7.12Hz,1H),4.27(br dd,J＝6.80,5.04Hz,2H),2.88-3.28(m,4H),1.26(br t,J＝7.12Hz,3H)。LCMS m/z＝258.2[M+1]+。
步骤5：化合物BB-11A和BB-11B的合成
将化合物BB-11经过超临界流体色谱(Chiralcel AD-3 3μm,0.46cm id x 15mL；流动相：A for SFC CO2 and B for MeOH(0.05％IPAm)；Gradient：Bin A from 10％to40％in 6minutes；Flow rate：4.0mL/min；Wavelength：220nm)分析，可知BB-11A和BB-11B保留时间分别为2.217min，2.427min；经超临界流体色谱(柱子：DAICEL CHIRALPAK AD(250mm*50mm,10μm)；流动相：[0.1％NH3H2O MEOH]；MeOH％：30％-30％,2.56min)分离，可得BB-11A和BB-11B。化合物BB-11A经过超临界流体色谱(Chiralcel AD-3 3μm,0.46cm id x15mL；流动相：A为超临界二氧化碳，B为甲醇(含有0.05％IPAm)；梯度：B的比例从10％到40％，总共6分钟；流速：4.0mL/min；波长：220nm)分析，可知BB-11A保留时间为2.235min,BB-11B保留时间为2.439min。
参考例12：片段BB-12
Figure GDA0003377327420000331
合成路线：
Figure GDA0003377327420000332
步骤1：化合物BB-12的合成。
在25℃下向BB-12-1的乙醇(100mL)溶液中加入I2(11.40g,44.92mmol,9.05mL,1eq)，Ag2SO4(14.01g,44.92mmol,7.61mL,1eq)，继续搅拌12小时。反应硅藻土过滤，滤液中加入水(150mL)和乙酸乙酯(150mL)，分液，水相用乙酸乙酯(50mL*2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品；粗品溶于乙酸乙酯中，加入盐酸/乙酸乙酯(4M)常温搅拌0.5h，过滤，收集滤饼；饼中加入乙酸乙酯(50mL)，向其中加入饱和碳酸氢钠使pH＝8～9，分液，水相用乙酸乙酯(25mL*2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩(水泵，45℃)得到粗品，经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1～1：1)纯化到BB-12。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.22(dt,J＝7.68,2.37Hz,1H),6.83(ddd,J＝10.85,8.22,2.76Hz,1H),3.97(br s,2H)。
参考例13：片段BB-13
Figure GDA0003377327420000333
合成路线：
Figure GDA0003377327420000334
步骤1：化合物BB-13-1的合成
向BB-9-2(760.78mg,4.33mmol,1eq)的DMF(5mL)中加入碳酸铯(1.84g,5.63mmol,1.3eq)，溴化苄(889.31mg,5.20mmol,617.58μL,1.2eq)，该反应在20℃搅拌2小时；经LCMS分析，原料反应完全，有目标信号峰出现；向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL*2)，有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，粗品经快速硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20：1～2：1)分离，得到BB-13-1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.34-7.41(m,3H),7.29-7.34(m,2H),5.42(s,2H),4.47(q,J＝22.40Hz,2H),1.43(t,J＝15.60Hz,3H)；LCMS m/z＝266.0[M+1]+。
步骤2：化合物BB-13的合成
将BB-13-1(0.08g,301.10μmol,1eq)溶于四氢呋喃(6mL)和水中(2mL)，加入一水合氢氧化锂(37.90mg,903.29μmol，3eq)，在25℃反应12小时；经LCMS分析，原料反应完全，有目标信号峰出现；向反应液中加入5mL乙酸乙酯，水相用1M盐酸调节pH约6，冻干得到BB-13。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.32-7.42(m,3H),7.25-7.30(m,2H),5.48(s,2H)；LCMS m/z＝238.1[M+1]+。
实施例1：WX001
Figure GDA0003377327420000341
合成路线：
Figure GDA0003377327420000342
步骤1：化合物WX001的合成
将化合物BB-3(0.58g,2.78mmol,1eq)，化合物BB-1(849mg,4.18mmol,1.5eq)，N,N-二异丙基乙胺(1.26g,9.75mmol,1.70mL,3.5eq)溶于乙酸乙酯(10mL)，然后向其中滴加2,4,6-三丁基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(4.43g,6.96mmol,4.14mL,50％纯度的乙酸乙酯溶液,2.5eq)，滴加完毕，在25℃搅拌12小时。反应液加入20mL水，用乙酸乙酯萃取(5mL*2)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(10mL)，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩得到粗品，粗品通过硅胶柱纯化，再经SFC分离(Chiralcel OJ-3,3μm,0.46cm id x 5cm L；流动相：A为超临界二氧化碳，B为甲醇(含有0.05％IPAm)；梯度：B的比例从10％到40％，总共5分钟；流速：4.0mL/min；波长h：220nm)，得到化合物WX001。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.71(d,J＝7.53Hz,1H),7.20-7.38(m,9H),5.15-5.25(m,1H),4.67(dd,J＝6.53,9.54Hz,1H),4.29(dd,J＝9.79,10.79Hz,1H),4.21(s,2H),3.89(s,3H)；LCMSm/z＝394.1[M+H]+。经过超临界流体色谱(手性柱：柱子：Chiralpak OD-3,3μm,0.46cm idx 5cm L；流动相：A：CO2，B：MeOH(0.05％IPAm)；梯度：B/A＝10％-40％，3分钟；流速：4.0mL/min；波长：220nm)分析，ee％＝96.36％。
实施例2：WX002
Figure GDA0003377327420000351
合成路线：
Figure GDA0003377327420000352
步骤1：化合物WX002的合成
向BB-3(0.06g,288.07μmol,1eq)和BB-2(131.48mg,576.15μmol,2eq)的DMF溶液(10mL)加入2,4,6-三丁基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(458.30mg,720.19μmol,428.32μL,50％纯度的乙酸乙酯溶液,2.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(111.69mg,864.22μmol,150.53μL,3eq)，然后于25℃搅拌10小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。向反应液加入20mL乙酸乙酯，用15mL饱和食盐水洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩得到粗品。粗品经制备HPLC分离纯化(柱子：Xtimate C18 150mm*25mm*5μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；乙腈％：35％-65％,10.5min)，得到化合物WX002。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.60(br d,J＝8.16Hz,1H),7.69-7.81(m,2H),7.51-7.65(m,3H),7.36-7.46(m,2H),7.25-7.33(m,1H),4.97(dt,J＝10.58,7.72Hz,1H),4.35-4.52(m,2H),4.21(s,2H),3.79(s,3H)；LCMS m/z＝419.1[M+H]+。经过超临界流体色谱(手性柱：柱子：Chiralpak OD-3,3μm,0.46cm id x 5cm L；流动相：A：CO2，B：MeOH(0.05％IPAm)；梯度：B/A＝10％-40％，3分钟；流速：4.0mL/min；波长：220nm)分析，ee％＝100％。
实施例3：WX003
Figure GDA0003377327420000361
合成路线：
Figure GDA0003377327420000362
步骤1：化合物WX003的合成
向BB-4(60mg,286.71μmol,1eq)和BB-1(87.39mg,430.07μmol,1.5eq)的DMF溶液(10mL)加入2,4,6-三丁基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(456.13mg,716.78μmol,426.29μL,50％纯度的乙酸乙酯溶液,2.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(111.16mg,860.13μmol,149.82μL,3eq)，然后于25℃搅拌10小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。向反应液中加入30mL乙酸乙酯，用20mL饱和食盐水洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩得到粗品。粗品经制备HPLC分离纯化(柱子：Xtimate C18 150mm*25mm*5μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；乙腈％：35％-65％,10.5min)，得到化合物WX003。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.63(br s,1H),8.46(dd,J＝4.63,1.54Hz,1H),7.79(d,J＝7.94Hz,1H),7.48(dd,J＝8.05,4.74Hz,1H),7.23-7.37(m,5H),5.01(dt,J＝10.80,7.28Hz,1H),4.43-4.72(m,2H),4.14(br s,2H),3.80(s,3H)；LCMS m/z＝395.2[M+H]+。经过超临界流体色谱(手性柱：柱子：Chiralpak OD-3,3μm,0.46cm id x 5cm L；流动相：A：CO2，B：MeOH(0.05％IPAm)；梯度：B/A＝10％-40％，3分钟；流速：4.0mL/min；波长：220nm)分析，ee％＝96.3％。
实施例4：WX004
Figure GDA0003377327420000363
合成路线：
Figure GDA0003377327420000364
步骤1：化合物WX004的合成
向BB-4(60mg,286.71μmol,1eq)和BB-2(130.86mg,573.43μmol,2eq)的DMF溶液(10mL)加入2,4,6-三丁基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(456.13mg,716.78μmol,426.29μL,50％纯度的乙酸乙酯溶液,2.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(111.16mg,860.14μmol,149.82μL,3eq)，然后于25℃搅拌10小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。向反应液中加入30mL乙酸乙酯，用20mL饱和食盐水洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩得到粗品。粗品经制备HPLC分离纯化(柱子：Xtimate C18 15 mm*25mm*5μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；乙腈％：35％-65％,10.5min)，得到化合物WX004。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.73(br s,1H),8.46(d,J＝4.85Hz,1H),7.69-7.86(m,3H),7.44-7.65(m,3H),5.01(dt,J＝11.08,7.14Hz,1H),4.48-4.68(m,2H),4.22(s,2H),3.80(s,3H)；LCMS m/z＝420.1[M+H]+。经过超临界流体色谱(手性柱：柱子：Chiralpak OD-3,3μm,0.46cm id x 5cm L；流动相：A：CO2，B：MeOH(0.05％IPAm)；梯度：B/A＝10％-40％，3分钟；流速：4.0mL/min；波长：220nm)分析，ee％＝100％。
实施例5：WX005
Figure GDA0003377327420000371
合成路线：
Figure GDA0003377327420000372
步骤1：化合物WX005的合成
向BB-5(100mg,471.06μmol,1eq)和BB-1(130.86mg,573.43μmol,1.2eq)的DMF溶液(10mL)加入2,4,6-三丁基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(599.53mg,942.12μmol,560.31μL,50％纯度的乙酸乙酯溶液,2.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(182.64mg,1.41mmol,246.15μL,3eq)，然后于25℃搅拌10小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。向反应液中加入乙酸乙酯(30mL)，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩得到粗品。粗品经制备HPLC分离纯化(柱子：Phenomenex Luna C18150mm*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；乙腈％：20％-50％,12min)，得到化合物WX005。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.62(br s,1H),8.46(dd,J＝1.75,4.82Hz,1H),7.79(dd,J＝1.32,7.89Hz,1H),7.48(dd,J＝4.82,7.89Hz,1H),7.20-7.37(m,5H),5.01(td,J＝7.34,11.18Hz,1H),4.60(br s,1H),4.49-4.55(m,1H),4.14(br s,2H)；LCMS m/z＝398.2[M+H]+。经过超临界流体色谱(手性柱：柱子：Chiralpak OD-3,3μm,0.46cm id x 5cm L；流动相：A：CO2，B：MeOH(0.05％IPAm)；梯度：B/A＝10％-40％，3分钟；流速：4.0mL/min；波长：220nm)分析，ee％＝100％。
实施例6：WX006
Figure GDA0003377327420000381
合成路线：
Figure GDA0003377327420000382
步骤1：化合物WX006的合成
向BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)和BB-1(11.60mg,57.34μmol,1.2eq)的DMF溶液(1mL)加入2,4,6-三丁基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50％纯度的乙酸乙酯溶液,2.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)，然后于25℃搅拌10小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。反应液直接经制备HPLC分离纯化(柱子：Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；乙腈％：20％-50％,12min)，得到化合物WX006。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝9.01(br s,1H),8.34-8.46(m,2H),7.51-7.64(m,2H),7.43(br s,3H),7.28-7.31(m,2H),7.22-7.26(m,1H),5.29(br s,2H),5.20(br d,J＝7.02Hz,1H),4.58-4.69(m,2H),3.91(s,3H)；LCMS m/z＝394.2[M+H]+。经过超临界流体色谱(手性柱：柱子：Chiralpak OD-3,3μm,0.46cm id x 5cm L；流动相：A：CO2，B：MeOH(0.05％IPAm)；梯度：B/A＝10％-40％，3分钟；流速：4.0mL/min；波长：220nm)分析，ee％＝100％。
实施例7：WX007
Figure GDA0003377327420000391
合成路线：
Figure GDA0003377327420000392
步骤1：化合物WX007的合成
向BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)和BB-7(11.65mg,57.35μmol,1.2eq)的DMF溶液(1mL)加入2,4,6-三丁基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50％纯度的乙酸乙酯溶液,2.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)，然后于25℃搅拌10小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。反应液直接经制备HPLC分离纯化(柱子：Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；乙腈％：20％-50％,12min)，得到化合物WX007。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.98(d,J＝8.33Hz,1H),8.46(dd,J＝1.32,4.82Hz,1H),7.77(dd,J＝1.75,7.89Hz,1H),7.47(dd,J＝4.60,8.11Hz,1H),7.22-7.40(m,5H),6.54(s,1H),5.00(td,J＝7.45,11.40Hz,1H),4.59-4.70(m,1H),4.48-4.56(m,1H),4.22(s,2H),3.79(s,3H)；LCMS m/z＝395.1[M+H]+。经过超临界流体色谱(手性柱：柱子：Chiralpak OD-3,3μm,0.46cm id x 5cmL；流动相：A：CO2，B：MeOH(0.05％IPAm)；梯度：B/A＝10％-40％，3分钟；流速：4.0mL/min；波长：220nm)分析，ee％＝100％。
实施例8：WX008
Figure GDA0003377327420000393
合成路线：
Figure GDA0003377327420000394
步骤1：化合物WX008的合成
向BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)和BB-8(15.06mg,57.35μmol,1.2eq)的DMF溶液(1mL)加入2,4,6-三丁基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50％纯度的乙酸乙酯溶液,2.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)，然后于25℃搅拌10小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。反应液直接经制备HPLC分离纯化(柱子：Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；乙腈％：20％-50％,12min)，得到化合物WX008。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.85(d,J＝7.89Hz,1H),8.46(d,J＝3.07Hz,1H),7.75-7.89(m,3H),7.61(d,J＝4.82Hz,2H),7.48(dd,J＝4.82,7.89Hz,1H),5.58(s,2H),4.94-5.06(m,1H),4.65(t,J＝10.74Hz,1H),4.45-4.57(m,1H),3.80(s,3H)；LCMS m/z＝454.1[M+H]+。经过超临界流体色谱(手性柱：柱子：Chiralpak OD-3,3μm,0.46cm id x 5cm L；流动相：A：CO2，B：MeOH(0.05％IPAm)；梯度：B/A＝10％-40％，3分钟；流速：4.0mL/min；波长：220nm)分析，ee％＝100％。
实施例9：WX009
Figure GDA0003377327420000401
合成路线：
Figure GDA0003377327420000402
步骤1：化合物WX009的合成
向BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)和BB-9(11.65mg,57.35μmol,1.2eq)的DMF溶液(1mL)加入2,4,6-三丁基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50％纯度的乙酸乙酯溶液,2.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)，然后于25℃搅拌10小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。反应液直接经制备HPLC分离纯化(柱子：Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；乙腈％：20％-50％,12min)，得到化合物WX009。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.84(s,1H),8.71(d,J＝7.89Hz,1H),8.46(dd,J＝1.53,4.60Hz,1H),7.79(dd,J＝1.53,8.11Hz,1H),7.48(dd,J＝4.82,7.89Hz,1H),7.26-7.42(m,5H),5.49(s,2H),4.94-5.08(m,1H),4.48-4.63(m,2H),3.80(s,3H)；LCMS m/z＝395.1[M+H]+。经过超临界流体色谱(手性柱：柱子：Chiralpak OD-3,3μm,0.46cm id x 5cm L；流动相：A：CO2，B：MeOH(0.05％IPAm)；梯度：B/A＝10％-40％，3分钟；流速：4.0mL/min；波长：220nm)分析，ee％＝100％。
实施例10：WX010
Figure GDA0003377327420000411
合成路线：
Figure GDA0003377327420000412
步骤1：化合物WX010的合成
向BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)和WX010-1(11.65mg,57.35μmol,1.2eq)的DMF溶液(1mL)加入2,4,6-三丁基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50％纯度的乙酸乙酯溶液,2.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)，然后于25℃搅拌10小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。反应液直接经制备HPLC(柱子：Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；乙腈％：20％-50％,12min)分离纯化，得到化合物WX010。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.75(d,J＝8.33Hz,1H),8.69(s,1H),8.46(dd,J＝1.53,4.60Hz,1H),7.79(dd,J＝1.53,8.11Hz,1H),7.48(dd,J＝4.82,7.89Hz,1H),7.30-7.41(m,5H),5.65(s,2H),4.97-5.10(m,1H),4.58-4.68(m,1H),4.47-4.57(m,1H),3.80(s,3H)；LCMS m/z＝395.1[M+H]+。经过超临界流体色谱(手性柱：柱子：Chiralpak OD-3,3μm,0.46cm id x 5cm L；流动相：A：CO2，B：MeOH(0.05％IPAm)；梯度：B/A＝10％-40％，3分钟；流速：4.0mL/min；波长：220nm)分析，ee％＝100％。
实施例11：WX011
Figure GDA0003377327420000421
合成路线：
Figure GDA0003377327420000422
步骤1：化合物WX011的合成
向BB-4(10mg,47.79μmol,1eq)和BB-13(14.76mg,62.13μmol,1.2eq)的DMF溶液(1mL)加入2,4,6-三丁基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(60.82mg,95.57μmol,56.84μL,50％纯度的乙酸乙酯溶液,2.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(18.53mg,143.36μmol,24.97μL,3eq)，然后于25℃搅拌10小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。反应液直接经制备HPLC(柱子：Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；乙腈％：20％-50％,12min)分离纯化，得到化合物WX011。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.83(d,J＝7.89Hz,1H),8.41-8.49(m,1H),7.77(dd,J＝1.32,7.89Hz,1H),7.46(dd,J＝4.82,7.89Hz,1H),7.30-7.42(m,3H),7.26(d,J＝7.02Hz,2H),5.48(s,2H),4.98(td,J＝7.13,11.62Hz,1H),4.59-4.67(m,1H),4.49(dd,J＝6.80,9.87Hz,1H),3.78(s,3H)；LCMS m/z＝429.0[M+H]+。经过超临界流体色谱(手性柱：柱子：Chiralpak OD-3,3μm,0.46cm id x 5cm L；流动相：A：CO2，B：MeOH(0.05％IPAm)；梯度：B/A＝10％-40％，3分钟；流速：4.0mL/min；波长：220nm)分析，ee％＝100％。
实施例12：WX012
Figure GDA0003377327420000423
合成路线：
Figure GDA0003377327420000424
步骤1：化合物WX012的合成
向BB-4(15mg,71.68μmol,1eq)和BB-10(33.29mg,143.36μmol,2eq)的甲苯溶液(3mL)加入三甲基铝(2M,53.76μL,1.5eq)，然后于25℃搅拌1小时。LCMS监测原料反应完，有目标信号。反应液直接经制备HPLC(柱子：Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；乙腈％：20％-50％,12min)分离纯化，得到化合物WX012。LCMS m/z＝396.2[M+H]+。
实施例13：WX013
Figure GDA0003377327420000431
合成路线：
Figure GDA0003377327420000432
步骤1：化合物WX013-1的合成
将LiOH·H2O(245.59mg,5.85mmol,3eq)加入至BB-11B(501.93mg,1.95mmol,1eq)的四氢呋喃(9mL)和水(3mL)的溶液中，25℃反应2小时。向反应液中加入水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)，分液，水相用乙酸乙酯(10mL*2)萃取，水相用1M HCl调节pH＝5～6，用乙酸乙酯(10mL*2)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩(水泵，45℃)得到WX013-1。LCMS m/z＝230.2[M+1]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.75-13.57(m,1H),7.33-7.44(m,3H),7.18-7.28(m,2H),5.57(dd,J＝7.97,6.21Hz,1H),3.06-3.22(m,2H),2.94-3.03(m,1H),2.53-2.61(m,1H)。
步骤2：化合物WX013的合成
将N,N-二异丙基乙胺(23.16mg,179.20μmol,31.21μL,2.5eq)，WX013-1(24.65mg,107.52μmol,1.5eq)加入至BB-1(15mg,71.68μmol,1eq)的DMF(1.5mL)溶液中，继续加入丙烷膦酸酐(T3P，68.42mg,107.52μmol,63.94μL,50％purity,1.5eq)，25℃反应1小时反应液过滤，收集滤液。经制备HPLC(柱子：Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；乙腈％：20％-50％,12min)分离得到WX013。LCMS m/z＝421.1[M+1]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.68(d,J＝8.04Hz,1H),8.46(dd,J＝4.72,1.32Hz,1H),7.78(dd,J＝8.04,1.38Hz,1H),7.47(dd,J＝8.04,4.64Hz,1H),7.32-7.43(m,3H),7.24(br d,J＝6.65Hz,2H),5.44-5.68(m,1H),5.00(dt,J＝11.40,7.40Hz,1H),4.42-4.68(m,2H),3.79(s,3H),2.90-3.23(m,4H)。
实施例14：WX014
Figure GDA0003377327420000441
合成路线：
Figure GDA0003377327420000442
步骤1：化合物WX014-2的合成
将WX014-1溶于THF(100mL)和MeOH(100mL)溶液中，将反应瓶置于冰水浴(0℃)中，向反应瓶中加入三甲基硅烷化重氮甲烷(2M,47.89mL,2.1eq)，自然升温至25℃搅拌2小时。滴加冰乙酸至反应液变淡黄色，减压浓缩得到化合物WX014-2。
步骤2：化合物WX014-3的合成
在25℃的条件下，将三苯基膦(14.30g,54.53mmol,1.2eq)，咪唑(3.71g,54.53mmol,1.2eq)溶于二氯甲烷(120mL)，将I2(13.84g,54.53mmol,10.98mL,1.2eq)缓慢加入至上述混合溶液中，搅拌10分钟，将WX014-2的DCM(80mL)溶液加入至上述溶液中，25℃反应12小时；反应液过滤，滤液减压浓缩得到粗品；粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1～1：1)分离纯化得到WX014-3。LCMS m/z＝244.1[M-100+1]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝5.10(br d,J＝4.82Hz,1H),4.35(br d,J＝3.96Hz,1H),3.77(s,3H),3.18(t,J＝7.46Hz,2H),2.30-2.49(m,1H),2.18(dq,J＝14.32,7.22Hz,1H),1.43-1.47(m,9H)。
步骤3：化合物WX014-4的合成
将1,2-二溴乙烷(82.12mg,437.12μmol,32.98μL,0.3eq)加入至锌粉(285.83mg,4.37mmol,3eq)的DMF(2mL)中，60℃搅拌30分钟，冷却至室温(25℃)，向反应瓶中加入三甲基氯硅烷(9.50mg,87.42μmol,11.10μL,0.06eq)，25℃搅拌30分钟，将WX014-2的DMF(2mL)溶液加入至上述溶液中，25℃下反应30分钟。静置30分钟，取上层乳液，缓慢加入至三(二亚苄基丙酮)二钯(44.08mg,48.14μmol,0.05eq)，三邻甲基苯基膦(58.61mg,192.55μmol,0.2eq)，BB-12的DMF(2mL)溶液中，20℃反应1小时；向反应液中加入水(5mL)和甲基叔丁基醚(5mL)，分液，水相甲基叔丁基醚(5mL*2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到WX014-4。LCMS m/z＝289.1[M-56+1]+。
步骤4：化合物WX014-5的合成
将LiOH·H2O(219.33mg,5.23mmol,3eq)加入至WX014-4的四氢呋喃(15mL)和水(15mL)溶液中，25℃反应2小时；向反应液中加入10mL水和10mL乙酸乙酯，分液，水相用乙酸乙酯(10mL*2)萃取，水相用1M HCl调节pH＝5～6，用乙酸乙酯(10mL*2)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到WX014-5。LCMS m/z＝275.1[M-56+1]+。
步骤5：化合物WX014-6的合成
将丙烷磷酸酐(895.80mg,1.41mmol,837.20μL,50％purity,1.5eq)加入至N,N-二异丙基乙胺(303.22mg,2.35mmol,408.65μL,2.5eq)，WX014-5的DMF(20mL)溶液中，25℃反应2小时；向反应液中加入水(15mL)和乙酸乙酯(15mL)，分液，水相用乙酸乙酯(15mL*2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品；粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1～1：1)得到WX014-6。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.40(br s,1H),6.76-6.87(m,2H),5.46(br d,J＝7.46Hz,1H),4.22-4.37(m,2H),2.88-3.03(m,1H),2.63-2.73(m,2H),1.42(s,9H)。
步骤6：化合物WX014-7的合成
20℃下，将劳森试剂(77.70mg,192.12μmol,1.5eq)加入至WX014-6(40mg,128.08μmol,1eq)的甲苯(5mL)溶液中，70℃反应12小时，反应液减压浓缩得到粗品；粗品经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1～1：1)分离纯化得到WX014-7。LCMS m/z＝273.1[M-56+1]+。
步骤7：化合物WX014-8的合成
将HCl/EtOAc(4M,2mL)加入至WX014-7的乙酸乙酯(3mL)溶液中，25℃反应2小时；反应液减压浓缩(水泵，40℃)得到粗品WX014-8。LCMS m/z＝229.2[M+1]+。
步骤8：化合物WX014的合成
将DIPEA(18.31mg,141.66μmol,24.67μL,2.5eq)，T3P(54.09mg,84.99μmol,50.55μL,50％purity,1.5eq)加入至WX014-8(15mg,56.66μmol,1eq,HCl)，BB-1(14.97mg,73.66μmol,1.3eq)的DMF(2mL)中，25℃反应2小时。向反应液中加入水(5mL)和乙酸乙酯(5mL)，分液，水相用乙酸乙酯(5mL*2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，粗品经制备HPLC(色谱柱：Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；乙腈％：20％-50％,12min)分离得到WX014。LCMS m/z＝414.2[M+1]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ＝7.21-7.37(m,5H),6.97-7.13(m,2H),4.71(br d,J＝4.14Hz,1H),4.18(br s,2H),2.84-2.96(m,1H),2.64-2.83(m,2H),2.17(td,J＝11.67,7.78Hz,1H)。
实施例15：WX015
Figure GDA0003377327420000461
合成路线：
Figure GDA0003377327420000471
步骤1：化合物WX015的合成
向装有N,N-二甲基甲酰胺(10mL)的圆底烧瓶中加入BB-3(20mg,96.02μmol,1.1eq)，DIPEA(23.69mg,183.32μmol,31.93μL,2.1eq)溶解后再加入BB-14(21.24mg,87.30μmol,1eq)，T3P(55.55mg,87.30μmol,51.92μL,50％纯度,1eq)后，在25℃下搅拌反应12小时；LCMS显示原料基本反应完全，将反应液减压浓缩为5mL左右，使用HPLC(色谱柱：WelchXtimate C18 150*25mm*5μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：35％-65％,8min)分离纯化，得到产物WX015。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.78(br d,J＝7.5Hz,1H),7.43-7.35(m,5H),7.35-7.26(m,4H),5.82(s,2H),5.21(td,J＝6.9,11.0Hz,1H),4.71(dd,J＝6.5,9.5Hz,1H),4.33-4.21(m,1H),3.87(s,3H)；LCMS m/z＝395.1[M+1]+。
实施例16：WX016
Figure GDA0003377327420000472
合成路线：
Figure GDA0003377327420000473
步骤1：化合物WX016-2的合成
向圆底烧瓶中加入DMSO(10mL)，然后缓慢加入WX016-1(1.31g,8.44mmol,1eq)、K2CO3(1.40g,10.13mmol,1.2eq)和溴化苄(1.59g,9.29mmol,1.10mL,1.1eq)，25℃下持续搅拌12小时；反应完成后，在反应液中加入水(50mL)与乙酸乙酯(30mLx2)萃取两次，合并有机相，并用饱和食盐水(5mLx2)洗涤，减压浓缩得到粗品，经柱层析(石油醚乙酸乙酯＝100：1～1：1)分离纯化得到WX016-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.39-7.30(m,3H),7.19(dd,J＝1.8,7.6Hz,2H),5.39(s,2H),4.49(q,J＝7.1Hz,2H),2.43(s,3H),1.44(t,J＝7.1Hz,3H)；LCMS m/z＝246.1[M+1]+。
步骤2：化合物WX016-3的合成
向圆底烧瓶中加入THF(7.5mL)和H2O(2.5mL)，然后缓慢加WX016-2(1g,4.08mmol,1eq)和LiOH·H2O(513.26mg,12.23mmol,3eq)，25℃下搅拌反应2小时，减压浓缩反应液，滴加2N盐酸调至pH为酸性，过滤得滤饼，得到目标化合物WX016-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.42-7.28(m,3H),7.25-7.19(m,2H),5.40(s,2H),2.56(s,3H)；LCMS m/z＝217.9[M+1]+。
步骤3：化合物WX016的合成
向圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，WX016-3(80mg,368.28μmol,1eq)和BB-4(77.07mg,368.28μmol,1eq)，然后加入T3P(351.54mg,552.43μmol,328.55μL,50％纯度,1.5eq)和DIPEA(142.79mg,1.10mmol,192.45μL,3eq)，25℃下持续搅拌5小时，浓缩后粗品经制备HPLC分离(色谱柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：35％-65％,8min)得到化合物WX016。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.72(br d,J＝7.3Hz,1H),8.37(dd,J＝1.4,4.6Hz,1H),7.56(dd,J＝1.3,8.0Hz,1H),7.38-7.27(m,4H),7.18(br d,J＝6.0Hz,2H),5.36(s,2H),5.23(td,J＝6.8,11.0Hz,1H),4.78(dd,J＝6.5,9.5Hz,1H),4.32(dd,J＝9.8,11.0Hz,1H),3.93(s,3H),2.41(s,3H)；LCMS m/z＝409.1[M+1]+。
实施例17：WX017
Figure GDA0003377327420000481
合成路线：
Figure GDA0003377327420000482
步骤1：化合物WX017-2的合成
25℃下，在反应瓶中加氢化铝锂(629.99mg,16.60mmol,2eq)，THF(5mL)，而后缓慢滴加WX017-1(1.08g,8.30mmol,1eq)的THF(5mL)溶液，加毕，升温度至35℃，持续搅拌1小时；加入6mL饱和Na2SO4水溶液淬灭反应，过滤，用乙酸乙酯(10mL×3次)洗涤，合并有机相，以无水MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。粗品经硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～5：1)得到化合物WX017-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝3.84(s,2H),2.01(d,J＝2.5Hz,6H)。
步骤2：化合物WX017-3的合成
在反应瓶中加WX017-2，DCM(10mL)，吡啶(1.40g,17.70mmol,1.43mL,4.11eq)，而后缓慢加入对甲苯磺酰氯(1.23g,6.46mmol,1.5eq)，随后升温至40℃反应24小时；TLC(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)显示有新点产生(Rf＝0.7；反应液直接减压浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～30：1)纯化，得到化合物WX017-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.78(d,J＝8.3Hz,2H),7.35(d,J＝8.0Hz,2H),4.24(s,2H),2.46(s,3H),1.99(d,J＝2.3Hz,6H)。
步骤3：化合物WX017-4的合成
25℃下，在茄形瓶中，加乙腈(10mL)，WX017-3(500mg,1.85mmol,1.1eq)以及BB-8-1(213.72mg,1.68mmol,1eq)，而后加K2CO3(278.88mg,2.02mmol,1.2eq)，升温至70℃反应48小时；反应液浓缩，粗品经硅胶柱(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：2)分离纯化得到化合物WX017-4。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.12(s,1H),4.57(s,2H),4.01(s,3H),2.05(d,J＝2.5Hz,6H)。
步骤4：化合物WX017-5的合成
25℃下，向装有THF(2mL)的圆底烧瓶中加入WX017-4(100mg,444.01μmol,1eq)，溶解后滴加LiOH·H2O(55.90mg,1.33mmol,3eq)的MeOH(1mL)溶液，25℃下反应5小时；减压浓缩后以四氢呋喃(5mL)溶解，加1N的稀盐酸调pH至4，而后加甲苯(5mL)，混合均匀，减压蒸干溶剂，得到WX017-5粗产物，产物无需纯化直接用于下一步反应。
步骤5：化合物WX017的合成
25℃下，在反应瓶中加乙酸乙酯(10mL)，WX017-5(207mg,588.09μmol,1eq)和BB-4(143.52mg,588.09μmol,1eq)溶解，加入T3P(1.12g,1.76mmol,1.05mL,50％purity,3eq)以及DIPEA(228.02mg,1.76mmol,307.30μL,3eq)，25℃反应8小时；反应结束后加入乙酸乙酯(10mL)，水洗(10mL×3次)，饱和食盐水洗涤(10mL×1次)减压浓缩得粗品。再经制备HPLC(色谱柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相：[水(0.05％NH3H2O)-ACN]；乙腈％：35％-65％,8min)分离得到化合物WX017。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.83(br d,J＝6.8Hz,1H),8.37(dd,J＝1.4,4.6Hz,1H),8.08(s,1H),7.57(dd,J＝1.3,8.0Hz,1H),7.29(dd,J＝4.8,8.0Hz,1H),5.20(td,J＝6.7,11.2Hz,1H),4.80(dd,J＝6.4,9.4Hz,1H),4.54(s,2H),4.33(dd,J＝9.8,11.0Hz,1H),3.94(s,3H),2.05(d,J＝2.3Hz,6H)；LCMS m/z＝403.2[M+1]+。
实施例18：WX018
Figure GDA0003377327420000501
合成路线：
Figure GDA0003377327420000502
化合物WX018的合成
向装有N,N-二甲基甲酰胺(10mL)的圆底烧瓶中加BB-4(200mg,955.71μmol,1.1eq)，DIPEA(235.80mg,1.82mmol,317.80μL,2.1eq)溶解后再加入BB-14(210.50mg,868.83μmol,1eq)，T3P(552.89mg,868.83μmol,516.72μL,50％纯度,1eq)后，在25℃下搅拌反应12小时，将反应液减压浓缩为5mL左右，使用HPLC(色谱柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：35％-65％,8min)分离纯化，得到化合物WX018。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.86(br d,J＝6.8Hz,1H),8.38(dd,J＝1.6,4.6Hz,1H),7.69-7.27(m,7H),5.83(s,2H),5.20(td,J＝6.7,11.2Hz,1H),4.78(dd,J＝6.3,9.5Hz,1H),4.33(dd,J＝9.7,11.2Hz,1H),3.93(s,3H)；LCMS m/z＝396.1[M+1]+。
实施例19：WX019
Figure GDA0003377327420000511
合成路线：
Figure GDA0003377327420000512
步骤1：化合物WX019的合成
向装有N,N-二甲基甲酰胺(10mL)的圆底烧瓶中加BB-15(156.11mg,745.97μmol,1.1eq)，BB-4(150mg,678.16μmol,1eq)，T3P(431.55mg,678.16μmol,403.32μL,50％纯度,1eq)，DIPEA(184.06mg,1.42mmol,248.06μL,2.1eq)后，开启搅拌，在25℃下搅拌反应12小时；反应结束后，将反应液减压浓缩为5mL左右，使用HPLC(色谱柱：Welch Xtimate C18150*25mm*5μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：35％-65％,8min)分离纯化，得到产物WX019。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.81(br d,J＝7.3Hz,1H),8.37(dd,J＝1.5,4.8Hz,1H),8.14(s,1H),7.56(dd,J＝1.5,8.0Hz,1H),7.41-7.27(m,3H),7.21-7.06(m,2H),5.45(s,2H),5.20(td,J＝6.7,11.2Hz,1H),4.78(dd,J＝6.5,9.5Hz,1H),4.31(dd,J＝9.5,11.0Hz,1H),3.93(s,3H)；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ＝-109.59～-130.05(m,1F)；LCMS m/z＝413.1[M+1]+。
实施例20：WX020
Figure GDA0003377327420000513
合成路线：
Figure GDA0003377327420000514
步骤1：化合物WX020-2的合成
向乙腈(15mL)中加入WX020-1(3g,23.60mmol,1eq)，2，6-二氟溴苄(5.37g,25.96mmol,1.1eq)，K2CO3(3.91g,28.32mmol,1.2eq)后，开启搅拌，在50℃下反应12小时，TLC检测反应结束后，将反应液过滤除去K2CO3，滤饼用乙酸乙酯(15mL)洗涤三次，向滤液中加入饱和食盐水(50mL)后萃取得有机相，水相再次用EA(30mL)萃取，合并有机相，减压浓缩得粗产品；粗产品用硅胶柱分离纯化(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝100：1～100：100)，得到化合物WX020-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.17(s,1H),7.46-7.33(m,1H),7.04-6.91(m,2H),5.51(s,2H),4.13-3.85(m,3H)。
步骤2：化合物WX020-3的合成
向装有THF(30mL)的圆底烧瓶中加入WX020-2(1g,3.95mmol,1eq)溶解后，再加入LiOH·H2O(331.43mg,7.90mmol,2eq)的H2O(5mL)溶液，在20℃下搅拌反应2小时；将反应液用1M的稀盐酸调pH为6，再减压浓缩去除溶剂得粗产品WX020-3；LCMS m/z＝239.9[M+1]+。
步骤3：化合物WX020的合成
向装有N,N-二甲基甲酰胺(10mL)的圆底烧瓶中加BB-4(192.49mg,919.82μmol,1.1eq)，WX020-3(200mg,836.20μmol,1eq)，T3P(532.12mg,836.20μmol,497.31μL,50％纯度,1eq)，DIPEA(226.95mg,1.76mmol,305.86μL,2.1eq)后，在25℃下搅拌反应12小时，反应液减压浓缩为5mL左右，经制备HPLC(色谱柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：35％-65％,8min)分离纯化，得到化合物WX020。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.79(br d,J＝7.0Hz,1H),8.36(dd,J＝1.5,4.8Hz,1H),8.14(s,1H),7.55(dd,J＝1.5,8.0Hz,1H),7.43-7.26(m,2H),6.97(t,J＝7.9Hz,2H),5.49(s,2H),5.19(td,J＝6.7,11.1Hz,1H),4.77(dd,J＝6.3,9.5Hz,1H),4.30(dd,J＝9.7,10.9Hz,1H),3.92(s,3H)；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ＝-104.74～-120.36(m,1F)；LCMS m/z＝431.1[M+1]+。
实施例21：WX021
Figure GDA0003377327420000521
合成路线：
Figure GDA0003377327420000531
步骤1：化合物WX021-1的合成
向装有DCM(20mL)的圆底烧瓶中加入BB-3-4(2g,6.73mmol,1eq)后，在40℃下搅拌，然后缓慢加入NCS(988.11mg,7.40mmol,1.1eq)后，然后40℃下持续搅拌反应5小时，将反应液减压浓缩得粗产品；粗产品使用硅胶柱分离纯化(洗脱剂为DCM：MeOH＝100：1～100：10)得到化合物WX021-1。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ＝7.54(d,J＝1.5Hz,1H),7.34(d,J＝1.8Hz,1H),6.95-6.77(m,1H),5.49(s,2H),4.70-4.60(m,2H),4.53(br dd,J＝4.3,9.5Hz,1H),4.39-4.26(m,1H),1.46(s,9H)。LCMS m/z＝331.9[M+1]+。
步骤2：化合物WX021-2的合成
向装有DCM(10mL)的圆底烧瓶中加入WX021-1(1.60g,4.82mmol,1eq)，T3P(6.14g,9.65mmol,5.74mL,50％纯度,2eq)，DIPEA(1.87g,14.47mmol,2.52mL,3eq)后，在20℃下反应3小时。将反应液倒入饱和食盐水(300mL)中，分离得有机相，水相用乙酸乙酯(100mL)萃取两次，合并有机相，并减压浓缩得粗产品；粗产品使用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：20～100：100)，得到化合物WX021-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.22(br s,1H),8.04(d,J＝2.0Hz,1H),7.41(d,J＝2.3Hz,1H),5.59(br s,1H),4.71-4.46(m,2H),4.23-4.05(m,1H),1.46(s,9H)；LCMS m/z＝257.8[M-56+1]+。
步骤3：化合物WX021-3的合成
向装有N,N-二甲基乙酰胺(10mL)的圆底烧瓶中加入WX021-2(200mg,637.48μmol,1eq)，碘甲烷(1.17g,8.24mmol,513.16μL,12.93eq)，碳酸铯(415.41mg,1.27mmol,2eq)，氮气保护下在25℃下搅拌反应1小时；反应结束后将反应液倒入饱和食盐水(20mL)中，乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相并减压浓缩得粗产品；粗产品用乙酸乙酯(2mL)溶解，经制备TLC分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)，得到产WX021-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.23(d,J＝2.3Hz,1H),7.47(d,J＝2.0Hz,1H),5.55(br s,1H),4.82-4.49(m,2H),4.35-4.14(m,1H),3.47(s,3H),1.41(s,9H)。
步骤4：化合物WX021-4的合成
25℃下，向装有甲苯(10mL)的圆底烧瓶中加入WX021-3(177mg,540.02μmol,1eq)，劳森试剂(327.63mg,810.04μmol,1.5eq)，然后缓慢升温至110℃反应12小时，将反应液倒入饱和食盐水(100mL)中，乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并有机相，并减压浓缩得粗产品；粗产品经制备TLC分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)得到化合物WX021-4。LCMS m/z＝287.8[M-56+1]+。
步骤5：化合物WX021-5的合成
25℃下，向装有二氯甲烷(5mL)的圆底烧瓶中加入WX021-4(35mg,101.80μmol,1eq)，边搅拌边滴加三氟乙酸(174.10mg,1.53mmol,113.06μL,15eq)，持续反应2小时，将反应液减压蒸干得到WX021-5粗品直接用于下一步。
步骤6：化合物WX021的合成
向装有N,N-二甲基乙酰胺(5mL)的圆底烧瓶中加WX021-5(20mg,82.06μmol,1eq)，BB-8(16.68mg,82.06μmol,1eq)，T3P(52.22mg,82.06μmol,48.81μL,50％纯度,1eq)，DIPEA(22.27mg,172.33μmol,30.02μL,2.1eq)，在25℃下反应5小时，加入饱和食盐水(30mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，将有机相减压浓缩得粗产品；粗产品经HPLC(甲酸体系)分离纯化(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：40％-70％,8min)得到化合物WX021。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.77(br d,J＝7.3Hz,1H),8.32(d,J＝2.3Hz,1H),8.04(s,1H),7.57(d,J＝2.0Hz,1H),7.44-7.34(m,3H),7.32-7.27(m,2H),5.40(s,2H),5.26-5.16(m,1H),4.77(dd,J＝6.3,9.5Hz,1H),4.39-4.27(m,1H),3.90(s,3H)；LCMS m/z＝429.0[M+1]+。
实施例22：WX022
Figure GDA0003377327420000541
合成路线：
Figure GDA0003377327420000551
步骤1：化合物WX022的合成
向N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中加入WX021-5(20mg,82.06μmol,1eq)，BB-15(18.15mg,82.06μmol,1eq)，T3P(52.22mg,82.06μmol,48.81μL,50％纯度,1eq)，DIPEA(22.27mg,172.33μmol,30.02μL,2.1eq)，在25℃下反应5小时，加入30mL饱和食盐水和乙酸乙酯(30mL×3)萃取得有机相，减压浓缩，粗产品经制备HPLC分离纯化(色谱柱：XtimateC18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：42％-72％,8min，得到化合物WX022。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.77(br d,J＝6.5Hz,1H),8.32(d,J＝2.0Hz,1H),8.14(s,1H),7.57(d,J＝2.3Hz,1H),7.41-7.31(m,2H),7.20-7.07(m,2H),5.45(s,2H),5.30-5.08(m,1H),4.76(dd,J＝6.3,9.5Hz,1H),4.32(t,J＝10.3Hz,1H),3.93-3.87(m,1H)；19FNMR(376MHz,CDCl3)δ＝-110.66～-127.90(m,1F)；LCMS m/z＝447.1[M+1]+。
实施例23：WX023
Figure GDA0003377327420000552
合成路线：
Figure GDA0003377327420000553
步骤1：化合物WX023-1的合成
25℃向DCM(30mL)中缓慢加入BB-4-3(3.00g,10.09mmol,1eq)和N-溴代丁二酰亚胺(1.98g,11.10mmol,1.1eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌12小时，将反应液缓慢倒入水(100mL)中，用二氯甲烷萃取(100mL×2，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，得有机相并减压浓缩。粗产品经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝100：1～100：5)得到化合物WX023-1。
步骤2：化合物WX023-2的合成
25℃下，往圆底烧瓶中加入乙酸乙酯(100mL)，再缓慢加入WX023-1(5.60g,14.89mmol,1eq)和T3P(14.21g,22.33mmol,13.28mL,50％纯度,1.5eq)和DIPEA(3.85g,29.77mmol,5.19mL,2eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌1小时。将反应液缓慢倒入水(200mL)中，用乙酸乙酯萃取(200mL×2)，合并有机相并依次用水(200mL)、饱和食盐水(200mL)洗涤，得有机相并减压浓缩。粗产品使用硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：1)得到化合物WX023-2。
步骤3：化合物WX023-3的合成
25℃下，往圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，再缓慢加入WX023-2(1.80g,5.03mmol,1eq)，碘甲烷(5.71g,40.23mmol,2.50mL,8.01eq)和碳酸铯(3.60g,11.06mmol,2.2eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌1小时，将反应液缓慢倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯萃取(100mL×2，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩得粗品。经硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～3：1)得到化合物WX023-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.32(d,J＝2.0Hz,1H),7.61(d,J＝2.3Hz,1H),5.55(brd,J＝4.8Hz,1H),4.79-4.44(m,2H),4.34-4.11(m,1H),3.46(s,3H),1.40(s,9H)。
步骤4：化合物WX023-4的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入甲苯(50mL)，再缓慢加入WX023-3(1.35g,3.63mmol,1eq)和劳森试剂(2.20g,5.44mmol,1.5eq)，在氮气保护下，反应液于110℃下持续搅拌11小时；把反应液缓慢倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩得粗品；粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：1)得到化合物WX023-4。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.38(d,J＝2.0Hz,1H),7.65(d,J＝2.3Hz,1H),6.10(br d,J＝7.3Hz,1H),4.81-4.67(m,1H),4.58(dd,J＝6.1,9.4Hz,1H),4.23(dd,J＝9.5,11.3Hz,1H),3.87(s,3H),1.41(s,9H)。
步骤5：化合物WX023-5的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入二氯甲烷(40mL)，再缓慢加入WX023-4(980mg,2.52mmol,1eq)和三氟乙酸(6.16g,54.02mmol,4,21.40eq)，反应液于25℃下持续搅拌11小时；把反应液缓慢倒入饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)中，二氯甲烷萃取两次(100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相并减压浓缩得化合物WX023-5粗品，不经纯化直接用于下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.32(d,J＝2.0Hz,1H),7.59(d,J＝2.3Hz,1H),4.40(dd,J＝6.3,10.0Hz,1H),4.10(t,J＝10.8Hz,1H),3.88-3.71(m,4H)。
步骤6：化合物WX023的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入N,N-二甲基乙酰胺(5mL)，再缓慢加入WX023-5(288mg,999.43μmol,1eq)，T3P(954.00mg,1.50mmol,891.59μL,50％纯度,1.5eq),BB-8(406.16mg,2.00mmol,2eq)和DIPEA(387.50mg,3.00mmol,522.24μL,3eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌2小时；把反应液缓慢倒入水(100mL)中，乙酸乙酯萃取(100mL×2，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相并减压浓缩得粗品。粗品经制备HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：42％-72％,8min)得到化合物WX023。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.77(br d,J＝7.0Hz,1H),8.42(d,J＝2.0Hz,1H),8.04(s,1H),7.71(d,J＝2.0Hz,1H),7.45-7.33(m,3H),7.33-7.27(m,2H),5.40(s,2H),5.21(td,J＝6.7,11.3Hz,1H),4.77(dd,J＝6.3,9.5Hz,1H),4.33(dd,J＝9.8,11.0Hz,1H),3.90(s,3H)；LCMS m/z＝475.0[M+1]+。
实施例24：WX024
Figure GDA0003377327420000571
合成路线：
Figure GDA0003377327420000581
步骤1：化合物WX024-2的合成
圆底烧瓶中加入THF(100mL)，然后缓慢加入WX024-1(10g,50.22mmol,1eq)、BB-3-2(11.34g,55.24mmol,1.1eq)和碳酸铯(29.45g,90.39mmol,1.8eq)，65℃下持续搅16小时，将反应液倒入水(300mL)中，然后滴加2M稀盐酸调节pH为3，乙酸乙酯(500mL×2)萃取，有机相合并，饱和食盐水(50mL×2)洗涤，有机相减压得到化合物WX024-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.46(d,J＝1.8Hz,1H),8.20(dd,J＝2.0,8.8Hz,1H),7.12(d,J＝8.8Hz,1H),5.62(br d,J＝8.0Hz,1H),4.83-4.61(m,2H),4.45(dd,J＝3.0,9.3Hz,1H),3.93(s,3H),1.45(s,10H)。
步骤2：化合物WX024-3的合成
氢化瓶中加入MeOH(300mL)，然后缓慢加入WX024-2(25.8g,67.13mmol,1eq)、钯碳催化剂(2.6g,26.02mmol,10％纯度)，氩气置换三次，在H2(40Psi)氛围下，30℃持续搅拌24小时；TLC(石油醚：乙酸乙酯：醋酸＝1：1：0.1)显示有新点产生，反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到化合物WX024-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.50-7.44(m,1H),7.39(br s,1H),6.70(d,J＝8.5Hz,1H),6.53(br s,2H),6.00(br d,J＝7.5Hz,1H),4.73(br d,J＝7.0Hz,1H),4.43(br d,J＝8.5Hz,1H),4.31-4.24(m,1H),3.85(s,3H),1.41(s,9H)。
步骤3：化合物WX024-4的合成
圆底烧瓶中加入乙酸乙酯(200mL)，然后缓慢加入WX024-3、T3P(33.67g,52.91mmol,31.47mL,50％纯度,1.5eq)、DIEA(13.68g,105.83mmol,18.43mL,3eq)，25℃下持续搅拌2小时，向反应液中加入水(200mL)萃取分离，水相用乙酸乙酯(200mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(100mL×2)洗涤，有机相减压浓缩。粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：1)得到化合物WX024-4。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.15(br s,1H),7.80(dd,J＝2.0,8.5Hz,1H),7.73(d,J＝2.0Hz,1H),7.13(d,J＝8.3Hz,1H),5.62(br d,J＝5.3Hz,1H),4.71-4.59(m,2H),4.33-4.23(m,1H),3.95-3.89(m,3H),1.43(s,9H)。
步骤4：化合物WX024-5的合成
圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(200mL)，然后缓慢加入WX024-4(17g,50.54mmol,1eq)、碳酸铯(49.40g,151.63mmol,3eq)和碘甲烷(21.52g,151.63mmol,9.44mL,3eq)，25℃下持续搅拌2小时，向反应液中加入水(300mL)，乙酸乙酯(300mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(100mL×2)洗涤，有机相减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：1)得到化合物WX024-5。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.92-7.83(m,2H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),5.50(br d,J＝6.1Hz,1H),4.72-4.52(m,2H),4.28-4.17(m,1H),3.92(s,3H),3.42(s,3H),1.38(s,9H)。
步骤5：化合物WX024-6的合成
圆底烧瓶中加入甲苯(40mL)，然后缓慢加入WX024-5(4.01g,11.45mmol,1eq)、劳森试剂(5.09g,12.59mmol,1.1eq)和Boc2O(10.60g,48.55mmol,11.15mL,4.24eq)，升温至110℃，搅拌12小时，将反应液缓慢倒入饱和食盐水(30mL)中，乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(30mL×2)洗涤，有机相减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：1)得到化合物WX024-6。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.99-7.92(m,2H),7.21(d,J＝8.3Hz,1H),6.02(br d,J＝7.8Hz,1H),4.80-4.69(m,1H),4.53(dd,J＝6.3,9.5Hz,1H),4.22(dd,J＝9.5,11.3Hz,1H),3.94(s,3H),3.86(s,3H),1.46-1.33(m,9H)。
步骤6：化合物WX024-7的合成
圆底烧瓶中加入乙酸乙酯(10mL)，然后缓慢加入WX024-6(500mg,1.36mmol,1eq)和HCl/乙酸乙酯(4M,10mL,29.31eq)，25℃下持续搅拌2小时，反应液减压浓缩，得到化合物WX024-7。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.04-7.89(m,2H),7.28(br s,1H),4.93(br s,1H),4.63(br s,1H),4.44(br s,1H),3.93(s,3H),3.88-3.85(m,1H),3.81(s,3H)。
步骤7：化合物WX024-8的合成
向圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，然后缓慢加入WX024-7(245mg,809.18μmol,1eq,HCl)、BB-8(164.42mg,809.18μmol,1eq)、HATU(461.51mg,1.21mmol,1.5eq)和DIPEA(313.74mg,2.43mmol,422.83μL,3eq)，25℃下持续搅拌2小时，反应液倒入水(20mL)中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(5mL×2)洗涤，有机相减压浓缩得粗品；粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：100)得到化合物WX024-8。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.70(br d,J＝7.3Hz,1H),8.02-7.94(m,3H),7.42-7.34(m,3H),7.31-7.28(m,2H),5.39(s,2H),5.20(td,J＝6.8,11.0Hz,1H),4.72(dd,J＝6.5,9.4Hz,1H),4.31(t,J＝10.3Hz,1H),3.95(s,3H),3.89(s,3H)。
步骤8：化合物WX024的合成
圆底烧瓶中加入THF(4mL)和H2O(1mL)，然后缓慢加入WX024-8(50mg,110.74μmol,1eq)和LiOH·H2O(4.65mg,110.74μmol,12.79μL,1eq)，25℃下持续搅拌2小时，将反应液进行HPLC分离(色谱柱：Phenomenex Gemini-NX 80*40mm*3μm；流动相：[水(0.05％NH3·H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；乙腈％：11％-31％,8min)得到化合物WX024。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.78(br s,1H),8.18-7.82(m,3H),7.36(br s,5H),5.64-5.32(m,2H),5.26(br s,1H),4.72(br s,1H),4.32(br s,1H),3.86(br s,3H)；LCMS m/z＝438.1[M+1]+。
实施例25：WX025
Figure GDA0003377327420000601
合成路线：
Figure GDA0003377327420000611
步骤1：化合物WX025-2的合成
0℃氮气保护下，将NaH(2.78g,69.38mmol,60％纯度,2.2eq)加入至BB-3-2(7.12g,34.69mmol,1.1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(80mL)溶液中，反应2小时，反应置于冰水浴下，将WX025-1(5g,31.54mmol,1eq)入上述溶液中，反应液升至25℃反应12小时；将反应液缓慢加入冰水(100mL)中，乙酸乙酯(150mL×2)萃取，水相用1M HCl调节pH＝5～6，乙酸乙酯(150mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到化合物WX025-2。LCMS m/z＝328.1[M+1]+。
步骤2：化合物WX025-3的合成
将Pd/C(3g,5％纯度)加入至WX025-2(9g,27.50mmol,1eq)的乙酸乙酯(60mL)、甲醇(30mL)溶液中，H2置换三次后，在H2(15psi)氛围下25℃反应12小时；反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到化合物WX025-3。LCMS m/z＝298.1[M+1]+。
步骤3：化合物WX025-4的合成
将T3P(20.87g,32.79mmol,19.50mL,50％纯度,1.5eq)加入至DIPEA(7.06g,54.66mmol,9.52mL,2.5eq)、WX025-3(6.5g,21.86mmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(200mL)溶液中，25℃反应3小时。冰浴下向反应液中加入水(200mL)，乙酸乙酯(200mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩得到粗品；粗品经柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1～1：2)得到化合物WX025-4。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.37(br s,1H),8.20-8.31(m,2H),6.97(d,J＝5.70Hz,1H),5.69(br d,J＝4.38Hz,1H),4.54-4.71(m,2H),4.22-4.35(m,1H),1.45-1.52(m,9H)；LCMS m/z＝280.1[M+1]+。
步骤4：化合物WX025-5的合成
将碘甲烷(384.21mg,2.71mmol,168.51μL,1.05eq)加入至WX025-4(0.72g,2.58mmol,1eq)，碳酸铯(1.01g,3.09mmol,1.2eq)的四氢呋喃溶液中(14mL)，20℃反应12小时。向反应液中加入水(25mL)和乙酸乙酯(25mL)，分液，水相用乙酸乙酯(25mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩得到粗品。粗品经柱层析分离纯化(二氯甲烷：甲醇＝10：0～10：1)得到化合物WX025-5。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.50(s,1H),8.39(d,J＝5.27Hz,1H),7.06(d,J＝5.40Hz,1H),5.54(br d,J＝6.02Hz,1H),4.56-4.73(m,2H),4.25-4.37(m,1H),3.47(s,3H),1.41(s,9H)；LCMS m/z＝294.1[M+1]+。
步骤5：化合物WX025-6的合成
20℃下将劳森试剂(110.32mg,272.74μmol,0.8eq)加入至WX025-5(0.1g,340.93μmol,1eq)的甲苯溶液中(2mL)，90℃下反应12小时；反应液中加入乙酸乙酯(5mL)，过滤，滤液减压浓缩得到粗品；粗品经柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1～1：2)得到化合物WX025-6。LCMS m/z＝310.1[M+1]+。
步骤6：化合物WX025-7的合成
将HCl/乙酸乙酯(3mL)加入至WX025-6(53mg,171.31μmol,1eq)的乙酸乙酯中(3mL)，25℃反应2小时，反应减压浓缩得到化合物WX025-7。LCMS m/z＝210.1[M+1]+。
步骤7：化合物WX025的合成
将DIPEA(77.82mg,602.10μmol,104.87μL,3eq)，T3P(127.72mg,401.40μmol,119.36μL,2eq)加入至WX025-7(42mg,200.70μmol,1eq)，BB-8(61.17mg,301.05μmol,1.5eq)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，25℃反应2小时；向反应液中加入水(5mL)和乙酸乙酯(5mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(5mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩得到粗品；粗品经制备HPLC(色谱柱：Phenomenex Luna C18150mm*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；乙腈％：20％-50％,12min)分离得到化合物WX025。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.83(d,J＝8.16Hz,2H),8.64-8.65(m,1H),8.67(d,J＝7.72Hz,1H),8.54(d,J＝5.28Hz,1H),7.26-7.42(m,6H),5.49(s,2H),5.04(dt,J＝11.24,6.84Hz,1H),4.44-4.64(m,2H),3.83(s,3H)；LCMS m/z＝395.2[M+1]+。
实施例26：WX026
Figure GDA0003377327420000631
合成路线：
Figure GDA0003377327420000632
步骤1：化合物WX026-2的合成
向WX026-1(1g,4.63mmol,1eq)和苯酚(871.27mg,9.26mmol,814.27μL,2eq)的N,N-二甲基甲酰胺溶液中(10mL)加入碳酸钾(1.28g,9.26mmol,2eq)，溴化亚铜(66.40mg,462.89μmol,14.10μL,0.1eq)，乙酰丙酮(23.17mg,231.45μmol,23.77μL,0.05eq)，于90℃下继续搅拌10小时。向反应液加入水(100mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩得到化合物WX026-2。LCMS m/z＝230.2[M+1]+。
步骤2：化合物WX026-3的合成
WX026-2(0.45g,1.96mmol,1eq)的四氢呋喃中(5mL)加入LiOH·H2O(164.76mg,3.93mmol,2eq)的水溶液(1mL)，18℃下搅拌1小时；向反应液加入乙酸乙酯(20mL)，用2N盐酸调节pH＝2，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩得到化合物WX026-3。LCMS m/z＝216.1[M+1]+。
步骤3：化合物WX026的合成
18℃下向BB-4(0.3g,679.40μmol,1eq)的N,N-二甲基甲酰胺中(2mL)加入WX026-3(153.52mg,713.37μmol,1.05eq)，DIPEA(263.42mg,2.04mmol,355.01μL,3eq)，T3P(648.52mg,1.02mmol,606.09μL,50％纯度,1.5eq)，搅拌1小时。反应液经HPLC(色谱柱：Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；乙腈％：20％-50％,12min)分离纯化得到化合物WX026。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.84(s,1H),8.60(d,J＝7.89Hz,1H),8.36(dd,J＝1.32,4.82Hz,1H),7.70(dd,J＝1.53,8.11Hz,1H),7.25-7.46(m,5H),5.49(s,2H),4.85(td,J＝7.67,11.40Hz,1H),4.63-4.75(m,1H),4.51(dd,J＝7.45,9.65Hz,1H),4.03(br s,3H)；LCMS m/z＝407.1[M+1]+。
实施例27：WX027
Figure GDA0003377327420000641
合成路线：
Figure GDA0003377327420000642
步骤1：化合物WX027的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入N,N-二甲基乙酰胺(5mL)，再缓慢加入BB-4(20mg,45.29μmol,1eq)、T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50％纯度,1.5eq)、BB-16(15.85mg,67.94μmol,1.5eq)和DIPEA(17.56mg,135.88μmol,23.67μL,3eq)，氮气保护下反应液于25℃下持续搅拌2小时；反应液缓慢倒入水(100mL)中，乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩得粗品；粗品经制备HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：42％-72％,8min)得到化合物WX027。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.78(br d,J＝7.0Hz,1H),8.47-8.25(m,1H),8.08(s,1H),7.60-7.50(m,1H),7.35(t,J＝7.9Hz,1H),7.32-7.26(m,2H),6.96(t,J＝7.4Hz,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),5.38(s,2H),5.20(td,J＝6.7,11.4Hz,1H),4.77(dd,J＝6.3,9.5Hz,1H),4.38-4.23(m,1H),3.92(s,3H),3.84(s,3H)；LCMS m/z＝425.1[M+1]+。
实施例28：WX028
Figure GDA0003377327420000643
合成路线：
Figure GDA0003377327420000651
步骤1：化合物WX028-2的合成
圆底烧瓶中加入MeCN(80mL)，然后缓慢加入WX028-1(4g,17.63mmol,1eq)，溶解后加入2-(2-溴乙氧基)四氢吡喃(4.42g,21.16mmol,3.21mL,1.2eq)和DIPEA(2.51g,19.40mmol,3.38mL,1.1eq)，升温至90℃并持续搅拌3小时；向反应液中加入水(100mL)，乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(30mL×2)洗涤，有机相减压浓缩得粗品；粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：1)，得到化合物WX028-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝4.55(br s,1H),4.34(t,J＝5.3Hz,2H),4.12-4.06(m,1H),3.79(td,J＝5.4,10.8Hz,1H),3.64-3.53(m,1H),3.50-3.41(m,1H),1.76-1.58(m,2H),1.57-1.43(m,4H)。
步骤2：化合物WX028-3的合成
圆底烧瓶中加入THF(50mL)，然后缓慢加入WX028-2(4.99g,14.06mmol,1eq)，降温至-78℃加入正丁基锂(2.5M,6.75mL,1.2eq)，搅拌1小时，缓慢加入苯甲醛(2.98g,28.11mmol,2.84mL,2eq)，-78℃下搅拌0.5小时，升温至-50℃并持续搅拌0.5小时；反应完成后，将反应液倒入饱和氯化铵(200mL)与乙酸乙酯(200mL)混合溶液中，分液，水相用乙酸乙酯(200mL)萃取，合并有机相，饱和食盐水(50mL×2)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶过柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：1)得到化合物WX028-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.45-7.29(m,5H),6.09(d,J＝5.8Hz,1H),4.51(br s,1H),4.34(ddq,J＝3.5,5.5,7.2Hz,1H),4.26-4.15(m,1H),4.07-3.97(m,1H),3.78-3.56(m,2H),3.47(dt,J＝5.9,10.7Hz,1H),1.85-1.64(m,2H),1.52(br d,J＝6.3Hz,4H)。
步骤3：化合物WX028-4的合成
圆底烧瓶中加入甲苯(50mL)，然后缓慢加入WX028-3(4.7g,12.30mmol,1eq)和TsOH·H2O(3.04g,15.98mmol,1.3eq)，110℃下持续搅拌5小时，向反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水(20mL×2)洗涤，有机相减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：1)得到化合物WX028-4。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.45-7.34(m,5H),5.87(s,1H),4.33-4.27(m,2H),4.19-4.06(m,2H)。
步骤4：化合物WX028-5的合成
高压釜中加入EtOH(20mL)，然后缓慢加入WX028-4(500mg,1.78mmol,1eq)，Pd(dppf)Cl2(261.21mg,356.99μmol,0.2eq)和TEA(1.81g,17.85mmol,2.48mL,10eq)，氩气置换三次，在CO(1MPa)保护下，100℃下持续搅拌24小时；向反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水(10mL×2)洗涤，有机相减压浓缩得粗品。粗品进行制备HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：42％-72％,8min)得到化合物WX028-5。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.47-7.31(m,5H),6.02-5.93(m,1H),4.54-4.38(m,4H),4.34-4.25(m,1H),4.19-4.10(m,1H),1.42(t,J＝7.1Hz,3H)。
步骤5：化合物WX028-6的合成
圆底烧瓶中加入THF(4mL)和H2O(1mL)，然后缓慢加入WX028-5(260mg,951.38μmol,1eq)和LiOH·H2O(119.77mg,2.85mmol,3eq)，25℃下持续搅拌1小时；反应液减压浓缩，旋干THF，滴加1M的HCl水溶液调pH为3，过滤得到产物WX028-6。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.40(s,5H),6.00(s,1H),4.50-4.40(m,1H),4.40-4.29(m,2H),4.26-4.11(m,1H)。
步骤6：化合物WX028-7的合成
圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，然后缓慢加入WX028-6(30mg,122.33μmol,1eq)、BB-4(54.02mg,122.33μmol,1eq)、T3P(116.77mg,183.50μmol,109.13μL,50％纯度,1.5eq)和DIPEA(47.43mg,366.99μmol,63.92μL,3eq)，25℃下持续搅拌2小时；反应液用制备HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：35％-65％,8min)得到化合物WX028的消旋体，再进SFC手性拆分(色谱柱：DAICELCHIRALCEL OD(250mm*30mm,10μm)；流动相：[Neu-ETOH]；乙醇％：45％-45％,min)得到活性异构体WX028。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.65(br d,J＝7.1Hz,1H),8.37(br d,J＝3.3Hz,1H),7.56(br d,J＝7.8Hz,1H),7.48-7.36(m,5H),7.32-7.27(m,1H),5.99(s,1H),5.33-5.16(m,1H),4.74(dd,J＝6.4,9.5Hz,1H),4.40(br d,J＝4.3Hz,2H),4.36-4.24(m,2H),4.19-4.07(m,1H),3.92(s,3H)；LCMS m/z＝437.1[M+1]+。
实施例29：WX029
Figure GDA0003377327420000671
合成路线：
Figure GDA0003377327420000672
步骤1：化合物WX029-2的合成
25℃下圆底烧瓶中加入MeCN(20mL)，再缓慢加入WX029-1(2.02g,15.89mmol,1eq)、K2CO3(4.39g,31.79mmol,2eq)和3-氟苄氯(2.76g,19.07mmol,2.28mL,1.2eq)，在氮气保护下，反应液于60℃下持续搅拌12小时；反应液缓慢倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯萃取(100mL×2，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：20～100：75)得到化合物WX029-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.14(s,1H),7.36(dt,J＝5.9,8.0Hz,1H),7.11-7.03(m,2H),6.99(brd,J＝9.0Hz,1H),5.42(s,2H),4.14-3.89(m,3H)。
步骤2：化合物WX029-3的合成
25℃下圆底烧瓶中加入THF(14mL)和H2O(2mL)，再缓慢加入WX029-2和LiOH·H2O(642.21mg,15.31mmol,3eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌1小时；反应液用稀盐酸(1M)调节pH至6～7，过滤并干燥析出物得到化合物WX029-3。
步骤3：化合物WX029的合成
25℃下圆底烧瓶中加入N,N-二甲基乙酰胺(5mL)，再缓慢加入WX029-3(15.03mg,67.94umol,1.5eq)、T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50％纯度,1.5eq)、BB-4(15.03mg,67.94μmol,1.5eq)和DIPEA(17.56mg,135.87μmol,23.67μL,3eq)，在氮气保护下，持续搅拌2小时；反应液缓慢倒入水(100mL)中，乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经制备HPLC(色谱柱：XtimateC18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：35％-65％,8min)得到产物WX029。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.83(br d,J＝7.0Hz,1H),8.37(d,J＝3.8Hz,1H),8.10(s,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.40-7.27(m,2H),7.15-6.87(m,3H),5.40(s,2H),5.29-5.07(m,1H),4.79(dd,J＝6.3,9.3Hz,1H),4.32(t,J＝10.3Hz,1H),3.93(s,3H)；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ＝-111.33(s,1F)；LCMS m/z＝413.0[M+1]+。
实施例30：WX030
Figure GDA0003377327420000681
合成路线：
Figure GDA0003377327420000682
步骤1：化合物WX030-2的合成
25℃下圆底烧瓶中加入MeCN(20mL)，再缓慢加入WX030-1(2.04g,16.05mmol,1eq)、K2CO3(4.44g,32.10mmol,2eq)和4-甲氧基氯化苄(3.02g,19.26mmol,2.62mL,1.2eq)，在氮气保护下，反应液于60℃下持续搅拌12小时；反应液缓慢倒入水(100mL)中，乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：20～100：75)得到化合物WX030-2。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.05(s,1H),7.27(d,J＝8.8Hz,2H),6.98-6.87(m,2H),5.43-5.26(m,2H),4.03-3.97(m,3H),3.82(s,3H)。
步骤2：化合物WX030-3的合成
25℃下圆底烧瓶中加入THF(14mL)和H2O(2mL)，再缓慢加入WX030-2(1.5g,6.07mmol,1eq)和LiOH·H2O(763.68mg,18.20mmol,3eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌1小时，反应液用稀盐酸(1M)调节pH至6～7，过滤并干燥析出物得到化合物WX030-3。
步骤3：化合物WX030的合成
25℃下圆底烧瓶中加入N,N-二甲基乙酰胺(5mL)，再缓慢加入WX030-3(15.84mg,67.94μmol,1.5eq)、T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50％纯度,1.5eq)、BB-4(15.84mg,67.94μmol,1.5eq)和DIPEA(17.56mg,135.87μmol,23.67μL,3eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌2小时；反应液缓慢倒入水(100mL)中，乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经制备HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：35％-65％,8min)得到产物WX030。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.80(br s,1H),8.37(br s,1H),7.98(br s,1H),7.56(brs,1H),7.38-7.28(m,1H),7.26(br s,2H),6.91(br s,2H),5.41-5.10(m,3H),4.78(br s,1H),4.31(br s,1H),3.98-3.73(m,6H)；LCMS m/z＝425.1[M+1]+。
实施例31：WX031
Figure GDA0003377327420000691
合成路线：
Figure GDA0003377327420000692
步骤1：化合物WX031-2的合成
圆底烧瓶中加入MeCN(20mL)，然后加入WX031-1(1.5g,11.80mmol,1eq)、K2CO3(2.45g,17.70mmol,1.5eq)和4-氟代氯化苄(1.88g,12.98mmol,1.55mL,1.1eq)，50℃下持续搅拌12小时；反应倒入水(50mL)中，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(10mL×2)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：100)得到化合物WX031-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.09(s,1H),7.30(dd,J＝5.3,8.3Hz,2H),7.08(t,J＝8.5Hz,2H),5.39(s,2H),4.00(s,3H)。
步骤2：化合物WX031-3的合成
圆底烧瓶中加入THF(8mL)和H2O(2mL)，然后加WX031-2(1.06g,4.52mmol,1eq)和LiOH·H2O(569.16mg,13.56mmol,3eq)，25℃下持续搅拌2小时；反应液减压浓缩，除去THF，向反应液中滴加1M稀盐酸溶液调节pH小于3，过滤得到化合物WX031-3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.79(s,1H),7.39(dd,J＝5.5,8.8Hz,2H),7.25-7.17(m,2H),5.47(s,2H)。
步骤3：化合物WX031的合成
圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，然后缓慢加入WX031-3(18.03mg,81.53μmol,1.2eq)、BB-4(30mg,67.94μmol,1eq)，DIPEA(26.34mg,203.82μmol,35.50μL,3eq)和T3P(64.85mg,101.91μmol,60.61μL,50％purity,1.5eq)，25℃下持续搅拌2小时；反应液直接进行HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：40％-70％,8min)得到化合物WX031。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.81(br d,J＝7.3Hz,1H),8.37(dd,J＝1.4,4.6Hz,1H),8.06(s,1H),7.56(dd,J＝1.4,7.9Hz,1H),7.33-7.27(m,3H),7.07(t,J＝8.5Hz,2H),5.37(s,2H),5.20(td,J＝6.7,11.2Hz,1H),4.78(dd,J＝6.4,9.4Hz,1H),4.32(dd,J＝9.7,10.9Hz,1H),3.93(s,3H)；LCMS m/z＝413.1[M+1]+。
实施例32：WX032
Figure GDA0003377327420000701
合成路线：
Figure GDA0003377327420000711
步骤1：化合物WX032-2的合成
MeCN(20mL)中加入WX032-1(1.5g,11.80mmol,1eq)、3-氯甲基苯甲腈(1.97g,12.98mmol,1.72mL,1.1eq)和K2CO3(2.45g,17.70mmol,1.5eq)，反应液在50℃下持续搅拌12小时；反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(20mL×2)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：100)得到化合物WX032-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.21(s,1H),7.67(t,J＝4.3Hz,1H),7.58(s,1H),7.52(d,J＝4.8Hz,2H),5.47(s,2H),4.01(s,3H)。
步骤2：化合物WX032-3的合成
圆底烧瓶中加入THF(8mL)和H2O(2mL)，然后加入WX032-2(1.4g,5.78mmol,1eq)和LiOH·H2O(727.53mg,17.34mmol,3eq)。反应液在25℃下持续搅拌2小时；反应液减压浓缩，除去THF，向反应液中滴加1M稀盐酸溶液调节pH小于3，过滤得到目标化合物WX032-3。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.83-8.80(m,1H),7.86-7.80(m,2H),7.68-7.57(m,2H),5.59-5.52(m,2H)。
步骤3：化合物WX032的合成
圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，然后缓慢加入WX032-3(15.50mg,67.94μmol,1eq)，BB-4(30mg,67.94μmol,1eq)，DIPEA(26.34mg,203.82μmol,35.50μL,3eq)和T3P(64.85mg,101.91μmol,60.61μL,50％纯度,1.5eq)，在25℃下持续搅2小时，反应液直接HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：35％-65％,8min)得到化合物WX032。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.85(br d,J＝7.3Hz,1H),8.37(d,J＝3.3Hz,1H),8.17(s,1H),7.65(br d,J＝2.8Hz,1H),7.60-7.55(m,2H),7.53-7.47(m,2H),7.29(dd,J＝4.6,7.9Hz,1H),5.45(s,2H),5.26-5.15(m,1H),4.79(dd,J＝6.3,9.5Hz,1H),4.38-4.28(m,1H),3.93(s,3H)；LCMS m/z＝420.1[M+1]+。
实施例33：WX033
Figure GDA0003377327420000721
合成路线：
Figure GDA0003377327420000722
步骤1：化合物WX033-2的合成
圆底烧瓶中加入MeCN(20mL)，加入WX033-1(1.5g,11.80mmol,1eq)，3-甲基氯化苄(1.83g,12.98mmol,1.72mL,1.1eq)和K2CO3(2.45g,17.70mmol,1.5eq)，在50℃下持续搅拌12小时，反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(20mL×2)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：100)得到化合物WX033-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.08(s,1H),7.33-7.27(m,1H),7.18(d,J＝7.6Hz,1H),7.10(br d,J＝1.8Hz,2H),5.38(s,2H),4.05-3.97(m,3H),2.38-2.31(m,3H)。
步骤2：化合物WX033-3的合成
圆底烧瓶中加入THF(8mL)和H2O(2mL)，然后加入WX033-2(1.6g,6.92mmol,1eq)和LiOH·H2O(870.95mg,20.76mmol,3eq)，在25℃下持续搅拌2小时，反应液减压浓缩，除去THF，向反应液中滴加1M稀盐酸溶液调节pH小于3，过滤得到化合物WX033-3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝13.28(br s,1H),8.79(s,1H),7.30-7.23(m,1H),7.17-7.07(m,3H),5.43(s,2H),2.29(s,3H)。
步骤3：化合物WX033的合成
圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，然后缓慢加入WX033-3(17.71mg,81.53μmol,1.2eq)，BB-4(30mg,67.94μmol,1eq)，DIPEA(26.34mg,203.82μmol,35.50μL,3eq)和T3P(64.85mg,101.91μmol,60.61μL,50％纯度,1.5eq)，在25℃下持续搅拌2小时；反应液直接HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：37％-67％,8min)得到化合物WX033。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.81(br d,J＝7.0Hz,1H),8.37(d,J＝3.3Hz,1H),8.03(s,1H),7.57(d,J＝6.8Hz,1H),7.31-7.27(m,2H),7.20-7.15(m,1H),7.11-7.07(m,2H),5.36(s,2H),5.22(td,J＝6.8,11.5Hz,1H),4.79(dd,J＝6.4,9.4Hz,1H),4.36-4.27(m,1H),3.93(s,3H),2.34(s,3H)；LCMS m/z＝409.1[M+1]+。
实施例34：WX034
Figure GDA0003377327420000731
合成路线：
Figure GDA0003377327420000732
步骤1：化合物WX034-2的合成。
单口瓶中加入MeCN(20mL)，随后加入1-氯甲基-3,5-二氟苯(2.11g,12.98mmol,573.45μL,1.1eq)，WX034-1(1.5g,11.80mmol,1eq)和K2CO3(2.45g,17.70mmol,1.5eq)，在50℃下持续搅拌12小时；TLC(石油醚：乙酸乙酯＝1：2)显示有新点产生；反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(20mL×2)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：100)得到化合物WX034-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.22(s,1H),6.92-6.77(m,3H),5.50-5.38(m,2H),4.11-3.99(m,3H)。
步骤2：化合物WX034-3的合成
圆底烧瓶中加入THF(8mL)和H2O(2mL)，然后加入WX034-2(1g,3.95mmol,1eq)和LiOH·H2O(497.15mg,11.85mmol,3eq)，在25℃下持续搅拌2小时；反应液减压浓缩，除去THF，向残余液中滴加1M稀盐酸溶液调节pH小于3，过滤得到化合物物WX034-3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.80(s,1H),7.24(br t,J＝9.4Hz,1H),7.07(br d,J＝6.3Hz,2H),5.52(s,2H)。
步骤3：化合物WX034的合成。
圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，然后缓慢加入WX034-3(19.50mg,81.53μmol,1.2eq)、BB-4(30mg,67.94μmol,1eq)，DIPEA(26.34mg,203.82μmol,35.50μL,3eq)和T3P(64.85mg,101.91μmol,60.61μL,50％纯度,1.5eq)，在25℃下持续搅拌2小时；反应液直接HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：37％-67％,8min)得到化合物WX034。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.85(br d,J＝7.0Hz,1H),8.37(dd,J＝1.5,4.6Hz,1H),8.16(s,1H),7.57(dd,J＝1.5,8.0Hz,1H),7.29(dd,J＝4.7,7.9Hz,1H),6.85-6.73(m,3H),5.38(s,2H),5.21(td,J＝6.6,11.2Hz,1H),4.79(dd,J＝6.4,9.5Hz,1H),4.33(dd,J＝9.6,11.0Hz,1H),3.93(s,3H)；LCMS m/z＝431.1[M+1]+。
实施例35：WX035
Figure GDA0003377327420000741
合成路线：
Figure GDA0003377327420000742
步骤1：化合物WX035-2的合成
MeCN(20mL)中加入WX035-1(1.5g,11.80mmol,1eq)、1-氯甲基-2-甲苯(1.83g,12.98mmol,1.72mL,1.1eq)和K2CO3(2.45g,17.70mmol,1.5eq)，在50℃下持续搅拌12小时；反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(20mL×2)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：100)得到化合物WX035-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.89(s,1H),7.36-7.29(m,1H),7.26-7.16(m,3H),5.42(s,2H),4.00(s,3H),2.27(s,3H)。
步骤2：化合物WX035-3的合成
圆底烧瓶中加入THF(8mL)和H2O(2mL)，然后加入WX035-2(1.6g,6.92mmol,1eq)和LiOH·H2O(870.95mg,20.76mmol,3eq)，在25℃下持续搅拌2小时；反应液减压浓缩，除去THF，向残余液中滴加1M稀盐酸溶液调节pH小于3，过滤得到WX035-3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝13.28(br s,1H),8.79(s,1H),7.30-7.23(m,1H),7.17-7.07(m,3H),5.43(s,2H),2.29(s,3H)。
步骤3：化合物WX035的合成
圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，然后缓慢加入WX035-3(17.71mg,81.53μmol,1.2eq)、BB-4(30mg,67.94μmol,1eq)、DIPEA(26.34mg,203.82μmol,35.50μL,3eq)和T3P(64.85mg,101.91μmol,60.61μL,50％purity,1.5eq)，在25℃下持续搅拌2小时；反应液直接HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：37％-67％,8min)得到化合物WX035。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.81(br d,J＝7.0Hz,1H),8.37(d,J＝4.5Hz,1H),7.86(s,1H),7.57(d,J＝7.8Hz,1H),7.34-7.27(m,2H),7.26-7.15(m,3H),5.40(s,2H),5.22(td,J＝6.7,11.2Hz,1H),4.79(dd,J＝6.4,9.4Hz,1H),4.38-4.26(m,1H),3.93(s,3H),2.29(s,3H)；LCMS m/z＝409.1[M+1]+。
实施例36：WX036
Figure GDA0003377327420000751
合成路线：
Figure GDA0003377327420000761
步骤1：化合物WX036-2的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入MeCN(20mL)，再缓慢加入WX036-1(2.02g,15.89mmol,1eq)、K2CO3(4.39g,31.79mmol,2eq)和1-氯-3-氯甲基苯(3.07g,19.07mmol,2.42mL,1.2eq)，在氮气保护下，反应液于60℃下持续搅拌12小时；反应液缓慢倒入水(100mL)中，乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：20～100：75)得到化合物WX036-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.15(s,1H),7.35-7.26(m,3H),7.17(d,J＝6.8Hz,1H),5.40(s,2H),4.04-3.93(m,3H)。
步骤2：化合物WX036-3的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入THF(14mL)和H2O(2mL)，再缓慢加入WX036-2(1.80g,7.15mmol,1eq)和LiOH·H2O(900.33mg,21.46mmol,3eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌1小时；反应液用稀盐酸(1M)调节pH至6～7，过滤析出物得到化合物WX036-3。
步骤3：化合物WX036的合成。
25℃下，圆底烧瓶中加入N,N-二甲基乙酰胺(5mL)，再缓慢加入BB-4(20mg,45.29μmol,1eq)、T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50％纯度,1.5eq)、WX036-3(16.14mg,67.94μmol,1.5eq)和DIPEA(17.56mg,135.87μmol,23.67μL,3eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌2小时；反应液缓慢倒入水(100mL)中，乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经制备HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：35％-65％,8min)得到化合物WX036。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.95-8.69(m,1H),8.37(br d,J＝3.1Hz,1H),8.10(s,1H),7.68-7.47(m,1H),7.38-7.27(m,3H),7.26-7.20(m,1H),7.16(br d,J＝7.0Hz,1H),5.38(s,2H),5.26-5.10(m,1H),4.79(dd,J＝6.5,9.4Hz,1H),4.41-4.20(m,1H),3.93(s,3H)；LCMS m/z＝429.0[M+1]+。
实施例37：WX037
Figure GDA0003377327420000771
合成路线：
Figure GDA0003377327420000772
步骤1：化合物WX037-2的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入MeCN(20mL)，再缓慢加入WX037-1(2.03g,15.97mmol,1eq)和K2CO3(4.41g,31.94mmol,2eq)和1-溴-3-氯甲基苯(3.94g,19.17mmol,241.82μL,1.2eq)，在氮气保护下，反应液于60℃下持续搅拌12小时；反应液缓慢倒入水(100mL)中，乙酸乙酯萃取100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)和饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：20～100：75)得到化合物WX037-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.14(s,1H),7.59-7.38(m,2H),7.30-7.26(m,1H),7.25-7.20(m,1H),5.39(s,2H),4.01(s,3H)。
步骤2：化合物WX037-3的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入THF(14mL)和H2O(2mL)，再缓慢加入WX037-2(2.0g,6.75mmol,1eq)和LiOH·H2O(850.20mg,20.26mmol,3eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌1小时。反应液用稀盐酸(1M)调节pH至6～7，过滤析出物得到化合物WX037-3。
步骤3：化合物WX037的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入N,N-二甲基乙酰胺(5mL)，再缓慢加入BB-4(20mg,45.29μmol,1eq)、T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50％纯度，1.5eq)、WX037-3(19.16mg,67.94μmol,1.5eq)和DIPEA(17.56mg,135.87μmol,23.67μL,3eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌2小时。反应液缓慢倒入水(100mL)中，乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经制备HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：35％-65％,8min)得到化合物WX037。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.83(br d,J＝6.4Hz,1H),8.37(br d,J＝4.5Hz,1H),8.10(s,1H),7.66-7.27(m,4H),7.25-7.15(m,2H),5.37(s,2H),5.26-5.06(m,1H),4.79(br dd,J＝6.5,9.1Hz,1H),4.33(br t,J＝10.3Hz,1H),3.93(s,3H)；LCMS m/z＝474.8[M+1]+。
实施例38：WX038
Figure GDA0003377327420000781
合成路线：
Figure GDA0003377327420000782
步骤1：化合物WX038-2的合成
圆底烧瓶中加入MeCN(20mL)，然后加入1-氯甲基-4-三氟甲氧基苯(2.73g,12.98mmol,517.03μL,1.1eq)，WX038-1(1.5g,11.80mmol,1eq)和K2CO3(2.45g,17.70mmol,1.5eq)，50℃下持续搅拌12小时，反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL×2)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：100)得到化合物WX038-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.17(s,1H),7.36(d,J＝8.5Hz,2H),7.27-7.23(m,2H),5.50-5.40(m,2H),4.08-3.96(m,3H)。
步骤2：化合物WX038-3的合成
圆底烧瓶中加入THF(16mL)和H2O(4mL)，然后加入WX038-2(1.9g,6.31mmol,1eq)和LiOH·H2O(794.01mg,18.92mmol,3eq)，25℃下持续搅拌2小时；反应液减压浓缩，除去THF，向残余液中滴加1M稀盐酸溶液调节pH小于3，过滤析出物得到化合物WX038-3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.81(s,1H),7.51-7.33(m,4H),5.53(s,2H)。
步骤3：化合物WX038的合成
圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，然后缓慢加入WX038-3(23.41mg,81.53μmol,1.2eq)、BB-4(30mg,67.94μmol,1eq)、DIPEA(26.34mg,203.82μmol,35.50μL,3eq)和T3P(64.85mg,101.91μmol,60.61μL,50％纯度,1.5eq)，25℃下持续搅拌2小时；反应液直接HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：40％-70％,8min)得到化合物WX038。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.84(br d,J＝7.3Hz,1H),8.38(dd,J＝1.5,4.5Hz,1H),8.11(s,1H),7.58(dd,J＝1.5,8.0Hz,1H),7.34(d,J＝8.8Hz,2H),7.32-7.29(m,1H),7.27(s,5H),7.26-7.22(m,2H),5.42(s,2H),5.28-5.15(m,1H),4.80(dd,J＝6.5,9.5Hz,1H),4.37-4.29(m,1H),3.94(s,3H)；LCMS m/z＝479.1[M+1]+。
实施例39：WX039
Figure GDA0003377327420000791
合成路线：
Figure GDA0003377327420000792
步骤1：化合物WX039-2的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入MeCN(20mL)，再缓慢加入WX039-1(2.0g,15.74mmol,1eq)、K2CO3(4.35g,31.48mmol,2eq)和1-氯甲基-4-甲基苯(2.66g,18.89mmol,2.48mL,1.2eq)，在氮气保护下，反应液于60℃下持续搅拌12小时；反应液缓慢倒入水(100mL)中，乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：20～100：75)得到化合物WX039-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.04(s,1H),7.23-7.17(m,4H),5.37(s,2H),4.00(s,3H),2.47-2.25(m,3H)。
步骤2：化合物WX039-3的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入THF(14mL)和H2O(2mL)，再缓慢加入WX039-2(1.5g,6.49mmol,1eq)和LiOH·H2O(816.52mg,19.46mmol,3eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌1小时；反应液用稀盐酸(1M)调节pH至6～7，过滤收集析出物得到化合物WX039-3。
步骤3：化合物WX039的合成
25℃下，向N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中加入BB-4(20mg,45.29μmol,1eq)和T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50％纯度,1.5eq)、WX039-3(14.76mg,67.94μmol,1.5eq)和DIPEA(17.56mg,135.87μmol,23.67μL,3eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌2小时；反应液缓慢倒入水(100mL)中，乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经制备HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：40％-70％,8min)得到产物WX039。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.80(br d,J＝7.3Hz,1H),8.37(dd,J＝1.5,4.5Hz,1H),8.00(s,1H),7.56(dd,J＝1.5,7.8Hz,1H),7.28(dd,J＝4.8,8.0Hz,1H),7.19(s,4H),5.35(s,2H),5.21(td,J＝6.8,11.0Hz,1H),4.78(dd,J＝6.4,9.4Hz,1H),4.32(dd,J＝9.7,11.2Hz,1H),3.93(s,3H),2.63-2.13(m,3H)；LCMS m/z＝409.1[M+1]+。
实施例40：WX040
Figure GDA0003377327420000801
合成路线：
Figure GDA0003377327420000811
步骤1：化合物WX040-2的合成
圆底烧瓶中加入THF(100mL)，然后缓慢加入WX040-1(10g,50.22mmol,1eq)、BB-3-2(11.34g,55.24mmol,1.1eq)和碳酸铯(29.45g,90.39mmol,1.8eq)，65℃下持续搅拌16小时；TLC(石油醚：乙酸乙酯：醋酸＝1：1：0.1)显示原料反应完全；反应液倒入水(300mL)中，然后滴加2M得HCl调节pH约为3，加入乙酸乙酯(500mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(50mL×2)洗涤，有机相减压浓缩得到WX040-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.46(d,J＝1.8Hz,1H),8.20(dd,J＝2.0,8.8Hz,1H),7.12(d,J＝8.8Hz,1H),5.62(br d,J＝8.0Hz,1H),4.83-4.61(m,2H),4.45(dd,J＝3.0,9.3Hz,1H),3.93(s,3H),1.45(s,10H)。
步骤2：化合物WX040-3的合成
氢化瓶中加入MeOH(300mL)，然后缓慢加入WX040-2(25.8g,67.13mmol,1eq)和Pd/C(2.6g,26.02mmol,10％纯度)，氩气置换三次，然后在H2(40Psi)保护下，30℃持续搅拌24小时；TLC(石油醚：乙酸乙酯：醋酸＝1：1：0.1)显示有新点产生；反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到化合物WX040-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.50-7.44(m,1H),7.39(br s,1H),6.70(d,J＝8.5Hz,1H),6.53(br s,2H),6.00(br d,J＝7.5Hz,1H),4.73(br d,J＝7.0Hz,1H),4.43(br d,J＝8.5Hz,1H),4.31-4.24(m,1H),3.85(s,3H),1.41(s,9H)。
步骤3：化合物WX040-4的合成
圆底烧瓶中加入乙酸乙酯(200mL)，然后缓慢加入WX040-3(12.5g,35.28mmol,1eq)，T3P(33.67g,52.91mmol,31.47mL,50％purity,1.5eq)和DIPEA(13.68g,105.83mmol,18.43mL,3eq)，25℃下持续搅拌2小时。反应液中加入水(200mL)，分液；水相用乙酸乙酯(200mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(100mL×2)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯从100：1～1：1)得到化合物WX040-4。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.15(br s,1H),7.80(dd,J＝2.0,8.5Hz,1H),7.73(d,J＝2.0Hz,1H),7.13(d,J＝8.3Hz,1H),5.62(br d,J＝5.3Hz,1H),4.71-4.59(m,2H),4.33-4.23(m,1H),3.95-3.89(m,3H),1.43(s,9H)。
步骤4：化合物WX040-5的合成
圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(200mL)，然后缓慢加入WX040-4为(17g,50.54mmol,1eq)、碳酸铯(49.40g,151.63mmol,3eq)和碘甲烷(21.52g,151.63mmol,9.44mL,3eq)，25℃下持续搅拌2小时；反应液中加入水(300mL)，乙酸乙酯(300mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(100mL×2)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：1)得到化合物WX040-5。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.92-7.83(m,2H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),5.50(br d,J＝6.1Hz,1H),4.72-4.52(m,2H),4.28-4.17(m,1H),3.92(s,3H),3.42(s,3H),1.38(s,9H)。
步骤5：化合物WX040-6的合成
甲苯(40mL)中缓慢加入WX040-5(4.01g,11.45mmol,1eq)，劳森试剂(5.09g,12.59mmol,1.1eq)和Boc2O(10.60g,48.55mmol,11.15mL,4.24eq)，升温至110℃下持续搅拌12小时；反应液缓慢倒入饱和食盐水(30mL)，乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1～1：1)得到化合物WX040-6。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.99-7.92(m,2H),7.21(d,J＝8.3Hz,1H),6.02(br d,J＝7.8Hz,1H),4.80-4.69(m,1H),4.53(dd,J＝6.3,9.5Hz,1H),4.22(dd,J＝9.5,11.3Hz,1H),3.94(s,3H),3.86(s,3H),1.46-1.33(m,9H)。
步骤6：化合物WX040-7的合成
圆底烧瓶中加入THF(8mL)和H2O(2mL)，然后缓慢加入WX040-6(800mg,2.18mmol,1eq)和LiOH·H2O(183.23mg,4.37mmol,2eq)，25℃下持续搅拌2小时。反应液中滴加稀盐酸调节pH<3，过滤收集析出物得到化合物WX040-7。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.89-7.79(m,1H),7.25-7.20(m,1H),7.02-6.95(m,1H),6.17-6.02(m,1H),4.88-4.74(m,1H),4.56(dd,J＝6.4,9.7Hz,1H),4.31-4.17(m,1H),3.85(s,3H),1.41(s,9H)。
步骤7：化合物WX040-8的合成
圆底烧瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，然后缓慢加入WX040-7(200mg,567.53μmol,1eq)、NH4Cl(91.07mg,1.70mmol,3eq)、HATU(647.37mg,1.70mmol,253.15μL,3.00eq)和DIPEA(366.75mg,2.84mmol,494.27μL,5eq)，25℃下持续搅拌2小时；反应液直接HPLC分离(色谱柱：Xtimate C18 100*30mm*3μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；乙腈％：30％-60％,8min)得到化合物WX040-8。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.82(s,1H),7.64(br d,J＝8.3Hz,1H),7.22(d,J＝8.3Hz,1H),6.98(s,2H),5.01(br s,1H),4.86-4.66(m,1H),4.52(dd,J＝6.3,9.5Hz,1H),4.30-4.11(m,1H),3.86(s,3H),1.40(s,9H)。
步骤8：化合物WX040-9的合成
圆底烧瓶中加入乙酸乙酯(10mL)，然后缓慢加入WX040-8(40mg,113.82μmol,1eq)和HCl/乙酸乙酯(4M,10.00mL,351.42eq)，25℃下持续搅拌2小时。反应液减压浓缩得到化合物WX040-9。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.16-8.04(m,2H),7.91(d,J＝8.5Hz,1H),7.57(s,1H),7.37(d,J＝8.3Hz,1H),4.62-4.41(m,3H),3.82(s,3H)。
步骤9：化合物WX040的合成
DMSO(1mL)中缓慢加入WX040-9(30mg,119.38μmol,1eq,HCl)、BB-8(24.26mg,119.38μmol,1eq)、HATU(68.09mg,179.07μmol,1.5eq)和DIEA(46.28mg,358.13μmol,62.38μL,3eq)，25℃下持续搅2小时；反应液直接HPLC分离(色谱柱：Phenomenex Gemini-NX 80*30mm*3μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；乙腈％：28％-58％,9min)得到化合物WX040。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.70(br d,J＝7.3Hz,1H),8.04(s,1H),7.69(s,1H),7.39-7.36(m,1H),7.31-7.28(m,7H),5.39(s,2H),5.20(td,J＝6.8,11.0Hz,1H),4.72(dd,J＝6.5,9.4Hz,1H),4.31(t,J＝10.3Hz,1H),3.89(s,3H)；LCMS m/z＝437.1[M+1]+。
实施例41：WX041
Figure GDA0003377327420000841
合成路线：
Figure GDA0003377327420000842
步骤1：化合物WX041-2的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入MeCN(20mL)，再缓慢加入WX041-1(2.68g,21.09mmol,1eq)和K2CO3(5.83g,42.17mmol,2eq)以及4-氯甲基三氟甲苯(4.92g,25.30mmol,3.73mL,1.2eq)，在氮气保护下，反应液于60℃下持续搅拌12小时；反应液缓慢倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：20-100：75)得到化合物WX041-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.17(s,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,2H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),5.49(s,2H),4.08-3.91(m,3H)。
步骤2：化合物WX041-3的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入THF(20mL)和H2O(4mL)，缓慢加入WX041-2(2.40g,8.41mmol,1eq)和LiOH·H2O(1.06g,25.24mmol,3eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌1小时；反应液用稀盐酸(1M)调节pH至6-7，过滤收集析出物得到化合物WX041-3。
步骤3：化合物WX041的合成
25℃下，圆底烧瓶中加入N,N-二甲基乙酰胺(5mL)，缓慢加入BB-4(20mg,45.29μmol,1eq)、T3P(43.23mg,67.94μmol,40.41μL,50％纯度,1.5eq)、WX041-3(18.42mg,67.94μmol,1.5eq)和DIPEA(17.56mg,135.87μmol,23.67μL,3eq)，在氮气保护下，反应液于25℃下持续搅拌2小时；反应液缓慢倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相并依次用水(100mL)、饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相减压浓缩所得粗品经制备HPLC分离(色谱柱：Phenomenex Gemini-NX 80*30mm*3μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]得到化合物WX041。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.77(br d,J＝7.5Hz,1H),8.31(br d,J＝3.6Hz,1H),8.07(s,1H),7.65-7.45(m,3H),7.33(br d,J＝8.0Hz,2H),7.22(dd,J＝4.8,7.9Hz,1H),5.40(s,2H),5.23-4.97(m,1H),4.72(dd,J＝6.5,9.4Hz,1H),4.25(t,J＝10.3Hz,1H),3.87(s,3H)；19F NMR(377MHz,CDCl3)δ＝-43.60(s,1F)；LCMS m/z＝463.1[M+1]+。
实施例42：WX042
Figure GDA0003377327420000851
合成路线：
Figure GDA0003377327420000852
步骤1：化合物WX042-2的合成
MeCN(20mL)中加入WX042-1(2g,15.74mmol,1eq)，3-氯甲基苯甲醚(2.46g,15.74mmol,2.14mL,1eq)，K2CO3(2.61g,18.88mmol,1.2eq)，在50℃下反应12小时；反应液过滤除去K2CO3，滤饼用乙酸乙酯(15mL×3)洗涤，滤液用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相减压浓缩所得粗产品经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1-100：100)得到化合物WX042-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.10-8.01(m,1H),7.30-7.21(m,1H),6.91-6.80(m,2H),6.77(s,1H),5.34(s,2H),3.96(s,3H),3.75(s,3H)。
步骤2：化合物WX042-3的合成
向THF(30mL)中加入WX042-2(2.5g,10.11mmol,1eq)，再加入LiOH·H2O(509.17mg,12.13mmol,1.2eq)的H2O(3mL)溶液，在25℃下搅拌反应3小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)显示原料已反应完全；反应液用1M的稀盐酸调pH为6，减压浓缩去除溶剂，残余液中加入甲苯(10mL)，然后再次减压浓缩去除甲苯得到化合物WX042-3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.19(s,4H),7.21-7.17(m,1H),4.65(s,2H),3.79(s,3H)；LCMS m/z＝233.9[M+1]+。
步骤3：化合物WX042的合成
向N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中加入BB-4(94.67mg,214.39μmol,1eq)，WX042-3(50mg,214.39μmol,1eq)，T3P(163.71mg,257.26μmol,153.00μL,50％纯度,1.2eq)，DIPEA(41.56mg,321.58μmol,56.01μL,1.5eq)，在25℃下反应2小时；LCMS显示原料反应完全；反应液减压浓缩至5mL左右，经HPLC(甲酸体系)分离纯化得到化合物WX042。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.81(br d,J＝7.0Hz,1H),8.37(dd,J＝1.6,4.6Hz,1H),8.04(s,1H),7.57(dd,J＝1.6,7.9Hz,1H),7.33-7.27(m,2H),7.00-6.69(m,3H),5.36(s,2H),5.22(td,J＝6.7,11.1Hz,1H),4.79(dd,J＝6.3,9.5Hz,1H),4.32(dd,J＝9.5,11.0Hz,1H),3.93(s,3H),3.79(s,3H)。
实验例1：体外测试部分
实验步骤：
1.1试剂
Figure GDA0003377327420000861
1.2仪器与耗材
CULTURPLATE-384+LID/50W品牌PerkinElmer cat#6007680
Envision plate reader(Perkin Elmer，Cat#2104-0010)
1.3试剂配置
(1)1×DPSB：10×DPBS 100毫升加入去离子水900毫升。
(2)1640完全培养基：RPMI-1640培养基89毫升加入10毫升FBS、1mL青霉素/链霉素
2.实验步骤
1将U937细胞离心后弃去培养基，用1640完全培养基重悬计数，将细胞浓度调整为5×105个/mL备用，根据待测化合物排版布局。
2向准备好的U937细胞重悬液中加入终浓度为25μM的QVD-OPh和终浓度100ng/mL的TNF-α后轻轻混匀。
3向384孔板中加入30μL/孔含有25μM的QVD-OPh和终浓度100ng/mL的TNF-α的U937细胞，同时设置未加入QVD-OPh和TNF-α的空白对照孔。4向加药组中加入10μL，4倍预设浓度的待测化合物，空白对照孔中加入相对应浓度的DMSO。
5将384孔板放入37℃，5％CO2的细胞培养箱中培养24小时。
6 24小时后取出384孔板于室温中平衡20分钟。
7每孔加入40μL CTG后于摇床上避光震荡2分钟。
8室温避光孵育10分钟后使用Envision plate reader读数。
实验结果：
本发明化合物的实验结果见表1。
表1.本发明化合物U937细胞活性测试结果
Figure GDA0003377327420000871
Figure GDA0003377327420000881
实验结论：
从上表可以看出，本发明化合物在抑制TNFα/QVD-OPh所诱导的程序性细胞坏死(Necroptosis)的细胞活性测试中，表现出良好的抑制活性。
实验例2：小鼠RIP1体外活性测试
细胞系
L929(购买于ATCC，货号：CCL-1)
试剂
Figure GDA0003377327420000882
Figure GDA0003377327420000891
仪器
酶标仪(Perkin Elmer，Envision)
试剂配制
L929细胞完全培养液：EMEM+10％马血清(体积比)+1％双抗(体积比)
实验步骤
1.将培养的L929细胞用胰酶消化后离心，用完全培养液重悬后计数，再拿完全培养液将细胞浓度稀释至1×105/mL。
2.将细胞悬液按照每孔100μL加入96孔板，37℃，5％CO2条件下培养24h。
3.每孔加入不同浓度的待测化合物，对照组加入二甲基亚砜，37℃，5％CO2条件下培养1h。
4.每孔加入终浓度为50ng/mL的TNF-α和50μM的Q-VD，37℃，5％CO2条件下培养24h。
5.每孔加入50μL CellTiter Glo荧光细胞，避光震荡10min。
6.在酶标仪上进行读数
实验结果
本发明化合物的实验结果见表2。
表2.本发明化合物L929细胞活性测试结果
Figure GDA0003377327420000892
Figure GDA0003377327420000901
实验结论：
从上表可以看出，本发明化合物在抑制TNFα/QVD-OPh所诱导的程序性细胞坏死(Necroptosis)的小鼠L929细胞活性测试中，表现出良好的抑制活性。
实验例3：化合物药代动力学评价
实验步骤
选择健康成年C57BL/6小鼠8只(6-9周龄，购自上海灵畅生物科技有限公司)，随机分成两组，每组4只(n＝2,交叉采血)，一组静脉注射给予受试化合物0.5mg/kg，另一组灌胃给予受试化合物1mg/kg。静脉组和灌胃组动物均分别于给药后0.083,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,24小时采集血浆样品。采用LC-MS/MS法测定血药浓度，使用WinNonlinTMVersion 6.3(Pharsight,Mountain View,CA)药动学软件，以非房室模型线性对数梯形法计算相关药代动力学参数。AUC0-last代表从零时间点到最后一个可检测到浓度时间点的血浆浓度-时间曲线下面积；Cmax代表峰浓度；Tmax代表达峰时间；T1/2代表半衰期；CL代表清除率；Tlast代表最后一个可定量时间点；p.o.代表口服；i.v.代表静脉注射；F％代表口服生物利用度。
实验结果
本发明化合物的实验结果见表3。
表3化合物的药代动力学性质
Figure GDA0003377327420000902
Figure GDA0003377327420000911
实验结论
本发明化合物具有较好的药代动力学性质，体内暴露量和生物利用度。
实验例4：肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的小鼠系统炎症应答综合症(SIRS)模型体内药效研究
试剂
Figure GDA0003377327420000912
仪器与耗材
1)电子天平：品牌常州天之平仪器设备有限公司型号JY20002
2)肛温计：品牌PHYSITEMP型号BAT-12
试剂配置
1)TNF-α：开盖前快速离心(10000rmp,30s)，将1瓶TNF-α(1mg)溶于1mL无菌水中，配制浓度为1mg/mL母液。置于4℃保存，可保存一周。取1000μL母液，加入5667μL无菌水中，再加入333mg海藻糖溶解，配置成工作液。
2)zVAD：称取20mg zVAD，加入480μLDMSO涡旋-超声-37℃加热后，再加入15.52mL生理盐水；配置浓度为1.25mg/mL工作液。
实验步骤
1)小鼠适应性饲养3天后，按照随机分组的方式进行分笼，并剪耳标。每笼5只。
2)首先对小鼠通过灌胃，按照体重给予对应的化合物，然后按照250μg每只小鼠的剂量，通过腹腔注射zVAD后，立即测肛温(0h)，并记录时间,将小鼠给予zVAD的时间定义为第0小时(0h)。
3)15min后按照200μL每只小鼠的剂量，通过尾静脉注射TNF-α，然后15min后测量肛温(0.5h)。
4)在1h后按照125μg每只小鼠的剂量，通过腹腔注射zVAD后，立即测量肛温(1h)，在2h，3h，4h时再次测量肛温。
实验结果
本发明化合物的实验结果见表4。
表4小鼠体温和存活率
Figure GDA0003377327420000921
实验结论
本发明化合物在抑制TNF-α/zVAD所诱导的小鼠系统炎症应答综合症(SIRS)模型中表现出很好的保护作用，小鼠体温降低幅度显著变小，动物生存率从0％提高到100％。
实验例5：体外Caco-2细胞渗透性测试
细胞培养
细胞培养使用添加了2mM的L-谷氨酰胺，10％胎牛血清(FBS)，100U/mL青霉素-G以及100μg/mL链霉素的MEM(最低必需培养基)。细胞培养条件为37±1℃，5％CO2及饱和湿度。待细胞长至80-90％密集度，加入胰酶(0.05％,w/v)/EDTA(0.02％,w/v)消化液消化细胞后种板。细胞接种于BD Falcon的Transwell-96孔板里，接种密度为1×105细胞/cm2。细胞置于二氧化碳培养箱中培养22天后用于转运实验。
转运实验
本项目采用含10mM HEPES的Hank’s平衡盐缓冲液(pH 7.40±0.05)为转运缓冲液。测试受试化合物和阳性药地高辛在2μM浓度下的双向转运，各两个平行样本，测试非诺特罗和普萘洛尔从顶端到基底端(A-B)的转运。孵育体系中DMSO的浓度控制在1％以下，加样后，将细胞板置于37±1℃，5％CO2及饱和湿度条件下孵育120分钟，所有的样品漩涡震荡后于3220rpm，20℃离心20分钟，对照品和供试品用超纯水1：1(v：v)稀释后储存于4℃，采用液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)进行分析测试。
样品分析
本研究采用液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)方法半定量分析起始溶液、接收液和给药孔上清液中受试化合物和对照品非诺特罗、普萘诺尔以及地高辛与内标的峰面积比值。
数据计算
采用如下公式计算表观渗透系数(Papp,cm/s)，外排率以及回收率。
表观渗透系数(Papp,cm/s)采用如下公式计算：
Papp＝(dCr/dt)×Vr/(A×C0)
dCr/dt是化合物在单位时间内接收端的累积浓度(μM/s)；Vr是接收端溶液的体积(顶端和基底端的溶液体积分别为0.075mL和0.250mL)；A是胞单层的相对表面积(0.0804cm2)；C0是给药端供试品的起始浓度(nM)或对照品的峰面积比值。
外排比采用如下公式计算：
外排比＝Papp(BA)/Papp(AB)
回收率采用如下公式计算：
％回收率＝100×[(Vr×Cr)+(Vd×Cd)]/(Vd×C0)
C0是给药端供试品的起始浓度(nM)或对照品的峰面积比值；Vd是给药端的体积(顶侧为0.075mL，基底侧为0.250mL)；Cd和Cr分别为给药端和接收端供试品的终浓度(nM)或对照品的峰面积比值。
实验结果
本发明化合物的实验结果见表5。
表5.Caco-2细胞渗透性测试结果
Figure GDA0003377327420000931
Figure GDA0003377327420000941
实验结论
本发明化合物是高渗透性的化合物，具有较低的外排比。
实验例6：血浆蛋白结合率(PPB)测定
取人、SD大鼠及CD-1小鼠的空白血浆796μL(血浆购买自BioreclamationIVT)，加入受试化合物工作溶液或华法林工作溶液，使血浆样品中受试化合物与华法林终浓度均为2μM。将样品充分混合。有机相DMSO的终浓度为0.5％；移取50μL受试化合物和华法林血浆样品到样品接收板中，立即加入相应体积的对应空白血浆或缓冲液，使得每个样品孔的终体积为100μL，血浆：透析缓冲液的体积比为1：1，然后向这些样品中加入终止液，此样品将作为T0样品用于回收率及稳定性测定。将受试化合物和华法林血浆样品加入到每个透析孔的给药端，在透析孔对应的接收端中加入空白透析缓冲液。然后将透析板封上透气膜后置于湿润的5％CO2的培养箱中，在37℃、100rpm振荡孵育4小时。透析结束后，移取50μL透析后的缓冲液样品和透析后的血浆样品到新的样品接收板。在样品中加入相应体积的对应空白血浆或缓冲液，使得每个样品孔的终体积为100μL，血浆：透析缓冲液的体积比为1：1。所有样品经过蛋白沉淀后进行LC/MS/MS分析，并通过以下公式计算化合物的游离率(％Unbound)、结合率(％Bound)和回收率(％Recovery)：
％Unbound＝100*FC/TC,
％Bound＝100-％Unbound,
％Recovery＝100*(FC+TC)/T0。
其中FC是透析板缓冲液端化合物的浓度；TC是透析板血浆端化合物的浓度；T0是零时刻血浆样品中化合物的浓度。
实验结果
本发明化合物的实验结果见表6。
表6.血浆蛋白结合率测试结果
化合物 PPB_Unbound(％)
WX009 5.7(人)/29.7(大鼠)/7.0(小鼠)
实验结论
本发明化合物在人，大鼠，小鼠中都具有合理的血浆蛋白结合率，人血浆中非结合状态的药物为5.7％。
实验例7：犬药代动力学参数的测定
实验步骤
选择健康成年比格犬4只，随机分成两组，一组静脉注射给予受试化合物，另一组灌胃给予受试化合物。静脉组和灌胃组动物均分别于给药后0.083,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,24小时采集血浆样品。采用LC-MS/MS法测定血药浓度，使用WinNonlinTMVersion 6.3(Pharsight,Mountain View,CA)药动学软件，以非房室模型线性对数梯形法计算相关药代动力学参数。AUC0-last代表从零时间点到最后一个可检测到浓度时间点的血浆浓度-时间曲线下面积；Cmax代表峰浓度；Tmax代表达峰时间；T1/2代表半衰期；CL代表清除率；Vdss代表表观分布容积；p.o.代表口服；i.v.代表静脉注射；F％代表口服生物利用度。
实验结果
本发明化合物的实验结果见表7。
表7本发明化合物的药代动力学性质
Figure GDA0003377327420000951
实验结论
本发明化合物在犬体内具有较好的药代动力学性质，体内暴露量较高，特别是其半衰期达到较为理想的5小时左右。
实验例8：本发明化合物的激酶选择性测试
本试验目的是检测WX009对多种激酶的体外抑制活性。本试验所采用的激酶包括413种激酶，由欧陆医药发现服务公司(Eurofins Pharma Discovery Service)提供活性检测方法。测试采用33P放射性标记激酶活性测试的方法进行，WX009的浓度为1μM，ATP浓度为10μM。测试结果如表8所示
表8 WX009激酶谱测试结果
抑制率 激酶个数 激酶名称
>80％ 1个 RIP1
50-79％ 1个 LIMK2
<50％ 411个 所有其他激酶
实验结论：本发明化合物具有高度特异的激酶选择性，几乎只对RIP1具有高活性的抑制作用，因此具有较低的脱靶到其他激酶靶点的风险。

Claims (16)

1.式(Ⅰ)所示化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，
Figure FDA0003979929140000011
其中，
T1选自N和CR1t；
T2选自N和CR2t；
T3选自N和CR3t；
T4选自N和CR4t；
E1选自C(R1e)2和O；
环A选自1,2,4-三唑基、
Figure FDA0003979929140000012
所述1,2,4-三唑基、
Figure FDA0003979929140000013
任选被1、2或3个卤素或C1-3烷基取代；
环B选自苯基和
Figure FDA0003979929140000014
L选自单键、O和C1-3亚 烷基；
R1选自H和C1-3烷基，其中所述C1-3烷基任选被1、2或3个Rb取代；
R1t、R2t、R3t和R4t分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、C1-3烷基、COOH和-C(＝O)NH2；
R1e分别独立地选自H和C1-3烷基；
R2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、C1-3烷基和C1-3烷氧基，其中所述C1-3烷基和C1-3烷氧基任选被1、2或3个Rf取代；
n为1、2、3、4或5；
Rb和Rf分别独立地选自F、Cl、Br、I和D。
2.根据权利要求1所述化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其中，R1选自H和CH3，其中所述CH3任选被1、2或3个Rb取代。
3.根据权利要求2所述化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其中，R1选自H、CH3和CD3。
4.根据权利要求1所述化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其中，R1t、R2t、R3t和R4t分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、CH3、COOH和-C(＝O)NH2。
5.根据权利要求4所述化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其中，R1t、R2t、R3t和R4t分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和CH3。
6.根据权利要求1所述化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其中，R1e分别独立地选自H和CH3。
7.根据权利要求1或6所述化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其中，E1选自CH2或O。
8.根据权利要求1所述化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其中，R2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、CH3和OCH3，其中所述CH3和OCH3任选被1、2或3个Rf取代。
9.根据权利要求8所述化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其中，R2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、CH3、OCH3、CF3和OCF3。
10.根据权利要求1所述化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其中，环A选自
Figure FDA0003979929140000021
Figure FDA0003979929140000022
所述
Figure FDA0003979929140000023
任选被1、2或3个卤素或C1-3烷基取代。
11.根据权利要求1所述化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其中，L选自单键、-CH2-和-O-。
12.根据权利要求1～3、8和9任意一项所述化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其选自
Figure FDA0003979929140000031
其中，
n、T1、T2和T3如权利要求1所定义；
R1如权利要求1、2或3所定义；
R2如权利要求1、8或9所定义；
R选自H和卤素；
带“*”碳原子为手性碳原子，以(R)或(S)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在。
13.根据权利要求12所述化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其选自
Figure FDA0003979929140000032
其中，
n、T1、T2和T3如权利要求1所定义；
R1如权利要求1、2或3所定义；
R2如权利要求1、8或9所定义；
R选自H和卤素。
14.下式化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003979929140000041
Figure FDA0003979929140000051
Figure FDA0003979929140000061
15.根据权利要求14所述的化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其选自
Figure FDA0003979929140000062
Figure FDA0003979929140000071
Figure FDA0003979929140000081
16.根据权利要求1～15任意一项所述化合物、其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐在制备治疗RIP-1激酶相关疾病的药物中的应用。
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