CN112778291B - 一种硫代七元环类衍生物及其应用 - Google Patents

一种硫代七元环类衍生物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种硫代七元环类衍生物或其药用盐、溶剂合物、立体异构体、消旋体，结构如通式I所示：
Figure DDA0002919022620000011
各取代基定义详见说明书。本发明的硫代七元环类衍生物可以用于预防或治疗细胞程序性死亡所引起的炎症性、感染性、缺血性或退行性相关疾病，可以作为预防或治疗程序性细胞坏死的药物或作为程序性细胞坏死抑制剂使用。

Description

一种硫代七元环类衍生物及其应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种硫代七元环类衍生物及作为药物的用途。
背景技术
细胞死亡是机体的一项基本生命过程，是维持组织机能和形态所必须的。细胞死亡包括被动死亡和主动死亡，被动死亡即细胞坏死是一种无序的、不可被调控的死亡；而主动死亡则是一种细胞主动死亡的方式，包括细胞凋亡、程序性细胞坏死、细胞焦亡、铁死亡以及自噬性细胞死亡，其中凋亡和坏死代表细胞死亡的两种不同的机制。凋亡是涉及半胱氨酸蛋白酶的半胱天冬酶家族，并且特征在于细胞皱缩、染色质凝聚和DNA降解的高度受调控的过程。相比之下，坏死与细胞和细胞器肿胀以及质膜破裂连同随后发生的细胞内容物释放和继发性炎症相关(Cell Death Differ.2009,16:3-11)。其中程序性细胞坏死经历了漫长的发展过程，直到2005年发现此坏死过程能被化学小分子抑制剂Nec-1抑制。这一系列的发现才使细胞死亡这一领域的研究者认识到当细胞凋亡被抑制之后，细胞会转而发生另一种同样受到精确调控的死亡方式，即细胞坏死。Nec-1的发现推动了这一程序性死亡方式被正式命名为程序性细胞坏死(necroptosis,Nat Chem Biol.2005,1:112-119.)。这一细胞死亡方式是由死亡受体介导的、Caspase蛋白水解酶非依赖性的细胞死亡方式，主要由受体相互作用蛋白激酶1(receptor-interacting protein kinase 1,RIPK1)、受体相互作用蛋白激酶3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)和混合系列蛋白激酶结构域样蛋白(mixed lineage kinase domain like protein,MLKL)调控。
研究表明，程序性细胞坏死的机制是RIPK1和RIPK3形成复合体并激活MLKL，MLKL形成三聚体后定位在细胞膜上并导致细胞膜破裂，内容物流出，诱发细胞周围的炎症反应，并引起许多相关的疾病，如炎症性疾病、缺血再灌注损伤、肾脏疾病、心血管疾病、肝脏疾病、病原微生物感染、肿瘤以及神经退行性疾病，越来越多的证据表明，程序性细胞坏死参与这些疾病的发生与发展过程。
RIPK1激酶被公认是细胞程序性坏死相关疾病的潜在治疗靶标。首创型RIPK1抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)及其类似物在临床前研究中，已经对多种退行性疾病、炎症、癌症等疾病展示出明确的疗效。例如，对AD、帕金森氏症(PD)、亨廷顿氏症(PD)炎性肠病、老年性黄斑变性等具有缓解作用；当前，Nec-1衍生物已进入治疗ALS和AD的临床试验当中；GSK3145095单独和与其他抗癌药组合进行了I/II期临床试验；DNL747已进入I期临床试验用于治疗阿尔兹海默症以及肌萎缩侧索硬化；DNL758是一种不透过大脑屏障的RIPK1抑制剂，目前用于治疗风湿性关节炎和牛皮癣等自身免疫疾病并对其进行临床前评估。然而，现有的程序性坏死抑制剂均存在着不同程度的缺陷，如活体抑制活性仍不够理想、药代性质不佳、口服生物利用度低等，还有一些无法透过血脑屏障进入中枢神经系统，或是因不能有效抑制鼠源RIPK1而难以实施临床前动物试验，这些缺点均限制了其进一步的研究与临床应用。
因此，鉴定并发现有效的程序性细胞坏死抑制剂，对于治疗与程序性细胞坏死相关的疾病具有十分重要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种硫代七元环类衍生物。
本发明的第二个目的是提供一种所述硫代七元环类衍生物在制备预防或治疗程序性细胞坏死的药物或作为程序性细胞坏死抑制剂的应用。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第一方面提供了一种硫代七元环类衍生物或其药用盐、溶剂合物、立体异构体、消旋体，结构如通式I所示：
Figure BDA0002919022600000021
X为O、S、SO、
Figure BDA0002919022600000022
NH、CO、CH2、CF2；
Y为CH2、CH2CH2、CF2；
R2选自氢、羟基、卤素(氟、氯、溴、碘)、C1-C6烷基、C1-C6氘代烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6硫代烷基、氰基；
A为C2～C6的饱和环基，环上均为碳或至少含有一个N或O，环上设有取代基R1；
R1设置为一个或两个，选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6氘代烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6硫代烷基、氰基；
L选自
Figure BDA0002919022600000023
B选自
Figure BDA0002919022600000031
较优选的，所述硫代七元环类衍生物或其药用盐、溶剂合物、立体异构体、消旋体的结构通式I中：
X为O、S、NH、CO；
Y为CH2；
R2选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6氘代烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6硫代烷基、氰基；
A为
Figure BDA0002919022600000032
L选自
Figure BDA0002919022600000033
B选自
Figure BDA0002919022600000034
进一步优选的，所述硫代七元环类衍生物或其药用盐、溶剂合物、立体异构体、消旋体的结构如通式I所示：
Figure BDA0002919022600000035
R2选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6氘代烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6硫代烷基、氰基；
R3选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6氘代烷基；
R4选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6氘代烷基；
E为C或N；
F为C或N。
更进一步优选的，所述硫代七元环类衍生物或其药用盐、溶剂合物、立体异构体、消旋体的结构通式I中：
R2选自氢、羟基、C1-C6烷基(如CH3、-CH2CH3)、C1-C6氘代烷基(如-CD3)；
R3选自氢、卤素、C1-C6烷基(如CH3、-CH2CH3)、C1-C6氘代烷基(如-CD3)；
R4选自氢、卤素、C1-C6烷基(如CH3、-CH2CH3)、C1-C6氘代烷基(如-CD3)；
E为C或N；
F为C或N。
最优选的，所述硫代七元环类衍生物或其药用盐、溶剂合物、立体异构体、消旋体的结构选自以下结构中的一种：
Figure BDA0002919022600000041
Figure BDA0002919022600000051
本发明的第二方面提供了一种硫代七元环类衍生物或其药用盐、溶剂合物、立体异构体、消旋体在制备预防或治疗程序性细胞坏死的药物或作为程序性细胞坏死抑制剂的应用。
所述程序性细胞坏死的细胞为HT-29(人结肠癌细胞)。
由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：
本发明的硫代七元环类衍生物可以用于预防或治疗细胞程序性死亡所引起的炎症性、感染性、缺血性或退行性相关疾病，可以作为预防或治疗程序性细胞坏死的药物或作为程序性细胞坏死抑制剂使用。
本发明提供了该类硫代七元环类衍生物的药用盐、立体异构体、对映异构体、非对映异构体、阻转异构体、光学异构体、外消旋体、多晶型物、溶剂合物或经同位素标记的化合物可以作为程序性细胞坏死相关激酶抑制剂，还可以作为程序性细胞坏死抑制剂，有效地抑制细胞坏死；可以用于制备程序性细胞坏死相关疾病的防治药物，或制备由程序性细胞坏死相关激酶紊乱、过度激活或过度相互作用引起的炎症性、感染性、缺血性或退行性相关疾病或组织损伤的药物。本发明合成简单，未涉及繁琐步骤，合成成本低。
附图说明
图1是化合物I-1和化合物I-2的蛋白免疫印迹结果示意图。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。所有原料未注明合成方法的均购自探索平台、阿拉丁、Sigma-Aldrich等厂家，均为分析纯。
以下化合物的制备从原料到最终产物，没有涉及手心中心的反应，因此最终产物的构型与原料N-BOC-丝氨酸的构型保持一致。
实施例1
(S)-5-苄基-N-(5-甲基-4-硫氧基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-1的制备：
Figure BDA0002919022600000061
步骤a：(S)-叔丁基-(5-甲基-4-硫氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)氨基甲酸酯化合物2
将化合物1(0.28g，0.96mmol)和劳森试剂(0.21g，0.53mmol)加到甲苯(5mL)中，115℃搅拌4小时，TLC监测，反应完全后加乙酸乙酯(5mL)稀释，在减压条件下浓缩得到粗产物，粗品通过硅胶柱色谱纯化(洗脱剂：含10-25％乙酸乙酯的石油醚溶液)，得0.15g油状化合物2，收率50％。
步骤b：化合物3的制备
在室温和氮气保护条件下，将盐酸(4M，0.6mL，2.40mmol)滴加到化合物2(0.15g，0.48mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中，反应液搅拌3小时。TLC监测，反应完全后用饱和碳酸氢钠中和，二氯甲烷(10mL)萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩，得0.09g油状化合物3，收率90％。
步骤c：目标化合物I-1的制备：
化合物4按照对比例1的方法制备。
在0℃条件下，将化合物3(0.32g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二甲基亚砜中，然后加N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.89g，2.34mmol)。将反应液在室温下搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL乙酸乙酯萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.49g即化合物I-1，收率80％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ14.36(s,1H),8.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.62(dd,J＝7.2,1.8Hz,1H),7.42(m,2H),7.37–7.24(m,6H),5.00(q,J＝9.0Hz,1H),4.43(d,J＝8.4Hz,2H),4.16(s,2H),3.80(s,3H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd forC20H20N5O2S[M+H]+394.1338；found 394.1346.
实施例2
(R)-5-苄基-N-(5-甲基-4-硫氧基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-2的制备：
Figure BDA0002919022600000071
在0℃条件下，将化合物5(0.32g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二甲基亚砜中，然后加N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.89g，2.34mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL乙酸乙酯萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.49g即化合物I-2，收率80％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ14.36(s,1H),8.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.62(dd,J＝7.2,1.8Hz,1H),7.42(m,2H),7.37–7.24(m,6H),5.00(q,J＝9.0Hz,1H),4.43(d,J＝8.4Hz,2H),4.16(s,2H),3.80(s,3H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd forC20H20N5O2S[M+H]+394.1338；found 394.1346.
实施例3
(S)-3-苄基-N-(5-(甲基-d3)-4-硫氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-5-甲酰胺即化合物I-3的制备：
Figure BDA0002919022600000081
在0℃条件下，将化合物6(0.33g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二甲基亚砜中，然后加N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.89g，2.34mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL乙酸乙酯萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.50g即化合物I-3，收率80％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ14.36(s,1H),8.53(s,1H),7.62(d,J＝6.6Hz,1H),7.47–7.22(m,8H),4.99(dd,J＝16.2,7.8Hz,1H),4.43(d,J＝7.8Hz,2H),4.16(s,2H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C20H17D3N5O2S[M+H]+397.1526；found397.1522.
实施例4
(R)-3-苄基-N-(5-(甲基-d3)-4-硫氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-5-甲酰胺即化合物I-4的制备：
Figure BDA0002919022600000082
在0℃条件下，将化合物7(0.33g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二甲基亚砜中，然后加N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.89g，2.34mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL乙酸乙酯萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.50g即化合物I-4，收率80％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ14.36(s,1H),8.53(s,1H),7.62(d,J＝6.6Hz,1H),7.47–7.22(m,8H),4.99(dd,J＝16.2,7.8Hz,1H),4.43(d,J＝7.8Hz,2H),4.16(s,2H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C20H17D3N5O2S[M+H]+397.1526；found397.1522.
实施例5
(S)-5-苄基-N-(1,7-二甲基-2-硫氧代-1,2,3,4-四氢吡啶[2,3-b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-5的制备：
Figure BDA0002919022600000091
在0℃条件下，将化合物8(0.35g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二氯甲烷中，然后滴加1-正丙基磷酸酐(1.4mL，2.34mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL二氯甲烷萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.51g即化合物I-5，收率80％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.36(s,1H),8.56(d,J＝7.8Hz,1H),7.98(d,J＝8.1Hz,1H),7.41–7.18(m,6H),5.14–4.92(m,1H),4.52(d,J＝8.7Hz,2H),4.15(s,2H),3.76(s,3H),2.48(s,3H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C20H21N6O2S[M+H]+409.1447；found409.1449.
实施例6
(R)-5-苄基-N-(1,7-二甲基-2-硫氧代-1,2,3,4-四氢吡啶[2,3-b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-6的制备：
Figure BDA0002919022600000092
在0℃条件下，将化合物9(0.35g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二氯甲烷中，然后滴加1-正丙基磷酸酐(1.4mL，2.34mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL二氯甲烷萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.51g即化合物I-6，收率80％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.36(s,1H),8.56(d,J＝7.8Hz,1H),7.98(d,J＝8.1Hz,1H),7.41–7.18(m,6H),5.14–4.92(m,1H),4.52(d,J＝8.7Hz,2H),4.15(s,2H),3.76(s,3H),2.48(s,3H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C20H21N6O2S[M+H]+409.1447；found409.1449.
实施例7
(S)-5-苄基-N-(5-甲基-4-硫氧代-2,3,4,5-四氢吡啶[3,2-b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-7的制备：
Figure BDA0002919022600000101
在0℃条件下，将化合物10(0.33g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二氯甲烷中，然后滴加1-正丙基磷酸酐(1.4mL，2.34mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL二氯甲烷萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.49g即化合物I-7，收率80％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,1H),8.47(dd,J＝4.8,1.8Hz,1H),7.80(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H),7.49(dd,J＝7.8,4.8Hz,1H),7.40–7.21(m,6H),5.02(dt,J＝14.4,7.2Hz,1H),4.63(t,J＝10.2Hz,1H),4.53(dd,J＝10.2,7.2Hz,1H),4.14(s,2H),3.81(s,3H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C19H19N6O3S[M+H]+395.1290；found 395.1289.
实施例8
(R)-5-苄基-N-(5-甲基-4-硫氧代-2,3,4,5-四氢吡啶[3,2-b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-8的制备：
Figure BDA0002919022600000102
在0℃条件下，将化合物11(0.33g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二氯甲烷中，然后滴加1-正丙基磷酸酐(1.4mL，2.34mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL二氯甲烷萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.49g即化合物I-8，收率80％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,1H),8.47(dd,J＝4.8,1.8Hz,1H),7.80(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H),7.49(dd,J＝7.8,4.8Hz,1H),7.40–7.21(m,6H),5.02(dt,J＝14.4,7.2Hz,1H),4.63(t,J＝10.2Hz,1H),4.53(dd,J＝10.2,7.2Hz,1H),4.14(s,2H),3.81(s,3H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C19H19N6O3S[M+H]+395.1290；found 395.1289.
实施例9
(S)-5-苄基-N-(4-硫氧基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-9的制备：
Figure BDA0002919022600000111
在0℃条件下，将化合物12(0.30g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二甲基亚砜中，然后加N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.89g，2.34mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL乙酸乙酯萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.43g即化合物I-9，收率70％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.32(s,1H),10.11(s,1H),8.37(s,1H),7.33–7.04(m,9H),4.75(dt,J＝14.7,7.5Hz,1H),4.54–4.32(m,2H),4.08(s,2H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C19H18N5O2S[M+H]+380.1181；found 380.1184.
实施例10
(R)-5-苄基-N-(4-硫氧基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-10的制备：
Figure BDA0002919022600000112
在0℃条件下，将化合物13(0.30g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二甲基亚砜中，然后加N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.89g，2.34mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL乙酸乙酯萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.43g即化合物I-10，收率70％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.32(s,1H),10.11(s,1H),8.37(s,1H),7.33–7.04(m,9H),4.75(dt,J＝14.7,7.5Hz,1H),4.54–4.32(m,2H),4.08(s,2H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C19H18N5O2S[M+H]+380.1181；found 380.1184.
实施例11
(S)-5-苄基-N-(5-乙基-4-硫氧基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-11的制备：
Figure BDA0002919022600000121
在0℃条件下，将化合物14(0.35g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二甲基亚砜中，然后加N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.89g，2.34mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL乙酸乙酯萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.54g即化合物I-11，收率85％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.59(d,J＝7.2Hz,1H),7.68(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H),7.47–7.40(m,2H),7.36–7.23(m,6H),4.97(dt,J＝15.6,7.8Hz,1H),4.82(m,1H),4.43(m,1H),4.39(m,1H),4.09(m,1H),4.14(s,2H),1.14(t,J＝6.6Hz,3H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C21H22N5O2S[M+H]+408.1494；found 408.1493.
实施例12
(R)-5-苄基-N-(5-乙基-4-硫氧基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-12的制备：
Figure BDA0002919022600000131
在0℃条件下，将化合物15(0.35g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二甲基亚砜中，然后加N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.89g，2.34mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL乙酸乙酯萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.54g即化合物I-12，收率85％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.59(d,J＝7.2Hz,1H),7.68(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H),7.47–7.40(m,2H),7.36–7.23(m,6H),4.97(dt,J＝15.6,7.8Hz,1H),4.82(m,1H),4.43(m,1H),4.39(m,1H),4.09(m,1H),4.14(s,2H),1.14(t,J＝6.6Hz,3H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C21H22N5O2S[M+H]+408.1494；found 408.1493.
实施例13
(S)-5-苄基-N-(1,8-二甲基-2-硫氧代-1,2,3,4-四氢吡啶[2,3-b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-13的制备：
Figure BDA0002919022600000132
在0℃条件下，将化合物16(0.35g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二氯甲烷中，然后滴加1-正丙基磷酸酐(1.4mL，2.34mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL二氯甲烷萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.48g即化合物I-13，收率80％。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.58(d,J＝6.0Hz,1H),8.16(dd,J＝1.8,0.6Hz,1H),7.98(d,J＝1.8Hz,1H),7.37–7.22(m,6H),5.01(q,J＝9.0Hz,1H),4.52(d,J＝7.8Hz,2H),4.16(s,2H),3.78(s,3H),2.38(s,3H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C20H21N6O2S[M+H]+409.1447；found 409.1448.
实施例14
(R)-5-苄基-N-(1,8-二甲基-2-硫氧代-1,2,3,4-四氢吡啶[2,3-b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-14的制备：
Figure BDA0002919022600000141
在0℃条件下，将化合物17(0.35g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二氯甲烷中，然后滴加1-正丙基磷酸酐(1.4mL，2.34mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL二氯甲烷萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.48g即化合物I-14，收率80％。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.58(d,J＝6.0Hz,1H),8.16(dd,J＝1.8,0.6Hz,1H),7.98(d,J＝1.8Hz,1H),7.37–7.22(m,6H),5.01(q,J＝9.0Hz,1H),4.52(d,J＝7.8Hz,2H),4.16(s,2H),3.78(s,3H),2.38(s,3H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C20H21N6O2S[M+H]+409.1447；found 409.1448.
实施例15
(S)-5-苄基-N-(1-甲基-2-硫氧基-1,2,3,4-四氢吡啶[2,3-b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-15的制备：
Figure BDA0002919022600000142
在0℃条件下，将化合物18(0.33g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二氯甲烷中，然后滴加1-正丙基磷酸酐(1.4mL，2.34mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL二氯甲烷萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.25g即化合物I-15，收率40％。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),8.08(dd,J＝7.6,1.8Hz,1H),7.93(dd,J＝4.9,1.8Hz,1H),7.40–7.22(m,5H),7.08(dd,J＝7.7,4.9Hz,1H),5.72(m,1H),4.64(dd,J＝10.5,4.4Hz,1H),4.30(t,J＝10.4Hz,1H),4.15(s,2H),3.50(s,3H).HRMS(ESI,positive)m/zcalcd for C19H19N6O2S[M+H]+395.1290；found 395.1293.
实施例16
(S)-5-苄基-N-(1-甲基-2-硫氧基-1,2,3,4-四氢吡啶[2,3-b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺即化合物I-16的制备：
Figure BDA0002919022600000151
在0℃条件下，将化合物19(0.33g，1.56mmol)和化合物4(0.35g，1.72mmol)加入到10mL二氯甲烷中，然后滴加1-正丙基磷酸酐(1.4mL，2.34mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用10mL水淬灭，10mL二氯甲烷萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体0.25g即化合物I-16，收率40％。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),8.08(dd,J＝7.6,1.8Hz,1H),7.93(dd,J＝4.9,1.8Hz,1H),7.40–7.22(m,5H),7.08(dd,J＝7.7,4.9Hz,1H),5.72(m,1H),4.64(dd,J＝10.5,4.4Hz,1H),4.30(t,J＝10.4Hz,1H),4.15(s,2H),3.50(s,3H).HRMS(ESI,positive)m/zcalcd for C19H19N6O2S[M+H]+395.1290；found 395.1293.
以上实施例中的化合物5～19参考实施例1中的化合物3制备。
对比例1
(S)-3-苄基-N-(5-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-5-甲酰胺(1)的制备即化合物GSK’772的制备：
合成路线如下：
Figure BDA0002919022600000161
步骤a：(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(2-硝基苯氧基)丙酸。
在室温条件下，将氢化钠(4.09g，10.23mmol)溶解在二甲基甲酰胺(8mL)中，形成悬浮液。然后，5分钟内将溶解在二甲基甲酰胺(2mL)中的N-BOC-L-丝氨酸(1.0g，4.87mmol)滴加到悬浮液中。观察到剧烈的气体逸出，一旦气体逸出停止，滴加1-氟-2-硝基苯(0.51mL，4.87mmol)。将反应液在室温搅拌3小时，TLC监测，反应完全后用乙酸乙酯(40mL)和盐酸溶液(0.5M，40mL)萃取，有机层用水(3×20mL)和盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩以提供粗产物，粗品通过硅胶柱色谱纯化(洗脱剂：含25-55％乙酸乙酯的石油醚溶液)，得红黄色半固体化合物(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(2-硝基苯氧基)丙酸1.23g，收率77％。
步骤b：(S)-3-(2-氨基苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸
在室温条件下，将(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(2-硝基苯氧基)丙酸(1.10g，3.40mmol)和钯/碳(0.11g)加到含有甲醇(10mL)的圆底烧瓶中，在氢气氛围下反应过夜，TLC点板监测，反应完成。用滤纸过滤，滤液减压浓缩，得到浅棕色半固体(S)-3-(2-氨基苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸0.98g，收率98％。直接用于下一步，未进一步纯化。
步骤c：(S)-叔丁基-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)氨基甲酸酯
在2分钟内将2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.25g，3.27mmol)分批加入到(S)-3-(2-氨基苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(0.97g，3.27mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.63mL，3.60mmol)的二甲基亚砜(12mL)溶液中。反应液在室温搅拌30分钟。加入水(30mL)形成沉淀物。将反应液在冰浴中冷却15分钟，过滤。收集的固体用水洗涤并真空干燥，得灰白色固体化合物(S)-叔丁基-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)氨基甲酸酯0.76g，收率84％。
步骤d：(S)-叔丁基-(5-甲基4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)氨基甲酸酯
在室温和氮气保护下，15分钟内将碘甲烷(0.08mL，1.29mmol)滴加到(S)-叔丁基-(4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b]-[1,4]恶唑啉-3-基)氨基甲酸酯(0.3g，1.08mmol)和碳酸铯(0.5g，1.51mmol)的二甲基甲酰胺(6mL)溶液中。反应液在室温搅拌16小时。TLC点板监测，反应完成。加入水(20mL)形成沉淀物。将反应液在冰浴中冷却15分钟，然后过滤。收集的固体用水洗涤并真空干燥，得白色固体化合物(S)-叔丁基-(5-甲基4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)氨基甲酸酯0.19g，收率58.1％。
步骤e：(S)-3-氨基-5-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]恶唑啉-4(5H)-酮
在室温和氮气保护条件下，将盐酸(4M，0.72mL，2.87mmol)滴加到(S)-叔丁基-(5-甲基4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b]-[1,4]恶唑啉-3-基)氨基甲酸酯(0.28g，0.96mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中，反应液搅拌3小时。TLC监测，反应完全后用饱和碳酸氢钠中和，二氯甲烷(10mL)萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到灰白色固体粗产物(S)-3-氨基-5-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]恶唑啉-4(5H)-酮0.17g，收率90％。
步骤f：(E)-2-氨基-2-(2-(2-苯乙酰基)肼基乙酸酯乙酯
将硫代草酸乙酯(3.3g，25mmol)和苯乙酰肼(3.3mL，25mmol)溶于无水乙醇(15mL)中，将反应液在圆底烧瓶中搅拌24小时。TLC监测，反应完全后，过滤得到固体，用无水乙醇(2×5mL)洗涤，干燥，得到白色固体化合物(E)-2-氨基-2-(2-(2-苯乙酰基)肼基乙酸乙酯5.60g，收率90％。
步骤g：5-苄基-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸乙酯
将(E)-2-氨基-2-(2-(2-(苯基苯基乙酰基)肼基)乙酸乙酯(2.70g，10.90mmol)加到二苯醚(30mL)中，在170℃和氮气保护下加热8小时。TLC监测，反应完全后，将反应液冷却至室温，沉淀出固体。加入石油醚，将反应液在冰/水浴中搅拌15分钟，过滤得固体，用水和石油醚洗涤固体，得白色固体化合物5-苄基-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸乙酯2.4g，收率95％。
步骤h：5-苄基-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸
温度为15℃的条件下，将5-苄基-1H-1,2-4-噻唑-3-羧酸乙酯(8.30g，35.85mmol)加到四氢呋喃(100mL)中，然后添加氢氧化锂(2g，84mmol)在水中的溶液(20mL)。将反应液在室温下搅拌20小时。TLC监测，反应完全后，将反应液浓缩以除去四氢呋喃。在0℃条件下，往溶液中加入稀HCl溶液至pH＝2，此时沉淀出固体，过滤，用冷水洗涤，真空干燥得白色化合物5-苄基-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸5.80g，收率80％。
步骤i：(S)-3-苄基-N-(5-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-5-甲酰胺(GSK’772)。
在0℃条件下，将(S)-3-氨基-5-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]恶唑啉-4(5H)-酮(0.3g，1.56mmol)和5-苄基-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(0.35g，1.72mmol)加入到二氯甲烷(10mL)中，然后滴加1-正丙基磷酸酐(1.4mL，2.34mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.95mL，5.46mmol)。将反应液在室温搅拌30分钟，TLC监测，反应完全后用水(10mL)淬灭，二氯甲烷(10mL)萃取，并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩得到粗产物，粗产物用二甲基亚砜和水重结晶得白色固体化合物(S)-3-苄基-N-(5-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]恶唑啉-3-基)-1H-1,2,4-三唑-5-甲酰胺0.47g，收率80％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.39(s,1H),8.41(s,1H),7.50(dd,J＝7.1,2.3Hz,1H),7.36–7.20(m,8H),4.82(dt,J＝11.5,7.8Hz,1H),4.59(t,J＝10.7Hz,1H),4.40(dd,J＝9.8,7.7Hz,1H),4.12(s,2H),3.31(s,3H).HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C20H20N5O3[M+H]+378.1566；found378.1573.
实施例17
本发明实施例1～16及对比例1制备的化合物的体外抗肿瘤活性测试：抗程序性细胞坏死实验。
通过z-VAD-fmk(20μM)和Smac模拟物(10nM)预处理30分钟后，加入hTNF-α(20ng/mL)诱导肿瘤细胞(HT-29，人结肠癌细胞)的坏死。将本发明实施例1～16及对比例1的化合物GSK’772与上述组合的细胞一起孵育10小时。使用CellTiter-Glo发光细胞活力测定试剂盒(Promega)测试细胞活性。用SpectraMax M5酶标仪(Molecular Devices，California)记录化学发光值，计算EC50值，结果见表1。
表1.化合物的抗程序性细胞坏死活性
Figure BDA0002919022600000181
Figure BDA0002919022600000191
实施例18
化合物I-1和I-2的蛋白免疫印迹实验：细胞经化合物I-1和I-2处理后，使用含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂混合物的RIPA裂解缓冲液(Beyotime Biotechnology，China)提取蛋白质，使用BCA蛋白测定试剂盒(Beyotime Biotechnology，China)建立标准蛋白曲线。将蛋白质(30μg)通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离并转移到PVDF膜上(Millipore，Bedford，MA，U.S.A.)。用5％BSA将膜封闭2小时，在1％BSA中以1:1000的稀释度制备一抗。将封闭的膜与相应的一抗在4℃下孵育过夜，然后在室温下与标记的二抗(1:8000)孵育1小时。使用LI-COR Odyssey系统捕获并分析信号，结果见图1所示，图1是化合物I-1和化合物I-2的蛋白免疫印迹结果示意图。化合物I-1和I-2均在1μM浓度下完全抑制RIPK1、RIPK3、MLKL磷酸化，从而发挥抗程序性细胞坏死作用。
抗体商业来源：人源RIPK1抗体(Abcam Cat#3493s)；人源RIPK1磷酸化抗体(CellSignaling Technology，Cat#65746S)；人源RIPK3抗体(Abcam Cat#ab56164)，人源RIPK3磷酸化抗体(Abcam Cat#ab209384)，人源MLKL抗体(Abcam Cat#ab184718)，人源MLKL磷酸化抗体(Abcam Cat#187091)，GAPDH抗体(Abcam Cat#ab181602)。
以上实验结果表明，本发明的硫代七元环类衍生物具有优异的抗细胞坏死活性，可作为细胞坏死及其相关靶点抑制剂，用于制备抗TNF诱导的全身免疫综合征(SIRS)和对乙酰氨基酚(APAP)诱导的肝毒性药物，用于制备抗阿尔茨海默病、抗缺血性心肌病、抗缺血性脑卒中、抗动脉粥样硬化、抗急性胰腺炎、抗儿童炎症性肠病、抗脓毒血症、抗沙门氏菌感染、抗李斯特菌感染、抗牛痘病毒感染等炎症或感染性相关疾病的药物。
综上，因此本发明化合物及其盐类可以作为抗程序性细胞坏死抑制剂。
以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。

Claims (2)

1.一种硫代七元环类衍生物或其药用盐，其特征在于，所述硫代七元环类衍生物的结构选自以下结构中的一种：
Figure FDA0003937882760000011
2.一种权利要求1所述的硫代七元环类衍生物或其药用盐在制备预防或治疗程序性细胞坏死的药物或制备程序性细胞坏死抑制剂中的应用，其特征在于，所述程序性细胞坏死的细胞为HT-29。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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