JP2022516045A - エピトープ結合タンパク質にコンジュゲート化されたサポニン - Google Patents
エピトープ結合タンパク質にコンジュゲート化されたサポニン Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022516045A JP2022516045A JP2021536413A JP2021536413A JP2022516045A JP 2022516045 A JP2022516045 A JP 2022516045A JP 2021536413 A JP2021536413 A JP 2021536413A JP 2021536413 A JP2021536413 A JP 2021536413A JP 2022516045 A JP2022516045 A JP 2022516045A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- proteinaceous molecule
- molecule
- saponin
- proteinaceous
- binding
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 title claims abstract description 343
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 title claims abstract description 325
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 title claims description 307
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 title 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 title 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 600
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 244
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 243
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims abstract description 237
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 161
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims abstract description 110
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims abstract description 107
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 92
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 claims abstract description 80
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 68
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 claims abstract description 52
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 45
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 33
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 29
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 28
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract description 15
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 156
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 151
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 151
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 145
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 claims description 140
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 130
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 130
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 113
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims description 95
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims description 95
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 85
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 85
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 claims description 66
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 57
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 57
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 54
- DRHZYJAUECRAJM-DWSYSWFDSA-N (2s,3s,4s,5r,6r)-6-[[(3s,4s,4ar,6ar,6bs,8r,8ar,12as,14ar,14br)-8a-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3-[(2s,3r,4s,5r,6s)-5-[(2s,3r,4s,5r)-4-[(2s,3r,4r)-3,4-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxyoxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-5-[(3s,5s, Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@H](O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@H]5CC(C)(C)CC[C@@]5([C@@H](C[C@@]4(C)[C@]3(C)CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)O)C(=O)O[C@@H]1O[C@H](C)[C@@H]([C@@H]([C@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@](O)(CO)CO3)O)[C@H](O)CO2)O)[C@H](C)O1)O)O)OC(=O)C[C@@H](O)C[C@H](OC(=O)C[C@@H](O)C[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](CO)O1)O)[C@@H](C)CC)C(O)=O)[C@@H]1OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O DRHZYJAUECRAJM-DWSYSWFDSA-N 0.000 claims description 53
- -1 hexafluorophosphate Chemical compound 0.000 claims description 53
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 52
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 51
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 49
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 claims description 47
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 45
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 claims description 43
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 43
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 43
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 40
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 claims description 39
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 39
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 38
- 101000835093 Homo sapiens Transferrin receptor protein 1 Proteins 0.000 claims description 37
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 claims description 37
- 102100026144 Transferrin receptor protein 1 Human genes 0.000 claims description 37
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 36
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 36
- 150000001299 aldehydes Chemical group 0.000 claims description 36
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 36
- 229930191339 dianthin Natural products 0.000 claims description 35
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 claims description 35
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 32
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 32
- 108010045100 HSP27 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 claims description 31
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 31
- 102000005623 HSP27 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 claims description 30
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 claims description 28
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 27
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 claims description 26
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 claims description 26
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical group OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 claims description 26
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 claims description 25
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 claims description 23
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 21
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 claims description 21
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 claims description 20
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 claims description 19
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 19
- 229930182493 triterpene saponin Natural products 0.000 claims description 19
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 18
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 18
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 17
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 claims description 17
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 claims description 17
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 17
- 108010084592 Saporins Proteins 0.000 claims description 16
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 15
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 claims description 15
- 102100024217 CAMPATH-1 antigen Human genes 0.000 claims description 14
- 108010065524 CD52 Antigen Proteins 0.000 claims description 14
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 claims description 14
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 claims description 14
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 14
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 14
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 14
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 claims description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 13
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 13
- 229960005558 mertansine Drugs 0.000 claims description 13
- 108090000829 Ribosome Inactivating Proteins Proteins 0.000 claims description 12
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 claims description 12
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 12
- 229960000578 gemtuzumab Drugs 0.000 claims description 12
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 claims description 12
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 claims description 11
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 claims description 11
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 claims description 11
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 11
- IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-methylamino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-N-methylcarbamate Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H]([C@@H](CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)c1ccccc1)OC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCc1ccc(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN2C(=O)CCC2=O)C(C)C)cc1)C(C)C IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N 0.000 claims description 10
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 claims description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 10
- 229960000455 brentuximab vedotin Drugs 0.000 claims description 9
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 9
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229960002204 daratumumab Drugs 0.000 claims description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 9
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 claims description 8
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims description 8
- 229940124295 CD38 monoclonal antibody Drugs 0.000 claims description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 8
- 108091093094 Glycol nucleic acid Proteins 0.000 claims description 8
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 claims description 8
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims description 8
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 8
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims description 8
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 8
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 claims description 8
- 229960001612 trastuzumab emtansine Drugs 0.000 claims description 8
- 150000008130 triterpenoid saponins Chemical class 0.000 claims description 8
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims description 7
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims description 7
- 102100028239 Basal cell adhesion molecule Human genes 0.000 claims description 7
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 claims description 7
- 101710115912 CD27 antigen Proteins 0.000 claims description 7
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 claims description 7
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 claims description 7
- 108010058905 CD44v6 antigen Proteins 0.000 claims description 7
- 102100025221 CD70 antigen Human genes 0.000 claims description 7
- 102100025473 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100023126 Cell surface glycoprotein MUC18 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100036466 Delta-like protein 3 Human genes 0.000 claims description 7
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 claims description 7
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 claims description 7
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100027842 Fibroblast growth factor receptor 3 Human genes 0.000 claims description 7
- 101710182396 Fibroblast growth factor receptor 3 Proteins 0.000 claims description 7
- 101710088083 Glomulin Proteins 0.000 claims description 7
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100030595 HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Human genes 0.000 claims description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 7
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000935638 Homo sapiens Basal cell adhesion molecule Proteins 0.000 claims description 7
- 101000934356 Homo sapiens CD70 antigen Proteins 0.000 claims description 7
- 101000914326 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000623903 Homo sapiens Cell surface glycoprotein MUC18 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000928513 Homo sapiens Delta-like protein 3 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 claims description 7
- 101001082627 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Proteins 0.000 claims description 7
- 101000606465 Homo sapiens Inactive tyrosine-protein kinase 7 Proteins 0.000 claims description 7
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 claims description 7
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 7
- 101000998120 Homo sapiens Interleukin-3 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 7
- 101001038507 Homo sapiens Ly6/PLAUR domain-containing protein 3 Proteins 0.000 claims description 7
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000623901 Homo sapiens Mucin-16 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 claims description 7
- 101001024605 Homo sapiens Next to BRCA1 gene 1 protein Proteins 0.000 claims description 7
- 101001126417 Homo sapiens Platelet-derived growth factor receptor alpha Proteins 0.000 claims description 7
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000932478 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000633786 Homo sapiens SLAM family member 6 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000874179 Homo sapiens Syndecan-1 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000914496 Homo sapiens T-cell antigen CD7 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000851018 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 1 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000851007 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 2 Proteins 0.000 claims description 7
- 102100039813 Inactive tyrosine-protein kinase 7 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 7
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 7
- 102100040281 Ly6/PLAUR domain-containing protein 3 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100023123 Mucin-16 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims description 7
- 102000001760 Notch3 Receptor Human genes 0.000 claims description 7
- 108010029756 Notch3 Receptor Proteins 0.000 claims description 7
- 102100030485 Platelet-derived growth factor receptor alpha Human genes 0.000 claims description 7
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 claims description 7
- 241001092473 Quillaja Species 0.000 claims description 7
- 108091008103 RNA aptamers Proteins 0.000 claims description 7
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 claims description 7
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 claims description 7
- 102100020718 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100029197 SLAM family member 6 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100035721 Syndecan-1 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100027208 T-cell antigen CD7 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100033178 Vascular endothelial growth factor receptor 1 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 claims description 7
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 7
- 229940127276 delta-like ligand 3 Drugs 0.000 claims description 7
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 7
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 claims description 7
- 108020005243 folate receptor Proteins 0.000 claims description 7
- 102000006815 folate receptor Human genes 0.000 claims description 7
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 claims description 7
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 claims description 7
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 7
- 229960002450 ofatumumab Drugs 0.000 claims description 7
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 claims description 7
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims description 7
- MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N (2s)-2-[[(2r,3r)-3-methoxy-3-[(2s)-1-[(3r,4s,5s)-3-methoxy-5-methyl-4-[methyl-[(2s)-3-methyl-2-[[(2s)-3-methyl-2-(methylamino)butanoyl]amino]butanoyl]amino]heptanoyl]pyrrolidin-2-yl]-2-methylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)[C@H](OC)CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N 0.000 claims description 6
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 claims description 6
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 claims description 6
- 102100036369 Carbonic anhydrase 6 Human genes 0.000 claims description 6
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 claims description 6
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000714525 Homo sapiens Carbonic anhydrase 6 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 claims description 6
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 6
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 claims description 6
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 claims description 6
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 6
- 108091008102 DNA aptamers Proteins 0.000 claims description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 5
- 102100022337 Integrin alpha-V Human genes 0.000 claims description 5
- 108010040765 Integrin alphaV Proteins 0.000 claims description 5
- 101100369076 Mus musculus Tdgf1 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 5
- 241000219287 Saponaria Species 0.000 claims description 5
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 claims description 5
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 claims description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 5
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 claims description 5
- 108010093470 monomethyl auristatin E Proteins 0.000 claims description 5
- 108010059074 monomethylauristatin F Proteins 0.000 claims description 5
- 229960002087 pertuzumab Drugs 0.000 claims description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 5
- 101710094856 Apoptin Proteins 0.000 claims description 4
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241001316290 Gypsophila Species 0.000 claims description 4
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 claims description 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 claims description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ZVYVPGLRVWUPMP-FYSMJZIKSA-N exatecan Chemical compound C1C[C@H](N)C2=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC3=CC(F)=C(C)C1=C32 ZVYVPGLRVWUPMP-FYSMJZIKSA-N 0.000 claims description 4
- 229950009429 exatecan Drugs 0.000 claims description 4
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 4
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 4
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 claims description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-O pyridinium Chemical compound C1=CC=[NH+]C=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 4
- 238000009958 sewing Methods 0.000 claims description 4
- 241001533988 Agrostemma Species 0.000 claims description 3
- 108010027164 Amanitins Proteins 0.000 claims description 3
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 claims description 3
- 229930188224 Cryptophycin Natural products 0.000 claims description 3
- 108010047852 Integrin alphaVbeta3 Proteins 0.000 claims description 3
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 claims description 3
- 101710084578 Short neurotoxin 1 Proteins 0.000 claims description 3
- DPOPAJRDYZGTIR-UHFFFAOYSA-N Tetrazine Chemical compound C1=CN=NN=N1 DPOPAJRDYZGTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 101710182532 Toxin a Proteins 0.000 claims description 3
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 claims description 3
- CIORWBWIBBPXCG-JZTFPUPKSA-N amanitin Chemical compound O=C1N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N2CC(O)C[C@H]2C(=O)N[C@@H](C(C)[C@@H](O)CO)C(=O)N[C@@H](C2)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@H]1CS(=O)C1=C2C2=CC=C(O)C=C2N1 CIORWBWIBBPXCG-JZTFPUPKSA-N 0.000 claims description 3
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 claims description 3
- 229940049706 benzodiazepine Drugs 0.000 claims description 3
- 108010006226 cryptophycin Proteins 0.000 claims description 3
- PSNOPSMXOBPNNV-VVCTWANISA-N cryptophycin 1 Chemical compound C1=C(Cl)C(OC)=CC=C1C[C@@H]1C(=O)NC[C@@H](C)C(=O)O[C@@H](CC(C)C)C(=O)O[C@H]([C@H](C)[C@@H]2[C@H](O2)C=2C=CC=CC=2)C/C=C/C(=O)N1 PSNOPSMXOBPNNV-VVCTWANISA-N 0.000 claims description 3
- PSNOPSMXOBPNNV-UHFFFAOYSA-N cryptophycin-327 Natural products C1=C(Cl)C(OC)=CC=C1CC1C(=O)NCC(C)C(=O)OC(CC(C)C)C(=O)OC(C(C)C2C(O2)C=2C=CC=CC=2)CC=CC(=O)N1 PSNOPSMXOBPNNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 claims description 3
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 claims description 3
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 claims description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 claims description 3
- UOWVMDUEMSNCAV-WYENRQIDSA-N rachelmycin Chemical class C1([C@]23C[C@@H]2CN1C(=O)C=1NC=2C(OC)=C(O)C4=C(C=2C=1)CCN4C(=O)C1=CC=2C=4CCN(C=4C(O)=C(C=2N1)OC)C(N)=O)=CC(=O)C1=C3C(C)=CN1 UOWVMDUEMSNCAV-WYENRQIDSA-N 0.000 claims description 3
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 claims description 3
- SVUOLADPCWQTTE-UHFFFAOYSA-N 1h-1,2-benzodiazepine Chemical compound N1N=CC=CC2=CC=CC=C12 SVUOLADPCWQTTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FJHBVJOVLFPMQE-QFIPXVFZSA-N 7-Ethyl-10-Hydroxy-Camptothecin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CC)=C(CN3C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=C33)=O)C3=NC2=C1 FJHBVJOVLFPMQE-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims description 2
- 108010066676 Abrin Proteins 0.000 claims description 2
- 101800002638 Alpha-amanitin Proteins 0.000 claims description 2
- 102100022987 Angiogenin Human genes 0.000 claims description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 2
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 claims description 2
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 claims description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 claims description 2
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 claims description 2
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 2
- 231100000742 Plant toxin Toxicity 0.000 claims description 2
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 claims description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 2
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 claims description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 claims description 2
- RXGJTYFDKOHJHK-UHFFFAOYSA-N S-deoxo-amaninamide Natural products CCC(C)C1NC(=O)CNC(=O)C2Cc3c(SCC(NC(=O)CNC1=O)C(=O)NC(CC(=O)N)C(=O)N4CC(O)CC4C(=O)NC(C(C)C(O)CO)C(=O)N2)[nH]c5ccccc35 RXGJTYFDKOHJHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108010079723 Shiga Toxin Proteins 0.000 claims description 2
- 101800004982 Volkensin A chain Proteins 0.000 claims description 2
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000004007 alpha amanitin Substances 0.000 claims description 2
- CIORWBWIBBPXCG-SXZCQOKQSA-N alpha-amanitin Chemical compound O=C1N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N2C[C@H](O)C[C@H]2C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](O)CO)C(=O)N[C@@H](C2)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@H]1C[S@@](=O)C1=C2C2=CC=C(O)C=C2N1 CIORWBWIBBPXCG-SXZCQOKQSA-N 0.000 claims description 2
- CIORWBWIBBPXCG-UHFFFAOYSA-N alpha-amanitin Natural products O=C1NC(CC(N)=O)C(=O)N2CC(O)CC2C(=O)NC(C(C)C(O)CO)C(=O)NC(C2)C(=O)NCC(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NCC(=O)NC1CS(=O)C1=C2C2=CC=C(O)C=C2N1 CIORWBWIBBPXCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108010072788 angiogenin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 claims description 2
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 claims description 2
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 claims description 2
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 claims description 2
- 229950007318 ozogamicin Drugs 0.000 claims description 2
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 2
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003123 plant toxin Substances 0.000 claims description 2
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims description 2
- HNMATTJJEPZZMM-BPKVFSPJSA-N s-[(2r,3s,4s,6s)-6-[[(2r,3s,4s,5r,6r)-5-[(2s,4s,5s)-5-[acetyl(ethyl)amino]-4-methoxyoxan-2-yl]oxy-6-[[(2s,5z,9r,13e)-13-[2-[[4-[(2e)-2-[1-[4-(4-amino-4-oxobutoxy)phenyl]ethylidene]hydrazinyl]-2-methyl-4-oxobutan-2-yl]disulfanyl]ethylidene]-9-hydroxy-12-(m Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](N(CC)C(C)=O)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@@](C/3=C/CSSC(C)(C)CC(=O)N\N=C(/C)C=3C=CC(OCCCC(N)=O)=CC=3)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HNMATTJJEPZZMM-BPKVFSPJSA-N 0.000 claims description 2
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 2
- DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N teicoplanin aglycone Chemical group N([C@H](C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)OC=1C=C3C=C(C=1O)OC1=CC=C(C=C1Cl)C[C@H](C(=O)N1)NC([C@H](N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)=O)C(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3NC(=O)[C@@H]1C1=CC5=CC(O)=C1 DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N 0.000 claims description 2
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 claims description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 2
- 108010043904 volkensin Proteins 0.000 claims description 2
- KQNNSYZQMSOOQH-GLDAUDTLSA-N volkensin Chemical compound C=1([C@@H]2C[C@@H]3O[C@@H](O)C[C@@H]4[C@]5(C)[C@H]6[C@H]([C@H]([C@@]4(C)C3=C2C)O)OC[C@]6(C)[C@H](OC(C)=O)C[C@@H]5OC(=O)C(/C)=C/C)C=COC=1 KQNNSYZQMSOOQH-GLDAUDTLSA-N 0.000 claims description 2
- 229960005502 α-amanitin Drugs 0.000 claims description 2
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 claims 2
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 claims 2
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 claims 2
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 claims 2
- YUOCYTRGANSSRY-UHFFFAOYSA-N pyrrolo[2,3-i][1,2]benzodiazepine Chemical compound C1=CN=NC2=C3C=CN=C3C=CC2=C1 YUOCYTRGANSSRY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- MOMFXATYAINJML-UHFFFAOYSA-N 2-Acetylthiazole Chemical group CC(=O)C1=NC=CS1 MOMFXATYAINJML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010043938 Ephrin-A4 Proteins 0.000 claims 1
- 102100033942 Ephrin-A4 Human genes 0.000 claims 1
- LAHSXXNOJMWHBH-WVPBMNGESA-N Gypsoside Natural products O=C(O)[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]3[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)[C@H](CO)O2)[C@H](O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CO2)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@](C=O)(C)[C@@H]3[C@](C)([C@H]4[C@](C)([C@]5(C)C([C@H]6[C@](C(=O)O[C@H]7[C@H](O[C@@H]8[C@H](O[C@@H]9[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO9)[C@H](O)[C@H](O)CO8)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]8[C@@H](O)[C@@H](O[C@H]9[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CO9)[C@H](O)[C@@H](C)O8)[C@@H](C)O7)(CC5)CCC(C)(C)C6)=CC4)CC3)CC2)O1 LAHSXXNOJMWHBH-WVPBMNGESA-N 0.000 claims 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 claims 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 claims 1
- 101150006308 botA gene Proteins 0.000 claims 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims 1
- 229920005565 cyclic polymer Polymers 0.000 claims 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 claims 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 claims 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 67
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 47
- 229940127166 Trastuzumab–saporin Drugs 0.000 description 32
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 31
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 28
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 25
- 238000001254 matrix assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrum Methods 0.000 description 25
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 21
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 20
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 20
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 19
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 15
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 15
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 14
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 14
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 13
- 238000011161 development Methods 0.000 description 13
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 12
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 10
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 10
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 10
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 10
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 9
- 208000012287 Prolapse Diseases 0.000 description 9
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 9
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 9
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 9
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 9
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 8
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 7
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 7
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 7
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 7
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 7
- 229960003297 gemtuzumab ozogamicin Drugs 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 230000009437 off-target effect Effects 0.000 description 7
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 7
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 6
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 6
- ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N ammonium persulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 6
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 6
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 6
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 6
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 239000002585 base Substances 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 5
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 5
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 5
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 5
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 5
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 4
- ZUHQCDZJPTXVCU-UHFFFAOYSA-N C1#CCCC2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 Chemical compound C1#CCCC2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ZUHQCDZJPTXVCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 4
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 4
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 4
- 239000011265 semifinished product Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 4
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N (4as,6as,6br,8ar,9r,10s,12ar,12br,14bs)-10-hydroxy-2,2,6a,6b,9,12a-hexamethyl-9-[(sulfooxy)methyl]-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-icosahydropicene-4a-carboxylic acid Chemical compound C1C[C@H](O)[C@@](C)(COS(O)(=O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N 0.000 description 3
- 101000762949 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) Exotoxin A Proteins 0.000 description 3
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 3
- 229910001870 ammonium persulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000031016 anaphase Effects 0.000 description 3
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 3
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 3
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 3
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 3
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 3
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- SSOORFWOBGFTHL-OTEJMHTDSA-N (4S)-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[(2S)-2-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(1S)-4-carbamimidamido-1-carboxybutyl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-2-oxoethyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2,6-diaminohexanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)[C@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SSOORFWOBGFTHL-OTEJMHTDSA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 244000303258 Annona diversifolia Species 0.000 description 2
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 2
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- 208000037914 B-cell disorder Diseases 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 2
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 2
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DLRVVLDZNNYCBX-UHFFFAOYSA-N Polydextrose Polymers OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 2
- PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N TCEP Chemical compound OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 239000003181 biological factor Substances 0.000 description 2
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical class C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000011038 discontinuous diafiltration by volume reduction Methods 0.000 description 2
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 2
- 230000004651 endocytosis pathway Effects 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 2
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 2
- QEWYKACRFQMRMB-UHFFFAOYSA-N fluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)CF QEWYKACRFQMRMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 2
- 230000037440 gene silencing effect Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 2
- 125000005597 hydrazone group Chemical group 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229950004101 inotuzumab ozogamicin Drugs 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 230000008095 long lasting therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N phenylboronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=CC=C1 HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000580 polymer-drug conjugate Substances 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009711 regulatory function Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 description 2
- 239000000878 small molecule-drug conjugate Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 2
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical compound O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 2
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 2
- 238000006177 thiolation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical group 0.000 description 2
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- BXTJCSYMGFJEID-XMTADJHZSA-N (2s)-2-[[(2r,3r)-3-[(2s)-1-[(3r,4s,5s)-4-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[6-[3-[(2r)-2-amino-2-carboxyethyl]sulfanyl-2,5-dioxopyrrolidin-1-yl]hexanoyl-methylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]-methylamino]-3-methoxy-5-methylheptanoyl]pyrrolidin-2-yl]-3-met Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C)[C@@H](OC)[C@@H]1CCCN1C(=O)C[C@H]([C@H]([C@@H](C)CC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CCCCCN1C(C(SC[C@H](N)C(O)=O)CC1=O)=O)C(C)C)OC)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 BXTJCSYMGFJEID-XMTADJHZSA-N 0.000 description 1
- QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M (4z)-1-(3-methylbutyl)-4-[[1-(3-methylbutyl)quinolin-1-ium-4-yl]methylidene]quinoline;iodide Chemical compound [I-].C12=CC=CC=C2N(CCC(C)C)C=CC1=CC1=CC=[N+](CCC(C)C)C2=CC=CC=C12 QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZOHXWSHGANNQGO-DSIKUUPMSA-N 1-amino-4-[[5-[[(2S)-1-[[(1S,2R,3S,5S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-chloro-21-hydroxy-12,20-dimethoxy-2,5,9,16-tetramethyl-8,23-dioxo-4,24-dioxa-9,22-diazatetracyclo[19.3.1.110,14.03,5]hexacosa-10,12,14(26),16,18-pentaen-6-yl]oxy]-1-oxopropan-2-yl]-methylamino]-2-methyl-5-oxopentan-2-yl]disulfanyl]-1-oxobutane-2-sulfonic acid Chemical compound CO[C@@H]([C@@]1(O)C[C@H](OC(=O)N1)[C@@H](C)[C@@H]1O[C@@]1(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](C)N(C)C(=O)CCC(C)(C)SSCCC(C(N)=O)S(O)(=O)=O)CC(=O)N1C)\C=C\C=C(C)\CC2=CC(OC)=C(Cl)C1=C2 ZOHXWSHGANNQGO-DSIKUUPMSA-N 0.000 description 1
- IXRAZHMEXBNECJ-UHFFFAOYSA-N 1-aminopropane-1-thiol Chemical compound CCC(N)S IXRAZHMEXBNECJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXBLVCZKDOZZOJ-UHFFFAOYSA-N 2,3-Dihydrothiophene Chemical compound C1CC=CS1 OXBLVCZKDOZZOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropyl methacrylate Chemical compound CC(O)COC(=O)C(C)=C VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DJBRKGZFUXKLKO-UHFFFAOYSA-N 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 DJBRKGZFUXKLKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXZBMSIDSOZZHK-DOPDSADYSA-N 31362-50-2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CNC=N1 QXZBMSIDSOZZHK-DOPDSADYSA-N 0.000 description 1
- GUCPYIYFQVTFSI-UHFFFAOYSA-N 4-methoxybenzamide Chemical compound COC1=CC=C(C(N)=O)C=C1 GUCPYIYFQVTFSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGMLACURZVGTPK-UHFFFAOYSA-N 5-fluoranyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound OC1=NC=C(F)C(O)=N1.FC1=CNC(=O)NC1=O ZGMLACURZVGTPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102100029457 Adenine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010024223 Adenine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 238000006596 Alder-ene reaction Methods 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 101710191958 Amino-acid acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 102000009042 Argininosuccinate Lyase Human genes 0.000 description 1
- 102000053640 Argininosuccinate synthases Human genes 0.000 description 1
- 108700024106 Argininosuccinate synthases Proteins 0.000 description 1
- 102000014654 Aromatase Human genes 0.000 description 1
- 108010078554 Aromatase Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000013585 Bombesin Human genes 0.000 description 1
- 108010051479 Bombesin Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940124292 CD20 monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 229940124293 CD30 monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 229940124294 CD33 monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 229940124296 CD52 monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 1
- 229940127291 Calcium channel antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 description 1
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 description 1
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 208000000094 Chronic Pain Diseases 0.000 description 1
- 102100040836 Claudin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000600 Claudin-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 238000005698 Diels-Alder reaction Methods 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012545 EGF-like domains Human genes 0.000 description 1
- 108050002150 EGF-like domains Proteins 0.000 description 1
- 101710082714 Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 240000003824 Gypsophila paniculata Species 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- 229940126592 Ibritsumomab Drugs 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010034143 Inflammasomes Proteins 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 description 1
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 description 1
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Natural products O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003939 Membrane transport proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000301 Membrane transport proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001092142 Molina Species 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 101001055320 Myxine glutinosa Insulin-like growth factor Proteins 0.000 description 1
- HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N N-ethylmaleimide Chemical compound CCN1C(=O)C=CC1=O HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 241001644525 Nastus productus Species 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 101150050051 OAC gene Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 208000030053 Opioid-Induced Constipation Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101150030083 PE38 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 229920001100 Polydextrose Polymers 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- OWPCHSCAPHNHAV-UHFFFAOYSA-N Rhizoxin Natural products C1C(O)C2(C)OC2C=CC(C)C(OC(=O)C2)CC2CC2OC2C(=O)OC1C(C)C(OC)C(C)=CC=CC(C)=CC1=COC(C)=N1 OWPCHSCAPHNHAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPDOZYZAJKUVRZ-NRYSMURASA-N S-[(2R,3S,4S,6S)-6-[[(2R,3S,4S,5R,6R)-5-[(2S,4S,5S)-5-[acetyl(ethyl)amino]-4-methoxyoxan-2-yl]oxy-4-hydroxy-6-[[(2S,5Z,9R)-9-hydroxy-12-(methoxycarbonylamino)-13-[2-(methyltrisulfanyl)ethylidene]-11-oxo-2-bicyclo[7.3.1]trideca-1(12),5-dien-3,7-diynyl]oxy]-2-methyloxan-3-yl]amino]oxy-4-hydroxy-2-methyloxan-3-yl] 4-[(2S,3R,4R,5S,6S)-3,5-dihydroxy-4-methoxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-5-iodo-2,3-dimethoxy-6-methylbenzenecarbothioate Chemical compound CCN([C@H]1CO[C@H](C[C@@H]1OC)O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](NO[C@H]2C[C@H](O)[C@H](SC(=O)c3c(C)c(I)c(O[C@@H]4O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)[C@H]4O)c(OC)c3OC)[C@@H](C)O2)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C#C\C=C/C#C[C@]2(O)CC(=O)C(NC(=O)OC)=C1C2=CCSSSC)C(C)=O WPDOZYZAJKUVRZ-NRYSMURASA-N 0.000 description 1
- 108010017898 Shiga Toxins Proteins 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000000365 Topoisomerase I Inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108010073062 Transcription Activator-Like Effectors Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 102100031638 Tuberin Human genes 0.000 description 1
- 108050009309 Tuberin Proteins 0.000 description 1
- 108010061323 Type 2 Ribosome Inactivating Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- DFYPFJSPLUVPFJ-QJEDTDQSSA-N [(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-2-[[[(2R,3S,5R)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[(2R,3S,5R)-2-[[[(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl] [(2R,3S,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methyl hydrogen phosphate Chemical compound Cc1cn([C@H]2C[C@H](OP(O)(=O)OC[C@H]3O[C@H](C[C@@H]3OP(O)(=O)OC[C@H]3O[C@H](C[C@@H]3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)[C@@H](COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]3C[C@@H](O[C@@H]3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)O2)c(=O)[nH]c1=O DFYPFJSPLUVPFJ-QJEDTDQSSA-N 0.000 description 1
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001241 acetals Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- HUMHYXGDUOGHTG-HEZXSMHISA-N alpha-D-GalpNAc-(1->3)-[alpha-L-Fucp-(1->2)]-D-Galp Chemical group O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)OC1O HUMHYXGDUOGHTG-HEZXSMHISA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DVKNGEFBSA-N alpha-D-quinovopyranose Chemical compound C[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DVKNGEFBSA-N 0.000 description 1
- 238000010976 amide bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940121369 angiogenesis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002280 anti-androgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002494 anti-cea effect Effects 0.000 description 1
- 229940046836 anti-estrogen Drugs 0.000 description 1
- 230000001833 anti-estrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000078 anti-malarial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 1
- 230000002137 anti-vascular effect Effects 0.000 description 1
- 239000000051 antiandrogen Substances 0.000 description 1
- 229940030495 antiandrogen sex hormone and modulator of the genital system Drugs 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013059 antihormonal agent Substances 0.000 description 1
- 229940045988 antineoplastic drug protein kinase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000003886 aromatase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940046844 aromatase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 150000001557 benzodiazepines Chemical class 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 description 1
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000007665 chronic toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000160 chronic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000011254 conventional chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000006352 cycloaddition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 229950008925 depatuxizumab mafodotin Drugs 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- VQNATVDKACXKTF-XELLLNAOSA-N duocarmycin Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=C2NC(C(=O)N3C4=CC(=O)C5=C([C@@]64C[C@@H]6C3)C=C(N5)C(=O)OC)=CC2=C1 VQNATVDKACXKTF-XELLLNAOSA-N 0.000 description 1
- 229960005501 duocarmycin Drugs 0.000 description 1
- 229930184221 duocarmycin Natural products 0.000 description 1
- 229960001776 edrecolomab Drugs 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 description 1
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M hexanoate Chemical compound CCCCCC([O-])=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000005918 in vitro anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000002608 insulinlike Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 230000008863 intramolecular interaction Effects 0.000 description 1
- 239000002555 ionophore Substances 0.000 description 1
- 230000000236 ionophoric effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229950000518 labetuzumab Drugs 0.000 description 1
- 150000003951 lactams Chemical class 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124735 malaria vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009061 membrane transport Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone Chemical compound O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001156 mitoxantrone Drugs 0.000 description 1
- 229950000720 moxetumomab pasudotox Drugs 0.000 description 1
- OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N n-(2-hydroxypropyl)-2-methylprop-2-enamide Chemical compound CC(O)CNC(=O)C(C)=C OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZHSEJADLWPNLE-GRGSLBFTSA-N naloxone Chemical compound O=C([C@@H]1O2)CC[C@@]3(O)[C@H]4CC5=CC=C(O)C2=C5[C@@]13CCN4CC=C UZHSEJADLWPNLE-GRGSLBFTSA-N 0.000 description 1
- 229960004127 naloxone Drugs 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229950010203 nimotuzumab Drugs 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960003347 obinutuzumab Drugs 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003401 opiate antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000009428 pathway alteration Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009522 phase III clinical trial Methods 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229940065514 poly(lactide) Drugs 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 239000001259 polydextrose Substances 0.000 description 1
- 235000013856 polydextrose Nutrition 0.000 description 1
- 229940035035 polydextrose Drugs 0.000 description 1
- 239000003505 polymerization initiator Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 229940124606 potential therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000003909 protein kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 201000000443 refractory hairy cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- OWPCHSCAPHNHAV-LMONGJCWSA-N rhizoxin Chemical compound C/C([C@H](OC)[C@@H](C)[C@@H]1C[C@H](O)[C@]2(C)O[C@@H]2/C=C/[C@@H](C)[C@]2([H])OC(=O)C[C@@](C2)(C[C@@H]2O[C@H]2C(=O)O1)[H])=C\C=C\C(\C)=C\C1=COC(C)=N1 OWPCHSCAPHNHAV-LMONGJCWSA-N 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M sodium docusate Chemical compound [Na+].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 125000002653 sulfanylmethyl group Chemical group [H]SC([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229960005267 tositumomab Drugs 0.000 description 1
- 231100000440 toxicity profile Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000003956 transport vesicle Anatomy 0.000 description 1
- SZCZSKMCTGEJKI-UHFFFAOYSA-N tuberin Natural products COC1=CC=C(C=CNC=O)C=C1 SZCZSKMCTGEJKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6883—Polymer-drug antibody conjugates, e.g. mitomycin-dextran-Ab; DNA-polylysine-antibody complex or conjugate used for therapy
- A61K47/6885—Polymer-drug antibody conjugates, e.g. mitomycin-dextran-Ab; DNA-polylysine-antibody complex or conjugate used for therapy the conjugate or the polymer being a starburst, a dendrimer, a cascade
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/554—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being a steroid plant sterol, glycyrrhetic acid, enoxolone or bile acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/593—Polyesters, e.g. PLGA or polylactide-co-glycolide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/595—Polyamides, e.g. nylon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/6415—Toxins or lectins, e.g. clostridial toxins or Pseudomonas exotoxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/642—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a cytokine, e.g. IL2, chemokine, growth factors or interferons being the inactive part of the conjugate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
- A61K47/6817—Toxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
- A61K47/6817—Toxins
- A61K47/6819—Plant toxins
- A61K47/6825—Ribosomal inhibitory proteins, i.e. RIP-I or RIP-II, e.g. Pap, gelonin or dianthin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6845—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a cytokine, e.g. growth factors, VEGF, TNF, a lymphokine or an interferon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
- A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
- A61K47/6857—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from lung cancer cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
- A61K47/6863—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from stomach or intestines cancer cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
- A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
- C07H15/256—Polyterpene radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
- C07J63/008—Expansion of ring D by one atom, e.g. D homo steroids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
ある実施形態は、本発明の治療薬の組み合わせであり、第2のタンパク質性分子に及び/又は第3のタンパク質性分子に含まれるエフェクター部分は、少なくとも1つのペイロードを含むか又はそれからなり、好ましくは、リボソームを標的化する毒素、伸長因子を標的化する毒素、チューブリンを標的化する毒素、DNAを標的化する毒素、及びRNAを標的化する毒素のいずれか1つ以上から選択される。
抗EGFR抗体-サポニン;
抗EGFR抗体-トリテルペノイドサポニン、及び/又は位置C-23にアルデヒド官能基を有しかつ任意にサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてグルクロン酸官能基を含む12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニン;
抗EGFR抗体-SO1861;
抗EGFR抗体-GE1741;
抗EGFR抗体-SA1641;
抗EGFR抗体-Quil-A;
抗EGFR抗体-QS-21;
抗EGFR抗体-Quillaja saponariaの水溶性サポニン画分中のサポニン;
セツキシマブ-サポニン;
セツキシマブ-トリテルペノイドサポニン、及び/又は位置C-23にアルデヒド官能基を有しかつ任意にサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてグルクロン酸官能基を含む12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニン;
セツキシマブ-SO1861;
セツキシマブ-GE1741;
セツキシマブ-SA1641;
セツキシマブ-Quil-A;
セツキシマブ-QS-21;
セツキシマブ-Quillaja saponariaの水溶性サポニン画分中のサポニン;
抗HER2抗体-サポニン;
抗HER2抗体-トリテルペノイドサポニン、及び/又は位置C-23にアルデヒド官能基を有しかつ任意にサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてグルクロン酸官能基を含む12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニン;
抗HER2抗体-SO1861;
抗HER2抗体-GE1741;
抗HER2抗体-SA1641;
抗HER2抗体-Quil-A;
抗HER2抗体-QS-21;
抗HER2抗体-Quillaja saponariaの水溶性サポニン画分中のサポニン;
トラスツズマブ-サポニン;
トラスツズマブ-トリテルペノイドサポニン、及び/又は位置C-23にアルデヒド官能基を有しかつ任意にサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてグルクロン酸官能基を含む12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニン;
トラスツズマブ-SO1861;
トラスツズマブ-GE1741;
トラスツズマブ-SA1641;
トラスツズマブ-Quil-A;
トラスツズマブ-QS-21;
トラスツズマブ-Quillaja saponariaの水溶性サポニン画分中のサポニン;
抗CD71抗体-サポニン;
抗CD71抗体-トリテルペノイドサポニン、及び/又は位置C-23にアルデヒド官能基を有しかつ任意にサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてグルクロン酸官能基を含む12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニン;
抗CD71抗体-SO1861;
抗CD71抗体-GE1741;
抗CD71抗体-SA1641;
抗CD71抗体-Quil-A;
抗CD71抗体-QS-21;
抗CD71抗体-Quillaja saponariaの水溶性サポニン画分中のサポニン;
OKT-9-サポニン;
OKT-9-トリテルペノイドサポニン、及び/又は位置C-23にアルデヒド官能基を有しかつ任意にサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてグルクロン酸官能基を含む12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニン;
OKT-9-SO1861;
OKT-9-GE1741;
OKT-9-SA1641;
OKT-9-Quil-A;
OKT-9-QS-21;
OKT-9-Quillaja saponariaの水溶性サポニン画分中のサポニン;
抗EGFR抗体-オリゴヌクレオチド;
抗EGFR抗体-アンチセンスオリゴヌクレオチド;
抗EGFR抗体-siRNA;
抗EGFR抗体-アンチセンスBNA;
抗EGFR抗体-アンチセンスBNA(HSP27);
抗EGFR抗体-タンパク質性毒素;
抗EGFR抗体-リボソーム不活性化タンパク質;
抗EGFR抗体-ジアンチン;
抗EGFR抗体-サポリン;
セツキシマブ-オリゴヌクレオチド;
セツキシマブ-アンチセンスオリゴヌクレオチド;
セツキシマブ-siRNA;
セツキシマブ-アンチセンスBNA;
セツキシマブ-アンチセンスBNA(HSP27);
セツキシマブ-タンパク質性毒素;
セツキシマブ-リボソーム不活化タンパク質;
セツキシマブ-ジアンチン;
セツキシマブ-サポリン;
抗HER2抗体-オリゴヌクレオチド;
抗HER2抗体-アンチセンスオリゴヌクレオチド;
抗HER2抗体-siRNA;
抗HER2抗体-アンチセンスBNA;
抗HER2抗体-アンチセンスBNA(HSP27);
抗HER2抗体-タンパク質性毒素;
抗HER2抗体-リボソーム不活性化タンパク質;
抗HER2抗体-ジアンチン;
抗HER2抗体-サポリン;
トラスツズマブ-オリゴヌクレオチド;
トラスツズマブ-アンチセンスオリゴヌクレオチド;
トラスツズマブ-siRNA;
トラスツズマブ-アンチセンスBNA;
トラスツズマブ-アンチセンスBNA(HSP27);
トラスツズマブ-タンパク質性毒素;
トラスツズマブ-リボソーム不活化タンパク質;
トラスツズマブ-ジアンチン;
トラスツズマブ-サポリン;
抗CD71抗体-オリゴヌクレオチド;
抗CD71抗体-アンチセンスオリゴヌクレオチド;
抗CD71抗体-siRNA;
抗CD71抗体-アンチセンスBNA;
抗CD71抗体-アンチセンスBNA(HSP27);
抗CD71抗体-タンパク質性毒素;
抗CD71抗体-リボソーム不活性化タンパク質;
抗CD71抗体-ジアンチン;
抗CD71抗体-サポリン;
OKT-9-オリゴヌクレオチド;
OKT-9-アンチセンスオリゴヌクレオチド;
OKT-9-siRNA;
OKT-9-アンチセンスBNA;
OKT-9-アンチセンスBNA(HSP27);
OKT-9-タンパク質性毒素;
OKT-9-リボソーム不活性化タンパク質;
OKT-9-ジアンチン;
OKT-9-サポリン;
抗EGFR抗体(-オリゴヌクレオチド)(-サポニン)であり、オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、siRNA、アンチセンスBNA、及びアンチセンスBNA(HSP27)のいずれか1つ以上であり、サポニンは、トリテルペノイドサポニン、及び/又は位置C-23にアルデヒド官能基を有し、かつ任意にサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてグルクロン酸官能基を含む12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニン、SO1861、GE1741、SA1641、Quil-A、QS-21、及びQuillaja saponariaの水溶性サポニン画分中のサポニンのいずれか1つ以上であり、抗EGFR抗体は好ましくはセツキシマブである;
抗EGFR抗体(-タンパク質性毒素)(-サポニン)であり、タンパク質性毒素は、リボソーム不活性化タンパク質、ジアンチン、及びサポリンのいずれか1つ以上であり、サポニンは、トリテルペノイドサポニン、及び/又は位置C-23にアルデヒド官能基を有しかつ任意にサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてグルクロン酸官能基を含む12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニン、SO1861、GE1741、SA1641、Quil-A、QS-21、及びQuillaja saponariaの水溶性サポニン画分中のサポニンのいずれか1つ以上であり、抗EGFR抗体は好ましくはセツキシマブである;
抗HER2抗体(-オリゴヌクレオチド)(-サポニン)であり、オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、siRNA、アンチセンスBNA、及びアンチセンスBNA(HSP27)のいずれか1つ以上であり、サポニンは、トリテルペノイドサポニン、及び/又は位置C-23にアルデヒド官能基を有しかつ任意にサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてグルクロン酸官能基を含む12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニン、SO1861、GE1741、SA1641、Quil-A、QS-21、及びQuillaja saponariaの水溶性サポニン画分中のサポニンのいずれか1つ以上であり、抗HER2抗体は、好ましくはトラスツズマブである;
抗HER2抗体(-タンパク質性毒素)(-サポニン)であり、タンパク質性毒素は、リボソーム不活性化タンパク質、ジアンチン、及びサポリンのいずれか1つ以上であり、サポニンは、トリテルペノイドサポニン、及び/又は位置C-23にアルデヒド官能基を有しかつ任意にサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてグルクロン酸官能基を含む12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニン、SO1861、GE1741、SA1641、Quil-A、QS-21、及びQuillaja saponariaの水溶性サポニン画分中のサポニンのいずれか1つ以上であり、抗HER2抗体は、好ましくはトラスツズマブである;
抗CD71抗体(-オリゴヌクレオチド)(-サポニン)であり、オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、siRNA、アンチセンスBNA、及びアンチセンスBNA(HSP27)のいずれか1つ以上であり、サポニンは、トリテルペノイドサポニン、及び/又は位置C-23にアルデヒド官能基を有しかつ任意にサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてグルクロン酸官能基を含む12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニン、SO1861、GE1741、SA1641、Quil-A、QS-21、及びQuillaja saponariaの水溶性サポニン画分中のサポニンのいずれか1つ以上であり、抗CD71抗体は、好ましくはOKT-9である;
抗CD71抗体(-タンパク質性毒素)(-サポニン)であり、タンパク質性毒素は、リボソーム不活性化タンパク質、ジアンチン、及びサポリンのいずれか1つ以上であり、サポニンは、トリテルペノイドサポニン、及び/又は位置C-23にアルデヒド官能基を有し、かつ任意にサポニンのC-3ベータ-OH基における炭水化物置換基上のグルクロン酸基を含む、12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニン、SO1861、GE1741、SA1641、Quil-A、QS-21、及びQuillaja saponariaの水溶性サポニン画分中のサポニンのいずれか1つ以上であり、抗CD71抗体は、好ましくは、OKT-9である。
A(-S)b(-E)c
構造C
式中、Aは、第1の結合部位であり;
Sはサポニンであり;
Eはエフェクター分子であり;
b=0~64、好ましくは0、1、2、3、4、8、16、32、64、又はその間のいずれかの整数若しくは分数であり;
c=0~8、好ましくは0、1、2、3、4、6、8、又はその間のいずれかの整数又は分数であり、
SはA及び/又はEにカップリングされ、EはA及び/又はSにカップリングされ、好ましくは、SはAにカップリングされ、EはAにカップリングされる。
定義
ある実施形態は、本発明のエンドソーム脱出向上コンジュゲートであり、サポニンは、位置23にアルデヒド官能基を有する12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニンであり、サポニンは、好ましくは、Gypsophila又はSaponaria種から単離され得るサポニンであり、より好ましくは、サポニンは、サポニンSO1861又はそのジアステレオマーのいずれかである。
雌Balb/cヌードマウスに、ヒトA431腫瘍細胞の懸濁液を皮下注射した。マウスの皮膚下に、ヒト表皮癌腫をゼノグラフト動物腫瘍モデルにおいて発生させた。腫瘍細胞の注射後に、ゼノグラフト腫瘍がおよそ170~180mm3のサイズまで発生することを許した。A431腫瘍細胞は次の特徴を有する:高EGFR発現体、中度CD71発現体、低HER2発現体。
スキームIは、一連のQS-21サポニンの共通の分子構造を見せている(Conrado Pedebos,Laercio Pol-Fachin,Ramon Pons,Cilaine V.Teixeira Hugo Verli,Atomic ModelAnd Micelle Dynamics of QS-21 Saponin,Molecules 2014,19,3744-3760から抜粋)。Quillaja saponariaから得られる水溶性サポニンの混合物(Sigma-Aldrich、製品No.S4521;Roth、アイテムNo.6857;InvivoGen、製品「Quil-A」)は、混合物中に存在する少なくとも1つの個々のサポニン、例えばQS-21のエンドソーム/リソソーム脱出向上特性に基づいて、又は混合物によって含まれる2つ以上のサポニンの組み合わせ、例えばQS-21及びQS-7に基づいて、本発明のエンドソーム/リソソーム脱出向上コンジュゲート、組成物、組み合わせに適用され得る。
種々の濃度のトラスツズマブ-サポリン(HER2標的化タンパク質-毒素コンジュゲート;静脈内)を、BT474(HER2++)ゼノグラフマウスモデルにおける向上した有効性について、1.5mg/kg SO1861(抗体-毒素注射の1時間前;皮下)と組み合わせて試験した。腫瘍が~150mm3のサイズに達した第13日に投薬を開始し、腫瘍体積を毎処置後に決定した。1mg/kg及び0.3mg/kgのトラスツズマブ-サポリンで処置したマウスにおいて腫瘍成長阻害が観察されたが、トラスツズマブ-サポリン+SO1861の組み合わせで処置したマウスでは、向上した腫瘍成長阻害は観察されなかった。これは、非コンジュゲート化SO1861が、現行の条件及びマウスモデルにおいては抗体-タンパク質毒素を向上させることができないということを示している。
材料:
QSミックス(1):S4521(SigmaAldrich);QSミックス(2):6857.1(Carl Roth)QSミックス(3):Quil-A(登録商標)アジュバント:vac-quil(InvivoGen/Brenntag)。
SO1861分子を抗体にコンジュゲート化するために、本発明に従って、不安定な/酸感受性のリンカー(-EMCH又は-N3)を、アルデヒド基を介してSO1861にコンジュゲート化し、SO1861-EMCH又はSO1861-N3を産生した(図60~66)。SO1861-EMCHの活性を検証するために、分子を、EGFR発現細胞(A431、HeLa)及び非発現細胞(A2058)において、固定された非有効な(1.5pM)EGFジアンチン濃度の存在下及び不在下でタイトレーションした。全ての3つの細胞株において、SO1861単独は強い細胞生存率縮減を示したが、単一化合物としてのSO1861-EMCHは25.000nMまでは毒性を示さなかった(図3A~C)。SO1861-EMCHを1.5pM EGFジアンチンと組み合わせたときには、強い標的特異的な細胞生存率縮減が、EGFR+A431細胞及びHeLa細胞において観察される(IC50=3.000nM;図2A、B)。一方、EGFR-A2058細胞は全く影響されない(図3C)。SO1861-N3についても類似の結果が得られた。1.5pM EGFジアンチンとのSO1861-N3の同時投与もまた、A431及びHeLa細胞における効率的な殺細胞を示すが(IC50=3.000nM)、EGFジアンチンなしでは、一般毒性は10.000nMよりも上において観察される(図3D、2E)。
SO1861-EMCHを、システイン残基(Cys)を介して、DAR3,7でセツキシマブ(ヒトEGFRを認識及び結合するモノクローナル抗体)にコンジュゲート化した(セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3,7)。セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3,7を、固定濃度の10pMセツキシマブ-サポリン(タンパク質毒素サポリンにコンジュゲート化されたセツキシマブ)でタイトレーションし、EGFR発現細胞(A431、EGFR++;CaSKi、EGFR+)における標的化されたタンパク質毒素により媒介される殺細胞を決定した。これは、低い濃度のセツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3,7における強い殺細胞を明らかにしたが(A431:IC50=0,6nM及びCaski IC50=1nM;図9A、9B)、セツキシマブ、セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3,7、又はセツキシマブ+10pMセツキシマブ-サポリンは、EGFR発現細胞においていずれかの殺細胞活性を誘導し得なかった。これは、セツキシマブコンジュゲート化SO1861が、(非有効濃度において)セツキシマブコンジュゲート化タンパク質毒素のエンドソーム脱出を効率的に向上させ、それによってEGFR発現細胞の殺細胞を誘導するということを示す。A431における殺細胞活性は、CaSkiと比較してより有効であり、これらの細胞株におけるEGFR発現レベルと相関する。1T2Cの両方のコンジュゲート間のEGFR受容体結合競合もまた観察される。セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3,7濃度が増大するときには、セツキシマブ-サポリンの打ち勝つ受容体結合及び内在化を原因として、殺細胞活性が落ちる(図9A、9B)。
不安定なSO1861をシステイン残基(Cys)を介して抗EGFR抗体セツキシマブ(ヒトEGFRを認識し、結合するモノクローナル抗体)にDAR3.9でコンジュゲート化し(セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3.9)、向上した標的遺伝子サイレンシングをもたらすアンチセンスBNAオリゴヌクレオチドのその向上した送達について試験した。本研究において、我々は、癌特異的標的遺伝子の熱ショックタンパク質27(HSP27)のmRNAに対するアンチセンスBNAオリゴヌクレオチドを用いた。細胞の細胞質において、HSP27BNAはHSP27をコードするmRNAに結合し、mRNAを破壊へと標的化し、それによって癌細胞内のHSP27発現を縮減する。セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3.9を、EGFR++(A431)細胞及びEGFR-(A2058)細胞において固定濃度の100nM HSP27BNAでタイトレーションした。本発明に従う組み合わせは、A431において効率的なHSP27サイレンシングを示したが(IC50=2nM;図5A)、セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3.9単独ではサイレンシングは観察されなかった。セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3.9+100nM HSP27BNAは、EGFR-細胞(A2058)において遺伝子サイレンシング活性を示さなかった(図5B)。これは、低い濃度の抗体コンジュゲート化SO1861が、アンチセンスBNAオリゴヌクレオチドの細胞質送達及びエンドリソソーム脱出を効率的に向上させ得、それによって標的発現細胞における効率的な遺伝子サイレンシングを誘導するということを示す。
SO1861-EMCH(不安定なリンカーL)を、システイン残基(Cys)を介して、セツキシマブに、DAR3.7(セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3.7)又はDAR2(セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)2)でコンジュゲート化した。これらのセツキシマブ-SO1861コンジュゲートを、高EGFR発現細胞(A431、EGFR++)において、10pMセツキシマブ-サポリンと組み合わせて、向上した殺細胞活性について試験した。これは、セツキシマブコンジュゲート化SO1861のDAR2及びDAR4について同じ殺細胞力価を明らかにした(図22A)。トラスツズマブ-(Cys-L-SO1861)4及びトラスツズマブ-(Cys-L-SO1861)2.1を、50pMトラスツズマブ-サポリンとの組み合わせで高HER2発現細胞(SK-BR-3、HER2++)において比較したときには、同じ結果が得られ(図22B)、本発明に従うコンジュゲート化SO1861の量を低下させることが、有効なエンドソーム脱出及び毒素により媒介される殺細胞の力価を縮減するということを示した。
SO1861-HATU(安定なリンカーS)を、システイン残基(Cys)を介して、抗EGFR抗体セツキシマブにDAR3.7でコンジュゲート化した(セツキシマブ-(Cys-S-SO1861)3.7)。このセツキシマブ-SO1861コンジュゲートを、固定濃度の10pM抗EGFR抗体-タンパク質毒素コンジュゲート(セツキシマブ-サポリン)と組み合わせ、不安定なコンジュゲート(セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3.7と比較して、高EGFR発現細胞(MDA-MB-468、EGFR++)における向上した殺細胞活性について試験した。これは、本発明に従う安定な又は不安定な抗体コンジュゲート化SO1861が、非有効濃度の抗体-タンパク質毒素コンジュゲートと組み合わせたときに、同じ向上した殺細胞活性を示すということを明らかにした(図23A)。トラスツズマブ-(Cys-L-SO1861)4を、SK-BR-3細胞(HER2++)において50pMトラスツズマブ-サポリンとの組み合わせによってトラスツズマブ-(Cys-S-SO1861)4と比較したときには、同じデータが明らかにされた(図23B)。これは全て、本発明に従う安定な又は不安定なコンジュゲート化SO1861が、有効に機能し、抗体コンジュゲート化毒素のエンドソーム脱出を誘導するということを指示している。
2標的2コンポーネント系(2T2C)は、mAb1-SO1861とmAb2-タンパク質毒素との組み合わせ処置である(図37)。SO1861-EMCHを、システイン残基(Cys)を介して、セツキシマブ(ヒトEGFRを認識し、結合するモノクローナル抗体)にDAR4でコンジュゲート化し、セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)4の産生をもたらした。セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)4とトラスツズマブ-サポリン又はCD71mab-サポリンとの組み合わせを、図37に例解される通りEGFR腫瘍標的化殺細胞について、A431(EGFR++/HER2+/-/CD71+)ゼノグラフ「ヌード」マウス腫瘍モデルにおいて試験した。用量漸増を行って、治療有効性を決定した(第9日:0.3mg/kgトラスツズマブ-サポリン又は0.1mg/kg CD71mab-サポリン+5mg/kgセツキシマブ-(Cys-L-SO1861)4;第14、18日:0.1mg/kgトラスツズマブ-サポリン又は0.05mg/kg CD71mab-サポリン+5mg/kgセツキシマブ-(Cys-L-SO1861)4;第21日:0.05mg/kgトラスツズマブ-サポリン又は0.05mg/kg CD71mab-サポリン+15mg/kgセツキシマブ-(Cys-L-SO1861)4;第28日:0.02mg/kgトラスツズマブ-サポリン又は0.02mg/kg CD71mab-サポリン+15mg/kgセツキシマブ-(Cys-L-SO1861)4トラスツズマブ-サポリン/セツキシマブ-SO1861。対照はそれぞれ同じ投薬スキームであり、セツキシマブ(i.v.)のみが毎処置日に25mg/kgで与えられた)。第32(破線)、35、及び39日に、我々は、25 mg/kgセツキシマブ-(Cys-L-SO1861)4(腹腔内注射(i.p.)+0.02mg/kgトラスツズマブ-サポリン又は0.02 CD71mab-サポリン(静脈内投与(i.v.))の2T2C発明に従う組み合わせ(腹腔内注射(i.p.))を開始した。これは、両方の2T2C組み合わせ群について、基剤対照、25mg/kgセツキシマブ-(Cys-L-SO1861)4、又は0.02mg/kgトラスツズマブ-サポリン/CD71mab-サポリン単独治療と比較して強い腫瘍退縮を明らかにした(図24)。さらには、2T2C系は、EGFRに対する臨床的に用いられるモノクローナル抗体であるセツキシマブに打ち勝つ。次に、我々は同じ実験を行ったが、それから、我々は、25mg/kgセツキシマブ-(Cys-L-SO1861)4(腹腔内注射(i.p.))+0.03mg/kgトラスツズマブ-サポリン又は0.03 CD71mab-サポリン(静脈内投与(i.v.))処置によって開始した。第9及び14日に1投薬、その後は週当たり1投薬であった。本発明に従う2T2C系は、全てのマウスにおける腫瘍退縮、及びさらには両方の2T2C群の1匹のマウスにおける完全な腫瘍根絶(腫瘍体積=0mm3)を示した(図25)。また、ここで、対照は腫瘍体積の強い増大を示したが、このA431マウスモデルの正の対照セツキシマブは退縮ではなく腫瘍成長阻害のみを示した(図25)。これは、セツキシマブコンジュゲート化SO1861+トラスツズマブコンジュゲート化タンパク質毒素又はCD71mabコンジュゲート化タンパク質毒素という本発明に従う2T2C系アプローチが、インビボの腫瘍を持つマウスの固形腫瘍の細胞質における治療薬タンパク質毒素の高度に効率的な標的化送達を誘導し、それによって、いくつかのマウスにおける完全な腫瘍根絶及び他のものにおける強い腫瘍退行をさえ、大きいサイズの腫瘍(2000mm3)においてさえ誘導することを示し、可能化する。
結果
2標的2コンポーネント系(2T2C)は、mAb1-SO1861とmAb2-タンパク質毒素との組み合わせ処置である(図37)。SO1861-EMCHを、システイン残基(Cys)を介して、DAR3,7でセツキシマブ(ヒトEGFRを認識及び結合するモノクローナル抗体)にコンジュゲート化した(セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3,7)。セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3,7を、固定濃度の50pMトラスツズマブ-サポリン(タンパク質毒素サポリンにコンジュゲート化されたトラスツズマブ)でタイトレーションし、EGFR/HER2発現細胞(A431、EGFR++/HER2+/-;CaSKi、EGFR+/HER2+/-)における標的化されたタンパク質毒素により媒介される殺細胞を図37に例解されている通り決定した。これは、低い濃度のセツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3,7における強い殺細胞を明らかにしたが(A431:IC50=3nM及びCaSKi IC50=10nM;図26A、26B)、当量濃度のセツキシマブ、セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3,7、又はセツキシマブ+50pMトラスツズマブ-サポリンは、EGFR/HER2発現細胞においていずれかの殺細胞活性を誘導し得なかった。これは、比較的低い濃度のセツキシマブ-SO1861コンジュゲートが、(非有効濃度において)トラスツズマブコンジュゲート化タンパク質毒素のエンドソーム脱出を効率的に向上させ、それによって高EGFR/低HER2発現細胞の効率的な殺細胞を誘導するということを示している。
2標的2コンポーネント系(1T2C)は、mAb1-QSミックス(Quillaja Saponariaからのサポニンの混合物)とmAb2-タンパク質毒素との組み合わせ処置でもまたあり得る。
セツキシマブ(ヒトEGFRを認識及び結合するモノクローナル抗体)に、SO1861をシステイン残基(Cys)を介してコンジュゲート化し(不安定)、ジアンチン(タンパク質毒素)をリジン残基(Lys)を介してコンジュゲート化し(安定)、セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-S-ジアンチン)2の産生をもたらした。セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-S-ジアンチン)2コンジュゲートを、図47に例解される通りEGFR腫瘍標的化殺細胞について、A431(EGFR++)ゼノグラフマウス腫瘍モデルにおいて試験した。腫瘍が~150mm3のサイズに達した第12日に投薬を開始し、毎投薬後に腫瘍体積を決定した。マウス(n=3)を12日目に治療(腹腔内投与;i.p.;用量漸増)した0.5mg/kg;第15日:1mg/kg、及び第24日:1.5mg/kgで、セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-S-ジアンチン)2又はセツキシマブ-(Lys-S-ジアンチン)1,6によって処置した(腹腔内;i.p.;用量漸増)。第26日に、対照群と比較して、腫瘍体積の縮減が、セツキシマブ-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-S-ジアンチン)2で処置した腫瘍を持つマウスにおいて観察され得た(図40A)。これは、抗体-タンパク質毒素(安定)コンジュゲートへのSO1861の不安定なコンジュゲート化が、腫瘍標的化抗体-タンパク質毒素の標的化治療有効性を向上させ得、それによってより有効な腫瘍標的化治療を誘導するということを示す。
図50A~Dは、トラスツズマブ(図50A)、セツキシマブ(図50B)、又はT-DM1(図50C)、非コンジュゲート化タンパク質毒素サポリン、ジアンチン、及び(非細胞結合)IgG抗体にコンジュゲート化されたサポリン(図50D)が種々の癌細胞株SK-BR-3、JIMT-1、MDA-MB-468、A431、CaSki、HeLa、A2058に投与されるときの相対的細胞生存率を表示している。
遊離の毒素サポリン及びジアンチン、並びに試験された細胞株上の細胞表面分子のいずれかに対する親和性を有さない対照IgGにカップリングされた毒素サポリンは、100.000pMまでの広い範囲の濃度の試験された毒素において、細胞生存率に対するいずれかの影響を有さないか又はほとんど有さない(図50D)。
デンドロン(-L-SO1861)n合成(図52、53、54)
材料及び方法
略語
DCM ジクロロメタン
DIPEA N,N-ジイソプロピルエチルアミン
DMF N,N-ジメチルホルムアミド
EDCI・HCl 3-((エチルイミノ)メチレンアミノ)-N,N-ジメチルプロパン-1-アミニウムクロリド
EMCH.TFA N-(ε-マレイミドカプロン酸)ヒドラジド、トリフルオロ酢酸塩
min 分
r.t.保持時間
TCEP トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩
Temp 温度
TFA トリフルオロ酢酸
THF テトラヒドロフラン
LC-MS法1,1
装置:Agilent 1200 Bin.ポンプ:G1312A、脱気装置;オートサンプラー、ColCom、DAD:Agilent G1316A、210、220、及び220~320nm、PDA:210-320nm、MSD:Agilent LC/MSD G6130B ESI、pos/neg 100-1000;ELSDAlltech 3300ガス流量 1.5ml/min、ガスtemp:40℃;カラム:Waters XSelect(商標)CSH C18、30×2.1mm、3.5μm、Temp:35℃、流量:1mL/min、勾配:t0=5%A、t1.6min=98%A、t3min=98%A、ポストタイム:1.3min、溶離液A:アセトニトリル中の0.1%ギ酸、溶離液B:水中の0.1%ギ酸
装置:Agilent 1260 Bin.ポンプ:G7112B、マルチサンプラー、カラムComp、DAD:Agilent G7115A、210、220、及び220-320nm、PDA:210-320nm、MSD:Agilent LC/MSD G6130B ESI、質量範囲は産物の分子量に依存する:
Apos/neg 100-1000
Bpos/neg 100-1400
;ELSDAlltech 3300ガス流量1.5ml/min、ガスtemp:40℃;カラム:Waters XSelect(商標)C18、30×2.1mm、3.5μm、Temp:40℃、流量:1mL/min、勾配:t0=5%A、t1.6min=98%A、t3min=98%A、ポストタイム:1.3min、溶離液A:アセトニトリル中の0.1%ギ酸、溶離液B:水中の0.1%ギ酸
装置:Waters IClass;Bin.ポンプ:UPIBSM、SM:UPISMFTN、SO;UPCMA、PDA:UPPDATC、210-320nm、SQD:ACQ-SQD2 ESI、pos/neg 800-1500;ELSD:ガス圧40psi、ドリフトチューブtemp:50℃;カラム:Waters XSelect(商標)CSH C18、50×2.1mm、2.5μm Temp:25℃、流量:0.6mL/min、勾配:t0=5%A、t2.0min=98%A、t2.7min=98%A、ポストタイム:0.3min、溶離液A:アセトニトリル、溶離液B:水中の10mM重炭酸アンモニウム(pH=9.5)。
装置:Waters IClass;Bin.ポンプ:UPIBSM、SM:UPISMFTN、SO;UPCMA、PDA:UPPDATC、210-320nm、SQD:ACQ-SQD2 ESI、pos/neg 1500-2500;ELSD:ガス圧40psi、ドリフトチューブtemp:50℃;カラム:Waters XSelect(商標)CSH C18、50×2.1mm、2.5μm Temp:25℃、流量:0.6mL/min、勾配:t0=15%A、t2.0min=60%A、t2.7min=98%A、ポストタイム:0.3min、溶離液A:アセトニトリル、溶離液B:水中の10mM重炭酸アンモニウム(pH=9.5)。
装置:Waters IClass;Bin.ポンプ:UPIBSM、SM:UPISMFTN、SO;UPCMA、PDA:UPPDATC、210-320nm、SQD:ACQ-SQD2 ESI、質量範囲は産物の分子量に依存する:
Apos/neg 1500-2500
Bneg 2000-3000
;ELSD:ガス圧40psi、ドリフトチューブtemp:50℃;カラム:Acquity C18、50×2.1mm、1.7μm Temp:60℃、流量:0.6mL/min、勾配:t0=2%A、t5.0min=50%A、t6.0min=98%A、ポストタイム:1.0min、溶離液A:アセトニトリル、溶離液B:水中の10mM重炭酸アンモニウム(pH=9.5)。
分取MP-LC法1,1
機器の型:Reveleris(商標)prep MPLC;カラム:Waters XSelect(商標)CSH C18(145×25mm、10μ);流量:40mL/min;カラムtemp:室温;溶離液A:水中の10mM重炭酸アンモニウムpH=9.0);溶離液B:99%アセトニトリル+水中の1% 10mM重炭酸アンモニウム;勾配:t0min=5%B、t1min=5%B、t2min=10%B、t17min=50%B、t18min=100%B、t23min=100%B;検出UV:210、225、285nm。
機器の型:Reveleris(商標)prep MPLC;カラム:Phenomenex LUNA C18(3)(150×25mm、10μ);流量:40mL/min;カラムtemp:室温;溶離液A:水中の0.1%(v/v)ギ酸、溶離液B:アセトニトリル中の0.1%(v/v)ギ酸;勾配:t0min=5%B、t1min=5%B、t2min=10%B、t17min=50%B、t18min=100%B、t23min=100%B;検出UV:210、225、285nm。
MS機器の型:Agilent Technologies G6130B四重極;HPLC機器型:Agilent Technologies 1290分取LC;カラム:Waters XSelect(商標)CSH(C18、100×30mm、10μ);流量:25ml/min;カラムtemp:室温;溶離液A:100%アセトニトリル;溶離液B:水中の10mM重炭酸アンモニウムpH=9.0;産物の極性に依存するlin.勾配:
At0=20%A、t2min=20%A、t8.5min=60%A、t10min=100%A、t13min=100%A
Bt0=5%A、t2min=5%A、t8.5min=40%A、t10min=100%A、t13min=100%A
Ct0=10%A、t2min=10%A、t8.5min=50%A、t10min=100%A、t13min=100%A
;検出:DAD(220~320nm);検出:MSD(ESI pos/neg)質量範囲:100~800;DADに基づく画分収集。
MS機器の型:Agilent Technologies G6130B四重極;HPLC機器型:Agilent Technologies 1290分取LC;カラム:Waters XBridge Shield(C18、150×19mm、5μ);流量:25ml/min;カラムtemp:室温;溶離液A:100%アセトニトリル;溶離液B:水中の10mM重炭酸アンモニウムpH=9.0;lin.勾配:t0=5%A、t2.5min=5%A、t11min=40%A、t13min=100%A、t17min=100%A;検出:DAD(220~320nm);検出:MSD(ESI pos/neg)質量範囲:100~800;フラクションコレクションに基づくDAD
フラッシュクロマトグラフィー
Grace Reveleris X2(登録商標)C-815 Flash;溶媒送達系:3ピストンポンプ、オートプライミング、一ランで4つの独立したチャンネル、4つまでの溶媒、溶媒が枯渇したときにラインを自動切り替え;最大ポンプ流量250mL/min;最大圧力50bar(725psi);検出:UV200~400nm、4つまでのUVシグナルの組み合わせ、全UV範囲の走査、ELSD;カラムサイズ:装置上4-330g、ルアー型、オプションホルダーによって750gから3000gまで。
SO1861(121mg、0.065mmol)及びEMCH.TFA(110mg、0.325mmol)に、メタノール(エクストラドライ、3.00mL)及びTFA(0.020mL、0.260mmol)を追加した。反応混合物を室温で撹拌した。1.5時間後に、反応混合物を分取MP-LC1に付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(120mg、90%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度96%。
LRMS(m/z):2069[M-1]1-
LC-MSr.t.(min):1.084
中間体1:
ジ-tert-ブチル(((6-アジドヘキサノイル)アザンジイル)ビス(エタン-2,1-ジイル))ジカルバメート
6-アジドヘキサン酸(0.943g、6.00mmol)、EDCI.HCl(1.21g、6.30mmol)、及びOxymaPure(0.938g、6.60mmol)をDMF(10.0mL)に溶解し、混合物を5分間撹拌した。次に、DMF中のジ-tert-ブチル(アザンジイルビス(エタン-2,1-ジイル))ジカルバメート(1.82g、6.00mmol)の溶液(5.00mL)を追加し、反応混合物を室温で撹拌した。5時間後に、反応混合物を真空において蒸発させ、残渣を酢酸エチル(50mL)に溶解した。もたらされた溶液を、1N重硫酸カリウム溶液(50mL)、飽和重炭酸ナトリウム溶液(2×50mL)、及びブライン(50mL)によって洗浄し、Na2SO4によって乾燥し、濾過し、真空中で蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(酢酸エチル-ヘプタン勾配、10:90が100:0まで上昇)により精製して、表題化合物(2.67g、100%)を白色固体として与えた。LC-MSに基づく純度98%。
LRMS(m/z):287/343/465[M-155/M-99/M+23]1+
LC-MSr.t.(min):2.022A
N,N-ビス(2-アミノエチル)-6-アジドヘキサンアミド二塩酸塩
ジ-tert-ブチル(((6-アジドヘキサノイル)アザンジイル)ビス(エタン-2,1-ジイル))ジカルバメート(2.66g、6.00mmol)に、イソプロパノール中のHCl(5-6 N、20.0mL、110mmol)を追加し、反応混合物を室温で撹拌した。4時間後に、反応混合物を真空中で蒸発させ、もたらされたクルードな産物をDCM(3×20mL)と同時蒸発させて、クルードな表題産物(1.49g、79%)を白色固体として与えた。
LRMS(m/z):243[M+1]1+
テトラ-tert-ブチル((5S,5S)-((((6-アジドヘキサノイル)アザンジイル)ビス(エタン-2,1-ジイル))ビス(アザンジイル))ビス(6-オキソヘキサン-6,1,5-トリイル))テトラカルバメート
DMF(30.0mL)及びDIPEA(2.62mL、15.1mmol)中のN,N-ビス(2-アミノエチル)-6-アジドヘキサンアミドジヒドロクロリド(1.19g、3.76mmol)の溶液に、Boc-Lys(Boc)-ONp(3.69g、7.90mmol)を追加し、混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空中で蒸発させ、残渣を酢酸エチル(100mL)に溶解した。もたらされた溶液を1N重硫酸カリウム溶液(100mL)及び飽和重炭酸ナトリウム溶液(5×100mL)によって洗浄し、Na2SO4によって乾燥し、濾過し、真空中で蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(DCM-メタノール/DCM(1/9v/v)勾配、100:0が0:100まで上昇)により精製して、標題産物(3.07g、91%)をわずかに黄色がかった固体として与えた。LC-MSに基づく純度94%。
LRMS(m/z):800/900/922[M-99/M+1/M+23]1+
LC-MSr.t.(min):2.172A
4-ニトロフェニル3-(アセチルチオ)プロパノエート
4-ニトロフェニルトリフルオロアセタート(5.17g、22.0mmol)及び3-(アセチルチオ)プロピオン酸(2.96g、20.0mmol)をDCM(50.0mL)に溶解した。次に、DIPEA(6.97mL、40.0mmol)を追加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空中で蒸発させ、残渣を酢酸エチル(50mL)に溶解した。もたらされた溶液を、1N重硫酸カリウム溶液(50mL)、飽和重炭酸ナトリウム溶液(5×50mL)、及びブライン(50mL)によって洗浄し、Na2SO4によって乾燥し、濾過し、真空中で蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(DCM-メタノール/DCM(1/9v/v)勾配、100:0が0:100まで上昇)により精製して、標題産物(4.90g、91%)をわずかに黄色がかった固体として与えた。LC-MSに基づく純度99%。
LRMS(m/z):292[M+23]1+
LC-MSr.t.(min):1.942A
(S)-2,6-ジアミノ-N-(2-(6-アジド-N-(2-((S)-2,6-ジアミノヘキサンアミド)エチル)ヘキサンアミド)エチル)ヘキサンアミドテトラヒドロクロリド
テトラ-tert-ブチル((5S,5’S)-((((6-アジドヘキサノイル)アザンジイル)ビス(エタン-2,1-ジイル))ビス(アザンジイル))ビス(6-オキソヘキサン-6,1,5-トリイル))テトラカルバメート(1.80g、2.00mmol)を、イソプロパノール中のHCl(5-6N、50.0ml、275 mmol)に溶解し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空中で蒸発させ、もたらされたクルードな産物をDCM(3×20mL)と同時蒸発させて、クルードな表題産物を白色固体として与えた。
LRMS(m/z):250[M+2]2+,500[M+1]1+
(2S)-2,6-ビス[3-(アセチルスルファニル)プロパンアミド]-N-[2-(6-アジド-N-{2-[(2S)-2,6-ビス[3-(アセチルスルファニル)プロパンアミド]ヘキサンアミド]エチル}ヘキサンアミド)エチル]ヘキサンアミド
DMF(30mL)及びDIPEA(3.48mL、20.0mmol)中の(S)-2,6-ジアミノ-N-(2-(6-アジド-N-(2-((S)-2,6-ジアミノヘキサンアミド)エチル)ヘキサンアミド)エチル)ヘキサンアミド)テトラヒドロクロリド(1.29g、2.00mmol)の溶液に、4-ニトロフェニル3-(アセチルチオ)プロパノエート(2.26g、8.40mmol)を追加し、反応混合物を週末をかけて室温で撹拌した。反応混合物を真空中で蒸発させ、残渣をDCM/メタノール(95:5v/v、100mL)に溶解した。もたらされた溶液を、1N重硫酸カリウム溶液(100mL)、1N水酸化ナトリウム溶液(3×100mL)、及びブライン(100mL)によって洗浄し、Na2SO4によって乾燥し、濾過し、真空中で蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(DCM-メタノール/DCM(1/9v/v)勾配、100:0が0:100まで上昇)により精製して、表題産物(1.33g、65%)を白色固体として与えた。LC-MSによって、1つの脱保護されたチオ酢酸基を有する産物に対応するm/z値を有する不純物(15%)が見出された。不純物は、ワークアップ中に又は後に形成された。LC-MSに基づく純度85%。
LRMS(m/z):510[M+2]2+,1019/1041[M+1/M+23]1+
LC-MSr.t.(min):1.862B
N,N’-((9S,19S)-14-(6-アミノヘキサノイル)-1-メルカプト-9-(3-メルカプトプロパンアミド)-3,10,18-トリオキソ-4,11,14,17-テトラアザトリコサン-19,23-ジイル)ビス(3-メルカプトプロパンアミド)ホルマート
骨格2(102mg、0.100mmol)をメタノール(1.00ml)に溶解した。次に、新しく調製した1N水酸化ナトリウム溶液(0.440ml、0.440mmol)を追加し、反応混合物を室温で撹拌した。30min後に、THF中の1.0Mトリメチルホスフィン溶液(0.500ml、0.500mmol)を追加し、もたらされた混合物を室温で撹拌した。30min後に、反応混合物を真空中で蒸発させ、メタノール(2×10mL)と同時蒸発させた。残渣をメタノール/水の混合物(9:1v/v、1.00mL)に溶解し、もたらされた溶液を分取MP-LC2に付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(75.6mg、87%)を無色のネバネバした油として与えた。LC-MSに基づく純度96%。
LRMS(m/z):513[M+2]2+,825[M+1]1+
LC-MSr.t.(min):1.422A
デンドロン(-L-SO1861)4-アミン
N,N’-((9S,19S)-14-(6-アミノヘキサノイル)-1-メルカプト-9-(3-メルカプトプロパンアミド)-3,10,18-トリオキソ-4,11,14,17-テトラアザトリコサン-19,23-ジイル)ビス(3-メルカプトプロパンアミド)ホルマート(2.73mg、3.13μmol)を、20mM NH4HCO3の0.5mMTCEP/アセトニトリルとの混合物(3:1v/v、3.00mL)に溶解した。次に、SO1861-EMCH(29.2mg、0.014mmol)を追加し、反応混合物を室温で撹拌した。1.5時間後に、反応混合物を分取LC-MS3Bに付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(12.3mg、43%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度97%。
LRMS(m/z):1517[M-6]6-,1821[M-5]5-,2276[M-4]4-
LC-MSr.t.(min):4.395A
デンドロン(-L-SO1861)4-アジド
デンドロン(SO1861)4-アミン(6.81mg、0.748μmol)及び2,5-ジオキソピロリジン-1-イル1-アジド-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-オアート(2.90mg、7.48μmol)をDMF(1.00mL)に溶解した。次に、DIPEA(1.302μL、7.48μmol)を追加し、混合物を1min振盪し、室温で静置した。2時間後に、反応混合物を分取LC-MS3Cに付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(5.86mg、84%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度90%。
LRMS(m/z):2344[M-4]4-
LC-MSr.t.(min):4.785B
デンドロン(-L-SO1861)4-マレイミド1
デンドロン(SO1861)4-アミン(8.12mg、0.891μmol)及び2,5-ジオキソピロリジン-1-イル1-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-オアート(3.94mg、8.91μmol)を、DMF(1.00mL)に溶解した。次に、DIPEA(1.55μL、8.91μmol)を追加し、混合物を1min振盪し、室温で静置した。3時間後に、反応混合物を分取LC-MS3Cに付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(6.76mg、80%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度66%。
LRMS(m/z):2358[M-4]4-
LC-MSr.t.(min):2.136C
デンドロン(-L-SO1861)4-マレイミド2
骨格2(5.10mg、5.00μmol)をメタノール(100μL)に溶解した。次に、新しく調製した1N水酸化ナトリウム溶液(22.0μL、22.0μmol)を追加し、混合物を1min振盪し、室温で静置した。30min後に、THF中の1.0Mトリメチルホスフィン溶液(25.0μL、25.0μmol)を追加し、もたらされた混合物を1min振盪し、室温で静置した。30min後に、反応混合物を真空中で蒸発させ、メタノール(2×5mL)と同時蒸発させた。もたらされた残渣を、0.5mM TCEP/アセトニトリルとの20mM NH4HCO3の混合物(3:1v/v、3.242mL)に溶解した。この溶液から、直接的に、1000μLをSO1861-EMCH(14.4mg、6.94μmol、骨格と比較して4.5当量)に追加し、混合物を1min振盪し、室温で静置した。10min後に、反応混合物を一晩凍結乾燥した。もたらされた残渣に、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル3-(2-(2-(3-(2,5-ジオキソ-2h-ピロル-1(5h)-イル)プロパンアミド)エトキシ)エトキシ)プロパノエート(5.84mg、0.014mmol)及びDMF(1.00mL)を追加した。次に、DIPEA(2.39μL、0.014mmol)を追加し、懸濁液を1min振盪し、室温で静置した。2時間後に、反応混合物を分取LC-MS3Cに付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(10.9mg、85%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度80%。
LRMS(m/z):2354[M-4]4-
LC-MSr.t.(min):4.165B
中間体1:
tert-ブチルN-[(1S)-1-{[(1S)-1-{[2-(6-アジド-N-{2-[(2S)-2,6-ビス[(2S)-2,6-ビス({[(tert-
ブトキシ)カルボニル]アミノ})ヘキサンアミド]ヘキサンアミド]エチル}ヘキサンアミド)エチル]カルバモイル}-5-[(2S)-2,6-ビス({[(tert-ブトキシ)カルボニル]アミノ})ヘキサンアミド]ペンチル]カルバモイル}-5-{[(tert-ブトキシ)カルボニル]アミノ}ペンチル]カルバメート
(S)-2-6-ジアミノ-N-(2-(6-アジド-N-(2-((S)-2,6-ジアミノヘキサンアミド)エチル)ヘキサンアミド)エチル)ヘキサンアミドテトラヒドロクロリド(964mg、1.50mmol)を、DMF(25.0mL)及びトリエチルアミン(2.08mL、15.0mmol)に溶解した。次に、Boc-Lys(Boc)-ONp(3.36g、7.18mmol)を追加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空中で蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(DCM-メタノール/DCM(1/9v/v)勾配、100:0が0:100まで上昇)により精製して、表題産物(2.71g、100%)を白色固体として与えた。LC-MSに基づく純度97%。
LRMS(m/z):807[M-198]2+
LC-MSr.t.(min):2.352B
(2S,2’S)-N,N’-((5S,15S,22S)-22,26-ジアミノ-10-(6-アジドヘキサノイル)-15-((S)-2,6-ジアミノヘキサンアミド)-6,14,21-トリオキソ-7,10,13,20-テトラアザヘキサコサン-1,5-ジイル)ビス(2,6-ジアミノヘキサンアミド)オクタヒドロクロリド
中間体1(2.71g、1.50mmol)を、イソプロパノール中のHCl(5-6N、25.0ml、138mmol)に溶解し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。次に、反応混合物を真空中で蒸発させ、もたらされたクルードな産物をDCM(3×20mL)と同時蒸発させて、クルードな表題産物を白色固体として与えた。
LRMS(m/z):203/254[M-200/M+4]4+,338[M+3]3+,507[M+2]2+,1012[M+1]1+
(2S)-2,6-ビス[3-(アセチルスルファニル)プロパンアミド]-N-[(1S)-1-{[2-(6-アジド-N-{2-[(2S)-2,6-ビス[(2S)-2,6-ビス[3-(アセチルスルファニル)プロパンアミド]ヘキサンアミド]ヘキサンアミド]エチル}ヘキサンアミド)エチル]カルバモイル}-5-[(2S)-2,6-ビス[3-(アセチルスルファニル)プロパンアミド]ヘキサンアミド]ペンチル]ヘキサンアミド
(2S,2’S)-N,N’-((5S,15S,22S)-22,26-ジアミノ-10-(6-アジドヘキサノイル)-15-((S)-2,6-ジアミノヘキサンアミド)-6,14,21-トリオキソ-7,10,13,20-テトラアザヘキサコサン-1,5-ジイル)ビス(2,6-ジアミノヘキサンアミド)オクタヒドロクロリド(300mg、0.230mmol)に、DMF(20.0mL)、トリエチルアミン(320μl、2.30mmol)、及び4-ニトロフェニル3-(アセチルチオ)プロパノエート(595mg、2.21mmol)を追加した。もたらされた懸濁液を60℃で30minソニケーションし、室温で一晩撹拌させた。反応混合物を真空中で蒸発させ、残渣を、最初にフラッシュクロマトグラフィー(DCM-メタノール/DCM(1/9v/v)勾配、100:0が0:100まで上昇)を行うこと、次に分取MP-LC2によって精製して、表題産物(70mg、15%)を白色固体として与えた。LC-MSに基づく純度100%。
LRMS(m/z):685[M+3]3+
LC-MSr.t.(min):1.912A
(2S)-N-[(1S)-1-{[2-(6-アミノ-N-{2-[(2S)-2,6-ビス[(2S)-2,6-ビス(3-スルファニルプロパンアミド)ヘキサンアミド]ヘキサンアミド]エチル}ヘキサンアミド)エチル]カルバモイル}-5-[(2S)-2,6-ビス(3-スルファニルプロパンアミド)ヘキサンアミド]ペンチル]-2,6-ビス(3-スルファニルプロパンアミド)ヘキサンアミドホルマート
骨格4(10.0mg、4.87μmol)をメタノール(200μL)に溶解した。次に、新しく調製した1N水酸化ナトリウム溶液(42.9μL、0.043mmol)を追加し、もたらされた混合物を1min振盪し、室温で静置した。30min後に、THF中の1.0Mトリメチルホスフィン溶液(24.4μL、0.024mmol)を追加し、もたらされた混合物を1min振盪し、室温で静置した。30min後に、反応混合物を水(1mL)で希釈し、直接的に分取MP-LC2に付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(4.02mg、48%)を白色の綿毛状の固体として与えた。
LRMS(m/z):564[M+3]3+,846[M+2]2+
LC-MSr.t.(min):1.542C
デンドロン(-L-SO1861)8-アミン
骨格5(0.52mg、0.299μmol)及びSO1861-EMCH(29.2mg、0.014mmol)を、20mM NH4HCO3の0.5mM TCEP/アセトニトリルとの混合物(3:1v/v、1.00mL)に溶解し、もたらされた混合物を1min振盪し、室温で静置した。30min後に、TCEP(0.30mg、1.05μmol)を追加し、反応混合物を1min振盪した。次に、混合物を、直接的に分取LC-MS3Bに付した。産物に対応する画分を、直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(2.17mg、40%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度97%。
LRMS(m/z):2282[M-8]8-,2607[M-7]7-
LC-MSr.t.(min):4.415A
SO1861-三官能性リンカー-BNAオリゴ合成(図55)
材料及び方法
三官能性リンカー
三官能性リンカー(DBCO、TCO、マレイミド)はBio-Synthesis Inc.(ルイスビル、テキサス)に発注した。
HSP27BNAオリゴ
HSP27BNA(-チオール)オリゴ(配列5’-GGCacagccagtgGCG-3’)(Zhang etAl.,2011)を、Bio-synthesis Inc.(ルイスビル、テキサス)から購入した。
SO1861-アジド
SO1861 60mg、0.032mmol))及び1-アジド-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-ヒドラジド(39.3mg、0.129mmol)に、メタノール(エクストラドライ、1.00mL)及びTFA(9.86μl、0.129mmol)を追加し、反応混合物を1min振盪し、室温で静置した。2時間後に、反応混合物を分取MP-LC1に付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(58.4mg、84%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度100%。
LRMS(m/z):2150[M-1]1-
LC-MSr.t.(min):1.103B
SO1861-三官能性リンカー
SO1861-アジド(45mg、0.021mmol)及び三官能性リンカー(26.5mg、0.022mmol)をDMF(2.50mL)に溶解し、もたらされた混合物を1min振盪し、室温で静置した。30min後に、反応混合物を分取LC-MS3Cに付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(58.4mg、84%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度89%。
LRMS(m/z):1677[M-2]2-
LC-MSr.t.(min):2.546A
(E)-1-(4-((2-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)ヘキサノイル)ヒドラジンイリデン)メチル)ベンズアミド)-N-(4-(6-メチル-1,2,4,5-テトラジン-3-イル)ベンジル)-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-アミド
1-(4-ホルミルベンズアミド)-N-(4-(6-メチル-1,2,4,5-テトラジン-3-イル)ベンジル)-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-アミド(28.0mg、0.048mmol)及びEMCH.TFA(24.5mg、0.072mmol)に、メタノール(エクストラドライ、2.00mL)及びTFA(11.1μL、0.145mmol)を追加し、反応混合物を50℃で撹拌した。30min後に、反応混合物を真空中で蒸発させ、もたらされた残渣をMP-LC1により精製した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(33.4mg、88%)を鮮紫色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度92%。
LRMS(m/z):394[M+2]2+,789[M+1]1+
LC-MSr.t.(min):1.287A
メチルテトラジン-BNAオリゴ
HSP27 BNAオリゴジスルフィド(70.0mg、0.012mmol)を20mM NH4HCO3(20.0mL)に溶解した。次に、TCEP(14.3mg、0.050mmol)を追加し、反応混合物を1min振盪し、室温で静置した。反応混合物を、3000Daの分子量カットオフを有する遠心フィルター(5000×g、30min)を用いることによって濾過した。次に、2.5mM TCEPを有する20mM NH4HCO3の溶液(20.0mL)を残渣溶液に追加し、もたらされた混合物を上に記載されている同じ条件下で再び濾過した。残渣溶液を20mM NH4HCO3(30.0mL)によって希釈し、もたらされた混合物を、アセトニトリル(10.0mL)中の(E)-1-(4-((2-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)ヘキサノイル)ヒドラジンイリデン)メチル)ベンズアミド)-N-(4-(6-メチル-1,2,4,5-テトラジン-3-イル)ベンジル)-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-アミド(14.8mg、18.8μmol)の溶液に追加した。反応混合物を1min振盪し、室温で静置した。30min後に、反応混合物を凍結し、週末をかけて凍結乾燥して、クルードな表題産物をピンク色の綿毛状の固体として与えた。クルードな産物に20mM NH4HCO3(20.0mL)を追加し、もたらされた懸濁液を0.45μmシリンジフィルターで濾過した。濾液を、上に記載されている同じ条件によって遠心フィルターを用いて濾過した。次に、再び、20mM NH4HCO3の溶液(20.0mL)を残渣溶液に追加し、もたらされた混合物を、上に記載されている同じ条件によって遠心フィルターを用いて再び濾過した。残渣溶液を20mM NH4HCO3(20.0mL)で希釈し、もたらされた混合物を一晩凍結乾燥して、表題産物(90.0mg、115%)をピンク色の綿毛状の固体として得た。LC-MSに基づく純度91%。
LRMS(m/z):1631[M-4]4-,2174[M-3]3-
LC-MSr.t.(min):0.737B
SO1861-三官能性リンカー-BNAオリゴ
メチルテトラジン-BNAオリゴ(90.0mg、0.014mmol)及びSO1861-三官能性リンカー(48.6mg、0.014mmol)を、水/アセトニトリル(4:1v/v、12.0mL)の混合物に溶解した。反応混合物を1min振盪し、室温で静置した。15min後に、混合物を分取LC-MS4Aに付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(82.0mg、60%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度92%(両方のm/z値が表題化合物に対応する、2つのピーク)。
LRMS(m/z):1641[M-6]6-,1970[M-5]5-
LC-MSr.t.(min):3.24及び3.406B
SO1861-アジド
SO1861 60mg、0.032mmol))及び1-アジド-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-ヒドラジド(39.3mg、0.129mmol)に、メタノール(エクストラドライ、1.00mL)及びTFA(9.86μl、0.129mmol)を追加し、反応混合物を1min振盪し、室温で静置した。2時間後に、反応混合物を分取MP-LC1に付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(58.4mg、84%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度100%。
LRMS(m/z):2150[M-1]1-
LC-MSr.t.(min):1.103B
SO1861-三官能性リンカー
SO1861-アジド(45mg、0.021mmol)及び三官能性リンカー(26.5mg、0.022mmol)をDMF(2.50mL)に溶解し、もたらされた混合物を1min振盪し、室温で静置した。30min後に、反応混合物を分取LC-MS3Cに付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(58.4mg、84%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度89%。
LRMS(m/z):1677[M-2]2-
LC-MSr.t.(min):2.546A
(E)-1-(4-((2-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)ヘキサノイル)ヒドラジンイリデン)メチル)ベンズアミド)-N-(4-(6-メチル-1,2,4,5-テトラジン-3-イル)ベンジル)-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-アミド
1-(4-ホルミルベンズアミド)-N-(4-(6-メチル-1,2,4,5-テトラジン-3-イル)ベンジル)-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-アミド(28.0mg、0.048mmol)及びEMCH.TFA(24.5mg、0.072mmol)に、メタノール(エクストラドライ、2.00mL)及びTFA(11.1μL、0.145mmol)を追加し、反応混合物を50℃で撹拌した。30min後に、反応混合物を真空中で蒸発させ、もたらされた残渣をMP-LC1により精製した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(33.4mg、88%)を鮮紫色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度92%。
LRMS(m/z):394[M+2]2+,789[M+1]1+
LC-MSr.t.(min):1.287A
メチルテトラジン-BNAオリゴ
HSP27 BNAオリゴジスルフィド(70.0mg、0.012mmol)を20mM NH4HCO3(20.0mL)に溶解した。次に、TCEP(14.3mg、0.050mmol)を追加し、反応混合物を1min振盪し、室温で静置した。反応混合物を、3000Daの分子量カットオフを有する遠心フィルター(5000×g、30min)を用いることによって濾過した。次に、2.5mM TCEPを有する20mM NH4HCO3の溶液(20.0mL)を残渣溶液に追加し、もたらされた混合物を上に記載されている同じ条件下で再び濾過した。残渣溶液を20mM NH4HCO3(30.0mL)によって希釈し、もたらされた混合物を、アセトニトリル(10.0mL)中の(E)-1-(4-((2-(6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)ヘキサノイル)ヒドラジンイリデン)メチル)ベンズアミド)-N-(4-(6-メチル-1,2,4,5-テトラジン-3-イル)ベンジル)-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-アミド(14.8mg、18.8μmol)の溶液に追加した。反応混合物を1min振盪し、室温で静置した。30min後に、反応混合物を凍結し、週末をかけて凍結乾燥して、クルードな表題産物をピンク色の綿毛状の固体として与えた。クルードな産物に20mM NH4HCO3(20.0mL)を追加し、もたらされた懸濁液を0.45μmシリンジフィルターで濾過した。濾液を、上に記載されている同じ条件によって遠心フィルターを用いて濾過した。次に、再び、20mM NH4HCO3の溶液(20.0mL)を残渣溶液に追加し、もたらされた混合物を、上に記載されている同じ条件によって遠心フィルターを用いて再び濾過した。残渣溶液を20mM NH4HCO3(20.0mL)で希釈し、もたらされた混合物を一晩凍結乾燥して、表題産物(90.0mg、115%)をピンク色の綿毛状の固体として得た。LC-MSに基づく純度91%。
LRMS(m/z):1631[M-4]4-,2174[M-3]3-
LC-MSr.t.(min):0.737B
SO1861-三官能性リンカー-BNAオリゴ
メチルテトラジン-BNAオリゴ(90.0mg、0.014mmol)及びSO1861-三官能性リンカー(48.6mg、0.014mmol)を、水/アセトニトリル(4:1v/v、12.0mL)の混合物に溶解した。反応混合物を1min振盪し、室温で静置した。15min後に、混合物を分取LC-MS4Aに付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(82.0mg、60%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度92%(両方のm/z値が表題化合物に対応する、2つのピーク)。
LRMS(m/z):1641[M-6]6-,1970[M-5]5-
LC-MSr.t.(min):3.24及び3.406B
SO1861-BNAオリゴコンジュゲート
HSP27BNAオリゴジスルフィド(1.10mg、0.187μmol)を、1.0mM TCEPを有する20mM NH4HCO3(500μL)に溶解し、混合物を1min振盪し、室温で静置した。1時間後に、反応混合物を、3000Daの分子量カットオフを有する遠心フィルターを用いることによって濾過した(14000×g、30min)。残渣溶液を、1.0mM TCEPを有する20mM NH4HCO3(500μL)によって希釈し、もたらされた混合物を再び上に記載されている同じ条件下で濾過した。残渣溶液を20mM NH4HCO3/アセトニトリル(3:1v/v、1.00mL)によって希釈し、もたらされた混合物をSO1861-EMCH(3.54mg、0.375μmol)に追加した。反応混合物を1min振盪し、室温で静置した。10min後に、反応混合物を分取LC-MS4Aに付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(1.25mg、85%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度100%。
LRMS(m/z):1561[M-5]5-,1951[M-4]4-
LC-MSr.t.(min):2.466B
HSP27BNAオリゴジスルフィド(1.1mg、0.187μmol)を、1.0mM TCEPを有する20mM NH4HCO3(500μL)に溶解し、混合物を1min振盪し、室温で静置した。1時間後に、反応混合物を、3000Daの分子量カットオフを有する遠心フィルターを用いることによって濾過した(14000×g、30min)。残渣溶液を、1.0mM TCEPを有する20mM NH4HCO3(500μL)によって希釈し、もたらされた混合物を再び上に記載されている同じ条件下で濾過した。残渣溶液を20mM NH4HCO3/アセトニトリル(3:1v/v、1.0mL)によって希釈し、もたらされた混合物をデンドロン(SO1861)4-マレイミド1(3.54mg、0.375μmol)に追加した。反応混合物を1min振盪し、室温で静置した。10min後に、反応混合物を分取LC-MS4Aに付した。産物に対応する画分を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、表題化合物(1.25mg、85%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度94%
LRMS(m/z):1896[M-8]8-,2167[M-7]7-
LC-MSr.t.(min):3.776B
デンドロン(NEM)4合成(図57)
ベンジルビス(2-((S)-2,6-ビス(3-メルカプトプロパンアミド)ヘキサンアミド)エチル)カルバメート(1.69mg、2.00μmol)及びN-エチルマレイミド(1.05mg、8.40μmol)に、20mM NH4HCO3/アセトニトリル(3:1v/v、2.00mL)の混合物を追加し、反応混合物を室温で撹拌した。2時間後に、反応混合物を一晩凍結乾燥した。もたらされた残渣を、分取LC-MS3Aを用いて精製して、表題化合物(1.53mg、57%)を白色の綿毛状の固体として与えた。LC-MSに基づく純度98%。
LRMS(m/z):1346[M+1]1+
LC-MSr.t.(min):1.433A
A431マウス腫瘍マウスモデル並びにビトロ及びビボ遺伝子サイレンシング研究
材料及び方法
リンカーオリゴを有するHSP27BNA(配列5’-GGCacagccagtgGCG-3’)(Zhang etAl.,2011)をBio-Synthesis Inc.(ルイスビル、テキサス)から購入した。
ビトロのRNA単離及び遺伝子発現分析
細胞からのRNAを単離し、標準的なプロトコール(Biorad)に従って分析した。
ビボのマウス腫瘍モデル
マウス研究を、標準的なプロトコール及び手順に従ってCrownBio(中国)で行った。モデル:雌BALB/cヌードマウスにおける皮下A431ヒト類表皮癌ゼノグラフトモデル。腫瘍体積をモニタリングし、腫瘍サンプルを遺伝子サイレンシング分析のために収集した(下参照)。
マウスからの腫瘍サンプルのRNA単離及び遺伝子発現分析
トータルRNAを、製造者の説明書に従ってTriZol(Thermo Fisher)を用いて腫瘍から単離した。単離されたRNAを、ヌクレアーゼ不含水(NFW)に再懸濁した。RNAサンプルをゲル上でそれらのRNAインテグリティについてチェックした。cDNAを調製するために、最初に、100ngのトータルRNAを、NFW中に12.5μlの最終体積でランダムヘキサマー(Qiagen;最終濃度2μM)と混合し、70℃で5min変性し、直ちに氷冷した。次に、4μlの5×RT緩衝液(Promega)、0.4μlの25mM dNTP(Promega)、1μlの200U/μL MMLV RT酵素(Promega)、0.5μLの40U/μl RNAse阻害剤(Promega)、及び1.6μL NFWからなる7.5μlのcDNA合成ミックスを追加した。次のcDNA合成プロトコールを用いた:1)10分25℃、2)60分37℃、3)5分85℃、4)無限4℃
単一のqPCR反応には、次のミックスを調製した:1μLのcDNA、0.05μLのフォワードプライマー(250μM)、0.05μLのリバースプライマー(250μM)、8.9μlのLNFW、10μlのSYBR Green(Bio-Rad)。次のqPCRプロトコールを用いた:1サイクル:5分95℃、40サイクル:15s 95℃+30s 60℃。
コンジュゲート合成
モノクローナル抗体、SO1861、QSサポニン
トラスツズマブ(ハーセプチン(登録商標))、セツキシマブ(アービタックス(登録商標))、及びT-DM1(Kadcyla(登録商標))を、薬局(Charite、ベルリン)から購入した。CD71モノクローナル抗体をBioCellから購入した(Okt9、#BE0023)。SO1861は、Saponaria officinalis L.から得た生の植物抽出物から、Analyticon Discovery GmbHによって単離及び精製された。Quillaja Saponariaサポニン抽出物(QSミックス)を購入した(SigmaAldrich、#S4521)。
材料
トラスツズマブ(Tras、ハーセプチン(登録商標)、Roche)、セツキシマブ(Cet、アービタックス(登録商標)、Merck KGaA)、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィンヒドロクロリド(TCEP、98%、Sigma-Aldrich)、5,5′-ジチオビス(2-ニトロ安息香酸)(DTNB、エルマン試薬、99%、Sigma-Aldrich)、Zeba(商標)スピン脱塩カラム(2mL、Thermo-Fisher)、NuPAGE(商標)4-12% ビス-トリスプロテインゲル(Thermo-Fisher)、NuPAGE(商標)MES SDS泳動緩衝液(Thermo-Fisher)、Novex(商標)Sharp染色済みタンパク質標準(Thermo-Fisher)、PageBlue(商標)タンパク質染色溶液(Thermo-Fisher)、Pierce(商標)BCAタンパク質アッセイキット(Thermo-Fisher)、N-エチルマレイミド(NEM、98%、Sigma-Aldrich)、1,4-ジチオスレイトール(DTT、98%、Sigma-Aldrich)、セファデックスG25(GE Healthcare)、セファデックスG50M(GE Healthcare)、セファデックス200P(GE Healthcare)、イソプロピルアルコール(IPA、99.6%、VWR)、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(トリス、99%、Sigma-Aldrich)、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン塩酸塩(トリス・HCL、Sigma-Aldrich)、L-ヒスチジン(99%、Sigma-Aldrich)、D-(+)-トレハロース脱水物(99%、Sigma-Aldrich)、ポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート(TWEEN 20、Sigma-Aldrich)、ダルベッコリン酸緩衝食塩水(DPBS、Thermo-Fisher)、グアニジン塩酸塩(99%、Sigma-Aldrich)、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム二水和物(EDTA-Na2、99%、Sigma-Aldrich)、無菌フィルター0.2μm及び0.45μm(Sartorius)、スクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート(SMCC、Thermo-Fisher)、ジアンチン-Cys(Dia-Cys。単一のC末端システイン官能基を有するジアンチン変異体、Proteogenix)、Vivaspin T4及びT15濃縮器(Sartorius)、Superdex 200PG(GE Healthcare)、テトラ(エチレングリコール)スクシンイミジル3-(2-ピリジルジチオ)プロピオナート(PEG4-SPDP、Thermo-Fisher)、HSP27オリゴヌクレオチド(Biosynthesis)、[O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N,N-テトラメチルウロニウム-ヘキサフルオロホスファタート](HATU、97%、Sigma-Aldrich)、ジメチルスルホキシド(DMSO、99%、Sigma-Aldrich)、N-(2-アミノエチル)マレイミドトリフルオロ酢酸塩(AEM、98%、Sigma-Aldrich)、L-システイン(98.5%、Sigma-Aldrich)、脱イオン水(DI)はUltrapure Lab Water Systems(MilliQ、Merck)から新しく取った、ニッケル-ニトリロトリ酢酸アガロース(Ni-NTAアガロース、Protino)、グリシン(99.5%、VWR)、5,5-ジチオビス(2-ニトロ安息香酸(エルマン試薬、DTNB、98%、Sigma-Aldrich)、S-アセチルメルカプトコハク酸無水物フルオレセイン(SAMSA試薬、Invitrogen)、重炭酸ナトリウム(99.7%、Sigma-Aldrich)、炭酸ナトリウム(99.9%、Sigma-Aldrich)、PD MiniTrap脱塩カラム-セファデックスG-25樹脂(GE Healthcare)、PD10 G25脱塩カラム(GE Healthcare)、Zebaスピン脱塩カラム0.5、2、5、及び10mL(Thermo-Fisher)、Vivaspin遠心フィルターT4 10kDa MWCO、T4 100kDa MWCO、及びT15(Sartorius)、Biosep s3000ASECカラム(Phenomenex)、Vivacell限外濾過ユニット10及び30kDa MWCO(Sartorius)、Nalgene Rapid-Flowフィルター(Thermo-Fisher)。
方法
MALDI-TOF-MS
マトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間型(MALDI-TOF)スペクトルを、MALDI-質量分析計(Bruker Ultrafex III)で記録した。典型的には、ナノモルからマイクロモル範囲でMilliQ水に溶解したサンプルを、液滴乾燥法によって、アセトニトリル(MADLI-TOF-MS試験済み、Sigma)/0.1%TFA(7:3v/v)に溶解したマトリックスとしてsuper-DHB(99%、Fluka)又はシナピン酸(SA、99%、Sigma-Aldrich)どちらかを用いて、ターゲット(MTP384ターゲットプレート研磨済みスチールTF、Bruker Daltons)上にスポットした。PepMix(ペプチド較正標準、Bruker Daltons)又はProteMass(タンパク質較正標準、Sigma-Aldrich)が較正標準としての用をなした。RPモードはリフレクターのポジティブモードを言う。RNモードはリフレクターのネガティブモードを言う。LPモードはリニアポジティブモードを言う。
再生セルロース膜:MWCO=1及び2kDa(Spectra/Por)及びMWCO=12~14kDa(Carl Roth)を用いて透析を行った。典型的には、透析は1Lの溶媒で24h行い、これはプロセスの最初の6hの後に交換した。
凍結乾燥は、Alpha 1-2 LD plus(Martin Christ Gefriertrocknungsanlagen GmbH)で行った。典型的には、サンプルを液体窒素で凍結し、高真空で凍結乾燥機内に置いた。
吸光度測定は、Perkin Elmer Lambda 25 UV-Visによって又はThermo NanoDrop ND-2000分光光度計によって、200~750nmのスペクトル範囲で行った。
トラスツズマブ OD280=1.5(mg/ml)-1 cm-1
セツキシマブ OD280=1.4(mg/ml)-1 cm-1
HSP27オリゴヌクレオチド OD260=153,000 M-1 cm-1;Rz260:280=1.819
Dia-Cys OD280=0.57(mg/ml)-1 cm-1
PEG4-SPDP(PDT)OD343=8,080 M-1 cm-1
SAMSA-フルオレセイン OD495=64,500 M-1 cm-1;Rz280:495=0.232
エルマン(TNB)OD412=14,150 M-1cm-1
固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィー(IMCA)
ニッケル-ニトリロ三酢酸(Ni-NTA)クロマトグラフィーを行って、ヒスチジンタグ付きタンパク質及びタンパク質コンジュゲートを精製した。手短には、Ni-NTAアガロース(10mL)を、5mLベッド体積の重力流カラムへとピペッティングした。樹脂を20mLの脱イオン水で洗浄し、5mLの100mM NiSO4溶液を再充填した。樹脂を5mLの脱イオン水で再び5回洗浄し、DPBSで5回平衡化した。タンパク質溶液を、4℃で30min、回転する洗浄済みNi-NTAアガロースとインキュベーションした。その後、Ni-NTAタンパク質溶液を重力流カラムへと再びピペッティングした。フロースルーを収集し、樹脂を5mLのDPBSで3回洗浄した。それから、固定化されたサンプルを、イミダゾール濃度を50mLの125mM、pH8から50mLの250mM、pH8まで増大させることによって溶出した。溶出画分をPBS pH7.4に対して透析して、精製サンプルを得た。
サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)を、AKTA精製装置によって行った。サンプルを、Biosep SEC-S3000カラム又はセファデックスG50Mカラム(10×40cm)どちらかを用いたSECによって分析した。TBS/イソプロピルアルコール溶液(85:15 v/v)で溶出した。サンプル純度は、トレースのアグリゲートピークに対して抗体サンプルピークの積分により決定した。
エルマン試験(又はエルマンアッセイ)を行って、分光光度法によりサンプル中のチオール濃度を定量的に決定した。チオールの存在は、チオールの存在下でのエルマン試薬からの2-ニトロ-5-チオベンゾエート(TNB)の化学量論的放出によって指示された。TNBは、緩衝系において、412nmの吸収極大及びOD412=14,150M-1cm-1の吸光係数を得る。手短には、リン酸緩衝液(0.1M、1mM EDTA、pH7.4)中のエルマン試薬(5,5-ジチオビス(2-ニトロ安息香酸)、DTNB)の0.5mg/mL溶液の2μLを、緩衝液中のチオール含有サンプル20μLと混合した。混合物を5secボルテックスした。それから、412nmのUV-Vis吸光度をThermo Nanodrop 2000で測定して、TNB濃度、それゆえにサンプルのチオール含量を決定した。
ジアンチンを細菌培養によって発現させ、タンパク質を、当分野で公知の従来の細胞培養及びタンパク質精製ステップを踏襲して精製した。
カスタムトラスツズマブ-サポリン、セツキシマブ-サポリン、CD71mab-サポリンコンジュゲートは、Advanced Targeting Systems(サンディエゴ、CA)から産生及び購入された。IgG-サポリン及びサポリンは、Advanced Targeting Systemsから購入した。
抗体-(Cys-デンドロン-(L-SO1861)n)n合成
トラスツズマブ及びセツキシマブは以降では「Ab」と言われる。Abを樹状サポニン(デンドロン-(L-SO1861)4-マレイミド)にテトラ(エチレングリコール)スクシンイミジル3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート(PEG4-SPDP)リンカーを介してコンジュゲート化し、Ab及び樹状サポニン間のチオール-エンマイケル型反応を行なった。セツキシマブ-(S-デンドロン-(L-SO1861)4)4について手順を例示的に記載する:
セツキシマブをDPBS pH7.5緩衝液中で脱塩し、それから2.50mg/mlに正規化した。Abのアリコート(9.19mg、61nmol)に、新しく調製したPEG4-SPDP溶液のアリコート(5.0mg/ml、6.70モル当量、411nmol)を追加し、混合物を手短にボルテックスし、それからローラー混合によって20℃で60分間インキュベーションした。インキュベーション後に、反応をグリシン(20mg/ml、7.7μl)の追加によってクエンチし、それから、SPDP部分をTCEP(5.0mg/ml、SPDP当たり4.0モル当量、1.64μmol)の追加によってインサイチュ還元した。この混合物を、ローラー混合によって20℃で15分間ローラー混合した。もたらされたAb-SHを、zebaスピン脱塩カラムを用いたTBS pH7.5へのゲル濾過により精製した。Ab-SHを、UV-vis分析及びエルマンアッセイによってキャラクタリゼーションした(チオール対Ab比=5.4)。バルクAb-SH(7.41mg、1.93mg/ml、49nmol)に、DMSO中の新しく調製したデンドロン-(L-SO1861)4-マレイミド溶液のアリコートを追加し(10mg/ml、Ab当たり8.0モル当量、0.4μmol、3.16mg、0.32ml)、混合物を手短にボルテックスし、それから20℃で一晩インキュベーションした。コンジュゲート化反応以外に、脱塩されたAb-SHの2つのアリコート(0.25mg、1.67nmol)をコンジュゲート化の前に取り分け、それぞれ正及び負の対照として、NEM(Ab当たり8.0モル当量、13.3 nmol、6.7μlの0.25mg/ml溶液)又はTBS pH7.5緩衝液(6.7μl)と20℃で一晩反応させ。(NEMの追加前に)18時間のインキュベーション後に、クルードなコンジュゲート混合物を手短に遠心し、100μlアリコートをUV-visによる分析のために取り出し、正及び負の対照と並べてエルマンアッセイによりキャラクタリゼーションして、デンドロン-(L-SO1861)4の組み込みを得た。バルクAb-デンドロン-(L-SO1861)4混合物に、新しく調製したNEM溶液のアリコート(2.5mg/ml、5.0モル当量、0.25μmol)を追加し、混合物を、DPBS pH7.5で溶出する1.6×30cmセファデックスG50カラムにより精製して、精製されたセツキシマブ-(S-デンドロン-(L-SO1861)4)4コンジュゲートを与えた。産物を0.2μmに濾過して清澄化し、それから、vivaspin T15濃縮器を用いてca.3mg/mlに注意深く濃縮して(3,000g、5分インターバル、5℃)、最終的なセツキシマブ-(S-デンドロン(L-SO1861)4)4コンジュゲートを与えた。収量:4.41mg、48%。デンドロン-(L-SO1861)4対Ab比=4.4。
トラスツズマブ、セツキシマブは以降では「Ab」と言われる。Abを、1、2、3、4、5、及び6のDARで、マイケル型チオール-エンコンジュゲート化反応によってサポニンSO18161-EMCHにコンジュゲート化した。SO1861-EMCH分子は、サポニンとAbとの間に不安定な結合を生成する不安定な(L)ヒドラゾン結合をその構造とそのマレイミド官能基との間に得る。トラスツズマブ-(L-SO1861)4について手順を例示的に記載する:
セツキシマブ(40mg、8.0ml)の溶液に、それぞれ10μl/mlのトリス濃縮液(127mg/ml、1.05M)、トリスHCl濃縮液(623mg/ml、3.95M)、及びEDTA-Na2濃縮液(95mg/ml、0.26M)を追加して、50mM TBS、2.5mM EDTA緩衝液pH7.5を与えた。
SO1861-S-Mal合成
Saponaria officinalis LからのSO1861(15.4mg、8.28μmol)及びHATU(140mg、368μmol、44.5モル当量)を固体として磁石攪拌子と共に20mLガラスバイアル内に置き、5mL DMSOを追加して材料を溶解させた。溶解した混合物を室温で30min撹拌した。30min後に、DMSO中の新しく調製したAEM溶液(65mg、256μmol、31モル当量)の1mLを、撹拌しているSO1861-HATU混合物に追加した。反応混合物を室温で17時間撹拌した。17時間の撹拌後に、混合物を脱イオン水で希釈し、1kDaのMWCOを有する再生セルロース膜チューブ(Spectra/Por7)を用いて脱イオン水に対して鋭意に24h透析した。透析後に、溶液を凍結乾燥して白色粉末を得た。
トラスツズマブ及びセツキシマブは以降では「Ab」と言われる。Abをマイケル型チオール-エンコンジュゲート化反応によってサポニンSO18161-S-Malにコンジュゲート化した。サポニンは、サポニンとAbとの間に安定な結合を生成する安定な(S)アミド結合をその構造とそのマレイミド官能基との間に得る。
DAR4によるPEG4-SPDPを介したトラスツズマブ-(L-HSP27)4、セツキシマブ-(L-HSP27)4合成、及びDAR2によるPEG4-SPDPを介したセツキシマブ-(L-HSP27)2合成
トラスツズマブ、セツキシマブは以降では「Ab」と言われる。Abを、AbとHSP27 BNAとの間に不安定な(L)ジスルフィド結合を形成するテトラ(エチレングリコール)スクシンイミジル3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート(PEG4-SPDP)リンカーを介してHSP27 BNAジスルフィドにコンジュゲート化した。トラスツズマブ-(L-HSP27 BNA)4について手順を例示的に記載する:
HSP27 BNAジスルフィドオリゴ(2.7mg、470nmol、6.10mg/ml)をTCEP(10モル当量、4.7μmol、1.34mg、50mg/ml)と、30分間、20℃で、ローラー混合によって反応させた。その後に、オリゴ-SHを、TBS pH7.5で溶出するPD10 G25脱塩カラムによって精製し、すぐに用いた。オリゴ-SHが得られた(2.48mg、90%、1.24mg/ml、SH対オリゴ比=0.8)。
トラスツズマブ(1.5mg、10.3nmol、2.50mg/ml)を、DMSO中の新しく調製したPEG4-SPDP溶液のアリコート(1mg/ml)(6.81モル当量、70.1nmol、39μg)と、ローラー混合によって20℃で60分間反応させた。その後に、反応をグリシン(TBS pH7.5中の2mg/mlの新しく調製した溶液の15.1μl)でクエンチし、それから、TBS pH7.5で溶出するzeba脱塩カラムによって脱塩した。もたらされたTras-S-PEG4-SPDPのアリコートを取り出し、UV-Vis分析によって試験した。SPDP組み込みを、ピリジル-2-チオン(PDT)を遊離させるためのTCEPを用いて、及び343nmでのUV-vis分析によって、決定した(SPDP対Ab比:4)。残りのTras-(S-PEG4-SPDP)4を、新しく調製したHSP27オリゴヌクレオチド(オリゴ-SH)のアリコート(8モル当量、82.4nmol、1.24mg/ml)と反応させ、ローラー混合によって一晩20℃でインキュベーションした。17時間後に、コンジュゲートをUV-vis分析によって分析して、343nmでのピリジル-2-チオン(PDT)の放出量によってHSP27の組み込みを確かめた。クルードなコンジュゲートを、DPBS pH7.5で溶出する1.6×33cmセファデックスG50カラムを用いて精製した。もたらされたトラスツズマブ-(L-HSP27)4は単一画分として得られた。収率:n.d.。純度:96%、HSP27 BNA対Ab比=4.4。
トラスツズマブ-(L-HSP27-L-ブロック)4、セツキシマブ-(L-HSP27-L-ブロック)
トラスツズマブ及びセツキシマブは以降では「Ab」と言われる。Abを、以降では「HSP27-Mal」と言われるマレイミド(Mal)を持つHSP27誘導体にコンジュゲート化した。Abをマイケル型チオール-エンコンジュゲート化反応によってHSP27-Malにコンジュゲート化した。HSP17-Malは、HSP27 BNAとAbとの間に不安定な結合を生成する不安定な(L)ヒドラゾン結合をその構造とそのマレイミド官能基との間に得る。トラスツズマブ-(L-HSP27BNA-L-ブロック)nについて、手順を例示的に記載する:
トラスツズマブを、脱イオン水(DI)で21mg/mlに戻し、それから、ヒスチジン緩衝液pH6を用いて5mg/mlに希釈した。20mg(4.0ml)アリコートに、それぞれ10μl/mlのトリス濃縮液(127mg/ml、1.05M)、トリスHCl濃縮液(623mg/ml、3.95M)、及びEDTA-Na2濃縮液(95mg/ml、0.26M)を追加して、50mM TBS、2.5mM EDTA緩衝液pH7.5を与えた。トラスツズマブ(20.30mg、4.920mg/ml、0.14μmol)に、新しく調製したTCEP溶液のアリコート(1.00mg/ml、2.35モル当量、0.32μmol)を追加し、混合物を手短にボルテックスし、それからローラー混合によって20℃で90分間インキュベーションした。インキュベーション後に(HSP27-Malの追加前に)、Ab-SHのca.2mg(0.439ml)アリコートを各混合物から取り出し、zebaスピン脱塩カラムを用いてTBS pH7.5へのゲル濾過により精製した。このアリコートを、UV-vis分析及びエルマンアッセイによってキャラクタリゼーションした(チオール対Ab比=4.0)。バルクAb-SH(5.1mg、35nmol)に、HSP27-Mal誘導体のアリコート(TBS pH7.5中に新しく調製、2mg/ml、「チオール」当たり1.3モル当量、182 nmol)を追加し、混合物を手短にボルテックスし、それから120分間20℃でインキュベーションした。トラスズマブ-HSP27 BNA誘導体コンジュゲート化反応以外に、脱塩されたAb-SHの2つのアリコート(0.5mg、3.3nmol)を、それぞれ正及び負の対照として、NEM(「チオール」当たり1.3モル当量、17.3nmol、6.7μlの0.25mg/ml溶液)又はTBS pH7.5緩衝液(6.7μl)と20℃で120分間反応させた。インキュベーション後に(NEMの追加前に)、Ab-HSP27BNA混合物の0.100mlアリコートを取り出し、zebaスピン脱塩カラムを用いてTBS pH7.5へのゲル濾過により精製した。このアリコートをUV-visによりキャラクタリゼーションし、正の対照及び負の対照と並べてエルマンアッセイによりキャラクタリゼーションして、HSP27組み込みを得た。バルクAb-HSP27混合物に、新しく調製したNEM溶液のアリコート(0.25mg/ml、2.5モル当量、89nmol)を追加し、混合物を、DPBS pH7.5で溶出する1.6×30cmセファデックスG50Mを用いたゲル濾過、次に100KDa MWCO濃縮器を用いた繰り返しの遠心濾過及び洗浄により精製して、精製トラスツズマブ-(L-HSP27-L-ブロック)4コンジュゲートを与えた。生物学的評価のために分注する前に、産物を0.2μmに濾過した。
トラスツズマブ-[S-Tri-(L-SO1861)-(L-HSP27)]4、トラスツズマブ-[S-Tri-(ブロック)-(L-HSP27)]4、セツキシマブ-[S-Tri-(L-SO1861)-(L-HSP27)]4、セツキシマブ-[S-Tri-(ブロック)-(L-HSP27)]4
トラスツズマブ及びセツキシマブは以降では「Ab」と言われる。Abを、マイケル型チオール-エン反応によって、以降では「HSP27-Mal」と言われる2つの異なるマレイミド(Mal)を持つHSP27 BNA誘導体にコンジュゲート化した。これらのHSP27-Mal誘導体は、すなわち:1)Mal-三官能性リンカー-(L-SO1861)-(L-HSP27)、2)Mal-三官能性リンカー-(ブロック)-(L-HSP27)であった。トラスツズマブ-[S-三官能性リンカー-(L-SO1861)-(L-HSP27 BNA)]4について、手順を例示的に記載する:
トラスツズマブを、脱イオン水(DI)で21mg/mlに戻し、それから、ヒスチジン緩衝液pH6を用いて5mg/mlに希釈した。20mg(4.0ml)アリコートに、それぞれ10μl/mlのトリス濃縮液(127mg/ml、1.05M)、トリスHCl濃縮液(623mg/ml、3.95M)、及びEDTA-Na2濃縮液(95mg/ml、0.26M)を追加して、50mM TBS、2.5mM EDTA緩衝液pH7.5を与えた。
DAR4によるPEG4-SPDPを介したトラスツズマブ-(L-SO1861)4-(L-HSP27)4、セツキシマブ-(L-SO1861)4-(L-HSP27)4合成、DAR2によるPEG4-SPDPを介したセツキシマブ-(L-SO1861)4-(L-HSP27)2(FBR703 STB17/7-8)合成
トラスツズマブ-(L-SO1861)4、セツキシマブ-(L-SO1861)4は以降では「Ab」と言われる。Abを、AbとHSP27 BNAの間に不安定な(L)ジスルフィド結合を形成するテトラ(エチレングリコール)スクシンイミジル3-(2ピリジルジチオ)プロピオネート(PEG4-SPDP)リンカーを介してHSP27 BNAジスルフィドにコンジュゲート化した。トラスツズマブ-(L-SO1861)4-(L-HSP27)4について手順を例示的に記載する:
HSP27 BNAジスルフィドオリゴ(2.7mg、470nmol、6.10mg/ml)をTCEP(10モル当量、4.7μmol、1.34mg、50mg/ml)と、30分間、20℃で、ローラー混合によって反応させた。その後に、オリゴ-SHを、TBS pH7.5で溶出するPD10 G25脱塩カラムによって精製し、すぐに用いた。オリゴ-SHが得られた(2.48mg、90%、1.24mg/ml、SH対オリゴ比=0.8)。
トラスツズマブ-(L-SO1861)4(1.3mg、8.7nmol、2.50mg/ml)を、DMSO中の新しく調製したPEG4-SPDP溶液のアリコート(1mg/ml)(9.26モル当量、80.3nmol、45μmol)と、ローラー混合によって20℃で60分間反応させた。その後に、反応をグリシン(TBS pH7.5中の2mg/mlの新しく調製した溶液の15.1μl)でクエンチし、それから、TBS pH7.5で溶出するzeba脱塩カラムによって脱塩した。もたらされたTras-(L-SO1861)-(L-PEG4-SPDP)のアリコートを取り出し、UV-Vis分析によって試験した。SPDP組み込みを、ピリジル-2-チオン(PDT)を遊離させるためのTCEPを用いて、及び343nmでのUV-vis分析によって、決定した(SPDP対Ab比=4)。残りのTras-(L-SO1861)-(L-PEG4-SPDP)を、新しく調製したHSP27オリゴヌクレオチド(オリゴ-SH)のアリコート(8モル当量、54.8nmol、0.32mg、1.24mg/ml)と反応させ、ローラー混合によって一晩20℃でインキュベーションした。17時間後に、コンジュゲートをUV-vis分析によって分析して、343nmにおけるピリジル-2-チオン(PDT)の放出量によってHSP27の組み込みを確かめた。クルードなコンジュゲートを、DPBS pH7.5で溶出する1.6×33cmセファデックスG50カラムを用いて精製した。もたらされたトラスツズマブ-(L-SO1861)4-(L-HSP27 BNA)4は単一画分として得られた。収量:0.47mg、45%(0.49mg/ml)、HSP27対Ab比=3.5。
トラスツズマブ、セツキシマブは以降では「Ab」と言われる。Abを、マイケル型チオール-エンコンジュゲート化反応によってサポニンQSミックス-EMCHにコンジュゲート化した。トラスツズマブ-L-QSミックスについて手順を例示的に記載する:
トラスツズマブ(「Ab」、600mg)を脱イオン水(DI)で21mg/mLに戻し、それから、新しく調製したヒスチジン緩衝液pH 6(5mMヒスチジンpH6、2%トレハロース、0.01% Tween 20)を用いて5mg/mLに希釈した。それぞれ10μL/mLのトリス濃縮液(127mg/mL、1.05M)、トリスHCL濃縮液(623mg/mL、3.95M)、及びEDTA-Na2濃縮液(95mg/ml、0.26M)を追加して、50mM TBS、2.5mM EDTA緩衝液pH7.5を与えた。トラスツズマブ(603.8mg、4.887mg/mL、4.0μmol)に、新しく調製したTCEP溶液のアリコート(1mg/mL、2.35モル当量、9.5μmol、2.72mg)を追加し、混合物を手で旋回させて混合し、それからローラー混合しながら20℃で90分間インキュベーションした。インキュベーション後に(QSミックス-EMCHの追加前に)、Ab-SHの2mg(0.409mL)アリコートを取り出し、zebaスピン脱塩カラムを用いてTBS pH7.5へのゲル濾過により精製した。このアリコートを、UV-vis分析及びエルマンアッセイによりキャラクタリゼーションした。バルクAb-SHに、新しく調製したQSミックス-EMCH溶液のアリコート(2mg/mL、5.2モル当量、21μmol、21.6mL)を追加し、混合物を手短にボルテックスし、それから20℃で120分間インキュベーションした。コンジュゲート化反応以外に、脱塩されたAb-SHの2つのアリコート(0.5mg、0.134mL、3.33nmol)を、それぞれ正及び負の対照として、NEM(8.00モル当量、26.6nmol、3.3μg、13.3μLの0.25mg/ml溶液)又はTBS pH7.5緩衝液(13.3μL)と20℃で120分間反応させた。インキュベーション後に(NEMの追加前に)、Ab-QSミックス-EMCH混合物のca.2mg(0.481mL)アリコートを取り出し、zebaスピン脱塩カラムを用いてTBS pH7.5へのゲル濾過により精製した。このアリコートをUV-visによりキャラクタリゼーションし、正の対照及び負の対照と並べてエルマンアッセイによりキャラクタリゼーションして、QSミックス-EMCH組み込みを得た。バルクAb-QSミックス-EMCH混合物に、新しく調製したNEM溶液のアリコート(2.5mg/mL、5モル当量、20μmoL、2.51mg)を追加し、混合物を2~8℃で一晩保存した。コンジュゲートを、DPBS pH7.5で溶出する10×40cmセファデックスG50Mカラムにより精製して、精製されたトラスツズマブ-(L-QSミックス)コンジュゲートを与えた。それから、産物丸ごとを、vivacell 100濃縮器(2,000g、4℃、200分)を用いて5mg/mLに正規化した。産物を0.2μmに濾過し、生物学的評価のために分注した。収量:n.d.。QSミックス対Ab比=4.1。
DAR4によるトラスツズマブ-(L-HSP27BNA-L-SO1861)4、セツキシマブ-(L-HSP27BNA-L-SO1861)4
トラスツズマブ及びセツキシマブは以降では「Ab」と言われる。Abを、サポニンSO1861、及び以降では「HSP27-Mal」と言われるマレイミド(Mal)を持つHSP27誘導体にコンジュゲート化した。Abをマイケル型チオール-エンコンジュゲート化反応によってHSP27-Malにコンジュゲート化した。HSP17-Malは、HSP27 BNAとAbとの間に不安定な結合を生成する不安定な(L)ヒドラゾン結合をその構造とそのマレイミド官能基との間に得る。トラスツズマブ-(L-HSP27BNA-L-SO1861)4について手順を例示的に記載する:
トラスツズマブを、脱イオン水(DI)で21mg/mlに戻し、それから、ヒスチジン緩衝液pH6を用いて5mg/mlに希釈した。20mg(4.0ml)アリコートに、それぞれ10μl/mlのトリス濃縮液(127mg/ml、1.05M)、トリスHCl濃縮液(623mg/ml、3.95M)、及びEDTA-Na2濃縮液(95mg/ml、0.26M)を追加して、50mM TBS、2.5mM EDTA緩衝液pH7.5を与えた。トラスツズマブ(20.30mg、4.920mg/ml、0.14μmol)に、新しく調製したTCEP溶液のアリコート(1.00mg/ml、2.35モル当量、0.32μmol)を追加し、混合物を手短にボルテックスし、それからローラー混合によって20℃で90分間インキュベーションした。インキュベーション後に(HSP27-Malの追加前に)、Ab-SHのca.2mg(0.439ml)アリコートを各混合物から取り出し、zebaスピン脱塩カラムを用いてTBS pH7.5へのゲル濾過により精製した。このアリコートを、UV-vis分析及びエルマンアッセイによってキャラクタリゼーションした(チオール対Ab比=4.0)。バルクAb-SH(4.7mg、32 nmol)に、HSP27-Mal誘導体のアリコート(TBS pH7.5中に新しく調製、2mg/ml、「チオール」当たり1.3モル当量、166 nmol)を追加し、混合物を手短にボルテックスし、次に120分間20℃でインキュベーションした。トラスズマブ-HSP27 BNA誘導体コンジュゲート化反応以外に、脱塩されたAb-SHの2つのアリコート(0.5mg、3.3nmol)を、それぞれ正及び負の対照として、NEM(「チオール」当たり1.3モル当量、17.3nmol、6.7μlの0.25mg/ml溶液)又はTBS pH7.5緩衝液(6.7μl)と20℃で120分間反応させた。インキュベーション後に(NEMの追加前に)、Ab-HSP27BNA混合物の0.100mlアリコートを取り出し、zebaスピン脱塩カラムを用いてTBS pH7.5へのゲル濾過により精製した。このアリコートをUV-visによりキャラクタリゼーションし、正の対照及び負の対照と並べてエルマンアッセイによりキャラクタリゼーションして、HSP27組み込みを得た。バルクAb-HSP27混合物に、新しく調製したNEM溶液のアリコート(0.25mg/ml、2.5モル当量、80nmol)を追加し、混合物を、DPBS pH7.5で溶出する1.6×30cmセファデックスG50Mを用いたゲル濾過、次に100KDa MWCO濃縮器を用いた繰り返しの遠心濾過及び洗浄により精製して、精製されたトラスツズマブ-(L-HSP27BNA-L-SO1861)4コンジュゲートを与えた。生物学的評価のために分注する前に、産物を0.2μmに濾過した。
DAR2によるSMCCを介したトラスツズマブ-(L-SO1861)4-(S-ジアンチン)2及びセツキシマブ-(L-SO1861)4-(S-ジアンチン)2の合成
トラスツズマブ-L-SO1861及びセツキシマブ-L-SO1861は以降では「Ab」と言われる。Abを、スクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート(SMCC)リンカーを介してジアンチン-Cysにコンジュゲート化し、Abとジアンチンとの間に安定な(S)アミド結合を提供した。トラスツズマブ-(L-SO1861)4-(S-ジアンチン)2について手順を例示的に記載する:
ジアンチン-Cys(7.8mg、261nmol、0.78mg/ml)をTCEP(5モル当量、1.31μmol、0.37mg、1mg/ml)と、30分間、20℃で、ローラー混合によって反応させた。その後で、タンパク質-SHを、TBS pH7.5で溶出するzeba脱塩カラムによって精製し、すぐに用いた。タンパク質-SHが得られた(5.2mg、67%、0.52mg/ml、SH対タンパク質比=1±0.1)。
DAR2によるSMCCを介したトラスツズマブ-(S-ジアンチン)2、セツキシマブ-(S-ジアンチン)2合成
トラスツズマブ及びセツキシマブは以降では「Ab」と言われる。Abを、スクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート(SMCC)リンカーを介してジアンチン-Cysにコンジュゲート化し、Abとジアンチンとの間に安定な(S)アミド結合を提供した。トラスツズマブ-(S-ジアンチン)2について手順を例示的に記載する:
ジアンチン-Cys(7.8mg、261nmol、0.78mg/ml)をTCEP(5モル当量、1.31μmol、0.37mg、1mg/ml)と、30分間、20℃で、ローラー混合によって反応させた。その後で、タンパク質-SHを、TBS pH7.5で溶出するzeba脱塩カラムによって精製し、すぐに用いた。タンパク質-SHが得られた(5.2mg、67%、0.52mg/ml、SH対タンパク質比=1±0.1)。
DAR2によるPEG4-SPDPを介したトラスツズマブ-(L-SO1861)4-(L-ジアンチン)2及びセツキシマブ-(L-SO1861)4-(L-ジアンチン)2合成
トラスツズマブ-L-SO1861及びセツキシマブ-L-SO1861は以降では「Ab」と言われる。Abを、Abとジアンチンとの間に不安定な(L)ジスルフィド結合を形成するテトラ(エチレングリコール)スクシンイミジル3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート(PEG4-SPDP)リンカーを介してジアンチン-Cysにコンジュゲート化した。トラスツズマブ-L-SO1861について手順を例示的に記載する:
ジアンチン-Cys(7.8mg、261nmol、0.78mg/ml)をTCEP(5モル当量、1.31μmol、0.37mg、1mg/ml)と、30分間、20℃で、ローラー混合によって反応させた。その後で、タンパク質-SHを、TBS pH7.5で溶出するzeba脱塩カラムによって精製し、すぐに用いた。タンパク質-SHが得られた(5.2mg、67%、0.52mg/ml、SH対タンパク質比=1±0.1)。
トラスツズマブ-(L-ジアンチン)2、セツキシマブ-(L-ジアンチン)2、及びDAR2によるPEG4-SPDPを介した合成
トラスツズマブ及びセツキシマブは以降では「Ab」と言われる。Abを、Abとジアンチンとの間に不安定な(L)ジスルフィド結合を形成するテトラ(エチレングリコール)スクシンイミジル3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート(PEG4-SPDP)リンカーを介してジアンチン-Cysにコンジュゲート化した。トラスツズマブ-L-SO1861について手順を例示的に記載する:
ジアンチン-Cys(7.8mg、261nmol、0.78mg/ml)をTCEP(5モル当量、1.31μmol、0.37mg、1mg/ml)と、30分間、20℃で、ローラー混合によって反応させた。その後で、タンパク質-SHを、TBS pH7.5で溶出するzeba脱塩カラムによって精製し、すぐに用いた。タンパク質-SHが得られた(5.2mg、67%、0.52mg/ml、SH対タンパク質比=1±0.1)。
材料及び方法
我々の現行の研究において、我々は、シッフ塩基(イミン)を介したサポニン結合のための4つの分子アームとクリックケミストリーのための1つのアームとからなるモデル骨格を検討した。ポリマー構造(図19)は第1世代(すなわち、繰り返される分岐サイクル数)の五価のポリエチレングリコールに基づくデンドリマーである。これはIris Biotech GmbH(マルクトレドヴィッツ、ドイツ)から購入した。サポニン(この例ではSA1641)を、Merck(ダルムシュタット、ドイツ)から得られたサポニナム・アルブムと呼ばれるGypsophila種からのサポニンの複合的な生抽出液から精製した。粉末状の生の抽出物(2.5g)を、水(100mL)中において水酸化ナトリウム(0.2g)によって加水分解した。溶液を40℃で20h撹拌し、それから、pH5.0に達するまで氷酢酸を足した。タンニンを除去するために、溶液を分液漏斗中で30mLのブタノールと共に振盪した。水相を再取得し、ブタノール抽出を2回繰り返した。ブタノール相に無水硫酸ナトリウムを足し、濾過し、プールした。ブタノールを蒸発させ、残りのサポニン粉末を20%メタノール中に最終濃度30mg/mLで溶かした。短いソニケーション後に、異なるサポニンを高速液体クロマトグラフィー(HPLC)により分離した。チューブ(カラム排除)を、1.5mL/minの流量の温水(40℃)によって、それから、Eurospher RP-C18カラム(5μm、250×8mm)を包含してイソプロパノール(100%)によってリンスした。サポニンをカラムにかけ、メタノール勾配によって溶出した(0.01%トリフルオロ酢酸を足した水中において1.5mL/minで30min以内の20%メタノールから70%メタノール、次にさらに60minの70%メタノール)(Sama etAl,2018)。画分のアリコートを、エレクトロスプレーイオン化質量分析(ESI-MS)によってそれらのSA1641含量について分析した。純粋なSA1641を含有する画分をプールし、メタノールを蒸発させた。水溶液を、ドライアイスの使用によって回転丸底フラスコ中で薄膜として凍結した。-80℃での16hの保存後に、サンプルを凍結乾燥した。本発明で定められる骨格を産生するために、ポリマー構造(0.2mM)及びSA1641(3.2mM)を水(およそpH8)に溶解し、等体積を混合し、26℃で24h振盪した。それから、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(NaCNBH3;0.1M)を、SA1641を参照して4倍モル過剰で追加し、サンプルをさらに24hインキュベーションした。それから、構造を超高速高分離液体クロマトグラフィー(UPLC)/ESI-MSにより検証した。サンプルをRP-C4カラムにかけ、メタノール勾配によって溶出した(0.01%トリフルオロ酢酸を足した水中において15min以内の25%メタノールから80%メタノール、次にさらに10minの80%メタノール)。Waters CorporationからのLC-飛行時間型(LC-TOF)質量分析計を用いて、エレクトロスプレーイオン化による精密質量測定のために特に設計されたイオン源であるLockSpray(商標)の使用によって、画分を分析した。
図58の挿入図は、同位体パターン計算機enviPat Web 2.0による計算から得られた理論的に予想される質量スペクトルを示す。パターンは、分子の電荷及び同位体の天然の存在率を考える。これは、1つよりも多いピークが単一の物質について予想される理由である。UPLC/ESI-MSにより得られた実験データ(図58)は、予測された同じ強度でもってm/z 758~760にほぼ厳密に同じピークを示し、それゆえに、ポリマー構造への首尾良いSA1641カップリングを証明している。
材料及び方法
原薬の例として、我々は、標的化された毒素のジアンチン-上皮成長因子(ジアンチン-EGF)を用いた。プラスミドのHis-ジアンチン-EGF-pET11d(Weng etAl,2009)(100ng)を、20μLのEscherichia coli Rosetta(商標)2(DE3)pLysSコンピテントセル(Novagen、サンディエゴ、CA、USA)に追加した。細胞を、熱ショックによってトランスフォーメーションした(氷上で30min、42℃で90s、氷上で1min)。その後に、300μLの溶原培地(LB)を追加し、懸濁液を200rpmで振盪しながら37℃で1hインキュベーションした。50μg/mLアンピシリンを有する予熱した溶原培地寒天プレートに、100μlの細菌懸濁液を接種し、プレートを37℃で一晩インキュベーションした。50μg/mLアンピシリン有する溶原培地(3mL)に、プレートからのコロニーを接種し、細菌を37℃かつ200rpmで8hインキュベーションした。懸濁液(50μL)を、50μg/mLアンピシリンを有する500mLの溶原培地に追加し、37℃かつ200rpmで一晩インキュベーションした。続いて、体積を2.0Lにスケールアップし、0.9という波長600nmの光学密度に達するまで、細菌を同じ条件下で成長させた。その後に、タンパク質発現を、1mMの最終濃度でのイソプロピルβ-D-1-チオガラクトピラノシド(IPTG)の追加によって誘導した。タンパク質発現は37℃かつ200rpmで3h続いた。最終的に、細菌懸濁液を5,000gかつ4℃で5min遠心し、20mLのPBS(137mM NaCl、2.7mM KCl、8.1mM Na2HPO4、1.47mM KH2PO4)に再懸濁し、使用まで-20℃で保存した。精製のために、細菌懸濁液を融解し、ソニケーションによりリシスした。ライセートを遠心し(15,800g、4℃、30分)、イミダゾールを最終濃度20mMで追加した。上清を、20mMイミダゾールの存在下で、4℃で30minに渡って、連続振盪下において、2mLのNi-ニトリロ三酢酸アガロースとインキュベーションした。続いて、材料を20mLカラムに注加し、10mL洗浄緩衝液(50mM NaH2PO4、300mM NaCl、20mMイミダゾール)で3回洗浄し、ジアンチン-EGFを、洗浄緩衝液中の10mLずつの増大して行く濃度のイミダゾール(31、65、125、及び250mM)によって溶出した。溶出液画分(2mL)を、2.0LのPBSに対して4℃で一晩透析した。脱塩されたジアンチン-EGFを、Amicon(登録商標)Ultra-15(10kDa)によって濃縮し、タンパク質濃度を定量した。
例のポリマー構造、五量体デンドリマー(ペントリマー)は、SA1641の不在下でも存在下でも、標的細胞に対するいずれかの細胞毒性効果を有さない(図59、カラム2及び3)。骨格の不在下では、標的化された毒素(ジアンチン-EGF)は、0.1nMの濃度において最大毒性の半分を示す(カラム4)。SA1641の存在下では、同じ濃度は全ての細胞の死をもたらし、エンドソーム脱出の向上因子として作用するSA1641の一般的能力を指示している(カラム5)。ポリマー構造の存在は、SA1641の存在下でも不在下でも、ジアンチン-EGFの毒性に影響せず(カラム6及び7)、骨格がジアンチン-EGFの毒性に影響しないということを指示している。クリックケミストリーによってモデルポリマー構造をジアンチン-EGFという例の原薬にカップリングするためには、物質は前にはアルキン基とカップリングされなければならなかった。この修飾の帰結として、ジアンチン-EGFはいくらかの活性を失った(それぞれ、カラム8及び9を6及び7と比較せよ)。しかしながら、非指向的なアルキン修飾は本発明の発想には影響せず、将来の適用にもまた要求されない。我々は試験目的のためにのみ非指向的なやり方でアルキンを導入しなければならず、毒素の薬学的活性中心を妨害するリスクを有した。原薬の製造業者は、物質の活性が影響されないままである彼の選んだ位置において、合成中にクリック位置を物質に直接的に導入し得る。アルキン修飾された原薬をポリマー構造とクリックしたときに、活性の追加の損失はなく、ポリマー構造そのものは毒性ではないということを指示した(カラム10及び11)。
材料
次の化学物質を購入のまま用いた:メタノール(MeOH、LiChrosolv、Merck)、N-ε-マレイミドカプロン酸ヒドラジド(EMCH、95%、TCI Chemicals)、トリフルオロ酢酸(TFA、99.8%、Carl Roth)、2-メルカプトエタノール(98%、Sigma-Aldrich)、ポリ(アミドアミン)(PAMAMデンドリマー、エチレンジアミンコア、5.0世代溶液、Sigma-Aldrich)、シアニン3カルボン酸(Cy3-COOH、95%、Lumiprobe)、1-[ビス(ジメチルアミノ)メチレン)-1H-1,2,3-トリアゾロ-[4,5-b]ピリジニウム3-オキシドヘキサフルオロホスフェート、N-[(ジメチルアミノ)-1H-1,2,3-トリアゾロ-[4,5-b]ピリジン-1-イルメチレン]-N-メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートN-オキシド(HATU、97%、Sigma-Aldrich)、ウシ血清アルブミン画分V(BSA、Carl Roth)、ジメチルスルホキシド(DMSO、99%、Carl Roth)、2-イミノチオランヒドロクロリド(98%、Sigma-Aldrich)、ローダミンb(RhodB、95%、Merck)、ダルベッコリン酸緩衝食塩水(PBS、Gibco)、塩酸(HCl、37%、Merck)、NHS-PEG13-DBCO(Click Chemistry Tools)、Alexa Fluor(商標)488 5-TFP(Thermo-Fischer)、アジド-PEG3-SS-NHS(Conju-Probe)、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(NaCNBH3、95%、Sigma-Aldrich)、過硫酸アンモニウム(APS、98%、Sigma-Aldrich)、N,N,N′,N′-テトラメチルエチレンジアミン(TMEDA、99%、Sigma-Aldrich)、カスタムペプチドSESDDAMFCDAMDESDSK(95%、PeptideSynthetics)、アジド-dPEG12-NHS(95%、Quanta Biodesign)、PFd-G4-アジド-NH-BOCデンドロン(G4-デンドロン、95%、Polymer Factory)、シアニン5-DBCO(Cy5-DBCO、95%、Lumiprobe)、クロロホルム(CHCl3、99.5%、Sigma)、Amicon Ultra 0.5mL遠心フィルター(3kDa MWCO、Sigma)、mPEG-SCM(mPEG2k-NHS、95.6%、Creative PEG Works)、Amicon Ultra 15mL遠心フィルター(10kDa MWCO、Sigma)。
MALDI-TOF-MS
MALDI-TOFスペクトルはMALDI質量分析計(Bruker Ultrafex III)で記録した。典型的には、ナノモルからマイクロモル範囲でMilliQ水に溶解したサンプルを、液滴乾燥法によって、アセトニトリル(MADLI-TOF-MS試験済み、Sigma)/0.1% TFA(7:3v/v)に溶解したマトリックスとしてsuper-DHB(99%、Fluka)又はシナピン酸(SA、99%、Sigma-Aldrich)どちらかを用いて、ターゲット(MTP384ターゲットプレート研磨済みスチールTF、Bruker Daltons)上にスポットした。PepMix(ペプチド較正標準、Bruker Daltons)又はProteMass(タンパク質較正標準、Sigma-Aldrich)が較正標準としての用をなした。RPモードはリフレクターのポジティブモードを言う。RNモードはリフレクターのネガティブモードを言う。LPモードはリニアポジティブモードを言う。
1H NMR分析はBruker 400MHz NMR分光計を用いて行った。サンプル調製は測定の24時間前に行われた。これによって、2mgのサンプルが0.8mLのメタノール-D4(99%、Deutero)に溶解された。
UV-Vis測定は、NanoDrop ND-1000分光光度計で、200~750nmのスペクトル範囲で行った。
サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)は、GE HealthcareからのセファデックスG25 Superfineによって、かつプレパックPD10カラム(GE Healthcare、セファデックスG25M)で行った。クロマトグラフィーを行う前に、材料をそれぞれの溶離液中で膨潤させることにより活性化した。
再生セルロース膜:MWCO=1及び2kDa(Spectra/Por)及びMWCO=12~14kDa(Carl Roth)を用いて透析を行った。典型的には、透析は1Lの溶媒で24h行い、これはプロセスの最初の6hの後に交換した。
凍結乾燥は、Alpha 1-2 LD plus(Martin Christ Gefriertrocknungsanlagen GmbH)で行った。典型的には、サンプルを液体窒素で凍結し、高真空で凍結乾燥機内に置いた。
Saponaria officinalis LからのSO1861(59mg、31.7μmol)及びEMCH(301mg、888μmol)を、スターラーと共にラウンドフラスコ内に置き、13mLメタノールに溶解した。TFA(400μL、cat.)を溶液に追加し、反応混合物を800rpmかつ室温で3h、RCT Bマグネットスターラー(IKA Labortechnik)で撹拌した。3hの撹拌後に、ミックスをMilliQ水又はPBSどちらかで希釈し、MilliQ水又はPBSどちらかに対して鋭意に24h透析した。1kDaのMWCOを有する再生セルロース膜チューブ(Spectra/Por7)を用いた。透析後に、溶液を凍結乾燥して白色粉末を得た。収量62.4mg(95%)。乾燥したアリコートを、さらに、1H NMR及びMALDI-TOF-MSによるキャラクタリゼーションに用いた。
MALDI-TOF-MS(RNモード):m/z 2275 Da([M-H]-,サポニン-EMCHコンジュゲート),2244 Da([M-H]-,サポニン-EMCHコンジュゲート),2222 Da([M-H]-,サポニン-EMCHコンジュゲート),2178 Da([M-H]-,サポニン-EMCHコンジュゲート),2144 Da([M-H]-,サポニン-EMCHコンジュゲート),2122 Da([M-H]-,サポニン-EMCHコンジュゲート),2092 Da([M-H]-,サポニン-EMCHコンジュゲート),2070 Da([M-H]-,SO1861-EMCH),2038 Da([M-H]-,SO1832-EMCH),1936 Da([M-H]-,SO1730-EMCH),1861 Da([M-H]-,SO1861)。
SO1861-EMCH(0.1mg、48nmol)に、200μLメルカプトエタノール(18mg、230μmol)を追加し、溶液をThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で1h振盪した。1hの振盪後に、溶液をメタノールで希釈し、1kDaのMWCOを有する再生セルロース膜チューブ(Spectra/Por7)を用いてメタノールに対して鋭意に4h透析した。透析後に、アリコートを取り出し、MALDI-TOF-MSにより分析した。
47μLのPBSに溶解した2-イミノチオラン(231μg、1.1μmol)を、200μLのPBS中のBSA-RhodB溶液(10mg、0.15μmol)に追加し、ミックスをThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で40min振盪した。40minの振盪後に、反応ミックスを直ちにセファデックスG25 Superfineサイズ排除カラム(16mLカラム体積)に通し、100μL PBSに溶解したSO1861-EMCH(1mg、0.5μmol)を収集されたBSA-SH画分に追加した。反応混合物を、ThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で12h振盪した。12hの振盪後に、BSA-SO1861を、3kDaのMWCOを有するAmicon Ultra 15フィルターによる4,000rpm(15℃)での遠心濾過を用いて濃縮した。コンジュゲートを溶液として冷蔵庫に保存し、アリコートを分析のため取った。収量:決定されなかった。
メタノールに溶解した720μLのPAMAM(30mg、1.04μmol)を、250mLラウンドフラスコ内に置き、メタノールをロータリーエバポレータ(20mbar、60℃)によって除去した。残りのPAMAMを9mLのDMSOに溶解した。0.5mLのDMSOに溶解したHATU(7.6mg、20μmol)を、DMSO中のCy3-COOH(0.6mg、1.2μmol)溶液に追加し、ミックスを、ThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で1h振盪した。1hの振盪後に、HATU-Cy3溶液を撹拌PAMAM溶液に追加し、反応ミックスを室温で12h撹拌した。12hの撹拌後に、反応ミックスをMilliQ水で希釈し、2kDaのMWCOを有する再生セルロース膜チューブ(Spectra/Por6)を用いてMilliQ水に対して鋭意に24h透析した。透析後に、コンジュゲート溶液の体積をロータリーエバポレータ(20mbar、60℃)によって縮減し、濃縮されたコンジュゲート溶液をセファデックスG25 Superfineサイズ排除カラム(16mLカラム体積)に通した。第1の画分を収集し、凍結乾燥して、粘稠なピンク色のPAMAM-Cy3コンジュゲートを得た。PAMAM-Cy3コンジュゲート形成を、薄層クロマトグラフィー(メタノール/水、v/v1:1)によるクロマトグラフィーと、セファデックスG25 Superfineカラムによるより速いバンドの出現とによって確認した。収量21.3mg(63%)。UV-Vis分光光度法により測定したPAMAM当たりの色素モル比は、0.43であった。
Cy3-PAMAM-(SO1861)5について、手順を例示的に記載する。250μLのMilliQ水に溶解した2-イミノチオラン(1mg、6.7μmol)を、125μLのMilliQ水中のPAMAM-Cy3溶液(0.5mg、17nmol)に追加し、ミックスをThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で40min振盪した。40minの振盪後に、反応ミックスを直ちにセファデックスG25 Superfineサイズ排除カラム(16mLカラム体積)に通し、40μLのMilliQ水に溶解したSO1861-EMCH(176μg、85nmol)を、収集されたCy3-PAMAM-SH画分に追加した。反応混合物を、ThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で12h振盪した。12hの撹拌後に、反応ミックスをMilliQ水で希釈し、12~14kDaのMWCOを有する再生セルロース膜チューブ(ZelluTrans、Carl Roth)を用いてMilliQ水に対して鋭意に24h透析した。透析後に、Cy3-PAMAM-SO1861溶液を、3kDaのMWCOを有するAmicon Ultra 15フィルターによる4000rpm(15℃)での遠心濾過を用いて濃縮した。コンジュゲートを溶液として冷蔵庫に保存し、アリコートを分析のため取った。収量:0.5mg(75%)。
Cy3-PAMAM(0.5mg、18nmol)、SO1861(2.3mg、1.24μmol)、及びHATU(64.6mg、170μmol)を、別々に200μL DMSOに溶解した。SO1861及びHATU溶液を混合し、ThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で20min振盪した。20minの振盪後に、Cy3-PAMAM溶液を振盪SO1861-HATU溶液に追加し、反応混合物がThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で12h振盪することを許した。12hの振盪後に、反応ミックスをMilliQ水で希釈し、12~14kDaのMWCOを有する再生セルロース膜チューブ(ZelluTrans、Carl Roth)を用いてMilliQ水に対して鋭意に24h透析した。透析後に、Cy3-PAMAM-NC-SO1861溶液を、3kDaのMWCOを有するAmicon Ultra 15フィルターによる4,000rpm(15℃)での遠心濾過を用いて濃縮した。Cy3-PAMAM-NC-(SO1861)17コンジュゲートを溶液として冷蔵庫に保存し、アリコートを分析のために取った。収量:0.77mg(69%)。
PFd-G4-アジド-NH-BOC(G4-デンドロン)(9.75mg、2.11μmol)を、2mL反応チューブ(Eppendorf)内に置き、200μL DMSOに溶解した。DMSO中の100μLのCy5-DBCO溶液(1.72μmol*mL-1、170nmol)をG4-デンドロン溶液に追加し、ミックスをThermoMixer C(Eppendorf)上で室温かつ800rpmで12時間振盪した。12hの撹拌後に、反応ミックスをMilliQ水で希釈し、1kDaのMWCOを有する再生セルロース膜チューブ(Spectra/Por7)を用いてMilliQ水に対して鋭意に24h透析した。透析後に、溶液を凍結乾燥して、青色粉末を得た。クルードな産物を、凍結乾燥から得られたままで脱保護ステップに用いた。
最も低いG4-デンドロン対SO1861-EMCH比についての手順を例示的に記載する。300μLのMilliQ水に溶解した2-イミノチオラン(2.65mg、19.2μmol)を、252μLのMilliQ水中の部分的にCy5標識されたG4-デンドロン溶液(0.577mg、192 nmol)に追加し、ミックスをThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で40min振盪した。40minの振盪後に、反応ミックスを直ちにPD10サイズ排除カラムに通し、100μLのMilliQ水に溶解したSO1861-EMCH(1.19mg、575nmol)を、収集されたG4-デンドロン-SH画分に追加した。反応混合物を、ThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で12h振盪した。12hの振盪後に、反応ミックスを、Amicon Ultra遠心フィルター(3kDa MWCO)を用いた遠心濾過により濃縮した。コンジュゲートを溶液として冷蔵庫に保存し、アリコートを分析のため取った。収量:90nmol(47%)。
最も高いPAMAM対2-イミノチオラン比について手順を例示的に記載する。30μLのメタノールに溶解したPAMAM(333μg、12.8 nmol)溶液に、128μLのMilliQ水に溶解した2-イミノチオラン(0.53mg、3.84μmol)を追加した。反応混合物を、ThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で12h振盪した。12hの振盪後に、反応ミックスを、15℃かつ13500rpmにおけるAmicon Ultra遠心フィルター(3kDa MWCO)を用いた遠心濾過によって、MilliQ水で4回洗浄した。洗浄後に、サンプルを凍結乾燥して白色固体を得た。収量は決定されなかった。
最も低いPAMAM対mPEG2k比について手順を例示的に記載する。10μLのDMSOに溶解したPAMAM(333μg、12.8nmol)溶液に、13μLのDMSOに溶解したmPEG2k-NHS(0.268mg、128nmol)を追加した。反応混合物を、ThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で12h振盪した。12hの振盪後に、反応ミックスをMilliQ水で希釈し、2kDaのMWCOを有する再生セルロース膜チューブ(Spectra/Por6)を用いてMilliQ水に対して鋭意に24h透析した。透析後に、バッチを、Amicon Ultra 15mL遠心フィルター(10kDa MWCO)を用いた遠心濾過によって濃縮した。濃縮されたバッチをPD10サイズ排除カラムに通し、次に凍結乾燥をして、白色の綿毛状の粉末を得た。収量は決定されなかった。
Cy3-PAMAM-(SO1861)27-(DBCO)10について、手順を例示的に記載する。Cy3-PAMAM-(SO1861)27(0.41mg、4.71nmol)をフリーズドライし、100μLのDMSOに溶解した。DMSOに溶解したDBCO-PEG13-NHSエステル(0.197mg、188nmol)をCy3-PAMAM-SO1861溶液に追加し、混合物を800rpmかつ室温でThermoMixer C(Eppendorf)上で振盪した。3hの振盪後に、反応ミックスをMilliQ水で希釈し、12~14kDaのMWCOを有する再生セルロース膜チューブ(ZelluTrans、Carl Roth)を用いてMilliQ水に対して鋭意に24h透析した。透析後に、Cy3-PAMAM-SO1861-DBCO溶液を、3kDaのMWCOを有するAmicon Ultra 15フィルターによる4,000rpm(15℃)での遠心濾過を用いて濃縮した。コンジュゲートを溶液として冷蔵庫に保存し、アリコートを分析のため取った。収量:0.1mg(22%)。
Cy3-PAMAM-NC-(SO1861)17(0.3mg、4.8nmol)をフリーズドライし、100μLのDMSOに溶解した。DMSOに溶解したDBCO-PEG13-NHSエステル(0.202mg、194nmol)をCy3-PAMAM-NC-SO1861溶液に追加し、混合物を800rpmかつ室温でThermoMixer C(Eppendorf)上で振盪した。3hの振盪後に、反応ミックスをMilliQ水で希釈し、12~14kDaのMWCOを有する再生セルロース膜チューブ(ZelluTrans、Carl Roth)を用いてMilliQ水に対して鋭意に24h透析した。透析後に、Cy3-PAMAM-SO1861-DBCO溶液を、3kDaのMWCOを有するAmicon Ultra 15フィルターによる4,000rpm(15℃)での遠心濾過を用いて濃縮した。コンジュゲートを溶液として冷蔵庫に保存し、アリコートを分析のため取った。収量:0.1mg(22%)。質量分析は、PAMAM分子当たり30個のDBCO部分のコンジュゲート化を指示している。
プラスミドDNA(His-ジアンチン-EGF-pET11d又はHis-ジアンチン-pET11d)[20]を、ケミカルコンピテントEscherichia coli NiCo21(DE3)(New England Biolabs(登録商標),Inc.)にトランスフォーメーションし、50μg/mLアンピシリンを足した3mL溶原培地によって37℃において200rpmで5h成長させた。これらの細菌を用いて、37℃での一晩培養のために、50μg/mLアンピシリンを足した500mL溶原培地に接種した。続いて、培養体積を2Lにスケールアップし、細菌を、0.9という光学密度(A600)まで成長させた。タンパク質発現を、1mMの最終濃度でのイソプロピルβ-D-1-チオガラクトピラノシド(IPTG)の追加によって誘導した。細胞を37℃かつ200rpmでさらに3h成長させた。遠心(5min、5,000g、4℃)後に、細胞ペレットを、20mLのリン酸緩衝食塩水(Ca2+及びMg2+を有するダルベッコリン酸緩衝食塩水(PBS)、pH7.4)に再懸濁し、-20℃で保存した。融解後に、タンパク質を超音波装置(Branson Sonifier 250、G.Heinemann)によって放出した。溶液を遠心し(15,800g、30min、4℃)、20mMイミダゾール濃度に調整した。構築物はN末端Hisタグを含有し、ニッケルニトリロ三酢酸クロマトグラフィー(Ni-NTAアガロース、Qiagen、ヒルデン、ドイツ)により精製した。イミダゾール(20~250mM)による溶出後に、溶出液を、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)(12%)によって分析した。ジアンチン-EGF又はジアンチンを含有する画分を、2Lのキチン結合ドメイン緩衝液(20mMトリス(ヒドロキシメチル)-アミノメタン/HCl、500mM NaCl、1mM EDTA、0.1%Tween-20、pH8.0)に対して4℃で透析した。キチンカラムアフィニティークロマトグラフィーによるさらなる精製が、Ni-NTAアガロースに対する結合活性を有する細菌タンパク質を除去するための用をなした。キチン結合ドメイン緩衝液による溶出後に、画分をSDS-PAGE(12%)によって分析した。ジアンチン-EGF又はジアンチンを含有する画分を、5LのPBSに対して4℃で透析した。精製タンパク質を、Amicon遠心フィルターデバイス(10kDa、Millipore、エシュボルン、ドイツ)により濃縮した。タンパク質濃度をビシンコニン酸アッセイ(Pierce、ロックフォード、USA)によって決定した。
PBS中のジアンチン-EGF(240μg、6.7nmol)溶液を、3kDaのMWCOを有するAmicon Ultra 15フィルター内に置き、4,000rpmかつ4℃で30min、3回遠心した。各サイクル後に、Amiconフィルターに、pH9の0.1M炭酸ナトリウム緩衝液を再充填した。第3の遠心サイクルの後に、体積を遠心により0.5mLまで縮減した。ジアンチン-EGF炭酸ナトリウム溶液を2mL反応チューブ内に置き、10μL DMSOに溶解したAlexa Fluor(商標)488 5-TFP(50μg、56nmol)をタンパク質溶液に追加した。ミックスをThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で80min振盪した。振盪後に、ミックスをセファデックスG25Mサイズ排除カラム(GE Healthcare、PD10カラム)に通した。ジアンチン-EGF-Alexa488コンジュゲートを、pH9の0.1M炭酸ナトリウム緩衝液中の溶液として冷蔵庫に保存し、アリコートを分析のために取った。収量:210μg(85%)。
PBS中のジアンチン(184μg、6.2nmol)溶液を、3kDaのMWCOを有するAmicon Ultra 15フィルター内に置き、4,000rpmかつ4℃で30min、3回遠心した。各サイクル後に、Amiconフィルターに、pH9の0.1M炭酸ナトリウム緩衝液を再充填した。第3の遠心サイクルの後に、体積を遠心により0.5mLまで縮減した。ジアンチン炭酸ナトリウム溶液を2mL反応チューブ内に置き、3.5μL DMSOに溶解したAlexa Fluor(商標)488 5-TFP(16.7μg、19nmol)をタンパク質溶液に追加した。ミックスを、ThermoMixer C(Eppendorf)上で、800rpmかつ室温で80min振盪した。振盪後に、ミックスをセファデックスG25Mサイズ排除カラム(GE Healthcare、PD10カラム)に通した。ジアンチン-Alexa488コンジュゲートを、pH9の0.1M炭酸ナトリウム緩衝液中の溶液として冷蔵庫に保存し、アリコートを分析のために取った。収量:決定されなかった。
MALDI-TOF-MS(図76D)(LPモード):m/z 30.7 kDa([M+H]+,ジアンチン-Alexa488)。
ジアンチン-EGF-Alexa488-S-S-PEG-N3について、手順を例示的に記載する。ジアンチン-EGF-Alexa488(70μg、1.9nmol)炭酸ナトリウム溶液を2mL反応チューブ内に置き、9μL DMSOに溶解したアジド-PEG3-S-S-NHS(120μg、272nmol)をタンパク質溶液に追加した。ミックスを、ThermoMixer C(Eppendorf)上で、800rpmかつ15℃で12h振盪した。振盪後に、反応ミックスをPBSで希釈し、3kDaのMWCOを有するAmicon Ultra 15フィルターを用いて、4,000rpmかつ4℃での遠心濾過によってPBSで洗浄した。
ジアンチン-Alexa488(24.5μg、0.8nmol)炭酸ナトリウム溶液を2mL反応チューブ内に置き、9μLのDMSOに溶解したアジド-PEG3-S-S-NHS(34μg、78nmol)をタンパク質溶液に追加した。ミックスを、ThermoMixer C(Eppendorf)上で、800rpmかつ15℃で12h振盪した。振盪後に、反応ミックスをPBSで希釈し、3kDaのMWCOを有するAmicon Ultra 15フィルターを用いて、4,000rpmかつ4℃での遠心濾過によってPBSで洗浄した。
Cy3-PAMAM-(SO1861)27-DBCOについての手順を例示的に記載する。MilliQ水中のCy3-PAMAM-(SO1861)27-DBCO(17μg、0.184nmol)溶液を、1.5mL反応チューブ内のPBS中のジアンチン-EGF-Alexa488-SS-PEG3-N3(3.6μg、0.089nmol)溶液と混合し、反応ミックスをThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ15℃で2h振盪した。振盪後に、小さいアリコートを、SDS-PAGEによる分析、及びMolecular Imager(登録商標)VersaDoc(商標)MP4000イメージングシステム(Bio-Rad)による蛍光イメージングのために取り出した(図77)。
Cy3-PAMAM(0.19mg、13 nmol)及びSO1861(0.73mg、0.39μmol)を、pH5の200μLの0.1M酢酸緩衝液に別々に溶解した。SO1861及びCy3-PAMAM溶液を混合し、ThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で20min振盪した。20minの振盪後に、NaCNBH3(5mg、81μmol)を振盪反応溶液に追加し、反応混合物がThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で12h振盪することを許した。12hの振盪後に、反応ミックスをMilliQ水で希釈し、12~14kDaのMWCOを有する再生セルロース膜チューブ(ZelluTrans、Carl Roth)を用いてMilliQ水に対して鋭意に24h透析した。透析後に、Cy3-PAMAM-NC-SO1861溶液を、3kDaのMWCOを有するAmicon Ultra 15フィルターによる4,000rpm(15℃)での遠心濾過を用いて濃縮した。コンジュゲートを溶液として冷蔵庫に保存し、アリコートを分析のため取った。収量:決定されなかった。
MALDI-TOF-MS(図78B、C)(LPモード):m/z 88.7 kDa([M+H]+,Cy3-PAMAM-NC-SO1861),49.2 kDa([M+H]2+,Cy3-PAMAM-NC-SO1861)。
SO1861-EMCH(0.13mg、63 nmol)を30μLの脱気済みMilliQ水に溶解した。4μLの脱気済みMilliQ水に溶解したAPS(0.2μg、0.8 nmol)をSO1861-EMCH溶液に追加し、溶液をThermoMixer C(Eppendorf)上に60℃で置いた。それから、TMEDA(cat.、0.5μL)をミックスに追加し、ミックスをThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ60℃で2h振盪した。2h後に、小さいアリコートを質量分析による分析のために取り出した。
配列SESDDAMFCDAMDESDSKを有するカスタムペプチド(0.6mg、0.3μmol)及びSO1861-EMCH(0.8mg、0.39μmol)を、別々に200μLのPBSに溶解した。SO1861-EMCH及びペプチド溶液を混合し、ThermoMixer C(Eppendorf)上で800rpmかつ室温で12h振盪した。振盪後に、小さいアリコートを分析のために取り出した。収量:決定されなかった。
MALDI-TOF-MS(図83B)(RNモード):m/z 4.05 kDa([M+H]-,ペプチド-SO1861),3.92 kDa([M+H]-,ペプチド-SO1730),1.98 kDa([M+H]-,ペプチド),1.86 kDa([M+H]-,SO1861)。
処置後に、細胞を37℃で72hrインキュベーションした後、細胞生存率を、製造者の説明書に従って行われたMTSアッセイによって決定した(CellTiter 96(登録商標)AQueous One Solution細胞増殖アッセイ、Promega)。手短には、MTS溶液を、10%FBS(PAN-Biotech GmbH)を足したフェノールレッドなしのDMEM(PAN-Biotech GmbH)によって20x希釈した。細胞をウェル当たり200μL PBSで1回洗浄し、これの後に100μLの希釈されたMTS溶液をウェル当たり追加した。プレートを37℃でおよそ20~30分間インキュベーションした。続いて、492nmの光学密度をThermo Scientific Multiskan FCプレートリーダー(Thermo Scientific)で測定した。定量化のために、「培地のみ」ウェルのバックグラウンドシグナルを、全ての他のウェルから差し引いた後に、無処置/処置細胞の比を、処置ウェルのバックグラウンド補正済みシグナルに対して無処置ウェルのバックグラウンド補正済みシグナルを割ることによって計算した。
HeLa細胞を、10%ウシ胎児血清(PAN-Biotech GmbH)及び1%ペニシリン/ストレプトマイシン(PAN-Biotech GmbH)を足したDMEM(PAN-Biotech GmbH)によって、500,000c/プレートで、10cmディッシュ上に播種し、90%のコンフルエンシーに達するまで48 hr(5%CO2、37℃)インキュベーションした。次に、細胞を単一細胞へとトリプシン処理した(TryplE Express、Gibco Thermo Scientific)。0.75×106細胞を15mLファルコンチューブに移し、遠心した(1400rpm、3min)。細胞ペレットを沈めたまま、上清を捨てた。ペレットを、ボルテックスシェーカー上でFalconチューブを穏やかにタップすることにより解離させ、細胞を4mLの冷PBS(Mg2+及びCa2+不含、2%FBS)で洗浄した。洗浄後に、細胞を3mLの冷PBS(Mg2+及びCa2+不含、2%FBS)に再懸濁し、3つの丸底FACSチューブに等しく分割した(1mL/チューブ)。細胞を再び遠心し、200μLの冷PBS(Mg2+及びCa2+不含、2%FBS)、又は195μLの冷PBS(Mg2+及びCa2+不含、2%FBS)中に5μL抗体を含有する200μLの抗体溶液に再懸濁した。APCマウスIgG1κアイソタイプCtrl FC(#400122、Biolegend)をアイソタイプ対照として用い、APC抗ヒトEGFR(#352906、Biolegend)を用いて、EGFR受容体を染色した。HER2:APC抗ヒトCD340(erbB2/HER-2)(324408、Biolegend)。CD71:APC抗ヒトCD71 #334108、Biolegend。サンプルを、チューブローラーミキサー上で4℃において30minインキュベーションした。その後で、細胞を冷PBS(Mg2+及びCa2+不含、2%FBS)で3x洗浄し、PBS中の2%PFA溶液を用いて室温で20min固定した。細胞を冷PBSで2x洗浄し、FACS分析のために250~350μLの冷PBSに再懸濁した。サンプルを、BD FACSCanto IIフローサイトメトリーシステム(BD Biosciences)及びFlowJoソフトウェアによって分析した。
SO1861分子へのコンジュゲート化反応のための利用可能な化学基を考えて、4つの化学基を同定した。糖残基のアルコール及びジオール、トリテルペノイドバックボーン上のアルデヒド基、糖残基の1つの上のカルボン酸(グルクロン酸)、及びトリテルペノイドバックボーン上のアルケン基が、図62において強調されている。
Weng,A.;Thakur,M.;Beceren-Braun,F.;Bachran,D.;Bachran,C.;Riese,S.B.;Jenett-Siems,K.;Gilabert-Oriol,R.;Melzig,M.F.;Fuchs,H.The toxin component of targetedAnti-tumor toxins determines their efficacy increase by saponins.Molecular oncology 2012,6,323-332.saponinumAlbum inA synergistic way.Journal of immunotherapy 2009,32,713-725.
Sama,S.;Jerz,G.;Schmieder,P.;Joseph,J.F.;Melzig,M.F.;Weng,A.Plant derived triterpenes from Gypsophila elegans M.Bieb.enable non-toxic delivery of gene loaded nanoplexes.Journal of Biotechnology 2018,284,131-139.
Kolb,H.C.;Finn,M.G.;Sharpless,K.B.Click Chemistry:Diverse Chemical Function fromA Few Good Reactions.Angewandte Chemie 2001,40,2004-2021.
Bird,R.E.;Hardmann,K.D.;Jacobson,J.W.;Johnson,S.;Kaufman,B.M.;Lee,S.M.;Lee,T.;Pope,S.H.;Riordan,G.S.;Whitlow,M.Single-chainAntigen-binding proteins.Science 1988,242,423-426.
Y Zhang,Z Qu,S Kim,V Shi,B Liao1,P Kraft,R Bandaru,Y Wu,LM GreenbergerAnd ID Horak,Down-modulation of cancer targets using locked nucleicAcid(LNA)-basedAntisense oligonucleotides without transfection,Gene Therapy(2011)18,326-333.
Claims (48)
- 第1の細胞表面分子の第1のエピトープに結合するための第1の結合部位を含む第1のタンパク質性分子であって、第1のタンパク質性分子が、少なくとも1つのリンカーを介して及び/又はオリゴマー若しくはポリマー骨格を介して前記第1のタンパク質性分子のアミノ酸残基に共有結合された或いは直接的に前記第1のタンパク質性分子のアミノ酸残基に共有結合された少なくとも1つのサポニンを提供される、第1のタンパク質性分子。
- 第1の結合部位が、免疫グロブリン、又は免疫グロブリンの少なくとも1つの結合ドメイン及び/若しくは免疫グロブリンの少なくとも1つの結合フラグメント、例えば抗体、IgG、Vhhドメイン若しくはVhドメインを含むか若しくはそれからなる分子、Fab、scFv、Fv、dAb、F(ab)2、Fcabフラグメントを含むか又はそれからなり、並びに/或いは、EGF又はサイトカインなどの細胞表面分子に結合するための少なくとも1つのリガンドを含むか又はそれからなる、請求項1に記載の第1のタンパク質性分子。
- 第1の細胞表面分子の第1のエピトープが、第1の腫瘍細胞表面分子の腫瘍細胞特異的な第1のエピトープ、より好ましくは腫瘍細胞上に特異的に存在する第1の腫瘍細胞表面受容体の腫瘍細胞特異的な第1のエピトープである、請求項1又は2に記載の第1のタンパク質性分子。
- 少なくとも1つのサポニンが、トリテルペノイドサポニン、並びに/或いは、位置C-23にアルデヒド官能基を有しかつ任意にサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてグルクロン酸官能基を含む12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニン、並びに/或いは、Gypsophila種及び/又はSaponaria種及び/又はAgrostemma種及び/又はQuillaja種、例えばQuillaja saponariaから単離されるサポニンである、請求項1~3のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- 少なくとも1つのサポニンが、単一の特定のサポニンであるか又は2つ以上の異なるサポニンの混合物、例えば、表A1又はスキームIのサポニン、SO1861、SA1657、GE1741、SA1641、QS-21、QS-21A、QS-21A-api、QS-21A-xyl、QS-21B、QS-21 B-api、QS-21 B-xyl、QS-7-xyl、QS-7-api、QS-17-api、QS-17-xyl、QS1861、QS1862、キラヤサポニン、サポニナム・アルブム(SaponinumAlbum)、QS-18、Quil-A、Gyp1、ギプソシド(gypsoside)A、AG1、AG2、SO1542、SO1584、SO1658、SO1674、SO1832の1つ以上、又はそれらの立体異性体(stereomer)のいずれか及び/若しくはそれらのいずれかの組み合わせであり、好ましくは、サポニンは、SO1861及び/又はGE1741及び/又はSA1641及び/又はQS-21、並びに/或いはキラヤ酸アグリコンコア、C-3ベータ-OH基のGal-(1→2)-[Xyl-(1→3)]-GlcA炭水化物置換基、及びC-28-OH基のGlc-(1→3)-Xyl-(1→4)-Rha-(1→2)-[Xyl-(1→3)-4-OAc-Qui-(1→4)]-Fuc炭水化物置換基を有するサポニンであり、並びに/或いは、3-O-ベータ-D-ガラクトピラノシル-(1→2)-[ベータ-D-キシロピラノシル-(1→3)]-ベータ-D-グルクロノピラノシルキラヤ酸28-O-ベータ-D-グルコピラノシル-(1→3)-ベータ-D-キシロピラノシル-(1→4)-アルファ-L-ラムノピラノシル-(1→2)-[ベータ-D-キシロピラノシル-(1→3)-4-OAc-ベータ-D-キノボピラノシル-(1→4)]-ベータ-D-フコピラノシドであり、より好ましくは、サポニンはSO1861及び/又はQS-21である、請求項1~4のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- 少なくとも1つのサポニンがビスデスモシド型サポニンであり、少なくとも1.500ダルトンの分子質量を有し、C-23位にアルデヒド基と任意にC-16位にヒドロキシル基とを含有するオレアナン型トリテルペンを含み、C-3位に第1の分岐炭水化物側鎖を有し、この第1の分岐炭水化物側鎖は任意にグルクロン酸を含有し、サポニンは、C-28位に第2の分岐炭水化物側鎖を有するエステル基を含有し、この第2の分岐炭水化物鎖は好ましくは少なくとも4つの炭水化物単位を含み、任意に少なくとも1つのアセチル残基、例えば2つのアセチル残基を含有し、及び/又は任意にデオキシ炭水化物を含み、及び/又は任意にキノボースを含み、及び/又は任意にグルコースを含み、及び/又は任意に4-メトキシケイ皮酸を含み、及び/又は任意に5-O-[5-O-Ara/Api-3,5-ジヒドロキシ-6-メチル-オクタノイル]-3,5-ジヒドロキシ-6-メチル-オクタン酸を含み、及び/又は任意に5-O-[5-O-Rha-(1→2)-Ara/Api-3,5-ジヒドロキシ-6-メチル-オクタノイル]-3,5-ジヒドロキシ-6-メチル-オクタン酸を含み、エステル結合を介して炭水化物に結合されているか、或いは、少なくとも1つのサポニンは、QS-21、又はQS-21A、QS-21A-api、QS-21A-xyl、QS-21B、QS-21 B-api、QS-21 B-xyl、QS-7-xyl、QS-7-api、QS-17-api、QS-17-xyl、QS-18、QS-1861、プロトン化QS1861(QS1862)、Quil-Aのいずれか1つ以上である、請求項1~5のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- 少なくとも1つのサポニンが、位置C-23にアルデヒド官能基を有する12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニンであり、少なくとも1つのサポニンは、第1のタンパク質性分子のアミノ酸残基に、サポニン上のアルデヒド官能基、好ましくは位置C-23の前記アルデヒド官能基を介して、好ましくは少なくとも1つのリンカーを介して、より好ましくは少なくとも1つの切断可能なリンカーを介して共有結合的にカップリングされ、アミノ酸残基は、好ましくはシステイン及びリジンから選択される、請求項1~6のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- 少なくとも1つのサポニンが、位置C-23にアルデヒド官能基を有しかつサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてグルクロン酸官能基を含む12,13-デヒドロオレアナンの型に属するビスデスモシド型トリテルペンサポニンであり、少なくとも1つのサポニンは、第1のタンパク質性分子のアミノ酸残基に、サポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてのグルクロン酸官能基を介して、好ましくは少なくとも1つのリンカーを介して、共有結合的にカップリングされ、アミノ酸残基は、好ましくはシステイン及びリジンから選択される、請求項1~7のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- 少なくとも1つのサポニンの位置C-23のアルデヒド官能基が、リンカーN-ε-マレイミドカプロ酸ヒドラジドに共有結合的にカップリングされ、このリンカーが、チオ-エーテル結合を介して、第1のタンパク質性分子上のスルフヒドリル基、例えばシステインのスルフヒドリル基に共有結合的にカップリングされる、請求項4~8のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- 少なくとも1つのサポニンのC-3ベータ-OH基の炭水化物置換基としてのグルクロン酸官能基が、リンカーの1-[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]-1H-1,2,3-トリアゾロ[4,5-b]ピリジニウム3-オキシドヘキサフルオロホスフェートに共有結合的にカップリングされ、このリンカーは、アミド結合を介して、第1のタンパク質性分子上のアミン基、例えば第1のタンパク質性分子のリジン又はN末端のアミン基に共有結合的にカップリングされる、請求項4~9のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- 第1のタンパク質性分子の第1の結合部位が結合する第1の細胞表面分子の第1のエピトープが、腫瘍細胞特異的受容体の腫瘍細胞特異的な第1のエピトープであり、好ましくは、CD71、CA125、EpCAM(17-1A)、CD52、CEA、CD44v6、FAP、EGF-IR、インテグリン、シンデカン-1、血管インテグリンアルファ-Vベータ-3、HER2、EGFR、CD20、CD22、葉酸受容体1、CD146、CD56、CD19、CD138、CD27L受容体、PSMA、CanAg、インテグリン-アルファV、CA6、CD33、メソテリン、Cripto、CD3、CD30、CD239、CD70、CD123、CD352、DLL3、CD25、エフリンA4、MUC1、Trop2、CEACAM5、CEACAM6、HER3、CD74、PTK7、Notch3、FGF2、C4.4A、FLT3、CD38、FGFR3、CD7、PD-L1、CTLA4、CD52、PDGFRA、VEGFR1、VEGFR2から選択され、より好ましくはCD71、EGFR、HER2から選択される、請求項1~10のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- 腫瘍細胞特異的な第1のエピトープ、第1の腫瘍細胞表面分子、又は第1の腫瘍細胞特異的受容体が、第1のエピトープ又は第1の分子又は第1の受容体への請求項1~11のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子の結合後に腫瘍細胞によって内在化される第1のエピトープ又は第1の分子又は第1の受容体であり、好ましくは、第1のタンパク質性分子は、第1のエピトープを含む細胞表面分子、腫瘍細胞表面分子、又は腫瘍細胞特異的受容体に結合したときに、例えばエンドサイトーシスを介した腫瘍細胞受容体により媒介される内在化又は例えばエンドサイトーシスを介した腫瘍細胞表面分子により媒介される内在化に付される、請求項3又は11に記載の第1のタンパク質性分子。
- 第1のタンパク質性分子の第1の結合部位が、セツキシマブ、ダラツムマブ、ゲムツズマブ、トラスツズマブ、パニツムマブ、ブレンツキシマブ、イノツズマブ、モキセツモマブ、ポラツズマブ、オビヌツズマブ、IgG型のOKT-9抗CD71モノクローナル抗体、ペルツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、ハーセプチン、アレムツズマブ、ピナツズマブ、OKT-10抗CD38モノクローナル抗体、表A2又は表A3又は表A4の抗体、好ましくはセツキシマブ又はトラスツズマブ又はOKT-9、或いはその少なくとも1つの腫瘍細胞受容体結合フラグメント及び/又はその少なくとも1つの腫瘍細胞受容体結合ドメイン、好ましくはその少なくとも1つの腫瘍細胞特異的受容体結合フラグメント及び/又はその少なくとも1つの腫瘍細胞特異的受容体結合ドメインのいずれか1つを含むか或いはそれからなる、請求項11又は12に記載の第1のタンパク質性分子。
- 治療薬の組み合わせが:
(a)請求項1~13のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子及び任意に薬学的に許容される賦形剤を含む第1の医薬組成物と;
(b)第1のタンパク質性分子とは異なる第2のタンパク質性分子を含む第2の医薬組成物と;を含み、第2のタンパク質性分子は、第1の細胞表面分子とは異なる第2の細胞表面分子の第2のエピトープに結合するための第2の結合部位を含み、かつエフェクター部分を含み、第2の医薬組成物は、任意にさらに薬学的に許容される賦形剤を含み、第2のエピトープは第1のエピトープとは異なる、治療薬の組み合わせ。 - 治療薬の組み合わせが:
(a)請求項1~13のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子を含む請求項14に記載の第1の医薬組成物と(第1の細胞表面分子上の第1のエピトープは、第1の腫瘍細胞特異的表面分子上の腫瘍細胞特異的な第1のエピトープ、好ましくは、腫瘍細胞に特異的に存在する第1の細胞表面受容体上の腫瘍細胞特異的な第1のエピトープである);
(b)請求項14に記載の第2の医薬組成物と;を含み、第2の細胞表面分子は、第1の腫瘍細胞特異的表面分子とは異なる第2の腫瘍細胞特異的表面分子、好ましくは、前記腫瘍細胞に特異的に存在する第1の細胞表面受容体とは異なる腫瘍細胞に特異的に存在する第2の細胞表面受容体であり、第2のエピトープは、腫瘍細胞特異的な第2のエピトープである、請求項14に記載の治療薬の組み合わせ。 - 治療薬の組み合わせが:
(a)第1の細胞表面分子上の第1のエピトープに結合するための第1の結合部位を含む請求項1~13のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子を含む請求項14又は15に記載の第1の医薬組成物と(第1の医薬組成物は任意にさらに薬学的に許容される賦形剤を含む);
(b)第3のタンパク質性分子を含む第3の医薬組成物と;を含み、第3のタンパク質性分子は(a)の細胞表面分子上の第1のエピトープに結合するための第1の結合部位及びエフェクター部分を含み、第3の医薬組成物は任意にさらに薬学的に許容される賦形剤を含み、
第1のタンパク質性分子の第1の結合部位、及び第3のタンパク質性分子の第1の結合部位は同じであり、第1のタンパク質性分子が結合し得る第1の細胞表面分子上の第1のエピトープ及び第1の細胞表面分子、並びに第3のタンパク質性分子が結合し得る第1の細胞表面分子上の第1のエピトープ及び第1の細胞表面分子は同じである、治療薬の組み合わせ。 - 治療薬の組み合わせが:
(a)請求項16に記載の第1の医薬組成物と;
(b)請求項16に記載の第3の医薬組成物と;を含み、
第1の細胞表面分子は腫瘍細胞表面上に発現され、好ましくは、第1の細胞表面分子は腫瘍細胞特異的表面分子であり、好ましくは、第1のエピトープは第1の腫瘍細胞特異的エピトープである、治療薬の組み合わせ。 - 第1の細胞表面分子上の第1のエピトープに結合するための第1の結合部位が、腫瘍細胞に特異的に存在する第1の細胞表面受容体上の腫瘍細胞特異的な第1のエピトープの結合部位である、請求項1~17のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子又は請求項14~17のいずれか1項に記載の治療薬の組み合わせ。
- 第2のタンパク質性分子の第2の結合部位及び/又は第3のタンパク質性分子の第1の結合部位が、免疫グロブリン、免疫グロブリンの少なくとも1つの結合ドメイン、及び/又は免疫グロブリンの少なくとも1つの結合フラグメント、例えば抗体、IgG、Vhhドメイン若しくはVhドメインを含むか若しくはそれからなる分子、Fab、scFv、Fv、dAb、F(ab)2、Fcabフラグメントを含むか又はそれからなり、並びに/或いは、EGF又はサイトカインなどの細胞表面分子に結合するための少なくとも1つのリガンドを含むか又はそれからなる、請求項14~18のいずれか1項に記載の治療薬の組み合わせ。
- 第2のエピトープに結合するための第2のタンパク質性分子の第2の結合部位が、腫瘍細胞に特異的に存在する第2の細胞表面受容体上の腫瘍細胞特異的な第2のエピトープの第2の結合部位であり、第2の結合部位は、第1の結合部位とは異なる、請求項14又は15又は18のいずれか1項に従属するときの請求項14、15、又は18、19のいずれか1項に記載の治療薬の組み合わせ。
- 前記第1及び第2のタンパク質性分子が、それぞれ第1及び第2の腫瘍細胞特異的受容体上の第1及び第2の腫瘍細胞特異的エピトープに結合するためのそれぞれ第1及び第2の結合部位を含み、受容体は異なり、かつ同じ腫瘍細胞に存在し、第1及び第2の結合部位は異なり、第1及び第2の腫瘍細胞特異的エピトープは異なる、請求項1~20のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子、又は請求項14若しくは15若しくは18若しくは19のいずれか1項に従属するときの請求項14、15、若しくは18、19、20のいずれか1項に記載の治療薬の組み合わせ。
- 前記第1及び第3のタンパク質性分子が、第1の腫瘍細胞特異的受容体上の第1の腫瘍細胞特異的エピトープに結合するための同じ第1の結合部位を含む、請求項1~20のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子、又は請求項16~19のいずれか1項に従属するときの請求項16、17、若しくは18~20のいずれか1項に記載の治療薬の組み合わせ。
- 第1の受容体及び/又は第2の受容体が、CD71、CA125、EpCAM(17-1A)、CD52、CEA、CD44v6、FAP、EGF-IR、インテグリン、シンデカン-1、血管インテグリンアルファ-Vベータ-3、HER2、EGFR、CD20、CD22、葉酸受容体1、CD146、CD56、CD19、CD138、CD27L受容体、PSMA、CanAg、インテグリン-アルファV、CA6、CD33、メソテリン、Cripto、CD3、CD30、CD239、CD70、CD123、CD352、DLL3、CD25、エフリンA4、MUC1、Trop2、CEACAM5、CEACAM6、HER3、CD74、PTK7、Notch3、FGF2、C4.4A、FLT3、CD38、FGFR3、CD7、PD-L1、CTLA4、CD52、PDGFRA、VEGFR1、VEGFR2から選択され、好ましくはCD71、EGFR、及びHER2から選択される、請求項21又は22に記載の第1のタンパク質性分子又は治療薬の組み合わせ。
- 第1及び第2の腫瘍細胞特異的受容体が、請求項1~21若しくは23のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子及び/又は請求項14、15、若しくは18~21のいずれか1項に従属するときの請求項14、15、若しくは18~21若しくは23のいずれか1項に記載の第2のタンパク質性分子に結合した後に、腫瘍細胞によって内在化され、好ましくは、それぞれ第1及び第2の腫瘍細胞特異的受容体への第1のタンパク質性分子及び/又は第2のタンパク質性分子の結合は、第1のタンパク質性分子と第1の腫瘍細胞特異的受容体との複合体の及び第2のタンパク質性分子と第2の腫瘍細胞特異的受容体との複合体の例えばエンドサイトーシスを介した腫瘍細胞受容体により媒介される内在化をもたらす、請求項21若しくは23に記載の第1のタンパク質性分子及び/又は請求項21若しくは23に記載の治療薬の組み合わせ。
- 第1の腫瘍細胞受容体、好ましくは第1の腫瘍細胞特異的受容体が、請求項1~20、22、若しくは23のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子に結合した後に及び/又は請求項16~20のいずれか1項に従属するときの請求項16、17、若しくは18~20、22のいずれか1項に記載の第3のタンパク質性分子に結合した後に、腫瘍細胞によって内在化され、好ましくは、第1の腫瘍細胞特異的受容体などの第1の腫瘍細胞受容体への第1のタンパク質性分子及び/又は第3のタンパク質性分子の結合には、第1のタンパク質性分子と第1の腫瘍細胞受容体との複合体の及び第3のタンパク質性分子と第1の腫瘍細胞受容体との複合体の例えばエンドサイトーシスを介した腫瘍細胞受容体により媒介される内在化が後続する、請求項22若しくは23に記載の治療薬の組み合わせ又は請求項22若しくは23に記載の第1の医薬組成物。
- 第1の結合部位及び/又は第2の結合部位が、モノクローナル抗体又はその少なくとも1つの細胞表面分子結合フラグメント及び/若しくはドメインであるか又はそれを含み、好ましくは、セツキシマブ、ダラツムマブ、ゲムツズマブ、トラスツズマブ、パニツムマブ、ブレンツキシマブ、イノツズマブ、モキセツモマブ、ポラツズマブ、オビヌツズマブ、IgG型のOKT-9抗CD71モノクローナル抗体、ペルツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、ハーセプチン、アレムツズマブ、ピナツズマブ、OKT-10抗CD38モノクローナル抗体、及び表A4の抗体、好ましくはセツキシマブ又はトラスツズマブ又はOKT-9、或いはその少なくとも1つの細胞表面分子結合フラグメント又はドメインのいずれか1つを含むか又はそれからなり、但し、第1のタンパク質性分子の第1の結合部位は、第2のタンパク質性分子の第2の結合部位とは異なる、請求項1~15若しくは18~21のいずれか1項に従属するときの請求項1~15若しくは18~21若しくは24のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子、及び/又は請求項14、15、18~21、若しくは24のいずれか1項に記載の治療薬の組み合わせ。
- 第1のタンパク質性分子及び第3のタンパク質性分子の第1の結合部位が、モノクローナル抗体、又はその少なくとも1つの細胞表面分子結合ドメイン及び/若しくはフラグメントを含み、好ましくは、セツキシマブ、ダラツムマブ、ゲムツズマブ、トラスツズマブ、パニツムマブ、ブレンツキシマブ、イノツズマブ、モキセツモマブ、ポラツズマブ、オビヌツズマブ、IgG型のOKT-9抗CD71モノクローナル抗体、ペルツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、ハーセプチン、アレムツズマブ、ピナツズマブ、OKT-10抗CD38モノクローナル抗体、表A2又は表A3又は表A4の抗体、好ましくはセツキシマブ又はトラスツズマブ又はOKT-9、或いはその少なくとも1つの細胞表面分子結合フラグメント及び/又はドメインのいずれか1つを含むか或いはそれからなり、但し、第1のタンパク質性分子の第1の結合部位は、第3のタンパク質性分子の第1の結合部位と同じである、請求項16~20のいずれか1項に従属するときの請求項16、17、若しくは18~20、22のいずれか1項に記載の治療薬の組み合わせ、又は請求項16~20のいずれか1項に従属するときの請求項16、17、若しくは18~20、22のいずれか1項に記載の第1の医薬組成物。
- 第2のタンパク質性分子の第2の結合部位及び/又は第3のタンパク質性分子の第1の結合部位が、モノクローナル抗体、又はその少なくとも1つの細胞表面分子結合フラグメント若しくはドメインであるか又はそれを含み、好ましくは、ゲムツズマブオゾガマイシン、ブレンツキシマブベドチン、トラスツズマブエムタンシン、イノツズマブオゾガマイシン、モキセツモマブパスドトクス、及びポラツズマブベドチン、並びに表A2及び表A3の抗体-薬物コンジュゲートのいずれか1つを含むか又はそれからなる、請求項14~27のいずれか1項に記載の治療薬の組み合わせ。
- 第2のタンパク質性分子に及び/又は第3のタンパク質性分子に含まれるエフェクター部分が、オリゴヌクレオチド、核酸、ゼノ核酸のいずれか1つ以上を含むか又はそれからなり、好ましくは、ベクター、遺伝子、細胞自殺を誘導するトランスジーン、デオキシリボ核酸(DNA)、リボ核酸(RNA)、アンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO、AON)、短鎖干渉RNA(siRNA)、マイクロRNA(miRNA)、DNAアプタマー、RNAアプタマー、mRNA、ミニサークルDNA、ペプチド核酸(PNA)、ホスホロアミダートモルフォリーノオリゴマー(PMO)、ロックド核酸(LNA)、ブリッジ型核酸(BNA)、2’-デオキシ-2’-フルオロアラビノ核酸(FANA)、2’-O-メトキシエチル-RNA(MOE)、2’-O,4’-アミノエチレンブリッジ型核酸、3’-フルオロヘキシトール核酸(FHNA)、プラスミド、グリコール核酸(GNA)、及びトレオース核酸(TNA)、又はその誘導体、より好ましくはBNA、例えばHSP27タンパク質発現をサイレンシングするためのBNAのいずれか1つ以上から選択される、請求項14~28のいずれか1項に記載の治療薬の組み合わせ。
- 第2のタンパク質性分子に及び/又は第3のタンパク質性分子に含まれるエフェクター部分が、少なくとも1つのタンパク質性分子を含むか又はそれからなり、好ましくは、ペプチド、タンパク質、酵素、例えばウレアーゼ及びCreリコンビナーゼ、リボソーム不活性化タンパク質、タンパク質性毒素のいずれか1つ以上から選択され、より好ましくは、表A5から選択されるタンパク質毒素、及び/又はウイルス毒素、例えばアポプチン、細菌毒素、例えば志賀毒素、志賀毒素様毒素、PseudomonasAeruginosa外毒素(PE)若しくはPEの外毒素A、全長若しくは短縮型ジフテリア毒素(DT)、コレラ毒素;真菌毒素、例えばアルファサルシン;リボソーム不活性化タンパク質及び2型リボソーム不活性化タンパク質のA鎖を包含する植物毒素、例えばジアンチン、例えばジアンチン-30若しくはジアンチン-32、サポリン、例えばサポリン-S3若しくはサポリン-S6、ブーガニン若しくはブーガニンの脱免疫化誘導体デブーガニン、志賀毒素様毒素A、ポークウィード抗ウイルスタンパク質、リシン、リシンA鎖、モデシン、モデシンA鎖、アブリン、アブリンA鎖、ボルケンシン、ボルケンシンA鎖、ビスクミン、ビスクミンA鎖;又は動物若しくはヒト毒素、例えばカエルRNase、又はヒトからのグランザイムB若しくはアンギオゲニン、又はそのいずれかのフラグメント若しくは誘導体のいずれか1つ以上から選択され;好ましくは、タンパク質毒素はジアンチン及び/又はサポリンである、請求項14~29のいずれか1項に記載の治療薬の組み合わせ。
- 第2のタンパク質性分子に及び/又は第3のタンパク質性分子に含まれるエフェクター分子が少なくとも1つのペイロードを含むか又はそれからなり、好ましくは、リボソームを標的化する毒素、伸長因子を標的化する毒素、チューブリンを標的化する毒素、DNAを標的化する毒素、及びRNAを標的化する毒素のいずれか1つ以上、より好ましくは、エムタンシン、パスドトクス、メイタンシノイド誘導体DM1、メイタンシノイド誘導体DM4、モノメチルアウリスタチンE(MMAE、ベドチン)、モノメチルアウリスタチンF(MMAF、マホドチン)、カリケアミシン、N-アセチル-γ-カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)二量体、ベンゾジアゼピン、CC-1065アナログ、デュオカルマイシン、ドキソルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、シクロホスファミド、エトポシド、ドセタキセル、5-フルオロウラシル(5-FU)、ミトキサントロン、チューブリシン、インドリノベンゾジアゼピン、AZ13599185、クリプトフィシン、リゾキシン、メトトレキサート、アントラサイクリン、カンプトテシンアナログ、SN-38、DX-8951f、エキサテカンメシレート、PseudomonasAeruginosa外毒素の短縮型形態(PE38)、デュオカルマイシン誘導体、アマニチン、α-アマニチン、スプライソスタチン、タイランスタチン、オゾガマイシン、テシリン、アンバースタチン269、及びソラブタンシンのいずれか1つ以上、又はその誘導体から選択される、請求項14~30のいずれか1項に記載の治療薬の組み合わせ。
- 第1のタンパク質性分子が、1つよりも多くのサポニン、好ましくは2、3、4、5、6、8、10、16、32、64、又は1~100個のサポニン、或いはその間のいずれかの数のサポニン、例えば7、9、12個のサポニンを含み、直接的に第1のタンパク質性分子のアミノ酸残基に、好ましくはシステインに及び/又はリジンに共有結合され、並びに/或いは、少なくとも1つのリンカーを介して及び/又は少なくとも1つの切断可能なリンカーを介して及び/又は少なくとも1つのポリマー若しくはオリゴマー骨格、好ましくはかかる骨格の1~8つ若しくはかかる骨格の2~4つを介して共有結合され、少なくとも1つの骨格は、任意にデンドロンに基づき、1~32個のサポニン、例えば、2、3、4、5、6、8、10、16、32個のサポニン、或いはその間のいずれかの数のサポニン、例えば7、9、12個のサポニンは、少なくとも1つの骨格に共有結合される、請求項1~31のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- 少なくとも1つのリンカーが、非切断可能なリンカー又は切断可能なリンカーであり、切断可能なリンカーは、サポニンに結合されるときに、例えば酸性条件、還元的条件、酵素的条件、又は光誘導性条件下で切断を受け、好ましくは、切断可能なリンカーは、サポニンに結合されるときに、酸性条件下で切断を受けるヒドラゾン結合若しくはヒドラジド結合を含み、及び/又は、タンパク質分解、例えばカテプシンBによるタンパク質分解に感受性の結合を含み、及び/又は、還元的条件下における切断に感受性の結合、例えばジスルフィド結合である、請求項7~32のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- 切断可能なリンカーがサポニンに結合されるときに、切断可能なリンカーが、哺乳類細胞、好ましくはヒト細胞のエンドソーム及び/又はリソソームに存在する酸性条件下において、好ましくはpH4.0~6.5で、より好ましくはpH≦5.5で、インビボでの切断を受ける、請求項7~33のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- オリゴマー又はポリマー骨格が、ポリマー又はオリゴマー構造を含み、化学基、前記第1のタンパク質性分子のアミノ酸残基への骨格の共有結合的カップリングのための化学基を含む、請求項1~34のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- 少なくとも1つのサポニンが、オリゴマー又はポリマー骨格のポリマー又はオリゴマー構造に、請求項32~34のいずれか1項に記載の少なくとも1つの切断可能なリンカーを介して共有結合される、請求項1~35のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- 前記第1のタンパク質性分子のアミノ酸残基へのオリゴマー又はポリマー骨格の共有結合的カップリングのためのオリゴマー又はポリマー骨格の化学基が、クリックケミストリー基であり、好ましくは、テトラジン、アジド、アルケン、若しくはアルキン、又はこれらの基の環状誘導体から選択され、より好ましくは、前記化学基はアジドである、請求項1~36のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- オリゴマー又はポリマー骨格のポリマー又はオリゴマー構造が、直鎖、分岐、及び/若しくは環状ポリマー、オリゴマー、デンドリマー、デンドロン、デンドロン化ポリマー、デンドロン化オリゴマー、DNA、ポリペプチド、ポリリジン、ポリエチレングリコール、又はこれらのポリマー若しくはオリゴマー構造の集合体を含み、この集合体が、好ましくは共有結合的な架橋によって組み上げられる、請求項1~37のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子。
- 請求項1~38のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子及び請求項14、15、又は18~38のいずれか1項に記載の第2のタンパク質性分子を含む組成物。
- 請求項1~38のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子及び請求項16~38のいずれか1項に記載の第3のタンパク質性分子を含む組成物。
- 第2のタンパク質性分子に又は第3のタンパク質性分子に含まれるエフェクター部分が、請求項29に記載のエフェクター部分のいずれか1つ、好ましくはBNAである、請求項39又は40に記載の組成物。
- 請求項1~41のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子と、好ましくはベクター、遺伝子、細胞自殺を誘導するトランスジーン、デオキシリボ核酸(DNA)、リボ核酸(RNA)、アンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO、AON)、短鎖干渉RNA(siRNA)、マイクロRNA(miRNA)、DNAアプタマー、RNAアプタマー、mRNA、ミニサークルDNA、ペプチド核酸(PNA)、ホスホロアミダートモルフォリーノオリゴマー(PMO)、ロックド核酸(LNA)、ブリッジ型核酸(BNA)、2’-デオキシ-2’-フルオロアラビノ核酸(FANA)、2’-O-メトキシエチル-RNA(MOE)、2’-O,4’-アミノエチレンブリッジ型核酸、3’-フルオロヘキシトール核酸(FHNA)、プラスミド、グリコール核酸(GNA)、及びトレオース核酸(TNA)、又はその誘導体、より好ましくはBNA、例えばHSP27タンパク質発現をサイレンシングするためのBNAの少なくとも1つから選択されるオリゴヌクレオチド、核酸、及びゼノ核酸のいずれか1つ以上とを含む、組成物。
- 請求項1~42のいずれか1項に記載の第1のタンパク質性分子及びエフェクター部分を含む、抗体-薬物コンジュゲート又はリガンド-薬物コンジュゲート。
- 抗体が、CD71、CA125、EpCAM(17-1A)、CD52、CEA、CD44v6、FAP、EGF-IR、インテグリン、シンデカン-1、血管インテグリンアルファ-Vベータ-3、HER2、EGFR、CD20、CD22、葉酸受容体1、CD146、CD56、CD19、CD138、CD27L受容体、PSMA、CanAg、インテグリン-アルファV、CA6、CD33、メソテリン、Cripto、CD3、CD30、CD239、CD70、CD123、CD352、DLL3、CD25、エフリンA4、MUC1、Trop2、CEACAM5、CEACAM6、HER3、CD74、PTK7、Notch3、FGF2、C4.4A、FLT3、CD38、FGFR3、CD7、PD-L1、CTLA4、CD52、PDGFRA、VEGFR1、VEGFR2、好ましくはCD71、HER2、EGFRのいずれか1つに結合し得、並びに/或いは、セツキシマブ、ダラツムマブ、ゲムツズマブ、トラスツズマブ、パニツムマブ、ブレンツキシマブ、イノツズマブ、モキセツモマブ、ポラツズマブ、オビヌツズマブ、IgG型のOKT-9抗CD71モノクローナル抗体、ペルツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、ハーセプチン、アレムツズマブ、ピナツズマブ、OKT-10抗CD38モノクローナル抗体、表A2又は表A3又は表A4の抗体、好ましくはセツキシマブ又はトラスツズマブ又はOKT-9、或いはその少なくとも1つの腫瘍細胞受容体結合フラグメント及び/又はその少なくとも1つの腫瘍細胞受容体結合ドメインのいずれか1つであるか又はそれを含み、並びに/或いは、抗体-薬物コンジュゲートは、ゲムツズマブオゾガマイシン、ブレンツキシマブベドチン、トラスツズマブエムタンシン、イノツズマブオゾガマイシン、モキセツモマブパスドトクス、及びポラツズマブベドチン、並びに表A2及び表A3の抗体-薬物コンジュゲートのいずれか1つを含み、或いは、リガンド-薬物コンジュゲートは、EGF又はサイトカインなどの細胞表面分子に結合するための少なくとも1つのリガンドを含む、請求項43に記載の抗体-薬物コンジュゲート又はリガンド-薬物コンジュゲート。
- エフェクター部分が、請求項29~31に記載のエフェクター部分のいずれか1つ以上である、請求項43又は44に記載の抗体-薬物コンジュゲート又はリガンド-薬物コンジュゲート。
- 請求項39~42のいずれか1項に記載の組成物又は請求項43~45のいずれか1項に記載の抗体-薬物コンジュゲート又は請求項43~45のいずれか1項に記載のリガンド-薬物コンジュゲートを含み、かつ任意にさらに薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
- 医薬として使用するための、請求項14~38のいずれか1項に記載の治療薬の組み合わせ、又は請求項39~42のいずれか1項に記載の組成物、又は請求項43~45のいずれか1項に記載の抗体-薬物コンジュゲート若しくはリガンド-薬物コンジュゲート、又は請求項46に記載の医薬組成物。
- 癌又は自己免疫疾患の処置又は防止において使用するための、請求項14~38のいずれか1項に記載の治療薬の組み合わせ、又は請求項39~42のいずれか1項に記載の組成物、又は請求項43~45のいずれか1項に記載の抗体-薬物コンジュゲート若しくはリガンド-薬物コンジュゲート、又は請求項46に記載の医薬組成物。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NL2022283 | 2018-12-21 | ||
NL2022283 | 2018-12-21 | ||
NL2023468 | 2019-07-10 | ||
NL2023468 | 2019-07-10 | ||
NL2023568 | 2019-07-25 | ||
NL2023568 | 2019-07-25 | ||
PCT/EP2019/000334 WO2020126064A1 (en) | 2018-12-21 | 2019-12-09 | Saponin conjugated to epitope-binding proteins |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022516045A true JP2022516045A (ja) | 2022-02-24 |
JPWO2020126064A5 JPWO2020126064A5 (ja) | 2023-01-11 |
Family
ID=71101079
Family Applications (6)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021536412A Pending JP2022515251A (ja) | 2018-12-21 | 2019-12-09 | 薬物コンジュゲート |
JP2021536410A Active JP7502301B2 (ja) | 2018-12-21 | 2019-12-09 | 改善された細胞標的化結合分子 |
JP2021536407A Pending JP2022516043A (ja) | 2018-12-21 | 2019-12-09 | 生物活性な分子のクラスター |
JP2021536414A Pending JP2022515797A (ja) | 2018-12-21 | 2019-12-09 | 改善された抗体-オリゴヌクレオチドコンジュゲート |
JP2021536413A Pending JP2022516045A (ja) | 2018-12-21 | 2019-12-09 | エピトープ結合タンパク質にコンジュゲート化されたサポニン |
JP2021536411A Pending JP2022516044A (ja) | 2018-12-21 | 2019-12-09 | サポニンコンジュゲート |
Family Applications Before (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021536412A Pending JP2022515251A (ja) | 2018-12-21 | 2019-12-09 | 薬物コンジュゲート |
JP2021536410A Active JP7502301B2 (ja) | 2018-12-21 | 2019-12-09 | 改善された細胞標的化結合分子 |
JP2021536407A Pending JP2022516043A (ja) | 2018-12-21 | 2019-12-09 | 生物活性な分子のクラスター |
JP2021536414A Pending JP2022515797A (ja) | 2018-12-21 | 2019-12-09 | 改善された抗体-オリゴヌクレオチドコンジュゲート |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021536411A Pending JP2022516044A (ja) | 2018-12-21 | 2019-12-09 | サポニンコンジュゲート |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (7) | US20220218837A1 (ja) |
EP (14) | EP3897743A1 (ja) |
JP (6) | JP2022515251A (ja) |
KR (8) | KR20210107073A (ja) |
CN (6) | CN113507941A (ja) |
AU (6) | AU2019411289A1 (ja) |
BR (2) | BR112021012225A8 (ja) |
CA (6) | CA3124151A1 (ja) |
DK (3) | DK3773737T3 (ja) |
ES (2) | ES2899612T3 (ja) |
IL (8) | IL284276A (ja) |
MX (2) | MX2021007296A (ja) |
PT (1) | PT4015003T (ja) |
SG (8) | SG11202106572QA (ja) |
WO (8) | WO2020126626A1 (ja) |
Families Citing this family (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3475424A1 (en) | 2016-06-22 | 2019-05-01 | ProQR Therapeutics II B.V. | Single-stranded rna-editing oligonucleotides |
EP3618867A4 (en) | 2017-05-02 | 2021-01-20 | Cornell University | METHODS AND REAGENTS FOR AGAINST TUMOR WITH HIGHER EFFICIENCY AND LOWER TOXICITY |
CA3124151A1 (en) * | 2018-12-21 | 2020-06-25 | Sapreme Technologies B.V. | Saponin conjugates |
EP4003427A1 (en) * | 2019-07-25 | 2022-06-01 | Sapreme Technologies B.V. | Saponin derivatives with improved therapeutic window |
CN113527498B (zh) * | 2020-04-16 | 2022-03-04 | 上海洛启生物医药技术有限公司 | 抗Trop2纳米抗体及其应用 |
KR20230043110A (ko) * | 2020-06-24 | 2023-03-30 | 사프렘 테크놀로지스 비.브이. | Vhh를 포함하는 adc 또는 aoc, 및 사포닌 또는 리간드-사포닌 접합체를 포함하는 조합물 |
US20230365617A1 (en) * | 2020-06-24 | 2023-11-16 | Sapreme Technologies B.V. | Saponin derivatives for use in medicine |
WO2021261998A1 (en) * | 2020-06-24 | 2021-12-30 | Sapreme Technologies B.V. | Therapeutic combination of galnac-oligonucleotide conjugate and saponin, and uses thereof |
EP4171642A1 (en) * | 2020-06-24 | 2023-05-03 | Sapreme Technologies B.V. | Combination of an antibody-drug conjugate and an antibody-saponin conjugate |
EP4171645A2 (en) * | 2020-06-24 | 2023-05-03 | Sapreme Technologies B.V. | Hydrazone-based saponin derivatives |
WO2021261992A1 (en) * | 2020-06-24 | 2021-12-30 | Sapreme Technologies B.V. | Conjugate of galnac and saponin, therapeutic composition comprising said conjugate and a galnac-oligonucleotide conjugate |
WO2022055352A1 (en) * | 2020-09-10 | 2022-03-17 | Sapreme Technologies B.V. | Semicarbazone-based saponin conjugate |
WO2022055351A1 (en) * | 2020-09-10 | 2022-03-17 | Sapreme Technologies B.V. | Conjugate of saponin, oligonucleotide and galnac |
US10947552B1 (en) | 2020-09-30 | 2021-03-16 | Alpine Roads, Inc. | Recombinant fusion proteins for producing milk proteins in plants |
EP4222167A1 (en) | 2020-09-30 | 2023-08-09 | Nobell Foods, Inc. | Recombinant milk proteins and food compositions comprising the same |
US10894812B1 (en) | 2020-09-30 | 2021-01-19 | Alpine Roads, Inc. | Recombinant milk proteins |
WO2022164316A1 (en) | 2021-01-26 | 2022-08-04 | Sapreme Technologies B.V. | Semicarbazone-based saponin conjugate |
EP4355369A1 (en) * | 2021-06-18 | 2024-04-24 | Sapreme Technologies B.V. | Conjugate of saponin, oligonucleotide and galnac |
WO2023038517A1 (en) | 2021-09-09 | 2023-03-16 | Sapreme Technologies B.V. | Semicarbazone-based saponin conjugate |
WO2023121446A1 (en) | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Sapreme Technologies B.V. | Targeted saponin-nucleic acid conjugates for treatment of muscle wasting disorders |
WO2023121445A1 (en) | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Sapreme Technologies B.V. | Compositions comprising therapeutic nucleic acid and saponin for the treatment of muscle-wasting disorders |
WO2023121447A1 (en) * | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Sapreme Technologies B.V. | Conjugate of a single domain antibody, a saponin and an effector molecule, pharmaceutical composition comprising the same, therapeutic use of said pharmaceutical composition |
WO2023121444A1 (en) | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Sapreme Technologies B.V. | Compositions comprising therapeutic nucleic acid and targeted saponin for the treatment of muscle-wasting disorders |
KR20240001074A (ko) * | 2022-06-24 | 2024-01-03 | 주식회사 피노바이오 | 하나의 항체에 2종의 약물-링커 접합체가 연결된 항체-약물접합체 |
WO2024013361A1 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Oligonucleotides for adar-mediated rna editing and use thereof |
WO2024013360A1 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Chemically modified oligonucleotides for adar-mediated rna editing |
EP4331609A1 (en) * | 2022-09-01 | 2024-03-06 | Sapreme Technologies B.V. | Methods and compositions for enhanced polyplex delivery |
WO2024046622A1 (en) * | 2022-09-01 | 2024-03-07 | Sapreme Technologies B.V. | Compositions of polyplexes and saponins |
EP4331610A1 (en) * | 2022-09-01 | 2024-03-06 | Sapreme Technologies B.V. | Polyplex-saponin covalent conjugate |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07504156A (ja) * | 1991-09-18 | 1995-05-11 | ケンブリッジ・バイオテック・コーポレイション | サポニン−抗原複合物とその用途 |
JP2008505958A (ja) * | 2004-07-13 | 2008-02-28 | シャリテ−ウニヴェルジテイト−メディツィン ベルリン | 標的細胞特異的成分に結合された薬理活性剤とサポニンとを含む組成物 |
JP2017506220A (ja) * | 2014-01-21 | 2017-03-02 | ユーシーエル ビジネス パブリック リミティド カンパニー | 薬物送達システム |
Family Cites Families (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5591829A (en) * | 1987-05-29 | 1997-01-07 | Matsushita; Shuzo | Antibodies modified with toxic substance |
US5856571A (en) * | 1995-06-07 | 1999-01-05 | Cellpro, Incorporated | Semicarbazide-containing linker compounds for formation of stably-linked conjugates and methods related thereto |
CA2290646C (en) * | 1997-05-20 | 2008-03-11 | Galenica Pharmaceuticals, Inc. | Triterpene saponin analogs having adjuvant and immunostimulatory activity |
WO2000009075A2 (en) * | 1998-08-14 | 2000-02-24 | Galenica Pharmaceuticals, Inc. | Chemically modified saponins and the use thereof as adjuvants |
WO2003069997A1 (en) * | 2002-02-04 | 2003-08-28 | Corixa Corporation | Immunostimulant compositions comprising aminoalkyl glucosaminide phosphates and saponins |
CA2522213A1 (en) * | 2003-04-08 | 2004-10-28 | Dante J. Marciani | Semi-synthetic saponin analogs with carrier and immune stimulatory activities for dna and rna vaccines |
JP2008510829A (ja) * | 2004-08-25 | 2008-04-10 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | デンドリマーに基づく組成物およびそれらの使用法 |
AU2006317242A1 (en) | 2005-11-28 | 2007-05-31 | Genmab A/S | Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof |
ES2630205T3 (es) * | 2006-11-20 | 2017-08-18 | Duecom | Uso de partículas que contengan lípidos que comprenden saponínas quillaja para el tratamiento del cáncer |
US20080311040A1 (en) * | 2007-03-06 | 2008-12-18 | Flagship Ventures | METHODS AND COMPOSITIONS FOR IMPROVED THERAPEUTIC EFFECTS WITH siRNA |
EP2282752A4 (en) * | 2008-03-26 | 2011-06-15 | Ca Nat Research Council | SAPONIN EXTRACT FROM SAPONARIA SPP AND USES THEREOF |
ES2710463T3 (es) * | 2008-04-11 | 2019-04-25 | Cedars Sinai Medical Center | Acido poli(beta málico) con tripéptido colgante Leu-Leu-Leu para la administración eficaz del fármaco citoplasmático |
WO2011054811A1 (en) * | 2009-11-03 | 2011-05-12 | Santaris Pharma A/S | Rna antagonists targeting hsp27 combination therapy |
CN103079587B (zh) * | 2010-05-13 | 2016-05-11 | 印第安纳大学研究及科技有限公司 | 呈现核激素受体活性的胰高血糖素超家族肽 |
US9125835B2 (en) * | 2010-11-12 | 2015-09-08 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Synergistic combinations to reduce particle dose for targeted treatment of cancer and its metastases |
CN102652836A (zh) * | 2011-03-03 | 2012-09-05 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 靶向释药的抗癌蛋白质或多肽聚合物前药及其制备方法 |
US20150023989A1 (en) * | 2011-12-14 | 2015-01-22 | Seattle Genetics, Inc. | New antibody drug conjugates (adcs) and the use thereof |
JP6408478B2 (ja) * | 2012-11-26 | 2018-10-17 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | トリオキサカルシン、トリオキサカルシン−抗体複合体、およびその用途 |
US9907846B2 (en) * | 2013-04-01 | 2018-03-06 | Mx Adjuvac Ab | Nanoparticles, composed of sterol and saponin from Quillaja saponaria Molina for use in pharmaceutical compositions |
TW201617368A (zh) * | 2014-09-05 | 2016-05-16 | 史坦森特瑞斯公司 | 新穎抗mfi2抗體及使用方法 |
CN106892957B (zh) * | 2015-12-17 | 2018-11-16 | 广州中医药大学 | 一种齐墩果烷型三萜皂苷类化合物及其制备方法和应用 |
EP3469000A1 (en) * | 2016-06-08 | 2019-04-17 | AbbVie Inc. | Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates |
CA3124151A1 (en) * | 2018-12-21 | 2020-06-25 | Sapreme Technologies B.V. | Saponin conjugates |
WO2022055352A1 (en) * | 2020-09-10 | 2022-03-17 | Sapreme Technologies B.V. | Semicarbazone-based saponin conjugate |
-
2019
- 2019-12-09 CA CA3124151A patent/CA3124151A1/en active Pending
- 2019-12-09 CA CA3124129A patent/CA3124129A1/en active Pending
- 2019-12-09 US US17/415,759 patent/US20220218837A1/en active Pending
- 2019-12-09 US US17/312,403 patent/US20220111066A1/en active Pending
- 2019-12-09 SG SG11202106572QA patent/SG11202106572QA/en unknown
- 2019-12-09 EP EP19817672.9A patent/EP3897743A1/en active Pending
- 2019-12-09 EP EP23166479.8A patent/EP4223316A3/en active Pending
- 2019-12-09 SG SG11202106574UA patent/SG11202106574UA/en unknown
- 2019-12-09 EP EP23170913.0A patent/EP4241847A3/en active Pending
- 2019-12-09 KR KR1020217023075A patent/KR20210107073A/ko unknown
- 2019-12-09 KR KR1020217023063A patent/KR20210119978A/ko unknown
- 2019-12-09 WO PCT/EP2019/084290 patent/WO2020126626A1/en unknown
- 2019-12-09 AU AU2019411289A patent/AU2019411289A1/en active Pending
- 2019-12-09 AU AU2019411276A patent/AU2019411276A1/en active Pending
- 2019-12-09 CN CN201980092709.XA patent/CN113507941A/zh active Pending
- 2019-12-09 SG SG11202106603UA patent/SG11202106603UA/en unknown
- 2019-12-09 WO PCT/EP2019/084292 patent/WO2020126627A1/en unknown
- 2019-12-09 AU AU2019408811A patent/AU2019408811A1/en active Pending
- 2019-12-09 SG SG11202106612QA patent/SG11202106612QA/en unknown
- 2019-12-09 CN CN201980092771.9A patent/CN113453722A/zh active Pending
- 2019-12-09 JP JP2021536412A patent/JP2022515251A/ja active Pending
- 2019-12-09 ES ES19835231T patent/ES2899612T3/es active Active
- 2019-12-09 ES ES21212184T patent/ES2952017T3/es active Active
- 2019-12-09 US US17/312,104 patent/US20220023433A1/en active Pending
- 2019-12-09 EP EP20209450.4A patent/EP3808379A1/en active Pending
- 2019-12-09 US US17/312,193 patent/US20220054643A1/en active Pending
- 2019-12-09 CN CN201980092811.XA patent/CN113474010A/zh active Pending
- 2019-12-09 EP EP19817689.3A patent/EP3897735A1/en active Pending
- 2019-12-09 US US17/312,476 patent/US20220072149A1/en active Pending
- 2019-12-09 KR KR1020217023069A patent/KR20210119979A/ko unknown
- 2019-12-09 KR KR1020217023074A patent/KR20210117275A/ko unknown
- 2019-12-09 PT PT212121842T patent/PT4015003T/pt unknown
- 2019-12-09 EP EP19817673.7A patent/EP3897738B1/en active Active
- 2019-12-09 KR KR1020217023071A patent/KR20210117274A/ko unknown
- 2019-12-09 CN CN201980092673.5A patent/CN113747923A/zh active Pending
- 2019-12-09 SG SG11202106606RA patent/SG11202106606RA/en unknown
- 2019-12-09 EP EP19817682.8A patent/EP3856254A2/en active Pending
- 2019-12-09 CA CA3123978A patent/CA3123978A1/en active Pending
- 2019-12-09 KR KR1020217023032A patent/KR20210119976A/ko unknown
- 2019-12-09 KR KR1020217023076A patent/KR20210117276A/ko unknown
- 2019-12-09 WO PCT/EP2019/000334 patent/WO2020126064A1/en unknown
- 2019-12-09 WO PCT/EP2019/084180 patent/WO2020126600A1/en unknown
- 2019-12-09 JP JP2021536410A patent/JP7502301B2/ja active Active
- 2019-12-09 BR BR112021012225A patent/BR112021012225A8/pt unknown
- 2019-12-09 BR BR112021012222A patent/BR112021012222A8/pt not_active Application Discontinuation
- 2019-12-09 SG SG11202106672SA patent/SG11202106672SA/en unknown
- 2019-12-09 DK DK19835231.2T patent/DK3773737T3/da active
- 2019-12-09 JP JP2021536407A patent/JP2022516043A/ja active Pending
- 2019-12-09 CA CA3124406A patent/CA3124406A1/en active Pending
- 2019-12-09 AU AU2019411278A patent/AU2019411278A1/en active Pending
- 2019-12-09 EP EP19820708.6A patent/EP3897741A1/en active Pending
- 2019-12-09 DK DK19817673.7T patent/DK3897738T3/da active
- 2019-12-09 EP EP21186481.4A patent/EP3915587A1/en active Pending
- 2019-12-09 AU AU2019407234A patent/AU2019407234A1/en active Pending
- 2019-12-09 KR KR1020217022975A patent/KR20210110323A/ko unknown
- 2019-12-09 EP EP19835231.2A patent/EP3773737B1/en active Active
- 2019-12-09 WO PCT/EP2019/084242 patent/WO2020126620A2/en active Search and Examination
- 2019-12-09 DK DK21212184.2T patent/DK4015003T3/da active
- 2019-12-09 SG SG11202106575YA patent/SG11202106575YA/en unknown
- 2019-12-09 CN CN201980092610.XA patent/CN113498350A/zh active Pending
- 2019-12-09 US US17/312,019 patent/US20220313834A1/en active Pending
- 2019-12-09 WO PCT/EP2019/084210 patent/WO2020126609A2/en unknown
- 2019-12-09 CN CN201980092858.6A patent/CN113474009A/zh active Pending
- 2019-12-09 JP JP2021536414A patent/JP2022515797A/ja active Pending
- 2019-12-09 WO PCT/EP2019/084211 patent/WO2020126610A1/en unknown
- 2019-12-09 EP EP19817676.0A patent/EP3897742A2/en active Pending
- 2019-12-09 EP EP24169240.9A patent/EP4374927A2/en active Pending
- 2019-12-09 SG SG11202106664PA patent/SG11202106664PA/en unknown
- 2019-12-09 JP JP2021536413A patent/JP2022516045A/ja active Pending
- 2019-12-09 AU AU2019400630A patent/AU2019400630A1/en active Pending
- 2019-12-09 US US17/312,311 patent/US20230173085A1/en active Pending
- 2019-12-09 MX MX2021007296A patent/MX2021007296A/es unknown
- 2019-12-09 CA CA3124064A patent/CA3124064A1/en active Pending
- 2019-12-09 JP JP2021536411A patent/JP2022516044A/ja active Pending
- 2019-12-09 CA CA3124065A patent/CA3124065A1/en active Pending
- 2019-12-09 EP EP21212184.2A patent/EP4015003B1/en active Active
- 2019-12-09 WO PCT/EP2019/084190 patent/WO2020126604A1/en active Search and Examination
- 2019-12-09 MX MX2021007449A patent/MX2021007449A/es unknown
- 2019-12-09 EP EP19817677.8A patent/EP3897739B1/en active Active
-
2021
- 2021-06-21 IL IL284276A patent/IL284276A/en unknown
- 2021-06-21 IL IL284280A patent/IL284280A/en unknown
- 2021-06-21 IL IL284278A patent/IL284278A/en unknown
- 2021-06-21 IL IL284273A patent/IL284273A/en unknown
- 2021-06-21 IL IL284265A patent/IL284265A/en unknown
- 2021-06-21 IL IL284272A patent/IL284272A/en unknown
- 2021-06-21 IL IL284274A patent/IL284274A/en unknown
- 2021-06-21 IL IL284279A patent/IL284279A/en unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07504156A (ja) * | 1991-09-18 | 1995-05-11 | ケンブリッジ・バイオテック・コーポレイション | サポニン−抗原複合物とその用途 |
JP2008505958A (ja) * | 2004-07-13 | 2008-02-28 | シャリテ−ウニヴェルジテイト−メディツィン ベルリン | 標的細胞特異的成分に結合された薬理活性剤とサポニンとを含む組成物 |
JP2017506220A (ja) * | 2014-01-21 | 2017-03-02 | ユーシーエル ビジネス パブリック リミティド カンパニー | 薬物送達システム |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
CHEENU BHARGAVA ET AL.: ""Targeted dianthin is a powerful toxin to treat pancreatic carcinoma when applied in combination wi", MOLECULAR ONCOLOGY, vol. 11, no. 11, JPN6023048554, 15 September 2017 (2017-09-15), pages 1527 - 1543, XP055677214, ISSN: 0005207709, DOI: 10.1002/1878-0261.12115 * |
HENDRIK FUCHS ET AL.: ""Glycosylated Triterpenoids as Endosomal Escape Enhancers in Targeted Tumor Therapies"", BIOMEDICINES, vol. 5, no. 4, JPN6023048555, 29 March 2017 (2017-03-29), pages 14, ISSN: 0005207708 * |
ROGER GILABERT-ORIOL ET AL.: ""Immunotoxins Constructed with Ribosome-Inactivating Proteins and their Enhancers: A Lethal Cocktai", CURRENT PHARMACEUTICAL DESIGN, vol. 20, no. 42, JPN6023048553, 22 October 2014 (2014-10-22), pages 6584 - 6643, XP055189313, ISSN: 0005207710, DOI: 10.2174/1381612820666140826153913 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7502301B2 (ja) | 改善された細胞標的化結合分子 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210917 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221209 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20221209 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20221209 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20231129 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20240110 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240524 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240702 |