JP2022084727A - 交互接線流の使い捨て濾過ユニット - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ハウジングおよび、例えば濾過システムにおいて使用するためのダイアフラムポンプ、ならびに無菌環境を保持しながらフィルタを湿らせ/洗い流すためのアタッチメントを含む、交互接線流の使い捨て濾過ユニットに関する。
濾過は、典型的には、流体溶液、混合流体または懸濁流体を分離し、清澄化し、改変しかつ/または濃縮するために実行される。バイオテクノロジー、製薬、および医療産業において、濾過は、薬物、診断および化学物質ならびに他の多くの製品の製造、加工および分析を成功させる上で極めて重要である。例として、濾過は、流体を滅菌し、かつ複合懸濁液を清澄化して濾過された「透明な」分画および濾過されない分画にするために用いることができる。同様に、懸濁液中の構成要素は、懸濁媒を除去または「濾過して除く」ことによって濃縮され得る。さらに、フィルタ材料、濾過孔径および/または他のフィルタ変数を適切に選択することにより、他の多くの特殊化されたフィルタ用途が開発されていて、これには、微生物の培養物、血液、ならびに溶液、混合液または懸濁液であり得る他の流体を含む、様々なソースからの構成要素の選択的分離が含まれ得る。
本開示は、高密度細胞培養プロセスをサポートすることに適する使い捨てATFデバイスを提供する。また、本開示は、使い捨てATFデバイスを用いて無菌環境で高い濾過性能を得る方法も提供する。本開示は、具体的にはトップフランジおよびボトムフランジを有する半球ATFポンプチャンバのトップおよびボトムハーフと協調して機能するように特別に設計される内径ねじ切りの付いた、(例えば、オートクレーブ、蒸気、ガンマ線、エチレンオキシドを用いて)滅菌可能なプラスチック・クランプ・リングであって、一方のフランジがクランプリングと結合するようにねじ切りされ、かつフランジの一方または双方が、特別に設計される内側のポンプダイアフラムと共にダイアフラムの密封を補助する追加機能を有し得るプラスチック・クランプ・リング、を使用すれば、市販の濾過システムにおけるような使い捨てATFユニットを用いる場合に内在する多大な圧力および広範な圧力変動に耐え得る滅菌可能で堅牢な使い捨てATF濾過ハウジングおよびポンプユニットを簡単に製造することができる、という発見を、少なくとも部分的に基礎とする。
、雌ねじを有する下側部分と、第1のポンプ半球体の曲がった、または斜めの外面を収容するように構成される内面を有する上側部分とを含むことができる。
測定値と相関することを含む。
「湿し」とは、糸膜の孔がその時点で液体を含み(湿った状態)、かつ低圧および高い流体流動速度において低い通気を示すような方法による中空糸フィルタのフラッシングを指す。
詳細な説明
本開示は、一般的な方法(例えば、ガンマ線およびエチレンオキシド)により滅菌可能であって、使い捨てであるように、かつ/または1回または使用を限定されて設計される新しい使い捨てATFハウジングおよびポンプユニットについて記述する。本ユニットは、2つの半球形半分を含む球形ATFポンプアセンブリへ直に連結されるプラスチックハウジングを含む。特定の構造を所与として、この新規ユニットは、使用中に生じる過酷さおよび多大な圧力に驚くほど耐えることができる。一方の半球は、雄ねじ付きフランジを
有し、かつクランプまたはロックリングは、一方の半球を同心円状に取り囲んで反対側の半球上にねじ込み、例えばシリコーンまたは他のエラストマー製の内側のポンプダイアフラムを挟んで締め付け/密封する。この実施形態において、クランプリングは、雌ねじ付きである。クランプまたはロックリングは、両半球を通して上下から繋ぐ2つのユニットから成る可能性もある。
図1A~C、図2A~Cおよび図3A~Cは、各々、本明細書に記述している使い捨てATFハウジングおよびポンプユニット100、200、および300の3つの異なる実施形態の等角図、正面図および断面図を示す。
周上ならびにフランジ26の上部分を取り囲むことにより、2つのポンプ半室の周辺フランジ26および27間に内部ダイアフラム6を封入して密閉する円筒形クランプである。上述したように、少なくとも(この実施形態では)下側のフランジ27の半径方向外側の接触面49は、ねじ切りされ、即ち、周辺フランジ27の半径方向周囲は、半径方向接触面49で使い捨てクランプリング110の下側の内面112上のねじ山に接触しかつこれと結合するねじ山を有する。実施形態によっては、他方のフランジ26(これらの実施形態では、上部フランジ)は、雄ねじを含んでいてもよく、含んでいなくてもよい。他の実施形態は、ボトムリングがトップリングに内的または外的に嵌まって両フランジを圧縮する2ピース式ロックリング構成を示す。
、液体受入れチャンバ7は、半球体であり、よって、平面ではなく曲がりを有する。液体受入れチャンバ7の外面を収容しかつこれと密封式に係合するために、上側の内面114は、水平に対して角度αで傾斜している。角度αは0~5゜、例えば1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0または4.5゜であってもよいが、異なるサイズのATFダイアフラムポンプ4の様々な大きさの半球の曲がりに対応するために必要に応じて調整される。この合わせ面は、高圧状態の間に上側の半球を補強する。上側半球と下側半球は、組み立ての間は接触せず、互いに押し付けられるが、ダイアフラムの圧縮によって分離される。
概して、新規使い捨てATFポンプは、例えば、図6Aに示されかつ後にさらに詳述するように、保持液チャンバおよび濾過液チャンバを使用する密閉式濾過システムと共に使用されることが可能である。このようなATF濾過システムおよびATFポンプは、Shevitzの米国特許第6,544,424号明細書に記述されている。
径範囲が約10~500kDaおよび0.2~100ミクロンである場合、一般に浸透膜として分類される、かつ限外濾過、精密濾過からマクロ濾過およびマイクロキャリア濾過に至る膜孔径全域に及ぶ。約0.2ミクロンの孔径は、細胞を保持し、かつ代謝産物および他の分子または分子複合体が細孔を通過できるようにするために一般的に使用される。一方で、10kDa~500kDaの範囲の限外濾過孔径は、細胞だけでなく、これらの孔径より大きい、例えば細胞によって産生される分子および分子複合体を保持するために好ましい。マクロ濾過膜は、7~100μmの範囲であって、マイクロキャリアまたはこれより大きい細胞を保持するために使用される。これらの選択透過性中空糸は、濾過される流体物質に適合する液体で湿されなければならない。例えば、細胞培養において、膜は、細胞培養増殖に適合する水ベースの溶液で湿されなければならない。多くの膜は、まず細孔を湿しかつ作動中に濾過プロセスの実行に必要な流動速度を達成するために、アルコール含有溶液を必要とする。図6Bは、ATFデバイスに流体を加えるために使用できるポートおよび流体バッグを示す。次には、ATFデバイスの交互ポンピング作用を用いて、無菌環境内で無血清培地によるフラッシングを実行することができる。次には、ポートからフラッシュ流体を排出することができ、デバイスは、無菌環境を保持しながら、細胞培養プロセスにおいてすぐに作動することができる。
(1)流体を保持液チャンバから流体コネクタを介して容器(貯蔵容器等)へ排出し、よって、前記排出の間、前記流体の一部は、半透過性バリアを介して濾過液チャンバ内へ方向づけられ、次に、選択バリアを介してリアクタチャンバへ方向づけられるステップであって、前記排出は、保持液チャンバへ連結されるダイアフラムポンプにより流体コネクタから遠位の位置に加えられる力に起因するステップと、
(2)容器からの流体の少なくとも一部は、保持液チャンバへ流れて戻り、かつ保持液チャンバからの流体の少なくとも一部は、濾過液チャンバへ流れ込むように(かつ、好ましくは、濾過液チャンバからの流体の一部は、リアクタチャンバへ流れ込むように)、ダイアフラムポンプにより加えられる力の方向を反転させるステップと、
(3)ステップ(1)およびステップ(2)を少なくとも1回反復するステップであって、保持液チャンバから排出される流体は、最適には、無血清培養培地等の膜細孔を湿すことができる溶液であり、かつ保持液チャンバ、濾過液チャンバ、リアクタチャンバおよびダイアフラムポンプは、同じ密閉式濾過システムの一部であるステップ(好ましくは、密閉式濾過システムは、本明細書において先の一般的態様または第2の態様に記述されている)とが含まれる。
かつフィルタの指定された流動速度が達成される。膜がATF作用により湿されると、流体をポンプポートから捨てることができ、デバイスは、バイオリアクタに取り付けられれば、いつでもATFを実行することができる。
(1)流体を保持液チャンバから流体コネクタを介して容器へ排出し、よって、前記排出の間、前記流体の一部は、選択透過性バリアを介して保持液チャンバから濾過液チャンバ内へ方向づけられ、濾過液チャンバ内へ方向づけられた前記流体の一部は、濾過液チャンバ壁内の開口を介して濾過液リザーバへ方向づけられ、かつ濾過液チャンバ内へ方向づけられた前記流体の一部は、選択バリアを介してリアクタチャンバ内へ方向づけられるステップであって、前記排出は、保持液チャンバへ連結されるダイアフラムポンプにより流体コネクタから遠位の位置に加えられる力に起因するステップと、
(2)容器からの流体の少なくとも一部は、保持液チャンバへ流れて戻り、保持液チャンバからの流体の少なくとも一部は、濾過液チャンバへ流れ込み、濾過液チャンバからの流体の少なくとも一部は、濾過液リザーバへ流れ込むように、ダイアフラムポンプにより加えられる力の方向を反転させるステップと、
(3)ステップ(1)およびステップ(2)を少なくとも1回反復するステップであって、保持液チャンバから排出される流体は、懸濁液および溶液より成るグループから選択され、かつ保持液チャンバ、濾過液チャンバ、リアクタチャンバおよびダイアフラムポンプは、同じ濾過液リザーバシステムの一部であるステップ(好ましくは、濾過液リザーバシステムは、本明細書において先に記述されている)とを含む。
ある。
次の実施例において、本発明をさらに説明するが、これらの実施例は、特許請求の範囲に記載される発明の範囲を限定するものではない。
ポンプ半球体の試験装置55の設計を図7に示す。設計は、シリコーン・ポンプ・ダイアフラムを圧縮した状態で保持するために用いる方法に関して、ステンレス鋼製の標準ポンプとは異なっていた。フランジを様々な取付け方法で互いに固定できるように、ポンプの両半分にシリコーンダイアフラムより外側のフラットフランジを追加し、かつ過剰圧縮を防止するために、一方のポンプ半分に小型の「シェルフ」機能を包含した。また、アセンブリには、Instron(登録商標)マシンによる故障試験(異なる取付け方法の強度分析用)を可能にするために大きい鋼製アイフックおよび鋼製タイダウンフックを取り付けられるようにする穴があった。
図6Bを参照して、以下、ATF技術を用いて中空糸膜を迅速かつ効率的に洗い流すように設計される手順について述べる。このフラッシングは、内毒素を湿らせ、調整し、低下させることにより、かつ膜から全ての有機化合物(TOC)を除去することにより、ユーザに利益をもたらす。ATFの使用は、必要な容積が少なくなり、密閉式滅菌システム内で、細胞培養増殖に適合しない溶液を用いることなく容易に実行できるという理由で、他の方法より効果的である。様々なサイズの使い捨てATFデバイスのATFランレートを記載する。
1.「T」チュービングセットをフィード401、保持液402および上部透過ポート403へ連結する。上部透過ポートは、例えば図1に示されているような上部ポート102であってもよい。
3.容器をポート402からの「T」に取り付ける。
5.ポート402からのバッグが湿潤剤に出合うまで、ポート401からのATFをポ
ンプで充填する。
同じく図6Bを参照すると、フィルタ完全性試験は、中空糸膜が無傷であって、膜細孔が完全に湿っていることを保証するための一手段である。ATFモードでフラッシングした後、湿潤流体(培地)を湿潤流体バッグへ、重力によって、またはポンプP2を反転させて空気源を1~2psiまで開放し、ダイアフラムを持ち上げかつ他のバルブを全て開放することによって、戻す。バッグは、排出を可能にするように位置合わせされなければならない。
0.2μmスペクトルPESフィルタを有する使い捨てATF6をRepligen C410コントローラへ連結した。A2B連結部を40℃水槽へ連結し、毎分17.2リットル(LPM)のATFレートで500,000回の圧力サイクルおよび500,000回の排出サイクルを実行した。透過液を、灌流プロセスで使用されることになるという理由で、作動を可能な限りバイオリアクタ状態と同様に保つように、5.7LMHで引き抜いた。これにより、1日当たり約10,000回の圧力サイクルおよび10,000回
の排出サイクルが生じる。ダイアフラムの押しのけ容積を監視しながら、ATFを50日間実行した。50日間の作動全体を通じて、押しのけ容積は一定を保ち、予測通り一定の流量が保持された。
本開示のATFフィルタを用いて培養した細胞について行った試験の結果を図8および9に示す。モノクローナル抗体産生CHO細胞灌流プロセスにおいて、ガンマ線を照射した無菌suATF2フィルタ(表面積0.13m2の0.2μmポリエーテルスルホンマイクロフィルタ)を試験した。ガンマ滅菌プロセスの後、滅菌GE Readymate(登録商標)コネクタを用いて、suATF2フィルタを5.0Lベンチ・スケール・バイオリアクタ(作業容量1.5L)へ連結した。C24Uv2.5 ATFコントローラを用いて、suATF2フィルタを作動させた。接種の前に、suATF2フィルタを、バイオリアクタに含まれる1.5LのCD optiCHO(登録商標)増殖培地(Thermo Fisher)により0.9LPMのATFレートで1時間、バイオリアクタ内を再循環する12.4LPM(フラックス5.7LMH)の透過レートでフラッシュした。フィルタを培地で洗い流し、フィルタを湿らせて内毒素レベルを0.25EU/mL未満に下げた。
本発明を、その詳細な説明に関連して記述したが、上述の説明は、例示のためのものであって、発明の範囲を限定する意図はなく、発明の範囲が添付の特許請求の範囲によって定義されることは、理解されるべきである。他の態様、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲に含まれる。
と結合するように構成される溝を有する。概して、クランプリングは、第1および第2の
フランジ間で可撓性ダイアフラムを圧縮するように構成され、かつ圧縮レベルは、設計上
桁違いに安全な圧力を包含するに足るダイアフラムの圧縮に相関するトルク仕様を適用す
ることによって、変更されることが可能である。例えば、トルク仕様は、約10~100
lbft(13.6~136Nm)以上であってもよく、例えば、約10~100lbf
t(13.6~136Nm)、20~80lbft(27.2~108.8Nm)、また
は30~70lbft(40.8~95.2Nm)、であってもよく、例えば、10、2
0、30、40、50、60、70、80、90または100lbft(13.6、27
.2、40.8、54.4、68、81.6、95.2、108.8、122.4または
136Nm)であってもよい。
Claims (21)
- 使い捨ての交互接線流(ATF)ハウジングおよびダイアフラム・ポンプ・ユニットであって、
滅菌可能で無毒の硬質プラスチック製中空管と、
前記中空管の一端へ固定される第1のポンプ半球体であって、前記第1のポンプ半球体は、第1の円周フランジを含み、かつ前記第1のポンプ半球体の開口は、前記第1のポンプ半球体と前記中空管との間に流体が流れることを可能にする、第1のポンプ半球体と、
前記第1の円周フランジと結合するように構成される第2の円周フランジを備える第2のポンプ半球体であって、前記第1の円周フランジまたは前記第2の円周フランジの何れかが外径ねじ切りを備える、第2のポンプ半球体と、
前記第1および第2の円周フランジ間に配置されるように構成される可撓性ダイアフラムと、
内径ねじ切りを備える内面を有するクランプリングであって、ねじ切りされた円周フランジなしで前記ポンプ半球体を覆って配置されかつねじ切りされた前記円周フランジへ固定されるように構成されるクランプリングと、を備える、使い捨ての交互接線流(ATF)ハウジングおよびダイアフラム・ポンプ・ユニット。 - 前記クランプリングは、アクリロニトリル-ブタジエン-スチレン、ポリエチレン、ポリエチレン、ポリカーボネートおよびポリスルホンプラスチックのうちの1つまたはそれ以上を含む、請求項1に記載の使い捨てATFユニット。
- 前記クランプリングは、前記雌ねじを備える下側部分と、前記第1のポンプ半球体の曲がった、または斜めの外面を収容するように構成される内面を備える上側部分とを備える、請求項1または請求項2に記載の使い捨てATFユニット。
- ATFとして動作されることが可能な密閉システムを実現しかつフィルタ膜を湿らせるために、空気リザーバ、透過フラッシュバッグおよび流体供給バッグのうちの何れか1つまたはそれ以上を無菌連結部を介して取り付けるために使用される1つまたは複数のポートをさらに備える、請求項1~3の何れか一項に記載の使い捨てATFユニット。
- 前記ATFユニットは、破裂する、または漏れることなく450psiまでの圧力に耐えることができる構造を有する、請求項1~4の何れか一項に記載の使い捨てATFユニット。
- 前記第1および第2のフランジは、前記可撓性ダイアフラム上の突起と結合するように構成される溝を有する、請求項1~5の何れか一項に記載の使い捨てATFユニット。
- 前記クランプリングは、前記第1および前記第2のフランジの間で前記可撓性ダイアフラムを圧縮するように構成される、請求項1~6の何れか一項に記載の使い捨てATFユニット。
- 圧縮レベルは、設計上桁違いに安全な圧力を包含するに足る前記ダイアフラムの圧縮に相関するトルク仕様を適用することによって変更されることが可能である、請求項7に記載の使い捨てATFユニット。
- 前記トルク仕様は、約10~約100lbftである、請求項8に記載の使い捨てATFユニット。
- 前記トルク仕様は、約30~約70lbftである、請求項9に記載の使い捨てATF
ユニット。 - 前記トルク仕様は、80lbftより大きい、請求項8に記載の使い捨てATFユニット。
- 前記ダイアフラムの密封を補助するために、前記第1および第2の半球体の間のシーリング機能をさらに備える、請求項1~11の何れか一項に記載の使い捨てATFユニット。
- 前記シーリング機能は、エネルギーダイレクタまたは隆起表面を備える、請求項12に記載の使い捨てATFユニット。
- 完全に湿らせた使い捨て濾過デバイスを調製する方法であって、
無菌連結部を用いて、請求項1~11の何れか一項に記載の使い捨ての交互接線流(ATF)ユニットの上部ポートへ保持および透過流体バッグを連結することと、
培地または他の流体含有バッグをポンプ入口ポートへ取り付けることと、
前記使い捨てATFユニットを作動して、前記使い捨てATFユニットの前記中空管内部のフィルタ膜に渡って培地または他の流体の流動を実現することを含む、方法。 - 前記使い捨てATFユニットを作動して前記使い捨てATFユニットの前記中空管内のチャンバを浸透する流体流動を実現した後に、前記使い捨てATFユニットから前記ポンプ入口ポートを通して保持流体を排出することをさらに含む、請求項14に記載の方法。
- 使い捨て濾過デバイスを使用する方法であって、
請求項1~11の何れか一項に記載の使い捨ての交互接線流(ATF)ユニットを調達することと、
無菌連結部を用いて流体バッグを前記ATFユニットの上部ポートへ連結することにより、前記ATFユニットを流体回路内へ配置することと、前記ATFユニットが、前記使い捨てATFユニットの前記中空管内のフィルタ膜を通って濾過される培地または他の流体の流動、および濾過が完了した時点の前記ATFユニットの処分を実現できるように、流体容器をポンプ入口ポートへ取り付けることを含む、方法。 - 使い捨て濾過デバイスの完全性試験を実行する方法であって、
使い捨て濾過デバイスを洗い流すために使用された培地を、前記濾過デバイス内部のダイアフラムを持ち上げるために空気圧源が開放されている状態の湿潤流体バッグ内へ排出することと、
空気圧源バルブを閉じて前記ダイアフラムに加わる圧力を放つことと、
前記湿潤流体バッグと前記濾過デバイス上のポートとの間に位置決めされるバルブ、および前記濾過デバイスの保持液ポートへ連結されるバルブを閉じることと、
前記空気圧源を用いてフィルタの片側を加圧することと、
前記フィルタと前記空気圧源との間のバルブを閉じることと、
経時的な圧減衰を測定することと、
前記圧減衰の測定値を空気流と相関することを含む、方法。 - 前記培地は、重力によって排出される、請求項17に記載の方法。
- 前記培地は、前記培地を前記デバイスからポンピングすることによって排出される、請求項17に記載の方法。
- 前記空気圧源は、空気を約1~2psiの圧力で提供する、請求項17に記載の方法。
- 使い捨て濾過デバイスの完全性試験を実行する方法であって、
使い捨て濾過デバイスを洗い流すために使用された培地を、前記濾過デバイス内部のダイアフラムを持ち上げるために空気圧源が開放されている状態の湿潤流体バッグ内へ排出することと、
空気圧源バルブを閉じて前記ダイアフラムに加わる圧力を放つことと、
前記湿潤流体バッグと前記濾過デバイス上のポートとの間に位置決めされるバルブ、および前記濾過デバイスの保持液ポートへ連結されるバルブを閉じることと、
前記空気圧源を用いてフィルタの片側を加圧することと、
前記デバイス内部の圧力を経時的に測定することと、
前記空気圧源と前記デバイスとの間の流れを流量計を用いて測定することと、
前記圧力の測定値を空気流の測定値と相関することを含む、方法。
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