JP2021524244A - 抗ｃｄ３３抗体、抗ｃｄ３３／抗ｃｄ３二重特異性抗体、及びその使用 - Google Patents

抗ｃｄ３３抗体、抗ｃｄ３３／抗ｃｄ３二重特異性抗体、及びその使用 Download PDF

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Abstract

抗ＣＤ３３抗体及びその抗原結合断片、並びに抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片が記載される。当該抗体をコードしている核酸、当該抗体を含む組成物、並びに当該抗体を生成する方法、及び癌などの疾患を治療又は予防するために当該抗体を使用する方法についても記載される。

Description

本発明は、モノクローナル抗ＣＤ３３抗体、二重特異性抗ＣＤ３３抗ＣＤ３抗体、当該抗体をコードしている核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該抗体を含む組成物に関する。抗体を作製する方法、及び癌を含む疾患を治療するために抗体を使用する方法も提供される。
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、白血病性細胞のクローン性増殖を特徴とする、遺伝学的異質性を有する疾患である。ＡＭＬにおける根底にある疾患の生物学の理解が進んだにもかかわらず、細胞傷害化学療法による標準的治療は、ここ数十年間ほとんど変化しておらず、５年全生存率は＜３０％と低いままである（Ｂｕｒｎｅｔｔ，Ｗｅｔｚｌｅｒ，＆Ｌｏｗｅｎｂｅｒｇ，２０１１；Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。したがって、理想的にはＡＭＬ幹細胞を標的とする、有効性を高めかつ毒性を低減した新規治療法が差し迫って必要とされており、その理由は、これらの細胞が、ＡＭＬの病態形成において重要であると考えられており、標準的療法では十分に根絶できないことが、高い再発発生率につながっていると考えられているためである（Ｈｏｐｅ，Ｊｉｎ，＆Ｄｉｃｋ，２００４；Ｉｓｈｉｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，２００７）。細胞表面分子に対する治療抗体は、リンパ腫及び急性リンパ芽球性白血病などの悪性疾患、並びに固形腫瘍の治療に有効であることが証明されており（Ｈｏｅｌｚｅｒ，２０１３；Ｊａｃｋｓｏｎ＆Ｃｈｅｓｔｅｒ，２０１５）、ＡＭＬについて現在承認されている抗体ベースの療法はわずか１つである（Ｇｏｄｗｉｎ，Ｇａｌｅ，＆Ｗａｌｔｅｒ，２０１７）。
ＣＤ３３は、６７ｋＤの１回膜貫通糖タンパク質であり、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（シグレック）ファミリーのメンバーである。その正確な生物学的機能は不明であるが、正常な個体では、主に骨髄分化抗原であると考えられ、骨髄前駆細胞、好中球、及びマクロファージでは低発現であるが、循環単球及び樹状細胞では高度に発現する。重要なことに、ＣＤ３３は、ＡＭＬを発症している患者の８５〜９０％の芽球及び白血病幹細胞で検出されている。興味深いことに、ＣＤ３３の発現は、造血細胞に限定されている（Ｐａｕｌ，Ｔａｙｌｏｒ，Ｓｔａｎｓｂｕｒｙ，＆ＭｃＶｉｃａｒ，２０００；Ｕｌｙａｎｏｖａ，Ｂｌａｓｉｏｌｉ，Ｗｏｏｄｆｏｒｄ−Ｔｈｏｍａｓ，＆Ｔｈｏｍａｓ，１９９９）が、正常な造血幹細胞には存在しない（Ａｎｄｒｅｗｓ，Ｔｏｒｏｋ−Ｓｔｏｒｂ，＆Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，１９８３；Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｌｉｎｃｈ，Ｓａｂｂａｔｈ，Ｌａｒｃｏｍ，＆Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ，１９８４；Ｊｉｌａｎｉ ｅｔ ａｌ．，２００２）。これらの知見は、ＣＤ３３が、ＡＭＬにおける抗体ベースの療法に好適な標的であることを示唆している。
ＣＤ３３の構造は、シアル酸結合を媒介するアミノ末端ＶセットＩｇ様ドメイン（ＣＤ３３のエキソン２によりコードされている）と、その細胞外部分におけるＣ２セットＩｇ様ドメイン（エキソン３及び４によりコードされている）からなる（Ｌａｓｚｌｏ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。ＣＤ３３ ＲＮＡのオルタナティブスプライシングにより、ＶセットＩｇ様ドメインは欠失しているが、Ｃ２セットＩｇ様ドメインは保持されている、細胞表面で発現するより短いアイソフォームが生じ得る（Ｌａｓｚｌｏ，Ｅｓｔｅｙ，＆Ｗａｌｔｅｒ，２０１４；Ｌａｓｚｌｏ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。最近の研究によって、一塩基多型型（ＳＮＰ）ｒｓ１２４５９４１９がＡＭＬ集団の〜５０％に存在し、それによってＣＤ３３のエキソン２がスキップされた結果、ＣＤ３３のＶドメインが欠失することが示されるまで（Ｌａｍｂａ ｅｔ ａｌ．，２０１７）、このスプライシングプロセスの生物学的関連性はほとんど不明であった。興味深いことに、ＡＭＬについて唯一承認されているＭｙｌｏｔａｒｇを含む、いくつかのＣＤ３３抗体ベースの療法は、ＣＤ３３のＶドメインに結合し、認識する。上記の研究は、実際に、ＳＮＰを発現している患者ではＭｙｌｏｔａｒｇが有効性を有しないので、ＡＭＬ集団の約５０％でしか有効性を有しないことを示した（Ｌａｍｂａ ｅｔ ａｌ．，２０１７）。Ｍｙｌｏｔａｒｇに関するデータに鑑みると、他のＶ結合ＣＤ３３抗体も、ＡＭＬ患者の限定されたプール、具体的には、ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９変異を有していないものでしか有効ではないであろうと仮定するのが合理的である。
実際、ＣＤ３３の臨床領域について研究するとき、追加の抗ＣＤ３３抗体としては、ＡｍｇｅｎのＡＭＧ３３０及びＡＭＧ６７３、ＡｍｐｈｉｖｅｎａのＡＭＶ５６４、ＩｍｍｕｎｏｇｅｎのＩＭＧＮ７７９、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ ＩｎｇｅｌｈｅｉｍのＢＩ８３６８５８、Ａｃｔｉｎｉｕｍ ＰｈａｒｍａのＡｃｔｉｍａｂ、並びにＳｅａｔｔｌｅ ＧｅｎｅｔｉｃのＳＧＮ３３Ａが挙げられる。ＡｍｇｅｎのＡＭＧ３３０は、ＣＤ３３×ＣＤ３ ＢｉＴＥであり、「コア配列ＩＰＹＹＤＫＮを有するＣＤ３３のＶセットドメインに位置する線形エピトープを認識する」ことが報告されている（Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。ＡＭＧ６７３がＣＤ３３ ＢｉＴＥの半減期延長バージョンであることに鑑みると、当該ＢｉＴＥと同じエピトープに結合すると考えられる。ＡｍｐｈｉｖｅｎａのＡＭＶ５６４は、四価二重特異性ＣＤ３３／ＣＤ３抗体であり、米国特許第９８０３０２９号によれば、この抗体はＣＤ３３のＶドメインに結合する。ＩｍｍｕｎｏｇｅｎのＩＭＧＮ７７９は、ＤＮＡアルキル化剤にコンジュゲートされたＣＤ３３抗体（Ｍｙ９−６）であり、米国特許第９３５９４４２号の図１によれば、１２５Ｉで標識されたＭｙ９−６抗体は、ＣＤ３３陽性Ｕ−９３７細胞への結合についてＭｙ９抗体と競合する。Ｍｙ９抗体は、ＣＤ３３のＶドメインに結合する（Ｐｅｒｅｚ Ｏｌｉｖａ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。まとめると、エビデンスは、ＩＭＧＮ７７９がＣＤ３３のＶドメインに結合することを示唆している。Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ ＩｎｇｅｌｈｅｉｍのＢＩ８３６８５８は、ＮＫ細胞に媒介されるＡＤＣＣを媒介し、ＣＤ３３のＶドメインに結合するＦｃ改変抗ＣＤ３３抗体である（Ｖａｓｕ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。更に、Ｍａｌｉｋら及びＰｅｒｅｚ Ｏｌｉｖａら（Ｍａｌｉｋ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｐｅｒｅｚ−Ｏｌｉｖａ ｅｔ ａｌ．，２０１１）に加えて、Ｖａｓｕらは、ＣＤ３３のＶドメインに対するリンツズマブ（ＨｕＭ１９５）のマッピングに関するエビデンスを示している。Ａｃｔｉｍａｂを作製するためにＡｃｔｉｎｉｕｍ ｐｈａｒｍａによってアクチニウムにコンジュゲートされたＨｕＭ１９５抗体は、現在臨床試験中である。ＨｕＭ１９５抗体は、また、ＳＧＮ３３Ａを作製するためにＳｅａｔｔｌｅ ＧｅｎｅｔｉｃｓによりＤＮＡバインダーにコンジュゲートされているが、この薬物は、現在、毒性に関する懸念から保留されている。したがって、当該技術分野において公知の抗ＣＤ３３抗体は、ＣＤ３３のＶドメインに結合する。
これらのデータに鑑みると、ＡＭＬにおけるＣＤ３３ベースの抗体療法に関して、重大なアンメットメディカルニーズ、及びＣＤ３３発現癌の治療のためにＣＤ３３のＣ２ドメインに結合する抗体を有する必要性が存在する。
全般的な一態様では、本発明は、ＣＤ３３に結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。特定の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ３３のＣ２ドメインに結合する。特定の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ３３のＶドメインに結合する。
別の全般的な態様では、本発明は、ＣＤ３３及びＣＤ３に結合する単離二重特異性抗体又はその抗原結合断片に関する。特定の実施形態では、二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ３３のＣ２ドメインに結合する。特定の実施形態では、二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ３３のＶ領域に結合する。
ＣＤ３３のＣ２ドメインに特異的に結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が提供される。特定の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、以下のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む：
ａ．それぞれ、配列番号４４７、４４８、４４９、５６７、５６８、及び５６９、
ｂ．それぞれ、配列番号４４４、４４５、４４６、５６４、５６５、及び５６６、
ｃ．それぞれ、配列番号３５４、３５５、３５６、４７７、４７８、及び４７９、
ｄ．それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５０１、５０２、及び５０３、
ｅ．それぞれ、配列番号４１１、４１２、４１３、５３１、５３２、及び５３３、
ｆ．それぞれ、配列番号３４８、３４９、３５０、４７１、４７２、及び４７３、
ｇ．それぞれ、配列番号３６０、３６１、３６２、４８３、４８４、及び４８５、
ｈ．それぞれ、配列番号３６３、３６４、３６５、４８６、４８７、及び４８８、
ｉ．それぞれ、配列番号３６６、３６７、３６８、４８９、４９０、及び４９１、
ｊ．それぞれ、配列番号３６９、３７０、３７１、４９２、４９３、及び４９４、
ｋ．それぞれ、配列番号３８７、３８８、３８９、４９２、４９３、及び４９４、
ｌ．それぞれ、配列番号４０２、４０３、４０４、５２２、５２３、及び５２４、
ｍ．それぞれ、配列番号４０８、４０９、４１０、５２８、５２９、及び５３０、
ｎ．それぞれ、配列番号４２３、４２４、４２５、５４３、５４４、及び５４５、又は
ｏ．それぞれ、配列番号４２６、４２７、４２８、５４６、５４７、及び５４８。
抗体又はその抗原結合断片は、例えば、ＣＤ３３、好ましくはヒトＣＤ３３に特異的に結合することができる。
特定の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９２、２９１、２６１、２６９、２８０、２５９、２６３、２６４、２６５、２６６、２７２、２７７、２７９、２８４、若しくは２８５と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３３２、３３１、３０２、３１０、３２０、３００、３０４、３０５、３０６、３０７、３１７、３１９、３２４、若しくは３２５と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
特定の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、以下を含む：
ａ．配列番号２９２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号２９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号２６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号２８０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ．配列番号２５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ．配列番号２６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ．配列番号２６４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ．配列番号２６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ．配列番号２６６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ．配列番号２７２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ．配列番号２７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ．配列番号２７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ．配列番号２８４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
ｏ．配列番号２８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
特定の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、約２ｎＭ未満のＥＣ５０でインビトロにおいて抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する。抗体又はその抗原結合断片は、例えば、ＩｇＧ１低フコース骨格を含み得る。
特定の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、約５×１０−９Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）でＣＤ３３に結合する。
特定の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、約２ｎＭ未満のＥＣ５０で、ＣＤ３３に結合し、内部移行を誘導する。
特定の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、治療剤にコンジュゲートされる。
特定の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、キメラである、部分的にヒト化されている、又は完全にヒト化されている。
また、抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片と、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片とを含む、抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片であって、
当該抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片が、以下のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み：
ａ．それぞれ、配列番号４４７、４４８、４４９、５６７、５６８、及び５６９、
ｂ．それぞれ、配列番号４４４、４４５、４４６、５６４、５６５、及び５６６、
ｃ．それぞれ、配列番号３５４、３５５、３５６、４７７、４７８、及び４７９、
ｄ．それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５０１、５０２、及び５０３、
ｅ．それぞれ、配列番号４１１、４１２、４１３、５３１、５３２、及び５３３、
ｆ．それぞれ、配列番号３４８、３４９、３５０、４７１、４７２、及び４７３、
ｇ．それぞれ、配列番号３６０、３６１、３６２、４８３、４８４、及び４８５、
ｈ．それぞれ、配列番号３６３、３６４、３６５、４８６、４８７、及び４８８、
ｉ．それぞれ、配列番号３６６、３６７、３６８、４８９、４９０、及び４９１、
ｊ．それぞれ、配列番号３６９、３７０、３７１、４９２、４９３、及び４９４、
ｋ．それぞれ、配列番号３８７、３８８、３８９、４９２、４９３、及び４９４、
ｌ．それぞれ、配列番号４０２、４０３、４０４、５２２、５２３、及び５２４、
ｍ．それぞれ、配列番号４０８、４０９、４１０、５２８、５２９、及び５３０、
ｎ．それぞれ、配列番号４２３、４２４、４２５、５４３、５４４、及び５４５、又は
ｏ．それぞれ、配列番号４２６、４２７、４２８、５４６、５４７、及び５４８；
当該抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片が、以下のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、二重特異性抗体又はその抗原結合断片も提供される：
１）それぞれ、配列番号３４２、３４３、３４４、４６５、４６６、及び４６７、又は
２）それぞれ、配列番号３４５、３４６、３４７、４６８、４６９、及び４７０。
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９２、２９１、２６１、２６９、２８０、２５９、２６３、２６４、２６５、２６６、２７２、２７７、２７９、２８４、若しくは２８５と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３３２、３３１、３０２、３１０、３２０、３００、３０４、３０５、３０６、３０７、３１７、３１９、３２４、若しくは３２５と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含み、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２５７若しくは２５８と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号２９８若しくは２９９と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性抗原結合断片は、以下を含む：
ａ．配列番号２９２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号２９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号２６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号２８０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ．配列番号２５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ．配列番号２６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ．配列番号２６４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ．配列番号２６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ．配列番号２６６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ．配列番号２７２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ．配列番号２７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ．配列番号２７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ．配列番号２８４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｏ．配列番号２８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｐ．配列番号２９２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｑ．配列番号２９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｒ．配列番号２６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｓ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｔ．配列番号２８０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｕ．配列番号２５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｖ．配列番号２６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｗ．配列番号２６４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｘ．配列番号２６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｙ．配列番号２６６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｚ．配列番号２７２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ａａ．配列番号２７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂｂ．配列番号２７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃｃ．配列番号２８４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
ｄｄ．配列番号２８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、約１ｎＭ未満のＥＣ５０値でインビトロにおいてＣＤ３３発現細胞でＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する。
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、キメラである、部分的にヒト化されている、又は完全にヒト化されている。
本発明のモノクローナル及び／若しくは二重特異性抗体又はその抗原結合断片をコードしている、単離核酸も提供される。
本発明のモノクローナル及び／若しくは二重特異性抗体又はその抗原結合断片をコードしている、単離核酸を含む、ベクターも提供される。
本発明のモノクローナル及び／若しくは二重特異性抗体又はその抗原結合断片をコードしている、単離核酸を含むベクターを含む、宿主細胞も提供される。
特定の実施形態では、本発明の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、医薬上許容できる担体とを含む、医薬組成物が提供される。特定の実施形態では、本発明の単離二重特異性抗体又はその抗原結合断片と、医薬上許容できる担体とを含む、医薬組成物が提供される。
また、それを必要としている対象における癌を治療する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法も提供される。特定の実施形態では、癌は血液癌である。血液癌は、例えば、白血病、リンパ腫、又は多発性骨髄腫からなる群から選択され得るが、これらに限定されない。特定の実施形態では、血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）であり得る。
また、本発明のモノクローナル若しくは二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する方法も提供される。当該方法は、モノクローナル若しくは二重特異性抗体又は抗原結合断片を生成する条件下で、当該モノクローナル若しくは二重特異性抗体又は抗原結合断片をコードしている核酸を含む細胞を培養することと、当該細胞又は培養物から当該モノクローナル若しくは二重特異性抗体又は抗原結合断片を回収することと、を含む。
また、本発明のモノクローナル及び／若しくは二重特異性抗体又は抗原結合断片を含む、医薬組成物を作製する方法も提供される。当該方法は、モノクローナル抗体及び／若しくは二重特異性抗体又はその抗原結合断片を、医薬上許容できる担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む。
上記の概要、及び本出願の好ましい実施形態の以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むことでより良く理解されるであろう。しかしながら、本出願は、図面に示される実施形態そのものに限定されないことを理解するべきである。
ＣＤ３３×ＣＤ３ Ｔ細胞媒介性細胞傷害アッセイを示す。抗ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ２１９を使用したＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体を、ヒト汎Ｔ細胞及びＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞株と共にインキュベートした。３７℃、５％ＣＯ２で４８時間後、フローサイトメトリーによって総腫瘍細胞傷害を測定した。ＯＭＮＩＲａｔにより同定された抗体候補を示す。 ＣＤ３３×ＣＤ３ Ｔ細胞媒介性細胞傷害アッセイを示す。抗ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ２１９を使用したＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体を、ヒト汎Ｔ細胞及びＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞株と共にインキュベートした。３７℃、５％ＣＯ２で４８時間後、フローサイトメトリーによって総腫瘍細胞傷害を測定した。ＯＭＮＩＭｏｕｓｅにより同定された抗体候補を示す。 新鮮ＡＭＬ患者全血における芽球の細胞傷害及びＴ細胞活性化に対する抗ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ２１９及びＣＤ３Ｂ３７６を使用したＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体のエクスビボ評価を示す。ＣＤ３３二重特異性抗体又はＣＤ３×ヌル対照を使用したＡＭＬ細胞の全細胞傷害のパーセントを示す。Ｆｃ遮断薬は添加しなかった。 新鮮ＡＭＬ患者全血における芽球の細胞傷害及びＴ細胞活性化に対する抗ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ２１９及びＣＤ３Ｂ３７６を使用したＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体のエクスビボ評価を示す。ＣＤ３３二重特異性抗体又はＣＤ３×ヌル対照によって誘導されたＴ細胞活性化を示す。Ｆｃ遮断薬は添加しなかった。 ＣＤ３３×ＣＤ３ Ｔ細胞媒介性細胞傷害アッセイを示す。抗ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ２１９及び抗ＣＤ３Ｂ３７６を使用したＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体を、ヒト汎Ｔ細胞、及びＣＤ３３ ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９変異について、野生型（ＫＧ１、図３Ａ）、ヘテロ接合型（ＳＨ２、図３Ｂ）、又はホモ接合型（ＯＣＩＡＭＬ３、図３Ｃ）のいずれかであるＡＭＬ細胞株と共にインキュベートした。３７℃、５％ＣＯ２で４８時間後、フローサイトメトリーによって総腫瘍細胞傷害を測定した。 ＣＤ３３×ＣＤ３ Ｔ細胞媒介性細胞傷害アッセイを示す。抗ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ２１９及び抗ＣＤ３Ｂ３７６を使用したＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体を、ヒト汎Ｔ細胞、及びＣＤ３３ ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９変異について、野生型（ＫＧ１、図３Ａ）、ヘテロ接合型（ＳＨ２、図３Ｂ）、又はホモ接合型（ＯＣＩＡＭＬ３、図３Ｃ）のいずれかであるＡＭＬ細胞株と共にインキュベートした。３７℃、５％ＣＯ２で４８時間後、フローサイトメトリーによって総腫瘍細胞傷害を測定した。 ＣＤ３３×ＣＤ３ Ｔ細胞媒介性細胞傷害アッセイを示す。抗ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ２１９及び抗ＣＤ３Ｂ３７６を使用したＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体を、ヒト汎Ｔ細胞、及びＣＤ３３ ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９変異について、野生型（ＫＧ１、図３Ａ）、ヘテロ接合型（ＳＨ２、図３Ｂ）、又はホモ接合型（ＯＣＩＡＭＬ３、図３Ｃ）のいずれかであるＡＭＬ細胞株と共にインキュベートした。３７℃、５％ＣＯ２で４８時間後、フローサイトメトリーによって総腫瘍細胞傷害を測定した。 正常健常ヒト全血（Ｎ＝６者のドナー）に外添されたＭＯＬＭ−１３細胞の細胞傷害に対する、ＣＤ３Ｂ２１９又はＣＤ３Ｂ３７６のいずれかと対形成されたＣ３３Ｂ９０４抗体のエクスビボ評価を示す。４８時間目における、ＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体及びそれぞれのヌル×ＣＤ３対照を使用した、ＭＯＬＭ−１３細胞の細胞傷害のパーセント（百分率）を示す。 正常健常ヒト全血（Ｎ＝６者のドナー）に外添されたＭＯＬＭ−１３細胞の細胞傷害に対する、ＣＤ３Ｂ２１９又はＣＤ３Ｂ３７６のいずれかと対形成されたＣ３３Ｂ９０４抗体のエクスビボ評価を示す。４８時間目における、ＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体及びそれぞれのヌル×ＣＤ３対照を使用した、ＣＤ３３＋ＣＤ１４＋単球の細胞傷害のパーセント（百分率）を示す。 ６者の正常カニクイザルドナー由来の新鮮全血における単球の細胞傷害及びＴ細胞活性化に対する抗ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ２１９及びＣＤ３Ｂ３７６を使用したＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体のエクスビボ評価を示す。ＣＤ３３二重特異性抗体又はそのＣＤ３×ヌル対照を使用したＣＤ３３＋ＣＤ１４＋カニクイザル単球の全細胞傷害のパーセントを示す。Ｆｃ遮断薬は添加しなかった。 ６者の正常カニクイザルドナー由来の新鮮全血における単球の細胞傷害及びＴ細胞活性化に対する抗ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ２１９及びＣＤ３Ｂ３７６を使用したＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体のエクスビボ評価を示す。ＣＤ３３二重特異性抗体又はそのＣＤ３×ヌル対照によって誘導されたＴ細胞活性化を示す。Ｆｃ遮断薬は添加しなかった。 Ｔ細胞ヒト化ＮＳＧマウスにおけるＭＯＬＭ−１３ヒトＡＭＬ異種移植片におけるＣ３ＣＢ１８９の抗腫瘍有効性を示す。播種性ＭＯＬＭ−１３腫瘍を生物発光（ＢＬＩ）について週２回撮像し、結果を平均放射輝度（ｐ／ｓ／ｃｍ２／ｓｒ）±ＳＥＭ（ｎ＝８〜１０／群）として提示した。＊処理対対照についてｐ≦０．０００１、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ検定を用いた二元配置分散分析により計算。 Ｔ細胞ヒト化ＮＳＧマウスにおけるＭＯＬＭ−１３ヒトＡＭＬ異種移植片におけるＣ３ＣＢ１８９で処理された動物の生存率を示す。ＭＯＬＭ−１３担持マウスの生存率を、カプラン・マイヤー曲線を使用してグラフで表し、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定によって評価する。＊処理群対対照群についてｐ≦０．０００１。 Ｔ細胞ヒト化ＮＳＧマウスにおけるＭＯＬＭ−１３ヒトＡＭＬ異種移植片におけるＣ３ＣＢ８８の抗腫瘍有効性を示す。播種性ＭＯＬＭ−１３腫瘍を生物発光（ＢＬＩ）について週２回撮像し、結果を平均放射輝度（ｐ／ｓ／ｃｍ２／ｓｒ）±ＳＥＭ（ｎ＝８〜１０／群）として提示した。＊処理対対照についてｐ≦０．０００１、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ検定を用いた二元配置分散分析により計算。 Ｔ細胞ヒト化ＮＳＧマウスにおけるＭＯＬＭ−１３ヒトＡＭＬ異種移植片におけるＣ３ＣＢ８８で処理された動物の生存率を示す。ＭＯＬＭ−１３担持マウスの生存率を、カプラン・マイヤー曲線を使用してグラフで表し、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定によって評価する。＊処理群対対照群についてｐ≦０．０５。 ＭＯＬＭ１３細胞における５つの抗ＣＤ３３抗体の内部移行を検出するための、インビトロにおけるプロテインＡ薬物コンジュゲート細胞生存率アッセイを示す。５つの抗ＣＤ３３抗体全てが、用量依存的に細胞傷害を示した。 低フコースＩｇＧ１抗ＣＤ３３ｍＡｂがＡＤＣＣ活性を媒介することを示す。ＩｇＧ１抗ＣＤ３３ｍＡｂの濃度の増加に応答した、ＭＯＬＭ−１３標的細胞に対するヒトＮＫ細胞のＡＤＣＣ。 低フコースＩｇＧ１抗ＣＤ３３ｍＡｂがＡＤＣＣ活性を媒介することを示す。ＩｇＧ１抗ＣＤ３３ｍＡｂの濃度の増加に応答した、ＭＶ４−１１標的細胞に対するヒトＮＫ細胞のＡＤＣＣ。 二重特異性抗体の表面結合プロファイルを特性評価するために様々な濃度のＣ３ＣＢ１８９で４時間染色したＣＤ３３陽性及びＣＤ３３陰性細胞株を示す。 ６者の健常ドナー由来のＴ細胞を、指定の細胞株を用いてＴ細胞リダイレクションアッセイで試験し、ＦＡＣＳによって細胞傷害のパーセントを求めた。平均±ＳＤをグラフ化する。 Ｃ３ＣＢ１８９は、Ｃ２ドメインに結合し、そのＳＮＰ１２４５９４１９遺伝子型の状態にかかわらず、一次サンプルの細胞傷害を媒介する。ＣＤ３３＋ＫＧ−１及びＣＤ３３−ＫＧ１ΔＣＤ３３細胞株におけるＣＤ３３×ＣＤ３又はＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体を使用したＴ細胞媒介性細胞傷害及び活性化アッセイ。平均±ＳＤをグラフ化する。 Ｃ３ＣＢ１８９は、Ｃ２ドメインに結合し、そのＳＮＰ１２４５９４１９遺伝子型の状態にかかわらず、一次サンプルの細胞傷害を媒介する。Ｔ細胞単独を、漸増濃度のＣ３ＣＢ１８９と共に４８時間インキュベートし、フローサイトメトリーによってＴ細胞活性化を測定した。平均±ＳＤをグラフ化する。 ６者の健常ドナー由来の細胞傷害読み出し値についてのＥＣ２０、ＥＣ５０、及びＥＣ９０を示す中央値を示す。 Ｔ細胞活性化を測定したことを除いて、図１３と同様である。 ６者の健常ドナー由来のＴ細胞活性化読み出し値についての中央ＥＣ２０、ＥＣ５０、及びＥＣ９０値を示したことを除いて、図１５Ａと同様である。 Ｃ３ＣＢ１８９は、２つの確立されたマウスＡＭＬモデルにおいて、インビボで強力な腫瘍活性を媒介する。確立されたＫＧ−１腫瘍を有するＴ細胞ヒト化ＮＳＧマウスに、０．１、０．５、及び１ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９を腹腔内投与したことについて示す。週２回腫瘍体積を測定し、その結果を、各群についての平均腫瘍体積±ＳＥＭとして提示した。 Ｃ３ＣＢ１８９は、２つの確立されたマウスＡＭＬモデルにおいて、インビボで強力な腫瘍活性を媒介する。播種性ＭＯＬＭ−１３Ｌｕｃ細胞を有するＴ細胞ヒト化ＮＳＧマウスに、０．００５、０．０５、及び０．５ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９を腹腔内投与したことについて示す。カプラン・マイヤー生存分析を利用して生存率を求めた。 Ｃ３ＣＢ１８９は、２つの確立されたマウスＡＭＬモデルにおいて、インビボで強力な腫瘍活性を媒介する。生物発光を週２回測定し、９、１３、及び１６日目における生存動物の生物発光を撮像した代表的な画像（ｎ＝３〜５匹の動物の腹側及び背側の図）を示す（死亡により１６日目の対照群はｎ＝３）こと以外、図１６Ｂと同様である。 Ｃ３ＣＢ１８９は、２つの確立されたマウスＡＭＬモデルにおいて、インビボで強力な腫瘍活性を媒介する。マウスに、０．００５及び０．０５ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９を３回投与したことを除いて、図１６Ｂと同様である。骨髄におけるＴ細胞浸潤をフローサイトメトリー分析によって測定し、結果を腫瘍細胞のパーセント（上パネル）又はＣＤ３＋Ｔ細胞のパーセント（下パネル）として提示する。 Ｃ３ＣＢ１８９は、２つの確立されたマウスＡＭＬモデルにおいて、インビボで強力な腫瘍活性を媒介する。骨髄におけるＴ細胞浸潤をＩＨＣ染色によって測定し、結果をＣＤ３３＋腫瘍細胞（上パネル）又はＣＤ８＋Ｔ細胞（下パネル）として提示すること以外、図１６Ｄと同様である。 Ｃ３ＣＢ１８９が、播種性マウスＡＭＬモデルにおいて抗腫瘍応答を媒介することを示す。０日目に腫瘍細胞を移植し、Ｔ細胞を５日目に移植し、Ｘ軸の下のバーによって示すとおり投与を行った。群の生物発光を、平均±ＳＥＭとしてグラフ化する。＊は、Ｃ３ＣＢ１８９による処理とヌル×ＣＤ３対照による処理との間の差が１３日目に有意である（ｐ≦０．０５）ことを示す（１３日目にｎ＝９〜１０／群）。 全血におけるＣＤ３３＋細胞株のＣ３ＣＢ１８９誘導性Ｔ細胞依存性細胞傷害を示す。１０者の健常ドナー由来のＴ細胞（ドナー１者あたり一点）を、指定の細胞株を用いたＴ細胞リダイレクションアッセイで試験した。平均±ＳＤをグラフ化する。ＮＤは、決定することができなかったこと、すなわち、Ｐｒｉｓｍが近似値を提供したか、又は曲線が不明瞭であったかのいずれかであったことを示す。値は、１０者の健常ドナー由来の中央値である。 全血におけるＣＤ３３＋細胞株のＣ３ＣＢ１８９誘導性Ｔ細胞依存性細胞傷害を示す。細胞傷害及びＴ細胞活性化のＥＣ２０、ＥＣ５０、及びＥＣ９０値を示すこと以外、図１８Ａと同様である。ＮＤは、決定することができなかったこと、すなわち、Ｐｒｉｓｍが近似値を提供したか、又は曲線が不明瞭であったかのいずれかであったことを示す。値は、１０者の健常ドナー由来の中央値である。 Ｃ３ＣＢ１８９が、一次患者サンプル由来のＡＭＬ芽球の細胞傷害を媒介することを示す。４８時間後の新鮮ＡＭＬ患者全血中のＣＤ３３＋芽球のＣ３ＣＢ１８９媒介性細胞傷害のエクスビボ評価を示す。各患者サンプルについて個々のＥＣ５０値を示す。 Ｃ３ＣＢ１８９が、一次患者サンプル由来のＡＭＬ芽球の細胞傷害を媒介することを示す。Ｔ細胞活性化を測定したことを除いて、図１９Ａと同様である。 カニクイザル免疫サブセットにおいてＣＤ３３が発現していることを示す。６者の正常健常カニクイザルドナー由来の全血をＣＤ３３に対するモノクローナル抗体で染色し、フローサイトメトリーによって分析した。平均±ＳＤをグラフ化する。 Ｃ３ＣＢ１８９が、カニクイザルＴ細胞を活性化すると共に、ＭＯＬＭ−１３細胞、正常ＣＤ３３＋カニクイザル単球及び好中球の細胞傷害を媒介することを示す。正常健常カニクイザルの全血（ｎ＝６）に外添されたＡＭＬ細胞株ＭＯＬＭ−１３細胞におけるＣ３ＣＢ１８９媒介性細胞傷害のエクスビボ評価。Ｃ３ＣＢ１８９及びヌル×ＣＤ３二重特異性抗体を使用したＭＯＬＭ−１３細胞の細胞傷害、Ｔ細胞活性化、並びにＣＤ３３＋単球及び好中球の細胞傷害のパーセントを示す。平均±ＳＥＭをグラフ化する。 Ｃ３ＣＢ１８９がカニクイザルにおいてＣＤ３３＋白血球の減少を媒介することを示す。カニクイザルを、対照（ビヒクル）、０．０５、０．２、又は１ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９の単回ＩＶ投与で処理した。時間プロファイルに対するＣ３ＣＢ１８９の濃度を示す。 Ｃ３ＣＢ１８９がカニクイザルにおいてＣＤ３３＋白血球の減少を媒介することを示す。カニクイザルを、対照（ビヒクル）、０．０５、０．２、又は１ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９の単回ＩＶ投与で処理した。末梢血中のＴ細胞活性化（ＣＤ８＋中のＣＤ２５＋％）を示す。 Ｃ３ＣＢ１８９がカニクイザルにおいてＣＤ３３＋白血球の減少を媒介することを示す。カニクイザルを、対照（ビヒクル）、０．０５、０．２、又は１ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９の単回ＩＶ投与で処理した。顆粒球（好中球）に対するＣ３ＣＢ１８９の効果を示す。 Ｃ３ＣＢ１８９がカニクイザルにおいてＣＤ３３＋白血球の減少を媒介することを示す。カニクイザルを、対照（ビヒクル）、０．０５、０．２、又は１ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９の単回ＩＶ投与で処理した。単球に対するＣ３ＣＢ１８９の効果を示す。 カニクイザルにおけるＣ３ＣＢ１８９投与後のサイトカイン放出を示す。Ｃ３ＣＢ１８９の単回ＩＶ投与後のカニクイザルにおける平均（ＳＤ）サイトカインレベル。（Ａ）ＩＦＮγ、（Ｂ）ＩＬ−１０、（Ｃ）ＩＬ−２、（Ｄ）ＩＬ−６、（Ｅ）ＭＣＰ、（Ｆ）ＴＮＦα。ＬＬＯＱ値を下回る全てを、プロットする目的及び平均を計算する目的のためにＬＬＯＱの半分として処理した。 Ｃ３ＣＢ１８９がＣ２ドメインに結合し、そのＳＮＰ１２４５９４１９遺伝子型の状態にかかわらず、一次サンプルの細胞傷害を媒介することを示す。Ｖ及びＣ２バインダーｍＡｂについてのＣＤ３３ ＥＣＤタンパク質のＩｇＣドメイン及びＩｇＶドメインにおけるエピトープ領域のＨＤＸマッピング及びその後の説明図を示す。Ｖエピトープ領域を青色に着色し、Ｃ２エピトープ領域を赤色に着色している。 Ｃ３ＣＢ１８９がＣ２ドメインに結合し、そのＳＮＰ１２４５９４１９遺伝子型の状態にかかわらず、一次サンプルの細胞傷害を媒介することを示す。２７ｎＭの二重特異性抗体濃度で実施した、新鮮ＡＭＬ患者全血中のＣＤ３３＋芽球の細胞傷害のエクスビボ評価を示す。平均±ＳＤをグラフ化する。 Ｃ３ＣＢ１８９がＣ２ドメインに結合し、そのＳＮＰ１２４５９４１９遺伝子型の状態にかかわらず、一次サンプルの細胞傷害を媒介することを示す。０．２７ｎＭの二重特異性抗体濃度で評価した、２５者の正常ドナー由来の凍結精製単球のＣ３ＣＢ１８９媒介性細胞傷害を示す。平均±ＳＤをグラフ化する。 ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９の遺伝子型解析結果を示す。細胞株におけるＳＮＰｒｓ１２４５９４１９のＴａｑｍａｎアッセイから得られた遺伝子型解析結果を示す。 ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９の遺伝子型解析結果を示す。一次患者サンプルを遺伝子型解析したことを除いて、図２５Ａと同様である。 ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９の遺伝子型解析結果を示す。健常ドナー由来の凍結単球を、Ｔａｑｍａｎアッセイ及びＳａｎｇｅｒシークエンシングを用いて遺伝子型解析したことを除いて、図２５Ａと同様である。
背景技術において、また、本明細書全体を通じて各種刊行物、論文及び特許を引用又は記載する。これら参照文献の各々はその全容が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれる文書、操作、材料、デバイス、物品などの考察は、本発明のコンテキストを与えるためのものである。かかる考察は、これらの事物のいずれか又は全てが、開示又は特許請求されるいかなる発明に対しても先行技術の一部を構成することを容認するものではない。
特に規定のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。そうでない場合、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書に記載される意味を有するものである。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に文脈上明らかでない限り、複数の指示対象物を含むことに留意すべきである。
特に明記しない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲などのあらゆる数値は、全ての場合において、「約」という用語によって修飾されているものとして理解されるべきである。したがって、数値は、典型的には、記載される値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度は０．９ｍｇ／ｍＬ〜１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％〜１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は０．９％（ｗ／ｖ）〜１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用するとき、数値範囲の使用は、文脈上そうでない旨が明確に示されない限り、その範囲内の整数及び値の分数を含む、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的に含む。
別途記載のない限り、一連の要素に先行する「少なくとも」という用語は、直列の全ての要素を指すと理解されるべきである。当業者であれば、単なる通常の実験手順を使用するだけで、本明細書に記載した特定の手順に対して非常に多くの同等物を認識するか、又は確認することができよう。このような等価物は、本発明によって包含されることが意図される。
本明細書で使用するとき、用語「含む（comprises）」、「含む（comprising）」、「含む（includes）」、「含む（including）」、「有する（has）」、「有する（having）」、「含有する（contains）」、若しくは「含有する（containing）」、又はそれらの任意の他の変形形態は、明記される整数又は整数群を含むが、任意の他の整数又は整数群を除外することを示唆しないと理解され、非独占又は無制限であることが意図される。例えば、一連の要素を含む組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置は、必ずしもそれらの要素のみに限定されるものではなく、明示的に列挙されない、又はそのような組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置に本来存在しない他の要素を含んでもよい。更に、明示的に反対に明記されない限り、「又は」は包括的な又はを指すものであり、排他的な又はを指すものではない。例えば、条件Ａ又はＢは、Ａが真であり（又は存在する）かつＢが偽である（又は存在しない）場合、Ａが偽であり（又は存在しない）かつＢが真である（又は存在する）場合、並びにＡ及びＢの両方が真である（又は存在する）場合、のいずれか１つによって充足される。
本明細書で使用するとき、複数の列挙された要素間の接続的な用語「及び／又は」は、個々の及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものとして理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」によって接続される場合、第１の選択肢は、第２の要素なしに第１の要素が適用可能であることを指す。第２の選択肢は、第１の要素なしの第２の要素が適用可能であることを指す。第３の選択肢は、第１及び第２の要素が一緒に適用可能であることを指す。これらの選択肢のうちのいずれか１つは、本明細書で使用される用語「及び／又は」の要件を満たすことが理解される。選択肢のうちの２つ以上の同時適用性もまた、意味に含まれることが理解され、したがって、用語「及び／又は」の要件を満たす。
本明細書で使用するとき、用語「からなる（consists of）」又は「からなる（consist of）」若しくは「からなる（consisting of）」などの変形は、明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用するとき、任意の列挙された整数又は整数群を包含するが、追加の整数又は整数群が、指定の方法、構造、又は組成物に追加されることはないことを示す。
本明細書で使用するとき、用語「から本質的になる（consists essentially of）」又は「から本質的になる（consist essentially of）」若しくは「から本質的になる（consisting essentially of）」などの変形は、明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用するとき、任意の列挙された整数又は整数群を包含し、任意選択で、指定の方法、構造、又は組成物の基本的又は新規の特性を実質的に変化させない任意の列挙された整数又は整数群も包含することを示す。Ｍ．Ｐ．Ｅ．Ｐ．§２１１１．０３を参照。
本明細書で使用される場合、「対象」は、任意の動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。本明細書で使用するとき、用語「哺乳動物」とは、あらゆる哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、これらに限定されるものではないが、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ヒトなど、より好ましくはヒトが挙げられる。
好ましい発明の構成要素の寸法又は特徴を指すときに本明細書で使用される用語「約」、「およそ」、「概ね」、「実質的に」などの用語は、当業者には理解されるように、記載の寸法／特徴が厳密な境界又はパラメータではなく、機能的に同じ又は類似する、それらからのわずかな相違を除外するものではないことを示すことも理解すべきである。最小値では、数値パラメータを含むこのような参照は、当該技術分野において受け入れられている数学的及び工業的原理（例えば、四捨五入、測定、又は他の系統的誤差、製造公差など）を使用すると、最小有効数字は変化しない変形形態を含むであろう。
「同一」又は「同一性」パーセントという用語は、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列（例えば、抗ＣＤ３３抗体及びそれをコードしているポリヌクレオチド、抗ＣＤ３３抗ＣＤ３二重特異性抗体及びそれをコードしているポリヌクレオチド、ＣＤ３３ポリペプチド及びそれをコードしているＣＤ３３ポリヌクレオチド）に関連して、以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用して又は目視検査によって測定したとき、一致が最大になるように比較及びアラインメントした場合に同じであるか、又は特定のパーセントの同じであるアミノ酸残基若しくはヌクレオチドを有する２つ以上の配列又はサブ配列を指す。
配列比較のために、典型的には、１つの配列は、試験配列が比較される参照配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列がコンピュータに入力され、必要に応じて、サブシーケンス座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。
比較のための配列の最適なアライメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アライメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）、又は目視検査（全般的には、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ａ ｊｏｉｎｔ ｖｅｎｔｕｒｅ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，（１９９５ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）（Ａｕｓｕｂｅｌ）を参照）によって行うことができる。
配列同一性及び配列類似性のパーセントを決定するのに好適なアルゴリズムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２にそれぞれ記載されているＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ分析を行うソフトウェアは、国立生物工学情報センター（National Center for Biotechnology Information）を通じて公的に入手可能である。このアルゴリズムは、最初に、データベース配列における同じ長さのワードとアラインメントしたときに一致するか、又はいくつかの正の値の閾値スコアＴを満たすかのいずれかの、クエリー配列における長さＷの短いワードを同定することによって、高スコア配列対（ＨＳＰ）を同定することを含む。Ｔは、隣接ワードスコア閾値（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．、上記）と称される。これらの初期隣接ワードヒットは、それを含むより長いＨＳＰを見つけるための検索を開始するためのシードとして機能する。次いで、累積アラインメントスコアを増加させることができる限り、各配列に沿ってワードヒットを両方向に延長する。
ヌクレオチド配列については、パラメータＭ（一致する残基の対についてのリワードスコア；常に＞０）及びＮ（不一致の残基についてのペナルティスコア；常に＜０）を使用して累積スコアを計算する。アミノ酸配列については、スコアリングマトリックスを使用して累積スコアを計算する。累積アラインメントスコアがその最大獲得値から量Ｘだけ低下したとき、１つ以上の負のスコアリング残基のアラインメントの蓄積により、累積スコアがゼロ以下になったとき、又はいずれかの配列の末端に達したときに、各方向におけるワードヒットの延長を停止する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ、及びＸが、アライメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）１１、期待値１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、及び両方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）３、期待値（Ｅ）１０、及びＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスを使用する（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ＆Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５（１９８９）を参照）。
配列同一性パーセントを計算することに加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計解析も行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３−５７８７（１９９３）を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致が偶然に生じる確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が、約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満である場合、参照配列に類似しているとみなされる。
２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同一であることの更なる指標は、以下に記載されるように、第１の核酸によりコードされるポリペプチドが、第２の核酸によりコードされるポリペプチドと免疫学的に交差反応性であることである。したがって、ポリペプチドは、典型的には、第２のポリペプチドと実質的に同一であり、例えば、２つのペプチドは保存的置換によってのみ異なる。２つの核酸配列が実質的に同一である別の指標は、以下に記載されるように、２つの分子がストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。
抗体
本発明は、全般的に、単離抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片、当該抗体をコードしている核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該抗体を含む組成物に関する。本発明は、更に、単離抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片、当該抗体をコードしている核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該二重特異性抗体を含む組成物に関する。抗体を作製する方法、及び癌を含む疾患を治療するために抗体を使用する方法も提供される。本発明の抗体は、ＣＤ３３及び／又はＣＤ３に対する高親和性結合、ＣＤ３３及び／又はＣＤ３に対する高い特異性、並びに単独で又は他の抗癌療法と組み合わせて投与されたときに癌を治療又は予防する能力を含むがこれらに限定されない、１つ以上の望ましい機能特性を有する。
全般的な態様では、本発明は、ＣＤ３３に特異的に結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。特定の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ３３のＣ２ドメインに結合する。特定の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ３３のＶドメインに結合する。
本明細書で使用するとき、用語「抗体」は、広義で使用され、免疫グロブリン、又はモノクローナル又はポリクローナルである、ヒト、ヒト化、複合、及びキメラ抗体を含む抗体分子並びに抗体断片を含む。全般的には、抗体とは、特定の抗原に対する結合特異性を示すタンパク質又はペプチド鎖である。抗体の構造は、公知である。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて５つの主なクラス（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ）に割り当てることができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。したがって、本発明の抗体は、５つの主要なクラス又は対応する下位クラスのいずれかのものであることができる。本発明の抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４であることが好ましい。脊椎動物種の抗体軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、すなわちκ及びλのうちの一方に割り当てることができる。したがって、本発明の抗体は、κ又はλ軽鎖定常ドメインを含有することができる。特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、ラット又はヒト抗体由来の重鎖及び／又は軽鎖定常領域を含む。重及び軽定常ドメインに加えて、抗体は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域からなる抗原結合領域を含有し、これらのそれぞれは３つのドメイン（すなわち相補性決定領域１〜３；ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含有する。軽鎖可変領域ドメインは、あるいはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＲＤ３と称され、重鎖可変領域ドメインは、あるいはＨＣＤＲ１、ＨＣＲＤ２、及びＨＣＤＲ３と称される。
本明細書で使用するとき、用語「単離抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す（例えば、ＣＤ３３に特異的に結合する単離抗体は、ＣＤ３３に結合しない抗体を実質的に含まない）。更に、単離抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない。
本明細書で使用するとき、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量に存在する可能性のある自然発生変異を除いて同一である。本発明のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ技術、単一リンパ球遺伝子クローニング技術、又は組換えＤＮＡ法によって作製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウス又はラットから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマによって生成され得、ヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する。
本明細書で使用するとき、用語「抗原結合断片」は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄａｂ）ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部から形成される多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片などの抗体断片を指す。抗原結合断片は、親抗体又は親抗体断片が結合する同じ抗原に結合することができる。特定の実施形態によれば、抗原結合断片は、軽鎖可変領域、軽鎖定常領域、及び重鎖のＦｄ断片を含む。他の特定の実施形態によれば、抗原結合断片はＦａｂ及びＦ（ａｂ’）を含む。
本明細書で使用するとき、用語「単鎖抗体」は、約１５〜約２０個のアミノ酸の短いペプチドによって接続される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、この分野における従来の単鎖抗体を指す。本明細書で使用するとき、用語「単一ドメイン抗体」は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含むか、又は重鎖可変領域のみを含む、この分野における従来の単一ドメイン抗体を指す。
本明細書で使用するとき、用語「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体、又は当該技術分野において既知の任意の技術を用いて作製される、ヒトによって産生される抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。ヒト抗体のこの定義は、インタクトな若しくは完全長の抗体、その断片、並びに／又は少なくとも１つのヒト重鎖及び／若しくは軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。
本明細書で使用するとき、用語「ヒト化抗体」とは、抗体の抗原結合特性が保持されるが、人体における抗原の抗原性が低下するように、改変により配列相同性をヒト抗体のそれに対して増加させた非ヒト抗体を意味する。
本明細書で使用するとき、用語「キメラ抗体」は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２つ以上の種に由来する抗体を指す。軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、多くの場合、所望の特異性、親和性、及び能力を有する１つの種の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体の可変領域に対応し、一方で定常領域は、その種における免疫応答の誘発を回避するために、別の種の哺乳動物（例えば、ヒト）に由来する抗体の配列に対応する。
本明細書で使用するとき、用語「多重特異性抗体」は、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む抗体を指し、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）上にある。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、重複するか、又は実質的に重複する。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、重複しないか、又は実質的に重複しない。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（又は異なる多量体タンパク質のサブユニット）上にある。ある実施形態では、多重特異性抗体は、第３、第４、又は第５の免疫グロブリン可変ドメインを含む。ある実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分枝、又は四重特異性抗体分子である。
本明細書で使用するとき、用語「二重特異性抗体」は、２つ以下のエピトープ又は２つ以下の抗原に結合する多重特異性抗体を指す。二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列、及び第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列によって特徴付けられる。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）上にある。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、重複するか、又は実質的に重複する。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（又は異なる多量体タンパク質のサブユニット）上にある。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列とを含む。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片とを含む。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ又はその断片と、第２のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ又はその断片とを含む。ある実施形態では、第１のエピトープはＣＤ３３に位置し、第２のエピトープはＣＤ３に位置する。ある実施形態では、第１のエピトープはＣＤ３３に位置し、第２のエピトープは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＣＴＬＡ−４、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３、及び／又は他の腫瘍関連免疫抑制因子若しくは表面抗原に位置する。
本明細書で使用するとき、用語「ＣＤ３３」は、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（シグレック）ファミリーのメンバーである６７ｋＤの１回膜貫通糖タンパク質を指す。ＣＤ３３は、Ｓｉｇｌｅｃ−３、ｇｐ６７、又はｐ６７としても知られている。ＣＤ３３の構造は、シアル酸結合を媒介するアミノ末端ＶセットＩｇ様ドメイン（ＣＤ３３のエキソン２によりコードされている）と、その細胞外部分におけるＣ２セットＩＧ様ドメイン（エキソン４によりコードされている）からなる（Ｌａｓｚｌｏ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。ＣＤ３３ ＲＮＡのオルタナティブスプライシングにより、ＶセットＩｇ様ドメインは欠失しているが、Ｃ２セットＩｇ様ドメインは保持されている、細胞表面で発現するより短いアイソフォームが生じ得る（Ｌａｓｚｌｏ，Ｅｓｔｅｙ，＆Ｗａｌｔｅｒ，２０１４；Ｌａｓｚｌｏ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。最近の研究によって、一塩基多型型（ＳＮＰ）ｒｓ１２４５９４１９がＡＭＬ集団の約５０％に存在し、それによってＣＤ３３のエキソン２がスキップされた結果、ＣＤ３３のＶドメインが欠失することが示されるまで（Ｌａｍｂａ ｅｔ ａｌ．，２０１７）、このスプライシングプロセスの生物学的関連性はほとんど不明であった。完全長ヒトＣＤ３３は、Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ２０１３８（配列番号１）によって提供される。
本明細書で使用するとき、「ＣＤ３３に特異的に結合する」抗体とは、ＣＤ３３、好ましくはヒトＣＤ３３、好ましくはＣＤ３３のＣ２ドメインに対し、１×１０−７Ｍ以下、好ましくは１×１０−８Ｍ以下、より好ましくは５×１０−９Ｍ以下、１×１０−９Ｍ以下、５×１０−１０Ｍ以下、又は１×１０−１０Ｍ以下のＫＤで結合する抗体を指す。用語「ＫＤ」は、Ｋｄ対Ｋａ（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）の比から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指す。抗体のＫＤ値は、本開示を考慮して当該技術分野における方法を用いて決定することができる。例えば、抗体のＫＤは、表面プラズモン共鳴を使用することによって、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムのバイオセンサーシステムを使用することなどによって、又はＯｃｔｅｔ ＲＥＤ９６システムなどのバイオレイヤーインターフェロメトリー技術を使用することによって、求めることができる。
抗体のＫＤの値が小さいほど、抗体が標的抗原に結合する親和性が高い。
特定の態様によれば、本発明は、以下のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって：
ａ．それぞれ、配列番号４４７、４４８、４４９、５６７、５６８、及び５６９、
ｂ．それぞれ、配列番号４４４、４４５、４４６、５６４、５６５、及び５６６、
ｃ．それぞれ、配列番号３５４、３５５、３５６、４７７、４７８、及び４７９、
ｄ．それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５０１、５０２、及び５０３、
ｅ．それぞれ、配列番号４１１、４１２、４１３、５３１、５３２、及び５３３、
ｆ．それぞれ、配列番号３４８、３４９、３５０、４７１、４７２、及び４７３、
ｇ．それぞれ、配列番号３６０、３６１、３６２、４８３、４８４、及び４８５、
ｈ．それぞれ、配列番号３６３、３６４、３６５、４８６、４８７、及び４８８、
ｉ．それぞれ、配列番号３６６、３６７、３６８、４８９、４９０、及び４９１、
ｊ．それぞれ、配列番号３６９、３７０、３７１、４９２、４９３、及び４９４、
ｋ．それぞれ、配列番号３８７、３８８、３８９、４９２、４９３、及び４９４、
ｌ．それぞれ、配列番号４０２、４０３、４０４、５２２、５２３、及び５２４、
ｍ．それぞれ、配列番号４０８、４０９、４１０、５２８、５２９、及び５３０、
ｎ．それぞれ、配列番号４２３、４２４、４２５、５４３、５４４、及び５４５、
ｏ．それぞれ、配列番号４２６、４２７、４２８、５４６、５４７、及び５４８、
ｐ．それぞれ、配列番号３５１、３５２、３５３、４７４、４７５、及び４７６、
ｑ．それぞれ、配列番号３５７、３５８、３５９、４８０、４８１、及び４８２、
ｒ．それぞれ、配列番号３７２、３７３、３７４、４９５、４９６、及び４９７、
ｓ．それぞれ、配列番号３７５、３７６、３７７、４９８、４９９、及び５００、
ｔ．それぞれ、配列番号３８１、３８２、３８３、５０４、５０５、及び５０６、
ｕ．それぞれ、配列番号３８４、３８５、３８６、５０７、５０８、及び５０９、
ｖ．それぞれ、配列番号３９０、３９１、３９２、５１０、５１１、及び５１２、
ｗ．それぞれ、配列番号３９３、３９４、３９５、５１３、５１４、及び５１５、
ｘ．それぞれ、配列番号３９６、３９７、３９８、５１６、５１７、及び５１８、
ｙ．それぞれ、配列番号３９９、４００、４０１、５１９、５２０、及び５２１、
ｚ．それぞれ、配列番号４０５、４０６、４０７、５２５、５２６、及び５２７、
ａａ．それぞれ、配列番号４１４、４１５、４１６、５３４、５３５、及び５３６、
ｂｂ．それぞれ、配列番号４１７、４１８、４１９、５３７、５３８、及び５３９、
ｃｃ．それぞれ、配列番号４２０、４２１、４２２、５４０、５４１、及び５４２、
ｄｄ．それぞれ、配列番号４２９、４３０、４３１、５４９、５５０、及び５５１、
ｅｅ．それぞれ、配列番号４３２、４３３、４３４、５５２、５５３、及び５５４、
ｆｆ．それぞれ、配列番号４３５、４３６、４３７、５５５、５５６、及び５５７、
ｇｇ．それぞれ、配列番号４３８、４３９、４４０、５５８、５５９、及び５６０、
ｈｈ．それぞれ、配列番号４４１、４４２、４４３、５６１、５６２、及び５６３、
ｉｉ．それぞれ、配列番号４５０、４５１、４５２、５７０、５７１、及び５７２、
ｊｊ．それぞれ、配列番号４５３、４５４、４５５、５７３、５７４、及び５７５、
ｋｋ．それぞれ、配列番号４５６、４５７、４５８、５７６、５７７、及び５７８、
ｌｌ．それぞれ、配列番号４５９、４６０、４６１、５７９、５８０、及び５８１、
ｍｍ．それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５８２、５８３、及び５８４、
ｎｎ．それぞれ、配列番号４１４、４１５、４１６、５８５、５８６、及び５８７、又は
ｏｏ．それぞれ、配列番号４２９、４３０、４３１、４８０、４８１、及び４８２；
ＣＤ３３、好ましくはヒトＣＤ３３に特異的に結合する、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
別の特定の態様によれば、本発明は、配列番号２５９〜２９６のうちの１つと少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３００〜３３８のうちの１つと少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。好ましい一実施形態によれば、本発明の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号２５９〜２９６のうちの１つと少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３００〜３３８のうちの１つと少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
別の特定の態様によれば、本発明は、以下を含む、本発明の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する：
ａ．配列番号２９２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号２９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号２６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号２８０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ．配列番号２５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ．配列番号２６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ．配列番号２６４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ．配列番号２６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ．配列番号２６６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ．配列番号２７２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ．配列番号２７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ．配列番号２７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ．配列番号２８４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｏ．配列番号２８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｐ．配列番号２６０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｑ．配列番号２６２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｒ．配列番号２６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｓ．配列番号２６８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｔ．配列番号２７０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｕ．配列番号２７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｖ．配列番号２７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｗ．配列番号２７４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｘ．配列番号２７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｙ．配列番号２７６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｚ．配列番号２７８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ａａ．配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂｂ．配列番号２８２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃｃ．配列番号２８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｄｄ．配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｅｅ．配列番号２８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｆｆ．配列番号２８８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｇｇ．配列番号２８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｈｈ．配列番号２９０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｉｉ．配列番号２９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｊｊ．配列番号２９４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｋｋ．配列番号２９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｌｌ．配列番号２９６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｍｍ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｎｎ．配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
ｏｏ．配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３４８、３４９、３５０、４７１、４７２、及び４７３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２５９と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３００と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３５１、３５２、３５３、４７４、４７５、及び４７６のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６０と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０１と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３５４、３５５、３５６、４７７、４７８、及び４７９のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６１と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０２と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３５７、３５８、３５９、４８０、４８１、及び４８２のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６２と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０３と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３６０、３６１、３６２、４８３、４８４、及び４８５のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６３と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０４と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３６３、３６４、３６５、４８６、４８７、及び４８８のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６４と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０５と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３６６、３６７、３６８、４８９、４９０、及び４９１のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６５と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０６と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３６９、３７０、３７１、４９２、４９３、及び４９４のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６６と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３７２、３７３、３７４、４９５、４９６、及び４９７のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６７と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０８と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３７５、３７６、３７７、４９８、４９９、及び５００のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６８と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０９と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５０１、５０２、及び５０３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６９と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１０と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３８１、３８２、３８３、５０４、５０５、及び５０６のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７０と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１１と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３８４、３８５、３８６、５０７、５０８、及び５０９のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７１と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１２と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３８７、３８８、３８９、４９２、４９３、及び４９４のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７２と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３９０、３９１、３９２、５１０、５１１、及び５１２のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７３と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１３と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３９３、３９４、３９５、５１３、５４、及び５１５のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７４と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１４と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３９６、３９７、３９８、５１６、５１７、及び５１８のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７５と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１５と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３９９、４００、４０１、５１９、５２０、及び５２１のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７６と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１６と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４０２、４０３、４０４、５２２、５２３、及び５２４のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７７と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１７と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４０５、４０６、４０７、５２５、５２６、及び５２７のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７８と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１８と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４０８、４０９、４１０、５２８、５２９、及び５３０のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７９と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１９と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４１１、４１２、４１３、５３１、５３２、及び５３３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８０と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２０と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４１４、４１５、４１６、５３４、５３５、及び５３６のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８１と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２１と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４１７、４１８、４１９、５３７、５３８、及び５３９のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８２と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２２と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４２０、４２１、４２２、５４０、５４１、及び５４２のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８３と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２３と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４２３、４２４、４２５、５４３、５４４、及び５４５のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８４と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２４と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４２６、４２７、４２８、５４６、５４７、及び５４８のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８５と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２５と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４２９、４３０、４３１、５４９、５５０、及び５５１のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８６と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２６と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４３２、４３３、４３４、５５２、５５３、及び５５４のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８７と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２７と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４３５、４３６、４３７、５５５、５５６、及び５５７のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８８と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２８と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４３８、４３９、４４０、５５８、５５９、及び５６０のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８９と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２９と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４４１、４４２、４４３、５６１、５６２、及び５６３のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９０と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３０と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４４４、４４５、４４６、５６４、５６５、及び５６６のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９１と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３１と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４４７、４４８、４４９、５６７、５６８、及び５６９のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９２と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３２と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４５０、４５１、４５２、５７０、５７１、及び５７２のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９３と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３３と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４５３、４５４、４５５、５７３、５７４、及び５７５のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９４と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３４と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４５６、４５７、４５８、５７６、５７７、及び５７８のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９５と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３５と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４５９、４６０、４６１、５７９、５８０、及び５８１のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９６と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３６と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２９６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５８２、５８３、及び５８４のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６９と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３７と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４１４、４１５、４１６、５８５、５８６、及び５８７のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８１と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３８と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４２９、４３０、４３１、４８０、４８１、及び４８２のポリペプチド配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。別の実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８６と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０３と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
また、抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片と、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片とを含む、抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片も本明細書に提供される。特定の実施形態では、抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片は、本発明の抗ＣＤ３３モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であり、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片は、（１）それぞれ、配列番号３４２、３４３、３４４、４６５、４６６、及び４６７、又は（２）それぞれ、配列番号３４５、３４６、３４７、４６８、４６９、及び４７０のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
「ＣＤ３」という用語は、ＣＤ３タンパク質マルチサブユニット複合体を指す。ＣＤ３はまた、「表面抗原分類３」と称される場合もある。ＣＤ３タンパク質マルチサブユニット複合体は、ＣＤ３γ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０９６９３）（配列番号５８８）、ＣＤ３δ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０４２３４）（配列番号５８９）、２本のＣＤ３ε鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０７７６６）（配列番号５９０）、並びにＴ細胞受容体α及びβ鎖に会合する１本のＣＤ３ζ鎖ホモ二量体（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ２０９６３）（配列番号５９１）を含む、６本の特有のポリペプチド鎖で構成される。ＣＤ３は、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋ナイーブＴ細胞）、またＴヘルパー細胞（ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞）の両方を活性化する機能を有するＴ細胞共受容体である。ＣＤ３マルチサブユニット複合体のＣＤ３γ、ＣＤ３δ、及びＣＤ３εポリペプチド鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及びＣＤ３ζ鎖と会合して、Ｔリンパ球において活性化シグナルを生成し、ＣＤ３とＴ細胞受容体との間の相互作用が、ＴＣＲ複合体を構成する。用語「ＣＤ３」は、特に断りのない限り、細胞（Ｔ細胞を含む）で天然に発現するか、又はそのポリペプチドをコードしている遺伝子若しくはｃＤＮＡがトランスフェクトされた細胞上で発現し得る任意のＣＤ３変異体、アイソフォーム、及び種間ホモログを含み、好ましくは、「ＣＤ３」は、ヒトＣＤ３タンパク質マルチサブユニット複合体である。
ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介したＣＤ３３を発現している癌細胞へのＴリンパ球のリダイレクションは、魅力的な代替治療アプローチとなる。Ｔリンパ球のＴＣＲ／ＣＤ３複合体は、ガンマ（γ）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ゼータ（ζ）、及びエータ（η）に標識化されたＣＤ３の不変性サブユニットと細胞表面で共発現した、ＴＣＲアルファ（α）／ベータ（β）又はＴＣＲガンマ（γ）／デルタ（δ）ヘテロ二量体のいずれかからなる。ヒトＣＤ３εは、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０７７６６（ＣＤ３Ｅ＿ＨＵＭＡＮ）に記載されている。当該技術分野で報告されている抗ＣＤ３ε抗体は、ＳＰ３４であり（Ｙａｎｇ ＳＪ，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９８６）１３７；１０９７−１１００）、これは、霊長類及びヒトＣＤ３の両方と反応し、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから市販されている。当該技術分野において報告されている追加の抗ＣＤ３抗体としては、ＵＣＨＴ−１（国際公開第２００００４１４７４号を参照）及びＢＣ−３（Ｆｒｅｄ Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ；ｕｓｅｄ ｉｎ Ｐｈａｓｅ Ｉ／ＩＩ ｔｒｉａｌｓ ｏｆ ＧｖＨＤ，Ａｎａｓｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５４：８４４（１９９２））が挙げられる。ＳＰ３４とＵＣＨＴ−１及びＢＣ−３との間の違いは、ＳＰ−３４がＣＤ３のε鎖上に単独で存在するエピトープを認識する（Ｓａｌｍｅｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：３０４７を参照されたい）のに対して、ＵＣＨＴ−１及びＢＣ−３はε鎖及びγ鎖の両方が寄与するエピトープを認識するという点である。ＳＰ３４と同じ配列を有する抗体配列は、少なくとも国際公開第２００８１１９５６５号、同第２００８１１９５６６号、同第２００８１１９５６７号、同第２０１００３７８３６号、同第２０１００３７８３７号、及び同第２０１００３７８３８号に記載されている。ＳＰ３４ ＶＨと９６％同一である抗体配列は、米国特許第８２３６３０８号（国際公開第２００７０４２２６１号）に記載されている。
これまでに種々のフォーマットの二重特異性抗体が記載されており、近年ではＣｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｂａｔｙ（２００９）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ Ｄｅｖ １２：２７６によりレビューされている。
一部の実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、本発明において記載されたもの等の制御されたＦａｂアーム交換により得られたダイアボディ、クロスボディ、又は二重特異性抗体である。
一部の実施形態では、二重特異性抗体には、ヘテロ二量体化する相補性ＣＨ３ドメインを有するＩｇＧ様分子、組換えＩｇＧ様二重標的化分子（この分子の２つの側面はそれぞれ少なくとも２種類の抗体のＦａｂフラグメント又はＦａｂフラグメントの一部を含有する）、ＩｇＧ融合分子（全長ＩｇＧ抗体がエクストラＦａｂフラグメント又はＦａｂフラグメントの一部に融合されている）、Ｆｃ融合分子（一本鎖Ｆｖ分子又は安定化ディアボディが重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域又はその一部に融合されている）、Ｆａｂ融合分子（異なるＦａｂフラグメントが互いに融合されている）、ＳｃＦｖ−及びダイアボディ−に基づく抗体及び重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）（異なる一本鎖Ｆｖ分子又は異なるディアボディ若しくは異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）が互いに又は別のタンパク質若しくは担体分子に融合されている）が挙げられる。
一部の実施形態では、相補性ＣＨ３ドメイン分子を有するＩｇＧ様分子には、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的に調整されたもの（Ａｍｇｅｎ）、ＬＵＺ−Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ストランドを交換し操作したドメインボディ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、並びにＤｕｏＢｏｄｙ（Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ）が挙げられる。
一部の実施形態では、組換えＩｇＧ様二重標的分子には、Ｄｕａｌ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＴ）−Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、Ｔｗｏ−ｉｎ−ｏｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｄ Ｍａｂｓ（Ｋａｒｍａｎｏｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ−Ｓｔａｒ）、及びＣｏｖＸ−ｂｏｄｙ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられる。
一部の実施形態では、ＩｇＧ融合分子には、Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ（ＤＶＤ）−Ｉｇ（Ａｂｂｏｔｔ）、ＩｇＧ−ｌｉｋｅ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（ＩｎｎＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、並びにＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。
一部の実施形態では、Ｆｃ融合分子には、ＳｃＦｖ／Ｆｃ Ｆｕｓｉｏｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、Ｄｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｆｃ−ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、及びＤｕａｌ（ＳｃＦｖ）．ｓｕｂ．２−Ｆａｂ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ−−Ｃｈｉｎａ）が挙げられる。
一部の実施形態では、Ｆａｂ融合二重特異性抗体には、Ｆ（ａｂ）２（Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ）、Ｄｕａｌ−Ａｃｔｉｏｎ ｏｒ Ｂｉｓ−Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ−ａｎｄ−Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）、及びＦａｂ−Ｆｖ（ＵＣＢ−Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）が挙げられる。ＳｃＦｖ−、ダイアボディ−に基づく抗体及びドメイン抗体には、Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｇａｇｅｒ（ＢＩＴＥ）（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、Ｔａｎｄｅｍ Ｄｉａｂｏｄｙ（Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、Ｄｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、Ｓｉｎｇｌｅ−ｃｈａｉｎ Ｄｉａｂｏｄｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、ＴＣＲ−ｌｉｋｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ＡＩＴ，ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃｓ）、Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ ＳｃＦｖ Ｆｕｓｉｏｎ（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）、及びＣＯＭＢＯＤＹ（Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、二重標的指向性ナノボディ（dual targeting nanobody）（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的指向性の重鎖のみのドメイン抗体（dual targeting heavy chain only domain antibody）が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の完全長の二重特異性抗体は、例えば、２つの単一特異的二価抗体間でのＦａｂアーム交換（又は半分子交換）を用い、インビトロにおいて、無細胞環境下又は共発現使用下のいずれかで、別個の特異性を有する２つの抗体半分子を好ましくヘテロ二量体形成させるべく各半分子における重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することにより生成されてもよい。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離−会合の結果である。単一特異的親抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合は減少する。単一特異的親抗体のうち１つについて生じる遊離システインは、第２の単一特異的親抗体分子のシステイン残基と重鎖内ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインは、解離−会合により開放及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体形成よりヘテロ二量体形成を好むように改変されてもよい。得られる生成物は、各々別個のエピトープ、すなわち、ＣＤ３３上のエピトープ及びＣＤ３上のエピトープに結合する２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異性抗体である。
本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体形成」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体形成」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
完全長二重特異性抗体を生成するのに「ノブ−イン−ホール」戦略（例えば、国際公開第２００６／０２８９３６号を参照）を使用してもよい。簡潔に述べると、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸は、ヘテロ二量体形成を促進するために、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置において変異され得る。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入され、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換の対は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）。
他の戦略、例えば、１つのＣＨ３表面における正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面における負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を使用する重鎖ヘテロ二量体形成の促進が、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号、米国特許出願公開第２０１０／０２８６３７号、又は米国特許出願公開第２０１１／０１２３５３２号に記載されるように使用されてもよい。他の戦略では、ヘテロ二量体形成は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は米国特許出願公開第２０１３／０１９５８４９号に記載されるように、下記置換：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ Ｋ４０９Ｆ Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）により促進されてもよい。
上記の方法に加えて、本発明の二重特異性抗体は、国際公開第２０１１／１３１７４６号に記載の方法に従って、２つの単一特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化させる還元条件下において２つの親単一特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成することによって、無細胞環境でインビトロにおいて生成されてもよい。この方法では、第１の単一特異性二価抗体（例えば、抗ＣＤ３３抗体）及び第２の単一特異性二価抗体（例えば、抗ＣＤ３抗体）は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインに特定の置換を有するように遺伝子操作され、これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合を異性化させるのに十分な還元条件下において共にインキュベートされ、それにより、Ｆａｂアーム交換により二重特異性抗体が生成される。インキュベート条件は、最適には、非還元条件に戻されてもよい。使用され得る例示的な還元剤は、２−メルカプトエチルアミン（２−ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ−システイン、及びβ−メルカプトエタノールであり、好ましくは、２−メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度において、少なくとも２５ｍＭの２−ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５〜８、例えば、ｐＨ７．０又はｐＨ７．４において、少なくとも９０分のインキュベートが使用されてもよい。
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片は、以下のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み：
ａ．それぞれ、配列番号４４７、４４８、４４９、５６７、５６８、及び５６９、
ｂ．それぞれ、配列番号４４４、４４５、４４６、５６４、５６５、及び５６６、
ｃ．それぞれ、配列番号３５４、３５５、３５６、４７７、４７８、及び４７９、
ｄ．それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５０１、５０２、及び５０３、
ｅ．それぞれ、配列番号４１１、４１２、４１３、５３１、５３２、及び５３３、
ｆ．それぞれ、配列番号３４８、３４９、３５０、４７１、４７２、及び４７３、
ｇ．それぞれ、配列番号３６０、３６１、３６２、４８３、４８４、及び４８５、
ｈ．それぞれ、配列番号３６３、３６４、３６５、４８６、４８７、及び４８８、
ｉ．それぞれ、配列番号３６６、３６７、３６８、４８９、４９０、及び４９１、
ｊ．それぞれ、配列番号３６９、３７０、３７１、４９２、４９３、及び４９４、
ｋ．それぞれ、配列番号３８７、３８８、３８９、４９２、４９３、及び４９４、
ｌ．それぞれ、配列番号４０２、４０３、４０４、５２２、５２３、及び５２４、
ｍ．それぞれ、配列番号４０８、４０９、４１０、５２８、５２９、及び５３０、
ｎ．それぞれ、配列番号４２３、４２４、４２５、５４３、５４４、及び５４５、
ｏ．それぞれ、配列番号４２６、４２７、４２８、５４６、５４７、及び５４８、
ｐ．それぞれ、配列番号３５７、３５８、３５９、４８０、４８１、及び４８２、
ｑ．それぞれ、配列番号３７２、３７３、３７４、４９５、４９６、及び４９７、
ｒ．それぞれ、配列番号３７５、３７６、３７７、４９８、４９９、及び５００、
ｓ．それぞれ、配列番号３８１、３８２、３８３、５０４、５０５、及び５０６、
ｔ．それぞれ、配列番号３８４、３８５、３８６、５０７、５０８、及び５０９、
ｕ．それぞれ、配列番号３９０、３９１、３９２、５１０、５１１、及び５１２、
ｖ．それぞれ、配列番号３９３、３９４、３９５、５１３、５１４、及び５１５、
ｗ．それぞれ、配列番号３９６、３９７、３９８、５１６、５１７、及び５１８、
ｘ．それぞれ、配列番号３９９、４００、４０１、５１９、５２０、及び５２１、
ｙ．それぞれ、配列番号４０５、４０６、４０７、５２５、５２６、及び５２７、
ｚ．それぞれ、配列番号４１４、４１５、４１６、５３４、５３５、及び５３６、
ａａ．それぞれ、配列番号４１７、４１８、４１９、５３７、５３８、及び５３９、
ｂｂ．それぞれ、配列番号４２０、４２１、４２２、５４０、５４１、及び５４２、
ｃｃ．それぞれ、配列番号４２９、４３０、４３１、５４９、５５０、及び５５１、
ｄｄ．それぞれ、配列番号４３２、４３３、４３４、５５２、５５３、及び５５４、
ｅｅ．それぞれ、配列番号４３５、４３６、４３７、５５５、５５６、及び５５７、
ｆｆ．それぞれ、配列番号４３８、４３９、４４０、５５８、５５９、及び５６０、
ｇｇ．それぞれ、配列番号４４１、４４２、４４３、５６１、５６２、及び５６３、
ｈｈ．それぞれ、配列番号４５０、４５１、４５２、５７０、５７１、及び５７２、
ｉｉ．それぞれ、配列番号４５３、４５４、４５５、５７３、５７４、及び５７５、
ｊｊ．それぞれ、配列番号４５６、４５７、４５８、５７６、５７７、及び５７８、
ｋｋ．それぞれ、配列番号４５９、４６０、４６１、５７９、５８０、及び５８１、
ｌｌ．それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５８２、５８３、及び５８４、
ｍｍ．それぞれ、配列番号４１４、４１５、４１６、５８５、５８６、及び５８７、又は
ｎｎ．それぞれ、配列番号４２９、４３０、４３１、４８０、４８１、及び４８２；
抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片は、以下のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む：
１）それぞれ、配列番号３４２、３４３、３４４、４６５、４６６、及び４６７、又は
２）それぞれ、配列番号３４５、３４６、３４７、４６８、４６９、及び４７０。
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２５９〜２９６のうちの１つと少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３００〜３３８のうちの１つと少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含み；抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２５７若しくは２５８と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号２９８若しくは２９９と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性抗原結合断片は、以下を含む：
ａ．配列番号２９２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号２９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号２６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号２８０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ．配列番号２５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ．配列番号２６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ．配列番号２６４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ．配列番号２６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ．配列番号２６６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ．配列番号２７２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ．配列番号２７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ．配列番号２７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ．配列番号２８４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｏ．配列番号２８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｐ．配列番号２６０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｑ．配列番号２６２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｒ．配列番号２６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｓ．配列番号２６８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｔ．配列番号２７０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｕ．配列番号２７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｖ．配列番号２７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｗ．配列番号２７４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｘ．配列番号２７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｙ．配列番号２７６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｚ．配列番号２７８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ａａ．配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂｂ．配列番号２８２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃｃ．配列番号２８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｄｄ．配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｅｅ．配列番号２８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｆｆ．配列番号２８８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｇｇ．配列番号２８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｈｈ．配列番号２９０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｉｉ．配列番号２９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｊｊ．配列番号２９４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｋｋ．配列番号２９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｌｌ．配列番号２９６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｍｍ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｎｎ．配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｏｏ．配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｐｐ．配列番号２９２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｑｑ．配列番号２９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｒｒ．配列番号２６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｓｓ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｔｔ．配列番号２８０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｕｕ．配列番号２５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｖｖ．配列番号２６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｗｗ．配列番号２６４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｘｘ．配列番号２６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｙｙ．配列番号２６６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｚｚ．配列番号２７２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ａａａ．配列番号２７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂｂｂ．配列番号２７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃｃｃ．配列番号２８４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
ｄｄｄ．配列番号２８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｅｅｅ．配列番号２６０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｆｆｆ．配列番号２６２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｇｇｇ．配列番号２６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｈｈｈ．配列番号２６８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｉｉｉ．配列番号２７０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｊｊｊ．配列番号２７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｋｋｋ．配列番号２７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｌｌｌ．配列番号２７４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｍｍｍ．配列番号２７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｎｎｎ．配列番号２７６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｏｏｏ．配列番号２７８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｐｐｐ．配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｑｑｑ．配列番号２８２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｒｒｒ．配列番号２８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｓｓｓ．配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｔｔｔ．配列番号２８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｕｕｕ．配列番号２８８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｖｖｖ．配列番号２８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｗｗｗ．配列番号２９０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｘｘｘ．配列番号２９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｙｙｙ．配列番号２９４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｚｚｚ．配列番号２９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ａａａａ．配列番号２９６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂｂｂｂ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃｃｃｃ．配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
ｄｄｄｄ．配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
別の特定の態様によれば、本発明は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する単離抗ＣＤ３３モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、例えば、インビトロでＡＤＣＣを誘導することができる。モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、約２ｎＭ未満のＥＣ５０でＡＤＣＣを誘導することができる。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、約２．０ｎＭ未満、約１．９ｎＭ未満、約１．８ｎＭ未満、約１．７ｎＭ未満、約１．６ｎＭ未満、約１．５ｎＭ未満、約１．４ｎＭ未満、約１．３ｎＭ未満、約１．２ｎＭ未満、約１．１ｎＭ未満、約１．０ｎＭ未満、約０．９ｎＭ未満、約０．８ｎＭ未満、約０．７ｎＭ未満、約０．６ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．４ｎＭ未満、約０．３ｎＭ未満、約０．２ｎＭ未満、又は約０．１ｎＭ未満である。特定の実施形態では、ＣＤ３３モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１低フコース骨格を含む。
本明細書に記載のいくつかの実施形態では、ＣＤ３３特異的抗体の免疫エフェクター特性は、当業者に既知の技術によりＦｃを改変することによってエンハンス又はサイレンシングさせることができる。例えば、Ｆｃエフェクター機能、例えば、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性貪食（ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）のダウンレギュレーション等が、これらの活性を担うＦｃ中の残基を改変することにより提供され、かつ／又は制御され得る。
「抗体依存性細胞介在性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現している非特異的細胞傷害細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が標的細胞上に結合した抗体を認識し、続けて、標的細胞の溶解を引き起こす、細胞介在性反応を指す。
ＡＤＣＣを誘導するモノクローナル抗体の能力は、そのオリゴ糖成分を操作することにより増強され得る。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３は、Ａｓｎ２９７においてＮ−グリコシル化される。ここで、グリカンの大部分は、公知の二分岐Ｇ０、Ｇ０Ｆ、Ｇ１、Ｇ１Ｆ、Ｇ２、又はＧ２Ｆの形態である。遺伝子操作されていないＣＨＯ細胞により生成される抗体は、典型的には、少なくとも約８５％のグリカンフコース含量を有する。Ｆｃ領域に付着した二分岐の複雑なタイプのオリゴ糖からコアフコースを除去すると、抗原結合性又はＣＤＣ活性を変化させることなく改善されたＦｃ．γ．ＲＩＩＩａ結合により、抗体のＡＤＣＣが向上される。このようなｍＡｂは、二分岐の複雑なタイプのＦｃオリゴ糖を有する、比較的高い脱フコシル化抗体の成功した発現をもたらすことが報告された種々の方法、例えば、培養浸透圧の制御（Ｋｏｎｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６４：２４９−６５，２０１２）、宿主細胞株としての変異体ＣＨＯ株Ｌｅｃ１３の適用（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７：２６７３３−２６７４０，２００２）、宿主細胞株としての変異体ＣＨＯ株ＥＢ６６の適用（Ｏｌｉｖｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ；２（４），２０１０、Ｅｐｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ、ＰＭＩＤ：２０５６２５８２）、宿主細胞株としてのラットハイブリドーマ細胞株ＹＢ２／０の適用（Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：３４６６−３４７３，２００３）、アルファ．１，６−フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子に対して特異的な低分子干渉ＲＮＡの導入（Ｍｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ８８：９０１−９０８，２００４）、又はベータ−１，４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩとゴルジアルファ−マンノシダーゼＩＩとの共発現又は強力なアルファ−マンノシダーゼＩ阻害剤であるキフネンシン（Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８１：５０３２−５０３６；２００６、Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ９３：８５１−８６１，２００６；Ｘｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ９９：６５２−６５，２００８）を使用して達成され得る。
本明細書に記載のいくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗体により惹起されるＡＤＣＣはまた、抗体のＦｃにおける特定の置換によってもエンハンスされ得る。例示的な置換は、例えば、米国特許第６，７３７，０５６号に記載されたように、アミノ酸位置２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８、又は４３０（ＥＵインデックスに従った残基番号付け）における置換である。
別の特定の態様によれば、本発明は、約５×１０−８Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）でＣＤ３３に結合することができる単離抗ＣＤ３３モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。特定の実施形態では、解離定数は、約５×１０−８Ｍ未満、１×１０−８Ｍ未満、５×１０−９Ｍ未満、１×１０−９Ｍ未満、５×１０−１０Ｍ未満、１×１０−１０Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、又は１×１０−１１Ｍ未満である。
別の特定の態様によれば、本発明は、約２ｎＭ未満のＥＣ５０でＣＤ３３に結合し、ＣＤ３３の内部移行を誘導することができる単離抗ＣＤ３３モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、約２．０ｎＭ未満、約１．９ｎＭ未満、約１．８ｎＭ未満、約１．７ｎＭ未満、約１．６ｎＭ未満、約１．５ｎＭ未満、約１．４ｎＭ未満、約１．３ｎＭ未満、約１．２ｎＭ未満、約１．１ｎＭ未満、約１．０ｎＭ未満、約０．９ｎＭ未満、約０．８ｎＭ未満、約０．７ｎＭ未満、約０．６ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．４ｎＭ未満、約０．３ｎＭ未満、約０．２ｎＭ未満、及び約０．１ｎＭ未満である。
別の特定の態様によれば、本発明は、ＣＤ３３発現細胞においてＴ細胞依存性細胞傷害を誘導することができる単離抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片に関する。二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、例えば、約２ｎＭ未満のＥＣ５０値でインビトロにおいてＣＤ３３発現細胞でＴ細胞依存性細胞傷害を誘導することができる。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、約２．０ｎＭ未満、約１．９ｎＭ未満、約１．８ｎＭ未満、約１．７ｎＭ未満、約１．６ｎＭ未満、約１．５ｎＭ未満、約１．４ｎＭ未満、約１．３ｎＭ未満、約１．２ｎＭ未満、約１．１ｎＭ未満、約１．０ｎＭ未満、約０．９ｎＭ未満、約０．８ｎＭ未満、約０．７ｎＭ未満、約０．６ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．４ｎＭ未満、約０．３ｎＭ未満、約０．２ｎＭ未満、及び約０．１ｎＭ未満である。
別の特定の態様によれば、本発明は、単離抗ＣＤ３３モノクローナル抗体及び／若しくは単離抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体、又はこれらの抗原結合断片であって、キメラである、抗ＣＤ３３モノクローナル抗体若しくは抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はこれらの抗原結合断片に関する。
別の特定の態様によれば、本発明は、単離抗ＣＤ３３モノクローナル抗体及び／若しくは単離抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体、又はこれらの抗原結合断片であって、ヒトである又はヒト化されている、抗ＣＤ３３モノクローナル抗体若しくは抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はこれらの抗原結合断片に関する。
別の全般的な態様では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードしている、単離核酸に関する。別の全般的な態様では、本発明は、本発明の二重特異性抗体又はその抗原結合断片をコードしている、単離核酸に関する。タンパク質のアミノ酸配列を変えることなく、タンパク質のコード配列を変える（例えば置換する、欠失する、挿入するなど）ことができることが、当業者には理解されよう。したがって、タンパク質のアミノ酸配列を変えることなく、本発明のモノクローナル抗体及び／又は二重特異性抗体をコードしている核酸配列を変更できることが当業者には理解されるであろう。
別の全般的な態様では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードしている単離核酸を含む、ベクターに関する。別の全般的な態様では、本発明は、本発明の二重特異性抗体又はその抗原結合断片をコードしている単離核酸を含む、ベクターに関する。プラスミド、コスミド、ファージベクター、又はウイルスベクターなどの、本開示の観点から当業者に公知の任意のベクターも使用することができる。いくつかの実施形態では、ベクターは、プラスミドなどの組換え発現ベクターである。ベクターは、例えば、プロモーター、リボソーム結合エレメント、ターミネーター、エンハンサー、選択マーカー、及び複製起点という、発現ベクターの従来の機能を確立するための任意のエレメントを含むことができる。プロモーターは、常時発現型、誘導型、又は再形成可能なプロモーターであり得る。細胞に核酸を送達することができる多数の発現ベクターが当技術分野において知られており、細胞内で抗体又はその抗原結合断片を生成するために、本明細書で使用することができる。従来のクローニング技術、又は人工遺伝子合成を使用して、本発明の実施形態に従った組換え発現ベクターを生成することができる。このような技術は、本開示の観点から、当業者に周知である。
別の全般的な態様では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体及び／若しくは二重特異性抗体、又はこれらの抗原結合断片をコードしている単離核酸を含む、宿主細胞に関する。本開示の観点から、当業者に知られている任意の宿主細胞を、本発明の抗体又は抗原結合断片の組換え発現に使用することができる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、大腸菌ＴＧ１若しくはＢＬ２１細胞（例えば、ｓｃＦｖ又はＦａｂ抗体の発現の場合）、ＣＨＯ−ＤＧ４４若しくはＣＨＯ−Ｋ１細胞、又はＨＥＫ２９３細胞（例えば、完全長ＩｇＧ抗体の発現の場合）である。特定の実施形態によれば、組換え発現ベクターは、組換え核酸が効果的に発現するように宿主細胞ゲノムに安定的に組み込まれる、化学的トランスフェクション、熱ショック、又はエレクトロポレーションなどの従来の方法によって宿主細胞に形質転換される。
別の全般的な態様では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を生成する条件下で、当該モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードしている核酸を含む細胞を培養することと、当該細胞又は細胞培養物から（例えば上清から）当該抗体又はその抗原結合断片を回収することと、を含む、方法に関する。別の全般的な態様では、本発明は、本発明の二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、本発明の二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する条件下で、当該二重特異性抗体又はその抗原結合断片をコードしている核酸を含む細胞を培養することと、当該細胞又は細胞培養物から（例えば、上清から）当該抗体又はその抗原結合断片を回収することと、を含む、方法に関する。発現した抗体又はその抗原結合断片を細胞から収集し、当該技術分野において公知の従来の技術に従って、そして、本明細書に記載のとおり精製することができる。
医薬組成物
別の全般的な態様では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、医薬上許容できる担体とを含む、医薬組成物に関する。別の全般的な態様では、本発明は、本発明の二重特異性抗体又はその抗原結合断片と、医薬上許容できる担体とを含む、医薬組成物に関する。本明細書で使用するとき、用語「医薬組成物」は、医薬上許容できる担体と一緒に本発明の抗体を含む製造物を意味する。本発明の抗体及びそれを含む組成物は、本明細書で言及される治療用途のための医薬の製造においても有用である。
本明細書で使用するとき、用語「担体」は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、バッファ、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、ミクロスフェア、リポソーム封入体、又は医薬製剤で使用するための当該技術分野で周知の他の材料を指す。担体、賦形剤又は希釈剤の特性は、特定の用途の投与経路によって決まる点は理解されよう。本明細書で使用するとき、用語「医薬上許容できる担体」は、本発明による組成物の効果にも本発明による組成物の生物活性にも干渉しない無毒性材料を指す。特定の実施形態によると、本開示を考慮して、抗体の医薬組成物での使用に好適ないずれの医薬上許容できる担体も、本発明において使用することができる。
医薬上許容できる担体を有する医薬的活性成分の製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（例えば２１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）及びそれ以降の任意の改訂版）にあるように、当該技術分野において既知である。追加成分の非限定的な例としては、緩衝剤、希釈剤、溶媒、張度調節剤、防腐剤、安定剤、及びキレート剤が挙げられる。１つ以上の医薬上許容できる担体は、本発明の医薬組成物を製剤化する際に使用され得る。
本発明の一実施形態では、医薬組成物は液体製剤である。液体製剤の好ましい例は、水性製剤、すなわち、水を含む製剤である。液体製剤は、溶液、懸濁液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、ゲルなどを含んでもよい。水性製剤は、典型的には、少なくとも５０％ｗ／ｗの水、又は少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は少なくとも９５％ｗ／ｗの水を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、例えば注射デバイス（例えば注射器又は注入ポンプ）を介して注射することができる注射剤として製剤化され得る。注射は、例えば、皮下、筋肉内、腹腔内、硝子体内、又は静脈内に送達され得る。
別の実施形態では、医薬組成物は、固体製剤、例えば、そのまま使用することができるか、又は医師若しくは患者が使用前に溶媒及び／又は希釈剤を添加する、凍結乾燥又は噴霧乾燥組成物である。固体剤形としては、圧縮錠剤などの錠剤、及び／又はコーティングされた錠剤、並びにカプセル（例えば、硬又は軟ゼラチンカプセル）を挙げることができる。医薬組成物はまた、例えば、サッシェ、糖衣錠、粉末、顆粒、トローチ剤、又は再構成用の粉末の形態であってもよい。
剤形は即時放出であってもよく、その場合、水溶性若しくは水分散性担体を含んでいてよく、又は剤形は遅延放出、持続放出、若しくは調節放出であってもよく、その場合、胃腸管若しくは皮下における剤形の溶解速度を制御する非水溶性ポリマーを含んでいてよい。
他の実施形態では、医薬組成物は、鼻腔内、口内、又は舌下に送達され得る。
水性製剤のｐＨは、ｐＨ３〜ｐＨ１０であり得る。本発明の一実施形態では、製剤のｐＨは約７．０〜約９．５である。本発明の別の実施形態では、製剤のｐＨは約３．０〜約７．０である。
本発明の別の実施形態では、医薬組成物は緩衝剤を含む。緩衝剤の非限定的な例としては、アルギニン、アスパラギン酸、ビシン、シトレート、リン酸一水素二ナトリウム、フマル酸、グリシン、グリシルグリシン、ヒスチジン、リジン、マレイン酸、リンゴ酸、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、コハク酸塩、酒石酸、トリシン、及びトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、及びこれらの混合物が挙げられる。緩衝液は、個々に又は集合体中に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在してもよい。これらの具体的な緩衝剤の各１つを含む医薬組成物は、本発明の代替実施形態を構成する。
本発明の別の実施形態では、医薬組成物は防腐剤を含む。緩衝剤の非限定的な例としては、塩化ベンゼトニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、ブロノポール、ブチル４−ヒドロキシベンゾエート、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロヘキシジン、クロルフェネシン、ｏ−クレゾール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、エチル４−ヒドロキシベンゾエート、イミド尿素、メチル４−ヒドロキシベンゾエート、フェノール、２−フェノキシエタノール、２−フェニルエタノール、プロピル４−ヒドロキシベンゾエート、デヒドロ酢酸ナトリウム、チオメロサール、及びこれらの混合物が挙げられる。防腐剤は、個々に又は集合体中に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在してもよい。これらの具体的な防腐剤の各１つを含む医薬組成物は、本発明の代替実施形態を構成する。
本発明の別の実施形態では、医薬組成物は、等張剤を含む。本実施形態の非限定的な例としては、塩（塩化ナトリウムなど）、アミノ酸（グリシン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、及びスレオニンなど）、アルジトール（グリセロール、１，２−プロパンジオールプロピレングリコールなど）、１，３−プロパンジオール、及び１，３−ブタンジオールなど）、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）、並びにこれらの混合物が挙げられる。等張剤の別の例としては、糖が挙げられる。糖の非限定的な例は、例えば、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、アルファ及びベータ−ＨＰＣＤ、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、並びにカルボキシメチルセルロースナトリウムを含む、単糖類、二糖類、若しくは多糖類、又は水溶性グルカンであり得る。等張剤の別の例は、糖アルコールであり、用語「糖アルコール」は、少なくとも１つの−ＯＨ基を有するＣ（４〜８）炭化水素として定義される。糖アルコールの非限定的な例としては、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ズルシトール、キシリトール、及びアラビトールが挙げられる。本段落に列記される各等張剤を含む医薬組成物は、本発明の代替実施形態を構成する。等張剤は、個々に又は集合体中に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在してもよい。これらの具体的な等張剤の各１つを含む医薬組成物は、本発明の代替実施形態を構成する。
本発明の別の実施形態では、医薬組成物はキレート剤を含む。キレート剤の非限定的な例としては、クエン酸、アスパラギン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）の塩、及びこれらの混合物が挙げられる。キレート剤は、個々に又は集合体中に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在してもよい。これらの具体的なキレート剤の各１つを含む医薬組成物は、本発明の代替実施形態を構成する。
本発明の別の実施形態では、医薬組成物は安定剤を含む。安定剤の非限定的な例としては、１つ以上の凝集阻害剤、１つ又は２つ以上の酸化阻害剤、１つ又は２つ以上の界面活性剤、及び／又は、１つ以上のプロテアーゼ阻害剤が挙げられる。
本発明の別の実施形態では、医薬組成物は安定剤を含み、当該安定剤は、カルボキシ−／ヒドロキシセルロース及びそれらの誘導体（ＨＰＣ、ＨＰＣ−ＳＬ、ＨＰＣ−Ｌ、及びＨＰＭＣなど）、シクロデキストリン、２−メチルチオエタノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ ３３５０など）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、塩（塩化ナトリウムなど）、硫黄含有物質、例えばモノチオグリセロール）、又はチオグリコール酸である。安定剤は、個々に又は集合体中に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在してもよい。これらの具体的な安定剤の各１つを含む医薬組成物は、本発明の代替実施形態を構成する。
本発明の更なる実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の界面活性剤、好ましくは界面活性剤、少なくとも１つの界面活性剤、又は２つの異なる界面活性剤を含む。「界面活性剤」という用語は、水溶性（親水性）部分及び脂溶性（親油性）部分から構成される任意の分子又はイオンを指す。界面活性剤は、例えば、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、及び／又は双性界面活性剤からなる群から選択され得る。界面活性剤は、個々に又は集合体中に、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在してもよい。これらの具体的な界面活性剤の各１つを含む医薬組成物は、本発明の代替実施形態を構成する。
本発明の更なる実施形態では、医薬組成物は、１つ以上のプロテアーゼ阻害剤、例えば、ＥＤＴＡ、及び／又はベンズアミジン塩酸（ＨＣｌ）を含む。プロテアーゼ阻害剤は、個々に又は集合体中に、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在してもよい。これらの具体的なプロテアーゼ阻害剤の各１つを含む医薬組成物は、本発明の代替実施形態を構成する。
別の全般的な態様では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬組成物を製造する方法であって、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を医薬上許容できる担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法に関する。別の全般的な態様では、本発明は、本発明の二重特異性抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬組成物を製造する方法であって、二重特異性抗体又はその抗原結合断片を医薬上許容できる担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法に関する。
使用方法
別の全般的な態様では、本発明は、対象における癌細胞表面上のＣＤ３３を標的化する方法であって、ＣＤ３３に特異的に結合する単離モノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、又は抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体若しくはその抗原結合断片、又は本発明の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法に関する。
また、放射線核種、ホウ素、ガドリニウム又はウラン原子、サイトカインなどの免疫調節物質、幹細胞増殖因子、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのリンホトキシン、インターロイキン（ＩＬ）などの造血因子、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）又は顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ））などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン−α、−β又は−γなどのインターフェロン（ＩＦＮ）、及び「Ｓ１因子」と命名されたものなどの幹細胞増殖因子、造血因子、エリスロポエチン、トロンボポエチン、抗体、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、酵素、酵素阻害剤、光活性治療剤、有糸分裂阻害剤などの細胞傷害性薬物、アルキル化剤、代謝拮抗剤、血管新生阻害剤、アポトーシス剤、アルカロイド剤、ＣＯＸ−２阻害剤、並びに抗生物質、植物毒素、微生物毒素、及び動物毒素などの細胞傷害性毒素、並びにこれらの合成変異体、血管新生阻害剤、様々な抗体、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される治療剤を含む、治療用抗ＣＤ３３抗体免疫コンジュゲートも本明細書で想到される。好ましい実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン−γ、ＴＮＦ−α、及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、放射性核種は、オージェ放射体、ベータ放射体、及びアルファ放射体、例えば、Ｐ−３２、Ｐ−３３、Ｓｃ−４７、Ｆｅ−５９、Ｃｕ−６４、Ｃｕ−６７、Ｓｅ−７５、Ａｓ−７７、Ｓｒ−８９、Ｙ−９０、Ｍｏ−９９、Ｒｈ−１０５、Ｐｄ−１０９、Ａｇ−１１１、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、Ｐｒ−１４２、Ｐｒ−１４３、Ｐｍ−１４９、Ｓｍ−１５３、Ｔｂ−１６１、Ｈｏ−１６６、Ｅｒ−１６９、Ｌｕ−１７７、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８９、Ｉｒ−１９４、Ａｕ−１９８、Ａｕ−１９９、Ｐｂ−２１１、Ｐｂ−２１２、及びＢｉ−２１３、Ｃｏ−５８、Ｇａ−６７、Ｂｒ−８０ｍ、Ｔｃ−９９ｍ、Ｒｈ−１０３ｍ、Ｐｔ−１０９、Ｉｎ−１１１、Ｓｂ−１１９、Ｉ−１２５、Ｈｏ−１６１、Ｏｓ−１８９ｍ、Ｉｒ−１９２、Ｄｙ−１５２、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１２、Ｒａ−２２３、Ｒｎ−２１９、Ｐｏ−２１５、Ｂｉ−２１１、Ａｃ−２２５、Ｆｒ−２２１、Ａｔ−２１７、Ｂｉ−２１３、Ｆｍ−２５５、Ｂ−１０、Ｇｄ−１５７、Ｕ−２３５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。好ましくは、放射性核種は、２０〜１０，０００ｋｅＶのエネルギーを有する。
ＣＤ３３に結合する抗体及びその抗原結合断片の機能活性は、当該技術分野において既知の方法により、そして本明細書に記載のとおり特性評価することができる。ＣＤ３３に結合する抗体及びその抗原結合断片を特性評価する方法としては、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、及びＯｃｔｅｔＲｅｄ分析を含む親和性及び特異性アッセイ；ＦＡＣＳにより癌細胞上のＣＤ３３への抗体の結合を検出する結合アッセイが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態によれば、ＣＤ３３に結合する抗体及びその抗原結合断片を特性評価する方法としては、以下に記載するものが挙げられる。
別の全般的な態様では、本発明は、それを必要としている対象における癌を治療する方法であって、ＣＤ３３に特異的に結合する単離モノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、又は本発明の医薬組成物を当該対象に投与することを含む、方法に関する。癌は、例えば、ＣＤ３３発現癌であり得る。癌は、例えば、肺癌、胃癌、結腸癌、肝細胞癌、腎細胞癌、膀胱尿路上皮癌、転移性黒色腫、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、頭頸部癌、膵臓癌、神経膠腫、神経膠芽腫、及び他の固形腫瘍、並びに非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び他の液体腫瘍から選択され得るが、これらに限定されない。癌は、例えば、血液癌であり得る。血液癌は、例えば、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫であり得る。特定の実施形態では、血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）であり得る。
本発明の実施形態によれば、医薬組成物は、治療有効量の抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片を含む。本明細書で使用するとき、用語「治療有効量」は、対象に所望の生物学的又は薬理的応答を惹起する活性成分又は構成成分の量を指す。治療有効量は、記載される目的に対して経験的かつ通常の方法で決定することができる。
抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片に関して本明細書で使用するとき、治療有効量は、それを必要としている対象における免疫応答を調節する抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片の量を意味する。
特定の実施形態によれば、治療有効量は、以下の効果のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上を達成するのに十分な治療の量を指す：（ｉ）治療される疾患、障害若しくは病態又はそれに関連する症状の重症度を軽減又は改善すること、（ｉｉ）治療される疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状の期間を短縮すること、（ｉｉｉ）治療される疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状の進行を防止すること、（ｉｖ）治療される疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状の退縮を生じさせること、（ｖ）治療される疾患、障害又は病態、又はそれに関連する症状の進行又は発症を予防すること、（ｖｉ）治療される疾患、障害又は病態、又はそれに関連する症状の再発を防止すること、（ｖｉｉ）治療される疾患、障害、若しくは病態、又はそれに関連する症状を有する対象の入院を減少させること、（ｖｉｉｉ）治療される疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状を有する対象の入院期間を短縮させること、（ｉｘ）治療される疾患、障害又は病態、又はそれに関連する症状を有する対象の生存率を高めること、（ｘｉ）治療される対象の疾患、障害若しくは病態、又はそれに関連する症状を阻害又は軽減すること、及び／又は（ｘｉｉ）別の治療の予防又は治療効果を強化又は改善すること。
治療有効量又は用量は、治療される疾患、障害又は病態、投与手段、標的部位、対象の生理学的状態（例えば、年齢、体重、健康状態を含む）、対象がヒトであるか動物であるか、投与される他の薬剤、及び、治療が予防的なものであるか治療的なものであるか、などの様々な因子によって異なり得る。治療用量は、安全性及び有効性を最適化するために最適に漸増される。
特定の実施形態によれば、本明細書に記載される組成物は、対象への想定される投与経路に好適であるように製剤化される。例えば、本明細書に記載される組成物は、静脈内投与、皮下投与、又は筋肉内投与に適した形で製剤化することができる。
本明細書で使用するとき、用語「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」は全て、癌に関連する少なくとも１つの測定可能な身体的パラメータの改善又は回復を指し、これは対象において必ずしも認識されるとは限らないが、対象において認識可能な場合もある。用語「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」はまた、疾患、障害、又は病態を退縮させる、その進行を防止する、又は少なくともその進行を遅らせることを指す場合もある。特定の実施形態では、「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」は、腫瘍若しくはより好ましくはがんなどの疾患、障害、若しくは病態に関連する１つ以上の症状の緩和、進行若しくは発症の予防、又はその期間の短縮を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態の再発の防止を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態を有する対象の生存率の向上を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、対象における疾患、障害、又は病態の消失を指す。
特定の実施形態によれば、癌の治療に使用される組成物が提供される。癌治療のために、組成物を、化学療法、抗ＣＤ２０ｍＡｂ、抗ＴＩＭ−３ｍＡｂ、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−１抗体、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１療法、他の免疫癌薬、抗血管新生剤、放射線療法、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、標的療法、又は他の抗癌剤が挙げられるがこれらに限定されない別の治療と併用してもよい。
本明細書で使用するとき、用語「併用される」は、対象への２つ以上の治療薬の投与との関連において、複数の治療薬の使用を指す。用語「併用される」の使用は、治療薬を対象に投与する順序について限定しない。例えば、第１の治療薬（例えば、本明細書に記載される組成物）を、対象への第２の治療薬の投与の前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間前）、同時、又はその後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間後）に投与することができる。
実施形態
本発明は、以下の非限定的な実施形態を提供する。
実施形態１は、ＣＤ３３のＣ２ドメインに特異的に結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態２は、以下のポリペプチド配列を有する、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み：
ａ．それぞれ、配列番号４４７、４４８、４４９、５６７、５６８、及び５６９、
ｂ．それぞれ、配列番号４４４、４４５、４４６、５６４、５６５、及び５６６、
ｃ．それぞれ、配列番号３５４、３５５、３５６、４７７、４７８、及び４７９、
ｄ．それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５０１、５０２、及び５０３、
ｅ．それぞれ、配列番号４１１、４１２、４１３、５３１、５３２、及び５３３、
ｆ．それぞれ、配列番号３４８、３４９、３５０、４７１、４７２、及び４７３、
ｇ．それぞれ、配列番号３６０、３６１、３６２、４８３、４８４、及び４８５、
ｈ．それぞれ、配列番号３６３、３６４、３６５、４８６、４８７、及び４８８、
ｉ．それぞれ、配列番号３６６、３６７、３６８、４８９、４９０、及び４９１、
ｊ．それぞれ、配列番号３６９、３７０、３７１、４９２、４９３、及び４９４、
ｋ．それぞれ、配列番号３８７、３８８、３８９、４９２、４９３、及び４９４、
ｌ．それぞれ、配列番号４０２、４０３、４０４、５２２、５２３、及び５２４、
ｍ．それぞれ、配列番号４０８、４０９、４１０、５２８、５２９、及び５３０、
ｎ．それぞれ、配列番号４２３、４２４、４２５、５４３、５４４、及び５４５、又は
ｏ．それぞれ、配列番号４２６、４２７、４２８、５４６、５４７、及び５４８；
ＣＤ３３、好ましくはヒトＣＤ３３に特異的に結合する、実施形態１に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態３は、配列番号２９２、２９１、２６１、２６９、２８０、２５９、２６３、２６４、２６５、２６６、２７２、２７７、２７９、２８４、若しくは２８５と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３３２、３３１、３０２、３１０、３２０、３００、３０４、３０５、３０６、３０７、３１７、３１９、３２４、若しくは３２５と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態１又は２に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態４は、以下を含む、実施形態１〜３のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である：
ａ．配列番号２９２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号２９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号２６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号２８０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ．配列番号２５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ．配列番号２６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ．配列番号２６４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ．配列番号２６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ．配列番号２６６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ．配列番号２７２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ．配列番号２７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ．配列番号２７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ．配列番号２８４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
ｏ．配列番号２８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
実施形態５は、以下のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み：
ａ．それぞれ、配列番号３５７、３５８、３５９、４８０、４８１、及び４８２、
ｂ．それぞれ、配列番号３７２、３７３、３７４、４９５、４９６、及び４９７、
ｃ．それぞれ、配列番号３７５、３７６、３７７、４９８、４９９、及び５００、
ｄ．それぞれ、配列番号３８１、３８２、３８３、５０４、５０５、及び５０６、
ｅ．それぞれ、配列番号３８４、３８５、３８６、５０７、５０８、及び５０９、
ｆ．それぞれ、配列番号３９０、３９１、３９２、５１０、５１１、及び５１２、
ｇ．それぞれ、配列番号３９３、３９４、３９５、５１３、５１４、及び５１５、
ｈ．それぞれ、配列番号３９６、３９７、３９８、５１６、５１７、及び５１８、
ｉ．それぞれ、配列番号３９９、４００、４０１、５１９、５２０、及び５２１、
ｊ．それぞれ、配列番号４０５、４０６、４０７、５２５、５２６、及び５２７、
ｋ．それぞれ、配列番号４１４、４１５、４１６、５３４、５３５、及び５３６、
ｌ．それぞれ、配列番号４１７、４１８、４１９、５３７、５３８、及び５３９、
ｍ．それぞれ、配列番号４２０、４２１、４２２、５４０、５４１、及び５４２、
ｎ．それぞれ、配列番号４２９、４３０、４３１、５４９、５５０、及び５５１、
ｏ．それぞれ、配列番号４３２、４３３、４３４、５５２、５５３、及び５５４、
ｐ．それぞれ、配列番号４３５、４３６、４３７、５５５、５５６、及び５５７、
ｑ．それぞれ、配列番号４３８、４３９、４４０、５５８、５５９、及び５６０、
ｒ．それぞれ、配列番号４４１、４４２、４４３、５６１、５６２、及び５６３、
ｓ．それぞれ、配列番号４５０、４５１、４５２、５７０、５７１、及び５７２、
ｔ．それぞれ、配列番号４５３、４５４、４５５、５７３、５７４、及び５７５、
ｕ．それぞれ、配列番号４５６、４５７、４５８、５７６、５７７、及び５７８、
ｖ．それぞれ、配列番号４５９、４６０、４６１、５７９、５８０、及び５８１、
ｗ．それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５８２、５８３、及び５８４、
ｘ．それぞれ、配列番号４１４、４１５、４１６、５８５、５８６、及び５８７、又は
ｙ．それぞれ、配列番号４２９、４３０、４３１、４８０、４８１、及び４８２；
ＣＤ３３、好ましくはヒトＣＤ３３に特異的に結合する、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態６は、配列番号２６０、２６２、２６７、２６８、２７０、２７１、２７３、２７４、２７５、２７６、２７８、２８１、２８２、２８３、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９３、２９４、２９５、若しくは２９６のうちの１つと少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３０１、３０３、３０８、３０９、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１８、３２１、３２２、３２３、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、若しくは３３８のうちの１つと少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態５に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態７は、以下を含む、実施形態５又は６に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である：
ａ．配列番号２６０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号２６２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号２６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号２６８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号２７０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ．配列番号２７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ．配列番号２７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ．配列番号２７４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ．配列番号２７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ．配列番号２７６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ．配列番号２７８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ．配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ．配列番号２８２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ．配列番号２８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｏ．配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｐ．配列番号２８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｑ．配列番号２８８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｒ．配列番号２８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｓ．配列番号２９０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｔ．配列番号２９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｕ．配列番号２９４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｖ．配列番号２９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｗ．配列番号２９６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｘ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｙ．配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
ｚ．配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
実施形態８は、約２ｎＭ未満のＥＣ５０でインビトロにおいて抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態９は、ＩｇＧ１低フコース骨格を含む、実施形態８に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態１０は、約５×１０−９Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）でＣＤ３３に結合する、実施形態１〜７のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態１１は、約２ｎＭ未満のＥＣ５０でＣＤ３３に結合し、内部移行を誘導する、実施形態１〜７のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態１２は、ＣＤ３３活性を阻害する、実施形態１〜１１のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態１３は、キメラである、実施形態１〜１２のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態１４は、ヒトである又はヒト化されている、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態１５は、治療剤にコンジュゲートしている、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態１６は、実施形態１〜１４のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードしている、単離核酸である。
実施形態１７は、実施形態１６に記載の単離核酸を含む、ベクターである。
実施形態１８は、実施形態１７に記載のベクターを含む、宿主細胞である。
実施形態１９は、実施形態１〜１４のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、医薬上許容できる担体とを含む、医薬組成物である。
実施形態２０は、それを必要としている対象における癌を治療する方法であって、実施形態１９に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法である。
実施形態２１は、当該癌が、血液癌である、実施形態２０に記載の方法である。
実施形態２２は、当該血液癌が、白血病、リンパ腫、又は多発性骨髄腫からなる群から選択される、実施形態２１に記載の方法である。
実施形態２３は、当該血液癌が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である、実施形態２２に記載の方法である。
実施形態２４は、実施形態１〜１４のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、当該モノクローナル抗体又は抗原結合断片を生成する条件下で、当該モノクローナル抗体又は抗原結合断片をコードしている核酸を含む細胞を培養することと、当該細胞又は培養物から当該抗体又は抗原結合断片を回収することと、を含む、方法である。
実施形態２５は、実施形態１〜１４のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片を含む、医薬組成物を作製する方法であって、当該モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を、医薬上許容できる担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法である。
実施形態２６は、抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片と、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片とを含む、抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体であって、
当該抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片が、以下のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み：
ａ．それぞれ、配列番号４４７、４４８、４４９、５６７、５６８、及び５６９、
ｂ．それぞれ、配列番号４４４、４４５、４４６、５６４、５６５、及び５６６、
ｃ．それぞれ、配列番号３５４、３５５、３５６、４７７、４７８、及び４７９、
ｄ．それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５０１、５０２、及び５０３、
ｅ．それぞれ、配列番号４１１、４１２、４１３、５３１、５３２、及び５３３、
ｆ．それぞれ、配列番号３４８、３４９、３５０、４７１、４７２、及び４７３、
ｇ．それぞれ、配列番号３６０、３６１、３６２、４８３、４８４、及び４８５、
ｈ．それぞれ、配列番号３６３、３６４、３６５、４８６、４８７、及び４８８、
ｉ．それぞれ、配列番号３６６、３６７、３６８、４８９、４９０、及び４９１、
ｊ．それぞれ、配列番号３６９、３７０、３７１、４９２、４９３、及び４９４、
ｋ．それぞれ、配列番号３８７、３８８、３８９、４９２、４９３、及び４９４、
ｌ．それぞれ、配列番号４０２、４０３、４０４、５２２、５２３、及び５２４、
ｍ．それぞれ、配列番号４０８、４０９、４１０、５２８、５２９、及び５３０、
ｎ．それぞれ、配列番号４２３、４２４、４２５、５４３、５４４、及び５４５、又は
ｏ．それぞれ、配列番号４２６、４２７、４２８、５４６、５４７、及び５４８；
当該抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片が、以下のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体である：
１）それぞれ、配列番号３４２、３４３、３４４、４６５、４６６、及び４６７、又は
２）それぞれ、配列番号３４５、３４６、３４７、４６８、４６９、及び４７０。
実施形態２７は、当該抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片が、配列番号２９２、２９１、２６１、２６９、２８０、２５９、２６３、２６４、２６５、２６６、２７２、２７７、２７９、２８４、若しくは２８５と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３３２、３３１、３０２、３１０、３２０、３００、３０４、３０５、３０６、３０７、３１７、３１９、３２４、若しくは３２５と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含み、当該抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片が、配列番号２５７若しくは２５８と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号２９８若しくは２９９と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態２５に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態２８は、以下を含む、実施形態２５又は２６に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片である：
ａ．配列番号２９２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号２９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号２６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号２８０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ．配列番号２５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ．配列番号２６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ．配列番号２６４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ．配列番号２６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ．配列番号２６６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ．配列番号２７２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ．配列番号２７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ．配列番号２７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ．配列番号２８４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｏ．配列番号２８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｐ．配列番号２９２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｑ．配列番号２９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｒ．配列番号２６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｓ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｔ．配列番号２８０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｕ．配列番号２５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｖ．配列番号２６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｗ．配列番号２６４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｘ．配列番号２６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｙ．配列番号２６６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｚ．配列番号２７２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ａａ．配列番号２７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂｂ．配列番号２７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃｃ．配列番号２８４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
ｄｄ．配列番号２８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
実施形態２９は、当該抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片が、ＣＤ３３のＣ２ドメインに特異的に結合する、実施形態２６〜２８のいずれか１つに記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態３０は、抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片と、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片とを含む、抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体であって、
当該抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片が、以下のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み：
ａ．それぞれ、配列番号３５７、３５８、３５９、４８０、４８１、及び４８２、
ｂ．それぞれ、配列番号３７２、３７３、３７４、４９５、４９６、及び４９７、
ｃ．それぞれ、配列番号３７５、３７６、３７７、４９８、４９９、及び５００、
ｄ．それぞれ、配列番号３８１、３８２、３８３、５０４、５０５、及び５０６、
ｅ．それぞれ、配列番号３８４、３８５、３８６、５０７、５０８、及び５０９、
ｆ．それぞれ、配列番号３９０、３９１、３９２、５１０、５１１、及び５１２、
ｇ．それぞれ、配列番号３９３、３９４、３９５、５１３、５１４、及び５１５、
ｈ．それぞれ、配列番号３９６、３９７、３９８、５１６、５１７、及び５１８、
ｉ．それぞれ、配列番号３９９、４００、４０１、５１９、５２０、及び５２１、
ｊ．それぞれ、配列番号４０５、４０６、４０７、５２５、５２６、及び５２７、
ｋ．それぞれ、配列番号４１４、４１５、４１６、５３４、５３５、及び５３６、
ｌ．それぞれ、配列番号４１７、４１８、４１９、５３７、５３８、及び５３９、
ｍ．それぞれ、配列番号４２０、４２１、４２２、５４０、５４１、及び５４２、
ｎ．それぞれ、配列番号４２９、４３０、４３１、５４９、５５０、及び５５１、
ｏ．それぞれ、配列番号４３２、４３３、４３４、５５２、５５３、及び５５４、
ｐ．それぞれ、配列番号４３５、４３６、４３７、５５５、５５６、及び５５７、
ｑ．それぞれ、配列番号４３８、４３９、４４０、５５８、５５９、及び５６０、
ｒ．それぞれ、配列番号４４１、４４２、４４３、５６１、５６２、及び５６３、
ｓ．それぞれ、配列番号４５０、４５１、４５２、５７０、５７１、及び５７２、
ｔ．それぞれ、配列番号４５３、４５４、４５５、５７３、５７４、及び５７５、
ｕ．それぞれ、配列番号４５６、４５７、４５８、５７６、５７７、及び５７８、
ｖ．それぞれ、配列番号４５９、４６０、４６１、５７９、５８０、及び５８１、
ｗ．それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５８２、５８３、及び５８４、
ｘ．それぞれ、配列番号４１４、４１５、４１６、５８５、５８６、及び５８７、又は
ｙ．それぞれ、配列番号４２９、４３０、４３１、４８０、４８１、及び４８２；
当該抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片が、以下のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体である：
１）それぞれ、配列番号３４２、３４３、３４４、４６５、４６６、及び４６７、又は
２）それぞれ、配列番号３４５、３４６、３４７、４６８、４６９、及び４７０。
実施形態３１は、当該抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片が、配列番号２６０、２６２、２６７、２６８、２７０、２７１、２７３、２７４、２７５、２７６、２７８、２８１、２８２、２８３、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９３、２９４、２９５、若しくは２９６のうちの１つと少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３０１、３０３、３０８、３０９、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１８、３２１、３２２、３２３、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、若しくは３３８のうちの１つと少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含み、当該抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片が、配列番号２５７若しくは２５８と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号２９８若しくは２９９と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態２９に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態３２は、以下を含む、実施形態２９又は３０に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片である：
ａ．配列番号２６０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号２６２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号２６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号２６８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号２７０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ．配列番号２７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ．配列番号２７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ．配列番号２７４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ．配列番号２７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ．配列番号２７６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ．配列番号２７８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ．配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ．配列番号２８２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ．配列番号２８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｏ．配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｐ．配列番号２８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｑ．配列番号２８８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｒ．配列番号２８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｓ．配列番号２９０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｔ．配列番号２９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｕ．配列番号２９４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｖ．配列番号２９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｗ．配列番号２９６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｘ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｙ．配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｚ．配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ａａ．配列番号２６０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｂｂ．配列番号２６２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｃｃ．配列番号２６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｄｄ．配列番号２６８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｅｅ．配列番号２７０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｆｆ．配列番号２７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｇｇ．配列番号２７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｈｈ．配列番号２７４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｉｉ．配列番号２７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｊｊ．配列番号２７６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｋｋ．配列番号２７８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｌｌ．配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｍｍ．配列番号２８２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｎｎ．配列番号２８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｏｏ．配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｐｐ．配列番号２８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｑｑ．配列番号２８８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｒｒ．配列番号２８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｓｓ．配列番号２９０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｔｔ．配列番号２９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｕｕ．配列番号２９４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｖｖ．配列番号２９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｗｗ．配列番号２９６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｘｘ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
ｙｙ．配列番号２８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
ｚｚ．配列番号２８６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
実施形態３３は、当該抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片が、約１ｎＭ未満のＥＣ５０値でインビトロにおいてＣＤ３３発現細胞においてＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、実施形態２６〜３２のいずれか１つに記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態３４は、キメラである、実施形態２６〜３３のいずれか１つに記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態３５は、ヒトである又はヒト化されている、実施形態２６〜３４のいずれか１つに記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片である。
実施形態３６は、実施形態２６〜３５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片をコードしている、単離核酸である。
実施形態３７は、実施形態３６に記載の単離核酸を含む、ベクターである。
実施形態３８は、実施形態３７に記載のベクターを含む、宿主細胞である。
実施形態３９は、実施形態２６〜３５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と、医薬上許容できる担体とを含む、医薬組成物である。
実施形態４０は、それを必要としている対象における癌を治療する方法であって、実施形態３９に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法である。
実施形態４１は、当該癌が、血液癌である、実施形態４０に記載の方法である。
実施形態４２は、当該血液癌が、白血病、リンパ腫、又は多発性骨髄腫からなる群から選択される、実施形態４１に記載の方法である。
実施形態４３は、当該血液癌が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である、実施形態４２に記載の方法である。
実施形態４４は、実施形態２６〜３５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、当該抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又は抗原結合断片を生成する条件下で、当該抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又は抗原結合断片をコードしている核酸を含む細胞を培養することと、当該細胞又は培養物から当該抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又は抗原結合断片を回収することと、を含む、方法である。
実施形態４５は、実施形態２６〜３５のいずれか１つに記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬組成物を作製する方法であって、当該抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を、医薬上許容できる担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法である。
試薬
抗原の生成
免疫化及びアッセイのためにＣ末端で融合させたＣ５８Ｓ変異を有するヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の変異型モノマー形態、Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０２７６８を有する又は有しない、ヒト及びカニクイザルのＣＤ３３タンパク質を生成した。６−ヒスチジンタグを有するＣＤ３３タンパク質抗原をコードしているｃＤＮＡを合成的に合成し、標準的な分子生物学的技術を用いて、Ａｃｔｉｎプロモーター下で哺乳動物分泌発現ベクターにクローニングした。
Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ２０１３８（配列番号１）由来の完全長ヒトＣＤ３３細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ヒトＣＤ３３ ＥＣＤ）を、Ｎ末端でＨＳＡの有り無しでシグナル配列と融合させ、続いて、６ヒスチジンタグをＣ末端でＨＳＡを有するｈＣＤ３３ ＥＣＤ及びｈＣＤ３３ ＥＣＤのみ）と融合させた。製造元のプロトコルに従ってＥｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅを使用して、ＨＥＫ２９３由来細胞、Ｅｘｐｉ２９３（Ｇｉｂｃｏ／Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）にヒトＣＤ３３ ＥＣＤ発現コンストラクトを一過的にトランスフェクトした。軌道振盪器において８％ＣＯ２で３７℃において５日間細胞をインキュベートした後、収集した。発現した細胞を遠心分離により除去し、Ｎｉ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ ｒｅｓｉｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；Ｌｉｔｔｌｅ Ｃｈａｌｆｏｎｔ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）を使用する固定化金属アフィニティクロマトグラフィー、続いて、ダルッベッコリン酸生理食塩水バッファｐＨ７．２（１×ＤＰＢＳ）におけるＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００分取サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、可溶性ＣＤ３３を培地から精製した。あらゆるジスルフィド凝集体を除く、ＳＥＣ溶出画分を合わせ、滅菌濾過して、免疫化及びＣＤ３３アッセイのための最終タンパク質を得た。Ａ２８０によってタンパク質濃度を求め、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及び分析ＳＥＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ；Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）によって精製タンパク質の品質を評価した。ＥｎｄｏＳａｆｅ−ＰＴＳ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ、発色性ＬＡＬアッセイ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ；Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）を使用して、内毒素測定を実施した。
ヒトＣＤ３３ ＥＣＤサブドメインタンパク質、ｈＣＤ３３ Ｖ−ドメイン−ＨＳＡ、ｈＣＤ３３ Ｖ−ドメイン−ｈｉｓ、ｈＣＤ３３ Ｃ２ドメイン−ＨＳＡ、及びｈＣＤ３３ Ｃ２ドメイン−Ｈｉｓを同様に構築し、発現させ、完全長ヒトＣＤ３３ ＥＣＤとして精製した。
Ｇｅｎｂａｎｋ配列ＸＰ＿００５５９０１３８．１に基づいて、免疫化及び交差選択性アッセイのためのカニクイザルＣＤ３３コンストラクト、カニクイザルＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ、カニクイザルＣＤ３３−Ｈｉｓも生成した。カニクイザルＣＤ３３タンパク質の発現及び精製は、ヒトＣＤ３３タンパク質と同じであった。
製造元の条件に従ってＳｕｒｅＬｉｎｋ Ｃｈｒｏｍａｇｅｎｉｃ Ｂｉｏｔｉｎ Ｌａｂｅｌｉｎｇキット（ＳｅｒａＣａｒｅ ＫＰＬ）を使用して、５０ｍＭのリン酸ナトリウムｐＨ７．２中でスクリーニングのためのＣＤ３３抗原をビオチン化した。簡潔に述べると、ビオチンのタンパク質に対するモル比４：１で２５ｍＭのビオチン原液をＣＤ３３タンパク質に添加し、穏やかに回転させながら室温で３０分間インキュベートし、次いで、４℃に切り替えて更に２時間インキュベートした。１×ＤＰＢＳへのバッファ交換によって、組み込まれていないビオチンを除去した。ＮａｎｏＤｒｏｐを使用してＡ２８０ｎｍ及びＡ３５４ｎｍで測定することによって、タンパク質濃度及びビオチンの組み込みを求めた。上記抗原のそれぞれの配列については表１を参照されたい。
Figure 2021524244
ＣＤ３３発現同質遺伝子細胞株の生成
完全長のヒトＣＤ３３又はカニクイザルＣＤ３３とＣＤ３３陽性細胞を選択するためのピューロマイシンとを含有する、レンチウイルス（Ｇｅｎｅｃｏｐｏｅｉａ；Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を使用して、ヒト及びカニクイザルのＣＤ３３発現細胞株を生成した。ＣＤ３３について陰性であるＨＥＫ２９３Ｆ細胞（ＡＴＣＣ）に、レンチウイルス粒子を形質導入して、ヒトＣＤ３３及びカニクイザルＣＤ３３を過剰発現させた。形質導入後、プールされた細胞を処理することによって、ＣＤ３３及び耐性マーカーを陽性発現している細胞を選択し、ＤＭＥＭ＋１０％ＨＩ ＦＢＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中で増殖させ、様々な濃度のピューロマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補給した。
ＨＥＫ生成細胞株に加えて、いくつかの市販の細胞株を、結合及び細胞傷害アッセイに使用した。これらはＭＯＬＭ１３、ＫＧ１、ＳＨ２、ＯＣＩＡＭＬ３、及びＭＶ４１１を含んでおり、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ又はＤｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎのいずれかから入手し、１０％ ＦＢＳを含む完全ＲＰＭＩ培養培地中、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。
実施例１：免疫化キャンペーン
ＯｍｎｉＲａｔ
ヒト免疫グロブリントランスジェニックラット系統（ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標）；Ｌｉｇａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して、ヒトＣＤ３３モノクローナル抗体発現ハイブリドーマ細胞を発生させた。ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標）は、キメラヒト／ラットＩｇＨ座（ラットＣＨ座に連結された天然構成の２２のヒトＶＨ、全てのヒトＤ及びＪＨセグメントを含む）を完全なヒトＩｇＬ座（Ｊκ−Ｃκに連結された１２のＶκ及びＪλ−Ｃλに連結された１６のＶλ）と共に含有する。（例えば、Ｏｓｂｏｒｎ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９０（４）：１４８１−１４９０を参照されたい）。したがって、このラットは、ラット免疫グロブリンの発現減少を示し、免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖及び軽鎖の導入遺伝子がクラススイッチ及び体細胞変異を受けて、完全にヒトの可変領域を有する高親和性キメラヒト／ラットＩｇＧモノクローナル抗体が生成される。ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標）の調製及び使用、並びにこのようなラットが有するゲノム改変は、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎらの国際公開第２０１４／０９３９０８号に記載されている。
組換えヒト及びカニクイザルＣＤ３３（それぞれ、ｈｕＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ及びカニクイザルＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ）で免疫化したとき、このトランスジェニックラットは、ヒトＣＤ３３に対するキメラヒト−ラットＩｇＧ抗体を産生し、そのうちのいくつかはカニクイザルＣＤ３３にも結合する。
８匹のＯｍｎｉＲａｔを、ｈｕＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ及びカニクイザルＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡのどちらかで免疫化した。４６日間の免疫化レジメン後、８匹のＯｍｎｉＲａｔ全てからリンパ節を摘出し、ハイブリドーマを生成するために使用した。８１枚の９６ウェルプレートのハイブリドーマ上清を、標準的な技術を用いて結合ＥＬＩＳＡ及びＡｌｐｈａＬＩＳＡを介してスクリーニングし、そのうち１２８個のハイブリドーマ上清を、ｈｕＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ及びカニクイザルＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡへの特異的結合について選択した。１２８個の上清の大部分が、ｈｕＣＤ３３又はｃｙＣＤ３３を過剰発現している細胞への結合についても陽性であった。
６匹の追加のＯｍｎｉＲａｔをｒｈｕＣＤ３３のみで免疫化した。３１日間の免疫化レジメン後、６匹のＯｍｎｉＲａｔ全てからリンパ節を摘出し、ハイブリドーマを生成するために使用した。３０枚の９６ウェルプレートのハイブリドーマ上清を、標準的な技術を用いて結合ＥＬＩＳＡを介してスクリーニングし、そのうち９４個のハイブリドーマ上清を、ｈｕＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ及びカニクイザルＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡへの特異的結合について選択した。陽性クローンからハイブリドーマ溶解物を調製し、下記ｖ領域クローニングに進めた。
ＯｍｎｉＭｏｕｓｅ
ヒト免疫グロブリントランスジェニックマウス系統（ＯｍｎｉＭｏｕｓｅ（登録商標）；Ｌｉｇａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を使用して、ヒトＣＤ３３モノクローナル抗体発現ハイブリドーマ細胞を発生させた。ＯｍｎｉＭｏｕｓｅ（登録商標）は、完全ヒトＩｇＬ遺伝子座と一緒にキメラヒト／ラットＩｇＨ遺伝子座を含有する。このマウスは、マウス免疫グロブリンの発現減少を示し、免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖及び軽鎖の導入遺伝子がクラススイッチ及び体細胞変異を受けて、完全にヒトの可変領域を有する高親和性キメラヒト／ラットＩｇＧモノクローナル抗体が生成される。
組換えヒト及びカニクイザルＣＤ３３（それぞれ、ｈｕＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ及びカニクイザルＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＡＳ）で免疫化したとき、このトランスジェニックマウスは、ヒトＣＤ３３に対するキメラヒト−ラットＩｇＧ抗体を産生し、そのうちのいくつかはカニクイザルＣＤ３３にも結合する。
４匹のＯｍｎｉＭｏｕｓｅを、ｈｕＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ及びカニクイザルＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡのどちらかで免疫化した。５３日間の免疫化レジメン後、４匹のＯｍｎｉＭｏｕｓｅ全てから脾臓及びリンパ節を摘出し、ハイブリドーマを生成するために使用した。４８枚の９６ウェルプレートのハイブリドーマ上清を、結合ＥＬＩＳＡ及びＡｌｐｈａＬＩＳＡを介してスクリーニングし、そのうち８個のハイブリドーマ上清を、ｈｕＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ及びカニクイザルＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡへの特異的結合について選択した。陽性クローンからハイブリドーマ溶解物を調製し、下記ｖ領域クローニングに進めた。
Ｖ領域クローニング
ハイブリドーマ細胞溶解物からの全ＲＮＡを、製造元のプロトコルに従ってＲＮｅａｓｙ ９６キット（Ｑｉａｇｅｎ；Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して精製し、得られたＲＮＡをＤｒｏｐ Ｓｅｎｓｅを使用して定量化し、−８０℃で保存した、又はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ＲＴ−ＰＣＲ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用してｃＤＮＡを合成した。それぞれ重鎖、κ鎖、及びλ鎖の定常領域にアニーリングされた遺伝子特異的プライマーを使用して、第１の鎖のｃＤＮＡ合成を実施した。ＲＴ−ＰＣＲ反応混合物は、最高３μｇの精製ＲＮＡ、遺伝子特異的プライマー、ｄＮＴＰミックス、反応バッファ、２５ｍＭ ＭｇＣｌ２、ＤＴＴ、ＲＮａｓｅＯＵＴ（商標）（４０Ｕ／μＬ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、及びＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（商標）ＩＩＩ ＲＴ（２００Ｕ／μＬ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ＃１８０８０−０５１）で構成されており、５０℃で５０分間及び８５℃で５分間インキュベートされる。得られた一本鎖ｃＤＮＡを−２０℃で保存した、又は一本鎖ＤＮＡをＰＣＲ増幅させた。Ｐｌａｔｉｎｕｍ Ｐｆｘポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してＰＣＲ反応を行った。最適化されたＰＣＲ条件を使用して、それぞれ、リーダー配列並びに重鎖、κ及びλ鎖の定常領域に、フォワード及びリバースプライマーをアニーリングさせることによって、ｖ領域断片を増幅させた。得られたＰＣＲ断片をゲルに流し、予め設計しておいたプライマーを使用してＧＥＮＥＷＩＺで配列決定して、ｖ領域配列を得た。得られたｖ領域配列の．ａｂｉファイルを収集し、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙで作成されたＳａｎｇｅｒ ｖ領域配列解析プログラムによって分析した。回収されたｖ領域のＡＡ配列を内部データベースに登録し、コドンを最適化し、所望のヒト抗体アイソタイプの適切な定常領域：ＩｇＧ１ Ｆ４０５Ｌ及びＩｇＧ４ ＰＡＡを有するｐＵｎｄｅｒベースの発現ベクターにクローニングした。合計７６個のＯＭＮＩＲａｔ抗体及び８個のＯＭＮＩＭｏｕｓｅ抗体のクローニングに成功し、更なる特性評価に進めた。以下の表は、ＯＭＮＩＲａｔキャンペーンで同定されたトップ４２（表２を参照されたい）及びＯＭＮＩＭｏｕｓｅキャンペーンで同定された１６（表３を参照されたい）由来の配列をまとめたものであり、ＯＭＮＩＲａｔ抗体のうちのいくつかをＩｇＧ１及びＩｇＧ ４ ＰＡＡにクローニングし、ＯＭＮＩＭｏｕｓｅキャンペーンからは全てをＩｇＧ１及びＩｇＧ ４ ＰＡＡの両方にクローニングした。
Figure 2021524244
Figure 2021524244
 ＨＣ：重鎖、ＬＣ：軽鎖
Figure 2021524244
 ＨＣ：重鎖、ＬＣ：軽鎖
Ｅｘｐｉ２９３小規模トランスフェクション及び精製
免疫化キャンペーン及びその後の（ＩｇＧ１ Ｆ４０５Ｌ及びＩｇＧ４ ＰＡＡへの）ｖ領域クローニングで同定された抗体を発現させ、小さな２ｍＬスケールを介して精製した。Ｅｘｐｉ２９３（商標）細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、Ｅｘｐｉ２９３（商標）発現培地に１．２５×１０５〜２．２５×１０５生存細胞／ｍＬの密度で播種し、３７℃、７％ＣＯ２のシェーカーインキュベータ（ＩＮＦＯＲＳ ＨＴ Ｍｕｌｔｉｔｒｏｎ Ｐｒｏ）においてポリカーボネート製、使い捨て、滅菌、排気、バッフルなしの三角振盪フラスコ内で培養した。１２５ｍＬ〜２Ｌの振盪フラスコにおける通常の細胞増殖の場合、振盪直径１９ｍｍの振盪器については振盪速度を１３０ｒｐｍに設定した。生存率９８〜９９％で、密度が３×１０６〜５×１０６生存細胞／ｍＬで対数増殖に達したときに、細胞を継代培養した。
トランスフェクションの日に、生存細胞密度及び生存百分率を求めた。細胞を、３×１０６生存細胞／ｍＬの密度でトランスフェクトした。最適なトランスフェクションのために、ＴＥバッファ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ８．０）中０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の滅菌重鎖及び軽鎖プラスミドＤＮＡを使用する。
製造元のトランスフェクションプロトコル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒ ＭＡＮ０００７８１４）に従って、Ｅｘｐｉ２９３（商標）細胞をトランスフェクトした。２４ウェルディープウェルプレート（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）においてトランスフェクションを行った。簡潔に述べると、プラスミドＤＮＡを、以下の比で０．１ｍＬのＯｐｔｉＭＥＭ（商標）培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で希釈した：０．２５０μｇの重鎖ＤＮＡ：０．７５０μｇの軽鎖ＤＮＡ：０．５μｇのｐＡｄｖａｎｔａｇｅ。５μＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクション試薬を希釈し、９５μＬのＯｐｔｉＭＥＭ（商標）培地と穏やかに混合し、１分間インキュベートした。希釈したＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３試薬を希釈したＤＮＡに添加し、穏やかに混合し、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３／プラスミドＤＮＡ複合体を室温で４０分間インキュベートした。インキュベーション後、３７℃、７％ＣＯ２のシェーカーインキュベータにおいて一晩インキュベートした複合体に、１．８ｍＬのＥｘｐｉ２９３（商標）細胞を添加した。
トランスフェクション後１日目に、１０μＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３ Ｅｎｈａｎｃｅｒ１及び１００μＬのＥｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２９３（商標）Ｅｎｈａｎｃｅｒ ２を添加し、プレートを更に５日間インキュベータに戻した。トランスフェクション後６日目に８５０×Ｇで１５分間遠心分離することによって培養物を収集した後、精製した。
上記で調製した１．７ｍＬの清澄化した発現上清を、新たな２ｍＬ９６ディープウェルプレートに移した。Ｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅレジン（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）及びＤＰＢＳ−／−スラリーの１：４混合物８００μＬを、９６ウェルＡｃｒｏｐｒｅｐ Ａｄｖａｎｃｅ １μｍガラスフィルタープレート（Ｐａｌｌ）の全てのウェルにピペッティングすることによって、精製プレートを調製した。２００ｍｂａｒの減圧をプレートに適用して過剰なＰＢＳを除去し、その後、８００μＬの新鮮ＰＢＳで洗浄した。２００ｍｂａｒの減圧を適用して、洗浄バッファを除去した。次いで、ＰＢＳで洗浄したレジンに清澄化した上清を移し、穏やかに混合し、１５分間インキュベートした。インキュベーション後、２００ｍｂａｒの減圧を適用して上清を除去した。洗浄と洗浄との間に２００ｍｂａｒの真空圧力を適用しながら、ｍＡｂ Ｓｅｌｅｃｔ ＳｕｒｅレジンをＰＢＳで３回洗浄し、２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５（ＴＥＫＮＯＶＡ；Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）で１回洗浄して、過剰のバッファを除去した。０．１Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ３．５を使用して、レジンに結合しているｍＡｂを溶出し、有効に解離させるために１０分間インキュベートした。フィルタープレートを９６ディープウェルプレートの上に置き、１０００ｇで２分間遠心分離することを介して、溶出したｍＡｂをボトムプレートに回収した。８０μＬの２．５Ｍトリス酢酸塩、ｐＨ７．２を添加してｍＡｂを中和した。ｍＡｂを、９６ウェルＤｉｓｐｏＤＩＡＬＹＺＥＲプレート（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ；Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）内のＰＢＳにて一晩透析し、９６ディープウェルプレートの上に配置された９６ウェルＡｃｒｏｐｒｅｐ Ａｄｖａｎｃｅ ０．２μｍ Ｓｕｐｏｒフィルタープレート（Ｐａｌｌ；Ｐｏｒｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＮＹ）に移し、デスクトップ遠心分離において１，５００ｇで１５分間遠心分離することを介して、タンパク質溶液を濾過した。ＤｒｏｐＳｅｎｓｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｔｒｉｎｅａｎ）を使用して、濾液に対するＡ２８０測定により、タンパク質濃度を求めた。
実施例２：抗ＣＤ３３ ｍＡｂの特性評価
免疫化を介して同定し、ｖ領域クローニングし、続いて、発現及び精製したＯＭＮＩＲａｔ抗体を、ＣＤ３３発現細胞への結合及び組換え抗原への結合について更に特性評価した。精製抗体を、ヒトＣＤ３３又はカニクイザルＣＤ３３（上記のとおり生成）を発現している安定的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞への結合について、陰性対照としての親ＨＥＫ２９３Ｆと共に評価した。非酵素的解離バッファ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、細胞を組織培養フラスコから収集した。フラスコをＰＢＳで２回すすぎ、解離バッファをフラスコに添加し、細胞が非接着性になるまでフラスコを３７℃で１０分間インキュベートした。細胞を３００ｇで５分間遠心分離し、染色バッファ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）に１．０×１０６細胞／ｍＬで再懸濁させた。５０，０００細胞／ウェルの各細胞型を、丸底プレート（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）における染色バッファ５０μＬにプレーティングした。２×濃度の試験ｍＡｂ又はアイソタイプ対照５０μＬを３つの希釈濃度及びゼロ（１２０ｎＭ、１２ｎＭ、及び１．２ｎＭ、並びに０ｎＭ）で添加し、得られた溶液を４℃で３０分インキュベートした。各プレートの全てのウェルに１００μＬの染色バッファを添加し、プレートを３００ｇで５分間回転させ、バッファを除去し、各プレートの全てのウェルに２００μＬの染色バッファを添加し、プレートを３００ｇで５分間回転させ、バッファを除去した。５０μＬの２μｇ／ｍＬヤギ抗ヒトＦｃ ＡＦ６４７二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）をプレートの全てのウェルに添加し、プレートを４℃で３０分間インキュベートした。プレートの全てのウェルに１００μＬの染色バッファを添加し、プレートを３００ｇで５分間回転させ、バッファを除去した。２００μＬのランニングバッファ（ランニングバッファは、染色バッファ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％プルロニック酸である）をプレートの全てのウェルに添加し、プレートを３００ｇで５分間回転させ、バッファを除去した。Ｓｙｔｏｘ Ｇｒｅｅｎ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ色素（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を含有するランニングバッファ３０μＬを細胞と共に全てのウェルに添加し、プレートをｉＱｕｅ ＩｎｔｅｌｌｉＣｙｔフローサイトメータで読み取った。細胞を前方対側方散乱でゲーティングして細胞片を除去し、次いでシングレット、次いで、Ｓｙｔｏｘ染色を除外した生細胞でゲーティングした。ＡＦ６４７チャネルにおける平均蛍光強度によって抗体結合を評価した。
精製ｍＡｂの生物物理的結合特性の評価を開始するために、オフレートスクリーニングを実施した。７６個のＯＭＮＩＲａｔ抗ＣＤ３３ｍＡｂを、組換えヒトＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ（Ｃ３３Ｗ２）及びカニクイザルＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ（Ｃ３３Ｗ１）タンパク質（Ｊａｎｓｓｅｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）への結合について試験し、ＩＢＩＳ ＭＸ９６ ＳＰＲｉアレイプラットフォーム（Ｃａｒｔｅｒｒａ；Ｎｅｗｔｏｎ，ＰＡ）によってオフレートを測定した。ＩＢＩＳ機器において１０分間の会合時間でＣＭＤ５０ｍセンサチップ（Ｘａｎｔｅｃ、ロットＣＭＤ５０ｍ０４１５．ａ）を使用し、酢酸バッファｐＨ４．５中１００μｇ／ｍＬのアミンカップリングを介して、ヤギ抗ヒトＦｃ ＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１０９−００５−０９８）を直接固定した。約９０００Ｒｕｓの平均ＧＡＨ−Ｆｃ固定化レベルが達成された。センサチップをＣｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｆｌｏｗ Ｍｉｃｒｏｓｐｏｔｔｅｒ（ＣＦＭ）ユニットに移して、１０分間１０μｇ／ｍＬで各抗ＣＤ３３ｍＡｂを捕捉した。再生なしの単一サイクル速度論により、結合をＩＢＩＳ ＳＰＲｉで測定した。各抗原濃度系列（３倍希釈系列で３μＭ）を低濃度（０．４６ｎＭ）から高濃度（３μＭ）まで逐次注入して、ランニングバッファとしてＰＢＳＴ（０．００５％Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ）を使用して、５分間の会合時間及び１５分間の解離時間で、捕捉されたｍＡｂに結合させた。生の結合データ（．ｔｒｉｘファイルフォーマット）を参照し、ＳｐｒｉｎｔＸソフトウェア（Ｗａｓａｔｃｈ、バージョン１．９．３．２）を使用して整列させた後、１：１結合速度論分析（Ｗａｓａｔｃｈ、バージョン２．０．０．３３）のためにＳｃｒｕｂｂｅｒソフトウェア（バージョン２．０）にエクスポート（．ｉｂｍｘファイルフォーマット）して、ｋｏｆｆ結果を抽出した。
以下の表４は、ヒト及びカニクイザルＣＤ３３発現細胞株への結合、並びに組換え抗原に対する結合（抗原のうちの１つについて少なくとも＞１０ｅ−３のオフレート）によって評価したときの、トップ３２のクローンをまとめたものである。これらの３２個のうち、４個を除いた全てが、ヒト又はカニクイザル発現細胞のいずれかへの認識可能な結合を示した。３２個全てを、エピトープビニング及び全速度論分析を介した更なる特性評価に進めた。
Figure 2021524244
Figure 2021524244
次いで、ｍＡｂのパネルを、完全親和性分析及びエピトープビニングのために更に特性評価した。抗ＣＤ３３ｍＡｂの組換えヒトＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ（Ｃ３３Ｗ２）及びカニクイザルＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ（Ｃ３３Ｗ１）への結合を、ＰｒｏｔｅＯｎ ＳＰＲ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）によって測定した。０．００５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳ中流量３０μＬ／分で、ＧＬＣ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、カタログ番号１７６−５０１１）に垂直に配向された６つのリガンドチャネル全てにおける酢酸バッファｐＨ５．０中３０μｇ／ｍＬでのアミンカップリングを介して、ヤギ抗ヒトＦｃ ＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１０９−００５−０９８）を直接固定した。固定密度は、平均で約５０００応答単位（ＲＵ）であり、異なるチャネル間のばらつきは５％未満であった。垂直リガンド配向で０．２５又は０．５μｇ／ｍＬ（１６０〜３００ＲＵ）において抗ヒトＦｃ ＩｇＧ表面に異なるｍＡｂを捕捉し、６番目のリガンドチャネルは、リガンドなし表面対照であった。５つの濃度の３倍希釈系列中０．３μＭ濃度のヒト及びカニクイザルＣＤ３３−ＨＳＡタンパク質をアナライトとして流して、捕捉されたｍＡｂに水平配向で結合させた。また、捕捉されたｍＡｂの解離及びベースラインでの安定性をモニタリングするために、６番目のチャネルにバッファサンプルを注入した。ヒト及びカニクイザルＣＤ３３−ＨＳＡの全ての濃度の解離相を、Ｃ３３Ｂ７８２への結合については１５分間、Ｃ３３Ｂ９１２（ｈＩｇＧ４を有するＣ３３Ｂ９０４と同一）への結合については６０分間、流量１００μＬ／分でモニタリングした後、０．８５％リン酸の１８秒間パルスを使用して再生して、抗原及び結合したｍＡｂを除去した。以下から応答データを減じた後に二重参照することによって生データを処理した：１）Ａｇと空のチップ表面との間で非特異的相互作用を補正するためのインタースポット；２）経時的な捕捉されたｍＡｂ表面の解離に起因するベースラインの揺れを補正するためのバッファチャネル。各ｍＡｂについて全抗原濃度において処理したデータを１：１の単純なラングミュア結合モデルに全体的に適合させて、速度論的定数（ｋｏｎ、ｋｏｆｆ）及び親和性（ＫＤ）定数の推定値を抽出した。
ｍＡｂのパネルが全て１つの別個のエピトープに結合するか、又は広いエピトープをカバーするかを判定するために、エピトープビニング実験を行った。ＣＭＤ−２００Ｍセンサプリズムチップを使用して、ＩＢＩＳ ＳＰＲｉ機器（Ｃａｒｔｅｒｒａ）において、ＣＤ３３ｍＡｂの競合的エピトープビニングを行った。別々のＣｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｆｌｏｗ Ｍｉｃｒｏｓｐｏｔｔｅｒ（ＣＦＭ）を使用して、酢酸バッファ（ｐＨ４．５）中１０μｇ／ｍＬで、チップにおけるアミンカップリングを介して各抗ＣＤ３３抗体を直接固定した。次いで、プリントされたセンサチップを、Ｃｌａｓｓｉｃａｌ又は「Ｓａｎｄｗｉｃｈ」ビニングフォーマットを使用してビニング分析のためにＩＢＩＳ機器に移した。５０ｎＭのヒトＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ（Ｃ３３Ｗ２）を逐次注入し、続いて、１３３ｎＭの溶液で競合アナライトとして抗ＣＤ３３ ｍＡｂを１回注入して、抗原及び抗体の各逐次注入サイクル後に表面再生を伴って固定された抗ＣＤ３３ｍＡに結合させることによって、ビニングを行った。
再生前及び再生後の固定されたｍＡｂの活性をモニタリングするために、実験の開始時及び終了時に、いずれの競合ｍＡｂも含まないバッファ注入を行って、抗原のみの結合活性を測定した。バッファ（抗原のみ）結合に対する競合ｍＡｂ結合の応答は、溶液中の抗体が固定されたｍＡｂへの抗原結合をブロック又はサンドイッチするかどうかの指標である。生のビニングデータ（．ｔｒｉｘファイルフォーマット）を参照し、ＳｐｒｉｎｔＸソフトウェア（Ｗａｓａｔｃｈ、バージョン１．９．３．２）を使用してゼロにした後、分析のためにビニングソフトウェアＨｔＴｏｏｌｓ．ｅｘｅ（Ｗａｓａｔｃｈ、バージョン２．０．０．３３）にエクスポート（．ｉｂｍｘファイルフォーマット）した。２０ＲＵ未満の抗原応答を有する抗体及び自己ブロックしなかった抗体を除去することにより、データを精選した。競合ｍＡｂ応答を、抗原のみの結合応答に対して正規化した。正規化された応答が＜０．２５である抗体はブロッカーを意味し、正規化された応答が≧０．２５である抗体は、非ブロッカー／サンドイッチャーを意味した。組み合わされたデンドログラムプロットにおいて高さ２．５におけるカットを使用して、異なるビンを予測した。
以下の表は、３２個の選択ｍＡｂの全速度論分析及びエピトープビニングをまとめたものである。ヒト及びカニクイザルＣＤ３３の両方に対してナノモル濃度以下の親和性を有する抗ＣＤ３３ｍＡｂは合計８個存在し、これらのｍＡｂは３つの別個のエピトープビンに対応し、一方、より大きなパネルは、様々な親和性及び７個の別個のエピトープビンを有する。
Figure 2021524244
Figure 2021524244
ＯｍｎｉＭｏｕｓｅパネル（合計８個のｍＡｂ）を別々に生成し、細胞への結合について更に特性評価した。細胞結合を上記のように行い、以下の表にまとめた。試験した８個のｍＡｂのうち、６個はＣＤ３３発現細胞に直接結合したが、２個はしなかった。
Figure 2021524244
Figure 2021524244
細胞上でＣＤ３３に結合している６つのｍＡｂを、上記の方法を使用して、組換え抗原に対する全速度論分析を介して生物物理学的に更に特性評価し、以下の表にまとめた。試験した６つのｍＡｂのうち、１つは、ピコモル濃度の親和性でヒトＣＤ３３に（Ｃ３３Ｂ９１２）、そして、カニクイザルＣＤ３３に対してはナノモル濃度以下で結合し、一方、１つは、ヒトＣＤ３３に対しては非常に強い親和性を有していたが、カニクイザルＣＤ３３（Ｃ３３Ｂ９１１）に対してはナノモル濃度の親和性しか有していなかった。更なる２つのクローンは、ヒト及びカニクイザルＣＤ３３（Ｃ３３Ｂ９１３及びＣ３３Ｂ９１６）の両方に対してナノモル濃度以下であったが、いずれも親和性はＣ３３Ｂ９１２の範囲ではなかった。
Figure 2021524244
先のＯＭＮＩＲａｔキャンペーンで既に同定されたいくつかの対照ｍＡに加えて、ＯＭＮＩＭｏｕｓｅ由来の６つの細胞結合ｍＡｂについてもエピトープビニング実験を実施した。ヒトＣＤ３３に対するそのナノモル濃度以下の親和性及び異なるエピトープビンの数に基づいて、対照ｍＡｂを選択した。ビニングソフトウェアＨｔＴｏｏｌｓは、実験毎にエピトープビン数を割り当てるので、既に定義されたエピトープビンに対するいくつかの対照を有することが、交差比較のために重要であった。２つのＯＭＮＩＭｏｕｓｅ由来のヒトＣＤ３３高親和性クローン（Ｃ３３Ｂ９１１及びＣ３３Ｂ９１２）は両方とも、上記のビン４（この実験におけるビン４）からのクローンにビニングしたが、ナノモル濃度以下のクローン（Ｃ３３Ｂ９１６）は、Ｃ３３Ｂ８３６（上記実験におけるビン１）と共にこの実験における２にビニングした。
Figure 2021524244
ＣＤ３３は、２つのＩｇＧドメイン、膜遠位Ｖドメイン、及び膜近位Ｃ２ドメインで構成される。ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９は、ＣＤ３３プレｍＲＮＡ転写物の選択的オルタナティブスプライシングを引き起こして、Ｃ２のみの形態を細胞上で発現させ得るので、このドメインを標的とすることにより、臨床的有益性を与えることができる。２つのドメインのうちのいずれにｍＡｂが結合可能であったかを確認するために、結合抗原としてヒトＣＤ３３ ＥＣＤ−ＨＳＡ、ヒトＣＤ３３ Ｖ−ＨＳＡ、及びヒトＣＤ３３ Ｃ２−ＨＳＡを使用して、４つの異なるエピトープビンをカバーする、最高結合能力を有する６つのｍＡｂに対して上記プロトコルに従ってオフレートスクリーニングを行った。以下の表に示すように、ビン４に予め分類された２つのクローンは、両方ともｈｕＣＤ３３ Ｃ２ドメインに結合したが、ｈｕＣＤ３３ Ｖドメインには結合せず、一方、ビン２及び３のクローンは、Ｖドメインには結合したが、Ｃ２ドメインには結合しなかった。ビン５に分類された２つのクローンは、いずれのドメインにも結合しなかったため、その正確な結合位置は、２つのドメインにまたがっている可能性がある。３つの市販のｍＡｂをこの実験に含めたところ（ＷＭ５３（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｐ６７．７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、及びＬＳＢｉｏクローン９０６（ＬｉｆｅＳｐａｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ））、全てＶドメインへの結合は示したが、Ｃ２ドメインへの結合は示さなかった。表９のＣ２ドメイン結合データに関連して表５及び８のエピトープビンを見ると、ヒト完全長タンパク質に対して約２５ｎＭから約３０ｐＭまでの親和性の範囲でＣ２ドメインに潜在的に結合し得るｍＡｂが合計１５個存在する。
Figure 2021524244
更にインビボ及びインビトロ研究を裏付けるために、スケールアップ及びｆａｂアーム交換のために選択クローン（Ｃ３３Ｂ８３６、Ｃ３３Ｂ７８２、Ｃ３３Ｂ７７８、Ｃ３３Ｂ９０４、Ｃ３３Ｂ８０６、Ｃ３３Ｂ８３０、Ｃ３３Ｂ９３７、Ｃ３３Ｂ７９２、Ｃ３３Ｂ７６０、及びＣ３３Ｂ７７７）を選択して、抗ＣＤ３抗体を有する二重特異性ＤｕｏＢｏｄｙ分子を生成した。ＥｘｐｉＣＨＯ−Ｓ（商標）細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、１．２５×１０５〜２．２５×１０５生存細胞／ｍＬでＥｘｐｉＣＨＯ（商標）発現培地に播種し、３７℃、７％ＣＯ２のシェーカーインキュベータ（ＩＮＦＯＲＳ ＨＴ Ｍｕｌｔｉｔｒｏｎ Ｐｒｏ）においてポリカーボネート製、使い捨て、滅菌、排気、バッフルなし三角振盪フラスコ内で培養した。１２５ｍＬ〜２Ｌの振盪フラスコにおける通常の細胞増殖の場合、振盪直径１９ｍｍの振盪器については振盪速度を１３０ｒｐｍに設定した。生存率９８〜９９％で、密度が４×１０６〜６×１０６生存細胞／ｍＬで対数増殖に達したときに、細胞を継代培養した。
トランスフェクションの２日前に、必要とされる培養体積に対して１．５×１０６生存細胞／ｍＬでＥｘｐｉＣＨＯ−Ｓ（商標）細胞を播種した。トランスフェクションの日に、生存細胞密度及び生存率を求めた。細胞を、６×１０６生存細胞／ｍＬの密度でトランスフェクトした。最適なトランスフェクションのために、ＴＥバッファ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ８．０）中≧１ｍｇ／ｍＬ濃度の滅菌重鎖及び軽鎖プラスミドＤＮＡを使用した。
製造元のＭａｘ Ｔｉｔｅｒトランスフェクションプロトコル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒ ＭＡＮ００１４３３７）に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ−Ｓ（商標）細胞をトランスフェクトした。以下に示す全ての量及び体積は、最終的なトランスフェクトされた培養体積１ｍＬ当たりであった。簡潔に述べると、プラスミドＤＮＡを、以下の比で０．０４ｍＬの冷ＯｐｔｉＰＲＯ（商標）培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で希釈した：０．１２５μｇの重鎖ＤＮＡ：０．３７５μｇの軽鎖ＤＮＡ：０．５μｇのｐＡｄｖａｎｔａｇｅ。６．４μＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＣＨＯトランスフェクション試薬を希釈し、０．０４ｍＬの冷ＯｐｔｉＰＲＯ（商標）培地と穏やかに混合し、１分間インキュベートした。希釈したＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＣＨＯ試薬を希釈したＤＮＡに添加し、穏やかに混合し、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＣＨＯ／プラスミドＤＮＡ複合体を室温で５分間インキュベートした。インキュベーション後、複合体をシェーカーフラスコ内のＥｘｐｉＣＨＯ−Ｓ（商標）細胞に添加し、３７℃、７％ＣＯ２のシェーカーインキュベータ内で一晩インキュベートした。
Ｍａｘ Ｔｉｔｅｒプロトコルのために、トランスフェクション後１日目に、６μＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＣＨＯ Ｅｎｈａｎｃｅｒ及び１６０μＬのＥｘｐｉＣＨＯＴＭ Ｆｅｅｄを添加し、フラスコを３２℃、７％ＣＯ２のシェーカーインキュベータに移した。トランスフェクション後５日目に、１６０μＬのＥｘｐｉＣＨＯ（商標）Ｆｅｅｄを２回目でフラスコに添加し、振盪しながら３２℃のインキュベータに戻した。トランスフェクション後１２日目に培養物を収集し、５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、０．２μｍ Ａｃｒｏｐａｋ １５００フィルターカプセル（Ｐａｌｌ）を通して清澄化した。
ｍＡｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ Ｒｅｓｉｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、発現した抗体を清澄化した上清から精製した。ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａカラムを、１×Ｄ−ＰＢＳ、ｐＨ７．２で平衡化した後、個々の培養上清をロードした。未結合タンパク質を、１×Ｄ−ＰＢＳ、ｐＨ７．２で広範囲にわたって洗浄することによって除去した。結合タンパク質を０．１Ｍの酢酸ナトリウム、ｐＨ３．５で溶出した。ピーク画分を２．５Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．２）で中和し、プールした。中和された画分プールを、アッセイ及び生物物理的特性評価のために１×ｄＰＢＳに透析した、又は二重特異性ＤｕｏＢｏｄｙアセンブリに利用した。
各溶出プールのタンパク質濃度をＯＤ２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって求め、アミノ酸配列に基づいて吸光度、吸光係数を用いて計算した。
実施例３：精製された親ｍＡｂを使用したＦａｂアーム交換
ＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体の形成は、２つの親ｍＡｂ、ターゲティングアームに特異的なもの（例えば、ＣＤ３３）、及びエフェクターアームに特異的なもの（例えばＣＤ３）を必要とする。ＣＤ３３ｍＡｂを、高親和性（ＣＤ３Ｂ２１９）又は低親和性ＣＤ３アーム（ＣＤ３Ｂ３７６）アームで組換えた。これらの親ｍＡｂは、ターゲティング親（ＣＤ３３）がＫ４０９Ｒ変異（ＩｇＧ４のネイティブアミノ酸）を含有し、一方、殺傷親（ＣＤ３）はＦ４０５Ｌ変異及びＲ４０９Ｋを含有する、ＩｇＧ４ ＰＡＡフォーマット（Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ，２０１３）である。単一特異性抗ＣＤ３抗体を、そのＦｃ領域にＦｃ置換Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ及びＲ４０９Ｋ（ＣＤ３アーム）（ＥＵインデックスに従って付番）を有するＩｇＧ４として発現させた。単一特異性抗体を、上記のように発現させ、精製した。精製後、親ＣＤ３３抗体を、７５ｍＭシステアミン−ＨＣｌ中の還元条件下で所望の親ＣＤ３抗体と混合し、３１℃で５時間インキュベートした。組換え反応は、モル濃度比に基づいており、設定量のＣＤ３３抗体（例えば、１０ｍｇ又は約７４．６ナノモル）をＣＤ３抗体（例えば、約６７．８ナノモル）と組み合わせ、ＣＤ３３抗体をＣＤ３抗体の６％過剰量で添加した。ＣＤ３３抗体原液の濃度は、０．８〜６ｍｇ／ｍＬで変化し、組換え反応の体積は、各対形成で変化した。その後、組換え反応物をＰＢＳに対して一晩透析して、還元剤を除去した。組換え後に残存する未反応のＣＤ３親抗体の量を最小化するために、過剰なＣＤ３３抗体（比）を用いてＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体反応を行った。
組換え反応で使用した親ｍＡｂ（すなわち、ＣＤ３３、ＣＤ３、又はヌル）と共に、生成された最終ＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体を表１０に列挙する。
選択されたＣＤ３３ヒットは、非殺傷アーム（ヌル）と対形成して、試験目的のための陰性対照が生じた。対照二重特異性抗体Ｂ２Ｍ１については、ＩｇＧ４ ＰＡＡフォーマットにおけるＲＳＶ抗体を生成し、精製し、それぞれ、ＣＤ３アーム、ＣＤ３Ｂ２１９及びＣＤ３Ｂ３７６−Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９Ｋのいずれかと組み合わせてＣＤ３Ｂ２８８（ＣＤ３×ヌル）及びＣＤ３Ｂ５１０（ＣＤ３Ｂ３７６×ヌル）を生成したか、又はＣＤ３３アーム、Ｃ３３Ｂ８３６、Ｃ３３Ｂ８０６、Ｃ３３Ｂ７８２、Ｃ３３Ｂ７９２、Ｃ３３Ｂ７６０、Ｃ３３Ｂ８３０、Ｃ３３Ｂ７９９、Ｃ３３Ｂ７７８、Ｃ３３Ｂ７７７と組み合わせて、Ｃ３３Ｂ９４１、Ｃ３３Ｂ９４３、Ｃ３３Ｂ９４６、Ｃ３３Ｂ９４５、Ｃ３３Ｂ９４９、Ｃ３３Ｂ９４２、Ｃ３３Ｂ９４４、Ｃ３３Ｂ９４７、Ｃ３３Ｂ９４８を生成した（ＣＤ３３×ヌル）。
Figure 2021524244
Figure 2021524244
 Ｐｅｐ：ペプチド；Ｎｕｃ：ヌクレオチド；ＳＥＱ ＩＤ：配列番号
実施例４：ＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体を用いたインビトロＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイ
インビトロでＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイを実施して、ＣＤ３アーム（ＣＤ３Ｂ２１９）と対形成したＣＤ３３ヒットが、ＡＭＬ細胞株ＯＣＩ−ＡＭＬ５を発現しているＣＤ３３の殺傷を媒介するかどうかを評価した。簡潔に述べると、エフェクター細胞（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙから購入した汎Ｔ細胞）を収集し、カウントし、洗浄し、１０％ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含むＲＰＭＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）細胞培地中１×１０６細胞／ｍＬになるように再懸濁させた。標的細胞（ＭＯＬＭ１３）をＣＦＳＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識し、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ中２×１０５細胞／ｍＬになるように再懸濁させた。エフェクター細胞及びＣＦＳＥ標識標的細胞を、滅菌９６ウェル丸底プレートにおいてＥ：Ｔ＝５：１で混合した。１０μＬのＦｃブロック（ＲｅｏＰｒｏ Ｆｃ断片）を、５μＬの二重特異性抗体のアリコートと共に、様々な濃度を含有する各ウェルに添加した。培養物を、５％ＣＯ２下、３７℃で４８時間インキュベートした。４８時間後、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ−ＩＲ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎバッファ（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）をサンプルに添加し、培養物をＲＴで暗所において２０分間インキュベートし、洗浄し、１００〜２００μＬ ＦＡＣｓバッファに再懸濁させた。ＣＡＮＴＯ ＩＩフローサイトメータ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）を使用して薬物誘発性細胞傷害を判定し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア又はＤｉｖｅソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。対象となる集団は、二重陽性ＣＦＳＥ＋／ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ＋細胞である。図１に示されるように、ＣＤ３３×ＣＤ３多重特異性抗体の全てが、４８時間でＣＤ３３＋ＭＯＬＭ−１３細胞のＴ細胞リダイレクトによる細胞傷害を誘導した。表１１は、ＣＤ３３×ＣＤ３多重特異性抗体で得られたＥＣ５０値をまとめたものである。トップ４の抗体、Ｃ３ＣＢ１０、Ｃ３ＣＢ１２、Ｃ３ＣＢ７、及びＣ３ＣＢ８８を、更なる特性評価に進めた。
Figure 2021524244
実施例５：ＡＭＬ一次サンプルにおけるＡＭＬ芽球及びＴ細胞の活性化の、エクスビボにおけるＣＤ３３×ＣＤ３によって媒介される減少
ＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体の細胞傷害能を更に評価するために、トップ４の抗体を使用して、ＡＭＬ患者全血を使用するエクスビボ細胞傷害アッセイを行った（図２）。このアッセイは患者の血液中の自家Ｔ細胞の存在に依存するので、このアッセイでは、追加のＴ細胞を供給することなく４８時間にわたってＡＭＬ患者由来の希釈された全血に様々な二重特異性抗体（ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ２１９及びＣＤ３Ｂ３７６のいずれかと対形成したＣＤ３３抗体）を添加した。４８時間目に、サンプルをＣＤ３ ＰｅｒＣＰＣｙ５．５、ＣＤ２５ ＰＥ、ＣＤ３３ ＦＩＴＣ、及びＣＤ３８ ＡＰＣで染色した（全ての抗体はＢｉｏｌｅｇｅｎｄ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから購入した）。次いで、サンプルを１×Ｌｙｓｅ ＲＢＣ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で少なくとも３回洗浄した。次いで、サンプルを、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ−ＩＲ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎバッファ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色した。まず、二重特異性抗体の存在下で、ＡＭＬ患者癌細胞の画分（ＣＤ３−ＣＤ３８＋細胞として定義）中の生ＣＤ３３＋細胞を定量することによって、腫瘍細胞傷害の程度を求めた。以下の等式を使用して、ＰＢＳ／未処理対照に対するパーセントとして細胞傷害を計算した：（ＰＢＳ／未処理対照中のＣＤ３３＋％−処理サンプル中のＣＤ３３＋％）／（ＰＢＳ／未処理対照中のＣＤ３３＋％）。ＣＤ３＋画分中のＣＤ２５＋事象のパーセントとしてＴ細胞活性化を計算した。
図２に示すように、ＣＤ３アーム（ＣＤ３Ｂ３７６及びＣＤ３Ｂ２１９）のいずれかと対形成した全てのＣＤ３３リード抗体は、４８時間後、Ｔ細胞の活性化と相関する総細胞傷害の用量依存的な減少を促進した。ヌルアーム対照抗体（ヌル×ＣＤ３Ｂ２１９及びヌル×ＣＤ３Ｂ３７６）は、腫瘍細胞傷害もＴ細胞活性化も示さなかった。この結果も、ＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体が自家状況において機能することを証明する。これらの結果は、４つの他のＡＭＬドナーサンプルの代表的なものである（データは示さない）。表１２は、ＣＤ３３×ＣＤ３多重特異性抗体で得られたＥＣ５０値をまとめたものである。ＥＣ５０値から分かるように、Ｃ３アーム（Ｃ３ＣＢ８８、Ｃ３ＣＢ１８９）のいずれかと対形成したＣ３３Ｂ９０４、並びにＣＤ３アーム（Ｃ３ＣＢ７、Ｃ３ＣＢ９７）のいずれかと対形成したＣ３３Ｂ８３６が、最も強力かつ有効な抗体であった。したがって、更なる特性評価ではこれらの４つの抗体に焦点をあてた。
Figure 2021524244
実施例６：ＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体がＣＤ３３のＣ２ドメインに結合し、ＣＤ３３一塩基多型（ＳＮＰ）発現細胞株の細胞傷害を誘導することの証明。
ＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体を用いたインビトロＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイ
最近の研究によって、ＡＭＬ集団の約５０％に一塩基多型型（ＳＮＰ）ｒｓ１２４５９４１９が存在し、ＣＤ３３のエキソン２がスキップされ、その結果、ＣＤ３３のＶドメインが欠失することが示された。この研究はまた、ＣＤ３３のＶドメインに結合するＭｙｌｏｔａｒｇがＳＮＰを発現する患者において有効性を有していなかったので、再発リスクが低下し、ＡＭＬ集団の約５０％において生存率が改善されたことも示した（Ｌａｍｂａ ｅｔ ａｌ ２０１７，ＪＣＯ，ＣＤ３３ Ｓｐｌｉｃｉｎｇ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ Ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ Ｄｅ Ｎｏｖｏ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ：Ｒｅｐｏｒｔ Ｆｒｏｍ Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ Ｐｈａｓｅ ＩＩＩ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ Ｔｒｉａｌ ＡＡＭＬ０５３１）。上述の研究におけるＭｙｌｏｔａｒｇに関するデータに鑑みて、インビトロＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイを行って、ＣＤ３アーム（ＣＤ３Ｂ２１９又はＣＤ３Ｂ３７６）と対形成したＣＤ３３ヒット（Ｖ結合Ｃ３３Ｂ８３６対Ｃ２結合Ｃ３３Ｂ９０４）が、ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９発現細胞株の殺傷を媒介するかどうかを評価した。簡潔に述べると、エフェクター細胞（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙから購入した汎Ｔ細胞）を収集し、カウントし、洗浄し、１０％ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含むＲＰＭＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）細胞培地中１×１０６細胞／ｍＬになるように再懸濁させた。標的細胞（ＫＧ１、ＳＨ２、及びＯＣＩＡＭＬ３）をＣＦＳＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識し、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ中２×１０５細胞／ｍＬになるように再懸濁させた。ＫＧ１、ＳＨ２及びＯＣＩＡＭＬ３は、それぞれ、ＣＤ３３ ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９変異の野生型、ヘテロ接合型、及びホモ接合型を表すように選択した。エフェクター細胞及びＣＦＳＥ標識標的細胞を、滅菌９６ウェル丸底プレートにおいてエフェクター：標的比（Ｅ：Ｔ）＝５：１で混合した。１０μＬのＦｃブロック（ＲｅｏＰｒｏ Ｆｃ断片）を、５μＬの二重特異性抗体のアリコートと共に、様々な濃度を含有する各ウェルに添加した。培養物を、５％ＣＯ２下、３７℃で４８時間インキュベートした。４８時間後、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ−ＩＲ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎバッファ（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）をサンプルに添加し、培養物を、ＲＴで暗所において２０分間インキュベートし、洗浄し、１００〜２００μＬ ＦＡＣバッファに再懸濁させた。ＣＡＮＴＯＩＩフローサイトメータ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、薬剤誘導細胞傷害を決定し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア又はＤｉｖｅソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により分析した。対象となる集団は、二重陽性ＣＦＳＥ＋／ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ＋細胞である。図３に示すように、ヌルアーム対照（ヌル×ＣＤ３Ｂ２１９及びヌル×ＣＤ３Ｂ３７６）とは異なり、Ｖ結合及びＣ２結合ＣＤ３３×ＣＤ３多重特異性抗体は、４８時間でＳＮＰｒｓ１２４５９４１９変異細胞株ＫＧ１についてＣＤ３３＋野生型のＴ細胞リダイレクトによる細胞傷害を誘導した。対照的に、ＶバインダーＣ３３Ｂ８３６（Ｃ３ＣＢ９７、Ｃ３ＣＢ７）とは異なり、Ｃ２結合Ｃ３３Ｂ９０４と対形成した二重特異性抗体（Ｃ３ＣＢ１８９、Ｃ３ＣＢ８８）のみが、それぞれｒｓ１２４５９４１９ ＳＮＰ変異についてヘテロ接合型又はホモ接合性であったＳＨ２及びＯＣＩＡＭＬ３細胞株の細胞傷害を媒介した。この理由から、Ｃ３３Ｂ９０４と対形成した二重特異性抗体（Ｃ３ＣＢ１８９、Ｃ３ＣＢ８８）を、更なる分析及び特性評価に進めた。まとめると、これらのデータは、Ｃ３３Ｂ９０４と対形成した二重特異性抗体などのＣＤ３３ Ｃ２結合二重特異性抗体が、Ｖ結合競合因子抗ＣＤ３３抗体よりも広範なＡＭＬ患者群において有効性を示す能力を有することを示唆している。
実施例７：エクスビボでＣＤ３３×ＣＤ３は、エクスビボ全血ＭＯＬＭ−１３細胞傷害アッセイにおいてＭＯＬＭ−１３及び単球におけるスパイクの減少を媒介した。
ＭＯＬＭ−１３細胞及び正常ヒト単球におけるスパイクの排除におけるＣＤ３３×ＣＤ３の細胞傷害能を評価するために、外添されたＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞株ＭＯＬＭ−１３と共に正常健常ヒト全血を使用するエクスビボ細胞傷害アッセイを利用した。このアッセイはドナーの血液中の自家Ｔ細胞の存在に依存するので、上記実験と同様に、追加のＴ細胞を供給することなく４８時間にわたって６者の異なる正常ヒトドナー由来の希釈された全血に様々な二重特異性抗体（ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ２１９及びＣＤ３Ｂ３７６のいずれかと対形成したＣＤ３３抗体）を添加した。希釈前に、各ドナーの血液中のＴ細胞の濃度を調べた。次いで、ＡＭＬ患者サンプルにおけるエフェクター：標的比を再現するためにエフェクター：標的比（Ｅ：Ｔ）が１：５になるように、血液をＣＦＳＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）標識ＭＯＬＭ−１３細胞で希釈した。４８時間目に、サンプルをＣＤ３ ＰｅｒＣＰＣｙ５．５、ＣＤ２５ ＰＥ、ＣＤ３３ ＦＩＴＣ、及びＣＤ１４ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅで染色した（全ての抗体はＢｉｏｌｅｇｅｎｄから購入した）。次いで、サンプルを１×Ｌｙｓｅ ＲＢＣ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で少なくとも３回洗浄した。次いで、サンプルを、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ−ＩＲ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎバッファ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色した。まず、二重特異性抗体の存在下で、ＣＤ１４＋単球の画分中の生ＣＤ３３＋細胞を定量することによって、腫瘍細胞傷害の程度を求めた。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセントを数えることにより、ＭＯＬＭ−１３細胞の細胞傷害を判定した。以下の等式を使用して、ＰＢＳ／未処理対照に対するパーセントとして単球の細胞傷害を計算した：（ＰＢＳ／未処理対照中のＣＤ３３＋ＣＤ１４＋％−処理サンプル中のＣＤ３３＋ＣＤ１４＋％）／（ＰＢＳ／未処理対照中のＣＤ３３＋ＣＤ１４＋％）。図４のデータは、両方のＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体（ＣＤ３アーム、ＣＤ３Ｂ３７６及びＣＤ３Ｂ２１９のいずれかと対形成した同じＣＤ３３リードＣ３３Ｂ９０４）が、４８時間でＭＯＬＭ−１３細胞及びＣＤ３３＋単球の細胞傷害を特異的に誘導することを示す。ヌルアーム対照を、陰性二重特異性抗体対照として使用した。ヌルアーム対照は、ＭＯＬＭ−１３及びＣＤ３３＋単球の細胞傷害活性をほとんど乃至全く示さなかった。これらのデータは、６者の異なる正常ドナーの平均値を示す。ＭＯＬＭ−１３及びＣＤ１４＋単球の細胞傷害についての平均ＥＣ５０値を表１３に示す。
Figure 2021524244
実施例８：カニクイザルに対するＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体の種交差反応性の証明
エクスビボにおいて、ＣＤ３３×ＣＤ３は、カニクイザル全血を用いたエクスビボ細胞傷害アッセイにおいて単球の減少を媒介した。
機能的交差反応性を証明し、正常カニクイザル単球の排除におけるＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体の細胞傷害能を評価するために、健常カニクイザル全血を使用したエクスビボ細胞傷害アッセイを利用した。このアッセイはドナーの血液中の自家Ｔ細胞の存在に依存するので、上記実験と同様に、追加のＴ細胞を供給することなく４８時間にわたって６者の異なる正常カニクイザルドナー由来の希釈された全血に様々な二重特異性抗体（ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ２１９及びＣＤ３Ｂ３７６のいずれかと対形成したＣＤ３３抗体）を添加した。４８時間目に、サンプルをＣＤ３ ＰｅｒＣＰＣｙ５．５、ＣＤ２５ ＰＥ、ＣＤ３３ ＦＩＴＣ、及びＣＤ１４ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅで染色した（全ての抗体は、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ；Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙから購入したＣＤ３３抗体を除いてＢｉｏｌｅｇｅｎｄから購入した）。次いで、１×Ｌｙｓｅ ＲＢＣ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）でサンプルを少なくとも３回洗浄した後、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ−ＩＲ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎバッファ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色した。まず、二重特異性抗体の存在下で、ＣＤ１４＋単球の画分中の生ＣＤ３３＋細胞を定量することによって、単球細胞傷害の程度を求めた。以下の等式を使用して、ＰＢＳ／未処理対照に対するパーセントとして細胞傷害を計算した：（ＰＢＳ／未処理対照中のＣＤ３３＋ＣＤ１４＋％−処理サンプル中のＣＤ３３＋ＣＤ１４＋％）／（ＰＢＳ／未処理対照中のＣＤ３３＋ＣＤ１４＋％）。ＣＤ３＋画分中のＣＤ２５＋事象のパーセントとしてＴ細胞活性化を計算した。図５のデータは、両方のＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体（ＣＤ３アーム、ＣＤ３Ｂ３７６及びＣＤ３Ｂ２１９のいずれかと対形成した同じＣＤ３３リードＣ３３Ｂ９０４）が、４８時間でＣＤ３３＋単球の細胞傷害及びＴ細胞活性化を特異的に誘導したことを示す。ヌルアーム対照を、陰性二重特異性抗体対照として使用したところ、ほとんど乃至全く細胞傷害もＴ細胞活性も示さなかった。表１４は、６者の異なるカニクイザルドナーの平均値を示す。
Figure 2021524244
実施例９：Ｔ細胞ヒト化ＮＳＧマウスにおけるＭＯＬＭ−１３ヒトＡＭＬ異種移植片におけるＣ３ＣＢ１８９及びＣ３ＣＢ８８の有効性
２０００万個のＴ細胞でヒト化された雌ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスにおける、樹立されたルシフェラーゼでトランスフェクトされた播種性ＭＯＬＭ−１３ヒト急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）異種移植片において、Ｃ３ＣＢ１８９及びＣ３ＣＢ８８の有効性を評価した。静脈内腫瘍移植後５日目にライブバイオルミネッセンスイメージング（ＢＬＩ）によって、動物をｎ＝１０／群に無作為化した。０．００５、０．０５、及び０．５ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９及びＣ３ＣＢ８８、又は０．５ｍｇ／ｋｇのヌル×ＣＤ３抗体対照を、６週間にわたって３〜４日毎に腹腔内投与した。
腫瘍移植後１３日目に、１群あたり少なくとも８匹の動物が残存していた場合、バイオルミネッセンスによって決定したときの腫瘍成長阻害（％ＴＧＩ）を計算した。ヌル×ＣＤ３対照と比較して、全ての濃度においてＣ３ＣＢ１８９（図６）及びＣ３ＣＢ８８（図８）で統計的に有意な腫瘍成長阻害が観察された。ヌル×ＣＤ３処理対照と比較して、０．００５、０．０５、及び０．５ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９は、それぞれ７６％、１００％、及び８２％の腫瘍成長阻害を惹起し、０．００５、０．０５、及び０．５ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ８８は、それぞれ１００％、１００％、及び９１％の腫瘍成長阻害を惹起した。
Ｃ３ＣＢ１８９及びＣ３ＣＢ８８による処理の結果、腫瘍量が低減し、ヌル×ＣＤ３対照群の１６日中央値生存期間よりも長寿命（ＩＬＳ）に延長された。Ｃ３ＣＢ１８９で処理した動物は、１９〜２７．５日間の中央値生存期間を有しており（図７）、Ｃ３ＣＢ８８で処理した動物は、全用量で２６〜２８．５日間の中央値生存期間を有していた（図９）。対照群と比較して、０．００５、０．０５、及び０．５ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９は、それぞれ１９％、７２％、及び５０％寿命を延長させ、Ｃ３ＣＢ８８は、それぞれ６３％、７８％及び７２％の寿命を延長させた。
実施例１０：インビトロプロテインＡ薬物コンジュゲート細胞生存アッセイにおけるＣＤ３３抗体の内部移行の証明
予めロードしておいたプロテインＡ薬物コンジュゲート、Ａ−ＭＭＡＦを使用したインビトロ細胞生存アッセイを行って、リガンド結合標的抗体の内部移行を検出した。ＡＭＬ細胞株ＭＯＬＭ１３において抗ＣＤ３３抗体のパネル、Ｃ３３Ｂ７８２、Ｃ３３Ｂ８０６、Ｃ３３Ｂ８３６、Ｃ３３Ｂ９０４、Ｃ３３Ｂ９３７、及びアイソタイプ対照抗体ＣＮＴＯ９４１２を用いて、この細胞ベースの機能アッセイを実施した。抗体の内部移行による細胞傷害と試験抗体自体の活性による細胞傷害とを区別するために、このアッセイでは標的抗体のみを対照として試験した。図１０は、３７℃、５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした後のＭＯＬＭ１３におけるプロテインＡ−ＭＭＡＦ結合抗体による細胞傷害を示す。ＭＯＬＭ１３細胞における５つ全てのＣＤ３３抗体で濃度依存性細胞傷害が観察され、これは、この細胞株における５つの抗体全てが内部移行したことを示唆する。アイソタイプ対照抗体、ＣＮＴＯ９４１２は、有意な濃度依存性細胞傷害を示さず、これは、ＭＯＬＭ１３細胞においてこれらのＣＤ３３抗体が標的特異的に内部移行することを示唆する。表１５は、５つのＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体についてのＥＣ５０値を示す。
結果はまた、抗体Ｃ３３Ｂ８３６が他の細胞よりもＭＯＬＭ１３細胞においてより良く内部移行することを示した。
Figure 2021524244
実施例１１：ＣＤ３３抗体がＡＤＣＣ活性を媒介し得ることの証明
抗ＣＤ３３ｍＡｂの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を特性評価するために、健常ドナーＮＫエフェクター細胞及びＭＯＬＭ−１３及びＭＶ４−１１ ＡＭＬ標的細胞を利用してインビトロＡＤＣＣアッセイを実施した。ＡＤＣＣアッセイを開始する１６〜２４時間前に、１×１０−６Ｍヒドロコルチゾン（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ）、７．５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、１％ピルビン酸ナトリウム（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１％非必須アミノ酸（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１％ペニシリンストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補給したＭｙｅｌｏＣｕｌｔ Ｈ５１００増殖培地（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＣＡ）に、健常ドナーＮＫ細胞（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎドナーＣＣ０００６１及びＭ７０１５；Ｃｏｌｍａｒ，ＰＡ）をプレーティングした。アッセイの日、１×１０６細胞／ｍＬのＭＯＬＭ−１３及びＭＶ４−１１細胞を、３７℃で３０分間１０μＭのカルセインＡＭで標識した。標識後、細胞を３回洗浄して過剰のカルセインＡＭを除去した。続いて、１×１０５個のカルセインＡＭ標識ＭＯＬＭ−１３又はＭＶ４−１１標的細胞を、様々な濃度の抗ＣＤ３３抗体の存在下で、健常ドナーＮＫ細胞（３×１０５個）と共に３７℃で１．５時間インキュベートした。０．５％の最終濃度で、指定された対照サンプルウェルにＴｒｉｔｏｎ Ｘ１００を添加することにより、最大溶解対照サンプルを生成した。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ５マルチモードプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，ＬＬＣ；Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて、４８５〜５３５ｎｍにおける蛍光によりカルセインＡＭの放出を測定した。以下の等式を使用して、データを最大（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００媒介）及び最小（エフェクター細胞のみ）の溶解に対して正規化することによって、細胞溶解パーセントを求めた：溶解％＝［（実験溶解−自発溶解）／（最大溶解−自発溶解）］×１００。
ＩｇＧ１低フコース抗ＣＤ３３抗体は、濃度依存的にＡＤＣＣを誘導した（図１１）。Ｃ３３Ｂ４８．ＣＬＦは、Ｃ３３Ｂ９１２．ＣＬＦよりもＭＯＬＭ−１３及びＭＶ４−１１細胞に対してより強力なＡＤＣＣ活性を示し、１２〜２３倍高い最大半量有効濃度値を有していた（ＥＣ５０、表１６）。Ｃ３３Ｂ４８．ＣＬＦ及びＣ３３Ｂ９１２．ＣＬＦに応答したＭＯＬＭ−１３及びＭＶ４−１１細胞の最大溶解は類似していた。
Figure 2021524244
実施例１２：白血病性芽球によって大量に発現される抗原、ＣＤ３３を標的とするＣ３ＣＢ１８９抗体の結合特性。
Ｃ３ＣＢ１８９は、Ｔ細胞におけるＣＤ３受容体複合体及び骨髄細胞におけるＣＤ３３を標的とする完全ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）４−ＰＡＡ二重特異性抗体である。Ｃ３ＣＢ１８９は、０．８９ｐＭの親和性（Ｋｄ）でヒト組換え（ｒ）ＣＤ３３に、そして、３６３ｐＭの親和性（Ｋｄ）でカニクイザル（ｃｙｎｏ）ｒＣＤ３３に結合する。Ｃ３ＣＢ１８９はまた、それぞれ１５１．３２及び４３．８３ｎＭの親和性（Ｋｄ）でヒト及びカニクイザルｒＣＤ３ｅにも結合する。Ｃ３ＣＢ１８９は、ＣＤ３３発現ＡＭＬ細胞株ＫＧ−１、ＭＯＬＭ−１３、Ｋａｓｕｍｉ−１、及びＯＣＩ−ＡＭＬ３に特異的に結合した（図１２）。単一の抗ＣＤ３３ Ｆａｂアームを含むので、予想どおり、陰性対照ＣＤ３３×ヌル抗体と同様の結合パターンが見られた。陰性対照二重特異性抗体ヌル×ＣＤ３並びにヌル×ヌルは、これらの細胞に対して有意な結合を示さなかった。試験した二重特異性抗体はいずれも、ＣＤ３３陰性細胞株、ＣＡＲＮＡＶＡＬ、及びＫＧ−１ΔＣＤ３３、すなわち、ＣＲＩＳＰＲを使用してＣＤ３３の遺伝子を欠失させたＫＧ−１細胞に結合しなかった（図１２）。更に、親ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞とは対照的に、Ｃ３ＣＢ１８９はカニクイザルＣＤ３３を発現しているＨＥＫ ２９３Ｔ細胞に結合し、これはカニクイザルとの交差反応性を証明するものである（図１２）。
実施例１３：Ｃ３ＣＢ１８９はＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞株を殺傷し、インビトロでＴ細胞を活性化する
次に、Ｔ細胞媒介性細胞傷害アッセイを用いて、ＭＯＬＭ−１３、ＫＧ−１、ＳＫＮＯ−１、Ｋａｓｕｍｉ−１、及びＯＣＩ−ＡＭＬ３などのＣＤ３３＋細胞株、並びにＣＡＲＮＡＶＡＬ及びＫＧ１ΔＣＤ３３などのＣＤ３３無し／低細胞株を含む様々な細胞株において、インビトロにおけるＣ３ＣＢ１８９の活性を評価した。６者の健常ドナー由来の単離された汎ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞及び断片結晶性領域（Ｆｃ）ブロッカーを用いてアッセイを設定した。Ｆｃによって媒介されるＣＤ３ＣＢ１８９の動員を防止するためにＦｃブロッカーを添加し、これは、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域におけるＰＡＡ変異が、それを完全にはサイレンシングしないため（Ｖａｆａ Ｅｔ ａｌ．，２０１４）、及びＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）は、多くの場合ＡＭＬ細胞で発現するため（Ｂａｌｌ Ｅｔ ａｌ．，１９８９）である。
図１３に見られるように、Ｃ３ＣＢ１８９は、４８時間後に精製Ｔ細胞と組み合わせたとき、ＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞株のＴ細胞媒介性細胞傷害を示した（図１３）。ＭＯＬＭ−１３、ＫＧ−１、Ｋａｓｕｍｉ−１、及びＯＣＩ−ＡＭＬ３の中央値最大半量有効濃度（ＥＣ５０）［並びにＥＣ２０値］は、それぞれ、０．１３０７［０．０２８３］、０．１６７７［０．０５２５］、０．０５［０．０３６６］、及び０．１８２６［０．０８４４］ｎＭであった（図２Ｂ）。ＣＤ３３陰性細胞株ＣＡＲＮＡＶＡＬ及びＫＧ−１ΔＣＤ３３でも、対照二重特異性抗体（ヌル×ＣＤ３又はＣＤ３３×ヌル；図１３を参照）でも細胞傷害は観察されなかった。本発明者らは、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体を用いて細胞傷害アッセイを実施することによって、ＫＧ１ΔＣＤ３３細胞が実際にＴ細胞に標的とされ得ることを確認した（図１４Ａ）。
ＣＤ３３＋腫瘍細胞株の存在下でＣ３ＣＢ１８９により誘導されたＴ細胞活性化の程度についても、細胞傷害アッセイにおいてインビトロで評価し、ＣＤ２５発現を活性化の指標として測定した。図２Ｃに示すように、ＣＤ３３＋腫瘍細胞株及び健常ドナー汎Ｔ細胞と共にインキュベートしたとき、Ｃ３ＣＢ１８９はＴ細胞活性化を誘導したが、ＣＤ３３−ＣＡＲＮＡＶＡＬ及びＫＧ−１ΔＣＤ３３細胞では、Ｔ細胞活性化が最小限しか又は全く観察されなかった。ＭＯＬＭ−１３、ＫＧ−１、Ｋａｓｕｍｉ−１、及びＯＣＩ−ＡＭＬ３についての中央ＥＣ５０［ＥＣ２０］値は、それぞれ、０．０２８３［０．００７７］、０．０６６４［０．０２５６］、０．０４３２［０．０２６７］、及び０．０５００［０．０１７８］ｎＭであった（図１５Ｃ）。Ｃ３ＣＢ１８９は、標的細胞の非存在下でＴ細胞の活性化を引き起こさず、これは、Ｔ細胞活性化の特異性を証明する（図１４Ｂ）。ＣＤ３３×ヌル対照抗体は、いずれの細胞株においてもＴ細胞活性化を誘導しなかった。ヌル×ＣＤ３対照抗体は、ＣＤ３３＋及びＣＤ３３−細胞株の存在下において５３３及び５３ｎＭの最高濃度でＴ細胞活性化を誘導したが、いずれの他の用量でも活性化を媒介しなかった。重要なことに、Ｃ３ＣＢ１８９は、ＣＤ３３＋細胞株の存在下でのみＴ細胞活性化の特異的誘導を示し、ＣＤ３３−細胞株の存在下（図１５Ａ）でも、Ｔ細胞を標的細胞の非存在下でインキュベートした場合（図１４Ｂ）にも誘導しなかった。
最後に、Ｋａｓｕｍｉ−１細胞株を用いた上記インビトロＴ細胞リダイレクションアッセイにおいてサイトカイン応答についても評価した。Ｃ３ＣＢ１８９は、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、インターロイキン（ＩＬ）−２、及びＩＬ−８（補助図３）を含むいくつかのサイトカインの分泌を引き起こした。これらのデータは、図１３及び図１５Ａ〜図１５Ｃに示す細胞傷害及びＴ細胞活性化データと一致している。サイトカイン応答についての中央ＥＯ５０及び最大可能効果の２０％を生じさせる濃度（ＥＣ２０）値の要約を表１７に報告する。
Figure 2021524244
実施例１４：Ｃ３ＣＢ１８９は、インビボにおいて有効な抗腫瘍活性を示す。
Ｔ細胞ヒト化ＮＳＧマウスにおいて２つの樹立された異種移植片腫瘍モデルにおけるＣ３ＣＢ１８９の機能を評価した。樹立された皮下ＫＧ−１担癌マウスにおいて、０．１、０．５、及び１ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９による処理は、ヌル×ＣＤ３で処理された対照動物と比較して、それぞれ４１％、９２％、及び８７％の腫瘍成長阻害を惹起した（０．５及び１ｍｇ／ｋｇについてはｐ＜０．０００１、図１６Ａ）。０．５及び１ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９はまた、５５日目にそれぞれ６及び７の完全奏功をもたらした。
樹立された播種性ルシフェラーゼ発現ＭＯＬＭ−１３モデル（ＭＯＬＭ−１３−ｌｕｃ）では、静脈注射後にＡＭＬ細胞の骨髄（ＢＭ）へのホーミングが確認された後に、Ｃ３ＣＢ１８９処理を開始した。３〜４日毎に投与した０．００５、０．０５、及び０．５ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９は、ヌル×ＣＤ３対照処理マウスと比較して、バイオルミネッセンスによって評価したとき、腫瘍成長を有意に阻害した（それぞれ７６％、１００％、及び８２％）（図１７）。０．００５、０．０５、及び０．５ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９は、バイオルミネッセンスによって観察したとき、ＢＭ、脊椎、及び後肢における腫瘍量の低減と相関して、それぞれ、１９％、７２％、及び５０％の統計的に有意な寿命の延長をもたらした（ｐ＜０．０００１、図１６Ｂ）（図１６Ｃ）。５５日目の試験の終了時に、ＢＬＩによって評価したとき、０．０５ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９で処理した３匹の動物は完全奏功を示した。
更に、０．０５ｍｇ／ｋｇ及びより低い程度の０．００５ｍｇ／ｋｇのＣ３ＣＢ１８９で処理したＭＯＬＭ−１３−ｌｕｃ担癌マウスは、１１日目に、フローサイトメトリーによって測定したとき、骨髄において腫瘍細胞の減少及びＣＤ３＋Ｔ細胞浸潤の増加を示し（図１６Ｄ）、ＩＨＣによりＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤の増加を示した（図３Ｅ）。ＢＭは、多くの場合、ＡＭＬにおける白血病幹細胞（ＬＳＣ）及び微小残存病変の残留に対する耐性の部位であるため、これらのデータは関連している。まとめると、これらのデータは、Ｃ３ＣＢ１８９がＴ細胞ヒト化マウスにおける腫瘍部位にＴ細胞を動員することによって、２つのＡＭＬ腫瘍モデルの腫瘍成長を阻害することを証明する。
実施例１５：Ｃ３ＣＢ１８９は、健常全血にスパイクされたＡＭＬ細胞並びに一次患者サンプル由来のＡＭＬ芽球の細胞傷害を媒介する。
ＣＤ３３の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）は、細胞からシェディングされることが報告されており、したがって、正常及び患者サンプルは、可溶性ＣＤ３３（ｓＣＤ３３）を含有し得る。ＡＭＬ患者の血漿中で検出された約４〜３０ｎｇ／ｍＬのｓＣＤ３３が存在することが研究によって示されている（Ｂｉｅｄｅｒｍａｎｎ，Ｂ，Ｇｉｌ，Ｄ．，Ｂｏｗｅｎ，Ｄ．Ｔ．，ａｎｄ Ｃｒｏｃｋｓ，Ｐ．Ｒ．（２００７）．Ｌｅｕｋ Ｒｅｓ ３１，２１１−２２０）。この値は、健常ヒト血清で測定された０．６〜５．８ｎｇ／ｍＬの濃度よりも高い（Ｂｉｅｄｅｒｍａｎｎ，Ｂ，Ｇｉｌ，Ｄ．，Ｂｏｗｅｎ，Ｄ．Ｔ．，ａｎｄ Ｃｒｏｃｋｓ，Ｐ．Ｒ．（２００７）．Ｌｅｕｋ Ｒｅｓ ３１，２１１−２２０）。
正常及びＡＭＬドナーにおける生理学的ｓＣＤ３３レベルを求めるために、免疫捕捉結合質量分析（ＭＳ）アッセイを開発した。正常及びＡＭＬ血清サンプルの分析は、それぞれ、５３．０３ｎｇ／ｍＬ（１．９１ｎＭ）及び５２．９０ｎｇ／ｍＬ（１．９０ｎＭ）の同様の平均ｓＣＤ３３レベルを示した（表１８）。
Figure 2021524244
より生理学的に関連する状況におけるＣ３ＣＢ１８９の活性を評価するために、本発明者らは、ヒト末梢全血をエフェクターＴ細胞源として使用してＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイを行い、様々なＣＤ３３＋腫瘍細胞を標的として添加し、４８時間インキュベートした。Ｃ３ＣＢ１８９は、ＣＤ３３＋ＭＯＬＭ−１３及びＫａｓｕｍｉ−１細胞のＴ細胞媒介性細胞傷害を誘導し、中央ＥＣ５０［ＥＣ２０］値は、それぞれ０．１１１［０．０５４］及び０．１２４［０．０６］ｎＭであった（図１７）。同様に、Ｃ３ＣＢ１８９は、Ｔ細胞（ＣＤ２５によって示されるように）、ＭＯＬＭ−１３、及びＫａｓｕｍｉ−１細胞を活性化させ、中央ＥＣ５０［ＥＣ２０］値は、それぞれ０．０３７［０．０１７］及び０．０８５［０．０３９］ｎＭであった（図１８Ａ及び図１８Ｂ）。測定されたＣ３ＣＢ１８９媒介性Ｔ細胞活性化は、血液中の総Ｔ細胞活性化を表し、外因性ＣＤ３３＋腫瘍細胞、並びに恐らく内因性ＣＤ３３＋末梢白血球、例えば、このアッセイにおいて細胞傷害について測定されなかった好中球及び単球などの両方の殺傷に関連する活性化を反映している。加えて、これらのデータは、全血中にベースラインレベルのｓＣＤ３３及び他のＣＤ３３＋白血球が存在するにもかかわらず、Ｃ３ＣＢ１８９が腫瘍細胞の殺傷を媒介することを示唆している。
次に、ＡＭＬドナー由来の全血を使用したエクスビボ細胞傷害アッセイにおいて、より臨床的に関連する状況において細胞傷害を誘導するＣ３ＣＢ１８９の能力を評価した。この系は、患者自身の血液中の自家Ｔ細胞の存在に依存して、ＡＭＬ細胞を殺傷する。ＣＤ３３＋細胞のＴ細胞媒介性細胞傷害及びＴ細胞活性化の程度を測定した。Ｃ３ＣＢ１８９は、６者の患者全員のサンプルにおいて、Ｔ細胞活性化の増大（図１９Ｂ）とも相関するＣＤ３３＋芽球の濃度依存性細胞傷害を誘導した（図１９Ａ）。Ｃ３ＣＢ１８９により誘導された最大細胞傷害は、ＣＤ３３＋芽球の約６０％であった。ヌルアーム対照抗体は、制限された細胞傷害及びＴ細胞活性化を誘導した。Ｃ３ＣＢ１８９は、細胞傷害及びＴ細胞活性化を誘導し、その結果、それぞれ０．０５２〜９．５２ｎＭ（中央値：０．３６５ｎＭ）及び０．０３〜５．１０９ｎＭ（中央値：０．３５５ｎＭ）の範囲のＥＣ５０値が得られた（図１９Ａ及び図１９Ｂ）。これらのデータは、Ｃ３ＣＢ１８９が、より生理学的なエクスビボ状況において、そして、ベースラインｓＣＤ３３レベルの存在下で、ＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞の殺傷において有効であったことを示す。
実施例１６：Ｃ３ＣＢ１８９についてのカニクイザル交差反応性の評価
カニクイザル（ｃｙｎｏ）がＣ３ＣＢ１８９の活性を評価するのに適切なモデルであるかどうかを評価するために、本発明者らは、まず、ＦＡＣＳ分析によって、６者の健常カニクイザルから得られた白血球におけるＣＤ３３発現について調べた。カニクイザル末梢血中のＴ細胞及びＢ細胞は、低レベル乃至ゼロレベルのＣＤ３３発現を有することが見出された（図２０）。カニクイザルの好中球の約７５％〜９６％は、７，５４５分子／細胞の平均抗原密度でＣＤ３３を発現した（図２０）。他方、ＣＤ３３＋カニクイザル単球のパーセントは、６者のドナー間で０％〜８４％の範囲でばらついており、平均抗原密度は２，１４６分子／細胞であった（図２０）。
次に、カニクイザルの交差反応性を証明し、正常カニクイザルの単球及び好中球を排除する際のＣ３ＣＢ１８９の細胞傷害能を評価するために、本発明者らは、健常カニクイザル全血を使用してエクスビボ細胞傷害アッセイを実施し、外添したＣＤ３３＋ＭＯＬＭ−１３細胞を利用した。この系では、ＣＤ３３＋正常カニクイザル単球及び正常カニクイザル好中球の枯渇についても、Ｔ細胞の活性化と共にモニタリングした。実際、４８時間エクスビボでインキュベートした後、Ｃ３ＣＢ１８９は、インビトロで、ＣＤ３３＋正常カニクイザル単球（ＥＣ５０：０．６２５〜５．６３６ｎＭ）及び正常カニクイザル好中球（ＥＣ５０：０．０１３〜０．７１４ｎＭ）と共に、ＣＤ３３＋ＭＯＬＭ−１３細胞（ＥＣ５０：０．０１３〜０．４５２ｎＭ）の殺傷を媒介した（図２１）。ヌル×ＣＤ３対照は、全てのＣＤ３３＋標的細胞の制限された細胞傷害を示し、５３３ｎＭの最高用量でのみＴ細胞活性化を示した。まとめると、これらのデータは、Ｃ３ＣＢ１８９の機能性カニクイザル交差反応性を示し、ＣＤ３３＋カニクイザルの単球及び好中球を非ヒト霊長類研究における潜在的な薬力学的（ＰＤ）マーカーとして確立する。これらのデータはまた、Ｃ３ＣＢ１８９がカニクイザルＴ細胞によるヒトＡＭＬ細胞株の枯渇を媒介し得ることも示す。重要なことに、これらの結果から、カニクイザルがＣ３ＣＢ１８９についての適切な有効性モデルであることが確認される。
実施例１７：Ｃ３ＣＢ１８９はカニクイザルにおけるＣＤ３３＋白血球の減少を媒介する。
インビボにおけるＣ３ＣＢ１８９の薬物動態（ＰＫ）及び薬力学（ＰＤ）を評価するために、Ｃ３ＣＢ１８９を単回ＩＶ投与としてカニクイザルに投与した。ＰＫプロファイルを図２２Ａに示す。Ｃ３ＣＢ１８９は、０．０５〜１ｍｇ／ｋｇの用量範囲にわたって、ほぼ線形のＰＫを有する典型的なモノクローナル抗体（ｍＡｂ）のＰＫ特性を示した。Ｃ３ＣＢ１８９の推定平均総クリアランスは、１３．０３〜２１．３９ｍＬ／日／ｋｇであり、分布の体積は、８９．１４〜１５４．９１ｍＬ／ｋｇであり、終末半減期は、４．２０〜５．０６日間であった。１ｍｇ／ｋｇ用量群の動物では１０日目の後にＣ３ＣＢ１８９の明らかに加速された排出が観察された。これは、恐らく抗薬物抗体（ＡＤＡ）の発生に関連しているが、ＡＤＡはこの研究では試験しなかった。
予想される作用機序と一致して、Ｃ３ＣＢ１８９の単回ＩＶ投与後にＴ細胞活性化の用量依存的な増大（ＣＤ２５＋％）が観察され、Ｔ細胞傷害リンパ球（ＣＤ８＋／ＣＤ４−）に対するピークＣＤ２５＋％は、投与後２４時間で最初に観察された（図２２Ｂ）。Ｔヘルパーリンパ球（ＣＤ４＋／ＣＤ８−）も、Ｃ３ＣＢ１８９投与後に同様の活性化（ＣＤ２５＋％）プロファイルを示した（データは示さない）。また、Ｃ３ＣＢ１８９の投与の結果、投与後２時間で分析したサイトカイン（ＩＦＮγ、ＩＬ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、及びＴＮＦα）の血漿濃度が用量依存的に増加した（図２３）。ＩＬ−１０及びＭＣＰ−１を除いて、サイトカインは、投与後２４時間までに、定量下限（ＬＬＯＱ）レベルを再度下回った。
Ｃ３ＣＢ１８９関連の投与は、ＣＤ３３＋顆粒球（好中球）を持続的に減少させた。単球におけるＣＤ３３発現レベルの低下と一致して、ＣＤ３３＋単球のより一過的な減少も観察された。顆粒球及び単球の濃度−時間プロファイルを、それぞれ図２２Ｃ及び図２２Ｄに示す。末梢血由来の顆粒球及び単球の初期の急速な消失は、Ｔ細胞活性化に関連する一過的な白血球の辺縁趨向に関連している可能性があるが、ＣＤ３３＋顆粒球／単球集団の減少は、はるかにより持続的であった。具体的には、顆粒球集団の減少は、８日目にほぼ最大レベルになるまで継続し、その後に徐々に回復する。単球の回復は、より早く生じ、より顕著であった。
また、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルの複数回ＩＶ投与後に、Ｃ３ＣＢ１８９を別の２者のカニクイザルの試験においても試験した。Ｃ３ＣＢ１８９に関連する変化は、単回投与後に観察されたものと概ね一致し、Ｃ３ＣＢ１８９はこれらの用量レベルで耐容性良好であった（データは示さない）。まとめると、これらのデータは、カニクイザルにおける耐容性を維持しながら、Ｃ３ＣＢ１８９媒介活性のエビデンスを提供する。
実施例１８：ｒｓ１２４５９４１９ ＳＮＰの遺伝子型を問わない、ＣＤ３３＋細胞株及び患者サンプルのＣ３ＣＢ１８９媒介性細胞傷害
ＳＮＰ、ｒｓ１２４５９４１９（Ｃ＞Ｔ；エキソン２におけるＡｌａ１４Ｖａｌ）は、ＣＤ３３の制御性スプライス部位内に存在し、ここがＴ対立遺伝子であると、Ｖセットドメインを欠くＣＤ３３タンパク質アイソフォームをコードしていると予測される転写物の発現が増加する。最近のデータによって、更に、ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９ ＣＣ遺伝子型を有する対象（試験参加者の約５０％）は、再発リスクが有意に低く、ＧＯ療法後の無再発生存期間（ＥＦＳ）及び無病生存期間がより良いことが証明されたが、この効果は、ＣＴ又はＴＴ遺伝子型を有する患者には見られなかった（Ｌａｍｂａ，Ｊ．Ｋ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｌ．，Ｓｈｉｎ，Ｍ．，Ｌｏｋｅｎ，Ｍ．Ｒ．，Ｐｏｌｌａｒｄ，Ｊ．Ａ．，Ｗａｎｇ，Ｙ．Ｃ．，Ｒｉｅｓ，Ｒ．Ｅ．，Ａｐｌｅｎｃ，Ｒ．，Ｈｉｒｓｃｈ，Ｂ．Ａ．，Ｒａｉｍｏｎｄｉ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．（２０１７）．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３５，２６７４−２６８２．）。上記の試験におけるＧＯに関するデータに鑑みて、本発明者らは、Ｃ３ＣＢ１８９の活性に対するＳＮＰ−ｒｓ１２４５９４１９遺伝子型の影響を評価した。まず、本発明者らは、水素重水素交換（ＨＤＸ）マッピングを介して、Ｃ３３Ｂ９０４（Ｃ３ＣＢ１８９のＣＤ３３親アームのＩｇＧ４バージョン）が、ＣＤ３３のＣ２ドメイン（図２４ＡのＩｇＣ）内の異なる領域に結合し、Ｖ領域（図２４ＡのＩｇＶ）には結合しないことを確認した。対照的に、Ｃ３３Ｂ８３６（Ｃ３ＣＢ９７のＣＤ３３親アームのＩｇＧ４バージョン）は、ＣＤ３３のＶドメインに結合し、ＣＤ３３のＣ２領域には結合しない。次に、本発明者らは、Ｃ３ＣＢ９７（Ｖバインダー）によって媒介される応答をＣ３ＣＢ１８９（Ｃ２バインダー）と比較するために、インビトロＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイを使用した。遺伝子型決定データ（図２５Ａ）に基づいて、ＫＧ−１、ＳＨ２、及びＯＣＩ−ＡＭＬ３は、それぞれ、ＣＤ３３ ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９変異の野生型ＣＣ、ヘテロ接合型ＣＴ、及びホモ接合型ＴＴを表すように選択した。ヌル×ＣＤ３対照とは異なり、Ｖ及びＣ２結合ＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体は、４８時間でＣＤ３３＋ＫＧ−１「ＣＣ」細胞株のＴ細胞リダイレクトによる細胞傷害を誘導した（図６Ｂ）。対照的に、Ｖ−バインダーＣ３ＣＢ９７とは異なり、Ｃ２結合Ｃ３ＣＢ１８９のみが、ＳＨ２「ＣＴ」細胞株及びＯＣＩ−ＡＭＬ３「ＴＴ」細胞株の細胞傷害を媒介したが、ＶバインダーＣ３ＣＢ９７については活性が観察されなかった。
次に、本発明者らは、ＡＭＬ患者全血を使用してエクスビボ細胞傷害アッセイを行って、上記の所見を確認した。遺伝子型決定データに基づいて、それぞれ、ＣＤ３３ ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９について、患者サンプル６０９５、６１１６、及び６１５２はＣＣ遺伝子型であると同定されたが、患者サンプル６１２９及びＵＳＡＭＬ００７８はヘテロ接合型ＣＴであると同定された（図２５Ｂ）。ＣＤ３３ ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９についてホモ接合型ＴＴであると同定されたサンプルはなかった。Ｖ結合及びＣ２結合ＣＤ３３×ＣＤ３二重特異性抗体は、実際に、ＣＣ遺伝子型として同定されたＡＭＬサンプルと同等のＴ細胞リダイレクトによる細胞傷害を誘導した。対照的に、Ｃ２結合Ｃ３ＣＢ１８９は、Ｖ結合Ｃ３ＣＢ９７と比較して、ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９変異についてヘテロ接合型（ＣＴ）であったＡＭＬサンプルの細胞傷害の増強を示した（図２４Ｂ）。次に、ＳＮＰｒｓ１２４５９４１９が生殖系列突然変異であることに鑑みて、本発明者らは、２５者の異なる健常ドナー由来の精製単球及び適合自家Ｔ細胞を用いて、同様のエクスビボ実験を実施した。２５者のドナー全てについての遺伝子型決定データを図２５Ｃに示す。Ｃ３ＣＢ１８９がＣＤ３３のＣ２ドメインに結合するという事実と一致して、Ｃ３ＣＢ１８９は、そのＳＮＰ遺伝子型状態を問わず、初代ヒト単球の細胞傷害を媒介した（図２４Ｃを参照）。対照的に、Ｖ結合Ｃ３ＣＢ９７は、サンプルがＳＮＰｒｓ１２４５９４１９についてＣＴ又はＴＴである場合、制限された細胞傷害しか媒介しなかった、又は全く媒介しなかった。まとめると、これら３つの系統のエビデンスは、Ｃ３ＣＢ１８９が、保存されたＣ２エピトープを標的とすることによって、より広いＡＭＬ患者群において有効性を示すことができることを示唆している。
当業者は、広い発明概念から逸脱することなく前述の実施形態に変更を行うことができることを理解するであろう。したがって、本発明は、開示された特定の実施形態に制限されず、本説明によって定義されるように本発明の趣旨及び範囲内の修正を包含することを意図するものと理解される。
Figure 2021524244
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Claims (38)

  1. ＣＤ３３のＣ２ドメインに特異的に結合する、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
  2. 以下のポリペプチド配列を有する、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片：
    ａ．それぞれ、配列番号４４７、４４８、４４９、５６７、５６８、及び５６９、
    ｂ．それぞれ、配列番号４４４、４４５、４４６、５６４、５６５、及び５６６、
    ｃ．それぞれ、配列番号３５４、３５５、３５６、４７７、４７８、及び４７９、
    ｄ．それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５０１、５０２、及び５０３、
    ｅ．それぞれ、配列番号４１１、４１２、４１３、５３１、５３２、及び５３３、
    ｆ．それぞれ、配列番号３４８、３４９、３５０、４７１、４７２、及び４７３、
    ｇ．それぞれ、配列番号３６０、３６１、３６２、４８３、４８４、及び４８５、
    ｈ．それぞれ、配列番号３６３、３６４、３６５、４８６、４８７、及び４８８、
    ｉ．それぞれ、配列番号３６６、３６７、３６８、４８９、４９０、及び４９１、
    ｊ．それぞれ、配列番号３６９、３７０、３７１、４９２、４９３、及び４９４、
    ｋ．それぞれ、配列番号３８７、３８８、３８９、４９２、４９３、及び４９４、
    ｌ．それぞれ、配列番号４０２、４０３、４０４、５２２、５２３、及び５２４、
    ｍ．それぞれ、配列番号４０８、４０９、４１０、５２８、５２９、及び５３０、
    ｎ．それぞれ、配列番号４２３、４２４、４２５、５４３、５４４、及び５４５、又は
    ｏ．それぞれ、配列番号４２６、４２７、４２８、５４６、５４７、及び５４８。
  3. 配列番号２９２、２９１、２６１、２６９、２８０、２５９、２６３、２６４、２６５、２６６、２７２、２７７、２７９、２８４、若しくは２８５と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３３２、３３１、３０２、３１０、３２０、３００、３０４、３０５、３０６、３０７、３１７、３１９、３２４、若しくは３２５と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項１又は２に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
  4. 以下を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片：
    ａ．配列番号２９２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｂ．配列番号２９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｃ．配列番号２６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｄ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｅ．配列番号２８０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｆ．配列番号２５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｇ．配列番号２６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｈ．配列番号２６４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｉ．配列番号２６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｊ．配列番号２６６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｋ．配列番号２７２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｌ．配列番号２７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｍ．配列番号２７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３１９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｎ．配列番号２８４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
    ｏ．配列番号２８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号３２５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
  5. 約２ｎＭ未満のＥＣ５０でインビトロにおいて抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
  6. ＩｇＧ１低フコース骨格を含む、請求項５に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
  7. 約５×１０−９Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）でＣＤ３３に結合する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
  8. 約２ｎＭ未満のＥＣ５０で、ＣＤ３３に結合し、内部移行を誘導する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
  9. キメラである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
  10. ヒトである又はヒト化されている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
  11. 治療剤にコンジュゲートしている、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
  12. 請求項１〜１０のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードしている、単離核酸。
  13. 請求項１２に記載の単離核酸を含む、ベクター。
  14. 請求項１３に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  15. 請求項１〜１０のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、医薬上許容できる担体とを含む、医薬組成物。
  16. それを必要としている対象における癌を治療する方法であって、請求項１５に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  17. 前記癌が、血液癌である、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記血液癌が、白血病、リンパ腫、又は多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記血液癌が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である、請求項１７に記載の方法。
  20. 請求項１〜１０のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、前記モノクローナル抗体又は抗原結合断片を生成する条件下で、前記モノクローナル抗体又は抗原結合断片をコードしている核酸を含む細胞を培養することと、前記細胞又は培養物から前記抗体又は抗原結合断片を回収することと、を含む、方法。
  21. 請求項１〜１０のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬組成物を作製する方法であって、前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を医薬上許容できる担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法。
  22. 抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片と、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片とを含む、抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体であって、
    前記抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片が、以下のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み：
    ａ．それぞれ、配列番号４４７、４４８、４４９、５６７、５６８、及び５６９、
    ｂ．それぞれ、配列番号４４４、４４５、４４６、５６４、５６５、及び５６６、
    ｃ．それぞれ、配列番号３５４、３５５、３５６、４７７、４７８、及び４７９、
    ｄ．それぞれ、配列番号３７８、３７９、３８０、５０１、５０２、及び５０３、
    ｅ．それぞれ、配列番号４１１、４１２、４１３、５３１、５３２、及び５３３、
    ｆ．それぞれ、配列番号３４８、３４９、３５０、４７１、４７２、及び４７３、
    ｇ．それぞれ、配列番号３６０、３６１、３６２、４８３、４８４、及び４８５、
    ｈ．それぞれ、配列番号３６３、３６４、３６５、４８６、４８７、及び４８８、
    ｉ．それぞれ、配列番号３６６、３６７、３６８、４８９、４９０、及び４９１、
    ｊ．それぞれ、配列番号３６９、３７０、３７１、４９２、４９３、及び４９４、
    ｋ．それぞれ、配列番号３８７、３８８、３８９、４９２、４９３、及び４９４、
    ｌ．それぞれ、配列番号４０２、４０３、４０４、５２２、５２３、及び５２４、
    ｍ．それぞれ、配列番号４０８、４０９、４１０、５２８、５２９、及び５３０、
    ｎ．それぞれ、配列番号４２３、４２４、４２５、５４３、５４４、及び５４５、又は
    ｏ．それぞれ、配列番号４２６、４２７、４２８、５４６、５４７、及び５４８、
    前記抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片が、以下のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、二重特異性抗体：
    １）それぞれ、配列番号３４２、３４３、３４４、４６５、４６６、及び４６７、又は
    ２）それぞれ、配列番号３４５、３４６、３４７、４６８、４６９、及び４７０。
  23. 前記抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片が、配列番号２９２、２９１、２６１、２６９、２８０、２５９、２６３、２６４、２６５、２６６、２７２、２７７、２７９、２８４、若しくは２８５と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３３２、３３１、３０２、３１０、３２０、３００、３０４、３０５、３０６、３０７、３１７、３１９、３２４、若しくは３２５と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含み、前記抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片が、配列番号２５７若しくは２５８と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号２９８若しくは２９９と少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項２２に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
  24. 以下を含む、請求項２２又は２３に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片：
    ａ．配列番号２９２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｂ．配列番号２９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｃ．配列番号２６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｄ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｅ．配列番号２８０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｆ．配列番号２５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｇ．配列番号２６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｈ．配列番号２６４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｉ．配列番号２６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｊ．配列番号２６６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｋ．配列番号２７２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｌ．配列番号２７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｍ．配列番号２７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｎ．配列番号２８４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｏ．配列番号２８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｐ．配列番号２９２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｑ．配列番号２９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｒ．配列番号２６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｓ．配列番号２６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｔ．配列番号２８０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｕ．配列番号２５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｖ．配列番号２６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｗ．配列番号２６４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｘ．配列番号２６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｙ．配列番号２６６のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｚ．配列番号２７２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３０７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ａａ．配列番号２７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１７のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｂｂ．配列番号２７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３１９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
    ｃｃ．配列番号２８４のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
    ｄｄ．配列番号２８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号３２５のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号２５８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号２９９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
  25. 前記抗ＣＤ３３抗体又はその抗原結合断片が、ＣＤ３３のＣ２ドメインに特異的に結合する、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
  26. 約１ｎＭ未満のＥＣ５０値でインビトロにおいてＣＤ３３発現細胞のＴ細胞依存性細胞傷害を誘導する、請求項２２〜２５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
  27. キメラである、請求項２２〜２６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
  28. ヒトである又はヒト化されている、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
  29. 請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片をコードしている、単離核酸。
  30. 請求項２９に記載の単離核酸を含む、ベクター。
  31. 請求項３０に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  32. 請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と、医薬上許容できる担体とを含む、医薬組成物。
  33. それを必要としている対象における癌を治療する方法であって、請求項３２に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  34. 前記癌が、血液癌である、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記血液癌が、白血病、リンパ腫、又は多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
  36. 前記血液癌が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である、請求項３５に記載の方法。
  37. 請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、前記抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又は抗原結合断片を生成する条件下で、前記抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又は抗原結合断片をコードしている核酸を含む細胞を培養することと、前記細胞又は培養物から前記抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又は抗原結合断片を回収することと、を含む、方法。
  38. 請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬組成物を作製する方法であって、前記抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を医薬上許容できる担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法。
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