TW202033551A - 抗ｃｄ３３抗體，抗ｃｄ３３／抗ｃｄ３雙特異性抗體及其用途 - Google Patents

抗ｃｄ３３抗體，抗ｃｄ３３／抗ｃｄ３雙特異性抗體及其用途 Download PDF

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Abstract

所述者為抗CD33抗體及其抗原結合片段、以及抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段。亦描述編碼該等抗體之核酸、包含該等抗體之組成物、產生該等抗體之方法、及使用該等抗體治療或預防諸如癌症之疾病的方法。

Description

抗CD33抗體、抗CD33/抗CD3雙特異性抗體及其用途
本發明係關於單株抗CD33抗體、雙特異性抗CD33/抗CD3抗體、編碼該等抗體之核酸及表現載體、含有該等載體之重組細胞、及包含該等抗體之組成物。亦提供製造該等抗體之方法、及使用該等抗體治療包括癌症之疾病的方法。
急性骨髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)係以白血病細胞之殖株擴增為特徵的遺傳異質性疾病。儘管對於AML中潛在疾病生物學的瞭解增加，但細胞毒性化學療法的標準治療在過去幾十年大致上保持不變，且總體五年存活率仍然很低，為<30%(Burnett,Wetzler,& Lowenberg,2011；Cancer Genome Atlas Research et al.,2013)。因此，迫切需要具有增加之功效和降低之毒性的新療法，其理想地靶向AML幹細胞，因為這些細胞被認為在AML的致病機制中是關鍵的，並認為其藉由標準療法之根除不足而促成高復發率(Hope,Jin,& Dick,2004；Ishikawa et al.,2007)。雖然針對細胞表面分子之治療性抗體已被證明可有效治療諸如淋巴瘤及急性淋巴母細胞性白血病之惡性病症、以及實體腫瘤(Hoelzer,2013；Jackson & Chester,2015)，目前僅有一種基於抗體之療法經核准用 於AML(Godwin,Gale,& Walter,2017)。
CD33係67kD單次跨膜醣蛋白，且係唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素(Siglec)家族的成員。雖然其確切的生物功能尚不清楚，但在正常個體中，其主要被認為是髓樣分化抗原(myeloid differentiation antigen)，在骨髓前驅細胞、嗜中性球、及巨噬細胞中具有低表現，而在循環單核球及樹突細胞中高度表現。重要的是，已在85至90%患有AML的患者之母細胞及白血病幹細胞上偵測到CD33。有趣的是，CD33的表現受限於造血細胞(Paul,Taylor,Stansbury,& McVicar,2000；Ulyanova,Blasioli,Woodford-Thomas,& Thomas,1999)，但不存在於正常的造血幹細胞(Andrews,Torok-Storb,& Bernstein,1983；Griffin,Linch,Sabbath,Larcom,& Schlossman,1984；Jilani et al.,2002)。這些發現表明CD33係AML中基於抗體之療法的合適標靶。
CD33的結構在其胞外部分係由媒介唾液酸結合的胺基端V-set Ig樣域(由CD33的外顯子2編碼)及C2-set Ig樣域(由外顯子3及4編碼)組成(Laszlo et al.,2016)。替代的CD33 RNA剪接可導致在細胞表面上表現之較短異構體，其缺乏V-set但保留C2-set Ig樣域(Laszlo,Estey,& Walter,2014；Laszlo et al.,2016)。此剪接程序之生物相關性大部分係未知的，直到最近的研究顯示在~50%之AML群體中存在單核苷酸多型性(single nucleotide polymorphism,SNP)rs12459419，並導致CD33之外顯子2的跳躍(skipping)，其導致CD33的V域缺失(Lamba et al.,2017)。有趣的是，數種基於CD33抗體的療法(包括唯一經核准用於AML之抗體Mylotarg)結合並辨識CD33之V域。事實上，上述研究顯示， Mylotarg在表現SNP的患者中沒有功效，並因此僅在~50%之AML群體中具有功效(Lamba et al.,2017)。鑑於Mylotarg的數據，假設其他V結合CD33抗體亦僅在有限的AML患者群中有效(特別是不具有SNP rs12459419突變者)是合理的。
實際上，當研究CD33臨床空間時，額外的抗CD33抗體包括Amgen之AMG330及AMG673、Amphivena之AMV564、Immunogen之IMGN779、Boehringer Ingelheim之BI836858、Actinium Pharma之Actimab、及Seattle Genetic之SGN33A。Amgen之AMG330係CD33xCD3 BiTE，且據報導其「識別位於具有核心序列IPYYDKN之CD33的V-set域中的線性表位」。(Friedrich et al.,2014)。鑑於AMG673係CD33 BiTE之半衰期延長版本，據信其與BiTE結合相同表位。Amphivena之AMV564係一種四價雙特異性CD33/CD3抗體，且根據US9803029，該抗體結合至CD33之V域。Immunogen IMGN779係一種接合至DNA烷化劑之CD33抗體(My9-6)，且根據US9359442專利中之圖1，125I-標記之My9-6抗體與My9抗體競爭結合至CD33陽性U-937細胞。My9抗體結合至CD33之V域(Perez-Oliva et al.,2011)。總而言之，該證據表明IMGN779結合至CD33之V域。Boehringer Ingelheim之BI 836858係一種Fc經工程改造之抗CD33抗體，其媒介NK細胞媒介之ADCC並結合至CD33之V域(Vasu et al.,2016)。另外，Vasu et al.連同Malik et al.及Perez-Oliva et al.示出將林妥珠單抗(lintuzumab)(HuM195)映射(mapping)至CD33之V域的證據(Malik et al.,2015；Perez-Oliva et al.,2011)。HuM195抗體目前正在臨床試驗中，由Actinium pharma將其 接合至錒以製造Actimab。HuM195抗體亦已由Seattle Gloctics將其接合至DNA結合劑以製造SGN33A；然而因為毒性考量，此藥物目前被擱置。因此，所屬技術領域中已知之抗CD33抗體結合至CD33之V域。
鑑於這些數據，當涉及AML中基於CD33之抗體療法以及需要具有結合CD33之C2域的抗體以治療CD33表現癌症時，存在關鍵的未滿足之醫療需求。
在一大致態樣中，本發明係關於結合CD33之單離單株抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，該等單離單株抗體或其抗原結合片段結合CD33之C2域。在某些實施例中，該等單離單株抗體或其抗原結合片段結合CD33之V域。
在一大致態樣中，本發明係關於結合至CD33及CD3之單離雙特異性抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，該等雙特異性抗體或其抗原結合片段結合CD33之C2域。在某些實施例中，該等雙特異性抗體或其抗原結合片段結合CD33之V域。
所提供者係特異性結合CD33之C2域的單離單株抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，該單離單株抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
a.分別為SEQ ID NO：447、448、449、567、568、及569；
b.分別為SEQ ID NO：444、445、446、564、565、及566；
c.分別為SEQ ID NO：354、355、356、477、478、及479；
d.分別為SEQ ID NO：378、379、380、501、502、及503；
e.分別為SEQ ID NO：411、412、413、531、532、及533；
f.分別為SEQ ID NO：348、349、350、471、472、及473；
g.分別為SEQ ID NO：360、361、362、483、484、及485；
h.分別為SEQ ID NO：363、364、365、486、487、及488；
i.分別為SEQ ID NO：366、367、368、489、490、及491；
j.分別為SEQ ID NO：369、370、371、492、493、及494；
k.分別為SEQ ID NO：387、388、389、492、493、及494；
l.分別為SEQ ID NO：402、403、404、522、523、及524；
m.分別為SEQ ID NO：408、409、410、528、529、及530；
n.分別為SEQ ID NO：423、424、425、543、544、及545；或
o.分別為SEQ ID NO：426、427、428、546、547、及548。
該抗體或其抗原結合片段可例如特異性結合至CD33、較佳地人類CD33。
在某些實施例中，該單離單株抗體或其抗原結合片段包含：具有與SEQ ID NO：292、291、261、269、280、259、263、264、265、266、272、277、279、284、或285至少95%同一之多肽序列的重鏈可變區；或具有與SEQ ID NO：332、331、302、310、320、300、304、305、306、307、317、319、324、或325至少95%同一之多肽序列的輕鏈可變區。
在某些實施例中，該單離單株抗體或其抗原結合片段包含：
a.具有SEQ ID NO：292之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：332之多肽序列的輕鏈可變區；
b.具有SEQ ID NO：291之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：331之多肽序列的輕鏈可變區；
c.具有SEQ ID NO：261之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：302之多肽序列的輕鏈可變區；
d.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：310之多肽序列的輕鏈可變區；
e.具有SEQ ID NO：280之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；
f.具有SEQ ID NO：259之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：300之多肽序列的輕鏈可變區；
g.具有SEQ ID NO：263之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：304之多肽序列的輕鏈可變區；
h.具有SEQ ID NO：264之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：305之多肽序列的輕鏈可變區；
i.具有SEQ ID NO：265之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：306之多肽序列的輕鏈可變區；
j.具有SEQ ID NO：266之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；
k.具有SEQ ID NO：272之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；
l.具有SEQ ID NO：277之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：317之多肽序列的輕鏈可變區；
m.具有SEQ ID NO：279之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：319之多肽序列的輕鏈可變區；
n.具有SEQ ID NO：284之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：324之多肽序列的輕鏈可變區；或
o.具有SEQ ID NO：285之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：325之多肽序列的輕鏈可變區。
在某些實施例中，該單離單株抗體或其抗原結合片段在體外以小於約2nM的EC50誘導抗體依賴性細胞毒性(antibody-dependent cellular cytotoxicity,ADCC)。該抗體或其抗原結合片段可例如包含IgG1低岩藻醣(fucose)主鏈。
在某些實施例中，該單離單株抗體或其抗原結合片段以小於約5×10-9M之解離常數(KD)結合CD33。
在某些實施例中，該單離單株抗體或其抗原結合片段以小於約2nM的EC50結合CD33並誘導內化(internalization)。
在某些實施例中，該單離單株抗體或其抗原結合片段係接合至治療劑。
在某些實施例中，該單離單株抗體或其抗原結合片段係嵌合的、部分人源化、或完全人源化。
本文亦提供抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含抗CD33抗體或其抗原結合片段、及抗CD3抗體或其抗原結合片段，其中該抗CD33抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
a.分別為SEQ ID NO：447、448、449、567、568、及569；
b.分別為SEQ ID NO：444、445、446、564、565、及566；
c.分別為SEQ ID NO：354、355、356、477、478、及479；
d.分別為SEQ ID NO：378、379、380、501、502、及503；
e.分別為SEQ ID NO：411、412、413、531、532、及533；
f.分別為SEQ ID NO：348、349、350、471、472、及473；
g.分別為SEQ ID NO：360、361、362、483、484、及485；
h.分別為SEQ ID NO：363、364、365、486、487、及488；
i.分別為SEQ ID NO：366、367、368、489、490、及491；
j.分別為SEQ ID NO：369、370、371、492、493、及494；
k.分別為SEQ ID NO：387、388、389、492、493、及494；
l.分別為SEQ ID NO：402、403、404、522、523、及524；
m.分別為SEQ ID NO：408、409、410、528、529、及530；
n.分別為SEQ ID NO：423、424、425、543、544、及545；或
o.分別為SEQ ID NO：426、427、428、546、547、及548；
且該抗CD3抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
1)分別為SEQ ID NO：342、343、344、465、466、及467；或
2)分別為SEQ ID NO：345、346、347、468、469、及470。
在某些實施例中，該抗CD33抗體或其抗原結合片段包含：具有與SEQ ID NO：292、291、261、269、280、259、263、264、265、266、272、277、279、284、或285至少95%同一之多肽序列的重鏈可變區；或具有與SEQ ID NO：332、331、302、310、320、300、304、305、306、307、317、319、324、或325至少95%同一之多肽序列的輕鏈可變區；且該抗CD3抗體或其抗原結合片段包含具有與SEQ ID NO：257或258至少95%同一之多肽序列的重鏈可變區；或具有與SEQ ID NO：298或299至少95%同一之多肽序列的輕鏈可變區。
在某些實施例中，該抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段包含：
a.具有SEQ ID NO：292之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：332之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
b.具有SEQ ID NO：291之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：331之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
c.具有SEQ ID NO：261之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：302之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
d.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：310之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
e.具有SEQ ID NO：280之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
f.具有SEQ ID NO：259之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：300之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
g.具有SEQ ID NO：263之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：304之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
h.具有SEQ ID NO：264之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：305之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
i.具有SEQ ID NO：265之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：306之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
j.具有SEQ ID NO：266之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
k.具有SEQ ID NO：272之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
l.具有SEQ ID NO：277之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：317之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
m.具有SEQ ID NO：279之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：319之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
n.具有SEQ ID NO：284之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：324之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
o.具有SEQ ID NO：285之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：325之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
p.具有SEQ ID NO：292之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：332之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
q.具有SEQ ID NO：291之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：331之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
r.具有SEQ ID NO：261之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：302之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
s.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：310之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
t.具有SEQ ID NO：280之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
u.具有SEQ ID NO：259之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：300之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
v.具有SEQ ID NO：263之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：304之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
w.具有SEQ ID NO：264之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：305之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
x.具有SEQ ID NO：265之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：306之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
y.具有SEQ ID NO：266之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
z.具有SEQ ID NO：272之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
aa.具有SEQ ID NO：277之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：317之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
bb.具有SEQ ID NO：279之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：319之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
cc.具有SEQ ID NO：284之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：324之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；或
dd.具有SEQ ID NO：285之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：325之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區。
在某些實施例中，該抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段在體外以小於約1nM的EC50值誘導CD33表現細胞中之T細胞依賴性細胞毒性。
在某些實施例中，抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段係嵌合的、部分人源化、或完全人源化。
亦提供編碼本發明之單株及/或雙特異性抗體或其抗原結合片段之單離核酸。
亦提供包含編碼本發明之單株及/或雙特異性抗體或其抗原結合片段之單離核酸的載體。
亦提供包含該等載體之宿主細胞，該等載體包含編碼本發明之單株及/或雙特異性抗體或其抗原結合片段之單離核酸。
在某些實施例中，所提供者係一種醫藥組成物，其包含本發明之單離單株抗體或其抗原結合片段、及醫藥上可接受之載劑。在某些實施例中，所提供者係一種醫藥組成物，其包含本發明之單離雙特異性抗體或其抗原結合片段、及醫藥上可接受之載劑。
亦提供治療有需要之對象的癌症之方法，該等方法包含向該對象投予本發明之醫藥組成物。在某些實施例中，該癌症係血液性癌症(hematologic cancer)。該血液性癌症可例如選自由(但不限於)白血病、淋巴瘤、或多發性骨髓瘤所組成之群組。在一些實施例中，該血液性癌症可係急性骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS，低或高風險)、急性淋巴球性白血病(ALL，包括所有亞型)、瀰漫性大B細胞淋巴 瘤(DLBCL)、慢性骨髓性白血病(CML)、或母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤(DPDCN)。
亦提供產生本發明之單株或雙特異性抗體或其抗原結合片段之方法。該等方法包含在產生該單株或雙特異性抗體或抗原結合片段之條件下培養包含編碼該單株或雙特異性抗體或抗原結合片段之核酸的細胞，及自該細胞或培養物回收該單株或雙特異性抗體或抗原結合片段。
亦提供產生包含本發明之單株及/或雙特異性抗體或抗原結合片段的醫藥組成物之方法。該等方法包含將該單株及/或雙特異性抗體或其抗原結合片段與醫藥上可接受之載劑組合以獲得該醫藥組成物。
前述發明內容以及下文中本申請案之較佳實施例的實施方式在結合附圖閱讀時可更有利理解。然而應理解的是，本申請案並不受限於圖式中所示確切實施例。
〔圖1A至圖1B〕顯示CD33xCD3 T細胞媒介之細胞毒性檢定。將使用抗CD3臂CD3B219之CD33xCD3雙特異性抗體與人類泛T細胞(pan T cell)及CD33+ AML細胞系培養。在37℃、5% CO2下48hr後，藉由流動式細胞測量術測量總腫瘤細胞之細胞毒性。圖1A顯示由OMNIRat所識別之抗體候選物，而圖1B顯示由OMNIMouse所識別之抗體候選物。
〔圖2A至圖2B〕顯示使用抗CD3臂CD3B219及CD3B376之CD33xCD3雙特異性抗體在新鮮AML患者全血中的母細胞細胞毒性及T細胞活化之離體評估。圖2A顯示使用CD33雙特異性抗體或CD3x空 (null)對照組之AML細胞的總細胞細胞毒性百分比。圖2B顯示由CD33雙特異性抗體或CD3x空對照組誘導之T細胞活化。不加入Fc阻斷劑。
〔圖3A至圖3C〕顯示CD33xCD3 T細胞媒介之細胞毒性檢定。將使用抗CD3臂CD3B219及抗CD3B376之CD33xCD3雙特異性抗體與人類泛T細胞及AML細胞系培養，該等細胞對於CD33 SNP rs12459419突變為野生型(KG1，圖3A)、異型(heterozygous)(SH2，圖3B)、或同型(homozygous)(OCIAML3，圖3C)任一者。在37℃、5% CO2下48hr後，藉由流動式細胞測量術測量總腫瘤細胞之細胞毒性。
〔圖4A至圖4B〕顯示與CD3B219或CD3B376配對之C33B904抗體對外源添加至正常健康人類全血(N=6個供體)的MOLM-13細胞之細胞毒性的離體評估：使用CD33xCD3雙特異性及各別空xCD3對照組之MOLM-13細胞(圖4A)及CD33+ CD14+單核球(圖4B)在48hrs時之細胞毒性百分比。
〔圖5A至圖5B〕顯示使用抗CD3臂CD3B219及CD3B376之CD33xCD3雙特異性抗體對來自六個正常食蟹獼猴供體之新鮮全血中單核球的細胞毒性及T細胞活化的離體評估。圖5A顯示使用CD33雙特異性抗體或其CD3x空對照組的CD33+CD14+食蟹獼猴單核球之總細胞的細胞毒性百分比。圖5B顯示由CD33雙特異性抗體或其CD3x空對照組誘導之T細胞活化。不加入Fc阻斷劑。
〔圖6〕顯示C3CB189在T細胞人源化NSG小鼠中之MOLM-13人類AML異種移植物中的抗腫瘤功效。將散播性MOLM-13腫瘤每週成像兩次以用於生物發光(BLI)，且結果係以平均輻射亮度(p/s/cm2/sr)±SEM (n=8至10/組)呈現。*p
Figure 108117806-A0202-12-0017-26
0.0001，針對治療組對對照組，其係藉由二因子ANOVA與Bonferroni檢定計算。
〔圖7〕顯示在T細胞人源化NSG小鼠中之MOLM-13人類AML異種移植物中用C3CB189治療之動物的存活。使用Kaplan-Meier曲線來圖形表示帶有MOLM-13之小鼠的存活，並藉由對數等級(Mantel-Cox)檢定評估。*p
Figure 108117806-A0202-12-0017-25
0.0001，針對治療組對對照組。
〔圖8〕顯示C3CB88在T細胞人源化NSG小鼠中之MOLM-13人類AML異種移植物中的抗腫瘤功效。將散播性MOLM-13腫瘤每週成像兩次以用於生物發光(BLI)，且結果係以平均輻射亮度(p/s/cm2/sr)±SEM(n=8至10/組)呈現。*p
Figure 108117806-A0202-12-0017-27
0.0001，針對治療組對對照組，其係藉由二因子ANOVA與Bonferroni檢定計算。
〔圖9〕顯示在T細胞人源化NSG小鼠中之MOLM-13人類AML異種移植物中用C3CB88治療之動物的存活。使用Kaplan-Meier曲線來圖形表示帶有MOLM-13之小鼠的存活，並藉由對數等級(Mantel-Cox)檢定評估。*p
Figure 108117806-A0202-12-0017-28
0.05，針對治療組對對照組。
〔圖10〕顯示用於偵測MOLM13細胞中的五種抗CD33抗體內化之體外蛋白質A藥物接合物細胞存活率檢定。所有五種抗CD33抗體均顯示劑量依賴性方式的細胞毒性。
〔圖11A至圖11B〕顯示低岩藻醣IgG1抗CD33 mAb媒介ADCC活性。人類NK細胞針對MOLM-13(圖11A)及MV4-11(圖11B)之ADCC回應於增加濃度的IgG1抗CD33 mAb而靶向細胞。
〔圖12〕顯示以各種濃度之C3CB189將CD33陽性及CD33陰性細胞系染色4h，以表徵雙特異性抗體之表面結合概況。
〔圖13〕顯示在用所指示之細胞系的T細胞重新定向檢定中測試來自六個健康供體之T細胞並藉由FACS判定細胞毒性百分比。繪製平均值±SD。
〔圖14A及圖14B〕.C3CB189結合至C2域並媒介原始樣本之細胞毒性，不論其SNP 12459419基因型狀態為何。圖14A)使用CD33xCD3或CD123xCD3雙特異性抗體於CD33+ KG-1及CD33- KG1△CD33細胞系中的T細胞媒介之細胞毒性及活化檢定。圖14B)將T細胞單獨與增加濃度之C3CB189培養48小時，並藉由流動式細胞測量術測量T細胞活化。繪製平均值±SD。
〔圖15A至圖15C〕.圖15A顯示中位數值，其顯示來自六個健康供體之細胞毒性讀數之EC20、EC50、及EC90。圖15B係類似於圖13，但此處測量T細胞活化。圖15C係類似於圖15A，但此處顯示來自六個健康供體之T細胞活化讀數之中位數EC20、EC50、及EC90值。
〔圖16A至圖16E〕：C3CB189在兩個已建立的鼠類AML模型中在體內媒介有效腫瘤活性。圖16A顯示帶有已建立的KG-1腫瘤之T細胞人源化NSG小鼠係以0.1、0.5、及1mg/kg的C3CB189 i.p.給藥。每週測量腫瘤體積兩次，並將各組之結果以平均腫瘤體積±SEM呈現。圖16B顯示帶有散播性MOLM-13Luc細胞之T細胞人源化NSG小鼠係以0.005、0.05、及0.5mg/kg的C3CB189 i.p.給藥。利用Kaplan Meier存活分析來判定存活。圖16C係與圖16B相同，但此處係每週測量生物發光兩次，並顯示在第9、13、及16天之生物發光的活動物成像(n=3至5隻動物的腹側及背 側視圖)的代表性影像(由於死亡率，在第16天對照組中n=3)。圖16D係類似於圖16B，但此處係用C3CB189以0.005及0.05mg/kg對小鼠給藥，共三次劑量。藉由流動式細胞測量分析來測量骨髓中之T細胞浸潤，且結果係以腫瘤細胞百分比(上圖)或CD3+ T細胞百分比(下圖)呈現。圖16E係與圖16D相同，但此處係藉由IHC染色來測量骨髓中之T細胞浸潤，且結果係以CD33+腫瘤細胞(上圖)或CD8+ T細胞(下圖)呈現。
〔圖17〕顯示C3CB189在散播性鼠類AML模型中媒介抗腫瘤反應。在第0天植入腫瘤細胞，在第5天植入T細胞，並依X軸下方所示的線條給藥。以平均值±SEM繪製群組生物發光。*表示在用C3CB189及空xCD3對照處理(在第13天，n=9至10/組)之間，在第13天的顯著差異(p
Figure 108117806-A0202-12-0019-29
0.05)。
〔圖18A及圖18B〕顯示在全血中C3CB189誘導之CD33+細胞系之T細胞依賴性細胞毒性。圖18A顯示在用所指示之細胞系的T細胞重新定向檢定中測試來自十個健康供體的T細胞(每供體單一點)。繪製平均值±SD。圖18B係與圖18A相同，但此處顯示細胞毒性及T細胞活化EC20、EC50、及EC90值。ND指示無法判定，即，Prism提供近似值或曲線不明確。值係來自10個健康供體之中位數。
〔圖19A及圖19B〕顯示C3CB189媒介來自原始患者樣本的AML母細胞之細胞毒性。圖19A顯示在48h後在新鮮AML患者全血中，CD33+母細胞之C3CB189媒介細胞毒性的離體評估。針對各患者樣本顯示個別的EC50值。圖19B係與圖19A相同，但此處測量T細胞活化。
〔圖20〕顯示CD33在食蟹獼猴免疫子集中表現。將來自六個正常健康食蟹獼猴供體的全血用CD33的單株抗體染色，並藉由流動式細胞測量術分析。繪製平均值±SD。
〔圖21〕顯示C3CB189媒介MOLM-13細胞、正常CD33+食蟹獼猴單核球及嗜中性球、以及活化的食蟹獼猴T細胞之細胞毒性。在AML細胞系MOLM-13細胞中C3CB189媒介細胞毒性的離體評估，細胞係外源添加至正常健康的食蟹獼猴全血(n=6)。顯示使用C3CB189及空xCD3雙特異性抗體之MOLM-13細胞之細胞毒性百分比、T細胞活化、及CD33+單核球及嗜中性球之細胞毒性。繪製平均值±SEM。
〔圖22A至圖22D〕顯示C3CB189媒介食蟹獼猴中的CD33+白血球之減少。將食蟹獼猴用單一IV劑量的對照(媒劑)、0.05、0.2、或1mg/kg的C3CB189處理。圖22A顯示C3CB189濃度隨時間的概況。圖22B顯示在周邊血液中的T細胞活化(於CD8+中之CD25+ %)。圖22C顯示C3CB189對顆粒球(嗜中性球)之效應。圖22D顯示C3CB189對單核球之效應。
〔圖23〕顯示在食蟹獼猴中之C3CB189給藥後的細胞介素釋放。C3CB189之單一IV劑量之後在食蟹獼猴中的平均(SD)細胞介素水平。(A)IFNγ，(B)IL-10，(C)IL-2，(D)IL-6，(E)MCP，(F)TNFα。將所有低於LLOQ值者視為LLOQ的一半，以用於作圖及平均值計算目的。
〔圖24A至圖24C〕顯示C3CB189結合至C2域並媒介原始樣本之細胞毒性，不論其SNP 12459419基因型狀態為何。圖24A顯示針對V及C2結合劑mAb，在CD33 ECD蛋白之IgC及IgV域中之表位區的HDX定位及 後續繪示。V表位區係以藍色著色而C2表位區域係以紅色著色。圖24B顯示在27nM的雙特異性抗體濃度下執行在新鮮AML患者全血中之CD33+母細胞之細胞毒性的離體評估。繪製平均值±SD。圖24C顯示在0.27nM之雙特異性抗體濃度下評估來自25個正常供體之經冷凍純化之單核球的C3CB189媒介細胞毒性。繪製平均值±SD。
〔圖25A至圖25C〕顯示針對SNP rs12459419之基因分型(genotyping)結果。圖25A顯示針對細胞系中SNP rs12459419的Taqman檢定之基因分型結果。圖25B係與圖25A相同，但此處對原始患者樣本進行基因分型。圖25C係與圖25A相同，但此處使用Taqman檢定以及桑格(Sanger)定序對來自健康供體之冷凍單核球進行基因分型。
各篇公開案、論文、及專利已於先前技術及整份說明書引用或描述；此等參考文獻之各者全文係以引用方式併入本文中。在本說明書中所包括之對於文件、行動、材料、裝置、物品、或其類似者的論述，目的在於提供關於本發明的脈絡。此等論述並非承認，任一或所有此等情事形成了關於任何所揭示或請求之發明的先前技術部分。
除非另有定義，否則本文中所使用之所有技術及科學用語，均與本發明有關技術領域中具有通常知識者所通常了解之意義相同。在其他方面，在本文中所使用的某些用語具有如本說明書所闡述之意義。
必須注意的是，本文及附加之申請專利範圍中所使用之單數形式「一(a/an)」及「該(the)」皆包括複數指稱，除非上下文另有明確說明。
除非以其他方式說明，在本文中描述之任何數值諸如濃度或濃度範圍應理解為在所有情況下皆受到用語「約(about)」之修飾。因此，數值一般包括記載值之±10%。例如，濃度1mg/mL包括0.9mg/mL至1.1mg/mL。同樣地，濃度範圍1%至10%(w/v)包括0.9%(w/v)至11%(w/v)。如本文中所使用，明示使用之數值範圍包括所有可能的子範圍、在該範圍內之所有個別數值，包括在該等範圍內之整數及數值之分數，除非上下文以其他方式清楚指示。
除非以其他方式指示，在一系列元件之前的用語「至少(at least)」應理解為係指該序列中的每一元件。所屬技術領域中具有通常知識者將認可或僅使用例行實驗即可確定本文所述之本發明的特定實施例的許多等效物。該等等效物意欲涵蓋於本發明中。
如本文中所使用，用語「包含(comprises、comprising)」、「包括(includes、including)」、「具有(has、having)」、「含有(contains或containing)」或彼等之任何其他變體將理解為隱含包括所述整體或整體之群，但不排除任何其他整體或整體之群，且意欲為非排他性或開放式的。例如，包含表列元件之組成物、混合物、過程、方法、物品、或設備未必局限於僅該些元件，但可包括未明示表列或為該組成物、混合物、過程、方法、物品、或設備所固有之其他元件。進一步地，除非明示相反說明，「或(or)」係指包括性的「或」而非排他性的「或」。例如，下列任一者皆滿足條件A或B：A為真(或存在)且B為偽(或不存在)、A為偽(或不存在)且B為真(或存在)、及A及B兩者皆為真(或存在)。
如本文中所使用，多個所述元件之間的聯合用語「及/或(and/or)」係理解為涵蓋個別及組合選項兩者。例如，其中兩個元件係藉由「及/或」結合，第一選項係指第一元件在沒有第二元件的情況下之適用性。第二選項係指第二元件在沒有第一元件的情況下之適用性。第三選項係指第一及第二元件一起的適用性。這些選項之任一者應理解為落入該含義內，並因此滿足如本文中所使用之用語「及/或」之要求。該等選項之多於一者的並行適用性亦應理解為落入該含義內，並因此滿足用語「及/或」之要求。
如本文中所使用，用語「由...組成(consists of)」、或諸如「由...組成(consist of或consisting of)」之變體，如在整個說明書及申請專利範圍中所使用，指示包括任何所述整體或整體之群組，但不能將額外的整體或整體之群組加入所指定之方法、結構、或組成物中。
如本文中所使用，用語「基本上由...組成(consists essentially of)」、或諸如「基本上由...組成(consist essentially of或consisting essentially of)」之變體，如在整個說明書及申請專利範圍中所使用，指示包括任何所述整體或整體之群組，並可選地包括任何所述整體或整體之群組，其不會實質上改變所指定之方法、結構、或組成物之基本或新穎性質。參見M.P.E.P.§ 2111.03。
如本文中所使用之「對象(subject)」意指任何動物，較佳的是哺乳動物，最佳的是人類。如本文中所使用的用語「哺乳動物(mammal)」，其涵蓋任何哺乳動物。哺乳動物之實例包括(但不限於)牛、馬、羊、豬、貓、狗、小鼠、兔、天竺鼠、猴、人類等，更佳的是人類。
亦應理解的是，在本文中使用之用語「約(about)」、「大約(approximately)」、「通常(generally)」、「實質上(substantially)」、及類似用語當用於較佳發明之組分的尺寸或特徵時，指示所述尺寸/特徵並非嚴格邊界或參數，且不排除將為所屬技術領域中具有通常知識者所理解的彼等之功能上相同或類似的微小變化。在最小限度上，包括數值參數之該等指稱將包括使用所屬技術領域中已接受之數學及工業原理(例如，四捨五入、測量或其他系統誤差、製造公差等)不會改變最低有效數位(least significant digit)之變化。
在二或更多個核酸或多肽序列(例如，抗CD33抗體及編碼其之多核苷酸、抗CD33抗CD3雙特異性抗體及編碼其之多核苷酸、CD33多肽、及編碼其之CD33多核苷酸)之上下文中，用語「同一(identical)」或「同一性(identity)」百分比係指當進行比較及比對以達最大對應性時，如使用下列序列比較演算法之一者或藉由目視檢查測量，二或更多個序列或子序列係相同的、或具有指定百分比的相同胺基酸殘基或核苷酸。
為進行序列比較，一般將一個序列當作參考序列，並使測試序列與其比較。當使用序列比較演算法時，將測試及參考序列輸入電腦中，指定子序列座標(若有需要)，並指定序列演算法程式參數。序列比較演算法接著基於指定程式參數，計算(多個)測試序列相對於參考序列之序列同一性百分比。
序列比較之最佳比對可例如藉由以下進行：局部同源性演算法(Smith & Waterman,Adv.Appl.Math.2：482(1981))、藉由同源性比對 演算法(Needleman & Wunsch,J.Mol.Biol.48：443(1970))、藉由搜尋相似性方法(Pearson & Lipman,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 85：2444(1988))、藉由這些演算法的電腦化實施(Wisconsin Genetics Software Package,Genetics Computer Group,575 Science Dr.,Madison,WI中之GAP、BESTFIT、FASTA、及TFASTA)、或藉由目視檢查(大致參見Current Protocols in Molecular Biology,F.M.Ausubel et al.,eds.,Current Protocols,a joint venture between Greene Publishing Associates,Inc.and John Wiley & Sons,Inc.,(1995 Supplement)(Ausubel))。
適合用於判定序列同一性及序列相似性百分比之演算法的實例係BLAST及BLAST 2.0演算法，其係描述於Altschul et al.(1990)J.Mol.Biol.215：403-410及Altschul et al.(1997)Nucleic Acids Res.25：3389-3402。執行BLAST分析之軟體由美國國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information)供大眾使用。此演算法涉及首先藉由在查詢序列中識別長度為W之短字組而識別高分序列對(HSP)，其在與資料庫序列中具有相同長度之字組排比時匹配或滿足某個正值閾值評分T。T係指鄰近字組評分閾(neighborhood word score threshold)(Altschul et al.，如前述)。此等初始的鄰近字組命中作用為種子而啟動搜尋以發現含有其等之較長HSP。接著將字組命中沿著各序列向兩方向延伸，只要可增加累積排比評分便繼續進行。
針對核苷酸序列，累積評分係使用參數M(匹配殘基對之獎勵評分(reward score)；總是>0)及N(錯配殘基之罰分；總是<0)來計算。針對胺基酸序列，使用評分矩陣以計算累積評分。字組命中在各方 向之延伸在下列情況下停止：累積排比評分自其最大達成值下滑X之數量時；累積評分因為累積一或多個負分殘基排比而變成零或以下時；或達到任一序列之末端時。BLAST演算法參數W、T、及X判定排比之敏感度及速度。BLASTN程式(針對核苷酸序列)使用以下作為預設值：字組長度(W)為11、期望值(E)為10、M=5、N=-4、及兩股之比較。針對胺基酸序列，BLASTP程式使用以下作為預設值：字組長度(W)為3、期望值(E)為10、及BLOSUM62評分矩陣(參見Henikoff & Henikoff,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915(1989))。
除了計算序列同一性百分比之外，BLAST演算法亦執行兩序列間之相似性的統計分析(參見例如，Karlin & Altschul,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 90：5873-5787(1993))。其中一種由BLAST演算法所提供之相似性量度係最小總和機率(smallest sum probability,P(N))，其提供兩核苷酸或胺基酸序列之間隨機發生匹配之機率的指標。舉例而言，如在測試核酸與參考核酸之比較中，最小總和機率小於約0.1、更佳地小於約0.01、且最佳地小於約0.001，則將該核酸視為與參考序列相似。
二個核酸序列或多肽係實質上同一的進一步指示在於第一核酸編碼之多肽及第二核酸編碼之多肽具有如下所述之免疫交叉反應性。因此，例如當二個肽只有保守性取代之差異時，多肽一般係實質上與第二多肽同一。二個核酸序列係實質上同一的另一個指示在於二個分子在如下述之嚴謹條件下彼此雜交。
抗體
本發明大致上係關於單離抗CD33抗體或其抗原結合片段、編碼該等抗體之核酸及表現載體、含有該等載體之重組細胞、及包含該等抗體之組成物。本發明係另外關於單離抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段、編碼該等抗體之核酸及表現載體、含有該等載體之重組細胞、及包含該等雙特異性抗體之組成物。亦提供製造該等抗體之方法、及使用該等抗體治療包括癌症之疾病的方法。本發明之抗體具有一或多種所欲功能性質，包括但不限於對於CD33及/或CD3之高親和力結合、對於CD33及/或CD3之高特異性、及當單獨投予或與其他抗癌療法組合投予時治療或預防癌症的能力。
在一大致態樣中，本發明係關於特異性結合CD33之單離單株抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，該等單離單株抗體或其抗原結合片段結合CD33之C2域。在某些實施例中，該等單離單株抗體或其抗原結合片段結合CD33之V域。
如本文中所使用，用語「抗體(antibody)」係以廣義的方式使用，並包括免疫球蛋白或抗體分子，抗體分子包括人類、人源化、複合物、及嵌合抗體和抗體片段，其係單株或多株。大致上，抗體是對特定抗原展現出結合特異性之蛋白質或肽鏈。抗體結構係熟知的。免疫球蛋白可分為五大類(即，IgA、IgD、IgE、IgG、及IgM)，取決於重鏈恆定域胺基酸序列。IgA及IgG係進一步被細分為同型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。因此，本發明之抗體可以是五大類或對應子類中之任一者。較佳的是，本發明之抗體是IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4。脊椎動物物種的抗體輕鏈可分為兩種截然不同類型(即κ及λ)中之一者，此係基於其 恆定域的胺基酸序列。因此，本發明之抗體可含有κ或λ輕鏈恆定域。根據具體實施例，本發明之抗體包括來自大鼠或人類抗體之重鏈及/或輕鏈恆定區。除了重鏈及輕鏈恆定域之外，抗體含有抗原結合區，其係由輕鏈可變區及重鏈可變區構成，該輕鏈可變區及重鏈可變區各含有三個結構域(即互補決定區1至3；CDR1、CDR2、及CDR3)。輕鏈可變區結構域替代地稱為LCDR1、LCDR2、及LCRD3，且重鏈可變區結構域替代地稱為HCDR1、HCRD2、及HCDR3。
如本文中所使用，用語「單離抗體(isolated antibody)」係指實質上不含其他具有不同抗原特異性之抗體的抗體(例如，特異性結合至CD33之單離抗體實質上不含不結合至CD33的抗體)。此外，單離抗體實質上不含其他細胞材料及/或化學品。
如本文中所使用，用語「單株抗體(monoclonal antibody)」係指自實質上均質的抗體之群體獲得之抗體，即，除了可能少量存在之可能天然發生之突變以外，構成該群體之個別抗體係相同的。本發明之單株抗體可藉由融合瘤方法、嗜菌體展示技術、單淋巴球基因選殖技術、或藉由重組DNA方法製備。例如，單株抗體可藉由融合瘤生產，該融合瘤包括獲自基因轉殖非人類動物(諸如基因轉殖小鼠或大鼠)的B細胞，該B細胞具有包含人類重鏈轉殖基因及輕鏈轉殖基因的基因體。
本文中所使用之用語「抗原結合片段(antigen-binding fragment)」係指抗體片段諸如例如雙體抗體(diabody)、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、雙硫鍵穩定性Fv片段(dsFv)、(dsFv)2、雙特異性dsFv(dsFv-dsFv')、雙硫鍵穩定性雙體抗體(ds雙體抗體)、單鏈抗體分子 (scFv)、單結構域抗體(sdab)、scFv二聚體(雙價雙體抗體)、由包含包含一或多個CDRs之抗體的一部分形成之多特異性抗體、駱駝化單結構域抗體、奈米抗體、結構域抗體、雙價結構域抗體、或任何其他結合至抗原但不包含完整抗體結構之抗體片段。抗原結合片段能夠結合至親本抗體(parent antibody)或親本抗體片段所結合之相同抗原。根據具體實施例，抗原結合片段包含輕鏈可變區、輕鏈恆定區、及重鏈之Fd區段。根據其他具體實施例，抗原結合片段包含Fab及F(ab')。
本文中所使用之用語「單鏈抗體(single-chain antibody)」係指所屬技術領域中習知之單鏈抗體，其包含由約15至約20個胺基酸之短肽連接的重鏈可變區及輕鏈可變區。本文中所使用之用語「單結構域抗體(single domain antibody)」係指所屬技術領域中習知之單結構域抗體，其包含重鏈可變區及重鏈恆定區或其僅包含重鏈可變區。
如本文中所使用，用語「人類抗體(human antibody)」係指由人類產生之抗體或使用所屬技術領域中已知之任何技術製造之具有對應於由人類產生之抗體的胺基酸序列之抗體。此人類抗體之定義包括完整或全長抗體、其片段、及/或包含至少一個人類重鏈及/或輕鏈多肽的抗體。
如本文中所使用，用語「人源化抗體(humanized antibody)」係指經修飾以增加與人類抗體之序列同源性的非人類抗體，使得抗體之抗原結合性質得以保留但其在人體內之抗原性減小。
本文中所使用之用語「嵌合抗體(chimeric antibody)」係指其中免疫球蛋白分子之胺基酸序列係衍生自二或更多個物種之抗體。輕鏈及重鏈二者之可變區通常對應具有所欲特異性、親和性及能力之衍生自一 個哺乳動物物種(例如小鼠、大鼠、兔等)的抗體可變區，然而恆定區對應衍生自另一個哺乳動物物種(例如人類)的抗體序列以避免在該物種引發免疫反應。
如本文中所使用，用語「多特異性抗體(multispecific antibody)」係指包含複數個免疫球蛋白可變域序列之抗體，其中複數個中之第一免疫球蛋白可變域序列具有對第一表位之結合特異性，且複數個中之第二免疫球蛋白可變域序列具有對第二表位之結合特異性。在一實施例中，第一及第二表位係在相同抗原例如相同蛋白質(或多聚體蛋白質的次單元)上。在一實施例中，第一及第二表位重疊或實質上重疊。在一實施例中，第一及第二表位不重疊或實質上不重疊。在一實施例中，第一及第二表位係在不同抗原例如不同蛋白質(或多聚體蛋白質的不同次單元)上。在一實施例中，多特異性抗體包含第三、第四、或第五免疫球蛋白可變域。在一實施例中，多特異性抗體係雙特異性抗體分子、三特異性抗體分子、或四特異性抗體分子。
如本文中所使用，用語「雙特異性抗體(bispecifc antibody)」係指結合不多於兩種表位或兩種抗原之多特異性抗體。雙特異性抗體之特徵在於具有對第一表位的結合特異性之第一免疫球蛋白可變域序列、及具有對第二表位的結合特異性之第二免疫球蛋白可變域序列。在一實施例中，第一及第二表位係在相同抗原例如相同蛋白質(或多聚體蛋白質的次單元)上。在一實施例中，第一及第二表位重疊或實質上重疊。在一實施例中，第一及第二表位係在不同抗原例如不同蛋白質(或多聚體蛋白質的不同次單元)上。在一實施例中，雙特異性抗體包含對第一表位具有結合特異性 之重鏈可變域序列及輕鏈可變域序列、以及對第二表位具有結合特異性之重鏈可變域序列及輕鏈可變域序列。在一實施例中，雙特異性抗體包含對第一表位具有結合特異性之半抗體或其片段、以及對第二表位具有結合特異性之半抗體或其片段。在一實施例中，雙特異性抗體包含對第一表位具有結合特異性之scFv或其片段、以及對第二表位具有結合特異性之scFv或其片段。在一實施例中，第一表位係位於CD33上且第二表位係位於CD3上。在一實施例中，第一表位係位於CD33上且第二表位係位於PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3、CTLA-4、EGFR、HER-2、CD19、CD20、CD3、及/或其他與腫瘤相關之免疫抑制因子或表面抗原。
如本文中所使用，用語「CD33」係指67kD單次跨膜醣蛋白，其係唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素(Siglec)家族之成員。CD33亦稱為Siglec-3、gp67、或p67。CD33的結構在其胞外部分係由媒介唾液酸結合的胺基端V-set Ig樣域(由CD33的外顯子2編碼)及C2-set IG樣域(由外顯子4編碼)組成(Laszlo et al.,2016)。替代的CD33 RNA剪接可導致在細胞表面上表現之較短異構體，其缺乏V-set但保留C2-set Ig樣域(Laszlo,Estey,& Walter,2014；Laszlo et al.,2016)。此剪接程序之生物相關性大部分係未知的，直到最近的研究顯示在~50%之AML群體中存在單核苷酸多型性(single nucleotide polymorphism,SNP)rs12459419，並導致CD33之外顯子2的跳躍(skipping)，其導致CD33的V域缺失(Lamba et al.,2017)。全長人類CD33係由Uniprot P20138(SEQ ID NO：1)提供。
如本文中所使用，「特異性結合至CD33(specifically binds to CD33)」的抗體係指以1×10-7M或更小、較佳地1×10-8M或更小、更 加地5×10-9M或更小、1×10-9M或更小、5×10-10M或更小、或1×10-10M或更小之KD結合至CD33、較佳地人類CD33、較佳地CD33之C2域的抗體。用語「KD」係指解離常數，此常數獲自Kd對Ka之比例(即Kd/Ka)，並以莫耳濃度(M)表示。抗體之KD值可使用本揭露所屬技術領域中之方法判定。例如，抗體之KD可藉由使用表面電漿共振(諸如藉由使用生物感測器系統，例如Biacore®系統)、或藉由使用生物層干涉技術(諸如Octet RED96系統)判定。
抗體之KD的值越小，抗體結合至目標抗原的親和力越高。
根據具體態樣，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
a.分別為SEQ ID NO：447、448、449、567、568、及569；
b.分別為SEQ ID NO：444、445、446、564、565、及566；
c.分別為SEQ ID NO：354、355、356、477、478、及479；
d.分別為SEQ ID NO：378、379、380、501、502、及503；
e.分別為SEQ ID NO：411、412、413、531、532、及533；
f.分別為SEQ ID NO：348、349、350、471、472、及473；
g.分別為SEQ ID NO：360、361、362、483、484、及485；
h.分別為SEQ ID NO：363、364、365、486、487、及488；
i.分別為SEQ ID NO：366、367、368、489、490、及491；
j.分別為SEQ ID NO：369、370、371、492、493、及494；
k.分別為SEQ ID NO：387、388、389、492、493、及494；
l.分別為SEQ ID NO：402、403、404、522、523、及524；
m.分別為SEQ ID NO：408、409、410、528、529、及530；
n.分別為SEQ ID NO：423、424、425、543、544、及545；
o.分別為SEQ ID NO：426、427、428、546、547、及548；
p.分別為SEQ ID NO：351、352、353、474、475、及476；
q.分別為SEQ ID NO：357、358、359、480、481、及482；
r.分別為SEQ ID NO：372、373、374、495、496、及497；
s.分別為SEQ ID NO：375、376、377、498、499、及500；
t.分別為SEQ ID NO：381、382、383、504、505、及506；
u.分別為SEQ ID NO：384、385、386、507、508、及509；
v.分別為SEQ ID NO：390、391、392、510、511、及512；
w.分別為SEQ ID NO：393、394、395、513、514、及515；
x.分別為SEQ ID NO：396、397、398、516、517、及518；
y.分別為SEQ ID NO：399、400、401、519、520、及521；
z.分別為SEQ ID NO：405、406、407、525、526、及527；
aa.分別為SEQ ID NO：414、415、416、534、535、及536；
bb.分別為SEQ ID NO：417、418、419、537、538、及539；
cc.分別為SEQ ID NO：420、421、422、540、541、及542；
dd.分別為SEQ ID NO：429、430、431、549、550、及551；
ee.分別為SEQ ID NO：432、433、434、552、553、及554；
ff.分別為SEQ ID NO：435、436、437、555、556、及557；
gg.分別為SEQ ID NO：438、439、440、558、559、及560；
hh.分別為SEQ ID NO：441、442、443、561、562、及563；
ii.分別為SEQ ID NO：450、451、452、570、571、及572；
jj.分別為SEQ ID NO：453、454、455、573、574、及575；
kk.分別為SEQ ID NO：456、457、458、576、577、及578；
ll.分別為SEQ ID NO：459、460、461、579、580、及581；
mm.分別為SEQ ID NO：378、379、380、582、583、及584；
nn.分別為SEQ ID NO：414、415、416、585、586、及587；或
oo.分別為SEQID NO：429、430、431、480、481、及482；
其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合CD33、較佳地人類CD33。
根據另一具體態樣，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：259至296中之一者至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；或輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：300至338中之一者至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。根據一較佳實施例，本發明之單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：259至296中之一者至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：300至338中之一者至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。
根據另一具體態樣，本發明係關於一種本發明之單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含：
a.具有SEQ ID NO：292之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：332之多肽序列的輕鏈可變區；
b.具有SEQ ID NO：291之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：331之多肽序列的輕鏈可變區；
c.具有SEQ ID NO：261之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：302之多肽序列的輕鏈可變區；
d.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：310之多肽序列的輕鏈可變區；
e.具有SEQ ID NO：280之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；
f.具有SEQ ID NO：259之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：300之多肽序列的輕鏈可變區；
g.具有SEQ ID NO：263之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：304之多肽序列的輕鏈可變區；
h.具有SEQ ID NO：264之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：305之多肽序列的輕鏈可變區；
i.具有SEQ ID NO：265之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：306之多肽序列的輕鏈可變區；
j.具有SEQ ID NO：266之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；
k.具有SEQ ID NO：272之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；
l.具有SEQ ID NO：277之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：317之多肽序列的輕鏈可變區；
m.具有SEQ ID NO：279之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：319之多肽序列的輕鏈可變區；
n.具有SEQ ID NO：284之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：324之多肽序列的輕鏈可變區；
o.具有SEQ ID NO：285之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：325之多肽序列的輕鏈可變區；
p.具有SEQ ID NO：260之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：301之多肽序列的輕鏈可變區；
q.具有SEQ ID NO：262之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區；
r.具有SEQ ID NO：267之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：308之多肽序列的輕鏈可變區；
s.具有SEQ ID NO：268之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：309之多肽序列的輕鏈可變區；
t.具有SEQ ID NO：270之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：311之多肽序列的輕鏈可變區；
u.具有SEQ ID NO：271之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：312之多肽序列的輕鏈可變區；
v.具有SEQ ID NO：273之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：313之多肽序列的輕鏈可變區；
w.具有SEQ ID NO：274之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：314之多肽序列的輕鏈可變區；
x.具有SEQ ID NO：275之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：315之多肽序列的輕鏈可變區；
y.具有SEQ ID NO：276之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：316之多肽序列的輕鏈可變區；
z.具有SEQ ID NO：278之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：318之多肽序列的輕鏈可變區；
aa.具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：321之多肽序列的輕鏈可變區；
bb.具有SEQ ID NO：282之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；
cc.具有SEQ ID NO：283之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：323之多肽序列的輕鏈可變區；
dd.具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：326之多肽序列的輕鏈可變區；
ee.具有SEQ ID NO：287之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：327之多肽序列的輕鏈可變區；
ff.具有SEQ ID NO：288之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：328之多肽序列的輕鏈可變區；
gg.具有SEQ ID NO：289之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：329之多肽序列的輕鏈可變區；
hh.具有SEQ ID NO：290之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：330之多肽序列的輕鏈可變區；
ii.具有SEQ ID NO：293之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：333之多肽序列的輕鏈可變區；
jj.具有SEQ ID NO：294之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：334之多肽序列的輕鏈可變區；
kk.具有SEQ ID NO：295之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：335之多肽序列的輕鏈可變區；
ll.具有SEQ ID NO：296之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：336之多肽序列的輕鏈可變區；
mm.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：337之多肽序列的輕鏈可變區；
nn.具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：338之多肽序列的輕鏈可變區；或
oo.具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：348、349、350、471、472、及473之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可 變區，其具有與SEQ ID NO：259至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：300至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：259之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：300之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：351、352、353、474、475、及476之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：260至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：301至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：260之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：301之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：354、355、356、477、478、及479之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：261至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈 可變區，其具有與SEQ ID NO：302至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：261之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：301之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：357、358、359、480、481、及482之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：262至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：303至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：262之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：360、361、362、483、484、及485之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：263至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：304至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳 地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：263之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：304之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：363、364、365、486、487、及488之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：264至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：305至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：264之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：305之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：366、367、368、489、490、及491之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：265至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：306至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：265之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：306之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：369、370、371、492、493、及494之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：266至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：307至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：266之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：372、373、374、495、496、及497之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：267至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：308至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：267之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：308之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：375、376、377、498、499、及 500之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：268至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：309至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：268之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：309之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：378、379、380、501、502、及503之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：269至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：310至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ IDNO：269之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：310之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：381、382、383、504、505、及506之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可 變區，其具有與SEQ ID NO：270至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：311至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ IDNO：270之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：311之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：384、385、386、507、508、及509之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：271至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：312至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：271之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：312之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：387、388、389、492、493、及494之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：272至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈 可變區，其具有與SEQ ID NO：307至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：272之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：390、391、392、510、511、及512之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：273至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：313至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：273之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：313之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：393、394、395、513、54、及515之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：274至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：314至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳 地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：274之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：314之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：396、397、398、516、517、及518之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：275至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：315至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：275之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：315之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：399、400、401、519、520、及521之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：276至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：316至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：276之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：316之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：402、403、404、522、523、及524之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：277至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：317至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：277之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：317之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：405、406、407、525、526、及527之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：278至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：318至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：278之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：318之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：408、409、410、528、529、及 530之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：279至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：319至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：279之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：319之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：411、412、413、531、532、及533之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：280至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：320至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：280之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：320之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：414、415、416、534、535、及536之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可 變區，其具有與SEQ ID NO：281至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：321至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：321之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：417、418、419、537、538、及539之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：282至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：322至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：282之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：420、421、422、540、541、及542之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：283至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈 可變區，其具有與SEQ ID NO：323至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：283之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：323之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：423、424、425、543、544、及545之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：284至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：324至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：284之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：324之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：426、427、428、546、547、及548之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：285至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：325至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳 地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：285之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：325之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：429、430、431、549、550、及551之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：286至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：326至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：326之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：432、433、434、552、553、及554之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：287至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：327至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：287之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：327之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：435、436、437、555、556、及557之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：288至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：328至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：288之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：328之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：438、439、440、558、559、及560之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：289至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：329至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：289之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：329之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：441、442、443、561、562、及 563之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：290至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：330至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：290之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：330之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：444、445、446、564、565、及566之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：291至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：331至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：291之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：331之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：447、448、449、567、568、及569之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可 變區，其具有與SEQ ID NO：292至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：332至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：292之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：332之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：450、451、452、570、571、及572之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：293至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：333至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：293之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：333之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：453、454、455、573、574、及575之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：294至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈 可變區，其具有與SEQ ID NO：334至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：294之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：334之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：456、457、458、576、577、及578之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：295至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：335至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：295之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：335之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：459、460、461、579、580、及581之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：296至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：336至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳 地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：296之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：336之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：378、379、380、582、583、及584之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：269至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：337至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：337之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：414、415、416、585、586、及587之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：281至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：338至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：338之多肽序列的輕鏈可變區。
在一實施例中，本發明係關於一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含具有分別為SEQ ID NO：429、430、431、480、481、及482之多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。在另一實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：286至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；及輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：303至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。較佳地，單離單株抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區；及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區。
本文亦提供抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含抗CD33抗體或其抗原結合片段、及抗CD3抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，抗CD33抗體或其抗原結合片段係本發明之抗CD33單株抗體或其抗原結合片段，且抗CD3抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：(1)分別為SEQ ID NO：342、343、344、465、466、及467，或(2)分別為SEQ ID NO：345、346、347、468、469、及470。
用語「CD3」係指CD3蛋白多重次單元複合體(multi-subunit complex)。CD3亦可稱為「分化簇3」。CD3蛋白多重次單元複合體係由六個(6)獨特的多肽鏈組成，該等鏈包括CD3γ鏈(SwissProt P09693)(SEQ ID NO：588)、CD3δ鏈(SwissProt P04234)(SEQ ID NO：589)、兩個CD3ε鏈(SwissProt P07766)(SEQ ID NO：590)、及一個CD3ζ鏈同二聚體(SwissProt 20963)(SEQ ID NO：591)，其係與T細胞受體α及β鏈相關聯。CD3係T細胞輔受體，其作用以活化細胞毒性T細胞(CD8+初始T細胞(naïve T cell))以及輔助T細胞(CD4+初始T細胞)兩者。CD3多重次單元複合體之CD3γ、CD3δ、及CD3ε多肽鏈與T細胞受體(TCR)及CD3ζ鏈相關聯，以在T淋巴球中產生活化信號，且CD3與T細胞受體之間的交互作用構成TCR複合體。用語「CD3」包括任何CD3變異體、異構體、及物種同源物，其係由細胞(包括T細胞)天然表現，或者可表現在經編碼該等多肽之基因或cDNA轉染的細胞上，除非另有註明，較佳的是「CD3」係人類CD3蛋白多重次單元複合體。經由TCR/CD3複合體將T淋巴球重新定向至表現CD33的癌細胞代表一種有吸引力的替代治療方法。T淋巴球的TCR/CD3複合體係由TCR阿法(α)/貝他(β)或TCR伽馬(γ)/德他(δ)異二聚體、以及共表現於細胞表面之不變CD3次單元(標示為伽馬(γ)、德他(δ)、艾普西龍(ε)、澤塔(ζ)、及艾塔(η))所組成。人類CD3ε係被描述於UniProt P07766(CD3E_HUMAN)。在目前最佳技術中所描述的一種抗CD3ε抗體係SP34(Yang SJ,The Journal of Immunology(1986)137；1097-1100)，其與靈長類及人類CD3兩者反應並可商購自Pharmingen。在目前最佳技術中所描述之額外抗CD3抗體包括UCHT-1(參見WO2000041474)及BC-3(Fred Hutchinson Cancer Research Institute；用於GVHD的I/II期試驗，Anasetti et al.,Transplantation 54：844(1992))。SP34與UCHT-1及BC-3的不同之處在於SP-34辨識只存在CD3之ε鏈上的表位(參見Salmeron et al.,(1991)J.Immunol.147：3047)，而UCHT-1及BC-3辨識由ε鏈及γ鏈兩者形成的表位。與SP34具有相同序列之抗體序列係至少描述於WO2008119565、WO2008119566、WO2008119567、WO2010037836、WO2010037837、及WO2010037838中。與SP34 VH 96%同一之抗體序列係描述於US8236308(WO2007042261)中。
已經描述雙特異性抗體之不同格式並且近來已由下列文獻所回顧：Chames及Baty(2009)Curr Opin Drug Disc Dev 12：276。
在一些實施例中，本發明之雙特異性抗體係雙價抗體、交叉抗體(cross-body)、或經由如本發明中所述之受控Fab臂交換所獲得之雙特異性抗體。
在一些實施例中，雙特異性抗體包括具有互補CH3域以迫使異二聚化的類IgG分子；重組類IgG雙靶向分子，其中該分子之兩側各包含至少兩種不同抗體之Fab片段或該Fab片段的一部分；IgG融合分子，其中全長IgG抗體係融合至額外Fab片段或Fab片段之部分；Fc融合分子，其中單鏈Fv分子或穩定化雙價抗體係融合至重鏈恆定域、Fc區或其部分；Fab融合分子，其中不同之Fab片段係融合在一起；基於ScFv之抗體及基於雙價抗體之抗體及重鏈抗體(例如，域抗體、奈米抗體)，其中不同單鏈Fv分子或不同雙價抗體或不同重鏈抗體(例如，域抗體、奈米抗體)係融合至彼此或融合至另一個蛋白質或載劑分子。
在一些實施例中，具有互補CH3域分子之類IgG分子包括Triomab/Quadroma(Trion Pharma/Fresenius Biotech)、Knobs-into-Holes(Genentech)、CrossMAbs(Roche)及靜電匹配者(electrostatically- matched)(Amgen)、LUZ-Y(Genentech)、股交換工程改造域抗體(Strand Exchange Engineered Domain body,SEEDbody)(EMD Serono)、Biclonic(Merus)及DuoBody(Genmab A/S)。
在一些實施例中，重組類IgG雙靶向分子包括Dual Targeting(DT)-Ig(GSK/Domantis)、二合一抗體(Two-in-one Antibody)(Genentech)、交聯單株抗體(Cross-linked Mabs)(Karmanos Cancer Center)、mAb2(F-Star)及CovX-body(CovX/Pfizer)。
在一些實施例中，IgG融合分子包括雙可變域(Dual Variable Domain,DVD)-Ig(Abbott)、類IgG雙特異性抗體(IgG-like Bispecific)(InnClone/Eli Lilly)、Ts2Ab(MedImmune/AZ)及BsAb(Zymogenetics)、HERCULES(Biogen Idec)和TvAb(Roche)。
在一些實施例中，Fc融合分子包括ScFv/Fc Fusions(Academic Institution)、SCORPION(Emergent BioSolutions/Trubion,Zymogenetics/BMS)、Dual Affinity Retargeting Technology(Fc-DART)(MacroGenics)及Dual(ScFv).sub.2-Fab(National Research Center for Antibody Medicine--China)。
在一些實施例中，Fab融合雙特異性抗體包括F(ab)2(Medarex/AMGEN)、Dual-Action或Bis-Fab(Genentech)、Dock-and-Lock(DNL)(ImmunoMedics)、Bivalent Bispecific(Biotecnol)及Fab-Fv(UCB-Celltech)。基於ScFv之抗體、基於雙價抗體之抗體及域抗體包括但不限於Bispecific T Cell Engager(BiTE)(Micromet)、Tandem Diabody(Tandab)(Affimed)、Dual Affinity Retargeting Technology(DART) (MacroGenics)、Single-chain Diabody(Academic)、TCR-like Antibodies(AIT,ReceptorLogics)、Human Serum Albumin ScFv Fusion(Merrimack)及COMBODY(Epigen Biotech)、雙靶向奈米抗體(Ablynx)、僅雙靶向重鏈域抗體(dual targeting heavy chain only domain antibody)。
本發明之全長雙特異性抗體可使用例如兩個單特異性雙價抗體之間的Fab臂交換(或半分子交換)來產生，其藉由於各半分子中之重鏈CH3界面引入取代以利於兩個具有不同特異性之抗體半分子的異二聚體在體外無細胞環境中或者使用共表現形成。該Fab臂交換反應係雙硫鍵異構化反應及CH3域之解離-締合的結果。親系單特異性抗體之鉸鏈區中的重鏈雙硫鍵係經還原。其中一個親系單特異性抗體所生成的游離半胱胺酸與第二親系單特異性抗體分子之半胱胺酸殘基形成重鏈間雙硫鍵，同時該等親系抗體之CH3域藉由解離-締合而釋出及重新形成。該等Fab臂之CH3域可經工程改造以利於異二聚化而非同二聚化。所得產物係具有兩個Fab臂或半分子之雙特異性抗體，該等Fab臂或半分子各自結合不同表位，即CD33上的表位及CD3上的表位。
本文中所用之「同二聚化(homodimerization)」係指具有相同CH3胺基酸序列之兩個重鏈的交互作用。本文中所用之「同二聚體(homodimer)」係指具有兩個有相同CH3胺基酸序列之重鏈的抗體。
本文中所用之「異二聚化(heterodimerization)」係指具有不同CH3胺基酸序列之兩個重鏈的交互作用。本文中所用之「異二聚體(heterodimer)」係指具有兩個有不同CH3胺基酸序列之重鏈的抗體。
「鈕扣(knob-in-hole)」策略(請參見例如PCT國際公開案第WO 2006/028936號)可用以產生全長雙特異性抗體。簡言之，在人類IgG中形成CH3域界面之選定胺基酸可在影響CH3域交互作用的位置處突變，以促進異二聚體形成。將具有小側鏈之胺基酸(孔)引入特異性結合第一抗原之抗體的重鏈中，並將具有大側鏈之胺基酸(鈕)引入特異性結合第二抗原之抗體的重鏈中。在共表現這兩個抗體之後，具有「孔」之重鏈與具有「鈕」之重鏈優先交互作用而導致異二聚體形成。形成鈕和孔之例示性CH3取代對係(表現為第一重鏈之第一CH3域中的經修飾位置/第二重鏈之第二CH3域中的經修飾位置)：T366Y/F405A、T366W/F405W、F405W/Y407A、T394W/Y407T、T394S/Y407A、T366W/T394S、F405W/T394S及T366W/T366S_L368A_Y407V。
可使用其他策略，諸如使用靜電交互作用促進重鏈異二聚化，其係藉由取代一個CH3表面之帶正電荷殘基及第二CH3表面之帶負電荷殘基，如描述於美國專利公開案第US2010/0015133號；美國專利公開案第US2009/0182127號；美國專利公開案第US2010/028637號、或美國專利公開案第US2011/0123532號。在其他策略中，異二聚化可藉由下列取代來促進(表現為第一重鏈之第一CH3域中的經修飾位置/第二重鏈之第二CH3域中的經修飾位置)：L351Y_F405AY407V/T394W、T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V、T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V、L351Y_Y407A/T366A_K409F、L351Y_Y407A/T366V K409F Y407A/T366A_K409F、或T350V_L351Y_F405A Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W，如描述於 美國專利公開案第US2012/0149876號或美國專利公開案第US2013/0195849號。
除了上述方法外，本發明之雙特異性抗體可在無細胞環境中體外產生，此係藉由在兩個單特異性同二聚體抗體之CH3區中引入非對稱突變，且在還原條件中(以讓雙硫鍵異構化)自兩個親本單特異性同二聚體抗體形成該雙特異性異二聚體抗體，其係根據描述於國際專利公開案第W02011/131746號中之方法。在該等方法中，第一單特異性雙價抗體(例如，抗CD33抗體)及第二單特異性雙價抗體(例如，抗CD3抗體)經工程改造以在CH3域具有某些促進異二聚體穩定性之取代；該等抗體係在足以讓絞鏈區中之半胱胺酸進行雙硫鍵異構化的還原條件下一起培養；從而藉由Fab臂交換來產生該雙特異性抗體。培養條件可最佳地被回復為非還原性條件。可使用之例示性還原劑係2-巰基乙胺(2-MEA)、二硫蘇糖醇(dithiothreitol,DTT)、二硫赤蘚醇(dithioerythritol,DTE)、麩胱甘肽、參(2-羧乙基)膦(TCEP)、L-半胱胺酸、及β-巰基乙醇，還原劑較佳係選自由下列所組成之群組：2-巰基乙胺、二硫蘇糖醇、及參(2-羧乙基)膦。舉例而言，可使用在至少20℃之溫度且有至少25mM之2-MEA存在下或於至少0.5mM之二硫蘇糖醇存在且在5至8之pH下(例如在7.0之pH下或在7.4之pH下)培養至少90min。
在某些實施例中，抗CD33抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
a.分別為SEQ ID NO：447、448、449、567、568、及569；
b.分別為SEQ ID NO：444、445、446、564、565、及566；
c.分別為SEQ ID NO：354、355、356、477、478、及479；
d.分別為SEQ ID NO：378、379、380、501、502、及503；
e.分別為SEQ ID NO：411、412、413、531、532、及533；
f.分別為SEQ ID NO：348、349、350、471、472、及473；
g.分別為SEQ ID NO：360、361、362、483、484、及485；
h.分別為SEQ ID NO：363、364、365、486、487、及488；
i.分別為SEQ ID NO：366、367、368、489、490、及491；
j.分別為SEQ ID NO：369、370、371、492、493、及494；
k.分別為SEQ ID NO：387、388、389、492、493、及494；
l.分別為SEQ ID NO：402、403、404、522、523、及524；
m.分別為SEQ ID NO：408、409、410、528、529、及530；
n.分別為SEQ ID NO：423、424、425、543、544、及545；
o.分別為SEQ ID NO：426、427、428、546、547、及548；
p.分別為SEQ ID NO：357、358、359、480、481、及482；
q.分別為SEQ ID NO：372、373、374、495、496、及497；
r.分別為SEQ ID NO：375、376、377、498、499、及500；
s.分別為SEQ ID NO：381、382、383、504、505、及506；
t.分別為SEQ ID NO：384、385、386、507、508、及509；
u.分別為SEQ ID NO：390、391、392、510、511、及512；
v.分別為SEQ ID NO：393、394、395、513、514、及515；
w.分別為SEQ ID NO：396、397、398、516、517、及518；
x.分別為SEQ ID NO：399、400、401、519、520、及521；
y.分別為SEQ ID NO：405、406、407、525、526、及527；
z.分別為SEQ ID NO：414、415、416、534、535、及536；
aa.分別為SEQ ID NO：417、418、419、537、538、及539；
bb.分別為SEQ ID NO：420、421、422、540、541、及542；
cc.分別為SEQ ID NO：429、430、431、549、550、及551；
dd.分別為SEQ ID NO：432、433、434、552、553、及554；
ee.分別為SEQ ID NO：435、436、437、555、556、及557；
ff.分別為SEQ ID NO：438、439、440、558、559、及560；
gg.分別為SEQ ID NO：441、442、443、561、562、及563；
hh.分別為SEQ ID NO：450、451、452、570、571、及572；
ii.分別為SEQ ID NO：453、454、455、573、574、及575；
jj.分別為SEQ ID NO：456、457、458、576、577、及578；
kk.分別為SEQ ID NO：459、460、461、579、580、及581；
ll.分別為SEQ ID NO：378、379、380、582、583、及584；
mm.分別為SEQ ID NO：414、415、416、585、586、及587；或
nn.分別為SEQID NO：429、430、431、480、481、及482；
且該抗CD3抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
1)分別為SEQ ID NO：342、343、344、465、466、及467；或
2)分別為SEQ ID NO：345、346、347、468、469、及470。
在某些實施例中，抗CD33抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：259至296中之一者至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；或輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：300至338中之一者至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列的輕鏈可變區；且抗CD3抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：257或258至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列；或輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：298或299至少85%、較佳地90%、更佳地95%或更多(諸如95%、96%、97%、98%、或99%)同一之多肽序列。
在某些實施例中，該抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段包含：
a.具有SEQ ID NO：292之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：332之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
b.具有SEQ ID NO：291之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：331之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
c.具有SEQ ID NO：261之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：302之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
d.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：310之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
e.具有SEQ ID NO：280之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
f.具有SEQ ID NO：259之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：300之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
g.具有SEQ ID NO：263之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：304之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
h.具有SEQ ID NO：264之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：305之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之 多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
i.具有SEQ ID NO：265之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：306之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
j.具有SEQ ID NO：266之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
k.具有SEQ ID NO：272之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
l.具有SEQ ID NO：277之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：317之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
m.具有SEQ ID NO：279之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：319之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
n.具有SEQ ID NO：284之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：324之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
o.具有SEQ ID NO：285之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：325之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
p.具有SEQ ID NO：260之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：301之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
q.具有SEQ ID NO：262之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
r.具有SEQ ID NO：267之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：308之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
s.具有SEQ ID NO：268之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：309之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之 多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
t.具有SEQ ID NO：270之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：311之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
u.具有SEQ ID NO：271之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：312之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
v.具有SEQ ID NO：273之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：313之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
w.具有SEQ ID NO：274之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：314之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
x.具有SEQ ID NO：275之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：315之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
y.具有SEQ ID NO：276之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：316之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
z.具有SEQ ID NO：278之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：318之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
aa.具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：321之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
bb.具有SEQ ID NO：282之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
cc.具有SEQ ID NO：283之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：323之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
dd.具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：326之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之 多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
ee.具有SEQ ID NO：287之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：327之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
ff.具有SEQ ID NO：288之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：328之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
gg.具有SEQ ID NO：289之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：329之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
hh.具有SEQ ID NO：290之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：330之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
ii.具有SEQ ID NO：293之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：333之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
jj.具有SEQ ID NO：294之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：334之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
kk.具有SEQ ID NO：295之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：335之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
ll.具有SEQ ID NO：296之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：336之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
mm.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：337之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
nn.具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：338之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
oo.具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之 多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
pp.具有SEQ ID NO：292之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：332之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
qq.具有SEQ ID NO：291之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：331之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
rr.具有SEQ ID NO：261之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：302之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
ss.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：310之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
tt.具有SEQ ID NO：280之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
uu.具有SEQ ID NO：259之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：300之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
vv.具有SEQ ID NO：263之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：304之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
ww.具有SEQ ID NO：264之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：305之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
xx.具有SEQ ID NO：265之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：306之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
yy.具有SEQ ID NO：266之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
zz.具有SEQ ID NO：272之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之 多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
aaa.具有SEQ ID NO：277之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：317之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
bbb.具有SEQ ID NO：279之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：319之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
ccc.具有SEQ ID NO：284之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：324之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；或
ddd.具有SEQ ID NO：285之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：325之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
eee.具有SEQ ID NO：260之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：301之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
fff.具有SEQ ID NO：262之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
ggg.具有SEQ ID NO：267之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：308之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
hhh.具有SEQ ID NO：268之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：309之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
iii.具有SEQ ID NO：270之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：311之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
jjj.具有SEQ ID NO：271之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：312之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
kkk.具有SEQ ID NO：273之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：313之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之 多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
lll.具有SEQ ID NO：274之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：314之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
mmm.具有SEQ ID NO：275之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：315之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
nnn.具有SEQ ID NO：276之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：316之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
ooo.具有SEQ ID NO：278之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：318之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
ppp.具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：321之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
qqq.具有SEQ ID NO：282之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
rrr.具有SEQ ID NO：283之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：323之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
sss.具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：326之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
ttt.具有SEQ ID NO：287之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：327之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
uuu.具有SEQ ID NO：288之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：328之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
vvv.具有SEQ ID NO：289之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：329之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之 多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
www.具有SEQ ID NO：290之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：330之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
xxx.具有SEQ ID NO：293之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：333之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
yyy.具有SEQ ID NO：294之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：334之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
zzz.具有SEQ ID NO：295之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：335之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
aaaa.具有SEQ ID NO：296之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：336之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
bbbb.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：337之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
cccc.具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：338之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；或
dddd.具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區。
根據另一具體態樣，本發明係關於一種誘導抗體依賴性細胞媒介之細胞毒性(ADCC)的單離抗CD33單株抗體或其抗原結合片段。單株抗體或其抗原結合片段可例如在體外誘導ADCC。單株抗體或其抗原結合片段可以小於約2nM的EC50誘導ADCC。在某些實施例中，EC50小於約2.0nM、小於約1.9nM、小於約1.8nM、小於約1.7nM、小於約1.6nM、小於約1.5nM、小於約1.4nM、小於約1.3nM、小於約1.2nM、小於約1.1nM、小於約1.0nM、小於約0.9nM、小於約0.8nM、小於約0.7nM、小於約0.6nM、小於約0.5nM、小於約0.4nM、小於約0.3nM、小於約0.2nM、或小於約0.1nM。在某些實施例中，CD33單株抗體或其抗原結合片段包含IgG1低岩藻醣主鏈。
在本文中所述之一些實施例中，CD33特異性抗體之免疫效應(effector)性質可藉由所屬技術領域中具有通常知識者已知之技術透過Fc修飾來強化或靜默。舉例而言，Fc效應功能(諸如C1q結合、補體依賴性細胞毒性(CDC)、抗體依賴性細胞媒介細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞媒介吞噬作用(ADCP)、向下調控細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)等)可藉由修飾Fc中負責這些活性之殘基來提供及/或控制。
「抗體依賴性細胞媒介細胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)」或「ADCC」係指一種細胞媒介反應，其中表現Fc受體(FcR)之非特異性細胞毒性細胞(例如自然殺手(NK)細胞、嗜中性球、及巨噬細胞)辨識目標細胞上的已結合抗體，然後造成目標細胞溶解。
單株抗體誘導ADCC之能力可藉由工程改造其寡醣組分來增強。人類IgG1或IgG3係在Asn297處經N-醣基化並且大部分聚醣係呈廣為周知之雙觸角(biantennary)G0、G0F、G1、G1F、G2或G2F形式。由未經工程改造之CHO細胞所產生之抗體一般具有約至少85%之聚醣岩藻醣(glycan fucose)含量。自附接至Fc區之雙觸角複合型寡醣移除核心岩藻醣經由改善的Fc.γ.RIIIa結合且不改變抗原結合或CDC活性來增強抗體之ADCC。此類mAb可使用已報導會導致成功表現相對高量去岩藻糖基化(defucosylated)抗體(帶有雙觸角複合型之Fc寡醣)的不同方法來達成，諸如控制培養滲透壓(Konno et al.,Cytotechnology 64：249-65,2012)、應用變異體CHO系Lec13作為宿主細胞系(Shields et al.,J Biol Chem 277：26733-26740,2002)、應用變異體CHO系EB66作為宿主細胞系(Olivier et al.,MAbs；2(4),2010；紙本發行前之電子發行版本； PMID：20562582)、應用大鼠融合瘤細胞系YB2/0作為宿主細胞系(Shinkawa et al.,J Biol Chem 278：3466-3473,2003)、引入特異性針對α-1,6-岩藻醣基轉移酶(FUT8)基因的短小干擾RNA(Mori et al.,Biotechnol Bioeng 88：901-908,2004)、或共表現β-1,4-N-乙醯葡糖胺基轉移酶III(β-1,4-N-acetylglucosaminyltransferase III)與高基氏α-甘露糖苷酶II(golgi α-mannosidase II)或基夫鹼(kifunensine，一種強效α-甘露糖苷酶I抑制劑)(Ferrara et al.,J Biol Chem 281：5032-5036,2006、Ferrara et al.,Biotechnol Bioeng 93：851-861,2006；Xhou et al.,Biotechnol Bioeng 99：652-65,2008)。
在本文中所述之一些實施例中，由CD33抗體所誘發之ADCC亦可藉由抗體Fc中之某些取代而增強。例示性取代為例如在胺基酸位置256、290、298、312、356、330、333、334、360、378、或430處之取代(殘基編號係根據EU索引)，如描述於美國專利第6,737,056號。
根據另一具體態樣，本發明係關於一種單離抗CD33單株抗體或其抗原結合片段，其能夠以小於約5×10-8M之解離常數(KD)結合CD33。在某些實施例中，解離常數小於約5×10-8M、小於1×10-8M、小於5×10-9M、小於1×10-9M、小於5×10-10M、小於1×10-10M、小於5×10-11M、或小於1×10-11M。
根據另一具體態樣，本發明係關於一種單離抗CD33單株抗體或其抗原結合片段，其能夠以小於約2nM之EC50結合CD33並誘導CD33的內化。在某些實施例中，EC50小於約2.0nM、小於約1.9nM、小於約1.8nM、小於約1.7nM、小於約1.6nM、小於約1.5nM、小於約 1.4nM、小於約1.3nM、小於約1.2nM、小於約1.1nM、小於約1.0nM、小於約0.9nM、小於約0.8nM、小於約0.7nM、小於約0.6nM、小於約0.5nM、小於約0.4nM、小於約0.3nM、小於約0.2nM、及小於約0.1nM。
根據另一具體態樣，本發明係關於一種單離抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其能夠誘導CD33表現細胞中之T細胞依賴性細胞毒性。雙特異性抗體或其抗原結合片段可例如在體外以小於約2nM的EC50值誘導CD33表現細胞中之T細胞依賴性細胞毒性。在某些實施例中，EC50小於約2.0nM、小於約1.9nM、小於約1.8nM、小於約1.7nM、小於約1.6nM、小於約1.5nM、小於約1.4nM、小於約1.3nM、小於約1.2nM、小於約1.1nM、小於約1.0nM、小於約0.9nM、小於約0.8nM、小於約0.7nM、小於約0.6nM、小於約0.5nM、小於約0.4nM、小於約0.3nM、小於約0.2nM、及小於約0.1nM。
根據另一具體態樣，本發明係關於一種單離抗CD33單株抗體及/或單離抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗CD33單株抗體或抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段係嵌合的。
根據另一具體態樣，本發明係關於一種單離抗CD33單株抗體及/或單離抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗CD33單株抗體或抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段係人類的或人源化。
在另一大致態樣中，本發明係關於一種單離核酸，其編碼本發明之單株抗體或其抗原結合片段。在另一大致態樣中，本發明係關於一種單離核酸，其編碼本發明之雙特異性抗體或其抗原結合片段。所屬技術領域中具有通常知識者將瞭解的是，可以改變(例如，置換、刪除、插入等)蛋白質之編碼序列而不改變該蛋白質之胺基酸序列。因此，所屬技術領域中具有通常知識者將理解的是，可改變編碼本發明之單株抗體及/或雙特異性抗體之核酸序列而不改變蛋白質之胺基酸序列。
在另一大致態樣中，本發明係關於一種載體，其包含編碼本發明之單株抗體或其抗原結合片段的單離核酸。在另一大致態樣中，本發明係關於一種載體，其包含編碼本發明之雙特異性抗體或其抗原結合片段的單離核酸。鑒於本揭露，可使用所屬技術領域中具有通常知識者已知之任何載體，諸如質體、黏質體、噬菌體載體、或病毒載體。在一些實施例中，載體是重組表現載體，諸如質體。該載體可包括建立表現載體之習知功能的任何元件，例如啟動子、核糖體結合元件、終止子、增強子、篩選標記、及複製起點。啟動子可以是組成型、誘導型、或阻抑型啟動子。許多能夠將核酸遞送至細胞之表現載體是所屬技術領域中已知的，且可在本文中用於在細胞中生產抗體或其抗原結合片段。習知選殖技術或人工基因合成可以用於生成根據本發明之實施例的重組表現載體。鑒於本揭露，此類技術對於所屬技術領域中具有通常知識者而言是熟知的。
在另一大致態樣中，本發明係關於一種宿主細胞，其包含編碼本發明之單株抗體及/或雙特異性抗體或其抗原結合片段的單離核酸。鑒於本揭露，所屬技術領域中具有通常知識者已知之任何宿主細胞可以用於 重組表現本發明之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，宿主細胞係大腸桿菌TG1或BL21細胞(用於表現例如scFv或Fab抗體)、CHO-DG44或CHO-K1細胞、或HEK293細胞(用於表現例如全長IgG抗體)。根據具體實施例，重組表現載體係藉由習知方法(諸如化學轉染、熱休克、或電穿孔)轉型成宿主細胞，其中該重組表現載體被穩定地整合至宿主細胞基因體中，使得重組核酸有效表現。
在另一大致態樣中，本發明係關於一種產生本發明之單株抗體或其抗原結合片段之方法，其包含在產生本發明之單株抗體或其抗原結合片段之條件下培養包含編碼該單株抗體或其抗原結合片段之核酸的細胞，及自該細胞或細胞培養物(例如，自上清液)回收該抗體或其抗原結合片段。在另一大致態樣中，本發明係關於一種產生本發明之雙特異性抗體或其抗原結合片段之方法，其包含在產生本發明之雙特異性抗體或其抗原結合片段之條件下培養包含編碼該雙特異性抗體或其抗原結合片段之核酸的細胞，及自該細胞或細胞培養物(例如，自上清液)回收該抗體或其抗原結合片段。經表現抗體或其抗原結合片段可自細胞收穫且根據所屬技術領域中已知之習知技術並如本文所述將其純化。
醫藥組成物
在另一大致態樣中，本發明係關於一種醫藥組成物，其包含本發明之單離單株抗體或其抗原結合片段及醫藥上可接受之載劑。在另一大致態樣中，本發明係關於一種醫藥組成物，其包含本發明之雙特異性抗體或其抗原結合片段、及醫藥上可接受之載劑。如本文中所使用之用語 「醫藥組成物(pharmaceutical composition)」意指包含本發明之抗體與醫藥上可接受之載劑的產品。本發明之抗體及包含其之組成物亦可用於製造用於在本文中提及之治療應用的藥劑。
本文中所使用之用語「載劑(carrier)」係指任何賦形劑、稀釋劑、填充料、鹽、緩衝劑、穩定劑、助溶劑、油、脂質、含脂質囊泡、微球、脂質體包封、或其他所屬技術領域中已知用於醫藥配方之材料。將理解載劑、賦形劑或稀釋劑之特徵將取決於特定應用之投予途徑而定。本文中所使用之用語「醫藥上可接受之載劑(pharmaceutically acceptable carrier)」係指不干擾根據本發明之組成物的有效性或根據本發明之組成物的生物活性之非毒性材料。根據鑒於本揭露之具體實施例，任何適合用於抗體醫藥組成物之醫藥上可接受之載劑皆可用於本發明。
醫藥活性成分與醫藥上可接受之載劑的配方係所屬技術領域中已知，例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy(例如第21版(2005)、及任何之後的版本)。額外成分之非限制性實例包括：緩衝劑、稀釋劑、溶劑、張力調節劑、保存劑、穩定劑、及螯合劑。一或多種醫藥上可接受之載劑可用於配製本發明之醫藥組成物。
在本發明之一實施例中，醫藥組成物係液體配方。液體配方之較佳實例係水溶液配方，即包含水之配方。液體配方可包含溶液、懸浮液、乳液、微乳液、凝膠、及類似者。水溶液配方一般包含至少50% w/w水、或至少60%、70%、75%、80%、85%、90%、或至少95% w/w的水。
在一實施例中，醫藥組成物可配製成可例如經由注射裝置(例如注射器或輸注泵)注射之注射用劑。例如，注射可經皮下、肌內、腹膜內、玻璃體內(intravitreally)、或靜脈內遞送。
在另一實施例中，醫藥組成物係固體配方，例如冷凍乾燥或噴霧乾燥組成物，其可照原樣使用，或在使用前由醫師或患者添加溶劑、及/或稀釋劑至其中。固體劑型可包括錠劑(諸如壓製錠及/或包衣錠)及膠囊(例如硬質或軟質明膠膠囊)。醫藥組成物亦可呈例如囊劑(sachet)、糖衣錠、粉劑、顆粒劑、口含錠(lozenge)、或重構用粉劑之形式。
劑型可為立即釋放型，在此情況下其可包含水溶性或分散性載劑，或者可為延緩釋放、持續釋放、或修飾釋放型，在此情況下其可包含調節劑型在胃腸道中或在皮下之溶解速率的水不溶性聚合物。
在其他實施例中，醫藥組成物可經鼻內、頰內、或舌下遞送。
水溶液配方中之pH可介於pH 3與pH 10之間。在本發明之一實施例中，配方pH係自約7.0至約9.5。在本發明之另一實施例中，配方pH係自約3.0至約7.0。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含緩衝劑。緩衝劑之非限制性實例包括：精胺酸、天冬胺酸、二羥乙基甘胺酸(bicine)、檸檬酸、磷酸氫二鈉、反丁烯二酸、甘胺酸、甘胺醯甘胺酸、組胺酸、離胺酸、順丁烯二酸、蘋果酸、乙酸鈉、碳酸鈉、磷酸二氫鈉、磷酸鈉、琥珀酸鹽、酒石酸、三羥甲基甘胺酸(tricine)、及參(羥甲基)-胺基甲烷、及其混合物。緩衝劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1 mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定緩衝劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含保存劑。緩衝劑之非限制性實例包括：氯化本索寧、苯甲酸、苄醇、溴硝丙二醇(bronopol)、丁基4-羥基苯甲酸酯、氯丁醇、氯甲苯酚、氯己定、氯菲那辛、鄰甲酚、間甲酚、對甲酚、乙基4-羥基苯甲酸酯、咪唑啶基脲(imidurea)、甲基4-羥基苯甲酸酯、苯酚、2-苯氧乙醇、2-苯乙醇、丙基4-羥基苯甲酸酯、去氫乙酸鈉、硫柳汞(thiomerosal)、及其混合物。保存劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定保存劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含等張劑。實施例之非限制性實例包括鹽(諸如氯化鈉)、胺基酸(諸如甘胺酸、組胺酸、精胺酸、離胺酸、異白胺酸、天冬胺酸、色胺酸、及蘇胺酸)、醛醣醇(諸如甘油、1,2-丙二醇(丙二醇(propyleneglycol))、1,3-丙二醇、及1,3-丁二醇)、聚乙二醇(例如PEG400)、及其混合物。等張劑之另一實例包括糖。糖之非限制性實例可為單醣、雙醣、或多醣、或水溶性葡聚糖，包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、普魯蘭(pullulan)、糊精、環糊精、α及β-HPCD、可溶性澱粉、羥乙基澱粉、及羧甲基纖維素鈉。等張劑之另一實例係糖醇，其中用語「糖醇(sugar alcohol)」係定義為具有至少一個-OH基團之C(4-8)烴。糖醇之非限制性實例包括甘露醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、甜醇(dulcitol)、 木糖醇、及阿拉伯糖醇。包含此段列出之各種等張劑的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。等張劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定等張劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含螫合劑。螯合劑之非限制性實例包括檸檬酸、天冬胺酸、伸乙二胺四乙酸(EDTA)之鹽、及其混合物。螯合劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定螯合劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
.【0152】在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含穩定劑。穩定劑之非限制性實例包括一或多種聚集抑制劑、一或多種氧化抑制劑、一或多種界面活性劑、及/或一或多種蛋白酶抑制劑。
在本發明之另一實施例中，醫藥組成物包含穩定劑，其中該穩定劑係羧基-/羥基纖維素及其衍生物(諸如HPC、HPC-SL、HPC-L及HPMC)、環糊精、2-甲基硫代乙醇、聚乙二醇(諸如PEG 3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯啶酮、鹽(諸如氯化鈉)、含硫物質諸如單硫代甘油)、或巰乙酸。穩定劑可個別地或總體地以自約0.01mg/ml至約50mg/ml，例如自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定穩定劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之進一步實施例中，醫藥組成物包含一或多種界面活性劑，較佳地一種界面活性劑、至少一種界面活性劑、或二種不同界面活性劑。用語「界面活性劑(surfactant)」係指任何包含水溶性(親水性) 部分及脂溶性(親脂性)部分的分子或離子。界面活性劑可例如選自由陰離子界面活性劑、陽離子界面活性劑、非離子界面活性劑、及/或兩性離子界面活性劑所組成之群組。界面活性劑可個別地或總體地以自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定界面活性劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在本發明之一進一步實施例中，醫藥組成物包含一或多種蛋白酶抑制劑，諸如例如EDTA、及/或苯甲脒鹽酸(HCl)。蛋白酶抑制劑可個別地或總體地以自約0.1mg/ml至約20mg/ml之濃度存在。包含這些特定蛋白酶抑制劑中之每一者的醫藥組成物構成本發明之替代實施例。
在另一大致態樣中，本發明係關於一種產生包含本發明之單株抗體或其抗原結合片段的醫藥組成物之方法，該方法包含將單株抗體或其抗原結合片段與醫藥上可接受之載劑組合以獲得該醫藥組成物。在另一大致態樣中，本發明係關於一種產生包含本發明之雙特異性抗體或其抗原結合片段的醫藥組成物之方法，該方法包含將雙特異性抗體或其抗原結合片段與醫藥上可接受之載劑組合以獲得該醫藥組成物。
使用方法
在另一大致態樣中，本發明係關於一種靶向對象中之癌細胞表面上之CD33的方法，該方法包含向該對象投予特異性結合CD33之單離單株抗體或其抗原結合片段、或抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段、或本發明之醫藥組成物。
本文亦設想一種治療性抗CD33抗體免疫接合物，其包含選 自由下列所組成之群組的治療劑：放射核種；硼、釓、或鈾原子；免疫調節劑，諸如細胞介素；幹細胞生長因子；淋巴毒素，諸如腫瘤壞死因子(TNF)；造血因子，諸如介白素(IL)；群落刺激因子(CSF)，諸如顆粒球群落刺激因子(G-CSF)或顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)；干擾素(IFN)，諸如干擾素-α、-β、或-γ；及幹細胞生長因子，諸如稱為「S1因子」者；造血因子；紅血球生成素；血小板生成素(thrombopoietin)；抗體；激素；激素拮抗劑；酶；酶抑制劑；光活化治療劑；細胞毒性藥物，諸如抗有絲分裂劑、烷化劑、抗代謝劑、血管新生抑制劑、細胞凋亡劑、生物鹼劑、COX-2抑制劑、及抗生素劑；細胞毒性毒素，諸如植物毒素，微生物毒素、及動物毒素、及其合成變體；血管新生抑制劑；不同抗體；及其組合。在一較佳實施例中，細胞介素係選自由下列所組成之群組：IL-1、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21、干擾素-γ、TNF-α、及其組合，放射核種係選自由下列所組成之群組：Auger發射器、β發射器、及α發射器，諸如P-32、P-33、Sc-47、Fe-59、Cu-64、Cu-67、Se-75、As-77、Sr-89、Y-90、Mo-99、Rh-105、Pd-109、Ag-111、I-125、I-131、Pr-142、Pr-143、Pm-149、Sm-153、Tb-161、Ho-166、Er-169、Lu-177、Re-186、Re-188、Re-189、Ir-194、Au-198、Au-199、Pb-211、Pb-212、及Bi-213、Co-58、Ga-67、Br-80m、Tc-99m、Rh-103m、Pt-109、In-111、Sb-119、I-125、Ho-161、Os-189m、Ir-192、Dy-152、At-211、Bi-212、Ra-223、Rn-219、Po-215、Bi-211、Ac-225、Fr-221、At-217、Bi-213、Fm-255、B-10、Gd-157、U-235、及其組合。較佳地，放射核種具有20與10,000keV之間的能量。
結合CD33之抗體及其抗原結合片段之功能性活性可藉由所屬技術領域中已知及如本文所述之方法表徵。用於表徵結合CD33之抗體及其抗原結合片段之方法包括但不限於親和力及特異性檢定，包括Biacore、ELISA、及OctetRed分析；藉由FACS偵測抗體結合至癌細胞上的CD33之結合檢定。根據具體實施例，用於表徵結合CD33之抗體及其抗原結合片段之方法包括以下所述者。
在另一大致態樣中，本發明係關於一種治療有需要之對象的癌症之方法，該方法包含向該對象投予特異性結合CD33之單離單株抗體或其抗原結合片段、或本發明之醫藥組成物。癌症可例如係CD33表現癌症。癌症可例如選自但不限於肺癌、胃癌、結腸癌、肝細胞癌、腎細胞癌、膀胱泌尿上皮癌(bladder urothelial carcinoma)、轉移性黑色素瘤、乳癌、卵巢癌、子宮頸癌、頭頸癌、胰腺癌、神經膠質瘤、神經膠質母細胞瘤、及其他實體腫瘤、及非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)、急性淋巴球性白血病(ALL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多發性骨髓瘤(MM)、急性骨髓性白血病(AML)、及其他液體腫瘤。癌症可例如係血液性癌症。血液性癌症可例如係白血病、淋巴瘤、及骨髓瘤。在一些實施例中，血液性癌症可係急性骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS，低或高風險)、急性淋巴球性白血病(ALL,包括所有亞型)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性骨髓性白血病(CML)、或母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤(DPDCN)。
根據本發明之實施例，醫藥組成物包含治療有效量的抗CD33抗體或其抗原結合片段。如本文中所使用，用語「治療有效量 (therapeutically effective amount)」係指活性成分或組分在對象中引起所欲生物或醫學反應之量。治療有效量可以憑經驗且以常規方式參考所述目的來判定。
如本文中關於抗CD33抗體或其抗原結合片段所使用，治療有效量意指抗CD33抗體或其抗原結合片段調變有需要之對象的免疫反應之量。
根據具體實施例，治療有效量係指足以達成一、二、三、四、或更多個下列效應之療法之量：(i)減少或改善待治療之疾病、病症、或病況或與其相關之症狀的嚴重性；(ii)減少所欲治療之疾病、病症、或病況或與其相關之症狀的持續期間；(iii)預防所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的進展；(iv)造成所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的消退；(v)預防所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的發展或發生；(vi)預防所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的復發；(vii)減少具有所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的對象的住院；(viii)減少具有所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的對象的住院期長度；(ix)增加具有所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀的對象的存活；(xi)抑制或減少對象的所欲治療之疾病、病症或病況或與其相關之症狀；及/或(xii)增強或改善另一療法的(多種)疾病預防或治療效應。
治療有效量或劑量可根據各種因子變化，諸如所欲治療之疾病、病症或病況、投予手段、標靶部位、對象之生理狀態(包括例如年齡、體重、健康)、對象係人類抑或動物、其他投予藥物、及治療係疾病預防性 抑或治療性。治療劑量經最佳地滴定以最佳化安全性及療效。
根據具體實施例，本文所述之組成物係配製成適用於對象的預期投予途徑。例如，本文中所述之組成物可配製成適用於靜脈內、皮下、或肌內投予。
如本文中所使用，用語「治療(treat、treating、及treatment)」皆意欲指改善或逆轉至少一個與癌症有關的可測量物理參數，該物理參數未必可在對象中覺察，但可係在對象中可覺察的。用語「治療」亦可指造成疾病、病症、或病況消退、預防疾病、病症、或病況進展、或至少延緩疾病、病症、或病況之進展。在一具體實施例中，「治療」係指減輕一或多個與疾病、病症、或病況相關之症狀、預防一或多個與疾病、病症、或病況相關之症狀的發展或開始、或減少一或多個與疾病、病症、或病況相關之症狀的持續期間，該疾病、病症、或病況諸如腫瘤或更加的是癌症。在一具體實施例中，「治療」係指預防疾病、病症、或病況之復發。在一具體實施例中，「治療」係指增加具有疾病、病症、或病況之對象的存活。在一具體實施例中，「治療」係指排除對象之疾病、病症、或病況。
根據具體實施例，所提供者係用於治療癌症的組成物。對於癌症療法而言，該等組成物可與另一治療組合使用，包括但不限於化學療法、抗CD20 mAb、抗TIM-3 mAb、抗CTLA-4抗體、抗PD-L1抗體、抗PD-1抗體、PD-1/PD-L1療法、其他免疫腫瘤藥物、抗血管生成劑、放射療法、抗體藥物接合物(ADC)、標靶治療、或其他抗癌藥。
本文中所使用之在向對象投予二或更多種療法上下文中之用語「組合(in combination)」係指使用超過一種療法。用語「組合」之使用 並不限制向對象投予療法之順序。例如，第一療法(例如本文描述之組成物)可在向對象投予第二療法之前(例如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、16小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週以前)、之同時或之後(例如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、16小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週之後)投予。
實施例
本發明提供以下非限制性實施例。
實施例1係一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其特異性結合CD33之C2域。
實施例2係實施例1之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該單離單株抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
a.分別為SEQ ID NO：447、448、449、567、568、及569；
b.分別為SEQ ID NO：444、445、446、564、565、及566；
c.分別為SEQ ID NO：354、355、356、477、478、及479；
d.分別為SEQ ID NO：378、379、380、501、502、及503；
e.分別為SEQ ID NO：411、412、413、531、532、及533；
f.分別為SEQ ID NO：348、349、350、471、472、及473；
g.分別為SEQ ID NO：360、361、362、483、484、及485；
h.分別為SEQ ID NO：363、364、365、486、487、及488；
i.分別為SEQ ID NO：366、367、368、489、490、及491；
j.分別為SEQ ID NO：369、370、371、492、493、及494；
k.分別為SEQ ID NO：387、388、389、492、493、及494；
l.分別為SEQ ID NO：402、403、404、522、523、及524；
m.分別為SEQ ID NO：408、409、410、528、529、及530；
n.分別為SEQ ID NO：423、424、425、543、544、及545；或
o.分別為SEQ ID NO：426、427、428、546、547、及548；
其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合CD33、較佳地人類CD33。
實施例3係如實施例1或2之單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：292、291、261、269、280、259、263、264、265、266、272、277、279、284、或285至少95%同一之多肽序列；或輕鏈可變區，其具有與SEQ ID No：332、331、302、310、320、300、304、305、306、307、317、319、324、或325至少95%同一之多肽序列。
實施例4係如實施例1至3中任一者之單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含：
a.具有SEQ ID NO：292之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：332之多肽序列的輕鏈可變區；
b.具有SEQ ID NO：291之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：331之多肽序列的輕鏈可變區；
c.具有SEQ ID NO：261之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：302之多肽序列的輕鏈可變區；
d.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：310之多肽序列的輕鏈可變區；
e.具有SEQ ID NO：280之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；
f.具有SEQ ID NO：259之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：300之多肽序列的輕鏈可變區；
g.具有SEQ ID NO：263之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：304之多肽序列的輕鏈可變區；
h.具有SEQ ID NO：264之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：305之多肽序列的輕鏈可變區；
i.具有SEQ ID NO：265之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：306之多肽序列的輕鏈可變區；
j.具有SEQ ID NO：266之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；
k.具有SEQ ID NO：272之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；
l.具有SEQ ID NO：277之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：317之多肽序列的輕鏈可變區；
m.具有SEQ ID NO：279之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：319之多肽序列的輕鏈可變區；
n.具有SEQ ID NO：284之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：324之多肽序列的輕鏈可變區；或
o.具有SEQ ID NO：285之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：325之多肽序列的輕鏈可變區。
實施例5係一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
a.分別為SEQ ID NO：357、358、359、480、481、及482；
b.分別為SEQ ID NO：372、373、374、495、496、及497；
c.分別為SEQ ID NO：375、376、377、498、499、及500；
d.分別為SEQ ID NO：381、382、383、504、505、及506；
e.分別為SEQ ID NO：384、385、386、507、508、及509；
f.分別為SEQ ID NO：390、391、392、510、511、及512；
g.分別為SEQ ID NO：393、394、395、513、514、及515；
h.分別為SEQ ID NO：396、397、398、516、517、及518；
i.分別為SEQ ID NO：399、400、401、519、520、及521；
j.分別為SEQ ID NO：405、406、407、525、526、及527；
k.分別為SEQ ID NO：414、415、416、534、535、及536；
l.分別為SEQ ID NO：417、418、419、537、538、及539；
m.分別為SEQ ID NO：420、421、422、540、541、及542；
n.分別為SEQ ID NO：429、430、431、549、550、及551；
o.分別為SEQ ID NO：432、433、434、552、553、及554；
p.分別為SEQ ID NO：435、436、437、555、556、及557；
q.分別為SEQ ID NO：438、439、440、558、559、及560；
r.分別為SEQ ID NO：441、442、443、561、562、及563；
s.分別為SEQ ID NO：450、451、452、570、571、及572；
t.分別為SEQ ID NO：453、454、455、573、574、及575；
u.分別為SEQ ID NO：456、457、458、576、577、及578；
v.分別為SEQ ID NO：459、460、461、579、580、及581；
w.分別為SEQ ID NO：378、379、380、582、583、及584；
x.分別為SEQ ID NO：414、415、416、585、586、及587；或
y.分別為SEQID NO：429、430、431、480、481、及482；
其中該抗體或其抗原結合片段特異性結合CD33、較佳地人類CD33。
實施例6係如實施例5之單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID No：260、262、267、268、270、271、273、274、275、276、278、281、282、283、286、287、288、289、290、293、294、295、或296中之一者至少95%同一之多肽序列；或輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：301、303、308、309、311、312、313、314、315、316、318、321、322、323、326、327、328、329、330、333、334、335、336、337、或338中之一者至少95%同一之多肽序列。
實施例7係如實施例5或6之單離抗體或抗原結合片段，其包含：
a.具有SEQ ID NO：260之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：301之多肽序列的輕鏈可變區；
b.具有SEQ ID NO：262之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區；
c.具有SEQ ID NO：267之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：308之多肽序列的輕鏈可變區；
d.具有SEQ ID NO：268之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：309之多肽序列的輕鏈可變區；
e.具有SEQ ID NO：270之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：311之多肽序列的輕鏈可變區；
f.具有SEQ ID NO：271之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：312之多肽序列的輕鏈可變區；
g.具有SEQ ID NO：273之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：313之多肽序列的輕鏈可變區；
h.具有SEQ ID NO：274之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：314之多肽序列的輕鏈可變區；
i.具有SEQ ID NO：275之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：315之多肽序列的輕鏈可變區；
j.具有SEQ ID NO：276之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：316之多肽序列的輕鏈可變區；
k.具有SEQ ID NO：278之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：318之多肽序列的輕鏈可變區；
l.具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：321之多肽序列的輕鏈可變區；
m.具有SEQ ID NO：282之多狀序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；
n.具有SEQ ID NO：283之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：323之多肽序列的輕鏈可變區；
o.具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：326之多肽序列的輕鏈可變區；
p.具有SEQ ID NO：287之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：327之多肽序列的輕鏈可變區；
q.具有SEQ ID NO：288之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：328之多肽序列的輕鏈可變區；
r.具有SEQ ID NO：289之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：329之多肽序列的輕鏈可變區；
s.具有SEQ ID NO：290之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：330之多肽序列的輕鏈可變區；
t.具有SEQ ID NO：293之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：333之多肽序列的輕鏈可變區；
u.具有SEQ ID NO：294之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：334之多肽序列的輕鏈可變區；
v.具有SEQ ID NO：295之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：335之多肽序列的輕鏈可變區；
w.具有SEQ ID NO：296之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：336之多肽序列的輕鏈可變區；
x.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：337之多肽序列的輕鏈可變區；
y.具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：338之多肽序列的輕鏈可變區；或
z.具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區。
實施例8係如實施例1至4中任一者之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該單株抗體或其抗原結合片段在體外以小於約2nM的EC50誘導抗體依賴性細胞媒介之細胞毒性(ADCC)。
實施例9係如實施例8之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該單株抗體或其抗原結合片段包含IgG1低岩藻醣主鏈。
實施例10係如實施例1至7中任一者之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該單株抗體或其抗原結合片段以小於約5×10-9M之解離常數(KD)結合CD33。
實施例11係如實施例1至7中任一者之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該單株抗體或其抗原結合片段以小於約2nM的EC50結合CD33並誘導內化。
實施例12係如實施例1至11中任一者之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該單株抗體或其抗原結合片段抑制CD33活性。
實施例13係如實施例1至12中任一者之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係嵌合的。
實施例14係如實施例1至13中任一者所述之單離抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係人類的或人源化。
實施例15係如實施例1至13中任一者之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係接合至治療劑。
實施例16係一種單離核酸，其編碼如實施例1至14中任一者之單株抗體或其抗原結合片段。
實施例17係一種載體，其包含如實施例16之單離核酸。
實施例18係一種宿主細胞，其包含如實施例17之載體。
實施例19係一種醫藥組成物，其包含如實施例1至14中任一者之單離單株抗體或其抗原結合片段、及醫藥上可接受之載劑。
實施例20係一種治療有需要之對象的癌症之方法，其包含向該對象投予如實施例19之醫藥組成物。
實施例21係如實施例20之方法，其中該癌症係血液性癌症。
實施例22係如實施例21之方法，其中該血液性癌症係選自由白血病、淋巴瘤、或多發性骨髓瘤所組成之群組。
實施例23係如實施例22之方法，其中該血液性癌症係急性骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、急性淋巴球性白血病(ALL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性骨髓性白血病(CML)、或母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤(DPDCN)。
實施例24係一種產生如實施例1至14中任一者之單株抗體或其抗原結合片段之方法，其包含在產生該單株抗體或抗原結合片段之條件下培養包含編碼該單株抗體或抗原結合片段之核酸的細胞，及自該細胞或培養物回收該抗體或抗原結合片段。
實施例25係一種產生包含如實施例1至14中任一者之單株抗體或抗原結合片段的醫藥組成物之方法，其包含將該單株抗體或其抗原結合片段與醫藥上可接受之載劑組合以獲得該醫藥組成物。
實施例26係一種抗CD33/抗CD3雙特異性抗體，其包含抗CD33抗體或其抗原結合片段、及抗CD3抗體或其抗原結合片段，其中該抗CD33抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
a.分別為SEQ ID NO：447、448、449、567、568、及569；
b.分別為SEQ ID NO：444、445、446、564、565、及566；
c.分別為SEQ ID NO：354、355、356、477、478、及479；
d.分別為SEQ ID NO：378、379、380、501、502、及503；
e.分別為SEQ ID NO：411、412、413、531、532、及533；
f.分別為SEQ ID NO：348、349、350、471、472、及473；
g.分別為SEQ ID NO：360、361、362、483、484、及485；
h.分別為SEQ ID NO：363、364、365、486、487、及488；
i.分別為SEQ ID NO：366、367、368、489、490、及491；
j.分別為SEQ ID NO：369、370、371、492、493、及494；
k.分別為SEQ ID NO：387、388、389、492、493、及494；
l.分別為SEQ ID NO：402、403、404、522、523、及524；
m.分別為SEQ ID NO：408、409、410、528、529、及530；
n.分別為SEQ ID NO：423、424、425、543、544、及545；或
o.分別為SEQ ID NO：426、427、428、546、547、及548；
且該抗CD3抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
1)分別為SEQ ID NO：342、343、344、465、466、及467：或
2)分別為SEQ ID NO：345、346、347、468、469、及470。
實施例27係如實施例25之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗CD33抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：292、291、261、269、280、259、263、264、265、266、272、277、279、284、或285至少95%同一之多肽序列；或輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：332、331、302、310、320、300、304、305、306、307、317、319、324、或325至少95%同一之多肽序列；且該抗CD3抗體或其抗原結合片段包含具有與SEQ ID NO：257或258至少95%同一之多肽序列的重鏈可變區；或具有與SEQ ID NO：298或299至少95%同一之多肽序列的輕鏈可變區。
實施例28係如實施例25或26之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含：
a.具有SEQ ID NO：292之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：332之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
b.具有SEQ ID NO：291之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：331之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
c.具有SEQ ID NO：261之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：302之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
d.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：310之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
e.具有SEQ ID NO：280之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
f.具有SEQ ID NO：259之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：300之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
g.具有SEQ ID NO：263之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：304之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
h.具有SEQ ID NO：264之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：305之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
i.具有SEQ ID NO：265之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：306之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
j.具有SEQ ID NO：266之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
k.具有SEQ ID NO：272之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
l.具有SEQ ID NO：277之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：317之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
m.具有SEQ ID NO：279之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：319之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
n.具有SEQ ID NO：284之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：324之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
o.具有SEQ ID NO：285之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：325之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
p.具有SEQ ID NO：292之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：332之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
q.具有SEQ ID NO：291之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：331之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
r.具有SEQ ID NO：261之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：302之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
s.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：310之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
t.具有SEQ ID NO：280之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
u.具有SEQ ID NO：259之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：300之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
v.具有SEQ ID NO：263之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：304之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
w.具有SEQ ID NO：264之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：305之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
x.具有SEQ ID NO：265之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：306之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
y.具有SEQ ID NO：266之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
z.具有SEQ ID NO：272之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
aa.具有SEQ ID NO：277之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：317之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
bb.具有SEQ ID NO：279之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：319之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
cc.具有SEQ ID NO：284之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：324之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；或
dd.具有SEQ ID NO：285之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：325之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區。
實施例29係如實施例26至28中任一者之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗CD33抗體或其抗原結合片段特異性結合CD33之C2域。
實施例30係一種抗CD33/抗CD3雙特異性抗體，其包含抗CD33抗體或其抗原結合片段、及抗CD3抗體或其抗原結合片段，其中該抗CD33抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
a.分別為SEQ ID NO：357、358、359、480、481、及482；
b.分別為SEQ ID NO：372、373、374、495、496、及497；
c.分別為SEQ ID NO：375、376、377、498、499、及500；
d.分別為SEQ ID NO：381、382、383、504、505、及506；
e.分別為SEQ ID NO：384、385、386、507、508、及509；
f.分別為SEQ ID NO：390、391、392、510、511、及512；
g.分別為SEQ ID NO：393、394、395、513、514、及515；
h.分別為SEQ ID NO：396、397、398、516、517、及518；
i.分別為SEQ ID NO：399、400、401、519、520、及521；
j.分別為SEQ ID NO：405、406、407、525、526、及527；
k.分別為SEQ ID NO：414、415、416、534、535、及536；
l.分別為SEQ ID NO：417、418、419、537、538、及539；
m.分別為SEQ ID NO：420、421、422、540、541、及542；
n.分別為SEQ ID NO：429、430、431、549、550、及551；
o.分別為SEQ ID NO：432、433、434、552、553、及554；
p.分別為SEQ ID NO：435、436、437、555、556、及557；
q.分別為SEQ ID NO：438、439、440、558、559、及560；
r.分別為SEQ ID NO：441、442、443、561、562、及563；
s.分別為SEQ ID NO：450、451、452、570、571、及572；
t.分別為SEQ ID NO：453、454、455、573、574、及575；
u.分別為SEQ ID NO：456、457、458、576、577、及578；
v.分別為SEQ ID NO：459、460、461、579、580、及581；
w.分別為SEQ ID NO：378、379、380、582、583、及584；
x.分別為SEQ ID NO：414、415、416、585、586、及587；或
y.分別為SEQID NO：429、430、431、480、481、及482；
且該抗CD3抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
1)分別為SEQ ID NO：342、343、344、465、466、及467；或
2)分別為SEQ ID NO：345、346、347、468、469、及470。
實施例31係如實施例29之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗CD33抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID No：260、262、267、268、270、271、273、274、275、276、278、281、282、283、286、287、288、289、290、293、294、295、或296中之一者至少95%同一之多肽序列；或輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：301、303、308、309、311、312、313、314、315、316、318、321、322、323、326、327、328、329、330、333、334、335、336、337、或338中之一者至少95%同一之多肽序列；且該抗CD3抗體或其抗原結合片段包含具有與SEQ ID NO：257或258至少95%同一之多肽序列的重鏈可變區；或具有與SEQ ID NO：298或299至少95%同一之多肽序列的輕鏈可變區。
實施例32係如實施例29或30之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含：
a.具有SEQ ID NO：260之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：301之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
b.具有SEQ ID NO：262之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
c.具有SEQ ID NO：267之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：308之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
d.具有SEQ ID NO：268之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：309之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
e.具有SEQ ID NO：270之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：311之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
f.具有SEQ ID NO：271之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：312之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
g.具有SEQ ID NO：273之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：313之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
h.具有SEQ ID NO：274之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：314之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
i.具有SEQ ID NO：275之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：315之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
j.具有SEQ ID NO：276之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：316之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
k.具有SEQ ID NO：278之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：318之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
l.具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：321之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
m.具有SEQ ID NO：282之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
n.具有SEQ ID NO：283之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：323之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
o.具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：326之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
p.具有SEQ ID NO：287之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：327之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
q.具有SEQ ID NO：288之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：328之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
r.具有SEQ ID NO：289之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：329之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
s.具有SEQ ID NO：290之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：330之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
t.具有SEQ ID NO：293之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：333之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
u.具有SEQ ID NO：294之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：334之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
v.具有SEQ ID NO：295之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：335之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
w.具有SEQ ID NO：296之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：336之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
x.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：337之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
y.具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：338之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
z.具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
aa.具有SEQ ID NO：260之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：301之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
bb.具有SEQ ID NO：262之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
cc.具有SEQ ID NO：267之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：308之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
dd.具有SEQ ID NO：268之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：309之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
ee.具有SEQ ID NO：270之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：311之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
ff.具有SEQ ID NO：271之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：312之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
gg.具有SEQ ID NO：273之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：313之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
hh.具有SEQ ID NO：274之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：314之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
ii.具有SEQ ID NO：275之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：315之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
jj.具有SEQ ID NO：276之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：316之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
kk.具有SEQ ID NO：278之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：318之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
ll.具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：321之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
mm.具有SEQ ID NO：282之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
nn.具有SEQ ID NO：283之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：323之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
oo.具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：326之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
pp.具有SEQ ID NO：287之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：327之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
qq.具有SEQ ID NO：288之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：328之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
rr.具有SEQ ID NO：289之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：329之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
ss.具有SEQ ID NO：290之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：330之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
tt.具有SEQ ID NO：293之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：333之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
uu.具有SEQ ID NO：294之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：334之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
vv.具有SEQ ID NO：295之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：335之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
ww.具有SEQ ID NO：296之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：336之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
xx.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：337之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
yy.具有SEQ ID NO：281之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：338之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；或
zz.具有SEQ ID NO：286之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：303之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區。
實施例33係如實施例26至32中任一者之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段在體外以小於約1nM的EC50值誘導CD33表現細胞中之T細胞依賴性細胞毒性。
實施例34係如實施例26至33中任一者之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該雙特異性抗體或其抗原結合片段係嵌合的。
實施例35係如實施例26至34中任一者之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該雙特異性抗體或其抗原結合片段係人類的或人源化。
實施例36係一種單離核酸，其編碼如實施例26至35中任一者之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段。
實施例37係一種載體，其包含如實施例36之單離核酸。
實施例38係一種宿主細胞，其包含如實施例37之載體。
實施例39係一種醫藥組成物，其包含如實施例26至35中任一者之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段、及醫藥上可接受之載劑。
實施例40係一種治療有需要之對象的癌症之方法，其包含向該對象投予如實施例39之醫藥組成物。
實施例41係如實施例40之方法，其中該癌症係血液性癌症。
實施例42係如實施例41之方法，其中該血液性癌症係選自由白血病、淋巴瘤、或多發性骨髓瘤所組成之群組。
實施例43係如實施例42之方法，其中該血液性癌症係急性骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、急性淋巴球性白血病(ALL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性骨髓性白血病(CML)、或母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤(DPDCN)。
實施例44係一種產生如實施例26至35中任一者之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段之方法，其包含在產生該抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或抗原結合片段之條件下培養包含編碼該抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或抗原結合片段之核酸的細胞，及自該細胞或培養物回收該抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或抗原結合片段。
實施例45係一種產生包含如實施例26至35中任一者之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或抗原結合片段的醫藥組成物之方法，其包含將該CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段與醫藥上可接受之載劑組合以獲得該醫藥組成物。
實例
試劑
抗原生成
以具有或不具有突變的單體形式之人類血清白蛋白(HSA)、具有C58S突變的Uniprot P02768來產生人類及食蟹獼猴CD33蛋白，其 在C端融合以用於免疫及檢定。合成性地合成編碼具有六個組胺酸標籤的CD33蛋白抗原之cDNA，並使用標準分子生物學技術在肌動蛋白啟動子下將其選殖至哺乳動物分泌表現載體中。
衍生自Uniprot P20138(SEQ ID NO：1)的全長人類CD33胞外域(ECD)(人類CD33 ECD)在N端與信號序列融合且具有或不具有HSA，接著在C端與六個組胺酸標籤融合(具有HSA之hCD33 ECD及僅hCD33 ECD)。將人類CD33 ECD表現建構體暫時轉染至HEK293衍生細胞(Expi293)(Gibco/Thermo Fisher Scientific；Waltham,MA)，其係根據製造商規程使用Expifectamine進行。在收穫前，將細胞在迴轉式振盪器上用8% CO2於37℃下培養5天。藉由離心移除表現細胞，並自培養基純化可溶性CD33，其係使用固定化金屬親和層析法，使用Ni Sepharose 6 Fast Flow樹脂(GE Healthcare；Little Chalfont,United Kingdom)，接著以達爾伯克磷酸鹽鹽水緩衝液pH 7.2(1X DPBS)進行Superdex 200製備粒徑篩析層析(SEC)(GE Healthcare)。將排除任何二硫化物聚集物之SEC洗提流份合併且無菌過濾，以產生用於免疫及CD33檢定之最終蛋白質。藉由A280判定蛋白質濃度，且經純化蛋白質之品質係藉由SDS-PAGE及分析型SEC(Phenomenex；Torrance,CA)評估。內毒素測量係使用EndoSafe-PTS Cartridges(一種顯色LAL檢定)(Charles River；Wilmington,MA)執行。
將人類CD33 ECD亞結構域蛋白、hCD33 V-域-HSA、hCD33 V-域-his、hCD33 C2域-HSA、及hCD33 C2域-His與全長人類CD33 ECD類似地建構、表現、及純化。
用於免疫及交叉選擇性檢定之食蟹獼猴CD33建構體、食蟹獼猴CD33 ECD-HSA、食蟹獼猴CD33-His亦基於Genbank序列XP_005590138.1而生成。食蟹獼猴CD33蛋白表現及純化與人類CD33蛋白相同。
根據製造商條件，使用SureLink Chromagenic Biotin Labeling套組(SeraCare KPL)，將用於篩選之CD33抗原在50mM磷酸鈉pH 7.2中進行生物素化。簡言之，將25mM之生物素儲備溶液以4：1莫耳比之生物素對蛋白質添加至CD33蛋白，並在室溫下在溫和旋轉下培養30分鐘，然後切換至4℃再培養2個小時。藉由緩衝液交換將未摻入的生物素移除至1x DPBS中。藉由使用NanoDrop在A280nm及A354nm處測量來判定蛋白質濃度及生物素摻入。上述抗原之各者的序列請參見表1。
Figure 108117806-A0202-12-0124-2
CD33表現同源細胞系之生成
人類及食蟹獼猴CD33表現細胞系係使用慢病毒(Genecopoeia；Rockville,MD)產生，其含有全長人類CD33或食蟹獼猴CD33、及嘌呤黴素(puromycin)，以選擇CD33陽性細胞。將HEK293F細胞(ATCC)(CD33陰性)用慢病毒粒子轉導，以過度表現人類CD33及食蟹獼猴CD33。在轉導之後，藉由處理匯集細胞來選擇陽性表現CD33及抗性標記的細胞，該等匯集細胞係生長在DMEM+10% HI FBS(Life Technologies；Carlsbad,CA)中，並補充有不同濃度的嘌呤黴素(Life Technologies)。
除了產生HEK之細胞系外，使用數種商業細胞系以用於結合及細胞毒性檢定。此等包括MOLM13、KG1、SH2、OCIAML3、及MV411，且係獲自美國菌種保存中心(American Type Culture collection)或德國微生及細胞保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikrooranismen und Zellkulturen)，並在37℃、5% CO2下於具有10% FBS的完全RPMI培養基中培養。
實例1：免疫活動(campaign)
OmniRat
使用人類免疫球蛋白基因轉殖大鼠品系(OmniRat®；Ligand Pharmaceuticals；San Diego,CA)以發展人類CD33單株抗體表現性融合瘤細胞。OmniRat®含有嵌合人類/大鼠IgH基因位點(包含22個人類VH、所有呈天然組態的人類D及JH區段，該等區段係連接至大鼠CH基因位點)再加上完整的人類IgL基因位點(12個Vκ連接到Jκ-Cκ，且16個Vλ連 接到Jλ-Cλ)。(參見例如Osborn,et al.(2013)J Immunol 190(4)：1481-1490)。因此，該等大鼠展現減少表現的大鼠免疫球蛋白，且所引入之人類重鏈及輕鏈轉殖基因回應於免疫會經歷類型轉換(class switching)及體細胞突變，以產生具有完整人類可變區之高親和力嵌合人類/大鼠IgG單株抗體。OmniRat®的製備及使用、及此類大鼠所攜帶的基因體修飾係由Bruggemann等人描述於PCT公開案WO 2014/093908中。
當用重組人類及食蟹獼猴CD33(分別為huCD33 ECD-HSA及食蟹獼猴CD33 ECD-HSA)免疫時，此基因轉殖大鼠產生針對人類CD33的嵌合人類-大鼠IgG抗體，其中一些亦與食蟹獼猴CD33結合。
用huCD33 ECD-HSA及食蟹獼猴CD33 ECD-HSA交替免疫八隻OmniRat。在46天免疫方案之後，收穫來自所有八隻OmniRat之淋巴結，並用以產生融合瘤。使用標準技術經由結合ELISA及AlphaLISA篩選八十一個96孔盤的融合瘤上清液，其中針對與huCD33 ECD-HSA及食蟹獼猴CD33 ECD-HSA之特異性結合，選擇128個融合瘤上清液。128個上清液中的大多數亦對結合過度表現huCD33或cyCD33的細胞呈陽性。
六隻額外的OmniRat僅用rhuCD33免疫。在31天免疫方案之後，收穫來自所有六隻OmniRat之淋巴結，並用以產生融合瘤。使用標準技術經由結合ELISA篩選三十個96孔盤的融合瘤上清液，其中針對與huCD33 ECD-HSA及食蟹獼猴CD33 ECD-HSA之特異性結合，選擇94個融合瘤上清液。從陽性殖株製備融合瘤溶解物，並進展至下述之v區選殖。
OmniMouse
使用人類免疫球蛋白基因轉殖小鼠品系(OmniMouse®；Ligand Pharmaceuticals)以發展人類CD33單株抗體表現性融合瘤細胞。OmniMouse®含有嵌合人類/大鼠IgH基因位點以及完整的人類IgL基因位點。該等小鼠展現減少表現的小鼠免疫球蛋白，且所引入之人類重鏈及輕鏈轉殖基因回應於免疫會經歷類型轉換及體細胞突變，以產生具有完整人類可變區之高親和力嵌合人類/大鼠IgG單株抗體。
當用重組人類及食蟹獼猴CD33(分別為huCD33 ECD-HSA及食蟹獼猴CD33 ECD-HAS)免疫時，此基因轉殖小鼠產生針對人類CD33的嵌合人類/大鼠IgG抗體，其中一些亦與食蟹獼猴CD33結合。
用huCD33 ECD-HSA及食蟹獼猴CD33 ECD-HSA交替免疫四隻OmniMice。在53天免疫方案之後，收穫來自所有四隻OmniMice之脾臟及淋巴結，並用以產生融合瘤。經由結合ELISA及AlphaLISA篩選四十八個96孔盤的融合瘤上清液，其中針對與huCD33 ECD-HSA及食蟹獼猴CD33 ECD-HSA之特異性結合，選擇8個融合瘤上清液。從陽性殖株製備融合瘤溶解物，並進展至下述之v區選殖。
V區選殖
將來自融合瘤細胞溶解物之總RNA使用RNeasy 96套組(Qiagen；Hilden,Germany)依照製造商的規程純化，且使用Drop Sense定量所得之RNA，並將其儲存在-80℃下，或使用Invitrogen SuperScript III First-Strand Synthesis System for RT-PCR(Invitrogen；Carlsbad,CA)合成cDNA。第一股cDNA合成係使用基因特異性引子進行，該基因特異性引子分別黏合至重鏈、κ鏈、及λ鏈的恆定區。RT-PCR反應混合物包含至多3μg純化的RNA、基因特異性引子、dNTP混合物、反應緩衝液、25mM MgCl2、DTT、RNaseOUTTM(40U/μl,Invitrogen)、及SuperScriptTM III RT(200U/μl,Invitrogen Cat# 18080-051)，並在50℃下培養50分鐘及在85℃下培養5分鐘。將所得單股cDNA儲存在-20℃下，或將單股DNA進行PCR擴增。使用Platinum Pfx聚合酶(Invitrogen)進行PCR反應。使用最佳化PCR條件，藉由分別黏合至前導序列及重鏈、κ鏈、及λ鏈的恆定區之正向及反向引子來擴增v區片段。使所得PCR片段在凝膠上跑膠，並使用預先設計之引子在GENEWIZ定序，以獲得v區序列。收集所得之v區序列的.abi檔案，並藉由在Janssen Biologics Discovery所創建的桑格v區序列分析程式進行分析。將回收的v區之AA序列登錄在內部資料庫中，優化密碼子，並選殖至帶有所欲人類抗體同型之適當恆定區的基於pUnder之表現載體中：IgG1 F405L及IgG4 PAA。總共76個OMNIRat抗體及8個OMNIMouse抗體經成功地選殖並繼續進行進一步表徵。下表彙總來自在OMNIRat活動中所識別之前42個(參見表2)及OMNIMouse活動中所識別之16個(參見表3)的序列，其中將數個OMNIRat抗體選殖至IgG1以及IgG4 PAA中，並將來自OMNIMouse活動之全部選殖至IgG1及IgG 4 PAA兩者中。
表2：OMNIRat中經由CD33免疫所識別之抗體序列
Figure 108117806-A0202-12-0129-3
表3：OMNIMouse中經由CD33免疫所識別之抗體序列
Figure 108117806-A0202-12-0130-4
Expi293小規模轉染及純化
將在免疫活動中識別的抗體及後續v區選殖(至IgG1 F405L及IgG4 PAA中)經由小的2ml規模表現並純化。將Expi293TM細胞(ThermoFisher Scientific)以1.25×105至2.25×105個活細胞/mL的密度接種於Expi293TM表現培養基中，並在聚碳酸酯、拋棄式、無菌、通氣、非擋板式(non-baffled)錐形搖瓶中培養於37℃、7% CO2振盪培養箱(INFORS HT Multitron Pro)中。對於在125mL至2L搖瓶中之常規細胞生長，針對具有19mm振盪直徑之振盪器，將振盪速度設定為130rpm。當密度在3×106至5×106個活細胞/mL下以98至99%的存活率達到對數期生長時，將細胞進行繼代培養。
在轉染當天，判定存活細胞密度及存活率百分比。在3×106個活細胞/mL的密度下將細胞轉染。為了最佳轉染，使用在0.1 mg/mL濃度下於TE緩衝液(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0)中之無菌重鏈及輕鏈質體DNA。
依照製造商之轉染規程(ThermoFisher出版號MAN0007814)將Expi293TM細胞轉染。轉染係在24孔深孔盤(GE Healthcare)中執行。簡言之，用0.1mL OptiMEMTM培養基(ThermoFisher Scientific)以下列比率稀釋質體DNA：0.250μg重鏈DNA：0.750μg輕鏈DNA：0.5μg pAdvantage。將5μL的ExpiFectamineTM 293轉染試劑稀釋並與95μL OptiMEMTM培養基輕輕地混合並培養1分鐘。將稀釋的ExpiFectamineTM 293試劑添加至稀釋的DNA中，輕輕地混合，並將ExpiFectamineTM 293/質體DNA複合體在室溫下培養40分鐘。培養後，將1.8mL之Expi293TM細胞添加至在37℃、7% CO2振盪培養箱中培養整夜的複合體中。
在轉染後第1天，添加10μL ExpiFectamineTM 293增強劑1及100μL Expifectamine 293TM增強劑2，並將盤再次放回培養箱中額外5天。在轉染後第6天藉由以850xG離心15分鐘收穫培養物，然後進行純化。
將以上製備之1.7ml的澄清表現上清液轉移至新的96 2ml深孔盤中。藉由將800μl的mAb Select Sure樹脂(GE Healthcare)與DPBS -/-漿液之1：4混合物移液至96孔Acroprep Advance 1μm玻璃濾盤(Pall)之各孔中來製備純化盤。對盤施加200mbar的真空壓力以移除過量的PBS，隨後用800μl新鮮的PBS洗滌。施加200mbar真空壓力以移除洗滌緩衝液。接著將澄清的上清液轉移至經PBS洗滌的樹脂，輕輕地混合 並培養15分鐘。培養後，施加200mbar真空壓力以移除上清液。將mAb Select Sure樹脂用PBS洗滌三次，並用pH 5之25mM乙酸鈉(TEKNOVA；Hollister,CA)洗滌一次，於洗滌之間施加200mbar真空壓力以移除過量的緩衝液。使用pH 3.5之0.1M乙酸鈉洗提結合至樹脂之mAb，並培養10分鐘以進行有效解離。將濾盤置於96深孔盤頂上，經由以1000g離心2分鐘將洗提的mAb收集在底盤中。添加80μl之2.5M Tris-乙酸鹽(pH 7.2)以中和mAb。將mAb在96孔DispoDIALYZER盤(Harvard Apparatus；Holliston,MA)中透析至PBS中整夜，將其轉移至96孔Acroprep Advance 0.2μm Supor濾盤(Pall；Port Washington,Ny)，置於96深孔盤頂上，且經由在桌上型離心機中以1,500g離心15分鐘來過濾蛋白質溶液。使用DropSense儀器(Trinean)在濾液上藉由A280測量來判定蛋白質濃度。
實例2：抗CD33 mAb的表徵
針對與CD33表現細胞的結合及與重組抗原的結合，進一步表徵經由免疫識別、v區選殖、及後續表現並純化的OMNIRat抗體。針對與表現人類CD33或食蟹獼猴CD33(上述生成)的穩定轉染之HEK293F細胞以及作為陰性對照之親本HEK293F的結合，評估純化的抗體。使用非酶解離緩衝液(Thermo Scientific)自組織培養瓶收穫細胞。將燒瓶用PBS潤洗兩次，並將解離緩衝液添加至燒瓶中，且將燒瓶在37℃下培養10分鐘直至細胞變得非貼附性。將細胞以300g離心5分鐘，並以1.0×106個細胞/ml再懸浮於染色緩衝液(Becton Dickinson；Franklin Lakes, NJ)。將50,000個細胞/孔的各細胞類型接種於圓底盤(Becton Dickinson)中之50μl的染色緩衝液中。3種稀釋及零(120nM、12nM、及1.2nM以及0nM)下添加50μl的2x濃度測試mAb或同型對照，並將所得溶液在4℃培養30分鐘。將100μl染色緩衝液添加至各盤之所有孔中，將盤以300g離心5分鐘，移除緩衝液，將200μl染色緩衝液添加至各盤之所有孔中，將盤以300g離心5分鐘，並移除緩衝液。將50μl的2μg/ml山羊抗人類Fc AF647二級抗體(Jackson Immunoresearch；West Grove,PA)添加至盤之所有孔中，並將盤在4℃下培養30分鐘。將100μl染色緩衝液添加至盤之所有孔中，將盤以300g離心5分鐘，並移除緩衝液。將200μl運行緩衝液(運行緩衝液係染色緩衝液，1mM EDTA，0.1%普朗尼克酸(Pluronic Acid))添加至盤之所有孔中，將盤以300g離心5分鐘，並移除緩衝液。將含有Sytox Green活/死染料(ThermoFisher)之30ul運行緩衝液添加至具有細胞的所有孔中，並在iQue IntelliCyt流動式細胞測量儀上讀盤。基於前向與側向散射上對細胞進行圈選(gate)以消除碎片，然後基於單態(singlet)進行圈選，然後基於排除Sytox染色的活細胞進行圈選。藉由AF647通道中之平均螢光強度評估抗體結合。
為了開始評估經純化的mAb之生物物理結合性質，執行解離速率篩選。測試76種OMNIRat抗CD33 mAb之與重組人類CD33 ECD-HSA(C33W2)及食蟹獼猴CD33 ECD-HSA(C33W1)蛋白(Janssen production)的結合，且解離速率係藉由IBIS MX96 SPRi陣列平台(Carterra；Newton,PA)測量。將山羊抗人類Fc IgG(Jackson Immunoresearch,Cat# 109-005-098)經由胺偶合、以100μg/mL於乙酸鹽 緩衝液(pH 4.5)中、使用CMD50m感測器晶片(Xantec，批號CMD50m0415.a)、以10分鐘之締合時間在IBIS儀器中直接固定。達成~9000Rus之平均GAH-Fc固定水平。將感測器晶片轉移至連續流微點樣器(Continuous Flow Microspotter,CFM)單元，以在10μg/ml下捕捉各抗CD33 mAb達10分鐘。藉由單循環動力學在IBIS SPRi上測量結合而不再生。將各抗原濃度系列(3倍稀釋系列中的3μM)從低濃度(0.46nM)至高濃度(3μM)依序注射以結合至所捕捉之mAb，締合時間為5分鐘且解離時間為15分鐘，並使用PBST(具有0.005% Tween之PBS)作為運行緩衝液。參照原始結合數據(.trix檔案格式)並使用SpTintX軟體(Wasatch，版本1.9.3.2)對準，然後將其匯出(.ibmx檔案格式)至Scrubber軟體(版本2.0)用於1：1結合動力學分析(Wasatch，版本2.0.0.33)以提取koff結果。
下表4彙總藉由結合至人類及食蟹獼猴CD33表現細胞系以及至重組抗原來評估前32個殖株(該等抗原之一者的解離速率至少>10e-3)。在32個中，除了4個之外全部皆顯示對人類或食蟹獼猴表現細胞有明顯的結合。經由表位分級(epitope binning)及完整動力學分析對所有32個進行進一步表徵。
Figure 108117806-A0202-12-0134-5
Figure 108117806-A0202-12-0135-6
Figure 108117806-A0202-12-0136-7
接著針對完全親和力分析以及表位分級，進一步表徵mAb之小組。藉由ProteOn SPR(Bio-Rad)測量抗CD33 mAb與重組人類CD33 ECD-HSA(C33W2)及食蟹獼猴CD33 ECD-HSA(C33W1)的結合。將山羊抗人類Fc IgG(Jackson Immunoresearch,Cat# 109-005-098)經由胺偶合、以30μg/mL於乙酸鹽緩衝液(pH 5.0)中、在所有6個配體通道上以垂直定向直接固定在GLC感測器晶片(Bio-Rad，目錄編號176-5011)上，其中在含有0.005% Tween-20之PBS中的流速為30μL/min。固定密度平均為約5000反應單位(Response Unit,RU)，且在不同通道間變異小於5%。在呈垂直配體定向、0.25或0.5μg/ml(160~300RU)之抗人類Fc IgG表面上捕捉不同的mAb，其中第6個配體通道作為無配體表面對照。在以5種濃度之3倍稀釋系列的0.3μM濃度下，使人類及食蟹獼猴CD33-HSA蛋白作為分析物進入，以結合至呈水平定向的所捕捉之mAb。亦在第6通道中注射緩衝液樣本以監測所捕捉之mAb的解離及基線穩定性。所有濃度的人類及食蟹獼猴CD33-HSA的解離相係以100μL/min的流速針對與C33B782的結合監測15分鐘，針對與C33B912(與具有hIgG4之 C33B904同一)的結合監測60分鐘，接著使用0.85%磷酸之18秒脈衝以移除抗原及結合的mAb而再生。自下列者減去反應數據之後，藉由雙重參考處理原始數據：1)間點，以校正Ag與空晶片表面之間的非特異性交互作用；2)緩衝通道，以校正由於所捕捉之mAb表面隨時間之解離而導致的基線漂移。將各mAb在所有抗原濃度下之經處理數據以1：1簡單Langmuir結合模型進行全域擬合(globally fit)，以提取動力學(kon,koff)及親和力(KD)常數之估計值。
為了判定mAb之小組是否皆結合1種不同表位、或者是否有廣泛表位覆蓋，執行表位分級實驗。使用CMD-200M感測器稜鏡晶片在IBIS SPRi儀器(Carterra)上執行CD33 mAb的競爭性表位分級。使用分開之連續流動微點樣器(CFM)，經由胺偶合將各抗CD33抗體以10μg/ml於乙酸鹽緩衝液(pH 4.5)中直接固定在晶片上。接著使用經典或「三明治(Sandwich)」分級格式將經印刷的感測器晶片轉移至IBIS儀器以用於分級分析。藉由依序注射50nM的人類CD33 ECD-HSA,(C33W2)、接著以133nM的單一抗CD33 mAb注射液作為溶液中的競爭分析物，以在抗原及抗體之各依序注射循環後結合經表面再生之固定的抗CD33 mAb來執行分級。
為了監測固定的mAb在再生之前及之後之活性，在實驗開始時及在結束時執行緩衝液注射(無任何競爭mAb)，以測量僅抗原的結合活性。相對於緩衝液(僅抗原)結合的競爭mAb結合之反應指示溶液中的抗體是否阻斷結合至固定mAb的抗原、或是否將結合至固定mAb的抗原夾在中間。參照原始分級數據(.trix檔案格式)並使用SprintX軟體 (Wasatch，版本1.9.3.2)歸零，然後將其匯出(.ibmx檔案格式)至分級軟體HtTools.exe(Wasatch，版本2.0.0.33)以用於分析。藉由移除抗原反應低於20RU的抗體及不自身阻斷之抗體來策劃數據。相對於僅抗原的結合反應，將競爭mAb反應標準化。標準化反應<0.25之抗體被稱為阻斷劑，標準化反應
Figure 108117806-A0202-12-0138-30
0.25者被稱為非阻斷劑/夾劑(Sandwicher)。在組合的樹狀圖上使用高度為2.5之切口來預測不同分級(bin)。
下表彙總32種所選mAb的完整動力學分析及表位分級。總共有8種抗CD33 mAb對人類及食蟹獼猴CD33兩者具有次奈莫耳(sub-nanomolar)親和力，且此等mAb對應於3種不同的表位庫(epitope bin)，而較大的小組具有一系列的親和力及7種不同的表位庫。
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Figure 108117806-A0202-12-0139-9
將OmniMouse小組(總共8種mAb)分開產生並針對與細胞的結合進一步表徵。如上所述執行細胞結合並彙總於下表中。所測試的8種mAb中，6種直接與CD33表現細胞結合，而2種沒有。
Figure 108117806-A0202-12-0140-10
使用上述方法，經由對重組抗原的完整動力學分析，進一步對結合細胞上CD33的6種mAb進行生物物理表徵，並彙總於下表。在所測試的6種mAb中，1種以皮莫耳(picomolar)親和力結合至人類CD33(C33B912)且以次奈莫耳親和力結合至食蟹獼猴CD33，而1種對人類CD33具有非常強的親和力但對食蟹獼猴CD33僅具有奈莫耳親和力 (C33B911)。另外兩個殖株對人類及食蟹獼猴CD33兩者係次奈莫耳的(C33B913及C33B916)，但是兩者親和力都不在C33B912的範圍內。
Figure 108117806-A0202-12-0141-12
對衍生自OMNIMouse之6種細胞結合mAb以及先前在早前OMNIRat活動中識別之數種對照mAb執行表位分級實驗。對照mAb係基於其等對人類CD33的次奈莫耳親和力及不同表位庫的數目來選擇。分級軟體HtTools在每個實驗基礎上分配表位庫數目，並因此對已定義之表位庫具有數個對照組以用於交叉比較是至關重要的。兩個OMNIMouse衍生之人類CD33高親和力殖株(C33B911及C33B912)皆與來自上述庫4之殖株(此實驗中為庫4)一起分級，而次奈莫耳殖株(C33B916)在此則連同C33B836(上述實驗中為庫1)一起分級至2中。
Figure 108117806-A0202-12-0141-11
Figure 108117806-A0202-12-0142-13
CD33包含2個IgG域，膜遠端V域及膜近端C2域。SNP rs12459419可引起CD33 pre-mRNA轉錄物的選擇性替代性剪接(selective alternative splicing)，以產生在細胞上表現之僅C2形式，且因此靶向此域可提供臨床效益。為了確定mAb能夠結合至兩域中之何者，依照上述規程對具有最高結合能力之涵蓋4個不同表位庫的6種mAb執行解離速率篩選，其使用人類CD33 ECD-HSA、人類CD33 V-HSA、及人類CD33 C2-HSA作為結合抗原。如下表所示，先前分組到庫4中的兩個殖株皆結合至huCD33 C2域但未結合至huCD33 V域，而庫2及庫3中的殖株則結合V域但未結合C2域。分組到庫5中的兩個殖株不與任一域結合，且因此其等之確切結合位置可能跨越兩個域。將三(3)種市售可得之mAb包括在此實驗中(WM53(EMD Millipore；Darmstadt,Germany)、P67.7(Biolegend,San Diego,CA)、及LSBio殖株906(LifeSpan Biosciences,Seattle,WA))，且所有皆顯示結合至V域但未結合至C2域。觀察表5及表8中與表9中之C2域結合數據相關的表位庫，總共有15種mAb可潛在地結合C2域，其對人類全長蛋白的親和力係在~25nM至~30pM的範圍內。
Figure 108117806-A0202-12-0143-14
為了進一步支持體內及體外研究，選擇所選殖株(C33B836、C33B782、C33B778、C33B904、C33B806、C33B830、C33B937、C33B792、C33B760、及C33B777)用於擴展及fab臂交換，以產生具有抗CD3抗體之雙特異性DuoBody分子。將ExpiCHO-STM細胞(ThermoFisher Scientific)以1.25×105至2.25×105個活細胞/mL接種於ExpiCHOTM表現培養基中，並在聚碳酸酯、拋棄式、無菌、通氣、非擋板式錐形搖瓶中培養於37℃、7% CO2振盪培養箱(INFORS HT Multitron Pro)中。對於在125mL至2L搖瓶中之常規細胞生長，針對具有19mm振盪直徑之振盪器，將振盪速度設定為130rpm。當密度在4×106至6×106個活細胞/mL下以98至99%的存活率達到對數期生長時，將細胞進行繼代培養。
在轉染前兩天，將ExpiCHO-STM細胞以1.5×106個活細胞/mL接種，以獲得所需的培養體積。在轉染當天，判定存活細胞密度及存活率百分比。在6×106個活細胞/mL的密度下將細胞轉染。為了最佳轉染， 使用在
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1mg/mL濃度下於TE緩衝液(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0)中之無菌重鏈及輕鏈質體DNA。
依照製造商之Max Titer轉染規程(ThermoFisher出版號MAN0014337)將ExpiCHO-STM細胞轉染。以下所示之所有數量及體積係每ml之最終轉染培養體積。簡言之，用0.04mL冷的OptiPROTM培養基(ThermoFisher Scientific)以下列比率稀釋質體DNA：0.125μg重鏈DNA：0.375μg輕鏈DNA：0.5μg pAdvantage。將6.4μL的ExpiFectamineTM CHO轉染試劑稀釋並與0.04mL冷的OptiPROTM培養基輕輕地混合並培養1分鐘。將稀釋的ExpiFectamineTM CHO試劑添加至稀釋的DNA中，輕輕地混合，並將ExpiFectamineTM CHO/質體DNA複合體在室溫下培養5分鐘。培養後，將複合體添加至在搖瓶中之ExpiCHO-STM細胞，並在37℃、7% CO2振盪培養箱中培養整夜。
針對Max Titer規程，在轉染後第1天，添加6μL ExpiFectamineTM CHO增強劑及160μL ExpiCHOTM Feed，並將燒瓶轉移至32℃、7% CO2振盪培養箱中。在轉染後第5天，將160μL的ExpiCHOTM Feed第二次添加至燒瓶中，並放回32℃培養箱中振盪。在轉染後第12天收穫培養物，以5000rpm離心15分鐘，並透過0.2um Acropak 1500膠囊式過濾器(Pall)淨化。
使用mAbSelect Sure樹脂(GE Healthcare)從澄清的上清液中純化表現抗體。在裝載個別培養物上清液之前，用pH 7.2的1x D-PBS將MabSelect SuRe蛋白質A管柱平衡。藉由用pH 7.2的1x D-PBS充分洗滌來移除未結合之蛋白質。將結合蛋白質用pH 3.5的0.1M乙酸鈉洗提。 用2.5M Tris pH 7.2中和峰流份並將其匯集。將中和的流份匯集物透析到1xdPBS中用於檢定及生物物理表徵化，或將其用於雙特異性DuoBody組裝。
藉由測量在OD280nm的吸光度來判定並使用基於胺基酸序列的吸光度消光係數來計算各洗提池之蛋白質濃度。
實例3：使用純化的親本mAb之Fab臂交換
CD33X CD3雙特異性抗體的形成需要兩種親本mAb，一種針對靶向臂(例如CD33)，且一種針對效應臂(例如CD3)。用高親和力(CD3B219)或低親和力CD3臂(CD3B376)臂將CD33 mAb重組。此等親本mAb係呈IgG4 PAA形式(Labrijn et al,2013)，其中靶向親本(CD33)含有K409R突變(IgG4之天然胺基酸)，而殺滅親本(CD3)則含有F405L突變及R409K。單特異性抗CD3抗體經表現為IgG4，其Fc區中具有Fc取代S228P、F234A、L235A、F405L、及R409K(CD3臂)(根據EU索引編號)。單特異性抗體係如上文所述表現並純化。在純化後，將親本CD33抗體與所欲之親本CD3抗體在還原條件下於75mM半胱胺-HCl中混合，並在31℃下培養5小時。重組反應係基於莫耳比，其中將設定量的CD33抗體(例如，10mg或~74.6奈莫耳)與CD3抗體(例如，~67.8奈莫耳)組合，其中於6%過量之CD3抗體中添加CD33抗體。CD33抗體儲備溶液的濃度在0.8至6mg/mL之間變化，且各配對之重組反應的體積也有所變化。隨後將重組反應對PBS透析整夜以移除還原劑。用過量的CD33抗體(比率)執行CD33xCD3雙特異性抗體反應，以使重組後剩餘未反應的 CD3親本抗體之量最小化。
所產生之最終CD33 X CD3雙特異性抗體連同重組反應中所使用之親本mAb(即CD33、CD3、或空)係列於表10中。
所選CD33命中亦與非殺滅臂(空)配對，以產生出於測試目的之陰性對照。針對對照雙特異性抗體B2M1，產生呈IgG4 PAA形式之RSV抗體，將其純化，並與CD3臂CD3B219及CD3B376-F405L,R409K組合，以產生CD3B288(CD3x空)及CD3B510(CD3B376x空)；或與CD33臂C33B836、C33B806、C33B782、C33B792、C33B760、C33B830、C33B799、C33B778、C33B777組合，以分別產生C33B941、C33B943、C33B946、C33B945、C33B949、C33B942、C33B944、C33B947、C33B948(CD33x空)。
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實例4：用CD33xCD3雙特異性抗體進行體外T細胞媒介之細胞毒性檢定
執行體外T細胞媒介之細胞毒性檢定以評估與CD3臂(CD3B219)配對之CD33命中是否媒介表現CD33之AML細胞系OCI-AML5的殺滅。簡言之，效應細胞(購自Biological Speciality之泛T細胞)經收穫、計數、洗滌、並在具有10% FBS(Invitrogen)之RPMI(Invitrogen)細胞培養基中再懸浮至1×106個細胞/ml。將目標細胞(MOLM13)用CFSE(Invitrogen)標記，並在具有10% FBS之RPMI中再懸浮至2×105個細胞/mL。將效應物及經CFSE標記之目標細胞以E：T=5：1混合於無菌96孔圓底盤中。將10μL之Fc阻斷(ReoPro Fc片段)連同雙特異性抗體之5μL等分試樣添加至含有各種濃度之各孔中。將培養物在37℃、5% CO2下培養48小時。在48小時之後，將LIVE/DEAD® Fixable Near-IR Dead Cell Stain緩衝液(Life Technologies)添加至樣本中，並將培養物於黑暗中在RT下培養20分鐘、洗滌、並再懸浮於100至200μL FACs緩衝液中。藥物誘導之細胞毒性係使用CANTO II流動式細胞測量儀(BD Biosciences；Franklin Lakes,NJ)判定，並用FlowJo軟體或Dive軟體(BD Biosciences)分析。所關注之群為雙陽性CFSE+/活/死+細胞(double positive CFSE+/live/dead+cell)。如圖1所示，所有CD33xCD3多特異性抗體在48小時誘導T細胞重新定向之CD33+ MOLM-13細胞之細胞毒性。表11彙總用CD33xCD3多特異性抗體產生之EC50值。取前4 種抗體C3CB10、C3CB12、C3CB7、及C3CB88用於進一步表徵。
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實例5：離體CD33xCD3媒介AML母細胞的減少及AML原始樣本中的T細胞活化
為了進一步評估CD33xCD3雙特異性抗體之細胞毒性潛力，使用AML患者全血使用前四種抗體執行離體細胞毒性檢定(圖2)。在此檢定中，將各種雙特異性抗體(CD33抗體與CD3臂CD3B219及CD3B376之任一者配對)添加至來自AML患者之稀釋全血中歷時48小時而不提供額外T細胞，因為此檢定仰賴於患者血液中自體T細胞之存在。在48小時，將樣本用CD3 PerCPCy5.5、CD25 PE、CD33 FITC、及CD38 APC染色(所有抗體皆購自Biolegend；San Diego,CA)。接著將樣本在1x裂解RBC裂解緩衝液(Lyse RBC Lysis Buffer,eBioscience)中洗滌至少3次。接著將樣本用LIVE/DEAD® Fixable Near-IR Dead Cell Stain緩衝液(Life Technologies)染色。藉由在雙特異性抗體存在下首先定量AML患者癌細胞(定義為CD3-CD38+細胞)部分中的活CD33+細胞來判定腫瘤細胞毒性的程度。使用下列方程式將細胞毒性計算為相對於PBS/未 處理對照組之百分比：(PBS/未處理對照組中之CD33+ %-經治療樣本中之CD33+ %)/(PBS/未處理對照組中之CD33+ %)。將T細胞活化計算為CD3+部分中的CD25+事件之百分比。
如圖2所示，與CD3臂(CD3B376及CD3B219)任一者配對之所有CD33先導抗體在48小時後促進與T細胞活化相關的總細胞毒性之劑量依賴性降低。空臂對照抗體(空xCD3B219及空xCD3B376)未能顯示腫瘤細胞之細胞毒性或T細胞活化。此結果亦證實CD33xCD3雙特異性抗體在自體環境中起作用。此等結果係代表4個其他AML供體樣本(數據未顯示)。表12彙總用CD33xCD3多特異性抗體所產生之EC50值。從EC50值可以看出，與CD3臂(C3CB88、C3CB189)任一者配對之C33B904以及與CD3臂(C3CB7、C3CB97)任一者配對之C33B836係最具效力且最有效的抗體。因此，這4種抗體係進一步表徵之焦點。
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實例6：證實CD33xCD3雙特異性抗體結合至CD33之C2域並誘導CD33單核苷酸多型性(SNP)表現細胞系之細胞毒性
用CD33xCD3雙特異性抗體進行體外T細胞媒介之細胞毒性檢定
最近的研究顯示，在~50%的AML群體中存在單核苷酸多型性(SNP)rs12459419，並導致CD33之外顯子2的跳躍，其導致CD33的V域缺失。此研究亦顯示結合至CD33之V域的Mylotarg在表現SNP的患者中沒有功效，且並因此降低復發的風險並在~50%的AML群體中提高存活。(Lamba et al 2017,JCO,CD33 Splicing Polymorphism Determines Gemtuzumab Ozogamicin Response in De Novo Acute Myeloid Leukemia：Report From Randomized Phase III Children's Oncology Group Trial AAML0531)。鑑於上述研究中之Mylotarg數據，執行體外T細胞媒介之細胞毒性檢定，以評估與CD3臂(CD3B219或CD3B376)配對之CD33命中(V結合C33B836對C2結合C33B904)是否媒介SNP rs12459419表現細胞系的殺滅。簡言之，效應細胞(購自Biological Speciality之泛T細胞)經收穫、計數、洗滌、並在具有10% FBS(Invitrogen)之RPMI(Invitrogen)細胞培養基中再懸浮至1×106個細胞/ml。將目標細胞(KG1、SH2、及OCIAML3)用CFSE(Invitrogen)標記，並在具有10% FBS之RPMI中再懸浮至2×105個細胞/mL。選擇KG1、SH2、及OCIAML3以分別代表對於CD33 SNP rs12459419突變為野生型、異型、及同型。將效應物及經CFSE標記之目標細胞以效應物：目標細胞比(E：T)=5：1混合於無菌96孔圓底盤中。將10μl之Fc阻斷(ReoPro Fc片段)連同雙特異性抗體之5.μL等分試樣添加至含有各種濃度之各孔中。將培養物在37℃、5% CO2下培養48小時。在48小時之後，將LIVE/DEAD® Fixable Near-IR Dead Cell Stain緩衝液(Life Technologies) 添加至樣本中，並將培養物於黑暗中在RT下培養20分鐘、洗滌、並再懸浮於100至200μL FACs緩衝液中。藥物誘導之細胞毒性係使用CANTO II流動式細胞測量儀(BD Biosciences)來測定，並且用FlowJo軟體或Dive軟體(BD Biosciences)來分析。所關注之群為雙陽性CFSE+/活/死+細胞(double positive CFSE+/live/dead+cell)。如圖3所示，不同於空臂對照組(空x CD3B219及空x CD3B376)，在48小時，V結合及C2結合CD33xCD3多特異性抗體誘導T細胞重新定向之CD33+ WT對SNP rs12459419突變細胞系KG1之細胞毒性。相反地，不同於V結合劑C33B836(C3CB97、C3CB7)，僅C2結合C33B904配對之雙特異性抗體(C3CB189、C3CB88)媒介SH2及OCIAML3細胞系之細胞毒性，該等細胞系對於rs12459419 SNP突變分別為異型或同型。為此，取C33B904配對之雙特異性抗體(C3CB189、C3CB88)用於進一步分析及表徵。總之，這些數據表明CD33 C2結合雙特異性抗體(諸如C33B904配對之雙特異性抗體)比V結合競爭抗CD33抗體具有在更廣泛的AML患者組中顯示功效的潛力。
實例7：離體CD33xCD3在離體全血MOLM-13細胞毒性檢定中媒介MOLM-13及單核球的飆升(spiked)減少
為了評估CD33xCD3雙特異性抗體在消除MOLM-13細胞及正常人類單核球中飆升的細胞毒性潛力，利用使用具有外源添加的CD33+ AML細胞系MOLM-13之正常健康人類全血的離體細胞毒性檢定。類似於上述實驗，將各種雙特異性抗體(CD33抗體與CD3臂CD3B219 及CD3B376之任一者配對)添加至來自6個不同正常人類供體之稀釋全血中歷時48小時而不提供額外的T細胞，因為此檢定仰賴於供體血液中自體T細胞之存在。在稀釋之前，計算各供體血液中之T細胞濃度。接著將血液用經CFSE(Invitrogen)標記之MOLM-13細胞稀釋，使得效應物：目標比(E：T)係1：5，以模擬在AML患者樣本中之效應物：目標比。在48小時，將樣本用CD3 PerCPCy5.5、CD25 PE、CD33 FITC、及CD14 Pacific Blue染色(所有抗體皆購自Biolegend)。接著將樣本在1x裂解RBC裂解緩衝液(Lyse RBC Lysis Buffer,eBioscience)中洗滌至少3次。接著將樣本用LIVE/DEAD® Fixable Near-IR Dead Cell Stain緩衝液(Life Technologies)染色。藉由在雙特異性抗體的存在下，首先定量CD14+單核球部分中之活CD33+細胞來判定腫瘤細胞毒性的程度。藉由計算死CFSE+細胞之百分比來判定MOLM-13細胞之細胞毒性。使用下列方程式將單核球的細胞毒性計算為相對於PBS/未處理對照組之百分比：(PBS/未處理對照組中之CD33+ CD14+ %-經治療樣本中之CD33+ CD14+ %)/(PBS/未處理對照組中之CD33+ CD14+ %)。圖4中之數據指示兩個CD33xCD3雙特異性抗體(與CD3臂CD3B376及CD3B219之任一者配對的相同CD33先導C33B904)在48小時特異性誘導MOLM-13細胞及CD33+單核球之細胞毒性。空臂對照組係用作為陰性雙特異性抗體對照組。空臂對照組幾乎沒有顯示出或沒有顯示出MOLM-13及CD33+單核球之細胞毒性活性。這些數據顯示6個不同的正常供體之平均值。MOLM-13及CD14+單核球之細胞毒性的平均EC50值係顯示於表13中。
Figure 108117806-A0202-12-0154-20
實例8：證實CD33xCD3雙特異性抗體對食蟹獼猴的物種交叉反應性
離體CD33xCD3在用食蟹獼猴全血之離體細胞毒性檢定中媒介單核球的減少
為了證實功能性交叉反應性及評估CD33xCD3雙特異性抗體在消除正常食蟹獼猴單核球中的細胞毒性潛力，利用使用健康食蟹獼猴全血之離體細胞毒性檢定。類似於上述實驗，將各種雙特異性抗體(CD33抗體與CD3臂CD3B219及CD3B376之任一者配對)添加至來自6個不同正常食蟹獼猴供體之稀釋全血中歷時48小時而不提供額外的T細胞，因為此檢定仰賴於供體血液中自體T細胞之存在。在48小時，將樣本用CD3 PerCPCy5.5、CD25 PE、CD33 FITC、及CD14 Pacific Blue染色(所有抗體皆購自Biolegend，除了C33抗體係購自Miltenyi；Bergisch Gladbach,Germany)。接著在用LIVE/DEAD® Fixable Near-IR Dead Cell Stain緩衝液(Life Technologies)染色前，將樣本在1x裂解RBC裂解緩衝液(eBioscience)中洗滌至少3次。藉由在雙特異性抗體的存在下，首先定量CD14+單核球部分中之活CD33+細胞來判定單核球細胞毒性的程度。使用下列方程式將細胞毒性計算為相對於PBS/未處理對照組之百分比： (PBS/未處理對照組中之CD33+ CD14+ %-經治療樣本中之CD33+ CD14+ %)/(PBS/未處理對照組中之CD33+ CD14+ %)。將T細胞活化計算為CD3+部分中的CD25+事件之百分比。圖5中之數據指示兩個CD33xCD3雙特異性抗體(與CD3臂CD3B376及CD3B219之任一者配對的相同CD33先導C33B904)在48小時特異性誘導CD33+單核球之細胞毒性以及T細胞活化。空臂對照組係用作為陰性雙特異性抗體對照組，且幾乎沒有顯示出或沒有顯示出細胞毒性或T細胞活性。表14顯示6個不同的食蟹獼猴供體之平均值。
Figure 108117806-A0202-12-0155-21
實例9：C3CB189及C3CB88在T細胞人源化NSG小鼠中之MOLM-13人類AML異種移植物中的功效
在用2千萬個T細胞人源化之雌性NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtmlwjl/SzJ(NSG)小鼠中，在建立的螢光素酶轉染之散播性MOLM-13人類急性骨髓性白血病(AML)異種移植物中評估C3CB189及C3CB88之功效。在i.v.腫瘤植入後第5天，藉由活體生物發光成像(BLI)將動物隨機分成n=10/組。將C3CB189及C3CB88以0.005、0.05、及0.5mg/kg或將空xCD3抗體對照以0.5mg/kg每3至4天i.p.給藥達6週。
在腫瘤植入後第13天，當每組至少剩下八隻動物時，計算藉由生物發光判定之腫瘤生長抑制(TGI%)。相較於空xCD3對照，觀察到C3CB189(圖6)及C3CB88(圖8)在所有濃度下有統計學顯著的腫瘤生長抑制。相較於經空xCD3對照，C3CB189在0.005、0.05、及0.5mg/kg下分別誘發76%、100%、及82%的腫瘤生長抑制，而C3CB88在0.005、0.05、及0.5mg/kg下分別誘發100%、100%、及91%的腫瘤生長抑制。
用C3CB189及C3CB88治療導致減少的腫瘤負荷及增加之壽命(ILS)大於空xCD3對照組的16天中位數存活。用C3CB189治療的動物具有19至27.5天之中位數存活(圖7)，且用C3CB88治療的動物在劑量範圍內具有26至28.5(圖9)天的中位數存活。相較於對照組，C3CB189在0.005、0.05、及0.5mg/kg下分別導致19%、72%、及50%的壽命增加，而C3CB88分別導致63%、78%、及72%的壽命增加。
實例10：在體外蛋白質A藥物接合物細胞存活率檢定中證實CD33抗體的內化
執行使用預裝載(pre-loaded)之蛋白質A藥物接合物(A-MMAF)的體外細胞存活率檢定，以偵測結合配體之目標抗體的內化。在AML細胞系MOLM13中用一小組抗CD33抗體(C33B782、C33B806、C33B836、C33B904、C33B937)及同型對照抗體CNTO9412執行此基於細胞之功能性檢定。在此檢定中測試單獨目標抗體作為對照，以區分由於抗體內化而引起的細胞毒性與由於測試抗體本身之活性而引起的細胞毒性。 圖10顯示在37℃、5% CO2下培養72小時後，MOLM13中與蛋白質A-MMAF結合的抗體之細胞毒性。在MOLM13細胞中觀察到所有五種CD33抗體之濃度依賴性細胞毒性，表明此細胞系中所有五種抗體的內化。同型對照抗體(CNTO9412)並未顯示顯著的濃度依賴性細胞毒性，表明在MOLM13細胞中這些CD33抗體之目標特異性內化。表15顯示五(5)種CD33xCD3雙特異性抗體之EC50值。
結果亦指示抗體C33B836在MOLM13細胞中具有比其他者更好的內化。
Figure 108117806-A0202-12-0157-22
實例11：證實CD33抗體可媒介ADCC活性
為了表徵抗CD33 mAb之抗體依賴性細胞媒介之細胞毒性(ADCC)活性，利用健康供體NK效應細胞及MOLM-13和MV4-11 AML目標細胞來進行體外ADCC檢定。將健康供體NK細胞(Biological Specialty Corporation供體CC00061及M7015；Colmar,PA)接種於MyeloCult H5100生長培養基(Stem Cell Technologies；Vancouver,CA)中，其補充有1×10-6M氫化皮質酮(hydrocortisone)(Stem Cell)、7.5ng/ml重組人類IL-2(R&D Systems；Minneapolis,MN)、1%丙酮酸鈉(Life Technologies)、1%非必需胺基酸(Life Technologies)、1%青黴素鏈黴素(Life Technologies)，此係在起始ADCC檢定前16至24小時進行。檢定 當天，用10μM鈣黃綠素AM在37℃下標記1×106個細胞/ml之MOLM-13及MV4-11細胞30分鐘。在標記之後，將細胞洗滌三次以移除過量的鈣黃綠素AM。隨後，在不同濃度的抗CD33抗體存在下，將1×105個經鈣黃綠素AM標記之MOLM-13或MV4-11目標細胞與健康供體NK細胞(3×105)在37℃下培養1.5小時。藉由將Triton X100添加至指定對照樣本孔，最終濃度為0.5%，產生最大裂解對照樣本。藉由在485至535nm的螢光測量鈣黃綠素AM釋放，其係使用SpectraMax® M5多模盤讀數儀(Molecular Devices,LLC；Sunnyvale,CA,USA)。藉由使用下列方程式將數據標準化至最大(Triton X100媒介)及最小(僅效應細胞)裂解來判定細胞裂解百分比：裂解%=〔(實驗裂解-自發裂解)/(最大裂解-自發裂解)〕*100。
IgG1低岩藻醣抗CD33抗體係以濃度依賴性方式誘導ADCC(圖11)。相較於C33B912.CLF，C33B48.CLF展示出更有效的對MOLM-13及MV4-11細胞之ADCC活性，且具有12至23倍較高的半最大有效濃度值(EC50，表16)。回應於C33B48.CLF及C33B912.CLF之MOLM-13及MV4-11細胞的最大裂解係相似的。
Figure 108117806-A0202-12-0158-249
實例12：靶向CD33(一種由白血病母細胞大量表現之抗原)的C3CB189抗體之結合特徵。
C3CB189係一種完全人類免疫球蛋白G(IgG)4-PAA雙特異性抗體，其靶向T細胞上之CD3受體複合體及骨髓細胞上之CD33。C3CB189以0.89pM之親和力(Kd)結合至人類重組(r)CD33，並以363pM之親和力(Kd)結合至食蟹獼猴(cyno)rCD33。C3CB189亦分別以151.32及43.83nM之親和力(Kd)結合至人類及食蟹獼猴rCD3e。C3CB189特異性結合至CD33表現AML細胞系KG-1、MOLM-13、Kasumi-1、及OCI-AML3(圖12)。如所預期的，用陰性對照CD33×空抗體之可見到類似的結合模式，因為其含有單一抗CD33 Fab臂。陰性對照雙特異性抗體空xCD3以及空×空顯示對此等細胞無顯著結合。所測試的雙特異性抗體均未結合至CD33陰性細胞系(CARNAVAL及KG-1△CD33，即使用CRISPR具有CD33遺傳缺失之KG 1細胞)(圖12)。另外，與親本HEK-293T細胞相反，C3CB189結合至表現食蟹獼猴CD33之HEK 293T細胞，證實食蟹獼猴交叉反應性(圖12)。
實例13：C3CB189在體外殺滅CD33 + AML細胞系並活化T細胞
接下來使用T細胞媒介之細胞毒性檢定，以在體外評估C3CB189在各種細胞系中的活性，該等細胞系包括CD33+細胞系，諸如MOLM-13、KG-1、SKNO-1、Kasumi-1、及OCI-AML3；以及CD33無/低細胞系，諸如CARNAVAL及KG1△CD33。用自六個健康供體單離之泛人類CD3+ T細胞及可結晶片段區(Fc)阻斷劑來建立檢定。添加Fc阻斷劑以 防止Fc媒介之C3CB189的補充(recruitment)，因為IgG4 Fc區中的PAA突變不使其完全靜默(Vafa et al.,2014)，且因為Fcγ受體(FcγR)經常在AML細胞上表現(Ball et al.,1989)。
如圖13中所見，當在48小時後與經純化T細胞組合時，C3CB189展示出T細胞媒介之CD33+ AML細胞系的細胞毒性(圖13)。MOLM-13、KG-1、Kasumi-1、及OCI-AML3之中位數半最大有效濃度(EC50)[以及EC20值]分別為0.1307[0.0283]、0.1677[0.0525]、0.05[0.0366]、及0.1826[0.0844]nM(圖2B)。用下列者並未觀察到細胞毒性：CD33陰性細胞系CARNAVAL及KG-1△CD33或對照雙特異性抗體(空×CD3或CD33×空；參見圖13)。吾人藉由用CD123xCD3雙特異性抗體執行細胞毒性檢定確認KG1△CD33細胞確實可以由T細胞靶向(圖14A)。
亦在細胞毒性檢定中在體外評估在CD33+腫瘤細胞系存在下由C3CB189誘導之T細胞活化的程度，其中測量CD25表現作為活化的指示劑。如圖15B所示，當與CD33+腫瘤細胞系及健康供體泛T細胞一起培養時，C3CB189誘導T細胞活化，而用CD33- CARNAVAL及KG-1△CD33細胞則觀察到最小T細胞活化或沒有T細胞活化。MOLM-13、KG-1、Kasumi-1、及OCI-AML3之中位數EC50[EC20]值分別為0.0283[0.0077]、0.0664[0.0256]、0.0432[0.0267]、及0.0500[0.0178]nM(圖15C)。C3CB189在目標細胞不存在下不會造成T細胞的活化，其證實T細胞活化的特異性(圖14B)。CD33×空對照抗體在任何細胞系中不誘導T細胞活化。在CD33+及CD33-細胞系存在下，在533及53nM之最高濃度下，空×CD3對照抗體誘導T細胞活化，但未能在任何其他劑量下媒介 活化。重要的是，C3CB189在下列情況下顯示特異性誘導T細胞活化：僅在CD33+細胞系存在且CD33-細胞系不存在的情況下(圖15A)，或當T細胞係在不存在目標細胞下培養時(圖14B)。
最後，亦在上述體外T細胞重新定向檢定中用Kasumi-1細胞系評估細胞介素反應。C3CB189導致數種細胞介素的分泌，該等細胞介素包括干擾素γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、介白素(IL)-2、及IL-8(補充圖3)。這些數據係與圖13及圖15A至圖15C中所示之細胞毒性及T細胞活化數據一致。表17中記述針對細胞介素反應之中位數EC50及產生20%最大可能效應(EC20)值之濃度的彙總。
Figure 108117806-A0202-12-0161-250
實例14：C3CB189在體內顯示有效抗腫瘤活性
評估C3CB189在T細胞人源化NSG小鼠中之兩個已建立的異種移植腫瘤模型中的功能。在已建立的皮下KG-1-荷瘤小鼠中，與經空xCD3處理的對照動物相比，用0.1、0.5、及1mg/kg的C3CB189之處 理分別誘發41%、92%、及87%的腫瘤生長抑制(針對0.5及1mg/kg，p<0.0001，圖16A)。C3CB189在0.5及1mg/kg下亦在第55天分別導致6及7個完全反應。
在已建立的散播性表現螢光素酶的MOLM-13模型(MOLM-13-luc)中，在靜脈內注射後確認AML細胞歸巢(homing)至骨髓(BM)後起始C3CB189治療。相較於空xCD3對照處理之小鼠，每3至4天投予0.005、0.05、及0.5mg/kg之C3CB189顯著地抑制腫瘤生長，如藉由生物發光所評估(分別為76%、100%、及82%)(圖17)。C3CB189在0.005、0.05、及0.5mg/kg下分別導致19%、72%、及50%的統計學顯著增加之壽命(p<0.0001，圖16B)，其與BM、脊柱、及後肢中減少的腫瘤負荷相關，如藉由生物發光所觀察到的(圖16C)。在第55天研究結束時，藉由BLI評估，用0.05mg/kg之C3CB189治療的三隻動物顯示完全反應。
此外，如藉由流動式細胞測量術所測量，用C3CB189以0.05mg/kg及以較低程度之0.005mg/kg治療的MOLM-13-luc荷瘤小鼠顯示在骨髓中腫瘤細胞減少且CD3+ T細胞浸潤增加(圖16D)，且藉由IHC測量顯示在第11天CD8+ T細胞浸潤增加(圖16E)。這些數據是重要的，因為BM通常是AML中白血病幹細胞(LSC)的抗性位點及微量殘存疾病的殘留位點。總而言之，這些數據證實C3CB189藉由將T細胞募集到T細胞人源化小鼠的腫瘤部位來抑制兩個AML腫瘤模型之腫瘤生長。
實例15：C3CB189媒介健康全血中飆升的AML細胞以及來自原始患者樣本之AML母細胞的細胞毒性
據報導CD33之胞外域(ECD)從細胞脫落；因此，正常及患者樣本可能含有可溶性CD33(sCD33)。研究顯示，在AML患者的血漿中偵測到大約4至30ng/mL的sCD33(Biedermann,B.,Gil,D.,Bowen,D.T.,and Crocker,P.R.(2007).Leuk Res 31,211-220.)。此值高於在健康人類血清中判定之0.6至5.8ng/mL濃度(Biedermann,B.,Gil,D.,Bowen,D.T.,and Crocker,P.R.(2007).Leuk Res 31,211-220.)。
為了判定正常及AML供體中之生理sCD33水平，開發免疫捕捉耦合質譜(MS)檢定。正常及AML血清樣本的分析顯示類似的平均sCD33水平，分別為53.03ng/mL(1.91nM)及52.90ng/mL(1.90nM)(表18)。
Figure 108117806-A0202-12-0163-251
Figure 108117806-A0202-12-0164-252
為了評估C3CB189在更具生理相關性之環境中的活性，吾人使用人類周邊全血作為效應T細胞之來源來執行T細胞媒介之細胞毒性檢定，其中添加各種CD33+腫瘤細胞作為目標並培養48小時。C3CB189誘導T細胞媒介之CD33+ MOLM-13及Kasumi-1細胞的細胞毒性，其中中位數EC50[EC20]值分別為0.111[0.054]及0.124[0.06]nM(圖17)。類似地，C3CB189導致T細胞(如由CD25所指示)、MOLM-13、及Kasumi-1細胞的活化，其中中位數EC50[EC20]值分別為0.037[0.017]及0.085[0.039]nM(圖18A及圖18B)。測得之C3CB189媒介T細胞活化代表血液中的總T細胞活化，且其反映與外源性CD33+腫瘤細胞及可能的內源性CD33+周邊白血球(諸如在此檢定中未測量其細胞毒性之嗜中性球及單核球)之殺滅相關的活化。另外，這些數據表明儘管全血中存在sCD33及其他CD33+白血球之基線水平，C3CB189仍媒介腫瘤細胞殺滅。
接下來在使用來自AML供體之全血的離體細胞毒性檢定中評估C3CB189在更臨床相關的背景下誘導細胞毒性的能力。此系統仰賴於患者自身血液中自體T細胞之存在來殺滅AML細胞。測量T細胞媒介之CD33+細胞之細胞毒性及T細胞活化的程度。C3CB189誘導CD33+母細胞之濃度依賴性細胞毒性(圖19A)，其亦與所有6個患者樣本中增加的 T細胞活化(圖19B)相關。由C3CB189所誘導的最大細胞毒性係大約60%的CD33+母細胞。空臂對照抗體誘導有限的細胞毒性及T細胞活化。C3CB189誘導細胞毒性及T細胞活化，其導致EC50值範圍分別在0.052至9.52nM(中位數：0.365nM)及0.03至5.109nM(中位數：0.355nM)(圖19A及圖19B)。這些數據指示C3CB189在更生理性的離體環境中及在基線sCD33水平存在下有效殺滅CD33+ AML細胞。
實例16：C3CB189之食蟹獼猴交叉反應性評估
為了評估食蟹獼猴(cyno)是否係評估C3CB189活性的適當模型，吾人首先藉由FACS分析探討從6隻健康食蟹獼猴獲得的白血球上之CD33表現。發現食蟹獼猴周邊血液中的T及B細胞具有低至零水平的CD33表現(圖20)。大約75%至96%的食蟹獼猴嗜中性球以7,545個分子/細胞的平均抗原密度表現CD33(圖20)。另一方面，CD33+食蟹獼猴單核球的百分比在6個供體間是可變的，範圍在0%至84%，平均抗原密度為2,146個分子/細胞(圖20)。
接下來為了證實食蟹獼猴交叉反應性並評估C3CB189在消除正常食蟹獼猴單核球及嗜中性球上之細胞毒性潛力，吾人利用外源添加的CD33+MOLM-13細胞，使用健康食蟹獼猴全血執行離體細胞毒性檢定。在此系統中，亦監測CD33+正常食蟹獼猴單核球及正常食蟹獼猴嗜中性球的耗竭以及T細胞的活化。實際上，在48小時的離體培養之後，C3CB189在體外媒介CD33+ MOLM-13細胞(EC50：0.013至0.452nM)以及CD33+正常食蟹獼猴單核球(EC50：0.625至5.636nM)及正常食蟹 獼猴嗜中性球(EC50：0.013至0.714nM)的殺滅(圖21)。空×CD3對照顯示所有CD33+目標細胞的有限細胞毒性，且僅在533nM的最高劑量下顯示T細胞活化。總而言之，這些數據顯示C3CB189的功能性食蟹獼猴交叉反應性，並確立CD33+食蟹獼猴單核球及嗜中性球在非人類靈長類研究中作為潛在的藥效動力學(PD)標記。這些數據亦顯示C3CB189可藉由食蟹獼猴T細胞來媒介人類AML細胞系的耗竭。重要的是，這些結果證實食蟹獼猴係C3CB189的適當功效模型。
實例17：C3CB189媒介食蟹獼猴中的CD33+白血球之減少
為了評估C3CB189在體內的藥物動力學(PK)及藥效動力學(PD)，將C3CB189以單一IV劑量投予食蟹獼猴。PK概況係顯示於圖22A。C3CB189展現出典型單株抗體(mAb)之PK特徵，其在0.05至1mg/kg劑量範圍內具有近似線性PK。C3CB189之估計平均總清除率為13.03至21.39mL/天/kg，分佈體積為89.14至154.91mL/kg，且終末半衰期為4.20至5.06天。在第10天後於1mg/kg劑量組動物中，觀察到C3CB189的明顯加速消除。這很可能與抗藥物抗體(ADA)的發展有關，雖然此研究中並未測試ADA。
與預期的作用機制一致，在C3CB189之單一IV劑量後觀察到T細胞活化(CD25+ %)的劑量依賴性增加，其中在給藥後24小時的第一時間點觀察到T細胞毒性淋巴球(CD8+/CD4-)之峰值CD25+ %(圖22B)。在C3CB189給藥後，輔助T淋巴球(CD4+/CD8-)亦展現出類似的活化(CD25+ %)概況(數據未顯示)。C3CB189投予亦導致在給藥2小時後所 分析的細胞介素(IFNγ、IL-10、IL-2、IL-6、MCP-1、及TNFα)之血漿濃度中的劑量依賴性增加(圖23)。除IL-10及MCP-1外，細胞介素在給藥後24小時恢復到低於定量下限(lower limit of quantification,LLOQ)水平。
C3CB189相關之給藥導致CD33+顆粒球(嗜中性球)的持續減少。與單核球上較低的CD33表現水平一致，亦觀察到CD33+單核球的更短暫減少。顆粒球及單核球的濃度-時間概況係分別顯示於圖22C及圖22D。雖然來自周邊血液之顆粒球及單核球的初始快速消失可能與T細胞活化相關的短暫白血球著邊(margination)有關，但CD33+顆粒球/單核球群的減少更為持久。具體而言，直到第8天顆粒球群的減少持續在接近最高水平，並之後逐漸恢復。單核球的反彈發生得更早且更為突出。
在多次IV投予後，在0.01mg/kg至30mg/kg之範圍內的劑量水平下，亦在另外兩個食蟹獼猴研究中研究C3CB189。C3CB189相關的變化大致上與單一劑量後所觀察到的變化一致，且C3CB189在這些劑量水平下耐受良好(數據未顯示)。這些數據一起提供C3CB189媒介活性而同時維持食蟹獼猴中之耐受性的證據。
實例18：無論rs12459419 SNP基因型的C3CB189媒介之CD33 + 細胞系及患者樣本的細胞毒性
SNP rs12459419(C>T；在外顯子2中之Ala14Val)發生在CD33之調節剪接位點內，其中T對偶基因導致預測編碼缺乏V set域之CD33蛋白質異構體的轉錄物表現增加。最近數據進一步證實具有SNP rs12459419 CC基因型的對象(約50%的研究參與者)在GO療法之後具有顯著較低的復發風險及較佳的無事件存活(event-free survival,EBS)及無疾病存活(disease-free survival)，然而並未在具有CT或TT基因型的患者中見到這種效益(Lamba,J.K.,Chauhan,L.,Shin,M.,Loken,M.R.,Pollard,J.A.,Wang,Y.C.,Ries,R.E.,Aplenc,R.,Hirsch,B.A.,Raimondi,S.C.,et al.(2017).J Clin Oncol 35,2674-2682.)。鑑於上述研究中之GO的數據，吾人評估SNP-rs12459419基因型對於C3CB189之活性的影響。吾人首先經由氫氘交換(hydrogen deuterium exchange,HDX)映射確認，C33B904(C3CB189之CD33親本臂的IgG4版本)結合至CD33之C2域(圖24A中的IgC)中的不同區域，且在V區(圖24A中的IgV)中沒有結合。相反地，C33B836(C3CB97之CD33親本臂的IgG4版本)結合至CD33之V域，且在CD33之C2域中沒有結合。接下來吾人使用體外T細胞媒介之細胞毒性檢定，以比較由C3CB97(V結合劑)與C3CB189(C2結合劑)媒介之反應。基於基因分型數據(圖25A)，選擇KG-1、SH2、及OCI-AML3以分別代表CD33 SNP rs12459419突變之野生型CC、異型CT、及同型TT。不同於空xCD3對照組，V及C2結合CD33xCD3雙特異性抗體在48h時誘導CD33+ KG-1「CC」細胞系的T細胞重新定向之細胞毒性(圖24B)。相反地，不同於V結合劑C3CB97，僅C2結合C3CB189媒介了SH2「CT」細胞系及OCI-AML3「TT」細胞系，而對V結合劑C3CB97則沒有觀察到活性。
吾人接著使用AML患者全血執行離體細胞毒性檢定，以擴展並確認上述觀察。基於基因分型數據，患者樣本6095、6116、及6152 經識別為CC基因型，而患者樣本6129及USAML0078分別經識別為CD33 SNP rs12459419之異型CT(圖25B)。沒有樣本被識別為CD33 SNP rs12459419之同型TT。V結合及C2結合CD33xCD3雙特異性抗體的確誘導經識別為CC基因型的AML樣本之相當的T細胞重新定向之細胞毒性；相反地，相較於V結合C3CB97，C2結合C3CB189顯示對於SNP rs12459419突變為異型(CT)的AML樣本之增強的細胞毒性(圖24B)。接下來，鑑於SNP rs12459419為生殖系突變，吾人用來自25個不同的健康供體之純化的單核球及匹配的自體T細胞進行類似的離體實驗。所有25個供體的基因型資料係顯示於圖25C。與C3CB189結合至CD33之C2域的事實一致，無論其SNP基因型狀態為何，C3CB189均媒介初代人類單核球的細胞毒性(參見圖24C)。相反地，當樣本對於SNP rs12459419為CT或TT時，V結合C3CB97媒介有限細胞毒性或不媒介細胞毒性。總而言之，這三個證據線表明C3CB189可藉由靶向保守性C2表位在更廣泛的AML患者組中展示出功效。
所屬技術領域中具有通常知識者將領會的是，能夠對以上所述的實施例進行變更而不違背其廣義的發明概念。因此，應了解本發明並未受限於揭示之具體實施例，而是意欲涵蓋如本實施方式所定義之屬於本發明之精神及範疇內的修改。
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Figure 108117806-A0202-12-0172-257
Figure 108117806-A0202-12-0173-258
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Figure 108117806-A0202-12-0177-263
Figure 108117806-A0202-12-0178-264
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<223> 食蟹獼猴CD33 ECD-HSA
<400> 2
Figure 108117806-A0202-12-0178-265
Figure 108117806-A0202-12-0179-266
Figure 108117806-A0202-12-0180-267
Figure 108117806-A0202-12-0181-268
Figure 108117806-A0202-12-0182-269
<210> 3
<211> 0
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類CD33 ECD-HSA
<400> 3
000
<210> 4
<211> 718
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類CD33-V-HSA
<400> 4
Figure 108117806-A0202-12-0182-270
Figure 108117806-A0202-12-0183-271
Figure 108117806-A0202-12-0184-272
Figure 108117806-A0202-12-0185-273
<210> 5
<211> 715
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類CD33-C2-HSA
<400> 5
Figure 108117806-A0202-12-0185-274
Figure 108117806-A0202-12-0186-275
Figure 108117806-A0202-12-0187-276
Figure 108117806-A0202-12-0188-277
<210> 6
<211> 135
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類CD33-V-His
<400> 6
Figure 108117806-A0202-12-0188-278
Figure 108117806-A0202-12-0189-280
<210> 7
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類CD33 C2-His
<400> 7
Figure 108117806-A0202-12-0189-279
Figure 108117806-A0202-12-0190-281
<210> 8
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類CD33 ECD-His
<400> 8
Figure 108117806-A0202-12-0190-282
Figure 108117806-A0202-12-0191-284
<210> 9
<211> 0
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 食蟹獼猴CD33 ECD-His
<400> 9
000
<210> 10
<211> 364
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類CD33全長
<400> 10
Figure 108117806-A0202-12-0191-283
Figure 108117806-A0202-12-0192-285
Figure 108117806-A0202-12-0193-286
<210> 11
<211> 363
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 食蟹獼猴CD33全長
<400> 11
Figure 108117806-A0202-12-0193-287
Figure 108117806-A0202-12-0194-288
<210> 12
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B46重鏈
<400> 12
Figure 108117806-A0202-12-0195-289
Figure 108117806-A0202-12-0196-290
<210> 13
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B48重鏈
<400> 13
Figure 108117806-A0202-12-0196-291
Figure 108117806-A0202-12-0197-292
Figure 108117806-A0202-12-0198-293
<210> 14
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B52重鏈
<400> 14
Figure 108117806-A0202-12-0198-294
Figure 108117806-A0202-12-0199-295
Figure 108117806-A0202-12-0200-296
<210> 15
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B54重鏈
<400> 15
Figure 108117806-A0202-12-0200-297
Figure 108117806-A0202-12-0201-298
Figure 108117806-A0202-12-0202-299
<210> 16
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B55重鏈
<400> 16
Figure 108117806-A0202-12-0203-300
Figure 108117806-A0202-12-0204-301
<210> 17
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B57重鏈
<400> 17
Figure 108117806-A0202-12-0205-302
Figure 108117806-A0202-12-0206-303
<210> 18
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B61重鏈
<400> 18
Figure 108117806-A0202-12-0207-304
Figure 108117806-A0202-12-0208-305
<210> 19
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B62重鏈
<400> 19
Figure 108117806-A0202-12-0209-306
Figure 108117806-A0202-12-0210-307
<210> 20
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B63重鏈
<400> 20
Figure 108117806-A0202-12-0211-308
Figure 108117806-A0202-12-0212-309
<210> 21
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B64重鏈
<400> 21
Figure 108117806-A0202-12-0213-310
Figure 108117806-A0202-12-0214-311
<210> 22
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B66重鏈
<400> 22
Figure 108117806-A0202-12-0215-312
Figure 108117806-A0202-12-0216-313
<210> 23
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B72重鏈
<400> 23
Figure 108117806-A0202-12-0217-314
Figure 108117806-A0202-12-0218-315
Figure 108117806-A0202-12-0219-316
<210> 24
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B73重鏈
<400> 24
Figure 108117806-A0202-12-0219-317
Figure 108117806-A0202-12-0220-318
Figure 108117806-A0202-12-0221-319
<210> 25
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B75重鏈
<400> 25
Figure 108117806-A0202-12-0221-320
Figure 108117806-A0202-12-0222-321
Figure 108117806-A0202-12-0223-322
<210> 26
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B77重鏈
<400> 26
Figure 108117806-A0202-12-0223-323
Figure 108117806-A0202-12-0224-324
Figure 108117806-A0202-12-0225-325
<210> 27
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B79重鏈
<400> 27
Figure 108117806-A0202-12-0225-326
Figure 108117806-A0202-12-0226-327
Figure 108117806-A0202-12-0227-328
<210> 28
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B80重鏈
<400> 28
Figure 108117806-A0202-12-0227-329
Figure 108117806-A0202-12-0228-330
Figure 108117806-A0202-12-0229-331
<210> 29
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B82重鏈
<400> 29
Figure 108117806-A0202-12-0229-332
Figure 108117806-A0202-12-0230-333
Figure 108117806-A0202-12-0231-334
<210> 30
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B83重鏈
<400> 30
Figure 108117806-A0202-12-0231-335
Figure 108117806-A0202-12-0232-336
Figure 108117806-A0202-12-0233-337
<210> 31
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B87重鏈
<400> 31
Figure 108117806-A0202-12-0233-338
Figure 108117806-A0202-12-0234-339
Figure 108117806-A0202-12-0235-340
<210> 32
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B88重鏈
<400> 32
Figure 108117806-A0202-12-0235-341
Figure 108117806-A0202-12-0236-342
Figure 108117806-A0202-12-0237-343
<210> 33
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B89重鏈
<400> 33
Figure 108117806-A0202-12-0237-344
Figure 108117806-A0202-12-0238-345
Figure 108117806-A0202-12-0239-346
<210> 34
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B94重鏈
<400> 34
Figure 108117806-A0202-12-0239-347
Figure 108117806-A0202-12-0240-348
Figure 108117806-A0202-12-0241-349
<210> 35
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B95重鏈
<400> 35
Figure 108117806-A0202-12-0241-350
Figure 108117806-A0202-12-0242-351
Figure 108117806-A0202-12-0243-352
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<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B96重鏈
<400> 36
Figure 108117806-A0202-12-0243-353
Figure 108117806-A0202-12-0244-354
Figure 108117806-A0202-12-0245-355
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<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B101重鏈
<400> 37
Figure 108117806-A0202-12-0245-356
Figure 108117806-A0202-12-0246-357
Figure 108117806-A0202-12-0247-358
<210> 38
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B107重鏈
<400> 38
Figure 108117806-A0202-12-0247-359
Figure 108117806-A0202-12-0248-360
Figure 108117806-A0202-12-0249-361
<210> 39
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B120重鏈
<400> 39
Figure 108117806-A0202-12-0249-362
Figure 108117806-A0202-12-0250-363
Figure 108117806-A0202-12-0251-364
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B122重鏈
<400> 40
Figure 108117806-A0202-12-0251-365
Figure 108117806-A0202-12-0252-366
Figure 108117806-A0202-12-0253-367
<210> 41
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B123重鏈
<400> 41
Figure 108117806-A0202-12-0253-368
Figure 108117806-A0202-12-0254-369
Figure 108117806-A0202-12-0255-370
<210> 42
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B124重鏈
<400> 42
Figure 108117806-A0202-12-0255-371
Figure 108117806-A0202-12-0256-372
Figure 108117806-A0202-12-0257-373
<210> 43
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B125重鏈
<400> 43
Figure 108117806-A0202-12-0257-374
Figure 108117806-A0202-12-0258-375
Figure 108117806-A0202-12-0259-376
<210> 44
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B760重鏈
<400> 44
Figure 108117806-A0202-12-0259-377
Figure 108117806-A0202-12-0260-378
Figure 108117806-A0202-12-0261-379
<210> 45
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B777重鏈
<400> 45
Figure 108117806-A0202-12-0261-380
Figure 108117806-A0202-12-0262-381
Figure 108117806-A0202-12-0263-382
<210> 46
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B778重鏈
<400> 46
Figure 108117806-A0202-12-0263-383
Figure 108117806-A0202-12-0264-384
Figure 108117806-A0202-12-0265-385
<210> 47
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B782重鏈
<400> 47
Figure 108117806-A0202-12-0265-386
Figure 108117806-A0202-12-0266-387
Figure 108117806-A0202-12-0267-388
<210> 48
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B792重鏈
<400> 48
Figure 108117806-A0202-12-0267-389
Figure 108117806-A0202-12-0268-390
Figure 108117806-A0202-12-0269-391
<210> 49
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B799重鏈
<400> 49
Figure 108117806-A0202-12-0269-392
Figure 108117806-A0202-12-0270-393
Figure 108117806-A0202-12-0271-394
<210> 50
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B806重鏈
<400> 50
Figure 108117806-A0202-12-0271-395
Figure 108117806-A0202-12-0272-396
Figure 108117806-A0202-12-0273-397
<210> 51
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B830重鏈
<400> 51
Figure 108117806-A0202-12-0273-398
Figure 108117806-A0202-12-0274-399
Figure 108117806-A0202-12-0275-400
<210> 52
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B836重鏈
<400> 52
Figure 108117806-A0202-12-0275-401
Figure 108117806-A0202-12-0276-402
Figure 108117806-A0202-12-0277-403
<210> 53
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B937重鏈
<400> 53
Figure 108117806-A0202-12-0277-404
Figure 108117806-A0202-12-0278-405
Figure 108117806-A0202-12-0279-406
<210> 54
<211> 1801
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B46重鏈
<400> 54
Figure 108117806-A0202-12-0279-407
Figure 108117806-A0202-12-0280-408
<210> 55
<211> 1801
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<213> 人工序列
<220>
<223> C33B48重鏈
<400> 55
Figure 108117806-A0202-12-0280-409
Figure 108117806-A0202-12-0281-410
<210> 56
<211> 1825
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B52重鏈
<400> 56
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Figure 108117806-A0202-12-0282-412
<210> 57
<211> 1816
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B54重鏈
<400> 57
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Figure 108117806-A0202-12-0283-414
<210> 58
<211> 1837
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B55重鏈
<400> 58
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Figure 108117806-A0202-12-0285-416
<210> 59
<211> 1798
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<213> 人工序列
<220>
<223> C33B56重鏈
<400> 59
Figure 108117806-A0202-12-0285-417
Figure 108117806-A0202-12-0286-418
<210> 60
<211> 1825
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B61重鏈
<400> 60
Figure 108117806-A0202-12-0286-419
Figure 108117806-A0202-12-0287-420
<210> 61
<211> 1825
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B62重鏈
<400> 61
Figure 108117806-A0202-12-0287-421
Figure 108117806-A0202-12-0288-422
<210> 62
<211> 1825
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B63重鏈
<400> 62
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Figure 108117806-A0202-12-0289-424
<210> 63
<211> 1825
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B64重鏈
<400> 63
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Figure 108117806-A0202-12-0290-426
<210> 64
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<213> 人工序列
<220>
<223> C33B66重鏈
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Figure 108117806-A0202-12-0292-428
<210> 65
<211> 1837
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<213> 人工序列
<220>
<223> C33B72重鏈
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Figure 108117806-A0202-12-0293-431
<210> 66
<211> 1837
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B73重鏈
<400> 66
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Figure 108117806-A0202-12-0294-432
<210> 67
<211> 1825
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 67
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Figure 108117806-A0202-12-0295-435
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<213> 人工序列
<220>
<223> C33B77重鏈
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Figure 108117806-A0202-12-0296-436
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<213> 人工序列
<220>
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Figure 108117806-A0202-12-0297-438
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<211> 1837
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 71
Figure 108117806-A0202-12-0299-440
Figure 108117806-A0202-12-0300-442
<210> 72
<211> 1837
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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Figure 108117806-A0202-12-0300-441
Figure 108117806-A0202-12-0301-443
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<211> 1804
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<220>
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Figure 108117806-A0202-12-0301-444
Figure 108117806-A0202-12-0302-445
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<211> 1807
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<213> 人工序列
<220>
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Figure 108117806-A0202-12-0302-446
Figure 108117806-A0202-12-0303-447
<210> 75
<211> 1816
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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Figure 108117806-A0202-12-0303-448
Figure 108117806-A0202-12-0304-449
<210> 76
<211> 1804
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Figure 108117806-A0202-12-0304-450
Figure 108117806-A0202-12-0305-451
<210> 77
<211> 1804
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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Figure 108117806-A0202-12-0306-452
Figure 108117806-A0202-12-0307-453
<210> 78
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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Figure 108117806-A0202-12-0307-454
Figure 108117806-A0202-12-0308-455
<210> 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B101重鏈
<400> 79
Figure 108117806-A0202-12-0308-456
Figure 108117806-A0202-12-0309-457
<210> 80
<211> 1810
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B107重鏈
<400> 80
Figure 108117806-A0202-12-0309-458
Figure 108117806-A0202-12-0310-459
<210> 81
<211> 1804
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 81
Figure 108117806-A0202-12-0310-460
Figure 108117806-A0202-12-0311-462
<210> 82
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 82
Figure 108117806-A0202-12-0311-461
Figure 108117806-A0202-12-0312-463
<210> 83
<211> 1825
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B123重鏈
<400> 83
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Figure 108117806-A0202-12-0314-465
<210> 84
<211> 1807
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 84
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Figure 108117806-A0202-12-0315-468
<210> 85
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 85
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Figure 108117806-A0202-12-0316-539
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 86
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Figure 108117806-A0202-12-0317-541
<210> 87
<211> 1828
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 87
Figure 108117806-A0202-12-0317-542
Figure 108117806-A0202-12-0318-543
<210> 88
<211> 1828
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B778重鏈
<400> 88
Figure 108117806-A0202-12-0318-544
Figure 108117806-A0202-12-0319-545
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<213> 人工序列
<220>
<223> C33B782重鏈
<400> 89
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Figure 108117806-A0202-12-0321-547
<210> 90
<211> 1795
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B792重鏈
<400> 90
Figure 108117806-A0202-12-0321-548
Figure 108117806-A0202-12-0322-550
<210> 91
<211> 1795
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 91
Figure 108117806-A0202-12-0322-549
Figure 108117806-A0202-12-0323-551
<210> 92
<211> 1801
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B806重鏈
<400> 92
Figure 108117806-A0202-12-0323-552
Figure 108117806-A0202-12-0324-554
<210> 93
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B830重鏈
<400> 93
Figure 108117806-A0202-12-0324-553
Figure 108117806-A0202-12-0325-555
<210> 94
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B836重鏈
<400> 94
Figure 108117806-A0202-12-0325-556
Figure 108117806-A0202-12-0326-558
<210> 95
<211> 1828
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B937重鏈
<400> 95
Figure 108117806-A0202-12-0326-557
Figure 108117806-A0202-12-0327-559
<210> 96
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B46輕鏈
<400> 96
Figure 108117806-A0202-12-0328-560
<210> 97
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Figure 108117806-A0202-12-0329-561
Figure 108117806-A0202-12-0330-562
<210> 98
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 98
Figure 108117806-A0202-12-0330-563
Figure 108117806-A0202-12-0331-565
<210> 99
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Figure 108117806-A0202-12-0331-564
Figure 108117806-A0202-12-0332-566
<210> 100
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 100
Figure 108117806-A0202-12-0332-567
Figure 108117806-A0202-12-0333-569
<210> 101
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Figure 108117806-A0202-12-0333-568
Figure 108117806-A0202-12-0334-570
<210> 102
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 102
Figure 108117806-A0202-12-0334-571
Figure 108117806-A0202-12-0335-572
<210> 103
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B62輕鏈
<400> 103
Figure 108117806-A0202-12-0335-573
Figure 108117806-A0202-12-0336-574
<210> 104
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B63輕鏈
<400> 104
Figure 108117806-A0202-12-0336-575
Figure 108117806-A0202-12-0337-576
<210> 105
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B64輕鏈
<400> 105
Figure 108117806-A0202-12-0337-577
Figure 108117806-A0202-12-0338-579
<210> 106
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B66輕鏈
<400> 106
Figure 108117806-A0202-12-0338-578
Figure 108117806-A0202-12-0339-580
<210> 107
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B72輕鏈
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Figure 108117806-A0202-12-0339-581
Figure 108117806-A0202-12-0340-583
<210> 108
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B73輕鏈
<400> 108
Figure 108117806-A0202-12-0340-582
Figure 108117806-A0202-12-0341-585
<210> 109
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B75輕鏈
<400> 109
Figure 108117806-A0202-12-0341-584
Figure 108117806-A0202-12-0342-587
<210> 110
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B77輕鏈
<400> 110
Figure 108117806-A0202-12-0342-586
Figure 108117806-A0202-12-0343-588
<210> 111
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 111
Figure 108117806-A0202-12-0344-589
<210> 112
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Figure 108117806-A0202-12-0345-590
<210> 113
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B82輕鏈
<400> 113
Figure 108117806-A0202-12-0346-591
Figure 108117806-A0202-12-0347-593
<210> 114
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B83輕鏈
<400> 114
Figure 108117806-A0202-12-0347-592
Figure 108117806-A0202-12-0348-594
<210> 115
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B87輕鏈
<400> 115
Figure 108117806-A0202-12-0348-595
Figure 108117806-A0202-12-0349-597
<210> 116
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B88輕鏈
<400> 116
Figure 108117806-A0202-12-0349-596
Figure 108117806-A0202-12-0350-598
<210> 117
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B89輕鏈
<400> 117
Figure 108117806-A0202-12-0350-599
Figure 108117806-A0202-12-0351-601
<210> 118
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B94輕鏈
<400> 118
Figure 108117806-A0202-12-0351-600
Figure 108117806-A0202-12-0352-602
<210> 119
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B95輕鏈
<400> 119
Figure 108117806-A0202-12-0352-603
Figure 108117806-A0202-12-0353-605
<210> 120
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B96輕鏈
<400> 120
Figure 108117806-A0202-12-0353-604
Figure 108117806-A0202-12-0354-606
<210> 121
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B101輕鏈
<400> 121
Figure 108117806-A0202-12-0354-607
Figure 108117806-A0202-12-0355-609
<210> 122
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B107輕鏈
<400> 122
Figure 108117806-A0202-12-0355-608
Figure 108117806-A0202-12-0356-610
<210> 123
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B120輕鏈
<400> 123
Figure 108117806-A0202-12-0356-611
Figure 108117806-A0202-12-0357-613
<210> 124
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B122輕鏈
<400> 124
Figure 108117806-A0202-12-0357-612
Figure 108117806-A0202-12-0358-614
<210> 125
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 125
Figure 108117806-A0202-12-0358-615
Figure 108117806-A0202-12-0359-616
<210> 126
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 126
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<210> 127
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 127
Figure 108117806-A0202-12-0361-618
<210> 128
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 128
Figure 108117806-A0202-12-0362-619
Figure 108117806-A0202-12-0363-620
<210> 129
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B777輕鏈
<400> 129
Figure 108117806-A0202-12-0363-621
Figure 108117806-A0202-12-0364-623
<210> 130
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B778輕鏈
<400> 130
Figure 108117806-A0202-12-0364-622
Figure 108117806-A0202-12-0365-624
<210> 131
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B782輕鏈
<400> 131
Figure 108117806-A0202-12-0365-625
Figure 108117806-A0202-12-0366-627
<210> 132
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B792輕鏈
<400> 132
Figure 108117806-A0202-12-0366-626
Figure 108117806-A0202-12-0367-628
<210> 133
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B799輕鏈
<400> 133
Figure 108117806-A0202-12-0367-629
Figure 108117806-A0202-12-0368-631
<210> 134
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 134
Figure 108117806-A0202-12-0368-630
Figure 108117806-A0202-12-0369-632
<210> 135
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 135
Figure 108117806-A0202-12-0369-633
Figure 108117806-A0202-12-0370-635
<210> 136
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
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<400> 136
Figure 108117806-A0202-12-0370-634
Figure 108117806-A0202-12-0371-636
<210> 137
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
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<400> 137
Figure 108117806-A0202-12-0371-637
Figure 108117806-A0202-12-0372-639
<210> 138
<211> 1111
<212> DNA
<213> 人工序列
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<400> 138
Figure 108117806-A0202-12-0372-638
Figure 108117806-A0202-12-0373-640
<210> 139
<211> 1111
<212> DNA
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<220>
<223> C33B48輕鏈
<400> 139
Figure 108117806-A0202-12-0373-641
Figure 108117806-A0202-12-0374-643
<210> 140
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B52輕鏈
<400> 140
Figure 108117806-A0202-12-0374-642
<210> 141
<211> 1099
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 141
Figure 108117806-A0202-12-0375-644
<210> 142
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B55輕鏈
<400> 142
Figure 108117806-A0202-12-0375-645
Figure 108117806-A0202-12-0376-647
<210> 143
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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Figure 108117806-A0202-12-0376-646
Figure 108117806-A0202-12-0377-648
<210> 144
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 144
Figure 108117806-A0202-12-0377-649
Figure 108117806-A0202-12-0378-651
<210> 145
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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Figure 108117806-A0202-12-0378-652
<210> 146
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 146
Figure 108117806-A0202-12-0378-650
Figure 108117806-A0202-12-0379-653
<210> 147
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 147
Figure 108117806-A0202-12-0379-654
Figure 108117806-A0202-12-0380-656
<210> 148
<211> 1102
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B66輕鏈
<400> 148
Figure 108117806-A0202-12-0380-655
Figure 108117806-A0202-12-0381-657
<210> 149
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 149
Figure 108117806-A0202-12-0381-658
<210> 150
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B73輕鏈
<400> 150
Figure 108117806-A0202-12-0382-660
<210> 151
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 151
Figure 108117806-A0202-12-0382-659
Figure 108117806-A0202-12-0383-661
<210> 152
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 152
Figure 108117806-A0202-12-0383-662
Figure 108117806-A0202-12-0384-664
<210> 153
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B79輕鏈
<400> 153
Figure 108117806-A0202-12-0384-663
<210> 154
<211> 1111
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 154
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<210> 155
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 155
Figure 108117806-A0202-12-0385-666
Figure 108117806-A0202-12-0386-668
<210> 156
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0386-667
Figure 108117806-A0202-12-0387-669
<210> 157
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Figure 108117806-A0202-12-0388-672
<210> 158
<211> 1111
<212> DNA
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<400> 158
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<211> 1102
<212> DNA
<213> 人工序列
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<400> 159
Figure 108117806-A0202-12-0389-673
<210> 160
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0389-674
Figure 108117806-A0202-12-0390-676
<210> 161
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0390-675
Figure 108117806-A0202-12-0391-677
<210> 162
<211> 1102
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<210> 163
<211> 1102
<212> DNA
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<400> 163
Figure 108117806-A0202-12-0392-680
<210> 164
<211> 1120
<212> DNA
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0392-679
Figure 108117806-A0202-12-0393-681
<210> 165
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Figure 108117806-A0202-12-0393-682
Figure 108117806-A0202-12-0394-684
<210> 166
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0395-685
<210> 167
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<210> 168
<211> 1099
<212> DNA
<213> 人工序列
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<400> 168
Figure 108117806-A0202-12-0396-688
<210> 169
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> C33B125輕鏈
<400> 169
Figure 108117806-A0202-12-0396-687
Figure 108117806-A0202-12-0397-689
<210> 170
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<212> DNA
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0397-690
Figure 108117806-A0202-12-0398-692
<210> 171
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<212> DNA
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0399-694
<210> 173
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> C33B782輕鏈
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Figure 108117806-A0202-12-0399-693
Figure 108117806-A0202-12-0400-695
<210> 174
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<213> 人工序列
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<400> 174
Figure 108117806-A0202-12-0400-696
Figure 108117806-A0202-12-0401-698
<210> 175
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> C33B799輕鏈
<400> 175
Figure 108117806-A0202-12-0401-697
Figure 108117806-A0202-12-0402-699
<210> 176
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<400> 177
Figure 108117806-A0202-12-0402-701
Figure 108117806-A0202-12-0403-703
<210> 178
<211> 1111
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B836輕鏈
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Figure 108117806-A0202-12-0403-702
Figure 108117806-A0202-12-0404-704
<210> 179
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B937輕鏈
<400> 179
Figure 108117806-A0202-12-0404-705
Figure 108117806-A0202-12-0405-707
<210> 180
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B901重鏈
<400> 180
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Figure 108117806-A0202-12-0406-708
Figure 108117806-A0202-12-0407-709
<210> 181
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B902重鏈
<400> 181
Figure 108117806-A0202-12-0407-710
Figure 108117806-A0202-12-0408-711
Figure 108117806-A0202-12-0409-712
<210> 182
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B903重鏈
<400> 182
Figure 108117806-A0202-12-0409-713
Figure 108117806-A0202-12-0410-714
Figure 108117806-A0202-12-0411-715
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<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
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<400> 183
Figure 108117806-A0202-12-0411-716
Figure 108117806-A0202-12-0412-717
<210> 184
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 184
Figure 108117806-A0202-12-0413-718
Figure 108117806-A0202-12-0414-719
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<212> PRT
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0415-720
Figure 108117806-A0202-12-0416-721
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B907重鏈
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Figure 108117806-A0202-12-0418-723
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<213> 人工序列
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<400> 187
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Figure 108117806-A0202-12-0420-725
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<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0422-727
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Figure 108117806-A0202-12-0424-729
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<212> PRT
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0426-731
<210> 191
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<212> PRT
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0427-732
Figure 108117806-A0202-12-0428-733
<210> 192
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Figure 108117806-A0202-12-0430-735
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Figure 108117806-A0202-12-0432-737
Figure 108117806-A0202-12-0433-738
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<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0433-739
Figure 108117806-A0202-12-0434-740
Figure 108117806-A0202-12-0435-741
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<212> PRT
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Figure 108117806-A0202-12-0435-742
Figure 108117806-A0202-12-0436-743
Figure 108117806-A0202-12-0437-744
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<213> 人工序列
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<400> 196
Figure 108117806-A0202-12-0437-745
Figure 108117806-A0202-12-0438-747
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<211> 1798
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Figure 108117806-A0202-12-0438-746
Figure 108117806-A0202-12-0439-748
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Figure 108117806-A0202-12-0440-751
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Figure 108117806-A0202-12-0441-752
<210> 200
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Figure 108117806-A0202-12-0442-755
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Figure 108117806-A0202-12-0442-754
Figure 108117806-A0202-12-0443-756
<210> 202
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<213> 人工序列
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<223> C33B908重鏈
<400> 203
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Figure 108117806-A0202-12-0446-760
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<211> 1792
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<213> 人工序列
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<400> 204
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Figure 108117806-A0202-12-0447-761
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Figure 108117806-A0202-12-0448-763
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Figure 108117806-A0202-12-0449-765
<210> 207
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<400> 207
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Figure 108117806-A0202-12-0450-767
<210> 208
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Figure 108117806-A0202-12-0451-769
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Figure 108117806-A0202-12-0453-771
<210> 210
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Figure 108117806-A0202-12-0454-774
<210> 211
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<212> DNA
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0455-775
<210> 212
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0456-778
<210> 213
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
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<400> 213
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Figure 108117806-A0202-12-0457-779
<210> 214
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<212> PRT
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0458-781
<210> 215
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
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<400> 215
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Figure 108117806-A0202-12-0459-784
<210> 216
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0460-785
<210> 217
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<212> PRT
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<400> 217
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Figure 108117806-A0202-12-0461-787
<210> 218
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<212> PRT
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0462-789
<210> 219
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<212> PRT
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0463-790
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<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0464-791
<210> 221
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<212> PRT
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0466-793
<210> 222
<211> 214
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<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0467-796
<210> 223
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Figure 108117806-A0202-12-0468-797
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<212> PRT
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Figure 108117806-A0202-12-0468-798
Figure 108117806-A0202-12-0469-800
<210> 225
<211> 214
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<400> 225
Figure 108117806-A0202-12-0469-799
Figure 108117806-A0202-12-0470-801
<210> 226
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
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Figure 108117806-A0202-12-0470-802
Figure 108117806-A0202-12-0471-804
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<212> PRT
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Figure 108117806-A0202-12-0471-803
Figure 108117806-A0202-12-0472-805
<210> 228
<211> 1102
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<400> 228
Figure 108117806-A0202-12-0472-806
Figure 108117806-A0202-12-0473-807
<210> 229
<211> 1102
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> C33B902輕鏈
<400> 229
Figure 108117806-A0202-12-0473-808
<210> 230
<211> 1120
<212> DNA
<213> 人工序列
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<400> 230
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<210> 231
<211> 1120
<212> DNA
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<400> 231
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Figure 108117806-A0202-12-0475-1043
<210> 232
<211> 1129
<212> DNA
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Figure 108117806-A0202-12-0475-1044
Figure 108117806-A0202-12-0476-1045
<210> 233
<211> 1102
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 233
Figure 108117806-A0202-12-0476-1046
Figure 108117806-A0202-12-0477-1047
<210> 234
<211> 1096
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<400> 234
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<210> 235
<211> 1096
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<213> 人工序列
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<400> 235
Figure 108117806-A0202-12-0478-1050
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Figure 108117806-A0202-12-0478-1049
Figure 108117806-A0202-12-0479-1051
<210> 237
<211> 1102
<212> DNA
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<400> 237
Figure 108117806-A0202-12-0479-1052
Figure 108117806-A0202-12-0480-1054
<210> 238
<211> 1102
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 238
Figure 108117806-A0202-12-0480-1053
<210> 239
<211> 1120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 239
Figure 108117806-A0202-12-0481-1055
Figure 108117806-A0202-12-0482-1056
Figure 108117806-A0202-12-0483-1057
Figure 108117806-A0202-12-0484-1058
Figure 108117806-A0202-12-0485-1059
<210> 240
<211> 1120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B913輕鏈
<400> 240
Figure 108117806-A0202-12-0485-1060
Figure 108117806-A0202-12-0486-1062
<210> 241
<211> 1102
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B914輕鏈
<400> 241
Figure 108117806-A0202-12-0486-1061
Figure 108117806-A0202-12-0487-1063
<210> 242
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B915輕鏈
<400> 242
Figure 108117806-A0202-12-0487-1064
Figure 108117806-A0202-12-0488-1066
<210> 243
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C33B916輕鏈
<400> 243
Figure 108117806-A0202-12-0488-1067
<210> 244
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3B219重鏈
<400> 244
Figure 108117806-A0202-12-0488-1065
Figure 108117806-A0202-12-0489-1068
Figure 108117806-A0202-12-0490-1069
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<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3B376重鏈
<400> 245
Figure 108117806-A0202-12-0491-1070
Figure 108117806-A0202-12-0492-1071
<210> 246
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B23B49重鏈
<400> 246
Figure 108117806-A0202-12-0492-1072
Figure 108117806-A0202-12-0493-1073
Figure 108117806-A0202-12-0494-1074
<210> 247
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3B219重鏈
<400> 247
Figure 108117806-A0202-12-0494-1075
Figure 108117806-A0202-12-0495-1076
<210> 248
<211> 1341
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3B376重鏈
<400> 248
Figure 108117806-A0202-12-0495-1077
Figure 108117806-A0202-12-0496-1079
<210> 249
<211> 1801
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> B23B49重鏈
<400> 249
Figure 108117806-A0202-12-0496-1078
Figure 108117806-A0202-12-0497-1080
<210> 250
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3B219輕鏈
<400> 250
Figure 108117806-A0202-12-0497-1081
Figure 108117806-A0202-12-0498-1082
<210> 251
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3B376輕鏈
<400> 251
Figure 108117806-A0202-12-0498-1083
Figure 108117806-A0202-12-0499-1084
<210> 252
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B23B49輕鏈
<400> 252
Figure 108117806-A0202-12-0500-1085
<210> 253
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3B219輕鏈
<400> 253
Figure 108117806-A0202-12-0501-1087
<210> 254
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3B376輕鏈
<400> 254
Figure 108117806-A0202-12-0501-1086
<210> 255
<211> 1117
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> B23B49輕鏈
<400> 255
Figure 108117806-A0202-12-0502-1088
<210> 256
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B23H1重鏈可變區
<400> 256
Figure 108117806-A0202-12-0502-1089
Figure 108117806-A0202-12-0503-1090
<210> 257
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3H141重鏈可變區
<400> 257
Figure 108117806-A0202-12-0503-1091
Figure 108117806-A0202-12-0504-1093
<210> 258
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3H219重鏈可變區
<400> 258
Figure 108117806-A0202-12-0504-1094
<210> 259
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H42重鏈可變區
<400> 259
Figure 108117806-A0202-12-0504-1092
Figure 108117806-A0202-12-0505-1095
<210> 260
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H44重鏈可變區
<400> 260
Figure 108117806-A0202-12-0505-1096
Figure 108117806-A0202-12-0506-1098
<210> 261
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H45重鏈可變區
<400> 261
Figure 108117806-A0202-12-0506-1097
<210> 262
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H46重鏈可變區
<400> 262
Figure 108117806-A0202-12-0507-1099
<210> 263
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H48重鏈可變區
<400> 263
Figure 108117806-A0202-12-0507-1100
Figure 108117806-A0202-12-0508-1102
<210> 264
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H49重鏈可變區
<400> 264
Figure 108117806-A0202-12-0508-1101
<210> 265
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H51重鏈可變區
<400> 265
Figure 108117806-A0202-12-0509-1103
<210> 266
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H52重鏈可變區
<400> 266
Figure 108117806-A0202-12-0509-1104
Figure 108117806-A0202-12-0510-1106
<210> 267
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H55重鏈可變區
<400> 267
Figure 108117806-A0202-12-0510-1105
<210> 268
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H65重鏈可變區
<400> 268
Figure 108117806-A0202-12-0511-1107
<210> 269
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H66重鏈可變區
<400> 269
Figure 108117806-A0202-12-0511-1108
Figure 108117806-A0202-12-0512-1110
<210> 270
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H68重鏈可變區
<400> 270
Figure 108117806-A0202-12-0512-1109
Figure 108117806-A0202-12-0513-1111
<210> 271
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H69重鏈可變區
<400> 271
Figure 108117806-A0202-12-0513-1112
<210> 272
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H70重鏈可變區
<400> 272
Figure 108117806-A0202-12-0513-1113
Figure 108117806-A0202-12-0514-1115
<210> 273
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H72重鏈可變區
<400> 273
Figure 108117806-A0202-12-0514-1114
Figure 108117806-A0202-12-0515-1116
<210> 274
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H73重鏈可變區
<400> 274
Figure 108117806-A0202-12-0515-1117
<210> 275
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H74重鏈可變區
<400> 275
Figure 108117806-A0202-12-0515-1118
Figure 108117806-A0202-12-0516-1120
<210> 276
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H76重鏈可變區
<400> 276
Figure 108117806-A0202-12-0516-1119
Figure 108117806-A0202-12-0517-1121
<210> 277
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H77重鏈可變區
<400> 277
Figure 108117806-A0202-12-0517-1122
<210> 278
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H80重鏈可變區
<400> 278
Figure 108117806-A0202-12-0518-1124
<210> 279
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H81重鏈可變區
<400> 279
Figure 108117806-A0202-12-0518-1123
Figure 108117806-A0202-12-0519-1125
<210> 280
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H84重鏈可變區
<400> 280
Figure 108117806-A0202-12-0519-1126
Figure 108117806-A0202-12-0520-1129
<210> 281
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H87重鏈可變區
<400> 281
Figure 108117806-A0202-12-0520-1128
<210> 282
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H88重鏈可變區
<400> 282
Figure 108117806-A0202-12-0520-1127
Figure 108117806-A0202-12-0521-1130
<210> 283
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H90重鏈可變區
<400> 283
Figure 108117806-A0202-12-0521-1131
Figure 108117806-A0202-12-0522-1133
<210> 284
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H91重鏈可變區
<400> 284
Figure 108117806-A0202-12-0522-1132
<210> 285
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H92重鏈可變區
<400> 285
Figure 108117806-A0202-12-0523-1134
<210> 286
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H98重鏈可變區
<400> 286
Figure 108117806-A0202-12-0523-1135
Figure 108117806-A0202-12-0524-1137
<210> 287
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H99重鏈可變區
<400> 287
Figure 108117806-A0202-12-0524-1136
<210> 288
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H108重鏈可變區
<400> 288
Figure 108117806-A0202-12-0525-1138
<210> 289
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H249重鏈可變區
<400> 289
Figure 108117806-A0202-12-0525-1139
Figure 108117806-A0202-12-0526-1141
<210> 290
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H250重鏈可變區
<400> 290
Figure 108117806-A0202-12-0526-1140
<210> 291
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H251重鏈可變區
<400> 291
Figure 108117806-A0202-12-0527-1142
<210> 292
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H252重鏈可變區
<400> 292
Figure 108117806-A0202-12-0527-1143
Figure 108117806-A0202-12-0528-1145
<210> 293
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H253重鏈可變區
<400> 293
Figure 108117806-A0202-12-0528-1144
<210> 294
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H254重鏈可變區
<400> 294
Figure 108117806-A0202-12-0529-1146
<210> 295
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H255重鏈可變區
<400> 295
Figure 108117806-A0202-12-0529-1147
Figure 108117806-A0202-12-0530-1149
<210> 296
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H256重鏈可變區
<400> 296
Figure 108117806-A0202-12-0530-1148
Figure 108117806-A0202-12-0531-1150
<210> 297
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B23L3輕鏈可變區
<400> 297
Figure 108117806-A0202-12-0531-1151
<210> 298
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3L66輕鏈可變區
<400> 298
Figure 108117806-A0202-12-0531-1152
Figure 108117806-A0202-12-0532-1154
<210> 299
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3L150輕鏈可變區
<400> 299
Figure 108117806-A0202-12-0532-1153
<210> 300
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L8輕鏈可變區
<400> 300
Figure 108117806-A0202-12-0533-1155
<210> 301
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L10輕鏈可變區
<400> 301
Figure 108117806-A0202-12-0533-1156
Figure 108117806-A0202-12-0534-1158
<210> 302
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L11輕鏈可變區
<400> 302
Figure 108117806-A0202-12-0534-1159
<210> 303
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAPL24輕鏈可變區
<400> 303
Figure 108117806-A0202-12-0534-1157
Figure 108117806-A0202-12-0535-1160
<210> 304
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L58輕鏈可變區
<400> 304
Figure 108117806-A0202-12-0535-1161
<210> 305
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L59輕鏈可變區
<400> 305
Figure 108117806-A0202-12-0536-1163
<210> 306
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L34輕鏈可變區
<400> 306
Figure 108117806-A0202-12-0536-1162
Figure 108117806-A0202-12-0537-1164
<210> 307
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> N46L109輕鏈可變區
<400> 307
Figure 108117806-A0202-12-0537-1165
<210> 308
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L42輕鏈可變區
<400> 308
Figure 108117806-A0202-12-0537-1166
Figure 108117806-A0202-12-0538-1168
<210> 309
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L47輕鏈可變區
<400> 309
Figure 108117806-A0202-12-0538-1167
<210> 310
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L60輕鏈可變區
<400> 310
Figure 108117806-A0202-12-0539-1169
<210> 311
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L17輕鏈可變區
<400> 311
Figure 108117806-A0202-12-0539-1170
Figure 108117806-A0202-12-0540-1172
<210> 312
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4LL152輕鏈可變區
<400> 312
Figure 108117806-A0202-12-0540-1171
<210> 313
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L40輕鏈可變區
<400> 313
Figure 108117806-A0202-12-0541-1173
<210> 314
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L32輕鏈可變區
<400> 314
Figure 108117806-A0202-12-0541-1174
Figure 108117806-A0202-12-0542-1176
<210> 315
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L38輕鏈可變區
<400> 315
Figure 108117806-A0202-12-0542-1177
<210> 316
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L39輕鏈可變區
<400> 316
Figure 108117806-A0202-12-0542-1175
Figure 108117806-A0202-12-0543-1178
<210> 317
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L57輕鏈可變區
<400> 317
Figure 108117806-A0202-12-0543-1179
<210> 318
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L73輕鏈可變區
<400> 318
Figure 108117806-A0202-12-0544-1181
<210> 319
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L53輕鏈可變區
<400> 319
Figure 108117806-A0202-12-0544-1180
Figure 108117806-A0202-12-0545-1182
<210> 320
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L66輕鏈可變區
<400> 320
Figure 108117806-A0202-12-0545-1183
<210> 321
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L35輕鏈可變區
<400> 321
Figure 108117806-A0202-12-0545-1184
Figure 108117806-A0202-12-0546-1186
<210> 322
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L61輕鏈可變區
<400> 322
Figure 108117806-A0202-12-0546-1185
Figure 108117806-A0202-12-0547-1187
<210> 323
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L51輕鏈可變區
<400> 323
Figure 108117806-A0202-12-0547-1188
<210> 324
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L44輕鏈可變區
<400> 324
Figure 108117806-A0202-12-0547-1189
Figure 108117806-A0202-12-0548-1191
<210> 325
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L30輕鏈可變區
<400> 325
Figure 108117806-A0202-12-0548-1190
<210> 326
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L69輕鏈可變區
<400> 326
Figure 108117806-A0202-12-0549-1192
<210> 327
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L37輕鏈可變區
<400> 327
Figure 108117806-A0202-12-0549-1193
Figure 108117806-A0202-12-0550-1195
<210> 328
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L74輕鏈可變區
<400> 328
Figure 108117806-A0202-12-0550-1196
<210> 329
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L115輕鏈可變區
<400> 329
Figure 108117806-A0202-12-0550-1194
Figure 108117806-A0202-12-0551-1197
<210> 330
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L116輕鏈可變區
<400> 330
Figure 108117806-A0202-12-0551-1198
<210> 331
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L117輕鏈可變區
<400> 331
Figure 108117806-A0202-12-0552-1200
<210> 332
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L118輕鏈可變區
<400> 332
Figure 108117806-A0202-12-0552-1199
Figure 108117806-A0202-12-0553-1201
<210> 333
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L119輕鏈可變區
<400> 333
Figure 108117806-A0202-12-0553-1202
<210> 334
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L120輕鏈可變區
<400> 334
Figure 108117806-A0202-12-0554-1204
<210> 335
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L121輕鏈可變區
<400> 335
Figure 108117806-A0202-12-0554-1203
Figure 108117806-A0202-12-0555-1205
<210> 336
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L122輕鏈可變區
<400> 336
Figure 108117806-A0202-12-0555-1206
<210> 337
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L132輕鏈可變區
<400> 337
Figure 108117806-A0202-12-0555-1207
Figure 108117806-A0202-12-0556-1209
<210> 338
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L41輕鏈可變區
<400> 338
Figure 108117806-A0202-12-0556-1208
<210> 339
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B23H1 HC CDR1
<400> 339
Figure 108117806-A0202-12-0557-1213
<210> 340
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B23H1 HC CDR2
<400> 340
Figure 108117806-A0202-12-0557-1212
<210> 341
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B23H1 HC CDR3
<400> 341
Figure 108117806-A0202-12-0557-1211
<210> 342
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3H141 HC CDR1
<400> 342
Figure 108117806-A0202-12-0557-1210
<210> 343
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3H141 HC CDR2
<400> 343
Figure 108117806-A0202-12-0558-1214
<210> 344
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3H141 HC CDR3
<400> 344
Figure 108117806-A0202-12-0558-1215
<210> 345
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3H219 HC CDR1
<400> 345
Figure 108117806-A0202-12-0558-1216
<210> 346
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3H219 HC CDR2
<400> 346
Figure 108117806-A0202-12-0558-1217
<210> 347
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3H219 HC CDR3
<400> 347
Figure 108117806-A0202-12-0558-1218
<210> 348
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H42 HC CDR1
<400> 348
Figure 108117806-A0202-12-0559-1222
<210> 349
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H42 HC CDR2
<400> 349
Figure 108117806-A0202-12-0559-1221
<210> 350
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H42 HC CDR3
<400> 350
Figure 108117806-A0202-12-0559-1220
<210> 351
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H44 HC CDR1
<400> 351
Figure 108117806-A0202-12-0559-1219
<210> 352
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H44 HC CDR2
<400> 352
Figure 108117806-A0202-12-0560-1223
<210> 353
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H44 HC CDR3
<400> 353
Figure 108117806-A0202-12-0560-1224
<210> 354
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H45 HC CDR1
<400> 354
Figure 108117806-A0202-12-0560-1225
<210> 355
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H45 HC CDR2
<400> 355
Figure 108117806-A0202-12-0560-1226
<210> 356
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H45 HC CDR3
<400> 356
Figure 108117806-A0202-12-0560-1227
Figure 108117806-A0202-12-0561-1232
<210> 357
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H46 HC CDR1
<400> 357
Figure 108117806-A0202-12-0561-1231
<210> 358
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H46 HC CDR2
<400> 358
Figure 108117806-A0202-12-0561-1230
<210> 359
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H46 HC CDR3
<400> 359
Figure 108117806-A0202-12-0561-1229
<210> 360
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H48 HC CDR1
<400> 360
Figure 108117806-A0202-12-0561-1228
<210> 361
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H48 HC CDR2
<400> 361
Figure 108117806-A0202-12-0562-1233
<210> 362
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H48 HC CDR3
<400> 362
Figure 108117806-A0202-12-0562-1234
<210> 363
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H49 HC CDR1
<400> 363
Figure 108117806-A0202-12-0562-1235
<210> 364
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H49 HC CDR2
<400> 364
Figure 108117806-A0202-12-0562-1236
<210> 365
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H49 HC CDR3
<400> 365
Figure 108117806-A0202-12-0563-1241
<210> 366
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H51 HC CDR1
<400> 366
Figure 108117806-A0202-12-0563-1240
<210> 367
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H51 HC CDR2
<400> 367
Figure 108117806-A0202-12-0563-1239
<210> 368
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H51 HC CDR3
<400> 368
Figure 108117806-A0202-12-0563-1238
<210> 369
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H52 HC CDR1
<400> 369
Figure 108117806-A0202-12-0563-1237
Figure 108117806-A0202-12-0564-1242
<210> 370
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H52 HC CDR2
<400> 370
Figure 108117806-A0202-12-0564-1243
<210> 371
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H52 HC CDR3
<400> 371
Figure 108117806-A0202-12-0564-1244
<210> 372
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H55 HC CDR1
<400> 372
Figure 108117806-A0202-12-0564-1245
<210> 373
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H55 HC CDR2
<400> 373
Figure 108117806-A0202-12-0564-1246
<210> 374
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H55 HC CDR3
<400> 374
Figure 108117806-A0202-12-0565-1250
<210> 375
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H65 HC CDR1
<400> 375
Figure 108117806-A0202-12-0565-1249
<210> 376
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H65 HC CDR2
<400> 376
Figure 108117806-A0202-12-0565-1248
<210> 377
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H65 HC CDR3
<400> 377
Figure 108117806-A0202-12-0565-1247
<210> 378
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H66 HC CDR1
<400> 378
Figure 108117806-A0202-12-0566-1251
<210> 379
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H66 HC CDR2
<400> 379
Figure 108117806-A0202-12-0566-1252
<210> 380
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H66 HC CDR3
<400> 380
Figure 108117806-A0202-12-0566-1253
<210> 381
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H68 HC CDR1
<400> 381
Figure 108117806-A0202-12-0566-1254
<210> 382
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H68 HC CDR2
<400> 382
Figure 108117806-A0202-12-0567-1259
<210> 383
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H68 HC CDR3
<400> 383
Figure 108117806-A0202-12-0567-1258
<210> 384
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H69 HC CDR1
<400> 384
Figure 108117806-A0202-12-0567-1257
<210> 385
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H69 HC CDR2
<400> 385
Figure 108117806-A0202-12-0567-1256
<210> 386
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H69 HC CDR3
<400> 386
Figure 108117806-A0202-12-0567-1255
<210> 387
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H70 HC CDR1
<400> 387
Figure 108117806-A0202-12-0568-1260
<210> 388
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H70 HC CDR2
<400> 388
Figure 108117806-A0202-12-0568-1261
<210> 389
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H70 HC CDR3
<400> 389
Figure 108117806-A0202-12-0568-1262
<210> 390
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H72 HC CDR1
<400> 390
Figure 108117806-A0202-12-0568-1263
<210> 391
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H72 HC CDR2
<400> 391
Figure 108117806-A0202-12-0569-1268
<210> 392
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H72 HC CDR3
<400> 392
Figure 108117806-A0202-12-0569-1267
<210> 393
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H73 HC CDR1
<400> 393
Figure 108117806-A0202-12-0569-1266
<210> 394
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H73 HC CDR2
<400> 394
Figure 108117806-A0202-12-0569-1265
<210> 395
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H73 HC CDR3
<400> 395
Figure 108117806-A0202-12-0569-1264
Figure 108117806-A0202-12-0570-1269
<210> 396
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H74 HC CDR1
<400> 396
Figure 108117806-A0202-12-0570-1270
<210> 397
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H74 HC CDR2
<400> 397
Figure 108117806-A0202-12-0570-1271
<210> 398
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H74 HC CDR3
<400> 398
Figure 108117806-A0202-12-0570-1272
<210> 399
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H76 HC CDR1
<400> 399
Figure 108117806-A0202-12-0570-1273
<210> 400
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H76 HC CDR2
<400> 400
Figure 108117806-A0202-12-0571-1277
<210> 401
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H76 HC CDR3
<400> 401
Figure 108117806-A0202-12-0571-1276
<210> 402
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H78 HC CDR1
<400> 402
Figure 108117806-A0202-12-0571-1275
<210> 403
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H78 HC CDR2
<400> 403
Figure 108117806-A0202-12-0571-1274
<210> 404
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H78 HC CDR3
<400> 404
Figure 108117806-A0202-12-0572-1278
<210> 405
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H80 HC CDR1
<400> 405
Figure 108117806-A0202-12-0572-1279
<210> 406
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H80 HC CDR2
<400> 406
Figure 108117806-A0202-12-0572-1280
<210> 407
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H80 HC CDR3
<400> 407
Figure 108117806-A0202-12-0572-1281
<210> 408
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H81 HC CDR1
<400> 408
Figure 108117806-A0202-12-0573-1285
<210> 409
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H81 HC CDR2
<400> 409
Figure 108117806-A0202-12-0573-1284
<210> 410
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H81 HC CDR3
<400> 410
Figure 108117806-A0202-12-0573-1283
<210> 411
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H84 HC CDR1
<400> 411
Figure 108117806-A0202-12-0573-1282
<210> 412
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H84 HC CDR2
<400> 412
Figure 108117806-A0202-12-0574-1286
<210> 413
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H84 HC CDR3
<400> 413
Figure 108117806-A0202-12-0574-1287
<210> 414
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H87 HC CDR1
<400> 414
Figure 108117806-A0202-12-0574-1288
<210> 415
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H87 HC CDR2
<400> 415
Figure 108117806-A0202-12-0574-1289
<210> 416
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H87 HC CDR3
<400> 416
Figure 108117806-A0202-12-0574-1290
Figure 108117806-A0202-12-0575-1294
<210> 417
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H88 HC CDR1
<400> 417
Figure 108117806-A0202-12-0575-1295
<210> 418
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H88 HC CDR2
<400> 418
Figure 108117806-A0202-12-0575-1293
<210> 419
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H88 HC CDR3
<400> 419
Figure 108117806-A0202-12-0575-1292
<210> 420
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H90 HC CDR1
<400> 420
Figure 108117806-A0202-12-0575-1291
<210> 421
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H90 HC CDR2
<400> 421
Figure 108117806-A0202-12-0576-1296
<210> 422
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H90 HC CDR3
<400> 422
Figure 108117806-A0202-12-0576-1297
<210> 423
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H91 HC CDR1
<400> 423
Figure 108117806-A0202-12-0576-1298
<210> 424
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H91 HC CDR2
<400> 424
Figure 108117806-A0202-12-0576-1299
<210> 425
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H91 HC CDR3
<400> 425
Figure 108117806-A0202-12-0577-1300
<210> 426
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H92 HC CDR1
<400> 426
Figure 108117806-A0202-12-0577-1301
<210> 427
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H92 HC CDR2
<400> 427
Figure 108117806-A0202-12-0577-1302
<210> 428
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H92 HC CDR3
<400> 428
Figure 108117806-A0202-12-0577-1303
<210> 429
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H98 HC CDR1
<400> 429
Figure 108117806-A0202-12-0577-1304
<210> 430
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H98 HC CDR2
<400> 430
Figure 108117806-A0202-12-0578-1305
<210> 431
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H98 HC CDR3
<400> 431
Figure 108117806-A0202-12-0578-1306
<210> 432
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H99 HC CDR1
<400> 432
Figure 108117806-A0202-12-0578-1307
<210> 433
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H99 HC CDR2
<400> 433
Figure 108117806-A0202-12-0578-1308
<210> 434
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H99 HC CDR3
<400> 434
Figure 108117806-A0202-12-0579-1313
<210> 435
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H108 HC CDR1
<400> 435
Figure 108117806-A0202-12-0579-1311
<210> 436
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H108 HC CDR2
<400> 436
Figure 108117806-A0202-12-0579-1312
<210> 437
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H108 HC CDR3
<400> 437
Figure 108117806-A0202-12-0579-1310
<210> 438
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H249 HC CDR1
<400> 438
Figure 108117806-A0202-12-0579-1309
<210> 439
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H249 HC CDR2
<400> 439
Figure 108117806-A0202-12-0580-1314
<210> 440
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H249 HC CDR3
<400> 440
Figure 108117806-A0202-12-0580-1315
<210> 441
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H250 HC CDR1
<400> 441
Figure 108117806-A0202-12-0580-1316
<210> 442
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H250 HC CDR2
<400> 442
Figure 108117806-A0202-12-0580-1317
<210> 443
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H250 HC CDR3
<400> 443
Figure 108117806-A0202-12-0581-1318
<210> 444
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H251 HC CDR1
<400> 444
Figure 108117806-A0202-12-0581-1319
<210> 445
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H251 HC CDR2
<400> 445
Figure 108117806-A0202-12-0581-1320
<210> 446
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H251 HC CDR3
<400> 446
Figure 108117806-A0202-12-0581-1321
<210> 447
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H252 HC CDR1
<400> 447
Figure 108117806-A0202-12-0581-1322
Figure 108117806-A0202-12-0582-1323
<210> 448
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H252 HC CDR2
<400> 448
Figure 108117806-A0202-12-0582-1324
<210> 449
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H252 HC CDR3
<400> 449
Figure 108117806-A0202-12-0582-1325
<210> 450
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H253 HC CDR1
<400> 450
Figure 108117806-A0202-12-0582-1326
<210> 451
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H253 HC CDR2
<400> 451
Figure 108117806-A0202-12-0582-1327
<210> 452
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H253 HC CDR3
<400> 452
Figure 108117806-A0202-12-0583-1328
<210> 453
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H254 HC CDR1
<400> 453
Figure 108117806-A0202-12-0583-1329
<210> 454
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H254 HC CDR2
<400> 454
Figure 108117806-A0202-12-0583-1330
<210> 455
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H254 HC CDR3
<400> 455
Figure 108117806-A0202-12-0583-1331
<210> 456
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H255 HC CDR1
<400> 456
Figure 108117806-A0202-12-0584-1332
<210> 457
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H255 HC CDR2
<400> 457
Figure 108117806-A0202-12-0584-1333
<210> 458
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H255 HC CDR3
<400> 458
Figure 108117806-A0202-12-0584-1335
<210> 459
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H256 HC CDR1
<400> 459
Figure 108117806-A0202-12-0584-1334
<210> 460
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H256 HC CDR2
<400> 460
Figure 108117806-A0202-12-0584-1336
Figure 108117806-A0202-12-0585-1337
<210> 461
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33H256 HC CDR3
<400> 461
Figure 108117806-A0202-12-0585-1338
<210> 462
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B23L3 LC CDR1
<400> 462
Figure 108117806-A0202-12-0585-1339
<210> 463
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B23L3 LC CDR2
<400> 463
Figure 108117806-A0202-12-0585-1340
<210> 464
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B23L3 LC CDR3
<400> 464
Figure 108117806-A0202-12-0585-1341
<210> 465
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3L66 LC CDR1
<400> 465
Figure 108117806-A0202-12-0586-1342
<210> 466
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3L66 LC CDR2
<400> 466
Figure 108117806-A0202-12-0586-1343
<210> 467
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3L66 LC CDR3
<400> 467
Figure 108117806-A0202-12-0586-1344
<210> 468
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3L150 LC CDR1
<400> 468
Figure 108117806-A0202-12-0586-1345
<210> 469
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3L150 LC CDR2
<400> 469
Figure 108117806-A0202-12-0587-1346
<210> 470
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3L150 LC CDR3
<400> 470
Figure 108117806-A0202-12-0587-1347
<210> 471
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L8 LC CDR1
<400> 471
Figure 108117806-A0202-12-0587-1348
<210> 472
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L8 LC CDR2
<400> 472
Figure 108117806-A0202-12-0587-1349
<210> 473
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L8 LC CDR3
<400> 473
Figure 108117806-A0202-12-0587-1350
<210> 474
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L10 LC CDR1
<400> 474
Figure 108117806-A0202-12-0588-1351
<210> 475
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L10 LC CDR2
<400> 475
Figure 108117806-A0202-12-0588-1352
<210> 476
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L10 LC CDR3
<400> 476
Figure 108117806-A0202-12-0588-1353
<210> 477
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L11 LC CDR1
<400> 477
Figure 108117806-A0202-12-0588-1354
<210> 478
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L11 LC CDR2
<400> 478
Figure 108117806-A0202-12-0589-1355
<210> 479
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L11 LC CDR3
<400> 479
Figure 108117806-A0202-12-0589-1356
<210> 480
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAPL24 LC CDR1
<400> 480
Figure 108117806-A0202-12-0589-1357
<210> 481
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAPL24 LC CDR2
<400> 481
Figure 108117806-A0202-12-0589-1358
<210> 482
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAPL24 LC CDR3
<400> 482
Figure 108117806-A0202-12-0589-1359
<210> 483
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L58 LC CDR1
<400> 483
Figure 108117806-A0202-12-0590-1360
<210> 484
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L58 LC CDR2
<400> 484
Figure 108117806-A0202-12-0590-1361
<210> 485
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L58 LC CDR3
<400> 485
Figure 108117806-A0202-12-0590-1362
<210> 486
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L59 LC CDR1
<400> 486
Figure 108117806-A0202-12-0590-1363
<210> 487
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L59 LC CDR2
<400> 487
Figure 108117806-A0202-12-0591-1364
<210> 488
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L59 LC CDR3
<400> 488
Figure 108117806-A0202-12-0591-1365
<210> 489
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L34 LC CDR1
<400> 489
Figure 108117806-A0202-12-0591-1366
<210> 490
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L34 LC CDR2
<400> 490
Figure 108117806-A0202-12-0591-1367
<210> 491
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L34 LC CDR3
<400> 491
Figure 108117806-A0202-12-0591-1368
Figure 108117806-A0202-12-0592-1369
<210> 492
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> N46L109 LC CDR1
<400> 492
Figure 108117806-A0202-12-0592-1370
<210> 493
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> N46L109 LC CDR2
<400> 493
Figure 108117806-A0202-12-0592-1371
<210> 494
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> N46L109 LC CDR3
<400> 494
Figure 108117806-A0202-12-0592-1372
<210> 495
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L42 LC CDR1
<400> 495
Figure 108117806-A0202-12-0592-1373
<210> 496
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L42 LC CDR2
<400> 496
Figure 108117806-A0202-12-0593-1374
<210> 497
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L42 LC CDR3
<400> 497
Figure 108117806-A0202-12-0593-1375
<210> 498
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L47 LC CDR1
<400> 498
Figure 108117806-A0202-12-0593-1376
<210> 499
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L47 LC CDR2
<400> 499
Figure 108117806-A0202-12-0593-1377
<210> 500
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L47 LC CDR3
<400> 500
Figure 108117806-A0202-12-0594-1378
<210> 501
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L60 LC CDR1
<400> 501
Figure 108117806-A0202-12-0594-1379
<210> 502
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L60 LC CDR2
<400> 502
Figure 108117806-A0202-12-0594-1380
<210> 503
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L60 LC CDR3
<400> 503
Figure 108117806-A0202-12-0594-1381
<210> 504
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L17 LC CDR1
<400> 504
Figure 108117806-A0202-12-0594-1382
<210> 505
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L17 LC CDR2
<400> 505
Figure 108117806-A0202-12-0595-1383
<210> 506
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L17 LC CDR3
<400> 506
Figure 108117806-A0202-12-0595-1384
<210> 507
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4LL152 LC CDR1
<400> 507
Figure 108117806-A0202-12-0595-1385
<210> 508
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4LL152 LC CDR2
<400> 508
Figure 108117806-A0202-12-0595-1386
<210> 509
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4LL152 LC CDR3
<400> 509
Figure 108117806-A0202-12-0596-1387
<210> 510
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L40 LC CDR1
<400> 510
Figure 108117806-A0202-12-0596-1388
<210> 511
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L40 LC CDR2
<400> 511
Figure 108117806-A0202-12-0596-1389
<210> 512
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L40 LC CDR3
<400> 512
Figure 108117806-A0202-12-0596-1390
<210> 513
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L32 LC CDR1
<400> 513
Figure 108117806-A0202-12-0596-1391
<210> 514
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L32 LC CDR2
<400> 514
Figure 108117806-A0202-12-0597-1392
<210> 515
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L32 LC CDR3
<400> 515
Figure 108117806-A0202-12-0597-1393
<210> 516
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L38 LC CDR1
<400> 516
Figure 108117806-A0202-12-0597-1394
<210> 517
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L38 LC CDR2
<400> 517
Figure 108117806-A0202-12-0597-1395
<210> 518
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L38 LC CDR3
<400> 518
Figure 108117806-A0202-12-0598-1396
<210> 519
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L39 LC CDR1
<400> 519
Figure 108117806-A0202-12-0598-1397
<210> 520
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L39 LC CDR2
<400> 520
Figure 108117806-A0202-12-0598-1398
<210> 521
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L39 LC CDR3
<400> 521
Figure 108117806-A0202-12-0598-1399
<210> 522
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L57 LC CDR1
<400> 522
Figure 108117806-A0202-12-0598-1400
Figure 108117806-A0202-12-0599-1401
<210> 523
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L57 LC CDR2
<400> 523
Figure 108117806-A0202-12-0599-1402
<210> 524
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L57 LC CDR3
<400> 524
Figure 108117806-A0202-12-0599-1403
<210> 525
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L73 LC CDR1
<400> 525
Figure 108117806-A0202-12-0599-1404
<210> 526
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L73 LC CDR2
<400> 526
Figure 108117806-A0202-12-0599-1405
<210> 527
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L73 LC CDR3
<400> 527
Figure 108117806-A0202-12-0600-1406
<210> 528
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L53 LC CDR1
<400> 528
Figure 108117806-A0202-12-0600-1407
<210> 529
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L53 LC CDR2
<400> 529
Figure 108117806-A0202-12-0600-1408
<210> 530
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L53 LC CDR3
<400> 530
Figure 108117806-A0202-12-0600-1409
<210> 531
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L66 LC CDR1
<400> 531
Figure 108117806-A0202-12-0601-1410
<210> 532
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L66 LC CDR2
<400> 532
Figure 108117806-A0202-12-0601-1411
<210> 533
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L66 LC CDR3
<400> 533
Figure 108117806-A0202-12-0601-1412
<210> 534
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L35 LC CDR1
<400> 534
Figure 108117806-A0202-12-0601-1413
<210> 535
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L35 LC CDR2
<400> 535
Figure 108117806-A0202-12-0601-1414
<210> 536
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L35 LC CDR3
<400> 536
Figure 108117806-A0202-12-0602-1415
<210> 537
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L61 LC CDR1
<400> 537
Figure 108117806-A0202-12-0602-1416
<210> 538
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L61 LC CDR2
<400> 538
Figure 108117806-A0202-12-0602-1417
<210> 539
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L61 LC CDR3
<400> 539
Figure 108117806-A0202-12-0602-1418
<210> 540
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L51 LC CDR1
<400> 540
Figure 108117806-A0202-12-0603-1419
<210> 541
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L51 LC CDR2
<400> 541
Figure 108117806-A0202-12-0603-1420
<210> 542
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L51 LC CDR3
<400> 542
Figure 108117806-A0202-12-0603-1421
<210> 543
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L44 LC CDR1
<400> 543
Figure 108117806-A0202-12-0603-1422
<210> 544
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L44 LC CDR2
<400> 544
Figure 108117806-A0202-12-0603-1423
<210> 545
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L44 LC CDR3
<400> 545
Figure 108117806-A0202-12-0604-1424
<210> 546
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L30 LC CDR1
<400> 546
Figure 108117806-A0202-12-0604-1425
<210> 547
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L30 LC CDR2
<400> 547
Figure 108117806-A0202-12-0604-1426
<210> 548
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L30 LC CDR3
<400> 548
Figure 108117806-A0202-12-0604-1427
<210> 549
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L69 LC CDR1
<400> 549
Figure 108117806-A0202-12-0605-1428
<210> 550
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L69 LC CDR2
<400> 550
Figure 108117806-A0202-12-0605-1429
<210> 551
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L69 LC CDR3
<400> 551
Figure 108117806-A0202-12-0605-1430
<210> 552
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L37 LC CDR1
<400> 5、52
Figure 108117806-A0202-12-0605-1431
<210> 553
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L37 LC CDR2
<400> 553
Figure 108117806-A0202-12-0605-1432
Figure 108117806-A0202-12-0606-1433
<210> 554
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L37 LC CDR3
<400> 554
Figure 108117806-A0202-12-0606-1434
<210> 555
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L74 LC CDR1
<400> 555
Figure 108117806-A0202-12-0606-1435
<210> 556
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L74 LC CDR2
<400> 556
Figure 108117806-A0202-12-0606-1436
<210> 557
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L74 LC CDR3
<400> 557
Figure 108117806-A0202-12-0606-1437
<210> 558
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L115 LC CDR1
<400> 558
Figure 108117806-A0202-12-0607-1438
<210> 559
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L115 LC CDR2
<400> 559
Figure 108117806-A0202-12-0607-1439
<210> 560
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L115 LC CDR3
<400> 560
Figure 108117806-A0202-12-0607-1440
<210> 561
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L116 LC CDR1
<400> 561
Figure 108117806-A0202-12-0607-1441
<210> 562
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L116 LC CDR2
<400> 562
Figure 108117806-A0202-12-0608-1442
<210> 563
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L116 LC CDR3
<400> 563
Figure 108117806-A0202-12-0608-1443
<210> 564
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L117 LC CDR1
<400> 564
Figure 108117806-A0202-12-0608-1444
<210> 565
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L117 LC CDR2
<400> 565
Figure 108117806-A0202-12-0608-1445
<210> 566
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L117 LC CDR3
<400> 566
Figure 108117806-A0202-12-0608-1446
<210> 567
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L118 LC CDR1
<400> 567
Figure 108117806-A0202-12-0609-1447
<210> 568
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L118 LC CDR2
<400> 568
Figure 108117806-A0202-12-0609-1448
<210> 569
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L118 LC CDR3
<400> 569
Figure 108117806-A0202-12-0609-1449
<210> 570
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L119 LC CDR1
<400> 570
Figure 108117806-A0202-12-0609-1450
<210> 571
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L119 LC CDR2
<400> 571
Figure 108117806-A0202-12-0610-1451
<210> 572
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L119 LC CDR3
<400> 572
Figure 108117806-A0202-12-0610-1452
<210> 573
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L120 LC CDR1
<400> 573
Figure 108117806-A0202-12-0610-1453
<210> 574
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L120 LC CDR2
<400> 574
Figure 108117806-A0202-12-0610-1454
<210> 575
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L120 LC CDR3
<400> 575
Figure 108117806-A0202-12-0610-1455
<210> 576
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L121 LC CDR1
<400> 576
Figure 108117806-A0202-12-0611-1456
<210> 577
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L121 LC CDR2
<400> 577
Figure 108117806-A0202-12-0611-1457
<210> 578
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L121 LC CDR3
<400> 578
Figure 108117806-A0202-12-0611-1458
<210> 579
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L122 LC CDR1
<400> 579
Figure 108117806-A0202-12-0611-1459
<210> 580
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L122 LC CDR2
<400> 580
Figure 108117806-A0202-12-0612-1460
<210> 581
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L122 LC CDR3
<400> 581
Figure 108117806-A0202-12-0612-1461
<210> 582
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L132 LC CDR1
<400> 582
Figure 108117806-A0202-12-0612-1462
<210> 583
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L132 LC CDR2
<400> 583
Figure 108117806-A0202-12-0612-1463
<210> 584
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L132 LC CDR3
<400> 584
Figure 108117806-A0202-12-0612-1464
Figure 108117806-A0202-12-0613-1465
<210> 585
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L41 LC CDR1
<400> 585
Figure 108117806-A0202-12-0613-1466
<210> 586
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L41 LC CDR2
<400> 586
Figure 108117806-A0202-12-0613-1467
<210> 587
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C33L41 LC CDR3
<400> 587
Figure 108117806-A0202-12-0613-1468
<210> 588
<211> 182
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 588
Figure 108117806-A0202-12-0613-1469
Figure 108117806-A0202-12-0614-1470
<210> 589
<211> 171
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 589
Figure 108117806-A0202-12-0614-1471
Figure 108117806-A0202-12-0615-1472
<210> 590
<211> 207
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 590
Figure 108117806-A0202-12-0615-1473
Figure 108117806-A0202-12-0616-1474
<210> 591
<211> 164
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 591
Figure 108117806-A0202-12-0616-1475
Figure 108117806-A0202-12-0617-1476

Claims (38)

  1. 一種單離單株抗體或其抗原結合片段，其特異性結合CD33之C2域。
  2. 如請求項1所述之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
    a.分別為SEQ ID NO：447、448、449、567、568、及569；
    b.分別為SEQ ID NO：444、445、446、564、565、及566；
    c.分別為SEQ ID NO：354、355、356、477、478、及479；
    d.分別為SEQ ID NO：378、379、380、501、502、及503；
    e.分別為SEQ ID NO：411、412、413、531、532、及533；
    f.分別為SEQ ID NO：348、349、350、471、472、及473；
    g.分別為SEQ ID NO：360、361、362、483、484、及485；
    h.分別為SEQ ID NO：363、364、365、486、487、及488；
    i.分別為SEQ ID NO：366、367、368、489、490、及491；
    j.分別為SEQ ID NO：369、370、371、492、493、及494；
    k.分別為SEQ ID NO：387、388、389、492、493、及494；
    l.分別為SEQ ID NO：402、403、404、522、523、及524；
    m.分別為SEQ ID NO：408、409、410、528、529、及530；
    n.分別為SEQ ID NO：423、424、425、543、544、及545；或
    o.分別為SEQ ID NO：426、427、428、546、547、及548。
  3. 如請求項1所述之單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：292、291、261、269、280、259、263、264、265、266、272、277、279、284、或285至少95%同一之多肽序列；或輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：332、331、302、310、320、300、304、305、306、307、317、319、324、或325至少95%同一之多肽序列。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之單離單株抗體或其抗原結合片段，其包含：
    a.具有SEQ ID NO：292之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：332之多肽序列的輕鏈可變區；
    b.具有SEQ ID NO：291之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：331之多肽序列的輕鏈可變區；
    c.具有SEQ ID NO：261之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：302之多肽序列的輕鏈可變區；
    d.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：310之多肽序列的輕鏈可變區；
    e.具有SEQ ID NO：280之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；
    f.具有SEQ ID NO：259之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：300之多肽序列的輕鏈可變區；
    g.具有SEQ ID NO：263之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：304之多肽序列的輕鏈可變區；
    h.具有SEQ ID NO：264之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：305之多肽序列的輕鏈可變區；
    i.具有SEQ ID NO：265之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：306之多肽序列的輕鏈可變區；
    j.具有SEQ ID NO：266之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；
    k.具有SEQ ID NO：272之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；
    l.具有SEQ ID NO：277之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：317之多肽序列的輕鏈可變區；
    m.具有SEQ ID NO：279之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：319之多肽序列的輕鏈可變區；
    n.具有SEQ ID NO：284之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：324之多肽序列的輕鏈可變區；或
    o.具有SEQ ID NO：285之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：325之多肽序列的輕鏈可變區。
  5. 如請求項1至3中任一項所述之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該單株抗體或其抗原結合片段在體外以小於約2nM的EC50誘導抗體依賴性細胞毒性(antibody-dependent cellular cytotoxicity,ADCC)。
  6. 如請求項5所述之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含IgG1低岩藻醣(fucose)主鏈。
  7. 如請求項1至3中任一項所述之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段以小於約5×10-9M之解離常數(KD)結合CD33。
  8. 如請求項1至3中任一項所述之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段以小於約2nM的EC50結合CD33並誘導內化。
  9. 如請求項1至3中任一項所述之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係嵌合的。
  10. 如請求項1至3中任一項所述之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係人類的或人源化。
  11. 如請求項1至3中任一項所述之單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係接合至治療劑。
  12. 一種單離核酸，其編碼如請求項1至10中任一項所述之單株抗體或其抗原結合片段。
  13. 一種載體，其包含如請求項12所述之單離核酸。
  14. 一種宿主細胞，其包含如請求項13所述之載體。
  15. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至10中任一項所述之單離單株抗體或其抗原結合片段、及醫藥上可接受之載劑。
  16. 一種治療有需要之對象的癌症之方法，其包含向該對象投予如請求項15所述之醫藥組成物。
  17. 如請求項16所述之方法，其中該癌症係血液性癌症。
  18. 如請求項17所述之方法，其中該血液性癌症係選自由白血病、淋巴瘤或多發性骨髓瘤所組成之群組。
  19. 如請求項17所述之方法，其中該血液性癌症係急性骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、急性淋巴球性白血病(ALL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性骨髓性白血病(CML)或母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤(DPDCN)。
  20. 一種產生如請求項1至10中任一項所述之單株抗體或其抗原結合片段之方法，其包含在產生該單株抗體或抗原結合片段之條件下培養包含編碼該單株抗體或抗原結合片段之核酸的細胞，及自該細胞或培養物回收該抗體或抗原結合片段。
  21. 一種產生包含如請求項1至10中任一項所述之單株抗體或抗原結合片段的醫藥組成物之方法，其包含將該單株抗體或其抗原結合片段與醫藥上可接受之載劑組合以獲得該醫藥組成物。
  22. 一種抗CD33/抗CD3雙特異性抗體，其包含抗CD33抗體或其抗原結合片段、及抗CD3抗體或其抗原結合片段，
    其中該抗CD33抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
    a.分別為SEQ ID NO：447、448、449、567、568、及569；
    b.分別為SEQ ID NO：444、445、446、564、565、及566；
    c.分別為SEQ ID NO：354、355、356、477、478、及479；
    d.分別為SEQ ID NO：378、379、380、501、502、及503；
    e.分別為SEQ ID NO：411、412、413、531、532、及533；
    f.分別為SEQ ID NO：348、349、350、471、472、及473；
    g.分別為SEQ ID NO：360、361、362、483、484、及485；
    h.分別為SEQ ID NO：363、364、365、486、487、及488；
    i.分別為SEQ ID NO：366、367、368、489、490、及491；
    j.分別為SEQ ID NO：369、370、371、492、493、及494；
    k.分別為SEQ ID NO：387、388、389、492、493、及494；
    l.分別為SEQ ID NO：402、403、404、522、523、及524；
    m.分別為SEQ ID NO：408、409、410、528、529、及530；
    n.分別為SEQ ID NO：423、424、425、543、544、及545；或
    o.分別為SEQ ID NO：426、427、428、546、547、及548；
    且該抗CD3抗體或其抗原結合片段包含重鏈互補決定區1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、LCDR2、及LCDR3，其具有下列之多肽序列：
    1)分別為SEQ ID NO：342、343、344、465、466、及467；或
    2)分別為SEQ ID NO：345、346、347、468、469、及470。
  23. 如請求項22所述之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗CD33抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：292、291、261、269、280、259、263、264、265、266、272、277、279、284、或285至少95%同一之多肽序列；或輕鏈可變區，其具有與SEQ ID NO：332、331、302、310、320、300、304、305、306、307、317、319、324、或325至少95%同一之多肽序列；且該抗CD3抗體或其抗原結合片段包含具有與SEQ ID NO：257或258至少95%同一之多肽序列的重鏈可變區；或具有與SEQ ID NO：298或299至少95%同一之多肽序列的輕鏈可變區。
  24. 如請求項22或23所述之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其包含：
    a.具有SEQ ID NO：292之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：332之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    b.具有SEQ ID NO：291之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：331之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    c.具有SEQ ID NO：261之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：302之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    d.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：310之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    e.具有SEQ ID NO：280之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    f.具有SEQ ID NO：259之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：300之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    g.具有SEQ ID NO：263之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：304之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    h.具有SEQ ID NO：264之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：305之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    i.具有SEQ ID NO：265之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：306之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    j.具有SEQ ID NO：266之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    k.具有SEQ ID NO：272之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之 多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    l.具有SEQ ID NO：277之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：317之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    m.具有SEQ ID NO：279之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：319之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    n.具有SEQ ID NO：284之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：324之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    o.具有SEQ ID NO：285之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：325之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：257之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：298之多肽序列的輕鏈可變區；
    p.具有SEQ ID NO：292之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：332之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
    q.具有SEQ ID NO：291之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：331之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
    r.具有SEQ ID NO：261之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：302之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
    s.具有SEQ ID NO：269之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：310之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
    t.具有SEQ ID NO：280之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：322之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
    u.具有SEQ ID NO：259之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：300之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
    v.具有SEQ ID NO：263之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：304之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之 多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
    w.具有SEQ ID NO：264之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：305之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
    x.具有SEQ ID NO：265之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：306之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
    y.具有SEQ ID NO：266之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
    z.具有SEQ ID NO：272之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：307之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
    aa.具有SEQ ID NO：277之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：317之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
    bb.具有SEQ ID NO：279之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：319之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；
    cc.具有SEQ ID NO：284之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：324之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區；或
    dd.具有SEQ ID NO：285之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：325之多肽序列的輕鏈可變區；以及具有SEQ ID NO：258之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO：299之多肽序列的輕鏈可變區。
  25. 如請求項22或23所述之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗CD33抗體或其抗原結合片段特異性結合CD33之C2域。
  26. 如請求項22或23所述之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段在體外以小於約1nM的EC50值誘導CD33表現細胞之T細胞依賴性細胞毒性。
  27. 如請求項22或23所述之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該雙特異性抗體或其抗原結合片段係嵌合的。
  28. 如請求項22或23所述之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該雙特異性抗體或其抗原結合片段係人類的或人源化。
  29. 一種單離核酸，其編碼如請求項22至28中任一項所述之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段。
  30. 一種載體，其包含如請求項29所述之單離核酸。
  31. 一種宿主細胞，其包含如請求項30所述之載體。
  32. 一種醫藥組成物，其包含如請求項22至28中任一項所述之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或其抗原結合片段、及醫藥上可接受之載劑。
  33. 一種如請求項32所述之醫藥組成物用於製造治療有需要之對象的癌症之藥劑的用途。
  34. 如請求項33所述之用途，其中該癌症係血液性癌症。
  35. 如請求項34所述之用途，其中該血液性癌症係選自由白血病、淋巴瘤或多發性骨髓瘤所組成之群組。
  36. 如請求項35所述之用途，其中該血液性癌症係急性骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、急性淋巴球性白血病(ALL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性骨髓性白血病(CML)或母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤(DPDCN)。
  37. 一種產生如請求項22至28中任一項所述之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或抗原結合片段之方法，其包含在產生該抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或抗原結合片段之條件下培養包含編碼該抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或抗原結合片段之核酸的細胞，及自該細胞或培養物回收該抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或抗原結合片段。
  38. 一種產生包含如請求項22至28中任一項所述之抗CD33/抗CD3雙特異性抗體或抗原結合片段的醫藥組成物之方法，其包含將該抗CD33/抗CD3 雙特異性抗體或其抗原結合片段與醫藥上可接受之載劑組合以獲得該醫藥組成物。
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