JP2023519932A - 抗ｃｄ３３抗体及びその使用 - Google Patents

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Abstract

一組の新規抗ＣＤ３３抗体が記載されている。提供されている抗体は、ＣＤ３３のＶセットＩｇ様ドメインの存在下又は非存在下でＣ２セットＩｇ様ドメインに結合するｐａｎ結合剤であり、ＣＤ３３のＶセットＩｇ様ドメインの非存在下でのみＣ２セットＩｇ様ドメインに結合するＣ２セット特異的結合剤であり、又はＣＤ３３のＶセットＩｇ様ドメインに結合するＶセット結合剤である。この抗体は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などのＣＤ３３関連障害に対する新規治療及び診断手段を提供する。

Description

本出願は、２０２０年３月３１日に出願された米国仮特許出願第６３／００３，２１９号に対する優先権を主張し、これは、本明細書に完全に記載されているかのように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
連邦政府が支援する研究又は開発に関する声明
本発明は、国立衛生研究所によって与えられたＣＡ２３４２０３及びＣＡ２２３４０９の下で政府の支援を受けてなされた。政府は本発明に一定の権利を有する。
配列表の参照
本出願に関連する配列表は、紙の複写の代わりにテキスト形式で提供され、本明細書に参照により組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名前は、Ｆ０５３－０１２９ＰＣＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは２３２ＫＢであり、２０２１年３月３１日に作成され、ＥＦＳ－Ｗｅｂにより電子的に提出されている。
本開示の分野
一組の新規抗ＣＤ３３抗体が記載されている。提供されている抗体は、ＣＤ３３のＶセットＩｇ様ドメインの存在下又は非存在下でＣ２セットＩｇ様ドメインに結合するｐａｎ結合剤であり、ＣＤ３３のＶセットＩｇ様ドメインの非存在下でのみＣ２セットＩｇ様ドメインに結合するＣ２セット結合剤であり、又はＣＤ３３のＶセットＩｇ様ドメインに結合するＶセット結合剤である。この抗体は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などのＣＤ３３関連障害に対する新規治療及び診断手段を提供する。
世界保健機関によると、がんは世界で２番目に多い死因であり、２０１８年には推定９６０万人の死亡の原因であった。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、クローン性の増殖性骨髄芽球細胞の悪性腫瘍に起因するがんの種類である。米国では年間２０，０００件のＡＭＬの新しい症例があり、毎年１１，０００人がＡＭＬにより死亡している（Ｓｉｅｇｅｌら、２０２１年、ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ．７１（１）：７～３３頁）。ＡＭＬを有する若年患者では、従来の化学療法により６０％～８０％の率の高い完全寛解率を達成することができるが（Ｄｏｈｎｅｒら、２０１７年．Ｂｌｏｏｄ．１２９（４）：４２４～４４７頁）、６５歳以上の年齢の高齢患者についての治療結果は、診断から１年以内に７０％もの患者がこの疾患で死亡しており、不十分なままである（Ｍｅｙｅｒｓら、Ａｐｐｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｅｃｏｎ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｏｌｉｃｙ、１１：２７５～２８６頁、２０１３年）。残念ながら、ＡＭＬ及び内在する白血病幹細胞の化学療法抵抗性のために、従来の治療後の再発は一般的であり（Ｅｐｐｅｒｔら、２０１１年．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１７（９）：１０８６～１０９３頁）、再発／難治性（Ｒ／Ｒ）ＡＭＬに対する現在の治療選択肢は悲惨であり、１２か月の全生存率は３０％未満という結果になる。
ＣＤ３３は、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（ＳＩＧＬＥＣ）タンパク質ファミリーのメンバーである。これは、６７ｋＤａのグリコシル化膜貫通タンパク質である。ＣＤ３３（ＳＩＧＬＥＣ－３としても知られている）は、ＡＭＬを有するほぼ全ての患者における少なくとも一部の白血病細胞、おそらく、一部の症例ではＡＭＬ幹細胞に見出される骨髄分化抗原である。この広範な発現パターンに基づいて、ＣＤ３３は、ＡＭＬにおける治療標的として広く追求されてきた。いくつかの無作為化研究からの最近のデータにより、ＣＤ３３抗体－薬物コンジュゲートである、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＧＯ）が、新たに診断されたＡＭＬを有する患者の定義されたサブセットにおいて化学療法に追加されると、生存率を改善することが実証された。このデータは、ＣＤ３３が、ＡＭＬにおける免疫療法についての最初の（そしてこれまでのところ唯一の）標的であることを確証している。ＧＯで指摘された制限を克服するための、新たな、より効果的なＣＤ３３指向療法（例えば、抗体－薬物コンジュゲート、放射性イムノコンジュゲート、二重特異性抗体、キメラ抗原受容体［ＣＡＲ］修飾Ｔ細胞）の開発と並行して、他の悪性及び非悪性障害についての薬物標的としてのＣＤ３３への関心が高まっている。これらの取り組みには、ＧＯによって認識されないＣＤ３３スプライスバリアントのターゲティング、並びに他の血液悪性腫瘍におけるＣＤ３３＋腫瘍細胞、様々な疾患におけるＣＤ３３＋骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、及びアルツハイマー病における正常なＣＤ３３＋ミクログリア細胞のターゲティングが含まれる（Ｗａｌｔｅｒ、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２０２０年、２０（９）：９５５～９５８頁）。
全長ＣＤ３３タンパク質（ＣＤ３３ＦＬ）は、その細胞外部分におけるアミノ末端の膜遠位のＶセット免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン及び膜近位のＣ２セットＩｇ様ドメインによって特徴付けられる（図１）。ＣＤ３３のより短いアイソフォームが存在する。ＣＤ３３のより短いアイソフォームには、Ｖセットドメイン（ＣＤ３３ΔＥ２）をコードする、エクソン２を欠く１つのバリアントが含まれる。少なくともｍＲＮＡレベルでは、ＣＤ３３ΔＥ２は、ＡＭＬを有する患者の骨髄及び末梢血の骨髄細胞において広範に発現される。しかしながら、現在、ほぼ全ての商業的及び臨床的に利用可能なＣＤ３３抗体は、免疫優勢なＶセットＩｇ様ドメインを認識する。このことは、これらの抗体が、ＣＤ３３ΔＥ２などのＶセットドメインを欠く、より短い形態のＣＤ３３を認識しないことを意味する。このことは、ＣＤ３３ΔＥ２の選択的転写及びＣＤ３３ＦＬの翻訳の減少をもたらす、ＣＤ３３遺伝子における一塩基多型を有する患者が、集中化学療法へのゲムツズマブオゾガマイシン（これはまた、ＣＤ３３のＶセットドメインにも結合する。）の追加から恩恵を受けなかったという小児ＡＭＬにおけるある臨床試験において行われた観察を説明することができる。
Ｓｉｅｇｅｌら、２０２１年、ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ．７１（１）：７～３３頁 Ｄｏｈｎｅｒら、２０１７年．Ｂｌｏｏｄ．１２９（４）：４２４～４４７頁 Ｍｅｙｅｒｓら、Ａｐｐｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｅｃｏｎ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｏｌｉｃｙ、１１：２７５～２８６頁、２０１３年 Ｅｐｐｅｒｔら、２０１１年．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１７（９）：１０８６～１０９３頁 Ｗａｌｔｅｒ、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２０２０年、２０（９）：９５５～９５８頁
（本開示の要旨）
本開示は、ＶセットＩｇ様ドメインが存在するかどうかに関係なく、ＣＤ３３タンパク質におけるＣ２セットＩｇ様ドメインに結合／認識する抗体を提供する（ＣＤ３３ＰＡＮ抗体（図１）。これらの抗体は、ｐａｎ結合剤と称される。ｐａｎ結合剤は、ＣＤ３３ＦＬ及びＣＤ３３ΔＥ２バリアントなどのより短いアイソフォームを発現する標的細胞に結合することができるため、より高いパーセンテージのＣＤ３３発現細胞を標的とすることができる。本明細書に開示されているＣＤ３３ＰＡＮ抗体には、６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５が含まれる。
本開示はまた、ＣＤ３３のＶセットＩｇ様ドメインに結合する抗ＣＤ３３抗体も提供する。これらのＶセット結合剤には、５Ｄ１２及び８Ｆ５が含まれ、これらは、ＣＤ３３ＦＬを発現する患者に追加の診断及び治療選択肢を提供する。
本開示はまた、Ｖセットドメインが存在しない場合のみであるが、Ｃ２セットドメインに結合する抗体も提供する。これらのＣ２セット結合剤には、１２Ｂ１２、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１及び７Ｅ７が含まれる。
本明細書に開示されている抗体は、抗ＣＤ３３抗体コンジュゲートなどの多数のフォーマットに操作され得る。抗ＣＤ３３抗体コンジュゲートは、ＣＤ３３抗体ベースの結合ドメインにコンジュゲートした分子を含む人工分子である。抗ＣＤ３３抗体コンジュゲートには、抗ＣＤ３３免疫毒素、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、抗体－フルオロフォアコンジュゲート及び放射性同位体コンジュゲートが含まれる。本明細書に開示されている抗体はまた、抗ＣＤ３３多重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ３３二重特異性抗体、抗ＣＤ３３三重特異性抗体、抗ＣＤ３３四重特異性抗体など）に操作され得る。多重特異性フォーマットの場合、操作された分子は、ＣＤ３３並びに例えば、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ２８、ＣＤ６４及び／又は４－１ＢＢなどの、免疫細胞上の免疫活性化エピトープに結合することができる。これらの実施形態は、活性化された免疫細胞をＣＤ３３発現細胞にもたらし、ＣＤ３３発現細胞を破壊するのに役立つ。
抗体のさらなる組合せは、対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現する又は欠くかどうかに基づいて選択され得る。例えば、対象がＶセットドメインを発現する場合、６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上を含む併用療法が、５Ｄ１２及び８Ｆ５のうちの１つ以上と組み合わせて選択され得る。対象がＶセットドメインを発現しない場合、６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上を含む併用療法が、１２Ｂ１２、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１及び７Ｅ７のうちの１つ以上と組み合わせて選択され得る。
本明細書で提出された図面の一部は、カラーでより良く理解される。出願人は、図面のカラーバージョンを元の提出物の一部とみなし、後の手続きで図面のカラー画像を提示する権利を留保する。
全長ＣＤ３３（ＣＤ３３ＦＬ）及びＶセットドメインの欠失をもたらす、エクソン２の欠失を伴うＣＤ３３（ＣＤ３３ΔＥ２）の図である。ＣＤ３３ＦＬのみ（抗ＣＤ３３ＦＬ）、ＣＤ３３ΔＥ２のみ（抗ＣＤ３３ΔＥ２）又はＣＤ３３ＦＬ及びＣＤ３３ΔＥ２（抗ＣＤ３３ＦＬ＋ΔＥ２又は抗ＣＤ３３ＰＡＮ）に結合する抗体が示される。 ＣＤ３３ＦＬ並びにＶセットドメインの膜近位再配置をもたらす、エクソン３及び４の欠失を伴う人工ＣＤ３３分子（ＣＤ３３ΔＥ３－４）又はＣＤ２２の２つのＣ２セットドメイン（「ＣＤ３３ＦＬ＋ＣＤ２２ ２Ｄ」）若しくはＣＤ２２の４つのＣ２セットドメインいずれかの挿入（「ＣＤ３３ＦＬ＋ＣＤ２２ ４Ｄ」）の概略図である。ＣＤ３３ΔＥ３－４は、ヒトＣＤ３３ＦＬ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のＣＤ３３アミノ酸（ａａ）１４０～２３２をスプライスアウトするために部位特異的突然変異誘発を使用して操作された。ＣＤ３３ＦＬ＋ＣＤ２２ ４Ｄは、内在性ＣＤ３３シグナルペプチド（ａａ１～１７）、６－ヒスチジンタグ、３×グリシンリンカー、ヒトＣＤ３３ ＥＣＤ（ａａ１８～２５９）、Ｃ２型ドメイン３～６を含むヒトＣＤ２２ ＥＣＤの一部（ａａ３３１～６８３）、ＣＤ３３膜貫通ドメイン及びＣＤ３３細胞内ドメイン（ａａ２６０～３６４）を使用して生成された。ＣＤ２２ ａａ３３１～５０４（Ｃ２型ドメイン３及び４）は、ＣＤ３３ＦＬ＋ＣＤ２２ ２Ｄを生成するためにＣＤ３３ＦＬ＋ＣＤ２２ ４Ｄから除去された。 細胞膜からの結合距離の減少により、ヒト骨髄性白血病細胞に対するＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）の抗腫瘍効果が増強する図である。内因性ＣＤ３３遺伝子座のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性欠失を伴うヒトＣＤ３３＋骨髄性白血病細胞株（（３Ａ）ＭＬ－１、（３Ｂ）ＨＬ－６０、（３Ｃ）Ｋ５６２）は、レンチウイルス遺伝子移入を介してＣＤ３３ＦＬ又はＣＤ３３ΔＥ３－４のいずれかを過剰発現するように操作された。標的タンパク質の相対的発現は、ＶセットドメインＣＤ３３抗体、Ｐ６７．６によりフローサイトメトリーで評価され、代表的なヒストグラムが右下のパネルに示されている。次いで細胞は、１０００ｐｇ／ｍＬの濃度のＶセットドメインターゲティングＣＤ３３／ＣＤ３ ＢｓＡｂ及び示したエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）細胞比の健康な成人ボランティアから採取された非刺激末梢血単核細胞から濃縮された健康なドナーＴ細胞により処理された（上側パネル）。骨髄細胞はまた、示した濃度のゲムツズマブオゾガマイシン（ＧＯ）により処理された（左下のパネル）。細胞傷害性は、２日後（ＢｓＡｂの場合）又は３日後（ＧＯの場合）に、４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ）染色によって測定した死細胞のパーセンテージの変化として、フローサイトメトリーで定量された。抗Ｖセットドメイン指向ＣＤ３３／ＣＤ３ ＢｓＡｂは、公開された配列（米国特許出願公開ＵＳ２０１６／０３１７６５７ Ａ１）を使用してｓｃＦｖ－ｓｃＦｖフォーマットにおいて構築された。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１。 細胞膜からの結合距離の減少により、ヒト骨髄性白血病細胞に対するＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）の抗腫瘍効果が増強する図である。内因性ＣＤ３３遺伝子座のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性欠失を伴うヒトＣＤ３３＋骨髄性白血病細胞株（（３Ａ）ＭＬ－１、（３Ｂ）ＨＬ－６０、（３Ｃ）Ｋ５６２）は、レンチウイルス遺伝子移入を介してＣＤ３３ＦＬ又はＣＤ３３ΔＥ３－４のいずれかを過剰発現するように操作された。標的タンパク質の相対的発現は、ＶセットドメインＣＤ３３抗体、Ｐ６７．６によりフローサイトメトリーで評価され、代表的なヒストグラムが右下のパネルに示されている。次いで細胞は、１０００ｐｇ／ｍＬの濃度のＶセットドメインターゲティングＣＤ３３／ＣＤ３ ＢｓＡｂ及び示したエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）細胞比の健康な成人ボランティアから採取された非刺激末梢血単核細胞から濃縮された健康なドナーＴ細胞により処理された（上側パネル）。骨髄細胞はまた、示した濃度のゲムツズマブオゾガマイシン（ＧＯ）により処理された（左下のパネル）。細胞傷害性は、２日後（ＢｓＡｂの場合）又は３日後（ＧＯの場合）に、４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ）染色によって測定した死細胞のパーセンテージの変化として、フローサイトメトリーで定量された。抗Ｖセットドメイン指向ＣＤ３３／ＣＤ３ ＢｓＡｂは、公開された配列（米国特許出願公開ＵＳ２０１６／０３１７６５７ Ａ１）を使用してｓｃＦｖ－ｓｃＦｖフォーマットにおいて構築された。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１。 細胞膜からの結合距離の減少により、ヒト骨髄性白血病細胞に対するＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）の抗腫瘍効果が増強する図である。内因性ＣＤ３３遺伝子座のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性欠失を伴うヒトＣＤ３３＋骨髄性白血病細胞株（（３Ａ）ＭＬ－１、（３Ｂ）ＨＬ－６０、（３Ｃ）Ｋ５６２）は、レンチウイルス遺伝子移入を介してＣＤ３３ＦＬ又はＣＤ３３ΔＥ３－４のいずれかを過剰発現するように操作された。標的タンパク質の相対的発現は、ＶセットドメインＣＤ３３抗体、Ｐ６７．６によりフローサイトメトリーで評価され、代表的なヒストグラムが右下のパネルに示されている。次いで細胞は、１０００ｐｇ／ｍＬの濃度のＶセットドメインターゲティングＣＤ３３／ＣＤ３ ＢｓＡｂ及び示したエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）細胞比の健康な成人ボランティアから採取された非刺激末梢血単核細胞から濃縮された健康なドナーＴ細胞により処理された（上側パネル）。骨髄細胞はまた、示した濃度のゲムツズマブオゾガマイシン（ＧＯ）により処理された（左下のパネル）。細胞傷害性は、２日後（ＢｓＡｂの場合）又は３日後（ＧＯの場合）に、４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ）染色によって測定した死細胞のパーセンテージの変化として、フローサイトメトリーで定量された。抗Ｖセットドメイン指向ＣＤ３３／ＣＤ３ ＢｓＡｂは、公開された配列（米国特許出願公開ＵＳ２０１６／０３１７６５７ Ａ１）を使用してｓｃＦｖ－ｓｃＦｖフォーマットにおいて構築された。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１。 細胞膜からの結合距離の減少により、ＣＤ３３タンパク質を発現するように操作されたヒト急性リンパ芽球性白血病細胞に対するＣＤ３３／ＣＤ３ ＢｓＡｂの抗腫瘍効果が増強する図である。ヒトＣＤ３３ｎｅｇ急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）細胞株ＲＳ４；１１は、レンチウイルス遺伝子移入を介してＣＤ３３ＦＬ又はＣＤ３３ΔＥ３－４のいずれかを過剰発現するように操作された。標的タンパク質の相対的発現は、ＶセットドメインＣＤ３３抗体、Ｐ６７．６によりフローサイトメトリーで評価され、代表的なヒストグラムが下のパネルに示されている。次いで細胞は、１０００ｐｇ／ｍＬの濃度のＶセットドメインターゲティングＣＤ３３／ＣＤ３ ＢｓＡｂ及び示したエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）細胞比の健康な成人ボランティアから採取された非刺激末梢血単核細胞から濃縮された健康なドナーＴ細胞により処理された（上側パネル）。細胞傷害性は、２日後に、ＤＡＰＩ染色によって測定した死細胞のパーセンテージの変化として、フローサイトメトリーで定量された。抗Ｖセットドメイン指向ＣＤ３３／ＣＤ３ ＢｓＡｂは、公開された配列（米国特許出願公開ＵＳ２０１６／０３１７６５７ Ａ１）を使用してｓｃＦｖ－ｓｃＦｖフォーマットにおいて構築された。＊ｐ＜０．０５。 細胞膜からの結合距離の増加により、ＣＤ３３／ＣＤ３ ＢｓＡｂの抗腫瘍効果が減少する図である。内因性ＣＤ３３遺伝子座のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性欠失を伴うヒト骨髄性白血病細胞株（ＭＬ－１［上側パネル］、Ｋ５６２［下側パネル］）は、レンチウイルス遺伝子移入を介してＣＤ３３ＦＬ、ＣＤ３３ＦＬ＋ＣＤ２２ ２Ｄ又はＣＤ３３ＦＬ＋ＣＤ２２ ４Ｄを過剰発現するように操作された。ＣＤ３３構築物の相対的発現は、ＶセットドメインＣＤ３３抗体、Ｐ６７．６を使用してフローサイトメトリーで評価された（右側パネル）。次いで細胞は、示した濃度（ｐｇ／ｍＬ）のＶセットドメインターゲティングＣＤ３３／ＣＤ３ ＢｓＡｂ及び１：１のＥ：Ｔ細胞比の健康なドナーの非刺激末梢血単核細胞から濃縮された健康なドナーＴ細胞により処理された。細胞傷害性は、２日後に、ＤＡＰＩ染色によって測定した死細胞のパーセンテージの変化として、フローサイトメトリーで定量された。抗Ｖセットドメイン指向ＣＤ３３／ＣＤ３ ＢｓＡｂは、公開された配列（米国特許出願公開ＵＳ２０１６／０３１７６５７ Ａ１）を使用してｓｃＦｖ－ｓｃＦｖフォーマットにおいて構築された。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 （６Ａ）マウスＣＤ３３ＰＡＮ抗体（クローン１Ｈ７、９Ｇ２、６Ｈ９、３Ａ５、７Ｄ５、２Ｄ５）、（６Ｂ）マウスＣＤ３３Ｖセット抗体（クローン８Ｆ５、５Ｄ１２）、及び（６Ｃ）マウスＣＤ３３Ｃ２セット特異的抗体（クローン１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１、７Ｅ７）が、ＣＤ３３＋親ＭＬ－１細胞、ＣＤ３３のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性欠失を伴うＭＬ－１細胞（「ＣＤ３３ ＫＯ」）、並びにＣＤ３３遺伝子座のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性ノックアウト及び非ヒト霊長類ＣＤ３３の発現を伴うＭＬ－１細胞「ＮＨＰ ＣＤ３３」、並びに示したように、ＣＤ３３ＦＬ又はＣＤ３３ΔＥ２を発現するように操作されたＣＤ３３ｎｅｇＲＥＨ亜系統に対してフローサイトメトリーにより試験された図である。二次抗体のみの陰性対照が示されている。 （６Ａ）マウスＣＤ３３ＰＡＮ抗体（クローン１Ｈ７、９Ｇ２、６Ｈ９、３Ａ５、７Ｄ５、２Ｄ５）、（６Ｂ）マウスＣＤ３３Ｖセット抗体（クローン８Ｆ５、５Ｄ１２）、及び（６Ｃ）マウスＣＤ３３Ｃ２セット特異的抗体（クローン１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１、７Ｅ７）が、ＣＤ３３＋親ＭＬ－１細胞、ＣＤ３３のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性欠失を伴うＭＬ－１細胞（「ＣＤ３３ ＫＯ」）、並びにＣＤ３３遺伝子座のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性ノックアウト及び非ヒト霊長類ＣＤ３３の発現を伴うＭＬ－１細胞「ＮＨＰ ＣＤ３３」、並びに示したように、ＣＤ３３ＦＬ又はＣＤ３３ΔＥ２を発現するように操作されたＣＤ３３ｎｅｇＲＥＨ亜系統に対してフローサイトメトリーにより試験された図である。二次抗体のみの陰性対照が示されている。 （６Ａ）マウスＣＤ３３ＰＡＮ抗体（クローン１Ｈ７、９Ｇ２、６Ｈ９、３Ａ５、７Ｄ５、２Ｄ５）、（６Ｂ）マウスＣＤ３３Ｖセット抗体（クローン８Ｆ５、５Ｄ１２）、及び（６Ｃ）マウスＣＤ３３Ｃ２セット特異的抗体（クローン１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１、７Ｅ７）が、ＣＤ３３＋親ＭＬ－１細胞、ＣＤ３３のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性欠失を伴うＭＬ－１細胞（「ＣＤ３３ ＫＯ」）、並びにＣＤ３３遺伝子座のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性ノックアウト及び非ヒト霊長類ＣＤ３３の発現を伴うＭＬ－１細胞「ＮＨＰ ＣＤ３３」、並びに示したように、ＣＤ３３ＦＬ又はＣＤ３３ΔＥ２を発現するように操作されたＣＤ３３ｎｅｇＲＥＨ亜系統に対してフローサイトメトリーにより試験された図である。二次抗体のみの陰性対照が示されている。 組換え１Ｈ７及び抗Ｖセットドメイン抗体Ｐ６７．６の結合が、親ＣＤ３３ｎｅｇＲＥＨ細胞、並びに全長ＣＤ３３（ＣＤ３３ＦＬ）、Ｖセットドメインの喪失をもたらすエクソン２の欠失を伴うＣＤ３３バリアント（ＣＤ３３ΔＥ２）及びＣ２セットドメインの喪失をもたらすエクソン３及び４の欠失を伴う人工ＣＤ３３分子（ＣＤ３３ΔＥ３－４）を過剰発現するようにレンチウイルス遺伝子移入を介して操作されたサブクローンに対してフローサイトメトリーで比較された図である。 Ｃａｒｔｅｒｒａ装置の表面プラズモン共鳴技術（ＳＰＲ）の使用によって精製された抗ＣＤ３３抗体及びハイブリドーマ上清から反応速度プロファイルが確立された図である。ＳＰＲは、結合相互作用の反応速度定数を推定するための優れた方法であり、この反応速度定数は、ｏｎ速度（Ｋｏｎ）及びｏｆｆ速度（Ｋｏｆｆ）を決定するために１：１ラングミュア結合モデルに適合させることができる。これらの速度パラメーターの両方は、結合親和性と称される解離速度定数（Ｋｄ）の計算を可能にする。抗体クローンは、ＨＣ３０Ｍチップに固定化されたプロテインＡ／Ｇローン上のアレイとして捕捉された。最初の反応速度実験は、２ｎＭまでの４倍滴定の前に２μＭの濃度で開始したＣＤ３３ＦＬ抗原を使用した。１０のＨＢＳＴＥバッファーブランクの後、続いて、アレイにプリントされた各クローンの反応速度、１分のベースライン、５分の会合、１０分の解離を評価するために低濃度から高濃度までの６回の注入がアレイ上に流された。次いで、目的の第２の抗原との相互作用を阻止するアレイに結合したままのいずれかの抗原が残存する場合、チップが、プロテインＡ／Ｇローンへのクローンの同じアレイの新たな再プリントのために０．８５％リン酸ｐＨ１．７で再生され、その中でＣＤ３３ΔＥ２が抗体のアレイ上に流された。Ｃａｒｔｅｒｒａ反応速度ソフトウェアが、アレイ上に注入された抗原の各濃度についての反応速度曲線に生データを適合させるためにデータを処理するために使用された。 捕捉された１Ｈ７に結合するＣＤ３３ＦＬ又はＣＤ３３ΔＥ２からの精製された細胞外ドメインのＳＰＲ評価の図である。黒い線はデータであり、灰色の線はモデル適合である。ＳＰＲ実験は、０．１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンを含む、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％の界面活性剤Ｐ２０のランニングバッファーを使用してＢｉａｃｏｒｅ Ｔ１００（Ｃｙｔｉｖａ）上で２５℃にて実施された。ウサギ抗マウスＩｇＧは、Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５チップ（７３００ＲＵ）の２つのフローセルにカップリングしたアミンであった。０．２μｇ／ｍＬの１Ｈ７が、ＣＤ３３ＦＬ及びＣＤ３３ΔＥ２結合実験のそれぞれについて９４又は１６３ＲＵの抗体を捕捉するために、固定化された抗マウスＩｇＧの１つのフローセル上に１０μＬ／分で２分間又は５分間のいずれかで注入された。ＣＤ３３ＦＬ及びＣＤ３３ΔＥ２についての精製された細胞外ドメイン（Ｃ末端Ｈｉｓ及びＡｖｉタグで操作された）は、捕捉抗体上及び抗マウスＩｇＧ単独（参照）表面上の両方で３５μＬ／分の濃度系列として実行された。ＣＤ３３ＦＬは、１０分間注入され、１５分間解離させられた。ＣＤ３３ΔＥ２は、７分間注入され、７分間解離された。細胞外ドメイン濃度（ＣＤ３３ＦＬの場合は７５ｎＭ及びＣＤ３３ΔＥ２の場合は２μＭから開始する連続２倍希釈）が２連で実行され、無作為化され、４回の注入ごとにバッファーブランクを含んだ。ＣＭ５チップが、１０ｍＭのグリシン、ｐＨ１．７で３分間、２０μＬ／分で再生され、各ＣＤ３３注入の前に１Ｈ７が再捕捉された。データは、ＢｉａＥｖａｌ ２．０．４で二重に参照され、分析された。 親ＭＬ－１及びＴＦ－１細胞並びにＣＤ３３ ＫＯ細胞への１Ｈ７及びＰ６７．６の結合が、フローサイトメトリーで評価された図である。二次抗体のみの陰性対照が示されている。ＣＤ３３ ｒｓ１２４５９４１９遺伝子型が括弧内に示されている。 親ＡＭＬ細胞株への１Ｈ７及びＰ６７．６の結合が、フローサイトメトリーで評価された図である。二次抗体のみの陰性対照が示されている。ＣＤ３３ ｒｓ１２４５９４１９遺伝子型が括弧内に示されている。 （図１２Ａ）１Ｈ７及びＰ６７．６の内在化の図である。ＡＭＬ細胞株が、示した時間３７℃でＣＤ３３抗体とインキュベートされた。次いで、蛍光標識された二次抗体が、細胞表面上に残っているＣＤ３３抗体を定量するために添加された。結果が、時間０で存在する蛍光シグナルのパーセンテージとして提示されている。３つの別々の実験の平均値±ＳＥＭが示されている。 （図１２Ｂ）抗ＣＤ３３抗体１Ｈ７及びＰ６７．６への連続曝露によるＣＤ３３発現の調節の図である。ＭＬ－１及びＨＬ－６０細胞が、１Ｈ７又はＰ６７．６に２４時間連続的に曝露された。次いで一次抗体が、利用可能な全てのＣＤ３３分子に結合するように過剰に再び添加され、蛍光標識された二次抗体が、フローサイトメトリーによる定量のために添加された。結果が、抗体で処理されていない対照細胞と比較した蛍光の変化率として提示されている。３つの別々の実験の平均値±ＳＥＭが示されている。ＣＤ３３ ｒｓ１２４５９４１９遺伝子型が括弧内に示されている。 ＩｇＧ ＣＤ３３ＰＡＮ抗体（クローン１Ｈ７）及びＣＤ３に対する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）から構成される、ＩｇＧベースのＢｓＡｂの概略図である。 マウスＣＤ３３ＰＡＮ／ＣＤ３ ＢｓＡｂが、ヒトＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞に対するＴ細胞媒介細胞傷害性を再誘導する図である。親ＡＭＬ細胞株は、示したエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）細胞比の健康なドナーＴ細胞及び１Ｈ７／ＣＤ３ ＢｓＡｂで処理された。細胞傷害性は、ＤＡＰＩ染色によって測定した死細胞のパーセンテージの変化として２日後にフローサイトメトリーで定量された。ＣＤ３３ ｒｓ１２４５９４１９遺伝子型が括弧内に示されている。 マウスＣＤ３３ＰＡＮ／ＣＤ３ ＢｓＡｂが、ＣＤ３３に特異的な方法でＡＭＬ細胞に対するＴ細胞媒介細胞傷害性を再誘導する図である。親ＭＬ－１細胞及びＣＤ３３ ＫＯを有する亜系統が、５００ｐｇ／ｍＬの１Ｈ７ ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ ＢｓＡｂ及び１：１のＥ：Ｔの健康なドナーＴ細胞で処理された。死んだ白血病細胞は、フローサイトメトリーによって４８時間後に数えられ、ＢｓＡｂ処理なしと比較した死細胞の変化が示されている。３つの別々の実験の平均値±ＳＥＭが示されている。＊ｐ＜０．０５。 マウスＣＤ３３ＰＡＮ／ＣＤ３ ＢｓＡｂが、ＣＤ３３及びエピトープに特異的な方法でヒト急性白血病細胞に対するＴ細胞媒介細胞傷害性を再誘導する図である。親ＲＥＨ細胞又はＣＤ３３ΔＥ２を過剰発現するように操作された亜系統（左側パネル）、並びに親ＭＬ－１細胞、ＭＬ－１ ＣＤ３３ ＫＯ細胞及びＣＤ３３ΔＥ２の過剰発現を伴うＣＤ３３ ＫＯ細胞（ＣＤ３３ ＫＯ＋ＣＤ３３ΔＥ２）が、５００ｐｇ／ｍＬの濃度の１Ｈ７／ＣＤ３ ＩｇＧ－ｓｃＦｖ ＢｓＡｂ及び１：１のＥ：Ｔの健康なドナーＴ細胞で処理された。死んだ白血病細胞は、フローサイトメトリーによって４８時間後に数えられ、ＢｓＡｂ処理なしと比較した死細胞の変化が示されている。３つの別々の実験の平均値±ＳＥＭが示されている。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。 マウスＣＤ３３ＰＡＮ／ＣＤ３ ＢｓＡｂが、初代ヒトＡＭＬ細胞に対するＴ細胞媒介細胞傷害性を再誘導する図である。１１個の初代ＡＭＬ患者試料のパネルが、１Ｈ７／ＣＤ３ ＢｓＡｂ及び示したＥ：Ｔ比の健康なドナーＴ細胞で処理された。細胞傷害性が、死細胞（ＤＡＰＩ染色を使用）と総細胞数の両方を数えるフローサイトメトリーにより２日後に決定された。１１個の患者試料にわたる平均細胞傷害性±ＳＥＭが示されている。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。 本開示を支持する配列の図である：ＣＤ３３／ＣＤ３二重特異性分子タンパク質（配列番号１）；ヒトＦＬ ＣＤ３３に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するヒト全長（ＦＬ）ＣＤ３３細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３－ｍｍＦｃ；配列番号２）；ヒトＣＤ３３ΔＥ２に対する免疫原として使用される、マウスＦｃドメインタンパク質を有するＣＤ３３のヒトΔＥ２型（ＣＤ３３ΔＥ２）細胞外ドメイン（ｈｓＣＤ３３＿ΔＥ２－ｍｍＦｃ、配列番号３）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ領域と組み合わされた、ヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられているマウスＣＤ３３に対するタンパク質（配列番号４）及びコード（配列番号５）の細胞外ドメイン（ｍｍＣＤ３３＿Ｖセット－ｍｍＣＤ３３＿Ｃ２セット－ｈｓＣＤ３３＿Ｆｃ＿ｈｓＩｇＧ１）；ＣＤ３３のヒトＣ２セットドメインに対する抗体を生成するための免疫原として使用される、マウス由来のＣ２セットＩｇ様ドメインが、両方ともヒトＣＤ３３に由来する膜貫通ドメイン及びトランケートされた細胞内ドメインと組み合わされたヒトＣＤ３３由来のＣ２セットＩｇ様ドメインで置き換えられている、マウスタンパク質（配列番号６）及びコード（配列番号７）ＣＤ３３の細胞外ドメイン；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄタンパク質（配列番号１１４）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ４Ｄヌクレオチド（配列番号１１５）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄタンパク質（配列番号１１６）；ＣＤ３３：ＣＤ２２ ２Ｄヌクレオチド（配列番号１１７）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）タンパク質（配列番号１１８）；ＣＤ３３ Ｖセット構築物（エクソン３及び４欠失）ヌクレオチド（配列番号１１９）；ＣＤ３３シグナルペプチド（配列番号１２０）；ＣＤ３３シグナルペプチドコード配列（配列番号１２１）；６－ヒスチジンタグ（配列番号１２２）；６－ヒスチジンタグコード配列（配列番号１２３）；ＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２４）；ＣＤ３３細胞外ドメインコード配列（配列番号１２５）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２６）；ＣＤ３３アミノ酸１４０～２３２コード配列を欠くＣＤ３３細胞外ドメイン（配列番号１２７）；ＣＤ３３膜貫通ドメイン（配列番号１２８）；ＣＤ３３膜貫通ドメインコード配列（配列番号１２９）；ＣＤ３３細胞内ドメイン（配列番号１３０）；ＣＤ３３細胞内ドメインコード配列（配列番号１３１）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３２）；Ｉｇ様Ｃ２型３、Ｉｇ様Ｃ２型４、Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３３）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３４）；Ｉｇ様Ｃ２型５、Ｉｇ様Ｃ２型６コード配列として定義されているＣＤ２２ドメインを含むＣＤ２２細胞外ドメインの部分（配列番号１３５）；１Ｈ７／ＣＤ３二重特異性分子（配列番号１３６）；ＩｇＫシグナルペプチド（配列番号１３７）；３Ａ５抗体可変軽鎖コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４６）；３Ａ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４７）；３Ａ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４８）；７Ｄ５可変軽鎖バリアントコドン最適化ヌクレオチド（配列番号１４９）；７Ｄ５可変重鎖バリアント１コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５０）；７Ｄ５可変重鎖バリアント２コドン最適化ヌクレオチド（配列番号１５１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５７）；３Ａ５バリアント１（３Ａ５ｖ１）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１５８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１５９）；３Ａ５バリアント２（３Ａ５ｖ２）ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向（配列番号１６０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向（配列番号１６１）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６２）；１Ｈ７ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６３）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６４）；９Ｇ２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６５）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６６）；５Ｄ１２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６７）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６８）；３Ａ５バリアント１ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１６９）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＨ－ＶＬ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７０）；３Ａ５バリアント２ ｓｃＦｖ ＶＬ－ＶＨ配向、二重特異性抗体ＣＤ３３／ＣＤ３エンゲージャー（配列番号１７１）；ヒトＣＤ３３全長ＤＮＡコード（配列番号１７２）；ヒトＣＤ３３全長タンパク質（配列番号１７３）；９Ｇ２及び／又は６Ｈ９の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４３）；３Ａ５ｖ１、３Ａ５ｖ２及び／又は２Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４４）；７Ｄ５バリアント１（７Ｄ５ｖ１）及び／又は７Ｄ５バリアント２（７Ｄ５ｖ２）の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４５）；１１Ｄ５の軽鎖シグナルペプチド（配列番号３４６）；６Ｈ９の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４７）；３Ａ５ｖ１及び／又は３Ａ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４８）；７Ｄ５ｖ１及び／又は７Ｄ５ｖ２の重鎖シグナルペプチド（配列番号３４９）；２Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５０）；１１Ｄ５の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５１）；並びに１３Ｅ１１の重鎖シグナルペプチド（配列番号３５２）。
世界保健機関によると、がんは世界で２番目に多い死因であり、２０１８年には推定９６０万人の死亡の原因であった。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、クローン性の増殖性骨髄芽球細胞の悪性腫瘍である。ＡＭＬはまた、急性骨髄球性白血病、急性骨髄白血病、急性顆粒球性白血病及び急性非リンパ球性白血病としても知られている。
ＡＭＬを有する患者についての高い完全寛解率が、若年成人で６０％～８０％、６０歳以上の成人で４０％～６０％の割合で従来の化学療法により達成され得る（Ｄｏｈｎｅｒら、２０１７年．Ｂｌｏｏｄ．１２９（４）：４２４～４４７頁）。残念ながら、ＡＭＬ及び内在する白血病幹細胞の化学療法抵抗性のために、従来の治療後の再発は一般的であり（Ｅｐｐｅｒｔら、２０１１年．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１７（９）：１０８６～１０９３頁）、再発／難治性（Ｒ／Ｒ）ＡＭＬに対する現在の治療選択肢は散々であり、１２か月の全生存率は３０％未満という結果になる。
全長ＣＤ３３タンパク質（ＣＤ３３ＦＬ）は、その細胞外部分におけるアミノ末端の膜遠位のＶセット免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン及び膜近位のＣ２セットＩｇ様ドメインによって特徴付けられる膜貫通糖タンパク質である（図１）。
ＣＤ３３ＦＬは主に骨髄系統の成熟している細胞及び成熟した細胞上で提示され、最初は多能性骨髄前駆細胞上で発現する。それは造血系以外では見出されず、多能性造血幹細胞上では発現していないと考えられる。骨髄分化抗原としての役割と一致して、ＣＤ３３ＦＬは骨髄性新生物を有する患者の悪性細胞上で広範に発現され、例えば、ＡＭＬでは、それはほぼ全ての症例において少なくともＡＭＬ芽細胞のサブセットに見られ、一部の症例では白血病幹細胞に見られる可能性がある。この発現パターンのために、ＣＤ３３ＦＬはＡＭＬの標的化療法のための抗原として広範に利用されてきた（Ｗａｌｔｅｒら、Ｂｌｏｏｄ １１９（２６）：６１９８～６２０８頁、２０１２年；Ｃｏｗａｎら、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．（Ｌａｎｄｍａｒｋ Ｅｄ）１８：１３１１～１３３４頁、２０１３年；Ｌａｓｚｌｏら、Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｆ．２８（４）：１４３～１５３頁、２０１４年；及びＷａｌｔｅｒ、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ ２７（４）：３３９～３４８頁、２０１８年）。コンジュゲートしていないモノクローナルＣＤ３３抗体は、臨床において効果がないことが証明されているが、ＣＤ３３抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）ゲムツズマブオゾガマイシン（ＧＯ）を用いたいくつかの最近の無作為化試験により、ＡＭＬを有する患者のサブセットにおいて生存率の改善が実証され、この疾患における抗体の価値が確立され、ＣＤ３３ＦＬが、ＡＭＬの免疫療法についての最初の、そしてこれまでのところ唯一の治療標的であることが確証された（Ｌａｓｚｌｏら、Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｖ．２８（４）：１４３～１５３頁、２０１４年；Ｇｏｄｗｉｎら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ ３１（９）３１（９）：１８５５～１８６８頁、２０１７年）。ＧＯで指摘された制限を克服するための、新たな、より効果的なＣＤ３３指向療法（例えば、抗体－薬物コンジュゲート、放射性イムノコンジュゲート、二重特異性抗体、キメラ抗原受容体［ＣＡＲ］修飾Ｔ細胞）の開発と並行して、他の悪性及び非悪性障害についての薬物標的としてのＣＤ３３への関心が高まっている。これらの取り組みには、ＧＯによって認識されないＣＤ３３スプライスバリアントのターゲティング、並びに他の血液悪性腫瘍におけるＣＤ３３＋腫瘍細胞、様々な疾患におけるＣＤ３３＋骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、及びアルツハイマー病における正常なＣＤ３３＋ミクログリア細胞のターゲティングが含まれる（Ｗａｌｔｅｒ、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２０２０年、２０（９）：９５５～９５８頁）。
しかしながら、一部の患者は、エクソン２を欠き、ＣＤ３３ΔＥ２と称されるＣＤ３３のトランケートされたスプライスバリアント型を発現する。ＣＤ３３ΔＥ２は、正常な造血細胞及び白血病細胞においてｍＲＮＡレベルで同定されている。後者に関して、ＣＤ３３ΔＥ２ｍＲＮＡは、試験された２９個のＡＭＬ患者検体のうちの２９個で同定され、ヒトＡＭＬにおいて普遍的な発現を示している。ＣＤ３３ΔＥ２は、ＣＤ３３のＣ２セットＩｇ様ドメインを含むが、ＶセットＩｇ様ドメインを含まない（図１）。ｍＲＮＡレベルで同定されたさらなるスプライスバリアントには、ＣＤ３３Ｅ７ａ及びＣＤ３３ΔＥ２／Ｅ７ａが含まれる。ＣＤ３３Ｅ７ａは、ＣＤ３３の細胞内ドメインのトランケーションをもたらす選択的エクソン７（Ｅ７ａ）を使用する。ＣＤ３３ΔＥ２／Ｅ７ａはエクソン２を欠き、また、ＣＤ３３の細胞内ドメインのトランケーションも有する。
しかしながら、現在、ほぼ全ての商業的な診断用ＣＤ３３抗体及び現在臨床的に利用可能なＣＤ３３抗体ベースの治療法は、エクソン２によってコードされる免疫優性なＶセットＩｇ様ドメインを認識する（図１）。すなわち、ＶセットＩｇ様ドメインを欠くＣＤ３３ΔＥ２及び他のＣＤ３３タンパク質は、ほとんどの任意の商業的及び臨床的に利用可能なＣＤ３３抗体によって認識されない。このことは、これらの抗体が、ＣＤ３３ΔＥ２などのＶセットドメインを欠く、より短い形態のＣＤ３３を認識しないことを意味する。このことは、ＣＤ３３ΔＥ２の選択的転写及びＣＤ３３ＦＬの翻訳の減少をもたらす、ＣＤ３３遺伝子における一塩基多型を有する患者が、集中化学療法へのゲムツズマブオゾガマイシン（これはまた、ＣＤ３３のＶセットドメインにも結合する。）の追加から恩恵を受けなかったという小児ＡＭＬにおけるある臨床試験において行われた観察を説明することができる。
ＶセットＩｇ様ドメインの存在／非存在に関係なく、ＣＤ３３タンパク質のＣ２セットＩｇ様ドメインを認識し、結合する抗体（例えば、ＣＤ３３ＰＡＮ抗体と称される、ＣＤ３３ΔＥ２及びＣＤ３３ＦＬアイソフォームに結合する抗体）は、全てのＣＤ３３アイソフォームのターゲティングに大きな進歩をもたらし、より広範な治療効果をもたらす。これらのｐａｎ結合抗体はまた、細胞膜のより近くに結合するため、利点を提供する（図１）。いくつかの治療標的について、標的化エピトープの特異性が、抗体ベースの治療にとって非常に重要であることが示されており、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５及びＥｐＣＡＭについて示されているように、膜近位エピトープは、膜遠位エピトープよりも強力な抗腫瘍効果をもたらす。例えば、Ｃｌｅａｒｙら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１７年；１９８（１０）：３９９９～４０１１頁；Ｌｉｎ、Ｐｈａｒｍｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｐｅｒｓ Ｍｅｄ．２０１０年；３：５１～５９頁；Ｈａｓｏら、Ｂｌｏｏｄ．２０１３年；１２１（７）：１１６５～１１７４頁；及びＢｌｕｅｍｅｌら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１０年；５９（８）：１１９７～１２０９頁を参照のこと。
本開示は、ＶセットＩｇ様ドメインが存在するかどうかに関係なく、ＣＤ３３のＣ２セットＩｇ様ドメインに結合する新規のｐａｎ結合抗体を提供する。これらのＣＤ３３ＰＡＮ結合抗体には、１Ｈ７、６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５及び２Ｄ５が含まれる。
本開示はまた、ＣＤ３３のＶセットＩｇ様ドメインに結合する抗ＣＤ３３抗体も提供する。これらのＶセット結合剤には、５Ｄ１２及び８Ｆ５が含まれ、これらは、ＣＤ３３ＦＬを発現する患者に追加の診断及び治療選択肢を提供する。
本開示はまた、Ｖセットドメインが存在しない場合のみであるが、Ｃ２セットドメインに結合する抗体も提供する。これらのＣ２セット結合剤には、１２Ｂ１２、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１及び７Ｅ７が含まれる。
特定の実施形態では、本明細書に開示されている抗体は、ＣＤ３３に結合し、以下の特徴のうちの１つ以上を有する：（ａ）組換えＣＤ３３に結合する；（ｂ）末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）又は他の骨髄性若しくは非骨髄性ヒト細胞の表面上の内因性ＣＤ３３に結合する；（ｃ）がん細胞の表面上の内因性ＣＤ３３に結合する；（ｄ）ＡＭＬがん細胞の表面上の内因性ＣＤ３３に結合する；（ｅ）ＶセットＩｇ様ドメイン（例えば、ＣＤ３３ＦＬにおける）の存在下でＣＤ３３ Ｃ２セットＩｇ様ドメイン内のエピトープに結合する；（ｆ）ＶセットＩｇ様ドメイン（例えば、ＣＤ３３ΔＥ２における）の非存在下でＣＤ３３ Ｃ２セットＩｇ様ドメイン内のエピトープに結合する；（ｇ）ＣＤ３３の膜近位エピトープに結合する；（ｈ）１Ｈ７のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｉ）６Ｈ９のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｊ）９Ｇ２のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｋ）２Ｄ５のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｌ）５Ｄ１２のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｍ）３Ａ５－Ｖ１のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｎ）３Ａ５－Ｖ２のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｏ）７Ｄ５－Ｖ１のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｐ）７Ｄ５－Ｖ２のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｑ）８Ｆ５のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｒ）１２Ｂ１２のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｓ）１１Ｄ５のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｔ）１３Ｅ１１のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｕ）１１Ｄ１１のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｖ）７Ｅ７のＶＬ鎖及びＶＨ鎖を含む；（ｗ）１Ｈ７のＣＤＲセットを含む；（ｘ）６Ｈ９のＣＤＲセットを含む；（ｙ）９Ｇ２のＣＤＲセットを含む；（ｚ）２Ｄ５のＣＤＲセットを含む；（ａａ）５Ｄ１２のＣＤＲセットを含む；（ｂｂ）３Ａ５－Ｖ１のＣＤＲセットを含む；（ｃｃ）３Ａ５－Ｖ２のＣＤＲセットを含む；（ｄｄ）７Ｄ５－Ｖ１のＣＤＲセットを含む；（ｅｅ）７Ｄ５－Ｖ２のＣＤＲセットを含む；（ｆｆ）８Ｆ５のＣＤＲセットを含む；（ｇｇ）１２Ｂ１２のＣＤＲセットを含む；（ｈｈ）１１Ｄ５のＣＤＲセットを含む；（ｉｉ）１３Ｅ１１のＣＤＲセットを含む；（ｊｊ）１１Ｄ１１のＣＤＲセットを含む；（ｋｋ）７Ｅ７のＣＤＲセットを含む；並びに／又は（ｌｌ）本明細書に開示されたマウス抗体のヒト化配列を含む。ＣＤＲセットは、本明細書の他の場所で提供されているように、「セット５」、ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、Ｎｏｒｔｈ、又はＣｈｏｔｈｉａによって予測される通りであり得る。
本明細書に記載された様々な形態の抗体及びその結合断片は、本明細書ではＣＤ３３ターゲティング剤と称され得る。
本開示の重要な態様を強調してきたが、本開示を実施するための以下のさらなる詳細及び選択肢が以下のように提供されている；（ｉ）ＣＤ３３抗体；（ｉｉ）抗ＣＤ３３抗体コンジュゲート；（ｉｉｉ）抗ＣＤ３３多重特異性抗体；（ｉｖ）製剤；（ｖ）免疫細胞試料採取及び細胞濃縮；（ｖｉ）組換えタンパク質を発現するように細胞集団を遺伝子修飾すること；（ｖｉｉ）細胞活性化培養条件；（ｖｉｉｉ）エクスビボで製造された細胞製剤；（ｉｘ）使用方法；（ｘ）対照集団に由来する参照レベル；（ｘｉ）例示的な実施形態；（ｘｉｉ）実験例；並びに（ｘｉｉｉ）最終パラグラフ。これらの見出しは、構成の目的のためにのみ提供されており、本開示の範囲又は解釈を限定するものではない。
（ｉ）ＣＤ３３抗体。ＣＤ３３とは、細胞内でのＣＤ３３前駆体タンパク質のプロセシングから生じる任意の天然の成熟ＣＤ３３を指す。ＣＤ３３陽性細胞とは、その表面上にＣＤ３３を発現する任意の細胞を指す。ＣＤ３３陽性がんとは、それらの表面上にＣＤ３３を発現する１つ以上の細胞を含むがんを指す。ＣＤ３３陽性がんの例には、白血病、骨髄肉腫及びリンパ腫が含まれる。このようながんのより具体的な例には、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、骨髄増殖性新生物、巨核球性白血病、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）及びその他の形質細胞異常増殖症、肥満細胞疾患、肥満細胞白血病、肥満細胞肉腫並びに骨髄肉腫が含まれる。
本開示は、ＶセットＩｇ様ドメインの存在／非存在に関係なくＣＤ３３のＣ２セットＩｇ様ドメインを標的とする抗体及びＣＤ３３のＶセットＩｇ様ドメインを標的とする抗体を提供する。Ｖセットドメインの非存在下でのみＣ２セットドメインに結合する抗体も提供されている。ある特定の例では、抗体の組合せは、対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現する又は欠くかどうかに基づいて選択され得る。例えば、対象がＶセットドメインを発現する場合、６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上を含む併用療法が、５Ｄ１２及び８Ｆ５のうちの１つ以上と組み合わせて選択され得る。対象がＶセットドメインを発現しない場合、６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上を含む併用療法が、１２Ｂ１２、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１及び７Ｅ７のうちの１つ以上と組み合わせて選択され得る。
天然に存在する抗体構造単位には四量体が含まれる。各四量体は２対のポリペプチド鎖を含み、各対は１本の軽鎖及び１本の重鎖を有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識及びエピトープ結合に関与する可変領域を含む。可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる３つの超可変領域によって接合された比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示す。各対の２つの鎖からのＣＤＲは、特定のエピトープへの結合を可能にするフレームワーク領域によって整列されている。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖及び重鎖可変領域の両方は、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、典型的に、免疫学的関心のあるタンパク質のＫａｂａｔ配列（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９８７年及び１９９１年）、又はＣｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１～９１７頁、１９８７年；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７８～８８３頁、１９８９年の定義に従う。
ＣＤＲの明確な描写及び抗体の結合部位を含む残基の同定は、抗体の構造を解明すること及び／又は抗体－エピトープ複合体の構造を解明することによって達成され得る。特定の実施形態では、これは、Ｘ線結晶構造解析などの方法によって達成され得る。或いは、ＣＤＲは、既知の抗体（直鎖状配列）との比較によって決定され、結晶構造の解明に頼ることはない。結合に関与する残基を決定するために、標的に結合したＦａｂ（抗体断片）の共結晶構造が任意選択的に決定され得る。ＡＢｏｄｙＢｕｉｌｄｅｒなどのソフトウェアプログラムも使用され得る。
各鎖のカルボキシ末端部分は、特に重鎖（Ｆｃ）におけるエフェクター機能に関与し得る定常領域を規定する。エフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；並びにＢ細胞活性化が含まれる。
全長の軽鎖及び重鎖内で、可変領域及び定常領域は、アミノ酸の「Ｊ」領域によって接合され、重鎖はまた、アミノ酸の「Ｄ」領域も含む。例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．、ｅｄ．、第２版、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９年））を参照のこと。
ヒト軽鎖は、カッパ及びラムダ軽鎖として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ又はイプシロンとして分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥとして定義する。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む、いくつかのサブクラスを有する。ＩｇＭは、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含むサブクラスを有する。ＩｇＡは同様に、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含むサブクラスに細分される。
示されているように、抗体は抗原上のエピトープに結合する。抗原という用語は、抗体が結合することができる分子又は分子の一部を指す。エピトープは、抗体の可変領域が結合する抗原の領域である。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル又はスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面グルーピングを含むことができ、特定の三次元構造特性及び／又は特定の電荷特性を有することができる。抗原がタンパク質又はペプチドである場合、エピトープは、抗体の可変領域と接触するそのタンパク質又はペプチド内に特定のアミノ酸を含む。
特定の実施形態では、エピトープは、抗体の対応する可変領域が結合するＣＤ３３上の結合部位を表す。可変領域は、直線状エピトープ（例えば、５～１２個の連続したアミノ酸のストレッチを含むエピトープ）に結合する又は可変領域は、タンパク質標的のいくつかの短いストレッチの空間的配置によって形成される三次元構造に結合する。可変領域によって、例えば、抗体又は抗体断片のエピトープ認識部位又はパラトープによって認識される三次元エピトープは、エピトープ分子の三次元表面の特徴であると考えられ得る。これらの特徴は、可変領域の対応する結合部位に（内に）正確に適合し、それによって可変領域とその標的タンパク質（より一般的には、抗原）との間の結合が促進される。特定の実施形態では、エピトープは、２つのレベルを有すると考えられ得る：（ｉ）抗体の可変領域が、結合する抗原に投じる影であると考えられ得る「カバーされたパッチ」；及び（ｉｉ）結合を促進する個々の関与する側鎖及び骨格残基。次いで結合は、イオン相互作用、水素結合及び疎水性相互作用の集合に起因する。
特定の実施形態では、本開示の抗体のエピトープ（すなわち、抗体が結合するエピトープ）は、ＣＤ３３のＣ２セットＩｇ様ドメイン内に見出される。エピトープは「ｐａｎ結合」部位を提供し、これは、ＣＤ３３分子もＶセットＩｇ様ドメインを含む（例えば、ＣＤ３３ＦＬである場合）又は含まない（例えば、ＣＤ３３ΔＥ２である場合）かどうかに関係なく、抗体が結合することを意味する（図１）。特定の実施形態では、Ｃ２セットＩｇ様ドメイン上のエピトープは、膜近位エピトープである。特定の実施形態では、膜近位エピトープは、膜貫通領域の１１５残基以内；膜貫通領域の１００残基以内；膜貫通領域の７５残基以内；膜貫通領域の５０残基以内；膜貫通領域の２５残基以内又は膜貫通領域の１５残基以内にある。特定の実施形態では、本開示の抗体のエピトープは、ＣＤ３３のＶセットＩｇ様ドメイン内に見出される。
特定の実施形態では、「結合する」は、可変領域が、１０－８Ｍ以下、特定の実施形態では１０－５Ｍ～１０－１３Ｍ、特定の実施形態では１０－５Ｍ～１０－１０Ｍ、特定の実施形態では１０－５Ｍ～１０－７Ｍ、特定の実施形態では１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ又は特定の実施形態では１０－９Ｍ～１０－１３Ｍの解離定数（Ｋｄ又はＫＤ）で、その標的エピトープと会合することを意味する。この用語は、可変領域が、存在する他の生体分子に結合しないことを示すためにさらに使用され得る（例えば、これは、１０－４Ｍ以上、特定の実施形態では１０－４Ｍ～１Ｍの解離定数（Ｋｄ）で他の生体分子に結合する。）。
特定の実施形態では、Ｋｄは、ＢＩＡｃｏｒｅを使用して特徴付けられ得る。例えば、特定の実施形態では、Ｋｄは、１０応答単位（ＲＵ）での固定化抗原ＣＭ５チップと共に、２５℃でＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用した表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定され得る。簡潔に述べると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、供給者の説明書に従って、Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化され得る。抗原は、１０応答単位（ＲＵ）のカップリングタンパク質を得るために５μｌ／分の流量での注入の前に、１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で５μｇ／ｍＬ（０．２μＭ）に希釈され得る。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンが、未反応基を遮断するために注入され得る。反応速度測定のために、Ｆａｂの２倍連続希釈液（０．７８ｎＭ～５００ｎＭ）が、２５℃の０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を有するＰＢＳ中に２５μＬ／分の流量で注入される。会合速度（Ｋｏｎ）及び解離速度（Ｋｏｆｆ）は、単純な１対１のラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合センサグラム及び解離センサグラムを同時に当てはめることによって計算され得る。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比率Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎとして計算され得る。例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５～８８１頁、１９９９年を参照のこと。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによるｏｎ速度が１０６Ｍ－１ｓ－１を超える場合、ｏｎ速度は、ストップフローを備えた分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ－ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計で測定される場合に、増加する抗原濃度の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ中２０ｎＭの抗－抗原抗体（Ｆａｂ型）、ｐＨ７．２の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加又は減少を測定する蛍光消光技術を使用することによって決定され得る。
特に指示がない限り、「抗体」という用語は、（上記の２つの全長重鎖及び２つの全長軽鎖を有する抗体に加えて）そのバリアント、誘導体及び断片を含み、それらの例は以下に記載されている。さらに、明示的に除外されない限り、抗体には、それぞれ、モノクローナル抗体、ヒト又はヒト化抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、多重特異性抗体、ポリクローナル抗体、線状抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体、キメラ抗体、抗体融合体及びそれらの断片が含まれ得る。特定の実施形態では、抗体には、抗体のオリゴマー又は多重型が含まれ得る。
モノクローナル抗体とは、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一であり、かつ／又は同じエピトープに結合するが、例えば、天然に存在する突然変異を含有する又はモノクローナル抗体調製物の産生中に発生する、想定されるバリアント抗体を除いて、このようなバリアントは一般に少量で存在する。異なるエピトープに対して指向される異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一のエピトープに対して指向される。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られるものとして抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるものではない。例えば、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含む、様々な技術によって作製され得る。
「ヒト抗体」は、ヒト若しくはヒト細胞によって産生される又はヒト抗体レパートリー若しくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト供給源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を含む抗体である。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位集団からである。配列の下位集団は、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１～３２４２頁、Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ．（１９９１年）、ｖｏｌｓ．１～３にあるような下位集団であり得る。特定の実施形態では、ＶＬについて、下位集団は、Ｋａｂａｔら（上記）にあるような下位集団カッパＩである。特定の実施形態では、ＶＨについて、下位集団は、Ｋａｂａｔら（上記）にあるような下位集団ＩＩＩである。
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＣＤＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含む、キメラ抗体を指す。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
ヒト化抗体及びそれらの作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９～１６３３、２００８年で概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３～３２９頁、１９８８年；Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９～１００３３頁、１９８９年；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５～３４頁、２００５年（ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）移植について記載している）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９～４９８頁、１９９１年（「リサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」について記載している）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３～６０頁、２００５年（「ＦＲシャフリング」について記載している）；並びにＯｓｂｏｕｒｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１～６８頁、２００５年及びＫｌｉｍｋａら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、８３：２５２～２６０頁、２０００年（ＦＲシャフリングへの「誘導選択」アプローチについて記載している）にさらに記載されている。ＥＰ－Ｂ－０２３９４００は、第１の抗体の１つ以上のＣＤＲ配列が、その抗体ではない、例えば、別の抗体の配列のフレームワーク内に位置している、「ＣＤＲ移植」についてのさらなる説明を提供している。
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６頁、１９９３年を参照のこと。）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定の下位集団のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｉ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５頁、１９９２年；及びＰｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２６２３頁、１９９３年を参照のこと。）；ヒト成熟（体細胞突然変異した）フレームワーク領域又はヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９～１６３３頁、２００８年を参照のこと。）；並びにＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８～１０６８４頁、１９９７年；及びＲｏｓｏｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１～２２６１８頁、１９９６年を参照のこと。）が含まれる。
本明細書で提供されている抗体に関して、以下のＣＤＲセットが提供されている。ＣＤＲセットとは、一緒になってＣＤ３３への結合を生じる３つの軽鎖ＣＤＲ及び３つの重鎖ＣＤＲを指す。
Figure 2023519932000002
Figure 2023519932000003
Figure 2023519932000004
Figure 2023519932000005
Figure 2023519932000006
Figure 2023519932000007
Figure 2023519932000008
Figure 2023519932000009
Figure 2023519932000010
Figure 2023519932000011
Figure 2023519932000012
Figure 2023519932000013
Figure 2023519932000014
Figure 2023519932000015
Figure 2023519932000016
Figure 2023519932000017
特定の実施形態では、１Ｈ７抗体は、配列：
Figure 2023519932000018
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000019
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、６Ｈ９抗体は、配列：
Figure 2023519932000020
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000021
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、９Ｇ２抗体は、配列：
Figure 2023519932000022
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000023
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、２Ｄ５抗体は、配列：
Figure 2023519932000024
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000025
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、３Ａ５バリアント１抗体は、配列：
Figure 2023519932000026
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000027
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、３Ａ５バリアント２抗体は、配列：
Figure 2023519932000028
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000029
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、７Ｄ５バリアント１抗体は、配列：
Figure 2023519932000030
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000031
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、７Ｄ５バリアント２抗体は、配列：
Figure 2023519932000032
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000033
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３Ｖセット抗体は５Ｄ１２を含む。特定の実施形態では、５Ｄ１２抗体は、配列：
Figure 2023519932000034
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000035
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３Ｖセット抗体は８Ｆ５を含む。特定の実施形態では、８Ｆ５抗体は、配列：
Figure 2023519932000036
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000037
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３Ｃ２セット抗体は１２Ｂ１２を含む。特定の実施形態では、１２Ｂ１２抗体は、配列：
Figure 2023519932000038
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000039
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３Ｃ２セット抗体は１１Ｄ１１を含む。特定の実施形態では、１１Ｄ１１抗体は、配列：
Figure 2023519932000040
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000041
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３Ｃ２セット抗体は７Ｅ７を含む。特定の実施形態では、７Ｅ７抗体は、配列：
Figure 2023519932000042
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000043
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３Ｃ２セット抗体は１１Ｄ５を含む。特定の実施形態では、１１Ｄ５抗体は、配列：
Figure 2023519932000044
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000045
 を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３Ｃ２セット抗体は１３Ｅ１１を含む。特定の実施形態では、１３Ｅ１１抗体は、配列：
Figure 2023519932000046
 を含む可変軽鎖及び配列：
Figure 2023519932000047
 を含む可変重鎖を含む。
本明細書に開示された抗体は、様々な形態の関連する結合ドメイン分子を調製するために利用され得る。例えば、特定の実施形態は、抗体の結合断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及び一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）又は本明細書に記載されたエピトープに特異的に結合する免疫グロブリンの任意の生物学的に有効な断片を含むことができる。
特定の実施形態では、抗体断片が使用される。「抗体断片」は、エピトープに結合する能力を保持する完全又は全長抗体の一部分を意味する。抗体断片は、本明細書に記載されているように、無傷抗体のタンパク質消化並びに組換え宿主細胞（例えば、哺乳動物懸濁細胞株、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はファージ）による産生を含む様々な技術によって作製され得る。抗体断片は、無傷抗体と同じ方法でそれらの結合特性についてスクリーニングされ得る。抗体断片の例には、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ及び線状抗体が含まれる。
一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、短いリンカーペプチドにより接続された免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の可変領域の融合タンパク質である。Ｆｖ断片は、抗体の単一のアームのＶＬ及びＶＨドメインを含むが、定常領域を欠く。Ｆｖ断片の２つのドメインである、ＶＬ及びＶＨは、別個の遺伝子によりコードされるが、それらは、例えば、組換え方法を使用して、ＶＬ及びＶＨ領域が一価分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ））を形成するために対合する、単一のタンパク質鎖となることを可能とする合成リンカーにより接合され得る。Ｆｖ及びｓｃＦｖに関するさらなる情報について、例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３～４２６頁、１９８８年；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９～５８８３頁、１９８８年；Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｖｏｌ．１１３、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ（ｅｄｓ．）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）（１９９４年）２６９～３１５頁；ＷＯ１９９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；並びに米国特許第５，５８７，４５８号を参照のこと。
ｓｃＦｖのＶＬ及びＶＨを接続するために使用されるリンカー配列は、一般に、５～３５アミノ酸の長さである。特定の実施形態では、ＶＬ－ＶＨリンカーは、５～３５、１０～３０アミノ酸又は１５～２５アミノ酸を含む。リンカーの長さの変化は、活性を保持又は増強する場合があり、活性研究において優れた有効性をもたらす。ｓｃＦｖのリンカー配列は、一般にＧｌｙ－Ｓｅｒリンカーであり、本明細書の別の場所でより詳細に記載されている。
抗体ベースの結合ドメインフォーマットのさらなる例には、ｓｃＦｖベースのグラバボディ（ｇｒａｂａｂｏｄｙ）及び可溶性ＶＨドメイン抗体が含まれる。これらの抗体は、重鎖可変領域のみを使用して結合領域を形成する。例えば、Ｊｅｓｐｅｒｓら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：１１６１頁、２００４年；Ｃｏｒｔｅｚ－Ｒｅｔａｍｏｚｏら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４：２８５３頁、２００４年；Ｂａｒａｌら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１２：５８０頁、２００６年；及びＢａｒｔｈｅｌｅｍｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：３６３９頁、２００８年を参照のこと。
Ｆａｂ断片は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインを含む一価抗体断片である。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片である。インビボ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察について、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。ダイアボディは、二価であり得る２つのエピトープ結合性部位を含む。例えば、ＥＰ０４０４０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；及びＨｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４～６４４８頁、１９９３年を参照のこと。デュアルアフィニティーリターゲティング抗体（ｄｕａｌ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ）（ＤＡＲＴ（商標）；ダイアボディフォーマットに基づくが、さらなる安定性のために、Ｃ末端のジスルフィド架橋を特徴とする（Ｍｏｏｒｅら、Ｂｌｏｏｄ、１１７：４５４２～５１頁、２０１１年））も使用され得る。抗体断片はまた、単離されたＣＤＲも含むことができる。抗体断片の概説について、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、９：１２９～１３４頁、２００３年を参照のこと。
特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が、抗体のＦｃ領域内に導入され得、それによってＦｃ領域バリアントが生成され得る。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含むことができる。多数のＦｃ修飾が当該技術分野で公知であり、そのような可能な修飾の代表的なサンプリングが本明細書に記載されている。
特定の実施形態では、バリアント（Ｆｃバリアントを含む）は、投与の利益をもたらすために参照配列から修飾されている。例示的な投与の利益には、（１）タンパク質分解に対する感受性の低下、（２）酸化に対する感受性の低下、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性の変化、（４）結合親和性の変化、（５）免疫原性の低下及び／又は（６）半減期の延長が含まれ得る。以下の開示は、これらの修飾を抗体への適用に関して記載しているが、別の特定の抗ＣＤ３３結合ドメインフォーマット（例えば、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体）に適用可能な場合、修飾は、これらの他のフォーマットにも適用され得る。
特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体に対する親和性を増加させるために突然変異され得る。Ｆｃ受容体に対する親和性を増加させる例示的な突然変異には、Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ（ＧＡＳＤＡＬＩＥ）が含まれる。Ｓｍｉｔｈら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ、１０９（１６）、６１８１～６１８６頁、２０１２年。特定の実施形態では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位及び／又は３３４位（残基のＥＵ番号付け）における置換を有するＦｃ領域を含む。特定の実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２及びＩｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８～４１８４頁、２０００年に記載されているように、改変されたＣ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす改変がＦｃ領域において行われる。
特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂ」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換残基は、抗体のアクセス可能な部位に存在する。これらの残基をシステインで置換することにより、したがって反応性チオール基が抗体のアクセス可能な部位に配置され、以下にさらに記載されているように、イムノコンジュゲートを作製するために、薬物部分又はリンカー－薬物部分などの他の分子と抗体をコンジュゲートするために使用され得る。特定の実施形態では、重鎖Ｆｃ領域の残基５４００（ＥＵ番号付け）が選択される。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているように生成され得る。
Ｆｃ領域に（直接的又は間接的に）結合されたフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体バリアントが提供されている。例えば、このような抗体中のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％又は２０％～４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されている、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域内の２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小規模な配列変化に起因して、２９７位から±３アミノ酸の上流又は下流、すなわち、２９４位から３００位の間に位置してもよい。このようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＷＯ２００２／０３１１４０；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９～１２４９頁（２００４年）；及びＹａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４頁（２００４年）を参照のこと。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例には、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３～５４５頁、１９８６年、及びアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４頁、２００４年；Ｋａｎｄａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、９４（４）：６８０～６８８頁、２００６年；及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照のこと。）が含まれる。
特定の実施形態では、修飾抗体は、１つ以上のアミノ酸が非アミノ酸成分で置換されているもの又はアミノ酸が官能基にコンジュゲートされている若しくは他の様態で官能基がアミノ酸に会合しているものを含む。修飾アミノ酸は、例えば、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分にコンジュゲートされたアミノ酸又は有機誘導体化剤にコンジュゲートされたアミノ酸であり得る。アミノ酸は、例えば、組換え産生中に翻訳と同時に若しくは翻訳後に修飾され得る（例えば、哺乳動物細胞における発現中のＮ－Ｘ－Ｓ／ＴモチーフにおけるＮ－結合グリコシル化）又は合成手段により修飾され得る。修飾アミノ酸は配列の内部に存在し得る又は配列の末端に存在し得る。修飾は亜硝酸化構築物も含む。
特定の実施形態では、バリアントは、グリコシル化部位の数及び／又は型が、参照配列のアミノ酸配列と比べて変化したグリコシル化バリアントを含む。特定の実施形態では、グリコシル化バリアントは、参照配列よりも多い又は少ない数のＮ－結合グリコシル化部位を含む。Ｎ－結合グリコシル化部位は、配列：Ａｓｎ－Ｘ－Ｓｅｒ又はＡｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒにより特徴付けられ、Ｘとして表されるアミノ酸残基はプロリンを除く任意のアミノ酸残基であり得る。この配列を作製するためのアミノ酸残基の置換は、Ｎ－結合炭水化物鎖の付加のための潜在的な新しい部位を提供する。或いは、この配列を削除する置換は、存在するＮ－結合炭水化物鎖を除去する。また、１つ以上のＮ－結合グリコシル化部位（例えば、天然に存在するもの）が削除され、１つ以上の新しいＮ－結合部位が作製されるＮ－結合炭水化物鎖の再配列も提供されている。さらなる抗体バリアントは、１つ以上のシステイン残基が、削除されている又は参照配列と比較して別のアミノ酸（例えば、セリン）に置換されているシステインバリアントを含む。これらのシステインバリアントは、不溶性封入体の単離後のように、抗体を再び折り重ねて生物学的に活性な立体配座にすべき場合に有用となり得る。これらのシステインバリアントは、一般に、参照配列より少ないシステイン残基を有し、典型的に、不対システインから生じる相互作用を最少化するために偶数を有する。
ＰＥＧ化は、特に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー鎖が、タンパク質などの他の分子と共有結合によりコンジュゲートするプロセスである。タンパク質をＰＥＧ化するいくつかの方法が文献に報告されている。例えば、タンパク質のリジン残基及びＮ末端の遊離アミン基をＰＥＧ化するためにＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）－ＰＥＧが使用されており；還元剤の存在下でタンパク質のアミノ末端をＰＥＧ化するためにアルデヒド基を有するＰＥＧが使用されており；タンパク質のシステイン残基の遊離チオール基を選択的にＰＥＧ化するためにマレイミド官能基を有するＰＥＧが使用されており；アセチル－フェニルアラニン残基の部位特異的ＰＥＧ化が実施され得る。
タンパク質のＰＥＧとの共有結合は、生体内のタンパク質の半減期を増加させるための有用な方法であることが証明されている（Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ，Ａ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．、１９８４年、７：１７５～１８６頁；Ｈｅｒｓｈｆｉｅｌｄ，Ｍ．Ｓ．ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１９８７年、３１６：５８９～５９６頁；及びＭｅｙｅｒｓ，Ｆ．Ｊ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．、４９：３０７～３１３頁、１９９１年）。ＰＥＧをタンパク質と結合させると、分子を酵素分解から保護するだけでなく、生体からのそれらのクリアランス速度も低下する。タンパク質と結合させるＰＥＧのサイズは、タンパク質の半減期に大きな影響を与える。ＰＥＧ化がクリアランスを減少させる能力は、一般に、ＰＥＧ基がタンパク質にいくつ結合しているかではなく、改変されたタンパク質の総分子量に応じる。通常、ＰＥＧが大きいほど、結合させたタンパク質のインビボ半減期は長くなる。さらに、ＰＥＧ化はタンパク質凝集を減少させ（Ｓｕｚｕｋｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈ．Ａｃｔａ ７８８；２４８頁、１９８４年）、タンパク質免疫原性を変化させ（Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：３５８２頁、１９７７年）、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１６２２１に記載されているようにタンパク質溶解度を増加させることもできる。
目標とする循環半減期を有するタンパク質を産生するのに適したいくつかのサイズのＰＥＧが市販されている（Ｎｅｋｔａｒ Ａｄｖａｎｃｅｄ ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ Ｃａｔａｌｏｇ ２００５～２００６年；及びＮＯＦ ＤＤＳ Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｖｅｒ７．１）。ｍＰＥＧスクシンイミジルスクシネート、ｍＰＥＧスクシンイミジルカーボネート及びｍＰＥＧプロピオンアルデヒドなどのＰＥＧアルデヒドを含む、様々な活性ＰＥＧが使用されている。
特定の実施形態では、抗体は、アミノ酸を改変していない同じＦｃポリペプチドを含有する同様の抗体の半減期と比較して、改変されたＦｃポリペプチドを含有する抗体のインビボ半減期を延長するアミノ酸改変を含むＦｃポリペプチドに融合され得る又はカップリングされ得る。特定の実施形態では、Ｆｃポリペプチドのアミノ酸改変は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｍ４２８Ｌ及び／又はＮ４３４Ｓを含むことができ、一緒に、別々に又は任意の組合せで使用され得る。例えば、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓは、Ｚａｌｅｖｓｋｙら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２８、１５７～１５９頁、２０１０年に記載されているように、血清中の抗体の半減期を増加させる一対の突然変異である。有用であり得る他の改変は、米国特許第７，０８３，７８４号、米国特許第７，６７０，６００号、米国特許公開第２０１０／０２３４５７５号、ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０７０１４６及びＺｗｏｌａｋ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ７：１５５２１頁、２０１７年に記載されている。特定の実施形態では、Ｆｃポリペプチドにおける以下のアミノ酸位置のうちの１つでの任意の置換は、半減期を延長するＦｃ改変とみなされ得る：２５０、２５１、２５２、２５９、３０７、３０８、３３２、３７８、３８０、４２８、４３０、４３４、４３６。これらの改変の各々又はこれらの改変の組合せは、本明細書に記載されている二重特異性抗体の半減期を延長するために使用され得る。
特定の実施形態では、Ｆｃ修飾には、ｈｕＩｇＧ４ ＰｒｏＡｌａＡｌａ、ｈｕＩｇＧ２ｍ４及び／又はｈｕＩｇＧ２ｓｉｇｍａ突然変異が含まれる。
特定の実施形態では、本明細書に開示されている抗体は、Ｐｅｃｈｍａｎら（Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２９４：Ｒ１２３４－Ｒ１２３９、２００８年）に記載されているＤａｅｄａｌｕｓ発現系を使用して形成される。Ｄａｅｄａｌｕｓ系は、ゲノムサイレンシングを低減又は予防し、デシグラムレベルの発現の安定性を維持するのを助けるために、導入ベクターにおける最小化遍在性クロマチンオープニングエレメントの含有を利用する。この系は、２９３ Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅなどの無血清適応ヒト懸濁細胞株の分泌経路を利用することによる他のタンパク質産生方法の面倒で時間のかかる工程を回避し得る。最適化レンチウイルスベクターを使用して、７０ｋＤａまでのサイズの適切にフォールディングした翻訳後修飾エンドトキシン非含有タンパク質の２０～１００ｍｇ／ｌの収量が、従来の小規模（１００ｍｌ）の培養において得られ得る。これらの収量において、ほとんどのタンパク質は、構造的、生物物理学的又は治療的用途での使用に直接的に適した単一のサイズ排除クロマトグラフィー工程を使用して精製され得る。Ｂａｎｄａｒａｎａｙａｋｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、３９（２１）２０１１年。一部の場合、本明細書に記載されている方法による製造の純度に起因して、クロマトグラフィーによる精製は必要でなくてもよい。
（ｉｉ）抗ＣＤ３３抗体コンジュゲート。抗ＣＤ３３抗体コンジュゲートには、抗ＣＤ３３免疫毒素、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、抗体－フルオロフォアコンジュゲート及び放射性同位体コンジュゲートが含まれる。
抗ＣＤ３３免疫毒素。特定の実施形態では、抗体はまた、免疫毒素として形成され得る。抗ＣＤ３３免疫毒素には、１つ以上の細胞毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物若しくは動物起源の酵素的に活性な毒素又はそれらの断片）にコンジュゲートされた、本明細書に開示されている抗ＣＤ３３抗体が含まれる。毒素は、細胞に有害な任意の作用物質であり得る。頻繁に使用される植物毒素は、２つのクラス：（１）リシン、アブリン、ヤドリギレクチン及びモデシンなどのホロトキシン（又はクラスＩＩリボソーム不活性化タンパク質）並びに（２）ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質（ＰＡＰ）、サポリン、ブリオジン（Ｂｒｙｏｄｉｎ）１、ブーガニン（ｂｏｕｇａｎｉｎ）及びゲロニンなどのヘミトキシン（クラスＩリボソーム不活性化タンパク質）に分類される。一般的に使用される細菌毒素には、ジフテリア毒素（ＤＴ）及びシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素（ＰＥ）が含まれる。Ｋｒｅｉｔｍａｎ、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２：３１３～３２５頁（２００１年）。毒素は、本質的に任意の供給源から得られ得、合成産物であってもよい又は天然産物であってもよい。
結合ドメインごとに複数（例えば、４つ）の細胞毒素を含む免疫毒素は、３７℃で３０分間、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）などの過剰の還元試薬を用いて結合ドメインを部分的に還元することによって調製され得、次いで、バッファーは、ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）中の１ｍＭのＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）を含むＳＥＰＨＡＤＥＸ Ｇ－２５樹脂を通して溶出することにより交換され得る。溶出液はさらにＤＰＢＳで希釈され得、結合ドメインのチオール濃度が、５，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）［エルマン試薬］を使用して測定され得る。過剰、例えば５倍のリンカー－細胞毒素コンジュゲートが４℃で添加され１時間おかれ得、コンジュゲーション反応は、かなり過剰、例えば２０倍のシステインの添加によってクエンチされ得る。得られた免疫毒素混合物は、未反応のリンカー－細胞毒素コンジュゲートを除去するために、ＰＢＳ中で平衡化されたＳＥＰＨＡＤＥＸ Ｇ－２５で精製され得、所望の場合、脱塩され、サイズ排除クロマトグラフィーによって精製され得る。次いで、得られた免疫毒素は、例えば、０．２μｍフィルターを通して滅菌濾過され得、保存が望まれる場合、凍結乾燥され得る。
抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、ＣＤ３３発現細胞への薬物部分の標的化送達を可能にし、特定の実施形態では、コンジュゲートされていない薬物の全身投与が、正常細胞に対して許容できないレベルの毒性をもたらす可能性がある、細胞内蓄積を可能にする（Ｐｏｌａｋｉｓ Ｐ．（２００５年）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５：３８２～３８７頁）。
特定の実施形態では、ＡＤＣとは、強力な細胞毒性薬を抗原発現がん細胞に標的化することによって、抗体及び細胞毒性薬の両方の特性を組み合わせ（Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．（２００９年）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ９：９８２～１００４頁）、それにより、有効性を最大化し、オフターゲット毒性を最小化することによって治療指数を高める（Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｊ．及びＳｅｎｔｅｒ Ｐ．Ｄ．（２００８年）Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒ．１４（３）：１５４～１６９頁；Ｃｈａｒｉ，Ｒ．Ｖ．（２００８年）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４１：９８～１０７頁）、標的化された化学療法分子を指す。ＡＤＣの開発に関する考慮事項について説明している、Ｋａｍａｔｈ ＆ Ｉｙｅｒ（Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．３２（１１）：３４７０～３４７９頁、２０１５年）も参照のこと。
ＡＤＣの薬物部分（Ｄ）は、細胞毒性効果又は細胞静止効果を有する任意の化合物、部分又は基を含むことができる。薬物部分は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合又はインターカレーション並びにＲＮＡポリメラーゼ、タンパク質合成及び／又はトポイソメラーゼの阻害を含む機構によって細胞毒性効果及び細胞静止効果を与えることができる。例示的な薬物には、アクチノマイシンＤ、アントラサイクリン、アウリスタチン、カリケアマイシン、カンプトテシン、ＣＣ１０６５、コルヒチン、サイトカラシンＢ、ダウノルビシン、１－デヒドロテストステロン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ドラスタチン、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、エリナフィド、エメチン、エチジウムブロマイド、エトポシド、グラミシジンＤ、グルココルチコイド、リドカイン、メイタンシノイド（モノメチルアウリスタチンＥ［ＭＭＡＥ］；ベドチンを含む）、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ネモルビシン、ＰＮＵ－１５９６８２、プロカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、タキサン、タキソール、テノポシド、テトラカイン、トリコテセン、ビンブラスチン、ビンカアルカロイド、ビンクリスチン並びに細胞傷害活性を有するそれらの立体異性体、同配体、類似体及び誘導体が含まれる。
薬物は、本質的に任意の供給源から得られ得、合成産物であってもよい又は選択された供給源、例えば、植物、細菌、昆虫、哺乳動物若しくは真菌源から単離された天然産物であってもよい。薬物はまた、合成的に修飾された天然産物であってもよい又は天然産物の類似体であってもよい。
本開示のＡＤＣ化合物は、抗ＣＤ３３活性を有するものを含む。特定の実施形態では、ＡＤＣ化合物は、薬物部分にコンジュゲートされた、すなわち共有結合された抗体を含む。特定の実施形態では、抗体は、リンカーを介して薬物部分に共有結合されている。リンカーは、抗体、抗体断片（例えば、抗原結合断片）又は機能的等価物を、薬物部分などの別の部分に連結することができる任意の化学部分を含むことができる。リンカーは、化合物又は抗体が活性のままである条件下で、酸誘導切断、光誘導切断、ペプチダーゼ誘導切断、エステラーゼ誘導切断及びジスルフィド結合切断などの切断を受けやすい可能性がある（切断可能なリンカー）。或いは、リンカーは、切断に対して実質的に耐性であり得る（例えば、安定したリンカー又は切断不可能なリンカー）。一部の態様では、リンカーは、プロチャージリンカー、親水性リンカー又はジカルボン酸ベースのリンカーである。ＡＤＣは、有効用量の薬物をがん細胞に選択的に送達し、それにより、治療指数（「治療ウィンドウ」）を増加させながら、より高い選択性、すなわち、より低い有効用量が達成され得る。
ＡＤＣを調製するために、リンカー－細胞毒素コンジュゲートは、Ｄｏｒｏｎｉｎａら（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１７：１１４～１２４頁、２００６年）によって記載されているものと同様の従来の方法によって作製され得る。抗体ごとに複数（例えば、４つ）の薬物を含む抗体－薬物コンジュゲートは、３７℃で３０分間、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）などの過剰の還元試薬を用いて抗体を部分的に還元することによって調製され得、次いで、バッファーは、ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）中の１ｍＭのＤＴＰＡを含むＳＥＰＨＡＤＥＸ Ｇ－２５樹脂を通して溶出することにより交換され得る。溶出液はさらにＤＰＢＳで希釈され得、抗体のチオール濃度が、５，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）［エルマン試薬］を使用して測定され得る。過剰、例えば５倍のリンカー－細胞毒素コンジュゲートが４℃で添加され１時間おかれ得、コンジュゲーション反応は、かなり過剰、例えば２０倍のシステインの添加によってクエンチされ得る。得られたＡＤＣ混合物は、未反応のリンカー－細胞毒素コンジュゲートを除去するために、ＰＢＳ中で平衡化されたＳＥＰＨＡＤＥＸ Ｇ－２５で精製され得、所望の場合、脱塩され、サイズ排除クロマトグラフィーによって精製され得る。次いで、得られたＡＤＣは、例えば、０．２μｍフィルターを通して滅菌濾過され得、保存が望まれる場合、凍結乾燥され得る。
抗ＣＤ３３フルオロフォアコンジュゲートは、蛍光標識に連結したＣＤ３３結合ドメインを含む。蛍光標識は、任意の適切な標識又は例えば、光学的、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学的又は化学的手段によって検出できる検出可能な基を含むことができる。
蛍光標識は、細胞の染色、同定、画像化及び単離の用途において特に有用であり得る。例示的な蛍光標識には、青色蛍光タンパク質（例えば、ｅＢＦＰ、ｅＢＦＰ２、アジュライト、ｍＫａｌａｍａ１、ＧＦＰｕｖ、サファイア、Ｔ－サファイア）；シアン蛍光タンパク質（例えば、ｅＣＦＰ、セルリアン、ＣｙＰｅｔ、ＡｍＣｙａｎｌ、ミドリイシ－シアン（Ｍｉｄｏｒｉｉｓｈｉ－Ｃｙａｎ）、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ）；緑色蛍光タンパク質（例えば、ＧＦＰ、ＧＦＰ－２、ｔａｇＧＦＰ、ｔｕｒｂｏＧＦＰ、ＥＧＦＰ、エメラルド、アザミグリーン（Ａｚａｍｉ Ｇｒｅｅｎ）、単量体アザミグリーン（ｍＡｚａｍｉｇｒｅｅｎ））、ＣｏｐＧＦＰ、ＡｃｅＧＦＰ、ａｖＧＦＰ、ＺｓＧｒｅｅｎｌ、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ（商標）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））；ルシフェラーゼ；オレンジ色蛍光タンパク質（ｍＯｒａｎｇｅ、ｍＫＯ、クサビラ－オレンジ（Ｋｕｓａｂｉｒａ－Ｏｒａｎｇｅ）、単量体クサビラ－オレンジ、ｍＴａｎｇｅｒｉｎｅ、ｔｄＴｏｍａｔｏ）；赤色蛍光タンパク質（ｍＫａｔｅ、ｍＫａｔｅ２、ｍＰｌｕｍ、ＤｓＲｅｄモノマー、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＲｕｂｙ、ｍＲＦＰ１、ＤｓＲｅｄ－Ｅｘｐｒｅｓｓ、ＤｓＲｅｄ２、ＤｓＲｅｄ－モノマー、ＨｃＲｅｄ－タンデム、ＨｃＲｅｄｌ、ＡｓＲｅｄ２、ｅｑＦＰ６１１、ｍＲａｓｐｂｅｒｒｙ、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、Ｊｒｅｄ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（商標）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））；遠赤色蛍光タンパク質（例えば、ｍＰｌｕｍ及びｍＮｅｐｔｕｎｅ）；黄色蛍光タンパク質（例えば、ＹＦＰ、ｅＹＦＰ、シトリン（Ｃｉｔｒｉｎｅ）、ＳＹＦＰ２、Ｖｅｎｕｓ、ＹＰｅｔ、ＰｈｉＹＦＰ、ＺｓＹｅｌｌｏｗｌ）；及びタンデムコンジュゲートが含まれる。
抗ＣＤ３３－放射性同位体コンジュゲートは、核医学において使用するための放射性同位体に連結したＣＤ３３結合ドメインを含む。核医学とは、放射活性同位体（放射性同位体又は放射性核種）を対象に投与することによる状態の診断及び／又は治療を指す。治療用核医学は、多くの場合、放射線療法又は放射免疫療法（ＲＩＴ）と称される。
本開示の抗体にコンジュゲートされ得る放射活性同位体の例には、ヨウ素－１３１、ヒ素－７２、ヒ素－７４、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、イットリウム－９０及びルテチウム－１７７並びにアスタチン２１１、アクチニウム－２２５、ビスマス－２１２又はビスマス－２１３などのアルファ線放射性核種が含まれる。放射性免疫コンジュゲートを調製するための方法は、当該技術分野において確立されている。Ｚｅｖａｌｉｎ（商標）（ＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を含む、放射性免疫コンジュゲートの例は市販されており、同様の方法が、本開示の抗体を使用して放射性免疫コンジュゲートを調製するために使用され得る。
放射線療法に有用な放射性核種の例には、２２５Ａｃ及び２２７Ｔｈが含まれる。２２５Ａｃは、半減期が１０日の放射性核種である。２２５Ａｃが崩壊すると、娘同位体２２１Ｆｒ、２１３Ｂｉ及び２０９Ｐｂが形成される。２２７Ｔｈは、半減期が１９日であり、娘同位体２２３Ｒａを形成する。
有用な放射性同位体のさらなる例には、２２８Ａｃ、１１１Ａｇ、１２４Ａｍ、７２Ａｓ、７４Ａｓ、２１１Ａｔ、２０９Ａｔ、１９４Ａｕ、１２８Ｂａ、７Ｂｅ、２０６Ｂｉ、２４５Ｂｋ、２４６Ｂｋ、７６Ｂｒ、１１Ｃ、４７Ｃａ、２５４Ｃｆ、２４２Ｃｍ、５１Ｃｒ、６７Ｃｕ、１５３Ｄｙ、１５７Ｄｙ、１５９Ｄｙ、１６５Ｄｙ、１６６Ｄｙ、１７１Ｅｒ、２５０Ｅｓ、２５４Ｅｓ、１４７Ｅｕ、１５７Ｅｕ、５２Ｆｅ、５９Ｆｅ、２５１Ｆｍ、２５２Ｆｍ、２５３Ｆｍ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、１４６Ｇｄ、１５３Ｇｄ、６８Ｇｅ、１７０Ｈｆ、１７１Ｈｆ、１９３Ｈｇ、１９３ｍＨｇ、１６０ｍＨｏ、１３０Ｉ、１３１Ｉ、１３５Ｉ、１１４ｍＩｎ、１８５Ｉｒ、４２Ｋ、４３Ｋ、７６Ｋｒ、７９Ｋｒ、８１ｍＫｒ、１３２Ｌａ、２６２Ｌｒ、１６９Ｌｕ、１７４ｍＬｕ、１７６ｍＬｕ、２５７Ｍｄ、２６０Ｍｄ、２８Ｍｇ、５２Ｍｎ、９０Ｍｏ、２４Ｎａ、９５Ｎｂ、１３８Ｎｄ、５７Ｎｉ、６６Ｎｉ、２３４Ｎｐ、１５Ｏ、１８２Ｏｓ、１８９ｍＯｓ、１９１Ｏｓ、３２Ｐ、２０１Ｐｂ、１０１Ｐｄ、１４３Ｐｒ、１９１Ｐｔ、２４３Ｐｕ、２２５Ｒａ、８１Ｒｂ、１８８Ｒｅ、１０５Ｒｈ、２１１Ｒｎ、１０３Ｒｕ、３５Ｓ、４４Ｓｃ、７２Ｓｅ、１５３Ｓｍ、１２５Ｓｎ、９１Ｓｒ、１７３Ｔａ、１５４Ｔｂ、１２７Ｔｅ、２３４Ｔｈ、４５Ｔｉ、１６６Ｔｍ、２３０Ｕ、２３７Ｕ、２４０Ｕ、４８Ｖ、１７８Ｗ、１８１Ｗ、１８８Ｗ、１２５Ｘｅ、１２７Ｘｅ、１３３Ｘｅ、１３３ｍＸｅ、１３５Ｘｅ、８５ｍＹ、８６Ｙ、９０Ｙ、９３Ｙ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、６５Ｚｎ、７１ｍＺｎ、８６Ｚｒ、９５Ｚｒ及び／又は９７Ｚｒが含まれる。
（ｉｉｉ）抗ＣＤ３３多重特異性抗体。抗ＣＤ３３二重特異性抗体は、エピトープの少なくとも１つがＣＤ３３上に位置する少なくとも２つのエピトープに結合する。抗ＣＤ３３三重特異性抗体は、エピトープの少なくとも１つがＣＤ３３上に位置する少なくとも３つのエピトープに結合する、などである。
二重特異性抗体は、全長抗体として調製され得る又は抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製され得る。例えば、ＷＯ１９９６／０１６６７３は、二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃガンマＲＩＩＩ抗体を記載しており、米国特許第５，８３７，２３４号は、二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃガンマＲＩ抗体を記載しており、ＷＯ１９９８／００２４６３は、二重特異性抗ＥｒｂＢ２／Ｆｃアルファ抗体を記載しており、ＵＳ５，８２１，３３７は、二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＣＤ３抗体を記載している。特定の実施形態では、二重特異性抗体は、二重特異性Ｔ細胞誘導（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体の形態であり得る。
いくつかのさらなる例示的な二重特異性抗体は、２つの重鎖（各々が３つの重鎖ＣＤＲを有し、その後に（Ｎ末端からＣ末端へ）ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインが続く）及び各重鎖との会合を通じて抗原結合特異性を与える２つの免疫グロブリン軽鎖を有する。しかしながら、示されているように、軽鎖が各重鎖と会合するが、抗原結合特異性に寄与しない（又は最小限でしか寄与しない）又は重鎖抗原結合領域が結合するエピトープの１つ以上に結合することができる又は各重鎖と会合することができ１つ若しくは両方のエピトープへの重鎖の１つ若しくは両方の結合を可能にする二重特異性抗体を含む、さらなる構成が想定される。
全抗体ではなく、ｓｃＦｖ二量体又はダイアボディが使用され得る。ダイアボディ及びｓｃＦｖは、Ｆｃ領域なしで、可変ドメイン（通常、ソース抗体の軽鎖及び重鎖の両方からの可変ドメイン成分を含む）のみを使用して構築され得、抗イディオタイプ反応の影響を低減させる可能性がある。二重特異性抗体の他の形態には、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら（Ｅｍｂｏ Ｊｏｕｒｎａｌ、１０、３６５５～３６５９頁、１９９１年）に記載されている一本鎖「Ｊａｎｕｓｉｎｓ」が含まれる。
半減期が延長された二重特異性抗体は、例えば、米国特許第８，９２１，５２８号及び米国特許公開第２０１４／０３０８２８５号に記載されている。
二重特異性抗体を作製するための方法は、当該技術分野において公知である。例えば、全長二重特異性抗体の従来の産生は、２つの鎖が異なる特異性を有する、２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の同時発現に基づく（例えば、Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：３７～３９頁、１９８３年を参照のこと。）。同様の手順は、例えば、ＷＯ１９９３／００８８２９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５～３６５９頁、１９９１年及びＨｏｌｌｉｇｅｒ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４、４４６～４４９頁（１９９３年）に開示されている。
特定の実施形態では、二重特異性抗体は、化学結合を使用して調製され得る。例えば、Ｂｒｅｎｎａｎら（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１頁、１９８５年）は、無傷抗体が、Ｆ（ａｂ’）２断片を生成するためにタンパク質分解的に切断される手順を記載している。これらの断片は、近接ジチオールを安定化し、分子間ジスルフィド形成を阻止するために、ジチオール錯化剤である、亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元される。次いで生成されたＦａｂ’断片は、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換される。次いでＦａｂ’－ＴＮＢ誘導体の１つが、メルカプトエチルアミンでの還元によりＦａｂ’－チオールに再変換され、二重特異性抗体を形成するために等モル量の他のＦａｂ’－ＴＮＢ誘導体と混合される。
特定の実施形態では、本明細書に開示されている結合ドメインは、二重特異性、三重特異性（又はそれよりも多い特異性）の免疫細胞誘導抗体構築物を作製するために使用され得る。免疫細胞誘導抗体構築物は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、単球／マクロファージ、リンパ球、造血幹細胞（ＨＳＣ）、造血前駆細胞（ＨＰＣ）並びに／又はＨＳＣ及びＨＰＣの混合物（すなわち、ＨＳＰＣ）を誘導することができる。特定の実施形態では、免疫細胞誘導抗体構築物はＴ細胞を誘導する。
Ｔ細胞のいくつかの異なるサブセットが発見されており、各々が異なる機能を有する。例えば、Ｔ細胞の大部分は、いくつかのタンパク質の複合体として存在するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有する。実際のＴ細胞受容体は、独立したＴ細胞受容体アルファ及びベータ（ＴＣＲα及びＴＣＲβ）遺伝子から産生され、α－ＴＣＲ鎖及びβ－ＴＣＲ鎖と呼ばれる、２つの別個のペプチド鎖から構成される。
γδＴ細胞は、それらの表面に異なるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有するＴ細胞の小さなサブセットを表す。γδＴ細胞では、ＴＣＲは、１つのγ鎖及び１つのδ鎖から構成される。Ｔ細胞のこの群は、αβＴ細胞ほど一般的ではない（全Ｔ細胞の２％）。
ＣＤ３は、全ての成熟Ｔ細胞上で発現される。活性化Ｔ細胞は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ６９及びＣＤ２５を発現する。ＣＤ５及びトランスフェリン受容体もまた、Ｔ細胞上で発現される。
Ｔ細胞はさらにヘルパー細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞）及び細胞溶解性Ｔ細胞を含む細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ、ＣＤ８＋Ｔ細胞）に分類され得る。Ｔヘルパー細胞は、Ｂ細胞の形質細胞への成熟、並びに細胞傷害性Ｔ細胞及びマクロファージの活性化などの機能を含む、免疫学的プロセスにおいて他の白血球を補助する。これらの細胞はまた、それらの表面上にＣＤ４タンパク質を発現するため、ＣＤ４＋Ｔ細胞としても知られている。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上で発現されるＭＨＣクラスＩＩ分子によりペプチド抗原を提示されると、活性化される。活性化されると、それらは迅速に分裂し、能動免疫応答を調節する又は補助するサイトカインと呼ばれる小さいタンパク質を分泌する。
細胞傷害性Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞及び腫瘍細胞を破壊し、移植片拒絶反応にも関与している。これらの細胞はまた、それらの表面上にＣＤ８糖タンパク質を発現するため、ＣＤ８＋Ｔ細胞としても知られている。これらの細胞は、生体のほぼ全ての細胞の表面上に存在するＭＨＣクラスＩと会合した抗原と結合することにより、それらの標的を認識する。
本明細書で使用される場合、「セントラルメモリー」Ｔ細胞（又は「ＴＣＭ」）とは、抗原を経験したＣＴＬであり、それらの表面上でＣＤ６２Ｌ又はＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＯを発現し、ナイーブ細胞と比較してＣＤ４５ＲＡを発現しない又は発現が低下しているものを指す。特定の実施形態では、セントラルメモリー細胞は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２５、ＣＤ１２７、ＣＤ４５ＲＯ及びＣＤ９５の発現が陽性であり、ナイーブ細胞と比較してＣＤ４５ＲＡの発現が低下している。
本明細書で使用される場合、「エフェクターメモリー」Ｔ細胞（又は「ＴＥＭ」）とは、抗原を経験したＴ細胞であり、セントラルメモリー細胞と比較してそれらの表面上でＣＤ６２Ｌを発現しない又は発現が低下しており、ナイーブ細胞と比較してＣＤ４５ＲＡを発現しない又は発現が低下しているものを指す。特定の実施形態では、エフェクターメモリー細胞は、ナイーブ細胞又はセントラルメモリー細胞と比較してＣＤ６２Ｌ及びＣＣＲ７の発現が陰性であり、ＣＤ２８及びＣＤ４５ＲＡの発現にばらつきがある。エフェクターＴ細胞は、メモリー又はナイーブＴ細胞と比較して、グランザイムＢ及びパーフォリンが陽性である。
本明細書で使用される場合、「ナイーブ」Ｔ細胞とは、抗原を経験していないＴ細胞であり、セントラルメモリー細胞又はエフェクターメモリー細胞と比較して、ＣＤ６２Ｌ及びＣＤ４５ＲＡを発現し、ＣＤ４５ＲＯを発現しないものを指す。特定の実施形態では、ナイーブＣＤ８＋Ｔリンパ球は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ１２７及びＣＤ４５ＲＡを含むナイーブＴ細胞の表現型マーカーの発現を特徴とする。
ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞、Ｋ細胞及びキラー細胞としても知られている）は、インターフェロン又はマクロファージ由来サイトカインに応答して活性化される。これらは、適応免疫応答により、感染症を排除することができる抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞が生成されている間に、ウイルス感染症を抑制するように機能する。ＮＫ細胞は、ＣＤ８、ＣＤ１６及びＣＤ５６を発現するが、ＣＤ３を発現しない。
ＮＫ細胞はＮＫ－Ｔ細胞を含む。ＮＫ－Ｔ細胞は、セミインバリアントＴ細胞受容体（ＴＣＲ ａｂ）及び典型的にナチュラルキラー細胞と会合する表面抗原を発現するＴ細胞の特殊化した集団である。ＮＫ－Ｔ細胞は、抗菌及び抗ウイルス免疫応答に寄与し、腫瘍関連の免疫監視又は免疫抑制を促進する。ナチュラルキラー細胞と同様に、ＮＫ－Ｔ細胞もまた、パーフォリン関連、Ｆａｓ関連及びＴＮＦ関連の細胞傷害性を誘導することができる。活性化されたＮＫ－Ｔ細胞は、ＩＦＮ－γ及びＩＬ－４を産生することができる。特定の実施形態では、ＮＫ－Ｔ細胞はＣＤ３＋／ＣＤ５６＋である。
マクロファージ（及びそれらの前駆細胞である単球）は、生体の全ての組織に（ある特定の場合では、小膠細胞、クッパー細胞及び破骨細胞として）存在し、アポトーシス細胞、病原体及び他の非自己成分を飲み込む。単球／マクロファージは、ＣＤ１１ｂ、Ｆ４／８０、ＣＤ６８、ＣＤ１１ｃ、ＩＬ－４Ｒα及び／又はＣＤ１６３を発現する。
未成熟樹状細胞（すなわち、活性化前）は、末梢において抗原及び他の非自己成分を飲み込んだ後、活性化形態において、リンパ組織のＴ細胞領域に移動し、Ｔ細胞への抗原提示を行う。樹状細胞は、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ２１、ＣＤ３５、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１０１、ＣＤ１４８、ＣＤ２０９及びＤＥＣ－２０５を発現する。
造血幹細胞／前駆細胞又はＨＳＰＣとは、造血幹細胞及び造血前駆細胞の組合せを指す。
造血幹細胞とは、インビボで自己複製でき、インビトロで本質的に無制限に増殖でき、他の全ての造血細胞型に分化できる未分化造血細胞を指す。
造血前駆細胞は、成熟細胞型にさらに分化することができる造血幹細胞又は胎児組織に由来する細胞である。ある特定の実施形態では、造血前駆細胞は、ＣＤ２４ｌｏＬｉｎ－ＣＤ１１７＋造血前駆細胞である。ＨＰＣは、（ｉ）最終的に単球及びマクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球／血小板若しくは樹状細胞を生じさせる骨髄前駆細胞、又は（ｉｉ）最終的にＴ細胞、Ｂ細胞及びＮＫ細胞を生じさせるリンパ系前駆細胞に分化することができる。
ＨＳＰＣは、他の型の造血細胞と比べて、ＨＳＰＣ上で増加したレベルで発現される特定のマーカーに対して陽性であり得る。例えば、そのようなマーカーには、ＣＤ３４、ＣＤ４３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５９、ＣＤ９０、ＣＤ１０９、ＣＤ１１７、ＣＤ１３３、ＣＤ１６６、ＨＬＡ ＤＲ又はそれらの組合せが含まれる。また、ＨＳＰＣは、他の型の造血細胞と比べて発現マーカーに対して陰性であり得る。例えば、そのようなマーカーには、Ｌｉｎ、ＣＤ３８又はそれらの組合せが含まれる。好ましくは、ＨＳＰＣはＣＤ３４＋細胞である。
細胞又は細胞集団が、特定のマーカーに対して「陽性」である又は特定のマーカーを発現するという記述は、特定のマーカーの細胞上又は細胞中での検出可能な存在を指す。表面マーカーに言及する場合、この用語は、フローサイトメトリーによって、例えば、マーカーに特異的に結合する抗体で染色し、前記抗体を検出することによって、検出される表面発現の存在を指すことができ、染色は、他の点では同一の条件下でアイソタイプが一致した対照を用いて同じ手順を実行して検出された染色を実質的に上回るレベルで及び／又はマーカーに対して陽性であることが知られている細胞についてのレベルと実質的に同様のレベルで及び／又はマーカーに対して陰性であることが知られている細胞についてのレベルより実質的に高いレベルでフローサイトメトリーによって検出可能である。
細胞又は細胞集団が、特定のマーカーに対して「陰性」である又はマーカーの発現を欠いているという記述は、特定のマーカーの細胞上又は細胞中での実質的に検出可能な存在がないことを指す。表面マーカーに言及する場合、この用語は、フローサイトメトリーによって、例えば、マーカーに特異的に結合する抗体で染色し、前記抗体を検出することによって、検出される表面発現の欠如を指すことができ、染色は、他の点では同一の条件下でアイソタイプが一致した対照を用いて同じ手順を実行して検出された染色を実質的に上回るレベルで及び／又はマーカーに対して陽性であることが知られている細胞についてのレベルより実質的に低いレベルで及び／又はマーカーに対して陰性であることが知られている細胞についてのレベルと比較して実質的に同様のレベルでフローサイトメトリーによって検出されない(ｔｈｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｉｓ
ｎｏｔ ｄｅｔｅｃｔｅｄ)。
多重特異性免疫細胞誘導抗体構築物の例は、免疫細胞をＣＤ３３発現細胞に引き寄せてＣＤ３３発現細胞を破壊することを目的として、ＣＤ３３及び免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）活性化エピトープの両方に結合するものを含む。例えば、ＵＳ２００８／０１４５３６２を参照のこと。そのような構築物は、本明細書では免疫活性化多重特異性又はＩ－ＡＭＳ）と称される。ＢｉＴＥｓ（登録商標）（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）はＩ－ＡＭＳの１つの形態である。本開示内でＩ－ＡＭＳによる局所活性化の標的とされ得る免疫細胞には、例えば、本明細書でより詳細に論じられる、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及びマクロファージが含まれる。
Ｔ細胞活性化は、２つの異なるシグナル：抗原依存性一次活性化を開始し、Ｔ細胞受容体様シグナルを提供するシグナル（一次細胞質シグナル伝達配列）及び抗原非依存的に作用し、二次又は共刺激シグナルを提供するシグナル（二次細胞質シグナル伝達配列）によって媒介され得る。本明細書に開示されているＩ－ＡＭＳは、結合するとＴ細胞活性化を誘導する任意のＴ細胞活性化エピトープを標的とすることができる。そのようなＴ細胞活性化エピトープの例は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ８３、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ及びＢ７－Ｈ３を含むＴ細胞マーカー上にある。
特定の実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列：
Figure 2023519932000048
 を含む可変軽鎖（ＬｃＦｖ）及び配列：
Figure 2023519932000049
 を含む可変重鎖（ＨｃＦｖ）を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＯＫＴ３抗体（ブリナツモマブにおいて利用されているものと同じ）に由来する。ＯＫＴ３抗体は、米国特許第５，９２９，２１２号に詳細に記載されている。それは、ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮ（配列番号４６）を含むＣＤＲＬ１配列、ＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳ（配列番号４７）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＷＳＳＮＰＦＴ（配列番号４８）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態では、ＣＤ３Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨ（配列番号４９）を含むＣＤＲＨ１配列、ＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号５０）を含むＣＤＲＨ２配列及びＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹ（配列番号５１）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。
以下の配列は、ＣＤ３に結合する能力を保持するＯＫＴ３に由来するｓｃＦｖである：
Figure 2023519932000050
これはまた、ＣＤ３結合ドメインとして使用され得る。
特定の実施形態では、ＣＤ３Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＱＳＬＶＨＮＮＧＮＴＹ（配列番号５３）を含むＣＤＲＬ１配列、ＫＶＳを含むＣＤＲＬ２配列及びＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号５４）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態では、ＣＤ３Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）を含むＣＤＲＨ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）を含むＣＤＲＨ２配列及びＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは、２０Ｇ６－Ｆ３抗体のＣＤＲ配列を反映する。
特定の実施形態では、ＣＤ３Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＱＳＬＶＨＤＮＧＮＴＹ（配列番号５８）を含むＣＤＲＬ１配列、ＫＶＳを含むＣＤＲＬ２配列及びＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号５４）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態では、ＣＤ３Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＧＦＴＦＳＮＡＷ（配列番号５９）を含むＣＤＲＨ１配列、ＩＫＡＲＳＮＮＹＡＴ（配列番号６０）を含むＣＤＲＨ２配列及びＲＧＴＹＹＡＳＫＰＦＤＹ（配列番号６１）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは、４Ｂ４－Ｄ７抗体のＣＤＲ配列を反映する。
特定の実施形態では、ＣＤ３Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＱＳＬＥＨＮＮＧＮＴＹ（配列番号６２）を含むＣＤＲＬ１配列、ＫＶＳを含むＣＤＲＬ２配列を含み；配列表に含まれない）及びＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号５４）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態では、ＣＤ３Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＧＦＴＦＳＮＡＷ（配列番号５９）を含むＣＤＲＨ１配列、ＩＫＤＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号６３）を含むＣＤＲＨ２配列及びＲＹＶＨＹＧＩＧＹＡＭＤＡ（配列番号６４）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは、４Ｅ７－Ｃ９抗体のＣＤＲ配列を反映する。
特定の実施形態では、ＣＤ３Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＱＳＬＶＨＴＮＧＮＴＹ（配列番号６５）を含むＣＤＲＬ１配列、ＫＶＳを含むＣＤＲＬ２配列及びＧＱＧＴＨＹＰＦＴ（配列番号６６）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態では、ＣＤ３Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＧＦＴＦＴＮＡＷ（配列番号６７）を含むＣＤＲＨ１配列、ＫＤＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号６８）を含むＣＤＲＨ２配列及びＲＹＶＨＹＲＦＡＹＡＬＤＡ（配列番号６９）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）である。これらは、１８Ｆ５－Ｈ１０抗体のＣＤＲ配列を反映する。
抗ＣＤ３抗体、結合ドメイン及びＣＤＲのさらなる例は、ＷＯ２０１６／１１６６２６に見出され得る。ＴＲ６６も使用され得る。
ＣＤ２８は、ヒトの末梢Ｔ細胞の８０％に存在する表面糖タンパク質であり、休止Ｔ細胞及び活性化Ｔ細胞の両方に存在する。ＣＤ２８は、Ｂ７－１（ＣＤ８０）及びＢ７－２（ＣＤ８６）に結合し、既知の共刺激分子の中で最も強力である（Ｊｕｎｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １５：３２１頁、１９９４年；Ｌｉｎｓｌｅｙら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：１９１頁、１９９３年）。特定の実施形態では、ＣＤ２８結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ８０、ＣＤ８６又は９Ｄ７抗体に由来する。ＣＤ２８に結合するさらなる抗体には、９．３、ＫＯＬＴ－２、１５Ｅ８、２４８．２３．２及びＥＸ５．３Ｄ１０が含まれる。さらに、１ＹＪＤは、有糸分裂促進抗体（５．１１Ａ１）のＦａｂ断片と複合体を形成したヒトＣＤ２８の結晶構造を提供する。
特定の実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインはＴＧＮ１４１２に由来する。特定の実施形態では、ＴＧＮ１４１２の可変重鎖は、
Figure 2023519932000051
 を含み、ＴＧＮ１４１２の可変軽鎖は、
Figure 2023519932000052
 を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、ＨＡＳＱＮＩＹＶＷＬＮ（配列番号７２）を含むＣＤＲＬ１配列、ＫＡＳＮＬＨＴ（配列番号７３）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＧＱＴＹＰＹＴ（配列番号７４）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖、ＧＹＴＦＴＳＹＹＩＨ（配列番号７５）を含むＣＤＲＨ１配列、ＣＩＹＰＧＮＶＮＴＮＹＮＥＫ（配列番号７６）を含むＣＤＲＨ２配列及びＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶ（配列番号７７）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、ＨＡＳＱＮＩＹＶＷＬＮ（配列番号７２）を含むＣＤＲＬ１配列、ＫＡＳＮＬＨＴ（配列番号７３）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＧＱＴＹＰＹＴ（配列番号７４）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖、並びにＳＹＹＩＨ（配列番号７８）を含むＣＤＲＨ１配列、ＣＩＹＰＧＮＶＮＴＮＹＮＥＫＦＫＤ（配列番号７９）を含むＣＤＲＨ２配列及びＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶ（配列番号７７）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
活性化Ｔ細胞は４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）を発現する。特定の実施形態では、４－１ＢＢ結合ドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳ（配列番号８０）を含むＣＤＲＬ１配列、ＡＳＮＲＡＴ（配列番号８１）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＲＳＮＷＰＰＡＬＴ（配列番号８２）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖、並びにＹＹＷＳ（配列番号８３）を含むＣＤＲＨ１配列、ＩＮＨを含むＣＤＲＨ２配列及びＹＧＰＧＮＹＤＷＹＦＤＬ（配列番号８４）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態では、４－１ＢＢ結合ドメインは、ＳＧＤＮＩＧＤＱＹＡＨ（配列番号８５）を含むＣＤＲＬ１配列、ＱＤＫＮＲＰＳ（配列番号８６）を含むＣＤＲＬ２配列及びＡＴＹＴＧＦＧＳＬＡＶ（配列番号８７）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖並びにＧＹＳＦＳＴＹＷＩＳ（配列番号８８）を含むＣＤＲＨ１配列、ＫＩＹＰＧＤＳＹＴＮＹＳＰＳ（配列番号８９）を含むＣＤＲＨ２配列及びＧＹＧＩＦＤＹ（配列番号９０）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
本明細書に開示されている特定の実施形態は、ＣＤ８上のエピトープに結合する結合ドメインを含む。特定の実施形態では、ＣＤ８結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＯＫＴ８抗体に由来する。例えば、特定の実施形態では、ＣＤ８Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＲＴＳＲＳＩＳＱＹＬＡ（配列番号９１）を含むＣＤＲＬ１配列、ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号９２）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＨＮＥＮＰＬＴ（配列番号９３）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態では、ＣＤ８Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＧＦＮＩＫＤ（配列番号９４）を含むＣＤＲＨ１配列、ＲＩＤＰＡＮＤＮＴ（配列番号９５）を含むＣＤＲＨ２配列及びＧＹＧＹＹＶＦＤＨ（配列番号９６）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは、ＯＫＴ８抗体のＣＤＲ配列を反映する。
特定の実施形態では、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞、Ｋ細胞及びキラー細胞としても知られている）は、Ｉ－ＡＭＳによる局所活性化の標的とされる。ＮＫ細胞は、細胞膜を破壊する顆粒を放出することによってアポトーシス又は細胞溶解を誘導することができ、他の免疫細胞を動員するためにサイトカインを分泌することができる。
ＮＫ細胞の表面上に発現される活性化タンパク質の例には、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ及び天然細胞傷害性受容体（ＮＣＲ）ファミリーのいくつかのメンバーが含まれる。リガンド結合時にＮＫ細胞を活性化するＮＣＲの例には、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０及びＤＮＡＭ－１が含まれる。
ＮＫ細胞受容体に結合し、ＮＫ細胞の活性化を誘導する及び／又は増強する市販の抗体の例には、ＮＫＧ２Ｄに結合し、それを活性化する５Ｃ６及び１Ｄ１１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡから入手可能）；ＫＩＲ２ＤＬ４に結合し、それを活性化するｍＡｂ３３（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）から入手可能）；ＮＫｐ４４に結合し、それを活性化するＰ４４－８（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）から入手可能）；ＣＤ８に結合し、それを活性化するＳＫ１；及びＣＤ１６に結合し、それを活性化する３Ｇ８が含まれる。
特定の実施形態では、Ｉ－ＡＭＳは、ＮＫ細胞活性化を増強するために、ＮＫ細胞阻害受容体に結合し、それを遮断することができる。結合を受け、遮断され得るＮＫ細胞阻害受容体の例には、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＮＫＧ２Ａ及びＫＬＲＧ１が含まれる。特定の実施形態では、ＮＫ細胞阻害受容体ＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３に結合し、それを遮断する結合ドメインは、配列
Figure 2023519932000053
 の可変軽鎖領域及び配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳ
Figure 2023519932000054
 の可変重鎖領域を含む。さらなるＮＫ細胞活性化抗体は、ＷＯ／２００５／０００３１７２及び米国特許第９，４１５，１０４号に記載されている。
特定の実施形態では、マクロファージは、Ｉ－ＡＭＳによる局所活性化の標的とされる。マクロファージは、白血球（又は白血球細胞）の一種であり、食作用として知られているプロセスにおいて細胞、細胞残屑及び／又は異物を飲み込み、消化することができる。
Ｉ－ＡＭＳは、マクロファージの表面上で発現されるタンパク質に結合するように設計され得る。マクロファージ（及びそれらの前駆細胞である単球）の表面上で発現される活性化タンパク質の例には、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ１１９、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ２０９、Ｆ４／８０、ＩＦＧＲ２ Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）１～９、ＩＬ－４Ｒα及びＭＡＲＣＯが含まれる。マクロファージの表面上で発現されるタンパク質に結合する市販の抗体には、ＣＤ１１ｂに結合し、それを活性化するＭ１／７０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）から入手可能）；ＣＤ６８に結合し、それを活性化するＫＰ１（ＡＢＣＡＭ（登録商標）、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍから入手可能）；及びＣＤ１６３に結合し、それを活性化するａｂ８７０９９（ＡＢＣＡＭ（登録商標）から入手可能）が含まれる。
特定の実施形態では、Ｉ－ＡＭＳは、病原体認識受容体（ＰＲＲ）を標的とすることができる。ＰＲＲは、危険シグナルを認識し、先天性免疫応答を活性化する及び／又は増強するタンパク質又はタンパク質複合体である。ＰＲＲの例には、グラム陰性菌を認識するＴＬＲ４／ＭＤ－２複合体；真菌及び他の病原体上のマンノース部分を認識するＤｅｃｔｉｎ－１及びＤｅｃｔｉｎ－２；グラム陽性菌を認識するＴＬＲ２／ＴＬＲ６又はＴＬＲ２／ＴＬＲ１ヘテロ二量体；フラジェリンを認識するＴＬＲ５；並びにＤＮＡのＣｐＧモチーフを認識するＴＬＲ９（ＣＤ２８９）が含まれる。特定の実施形態では、Ｉ－ＡＭＳは、ＴＬＲ４／ＭＤ－２、Ｄｅｃｔｉｎ－１、Ｄｅｃｔｉｎ－２、ＴＲＬ２／ＴＬＲ６、ＴＬＲ２／ＴＬＲ１、ＴＬＲ５及び／又はＴＬＲ９に結合し、それらを活性化することができる。
特定の実施形態では、Ｉ－ＡＭＳは補体系を標的とすることができる。補体系とは、抗原結合抗体によって誘導され、補体タンパク質のシグナル伝達を伴う免疫経路を指し、抗体によりコーティングされた抗原の免疫認識及びクリアランスをもたらす。
Ｉ－ＡＭＳの結合ドメイン及び本明細書に記載されている他の操作されたフォーマットは、リンカーを介して接合され得る。リンカーは、Ｉ－ＡＭの結合ドメイン間の立体配座移動についての柔軟性及び余地を提供することができるアミノ酸配列である。任意の適切なリンカーが使用され得る。
リンカーの例は、Ｃｈｅｎら、Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１３年１０月１５日；６５（１０）：１３５７～１３６９頁に見出され得る。リンカーは、標的への所望の機能ドメインの提示に応じて、柔軟、剛性又は半剛性であり得る。
一般的に使用される柔軟なリンカーには、アミノ酸のグリシン及びセリンを含むリンカー配列（Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカー）が含まれる。特定の実施形態では、リンカー配列は、（ＧｌｙｘＳｅｒｙ）ｎ（配列番号９９）の１～１０個の反復などのグリシン及びセリン反復のセットを含み、ここで、ｘ及びｙは独立して０～１０の整数であり、ただし、ｘ及びｙの両方が０であることはなく、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０の整数である。特定の例には、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（配列番号１００）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）ｎ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（配列番号１０１）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）ｎ（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）ｎ（配列番号１０２）及び（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）ｎ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）１（配列番号１０３）が含まれる。特定の実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号１０４）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号１０５）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）２（配列番号１０６）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）１（配列番号１０７）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）２（配列番号１０８）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）１（配列番号１０９）、（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）２（配列番号１１０）又は（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）１、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号１１１）、ＧＧＳＧＧＧＳＧＳＧ（配列番号１１２）又はＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１３）である。
１つ以上の抗体ヒンジ領域及び／又は免疫グロブリン重鎖定常領域、例えばＣＨ３単独又はＣＨ２ＣＨ３配列を含むリンカーも使用され得る。
一部の状況では、柔軟なリンカーは、特定の用途に必要な結合ドメインの距離又は配置を維持することができない場合がある。これらの例では、剛性又は半剛性リンカーが有用な場合がある。剛性又は半剛性リンカーの例には、プロリンリッチリンカーが含まれる。特定の実施形態では、プロリンリッチリンカーは、偶然のみに基づいて予測されるよりも多くのプロリン残基を有するペプチド配列である。特定の実施形態では、プロリンリッチリンカーは、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４８％、少なくとも５０％又は少なくとも５１％のプロリン残基を有するリンカーである。プロリンリッチリンカーの特定の例には、プロリンリッチ唾液タンパク質（ＰＲＰ）の断片が含まれる。
Ｉ－ＡＭＳ分子の細胞溶解特性は、比較インビトロアッセイにおいて確認され得る。簡潔に述べると、細胞株の実験では、標的がん細胞が、健康なドナーＴ細胞（１：１及び３：１のＥ：Ｔ細胞比にて使用される）を含む又は含まない、増加した濃度の種々のＩ－ＡＭＳ抗体（例えば、ＣＤ３３－ＣＤ３二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）を含むＣＤ３３／ＣＤ３ Ｉ－ＡＭＳ）を含有する５～１０，０００細胞／ウェルにて９６ウェル丸底プレート中でインキュベートされ得る。４８時間後、非生存細胞を検出するために４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ）を使用して細胞数及び薬物誘発性細胞傷害が、フローサイトメトリーによって決定され得る。健康なドナーＴ細胞が追加される実験では、がん細胞は、前方／側方散乱特性及びＣｅｌｌＶｕｅ Ｂｕｒｇｕｎｄｙ色素に対する陰性によって同定され得る。実験は技術的重複を含み得る。
Ｉ－ＡＭＳ構築物を含む特定の実施形態では、Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、既知のＴＣＲのＶα、Ｖβ、Ｃα若しくはＣβと比較した場合に、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の挿入、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の欠失、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換又は非保存的アミノ酸置換）又は上記の変化の組合せを含む。挿入、欠失又は置換は、これらの領域のアミノ末端若しくはカルボキシ末端又は両方の末端を含む、Ｖα、Ｖβ、Ｃα又はＣβ領域のいずれの場所でもよく、ただし、各ＣＤＲが、変化を含まない、又は１つ、２つ若しくは３つ以下の変化を含み、修飾されたＶα、Ｖβ、Ｃα又はＣβ領域を含む結合ドメインが、野生型と同様の親和性で、その標的に依然として特異的に結合することができる。
特定の実施形態では、５’ＲＡＣＥ（ｃＤＮＡ末端の迅速なクローニング）クローニングに由来する可変領域ＣＤ３３抗体配列及びＣＤ３３－ＣＤ３ ＢｓＡｂからのＣＤ３配列を使用して、二重特異性分子が、標準的なＢｉＴＥ（登録商標）抗体フォーマットにおいて重複するギブソンアセンブリ適合末端を有するＤＮＡ断片として各ｓｃＦｖを合成することによって組み立てられ得る。（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号１０５）リンカーなどの原型的な介在領域が、対になった可変ドメインと、２つのｓｃＦｖの間の短いＧｌｙ４Ｓｅｒ（配列番号１０７）リンカーとの間で使用され得る。
抗ＣＤ３３三重特異性抗体は、抗原の少なくとも１つがＣＤ３３である、３つの異なる型の抗原に同時に結合する人工タンパク質である。三重特異性抗体は、例えば、ＷＯ２０１６／１０５４５０、ＷＯ２０１０／０２８７９６、ＷＯ２００９／００７１２４、ＷＯ２００２／０８３７３８、ＵＳ２００２／００５１７８０及びＷＯ２０００／０１８８０６に記載されている。
（ｉｖ）製剤。任意の例示的なフォーマットにおいて本明細書に記載されている抗体のいずれかは、対象への投与のために単独で又は組み合わせて組成物に製剤化され得る。抗体の塩及び／又はプロドラッグも使用され得る。
薬学的に許容される塩には、抗体の活性を保持し、薬学的使用に許容される任意の塩が含まれる。薬学的に許容される塩はまた、酸、別の塩又は酸若しくは塩に変換されるプロドラッグの投与の結果としてインビボで形成され得る任意の塩も指す。
適切な薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸又は有機酸から調製され得る。そのような無機酸の例は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸及びリン酸である。適切な有機酸は、脂肪族、脂環式、芳香族、アリール脂肪族、複素環式、カルボン酸及びスルホン酸クラスの有機酸から選択され得る。
適切な薬学的に許容される塩基付加塩には、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛から作製される金属塩、又はＮ，Ｎ’－ジベンジルエチレン－ジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、リジン、アルギニン及びプロカインから作製される有機塩が含まれる。
プロドラッグは、投与後に、例えば開裂により又は生物学的に不安定な基の加水分解により治療的に活性な化合物に変換される活性成分を含む。
特定の実施形態では、組成物は、組成物の少なくとも０．１％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗ、組成物の少なくとも１％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗ、組成物の少なくとも１０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗ、組成物の少なくとも２０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗ、組成物の少なくとも３０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗ、組成物の少なくとも４０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗ、組成物の少なくとも５０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗ、組成物の少なくとも６０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗ、組成物の少なくとも７０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗ、組成物の少なくとも８０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗ、組成物の少なくとも９０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗ、組成物の少なくとも９５％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗ又は組成物の少なくとも９９％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの抗体を含む。
例示的な一般に使用される薬学的に許容される担体には、あらゆる吸収遅延剤、抗酸化剤、結合剤、緩衝剤、増量剤若しくは充填剤、キレート剤、コーティング、崩壊剤、分散媒体、ゲル、等張剤、潤滑剤、保存剤、塩、溶媒若しくは共溶媒、安定剤、界面活性剤及び／又は運搬ビヒクルが含まれる。
例示的な抗酸化剤には、アスコルビン酸、メチオニン及びビタミンＥが含まれる。
例示的な緩衝剤には、クエン酸バッファー、コハク酸バッファー、酒石酸バッファー、フマル酸バッファー、グルコン酸バッファー、シュウ酸バッファー、乳酸バッファー、酢酸バッファー、リン酸バッファー、ヒスチジンバッファー及び／又はトリメチルアミン塩が含まれる。
例示的なキレート剤は、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）である。
例示的な等張剤には、三価以上の糖アルコール、例えば、グリセリン、エリトリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール又はマンニトールを含む多価糖アルコールが含まれる。
例示的な保存剤には、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、ハロゲン化ベンザルコニウム、塩化ヘキサメトニウム、アルキルパラベン、例えば、メチル又はプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール及び３－ペンタノールが含まれる。
安定剤とは、増量剤から、抗体を可溶化する又は変性若しくは容器壁面への付着を阻止する一助となる添加剤に至る機能の範囲にわたり得る、広範な類型の賦形剤を指す。典型的な安定剤には、多価糖アルコール；アミノ酸、例えば、アルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ－ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸及びトレオニン；有機糖又は糖アルコール、例えば、ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイニシトール、ガラクチトール、グリセロール及びシクリトール、例えば、イノシトール；ＰＥＧ；アミノ酸ポリマー；硫黄含有還元剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロール及びチオ硫酸ナトリウム；低分子量ポリペプチド（すなわち、１０残基未満）；タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；単糖類、例えば、キシロース、マンノース、フルクトース及びグルコース；二糖類、例えば、ラクトース、マルトース及びスクロース；三糖類、例えば、ラフィノース並びに多糖類、例えば、デキストランが含まれ得る。安定剤は、典型的に、治療剤の重量に基づいて０．１～１０，０００重量部の範囲で存在する。
本明細書に開示されている組成物は、例えば、注射、吸入、注入、灌流、洗浄又は摂取による投与用に製剤化され得る。本明細書に開示されている組成物はさらに、静脈内、皮内、動脈内、結節内、リンパ内、腹腔内、病巣内、前立腺内、膣内、直腸内、局所、髄腔内、腫瘍内、筋肉内、小胞内、経口、舌下及び／又は皮下投与用に製剤化され得る。
注射用に、組成物は、水溶液として、例えば、ハンクス液、リンガー液又は生理食塩水を含むバッファー中で製剤化され得る。水溶液は、製剤化剤、例えば、懸濁化剤、安定剤及び／又は分散剤を含み得る。或いは、製剤は、適切なビヒクル、例えば、発熱物質非含有無菌水で使用前に構成するための凍結乾燥形態及び／又は粉末形態であり得る。
経口投与用に、組成物は、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤などとして製剤化され得る。経口固形製剤、例えば、散剤、カプセル剤及び錠剤の場合、適切な賦形剤には、結合剤（トラガカントガム、アラビアゴム、コーンスターチ、ゼラチン）、充填剤、例えば、糖類、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール及びソルビトール；リン酸二カルシウム、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）；顆粒化剤；並びに結合剤が含まれる。所望により、崩壊剤、例えば、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸、架橋ポリビニルピロリドン、寒天又はアルギン酸若しくはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムが添加され得る。所望により、固形剤形は、標準的な技術を使用して、糖衣又は腸溶コーティングされ得る。香味剤、例えば、ペパーミント、ウィンターグリーンオイル、チェリーフレーバー、オレンジフレーバーなども使用され得る。
組成物はエアロゾルとして製剤化され得る。特定の実施形態では、エアロゾルは、無水、液体又は乾燥粉末吸入器の一部として提供されている。加圧パック又はネブライザーからのエアロゾルスプレーも、適切な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切なガスと共に使用され得る。加圧エアロゾルの場合、投与単位は、定量を送達するための弁を設けることにより決定され得る。組成物及び適切な粉末基剤、例えば、ラクトース又はデンプンとの粉末混合物を含む、吸入器又は吹送器における使用のためのゼラチンのカプセル剤及びカートリッジも製剤化され得る。
組成物は、デポー調製物としても製剤化され得る。デポー調製物は、適切なポリマー材料若しくは疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルジョンとして）又はイオン交換樹脂を用いて、又は難溶性誘導体、例えば、難溶性塩として製剤化され得る。
さらに、組成物は、少なくとも１つの型の抗体を含む固体ポリマーの半透性マトリックスを利用する徐放系として製剤化され得る。種々の徐放性材料が確立されており、当業者に周知である。徐放系は、それらの化学的性質に応じて、投与後に数週間から１００日以上にわたって１つ以上の抗体を放出し得る。デポー調製物は、注射；非経口注射；点眼；又は細い針を介した注射による軟組織、体腔若しくは時には血管内への移植により投与され得る。
デポー製剤は、所望のラクチド：グリコリド比、平均分子量、多分散性及び末端基化学のポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（カプロラクトン）及びポリ（ラクチド）－コ（グリコリド）（ＰＬＧ）を含む様々な生体内分解性ポリマーを含み得る。種々のグレードを使用して異なるポリマータイプを異なる比率で混合することにより、寄与するポリマーのそれぞれから取り入れられる特性が得られ得る。
異なる溶媒（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、酢酸エチル、トリアセチン、Ｎ－メチルピロリドン、テトラヒドロフラン、フェノール又はそれらの組合せ）の使用は微粒子のサイズ及び構造を改変して、放出特性を調節し得る。他の有用な溶媒には、水、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ－メチル－２－ピロリドン（ＮＭＰ）、アセトン、メタノール、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、安息香酸エチル及び安息香酸ベンジルが含まれる。
例示的な放出修飾剤には、界面活性剤、洗剤、内相増粘剤、錯化剤、界面活性分子、共溶媒、キレート剤、安定剤、セルロースの誘導体、（ヒドロキシプロピル）メチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ＨＰＭＣアセエート、セルロースアセテート、プルロニック（例えば、Ｆ６８／Ｆ１２７）、ポリソルベート、Ｓｐａｎ（登録商標）（Ｃｒｏｄａ Ａｍｅｒｉｃａｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、Ｄｅｌａｗａｒｅ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、Ｂｒｉｊ（登録商標）（Ｃｒｏｄａ Ａｍｅｒｉｃａｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、Ｄｅｌａｗａｒｅ）、スクロースアセテートイソブチレート（ＳＡＩＢ）、塩及びバッファーが含まれ得る。
ポリソルベート、ジオクチルスルホスクシネート、ポロキサマー、ＰＶＡを含む界面活性剤などの微粒子の外部相境界に分配する賦形剤はまた、粒子安定性及び侵食速度、水和及びチャネル構造、界面輸送並びに反応速度を含む特性を、好ましい様態で改変し得る。
開示されている徐放性デポー製剤の追加的な処理は、トリス、シトレート又はヒスチジンなどのバッファー中に、マンニトール、スクロース、トレハロース及びグリシンを含む安定化賦形剤を、ポリソルベート、ＰＶＡ及びジオクチルスルホスクシネートなどの他の成分と共に利用することができる。元の懸濁液の類似サイズ及び性能特性に復元される非常に低い水分の散剤を製造するために、凍結乾燥サイクルも使用され得る。
本明細書に開示されている任意の組成物は、投与の利益を越える有意に有害なアレルギー性の又は他の厄介な反応を引き起こさないものを含む任意の他の薬学的に許容される担体を有利に含み得る。例示的な薬学的に許容される担体及び製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ｍａｃｋ Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０年に開示されている。さらに、製剤は、米国ＦＤＡ生物学的標準局（Ｕ．Ｓ．ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ）及び／又は他の関連する外国の規制当局により要求される無菌性、発熱性、一般的安全性及び純度基準を満たすように調製され得る。
（ｖ）免疫細胞試料採取及び細胞濃縮。免疫細胞の型は上に記載されている。本開示は、二重特異性抗体などの組換えタンパク質を発現するように遺伝子修飾された細胞を記載している。本開示の教示に従って遺伝子修飾された細胞は、患者由来細胞（自己由来）であり得る又は適切な場合、同種異系であり得る。
試料採取及び濃縮の方法は当業者に公知である。一部の実施形態では、細胞は細胞株に由来する。一部の実施形態では、細胞は、異種源、例えば、マウス、ラット、非ヒト霊長類又はブタから得られる。特定の実施形態では、細胞はヒトに由来する。
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、全血、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、白血球、骨髄、胸腺、組織生検、腫瘍、白血病、リンパ腫、リンパ節、腸管関連リンパ組織、粘膜関連リンパ組織、脾臓、他のリンパ組織、肝臓、肺、胃、腸、結腸、腎臓、膵臓、乳房、骨、前立腺、子宮頸部、精巣、卵巣、扁桃腺若しくは他の臓器及び／又はそれらに由来する細胞などの試料に由来する又はそれらから単離される。特定の実施形態では、対象の循環血液からの細胞は、例えば、アフェレーシス又は白血球アフェレーシスによって得られる。試料は、特定の実施形態では、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、ＨＳＣ、ＨＰＣ、ＨＳＰＣ、赤血球及び／又は血小板を含むリンパ球を含有し、一部の態様では、赤血球及び血小板以外の細胞を含有し、さらに処理が必要である。
一部の実施形態では、対象から採取された血液細胞は、例えば、血漿画分を除去し、後続の処理工程のために、細胞を、適切なバッファー又は培地中に入れるように、洗浄される。特定の実施形態では、細胞は、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）により洗浄される。一部の実施形態では、洗浄液は、カルシウム及び／若しくはマグネシウム並びに／又は多くの二価カチオン若しくは全ての二価カチオンを欠く。洗浄は、製造元の指示書に従い、半自動式「フロースルー」型遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１ ｃｅｌｌ ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ、Ｂａｘｔｅｒ）を使用して達せられ得る。接線流濾過（ＴＦＦ）もまた、実施され得る。特定の実施形態では、細胞は、洗浄の後に、Ｃａ＋＋／Ｍｇ＋＋非含有ＰＢＳなどの様々な生体適合性バッファー中で再懸濁され得る。
単離は、サイズ、密度、特定の試薬に対する感受性若しくは耐性及び／又は親和性、例えば、抗体若しくは他の結合パートナーに対する免疫親和性などの１つ以上の特性に基づく分離を含む、種々の細胞調製及び分離工程のうちの１つ以上を含み得る。特定の実施形態では、単離は、同じ装置又は機器を使用して、単一のプロセスストリームにおいて順次及び／又は同時に実行される。特定の実施形態では、異なる集団の単離、培養及び／又は操作は、同じ試料からなどの、同じ出発組成物又は材料から実行される。
特定の実施形態では、試料は、密度に基づく細胞分離方法及び関連する方法を使用することによって、Ｔ細胞について濃縮され得る。例えば、白血球は、赤血球を溶解し、Ｐｅｒｃｏｌｌ又はＦｉｃｏｌｌ勾配により試料を遠心分離することによって末梢血中の他の細胞型から分離され得る。
特定の実施形態では、特定のＴ細胞型について濃縮されていないバルクＴ細胞集団が使用され得る。特定の実施形態では、選択されたＴ細胞型は、細胞マーカーに基づく陽性及び／又は陰性選択に基づいて濃縮及び／又は単離され得る。陽性選択では、細胞マーカーに結合した細胞が、さらなる使用のために保持される。陰性選択では、抗体などの捕捉剤によって細胞マーカーに結合していない細胞が、さらなる使用のために保持される。一部の例では、両方の画分がさらなる使用のために保持され得る。
分離は、特定の細胞集団又は特定のマーカーを発現する細胞の１００％の濃縮又は除去をもたらす必要はない。例えば、特定の型の細胞の陽性選択又はそれについての濃縮とは、そのような細胞の数又はパーセンテージを増加させることを指すが、マーカーを発現しない細胞の完全な不在をもたらす必要はない。同様に、特定の型の細胞の陰性選択、除去又は枯渇は、そのような細胞の数又はパーセンテージを減少させることを指すが、そのような細胞の全ての完全な除去をもたらす必要はない。
一部の例では、複数ラウンドの分離工程が実行され、ある工程から陽性又は陰性に選択された画分が、後続の陽性又は陰性選択などの別の分離工程に供される。
一部の実施形態では、細胞マーカーについての抗体又は結合ドメインは、磁気ビーズ又は常磁性ビーズなどの固体支持体又はマトリックスに結合して、陽性及び／又は陰性選択のための細胞の分離を可能にする。例えば、一部の実施形態では、細胞及び細胞集団は、免疫磁性（又はアフィニティー磁気）分離技術を使用して分離又は単離される（Ｓ．Ａ．Ｂｒｏｏｋｓ及びＵ．Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ（コピーライト）Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪによって編集された、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ｖｏｌ．５８：Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ｖｏｌ．２：Ｃｅｌｌ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ Ｉｎ Ｖｉｖｏ、１７～２５頁に概説されている）。ＵＳ４，４５２，７７３、ＵＳ４，７９５，６９８、ＵＳ５，２００，０８４及びＥＰ４５２３４２も参照のこと。
一部の実施形態では、親和性に基づく選択は、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）による。ＭＡＣＳシステムは、磁化粒子が付着した細胞の高純度選択を可能にする。ある特定の実施形態では、ＭＡＣＳは、外部磁場の印加後に非標的種及び標的種が順次溶出されるモードにおいて動作する。すなわち、磁化粒子に付着した細胞は所定の位置に保持されるが、付着していない種は溶出される。次に、この最初の溶出工程が完了した後、磁場に捕捉され、溶出が阻止された種は、溶出及び回収され得るように何らかの方法で解放される。ある特定の実施形態では、非標的細胞が標識され、不均一な細胞集団から枯渇される。
一部の実施形態では、本明細書に記載されている細胞集団は、フローサイトメトリーによって採取及び濃縮（又は枯渇）され、フローサイトメトリーでは、複数の細胞表面マーカーについて染色された細胞が流体流中で運ばれる。一部の実施形態では、本明細書に記載されている細胞集団は、分取規模（ＦＡＣＳ）選別によって採取及び濃縮（又は枯渇）される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されている細胞集団は、ＦＡＣＳに基づく検出システムと組み合わせた微小電気機械システム（ＭＥＭＳ）チップの使用によって採取及び濃縮（又は枯渇）される（例えば、ＷＯ２０１０／０３３１４０、Ｃｈｏら（２０１０年）Ｌａｂ Ｃｈｉｐ １０、１５６７～１５７３頁；及びＧｏｄｉｎら（２００８年）Ｊ Ｂｉｏｐｈｏｔｏｎ．１（５）：３５５～３７６頁を参照のこと。）。どちらの場合も、細胞は複数のマーカーで標識され得、明確に定義された細胞サブセットの単離を高純度で可能にする。
異なるＴ細胞亜集団についての細胞マーカーは上に記載されている。特定の実施形態では、Ｔ細胞の特定の亜集団、例えば、陽性又は高レベルの１つ以上の表面マーカー、例えば、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ４及び／又はＣＤ４５ＲＡ Ｔ細胞を発現する細胞が、陽性又は陰性選択技術によって単離される。
ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋Ｔ細胞は、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８コンジュゲート磁気ビーズ（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｄｅｒ）を使用して陽性選択され、拡大され得る。
特定の実施形態では、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋選択工程が、ＣＤ４＋ヘルパー及びＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を分離するために使用される。そのようなＣＤ８＋及びＣＤ４＋集団は、１つ以上のナイーブ、メモリー及び／又はエフェクターＴ細胞亜集団上で発現された又は比較的高度に発現されたマーカーについての陽性又は陰性選択によって亜集団にさらに選別され得る。
一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞についての濃縮が実行される。特定の実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋末梢血リンパ球の両方のＣＤ６２Ｌサブセットに存在する。ＰＢＭＣは、抗ＣＤ８及び抗ＣＤ６２Ｌ抗体を使用するなどして、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ８及び／又はＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ８＋画分について濃縮又は枯渇され得る。
一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞についての濃縮は、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ３及び／又はＣＤ１２７の陽性又は高表面発現に基づき、一部の態様では、それは、ＣＤ４５ＲＡ及び／又はグランザイムＢを発現する又は高度に発現する細胞についての陰性選択に基づく。一部の態様では、ＴＣＭ細胞について濃縮されたＣＤ８＋集団の単離は、ＣＤ４、ＣＤ１４、ＣＤ４５ＲＡを発現する細胞の枯渇、並びにＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＯ及び／又はＣＤ６２Ｌを発現する細胞についての陽性選択又は濃縮によって実行される。一態様では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞についての濃縮は、ＣＤ１４及びＣＤ４５ＲＡの発現に基づいて陰性選択に供される、ＣＤ４発現に基づいて選択された細胞の陰性画分、並びにＣＤ６２Ｌに基づく陽性選択から開始して実行される。このような選択は、一部の態様では同時に実行され、他の態様ではいずれかの順序で順次実行される。一部の態様では、ＣＤ８＋細胞集団又は亜集団を調製する際に使用されるものと同じＣＤ４発現に基づく選択工程もまた、ＣＤ４＋細胞集団又は亜集団を生成するために使用され、それによって任意選択的に１つ以上のさらなる陽性又は陰性選択工程後にＣＤ４に基づく分離からの陽性画分及び陰性画分の両方が保持される。
特定の例では、ＰＢＭＣの試料又は他の白血球試料は、ＣＤ４＋細胞の選択に供され、陰性画分及び陽性画分の両方が保持される。次に、陰性画分は、ＣＤ１４及びＣＤ４５ＲＡ又はＲＯＲ１の発現に基づく陰性選択、並びにＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＯ及び／又はＣＤ６２ＬなどのセントラルメモリーＴ細胞に特徴的なマーカーに基づく陽性選択に供され、陽性及び陰性選択はいずれかの順序で実行される。
特定の実施形態では、細胞濃縮は、バルクＣＤ８＋ＦＡＣｓ選別細胞集団をもたらす。
他の細胞型は、公知のマーカープロファイル及び技術に基づいて濃縮され得る。例えば、ＣＤ３４＋ＨＳＣ、ＨＳＰ及びＨＳＰＣは、磁気細胞分離装置、例えば、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｃｅｌｌ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に接続された磁性粒子に直接的又は間接的にコンジュゲートされた抗ＣＤ３４抗体を使用して濃縮され得る。
（ｖｉ）組換えタンパク質を発現するように細胞集団を遺伝子修飾すること。本明細書に開示されている組換えタンパク質をコードする所望の遺伝子は、トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポフェクション、リン酸カルシウム媒介トランスフェクション、遺伝子配列を含むウイルス又はバクテリオファージベクターによる感染、細胞融合、染色体媒介遺伝子導入、マイクロセル媒介遺伝子導入、スフェロプラスト（ｓｐｈｅｒｏｐｌａｓｔ）融合、インビボナノ粒子媒介送達などを含む、当該技術分野において公知の任意の方法によって細胞に導入され得る。外来遺伝子を細胞に導入するための多数の技術が当該技術分野において公知であり（例えば、Ｌｏｅｆｆｌｅｒ及びＢｅｈｒ、１９９３年、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７、５９９～６１８頁；Ｃｏｈｅｎら、１９９３年、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８～６４４頁；Ｃｌｉｎｅ、１９８５年、Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．２９：６９～９２頁を参照のこと。）、レシピエント細胞の必要な発達及び生理学的機能が必要以上に破壊されない限り、使用され得る。この技術は、遺伝子が細胞によって発現可能であり、ある特定の場合、好ましくは遺伝性であり、この細胞子孫によって発現可能であるように、遺伝子の細胞への安定な導入を提供する。
「遺伝子」という用語は、本明細書で開示されている組換えタンパク質をコードする核酸配列（ポリヌクレオチド又はヌクレオチド配列と相互交換可能に使用される）を指す。この定義は、種々の配列の多型、変異及び／又は配列バリアントを含み、このような変更はコードされたＣＡＲの機能には実質的に影響を与えない。「遺伝子」という用語は、コード配列だけでなく、プロモーター、エンハンサー及び終結領域などの調節領域も含み得る。この用語はさらに、選択的スプライス部位から生じるバリアントと共に、イントロンの全て及びｍＲＮＡの転写物からスプライスされた他のＤＮＡ配列を含み得る。分子をコードする遺伝子配列はキメラ分子の発現を指図するＤＮＡ又はＲＮＡであり得る。これらの核酸配列は、ＲＮＡに転写されるＤＮＡ鎖配列であり得る又はタンパク質に翻訳されるＲＮＡ配列であり得る。核酸配列は、完全長の核酸配列及び完全長のタンパク質に由来する非完全長の配列の両方を含む。配列はまた、特定の細胞型においてコドン選択を提供するために導入され得る天然配列（単数又は複数）の縮重コドンを含み得る。当業者によって理解されるように、本開示の全体を通して完全な遺伝子配列の一部が参照される。
組換えタンパク質をコードする遺伝子配列が本明細書に提供され、また、関連するアミノ酸配列及び本明細書に提供されている他の記述から合成又は組換え方法によって容易に調製され得る。実施形態では、これらの配列のいずれかをコードする遺伝子配列はまた、容易な切り出し及び配列をコードする遺伝子配列の、異なる配列をコードする別の遺伝子配列による置き換えを提供するために、コード配列の５’及び／又は３’末端にて１つ以上の制限酵素部位を有し得る。実施形態では、配列をコードする遺伝子配列は、哺乳動物細胞での発現のためにコドン最適化され得る。
「コードすること」とは、アミノ酸の定義された配列などの他の巨大分子の合成のための鋳型として役立つ、ｃＤＮＡ又はｍＲＮＡなどの遺伝子におけるヌクレオチドの特定の配列の特性を指す。したがって、遺伝子に相当するｍＲＮＡの転写及び翻訳が、細胞又は他の生物系においてタンパク質を産生するのであれば、遺伝子はタンパク質をコードしている。「タンパク質をコードする遺伝子配列」は、互いの縮重型であり、実質的に類似の形態及び機能の同じアミノ酸配列（単数又は複数）をコードするヌクレオチド配列全てを含む。
「ベクター」は、別の核酸を輸送することができる核酸分子である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス又はファージであり得る。「発現ベクター」は、それが適切な環境に存在する場合、ベクターによって運ばれる１つ以上の遺伝子によってコードされたタンパク質の発現を指図することができるベクターである。
「レンチウイルス」とは、分裂細胞及び非分裂細胞に感染することができるレトロウイルスの属を指す。レンチウイルスのいくつかの例には、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス：１型ＨＩＶ及び２型ＨＩＶを含む）；ウマ伝染性貧血ウイルス；ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）；ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）；及びサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が含まれる。
「レトロウイルス」はＲＮＡゲノムを有するウイルスである。「ガンマレトロウイルス」とは、レトロウイルス科の属を指す。例示的なガンマレトロウイルスには、マウス幹細胞ウイルス、マウス白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス及びトリ細網内皮症ウイルスが含まれる。
レトロウイルスベクター（Ｍｉｌｌｅｒら、１９９３年、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１～５９９頁を参照のこと。）が使用され得る。そのような実施形態では、発現される遺伝子は、細胞への送達のためにレトロウイルスベクターにクローニングされる。特定の実施形態では、レトロウイルスベクターは、ウイルスゲノムのパッケージング及び組込みに必要なシス作用性の配列の全て、すなわち、（ａ）ベクターの各末端での長い末端反復（ＬＴＲ）又はその一部、（ｂ）マイナス鎖及びプラス鎖ＤＮＡの合成のためのプライマー結合部位、並びに（ｃ）ゲノムＲＮＡのビリオンへの取込みに必要なパッケージングシグナルを含む。レトロウイルスベクターについてのさらなる詳細は、Ｂｏｅｓｅｎら、１９９４年、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ６：２９１～３０２頁；Ｃｌｏｗｅｓら、１９９４年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４４～６５１頁；Ｋｉｅｍら、１９９４年、Ｂｌｏｏｄ ８３：１４６７～１４７３頁；Ｓａｌｍｏｎｓ及びＧｕｎｚｂｅｒｇ、１９９３年、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１２９～１４１頁；並びにＧｒｏｓｓｍａｎ及びＷｉｌｓｏｎ、１９９３年、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．３：１１０～１１４頁に見出され得る。アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）及びアルファウイルスも使用され得る。Ｋｏｚａｒｓｋｙ及びＷｉｌｓｏｎ、１９９３年、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ３：４９９～５０３頁、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、１９９１年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１～４３４頁；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、１９９２年、Ｃｅｌｌ ６８：１４３～１５５頁；Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｉら、１９９３年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２２５～２３４頁；Ｗａｌｓｈら、１９９３年、Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｉ．Ｍｅｄ．２０４：２８９～３００頁；並びにＬｕｎｄｓｔｒｏｍ、１９９９年、Ｊ．Ｒｅｃｅｐｔ．Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔ．Ｒｅｓ．１９：６７３～６８６頁を参照のこと。遺伝子送達の他の方法には、哺乳動物の人工染色体（Ｖｏｓ、１９９８年、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．８：３５１～３５９頁）；リポソーム（Ｔａｒａｈｏｖｓｋｙ及びＩｖａｎｉｔｓｋｙ、１９９８年、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃ）６３：６０７～６１８頁）；リボザイム（Ｂｒａｎｃｈ及びＫｌｏｔｍａｎ、１９９８年、Ｅｘｐ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．６：７８～８３頁）；並びにトリプレックスＤＮＡ（Ｃｈａｎ及びＧｌａｚｅｒ、１９９７年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７５：２６７～２８２頁）の使用が含まれる。
ヒトの遺伝子療法への応用のために特定されたものを含む、本開示の範囲内で好適な多数の利用できるウイルスベクターが存在する（Ｐｆｅｉｆｅｒ及びＶｅｒｍａ、２００１年、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．２：１７７頁を参照のこと。）。レトロウイルスベクター及びレンチウイルスベクターを使用し、導入遺伝子を含むウイルス粒子を哺乳動物宿主細胞に形質導入するために細胞をパッケージングする方法は、例えば、ＵＳ８，１１９，７７２；Ｗａｌｃｈｌｉら、２０１１年、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ６：３２７９３０頁；Ｚｈａｏら、２００５年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：４４１５頁；Ｅｎｇｅｌｓら、２００３年、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１４：１１５５頁；Ｆｒｅｃｈａら、２０１０年、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８：１７４８頁；及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎら、２００９年、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５０６：９７頁に記載されている。レトロウイルス及びレンチウイルスのベクター構築物及び発現系も市販されている。
標的化遺伝子操作アプローチも利用され得る。ＣＲＩＳＰＲ（クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート）／Ｃａｓ（ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質）ヌクレアーゼ系は、細菌系に基づく遺伝子操作のために使用される操作されたヌクレアーゼ系である。ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系及びその成分に関する情報は、例えば、ＵＳ８６９７３５９、ＵＳ８７７１９４５、ＵＳ８７９５９６５、ＵＳ８８６５４０６、ＵＳ８８７１４４５、ＵＳ８８８９３５６、ＵＳ８８８９４１８、ＵＳ８８９５３０８、ＵＳ８９０６６１６、ＵＳ８９３２８１４、ＵＳ８９４５８３９、ＵＳ８９９３２３３及びＵＳ８９９９６４１並びにこれらと関連する出願；並びにＷＯ２０１４／０１８４２３、ＷＯ２０１４／０９３５９５、ＷＯ２０１４／０９３６２２、ＷＯ２０１４／０９３６３５、ＷＯ２０１４／０９３６５５、ＷＯ２０１４／０９３６６１、ＷＯ２０１４／０９３６９４、ＷＯ２０１４／０９３７０１、ＷＯ２０１４／０９３７０９、ＷＯ２０１４／０９３７１２、ＷＯ２０１４／０９３７１８、ＷＯ２０１４／１４５５９９、ＷＯ２０１４／２０４７２３、ＷＯ２０１４／２０４７２４、ＷＯ２０１４／２０４７２５、ＷＯ２０１４／２０４７２６、ＷＯ２０１４／２０４７２７、ＷＯ２０１４／２０４７２８、ＷＯ２０１４／２０４７２９、ＷＯ２０１５／０６５９６４、ＷＯ２０１５／０８９３５１、ＷＯ２０１５／０８９３５４、ＷＯ２０１５／０８９３６４、ＷＯ２０１５／０８９４１９、ＷＯ２０１５／０８９４２７、ＷＯ２０１５／０８９４６２、ＷＯ２０１５／０８９４６５、ＷＯ２０１５／０８９４７３及びＷＯ２０１５／０８９４８６、ＷＯ２０１６２０５７１１、ＷＯ２０１７／１０６６５７、ＷＯ２０１７／１２７８０７並びにこれらと関連する出願に記載されている。
特定の実施形態は、遺伝子編集剤として、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を利用する。ＺＦＮは、特異的な位置において、ＤＮＡに結合し、それを切断するように操作された部位特異的ヌクレアーゼのクラスである。ＺＦＮは、ＤＮＡ配列内の特異的な部位において二本鎖切断（ＤＳＢ）を導入するのに使用され、これは、ＺＦＮが、様々な異なる細胞におけるゲノム内の固有の配列を標的とすることを可能とする。ＺＦＮ及び本開示の教示の範囲内の有用なＺＦＮに関するさらなる情報については、例えば、ＵＳ６，５３４，２６１；ＵＳ６，６０７，８８２；ＵＳ６，７４６，８３８；ＵＳ６，７９４，１３６；ＵＳ６，８２４，９７８；６，８６６，９９７；ＵＳ６，９３３，１１３；６，９７９，５３９；ＵＳ７，０１３，２１９；ＵＳ７，０３０，２１５；ＵＳ７，２２０，７１９；ＵＳ７，２４１，５７３；ＵＳ７，２４１，５７４；ＵＳ７，５８５，８４９；ＵＳ７，５９５，３７６；ＵＳ６，９０３，１８５；ＵＳ６，４７９，６２６；ＵＳ２００３／０２３２４１０及びＵＳ２００９／０２０３１４０並びにＧａｊら、Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０１２年、９（８）：８０５～７頁；Ｒａｍｉｒｅｚら、Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ、２０１２年、４０（１２）：５５６０～８頁；Ｋｉｍら、Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ、２０１２年、２２（７）：１３２７～３３頁；Ｕｒｎｏｖら、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２０１０年、１１：６３６～６４６頁；Ｍｉｌｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２５、７７８～７８５頁（２００７年）；Ｂｉｂｉｋｏｖａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３００、７６４頁（２００３年）；Ｂｉｂｉｋｏｖａら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６１、１１６９～１１７５頁（２００２年）；Ｗｏｌｆｅら、Ａｎｎｕａｌ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ ａｎｄ ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２９、１８３～２１２頁（２０００年）；Ｋｉｍら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ ９３、１１５６～１１６０頁（１９９６年）；及びＭｉｌｌｅｒら、Ｔｈｅ ＥＭＢＯ ｊｏｕｒｎａｌ ４、１６０９～１６１４頁（１９８５年）を参照のこと。
特定の実施形態は、遺伝子編集剤として、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）を使用することができる。ＴＡＬＥＮとは、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）ＤＮＡ結合タンパク質及びＤＮＡ切断ドメインを含む融合タンパク質を指す。ＴＡＬＥＮは、ＤＮＡ内に、細胞内の修復機構を誘導する２つのＤＳＢを誘導することにより、遺伝子及びゲノムを編集するのに使用される。一般に、２つのＴＡＬＥＮは、ＤＮＡ切断ドメインが、二量体化し、ＤＳＢを誘導するように、標的ＤＮＡ部位の各側に結合し、これらを挟まなければならない。ＴＡＬＥＮに関するさらなる情報については、ＵＳ８，４４０，４３１；ＵＳ８，４４０，４３２；ＵＳ８，４５０，４７１；ＵＳ８，５８６，３６３；及びＵＳ８，６９７，８５３；並びにＪｏｕｎｇ及びＳａｎｄｅｒ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、２０１３年、１４（ｌ）：４９～５５頁；Ｂｅｕｒｄｅｌｅｙら、Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ、２０１３年、４：１７６２頁；Ｓｃｈａｒｅｎｂｅｒｇら、Ｃｕｒｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ、２０１３年、１３（４）：２９１～３０３頁；Ｇａｊら、Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０１２年、９（８）：８０５～７頁；Ｍｉｌｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２９、１４３～１４８頁（２０１１年）；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １８６、７５７～７６１頁（２０１０年）；Ｂｏｃｈら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６、１５０９～１５１２頁（２００９年）；並びにＭｏｓｃｏｕ及びＢｏｇｄａｎｏｖｅ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６、１５０１頁（２００９年）を参照のこと。
特定の実施形態は、ＭｅｇａＴＡＬを、遺伝子編集剤として利用することができる。ＭｅｇａＴＡＬは、ＴＡＬＥが、メガヌクレアーゼのＤＮＡ切断ドメインと融合されたｓｃ希少切断型ヌクレアーゼ構造を有する。ホーミングエンドヌクレアーゼとしても公知のメガヌクレアーゼは、同じドメイン内にＤＮＡ認識機能及びヌクレアーゼ機能の両方を有する、単一のペプチド鎖である。ＴＡＬＥＮとは対照的に、ｍｅｇａＴＡＬは、機能的な活性のために、単一のペプチド鎖の送達だけを要求する。
標的化細胞型の選択的インビボ遺伝子修飾をもたらすナノ粒子が記載されており、本開示の教示の範囲内で使用され得る。特定の実施形態では、ナノ粒子は、ＷＯ２０１４１５３１１４、ＷＯ２０１７１８１１１０及びＷＯ２０１８２２６７２に記載されているものであり得る。
（ｖｉｉ）細胞活性化培養条件。細胞集団は、遺伝子修飾された細胞集団を拡大するために培養開始組成物中でインキュベートされ得る。インキュベーションは、バッグ、細胞培養プレート、フラスコ、チャンバー、クロマトグラフィーカラム、架橋ゲル、架橋ポリマー、カラム、培養ディッシュ、中空糸、マイクロタイタープレート、シリカコーティングガラスプレート、チューブ、チューブセット、ウェル、バイアル又は培養若しくは細胞培養のための他の容器などの培養容器内で実行され得る。
培養条件は、特定の培地、温度、酸素含量、二酸化炭素含量、時間、薬剤、例えば、栄養物質、アミノ酸、抗生物質、イオン及び／又はサイトカイン、ケモカイン、抗原などの刺激因子、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体並びに細胞を活性化するように設計された任意の他の薬剤のうちの１つ以上を含み得る。
一部の態様では、インキュベーションは、ＵＳ６，０４０，１７７、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆら（２０１２年）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３５（９）：６５１～６６０頁；Ｔｅｒａｋｕｒａら（２０１２年）Ｂｌｏｏｄ．１：７２～８２頁及び／又はＷａｎｇら（２０１２年）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３５（９）：６８９～７０１頁に記載されている技術などの技術に従って実行される。
Ｔ細胞を培養するための例示的な培養培地は、（ｉ）非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム及びペニシリン／ストレプトマイシンを補充されたＲＰＭＩ；（ｉｉ）ＨＥＰＥＳ、５～１５％のヒト血清、１～３％のＬ－グルタミン、０．５～１．５％のペニシリン／ストレプトマイシン及び０．２５×１０－４～０．７５×１０－４Ｍのβ－メルカプトエタノールを伴うＲＰＭＩ；（ｉｉｉ）１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、２ｍＭのＬ－グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン及び１００ｍ／ｍＬのストレプトマイシンを補充されたＲＰＭＩ－１６４０；（ｉｖ）１０％のＦＢＳ、２ｍＭのＬ－グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００ｍ／ｍＬのストレプトマイシンを補充されたＤＭＥＭ培地；並びに（ｖ）５％のヒトＡＢ型血清（Ｇｅｍｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ、ＣＡ）、１％のＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）、１％のＰｅｎ－Ｓｔｒｅｐ（Ｇｉｂｃｏ）、１％のＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ）及び２％のＮ－アセチルシステイン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を補充されたＸ－Ｖｉｖｏ １５培地（Ｌｏｎｚａ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を含む。Ｔ細胞培養培地はまた、Ｈｙｃｌｏｎｅ（Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）からも市販されている。このような培養培地へと添加され得る、さらなるＴ細胞活性化成分については、下記において、より詳細に記載されている。
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、非分裂末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）などのフィーダー細胞を培養開始組成物に添加し（例えば、結果として得られる細胞集団が、拡大される初期集団内の各Ｔリンパ球につき、少なくとも５、１０、２０又は４０個以上のＰＢＭＣフィーダー細胞を含有するように）、培養物をインキュベートする（例えば、Ｔ細胞の数を拡大するのに十分な時間）ことにより拡大される。一部の態様では、非分裂フィーダー細胞は、ガンマ照射ＰＢＭＣフィーダー細胞を含み得る。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、細胞分裂を阻止するように、３０００～３６００ｒａｄの範囲のガンマ線により照射される。一部の態様では、フィーダー細胞は、Ｔ細胞の集団が添加される前に、培養培地に添加される。
任意選択的に、インキュベーションは、ＥＢＶ形質転換非分裂リンパ芽球様細胞（ＬＣＬ）を、フィーダー細胞として添加することをさらに含み得る。ＬＣＬは、６０００～１０，０００ｒａｄの範囲のガンマ線により照射され得る。一部の態様では、ＬＣＬフィーダー細胞は、少なくとも１０：１の比のＬＣＬフィーダー細胞対初期Ｔリンパ球などの任意の適切な量において提供される。
一部の実施形態では、刺激条件は、ヒトＴリンパ球の成長に適する温度、例えば、少なくとも２５℃、少なくとも３０℃又は３７℃を含む。
特定の実施形態では、Ｔ細胞活性化培養条件の条件は、Ｔ細胞刺激エピトープを含み得る。Ｔ細胞刺激エピトープには、ＣＤ３、ＣＤ２７、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ８３、ＣＤ９０、ＣＤ９５、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＣＴＬＡ－４、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ－１（ＦＺＤ１）、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＦＺＤ１０、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＩＬ－１Ｒ、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＭＨＣＩ、ＭＨＣＩＩ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ４０、ＲＯＲ２及びＲＴＫが含まれる。
ＣＤ３は、Ｔ細胞受容体の主要なシグナル伝達エレメントである。以前に示されているように、ＣＤ３は全ての成熟Ｔ細胞上で発現される。特定の実施形態では、ＣＤ３刺激分子（すなわち、ＣＤ３結合ドメイン）は、ＯＫＴ３抗体（ＵＳ５，９２９，２１２；ＵＳ４，３６１，５４９；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－８００１（商標）；及びＡｒａｋａｗａら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１２０、６５７～６６２頁（１９９６年）を参照のこと。）、２０Ｇ６－Ｆ３抗体、４Ｂ４－Ｄ７抗体、４Ｅ７－Ｃ９又は１８Ｆ５－Ｈ１０抗体に由来し得る。
特定の実施形態では、ＣＤ３刺激分子は、少なくとも０．２５若しくは０．５ｎｇ／ｍｌの濃度又は２．５～１０μｇ／ｍＬの濃度にて培養培地内に含まれ得る。特定の実施形態は、５μｇ／ｍＬにてＣＤ３刺激分子（例えば、ＯＫＴ３）を利用する。
特定の実施形態では、ａｖｉタグに関連する活性化分子が、ビオチン化され、ストレプトアビジンビーズに結合され得る。このアプローチは、例えば、除去可能なＴ細胞エピトープ刺激活性化システムを作製するために使用され得る。
ＣＤ２８についての例示的な結合ドメインは、ＴＧＮ１４１２、ＣＤ８０、ＣＤ８６又は９Ｄ７抗体を含み得る又はそれらに由来し得る。ＣＤ２８に結合するさらなる抗体には、９．３、ＫＯＬＴ－２、１５Ｅ８、２４８．２３．２、ＥＸ５．３Ｄ１０及びＣＤ２８．３（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ４５１９７４．１の下で合成一本鎖Ｆｖ構築物として寄託されている；Ｖａｎｈｏｖｅら、ＢＬＯＯＤ、２００３年７月１５日、Ｖｏｌ．１０２、Ｎｏ．２、５６４～５７０頁も参照のこと。）が含まれる。さらに、１ＹＪＤは、有糸分裂促進抗体（５．１１Ａ１）のＦａｂ断片と複合体を形成したヒトＣＤ２８の結晶構造を提供する。特定の実施形態では、９Ｄ７と競合しない抗体が選択される。
４－１ＢＢ結合ドメインは、Ｔａｒａｂａｎら、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２年１２月；３２（１２）：３６１７～２７頁に記載されているようにＬＯＢ１２、ＩｇＧ２ａ、ＬＯＢ１２．３又はＩｇＧ１に由来し得る。特定の実施形態では、４－１ＢＢ結合ドメインは、ＵＳ９，３８２，３２８に記載されているモノクローナル抗体に由来する。さらなる４－１ＢＢ結合ドメインは、ＵＳ６，５６９，９９７、ＵＳ６，３０３，１２１及びＭｉｔｔｌｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２００４年；２９（１～３）：１９７～２０８頁に記載されている。
ＯＸ４０（ＣＤ１３４）及び／又はＩＣＯＳ活性化も使用され得る。ＯＸ４０結合ドメインは、ＵＳ２０１００１９６３５９、ＵＳ２０１５０３０７６１７、ＷＯ２０１５／１５３５１３、ＷＯ２０１３／０３８１９１及びＭｅｌｅｒｏら、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１３年；１９（５）：１０４４～５３頁に記載されている。ＩＣＯＳに結合し、それを活性化し得る例示的な結合ドメインは、例えば、ＵＳ２００８０２７９８５１及びＤｅｎｇら、Ｈｙｂｒｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍｉｃｓ．２００４年；２３（３）：１７６～８２頁に記載されている。
可溶型の場合、Ｔ細胞活性化剤は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子などの別の分子とカップリングされ得る。任意の適切なＰＥＧ分子が使用され得る。典型的に、最大で１０００Ｄａまでの分子量のＰＥＧ分子が水又は培養培地に溶解する。一部の場合、このようなＰＥＧベースの試薬は、市販の活性化ＰＥＧ分子（例えば、ＮＯＦ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｒｖｉｎｅ、Ｃａｌｉｆ．、ＵＳＡから入手可能なＰＥＧ－ＮＨＳ誘導体、又はＣｒｅａｔｉｖｅ ＰＥＧＷｏｒｋｓ、Ｃｈａｐｅｌ Ｈｉｌｌｓ、Ｎ．Ｃ．、ＵＳＡから入手可能な活性化ＰＥＧ誘導体）を使用して調製され得る。
特定の実施形態では、細胞刺激剤は培養培地内の固相上に固定化される。特定の実施形態では、固相は、培養容器（例えば、バッグ、細胞培養プレート、チャンバー、クロマトグラフィーカラム、架橋ゲル、架橋ポリマー、カラム、培養ディッシュ、中空糸、マイクロタイタープレート、シリカコーティングガラスプレート、チューブ、チューブセット、ウェル、バイアル、培養若しくは細胞培養のための他の構造又は容器）の表面である。
特定の実施形態では、固相は培養培地に添加され得る。このような固相には、例えば、ビーズ、中空糸、樹脂、膜及びポリマーが含まれ得る。
例示的なビーズには、磁気ビーズ、ポリマービーズ及び樹脂ビーズ（例えば、Ｓｔｒｅｐ－Ｔａｃｔｉｎ（登録商標）Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、Ｓｔｒｅｐ－Ｔａｃｔｉｎ（登録商標）Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ及びＳｔｒｅｐ－Ｔａｃｔｉｎ（登録商標）ＭａｃｒｏＰｒｅｐ ＩＢＡ ＧｍｂＨ、Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ））が含まれる。抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズは、Ｔ細胞拡大用の市販の試薬である（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）。これらのビーズは、ヒトＴ細胞上のＣＤ３及びＣＤ２８細胞表面分子に対するアフィニティー精製モノクローナル抗体の混合物でコーティングされた均一な、４．５μｍの超常磁性、無菌、非発熱性ポリスチレンビーズである。中空糸は、ＴｅｒｕｍｏＢＣＴ Ｉｎｃ．（Ｌａｋｅｗｏｏｄ、Ｃｏｌｏ．、ＵＳＡ）から入手可能である。樹脂には、金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）樹脂（例えば、ＴＡＬＯＮ（登録商標）樹脂（Ｗｅｓｔｂｕｒｇ、Ｌｅｕｓｄｅｎ））が含まれる。膜には、紙及びクロマトグラフィーマトリックスの膜基材（例えば、ニトロセルロース膜又はポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜）が含まれる。
例示的なポリマーには、多糖マトリックスなどの多糖が含まれる。このようなマトリックスには、アガロースゲル（例えば、Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ（商標）アガロース又はＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）材料、例えば、異なるビーズ及び孔径で市販されているＳｕｐｅｒｆｌｏｗ（商標）Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標））又は架橋デキストランのゲルが含まれる。さらなる例示的な例は、デキストランが共有結合している、粒子状の架橋アガロースマトリックスであり、これは、（様々なビーズサイズ及び様々な孔径で）Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）又はＳｕｐｅｒｄｅｘ（登録商標）として市販されており、両方ともＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから入手可能である。
使用され得る合成ポリマーには、ポリアクリルアミド、ポリメタクリレート、多糖及びアガロースのコポリマー（例えば、ポリアクリルアミド／アガロース複合体）又は多糖及びＮ，Ｎ’－メチレンビスアクリルアミドが含まれる。デキストラン及びＮ，Ｎ’－メチレンビスアクリルアミドのコポリマーの例は、Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ（登録商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）シリーズの材料である。
特定の実施形態は、多糖グラフトシリカ、ポリビニルピロリドングラフトシリカ、ポリエチレンオキシドグラフトシリカ、ポリ（２－ヒドロキシエチルアスパルタミド）シリカ及びポリ（Ｎ－イソプロピルアクリルアミド）グラフトシリカなどの、合成ポリマー又は天然ポリマーにカップリングしたシリカ粒子を利用することができる。
細胞活性化剤は、共有結合を介して固相に固定化され得る又は非共有結合を介して可逆的に固定化され得る。
特定の実施形態では、Ｔ細胞活性化培養培地は、ＨＥＰＥＳ、５～１５％のヒト血清、１～３％のＬ－グルタミン、０．５～１．５％のＰｅｎ／ｓｔｒｅｐ、０．２５×１０－４～０．７５×１０－４Ｍのβ－メルカプトエタノールを含むＲＰＭＩ内で、５～１５（例えば、１０）ｎｇ／μＬで含まれるＩＬ－７、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１と個々に培養されたＦＡＣＳ選別Ｔ細胞集団を含む。培養は、０．１～０．５×１０６個の細胞／ウェルをプレーティングした平底ウェルプレート上で実行される。活性化後３日目に、細胞はＴＣ処理プレートに移される。
特定の実施形態では、Ｔ細胞活性化培養培地は、ＨＥＰＥＳ、１０％のヒト血清、２％のＬ－グルタミン、１％のＰｅｎ／ｓｔｒｅｐ、０．５×１０－４Ｍのβ－メルカプトエタノールを含むＲＰＭＩ内で、５～１５（例えば、１０）ｎｇ／μＬで含まれるＩＬ－７、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１と個々に培養されたＦＡＣＳ選別ＣＤ８＋Ｔ集団を含む。培養は、０．１～０．５×１０６個の細胞／ウェルをプレーティングした平底非組織培養（ＴＣ）処理９６／４８ウェルプレート上で実行される。活性化後３日目に、細胞はＴＣ処理プレートに移される。
ＨＳＣ／ＨＳＰについての培養条件は、Ｎｏｔｃｈアゴニストによる拡大（例えば、ＵＳ７，３９９，６３３；ＵＳ５，７８０，３００；ＵＳ５，６４８，４６４；ＵＳ５，８４９，８６９；及びＵＳ５，８５６，４４１を参照のこと、以下のような培養条件で存在する増殖因子：２５～３００ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ、２５～３００ｎｇ／ｍＬのＦｌｔ－３リガンド、２５～１００ｎｇ／ｍＬのＴＰＯ、２５～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－６及び１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－３を含み得る。より具体的な実施形態では、５０、１００又は２００ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ；５０、１００又は２００ｎｇ／ｍＬのＦｌｔ－３リガンド；５０又は１００ｎｇ／ｍＬのＴＰＯ；５０又は１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－６；及び１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－３が使用され得る。
（ｖｉｉｉ）エクスビボで製造された細胞製剤。特定の実施形態では、遺伝子修飾された細胞は、培養培地から採取され、洗浄され、治療有効量において、担体へと濃縮され得る。例示的な担体には、食塩水、緩衝食塩液、生理食塩液、水、ハンクス液、リンゲル液、Ｎｏｎｎｏｓｏｌ－Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ）、ＰＬＡＳＭＡ－ＬＹＴＥ Ａ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｒｔｏｎ Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ）、グリセロール、エタノール及びこれらの組合せが含まれる。
特定の実施形態では、担体は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）又は他のヒト血清成分又はウシ胎仔血清が補充され得る。特定の実施形態では、注入のための担体には、５％のＨＡＳ又はデキストロースを伴う緩衝食塩液が含まれる。さらなる等張剤には、グリセリン、エリトリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール又はマンニトールなどの三価以上の糖アルコールを含む、多価糖アルコールが含まれる。
担体には、クエン酸バッファー、コハク酸バッファー、酒石酸バッファー、フマル酸バッファー、グルコン酸バッファー、シュウ酸バッファー、乳酸バッファー、酢酸バッファー、リン酸バッファー、ヒスチジンバッファー及び／又はトリメチルアミン塩などの緩衝剤が含まれ得る。
安定剤とは、増量剤から、容器壁面への細胞の付着を阻止する一助となる添加剤に至る機能の範囲にわたり得る、広範な類型の賦形剤を指す。典型的な安定剤には、多価糖アルコール；アミノ酸、例えば、アルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ－ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸及びトレオニン；有機糖又は糖アルコール、例えば、ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイニシトール、ガラクチトール、グリセロール及びシクリトール、例えば、イノシトール；ＰＥＧ；アミノ酸ポリマー；硫黄含有還元剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、アルファ－モノチオグリセロール及びチオ硫酸ナトリウム；低分子量ポリペプチド（すなわち、１０残基未満）；タンパク質、例えば、ＨＳＡ、ウシ血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；単糖類、例えば、キシロース、マンノース、フルクトース及びグルコース；二糖類、例えば、ラクトース、マルトース及びスクロース；三糖類、例えば、ラフィノース並びに多糖類、例えば、デキストランが含まれ得る。
必要な場合又は有益な場合、組成物又は製剤は、注射部位における疼痛を和らげるように、リドカインなどの局所麻酔剤を含み得る。
例示的な保存剤には、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、ハロゲン化ベンザルコニウム、塩化ヘキサメトニウム、アルキルパラベン、例えば、メチル又はプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール及び３－ペンタノールが含まれる。
組成物又は製剤中の細胞の治療有効量は、１０２個超の細胞、１０３個超の細胞、１０４個超の細胞、１０５個超の細胞、１０６個超の細胞、１０７個超の細胞、１０８個超の細胞、１０９個超の細胞、１０１０個超の細胞又は１０１１個超であり得る。
本明細書に開示された組成物及び製剤中において、細胞は、一般に、１リットル以下、５００ｍＬ以下、２５０ｍＬ以下又は１００ｍＬ以下の容量である。よって、投与された細胞の密度は、典型的に、１０４個の細胞／ｍＬ、１０７個の細胞／ｍＬ又は１０８個の細胞／ｍＬより多い。
示されているように、組成物は、少なくとも１つの遺伝子修飾された細胞型（例えば、修飾されたＴ細胞、ＮＫ細胞又は幹細胞）を含む。製剤は、異なる型の遺伝子修飾された細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及び／又は組み合わせた幹細胞）を含み得る。
異なる型の遺伝子修飾された細胞又は細胞サブセット（例えば、修飾されたＴ細胞、ＮＫ細胞及び／又は幹細胞）は、異なる比、例えば、１：１：１の比、２：１：１の比、１：２：１の比、１：１：２の比、５：１：１の比、１：５：１の比、１：１：５の比、１０：１：１の比、１：１０：１の比、１：１：１０の比、２：２：１の比、１：２：２の比、２：１：２の比、５：５：１の比、１：５：５の比、５：１：５の比、１０：１０：１の比、１：１０：１０の比、１０：１：１０の比などで提供され得る。これらの比は、同じ又は異なる組換えタンパク質を発現する細胞の数にも適用することができる。細胞型のうちの２つのみが組み合わされる場合又は組換えタンパク質の２つの組合せのみが製剤内に含まれる場合、比は、上記に提供された３つの数字の組み合わせから作成され得る任意の２つの数字の組み合わせを含み得る。実施形態では、組み合わされた細胞集団は、有効性及び／又は細胞増殖について、インビトロ、インビボ及び／又はエクスビボで試験され、細胞の有効性及び／又は増殖をもたらす細胞の比が選択される。特定の実施形態は、１：１の比のＣＤ４Ｔ細胞及びＣＤ８Ｔ細胞を含む。
本明細書に開示された細胞ベースの組成物は、例えば、注射、注入、灌流又は洗浄による投与のために調製され得る。組成物及び製剤は、骨髄内、静脈内、皮内、動脈内、結節内、リンパ内、腹腔内、病巣内、腫瘍内、膀胱内及び／又は皮下注射のためにさらに製剤化され得る。
（ｉｘ）使用方法。本明細書に開示された方法は、本明細書に開示された組成物を用いて、対象（ヒト、獣医科動物（イヌ、ネコ、爬虫類、鳥類など）、家畜（ウマ、ウシ、ヤギ、ブタ、ヒツジ、ニワトリなど）及び研究動物（サル、ラット、マウス、魚類など）を治療することを含む。対象を治療することは、治療有効量を送達することを含む。治療有効量は、有効量、予防的治療及び／又は治療的治療を提供する量を含む。
「有効量」は、対象において所望の生理学的変化をもたらすのに必要な組成物の量である。有効量は、多くの場合、研究目的で投与される。本明細書に開示された有効量は、ＣＤ３３関連障害の発生又は進行の評価に関連した動物モデル又はインビトロアッセイにおける統計的に有意な効果をもたらし得る。
「予防的治療」は、ＣＤ３３関連（例えば、ＣＤ３３発現）障害の徴候若しくは症状を示さず、又はＣＤ３３関連障害の初期の徴候若しくは症状のみを示す対象に投与された治療を含み、それにより、治療は、ＣＤ３３関連障害をさらに進展させるリスクを低減又は減少させる目的で投与される。したがって、予防的治療は、ＣＤ３３関連障害を予防する治療として機能する。
「治療的治療」は、ＣＤ３３関連障害の徴候又は症状を示す対象に投与され、ＣＤ３３関連障害のそれらの徴候又は症状を低減又は排除する目的で対象に投与される治療を含み得る。治療的治療は、ＣＤ３３関連障害の存在若しくは活性を低減、制御若しくは排除し、及び／又はＣＤ３３関連障害の副作用を低減、制御若しくは排除し得る。
「治療的処置」はまた、画像化を必要とする対象に投与される処置を含み得る。対象は、診断を補助するため、治療介入についての位置を特定するため、身体部分の機能を評価するため、及び／又は状態の存在若しくは非存在を評価するために画像化を必要とし得る。治療的画像化処置の有効性は、その意図する目的に十分な画像の捕捉に基づいて確認され得る。例示的な種類の画像化には、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）、単一光子放出コンピューター断層撮影法、ラジオアイソトープレノグラフィー及びシンチグラフィーが含まれる。
有効量としての機能、予防的治療又は治療的処置は相互に排他的ではなく、特定の実施形態では、投与される用量は２つ以上の治療の種類を達成し得る。
特定の実施形態では、治療有効量は抗がん効果をもたらす。抗がん効果は、がん細胞数の減少、転移数の減少、転移の予防若しくは低減、腫瘍体積の減少、腫瘍成長の阻害、平均余命の延長、対象の寿命の延長、がん細胞における化学感受性若しくは放射線感受性の誘発、がん細胞増殖の阻害、がん関連疼痛の低減及び／又は治療後のがんの再燃若しくは再発の低減を含む。
「腫瘍」は、細胞（新生細胞又は腫瘍細胞と呼ばれる）の異常成長により形成される腫脹又は病変である。「腫瘍細胞」は、急速な無制御細胞増殖により成長する異常細胞であり、新たな成長を開始した刺激が停止した後も成長し続ける異常細胞である。腫瘍は、正常組織との構造的組織化及び機能的協調の部分的又は完全な欠如を示し、通常、良性、前悪性又は悪性であり得る明瞭な組織塊を形成する。
特定の実施形態では、治療有効量は、免疫応答を誘導する。免疫応答は、がん細胞に対するものであり得る。
ＣＤ３３関連障害の例には、白血病及びリンパ腫などの血液がん及び他の骨髄性障害又はリンパ増殖性障害が含まれる。
例示的な白血病には、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＬ）、肥満細胞白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）及び巨核球性白血病が含まれる。
ＡＭＬの例示的なサブタイプには、急性好塩基球性白血病、急性赤白血病（ＡＭＬ－Ｍ６）、急性巨核芽球性白血病（ＡＭＬ－Ｍ７）、急性単芽球性白血病（ＡＭＬ－Ｍ５ａ）、急性単球性白血病（ＡＭＬ－Ｍ５ｂ）、顆粒球成熟を伴う急性骨髄芽球性白血病、成熟を伴わない急性骨髄芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病（ＡＭＬ－Ｍ４）、骨髄線維症を伴う急性汎骨髄症、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、赤白血病（ＡＭＬ－Ｍ６ａ）、最小分化急性骨髄芽球性白血病、骨髄好酸球増多を伴う骨髄単球性白血病及び純粋赤白血病（ＡＭＬ－Ｍ６ｂ）が含まれる。
例示的なリンパ腫には、多発性骨髄腫が含まれる。
本明細書に開示された組成物はまた、上記のリンパ球増殖性障害及び血液がんに関連する合併症又は疾患を治療するために使用され得る。例えば、ＡＭＬに関連する合併症には、先行する骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、以前は「前白血病」として知られていた）、二次性白血病、特に二次性ＡＭＬ、白血球数増加及びアウエル小体の欠如が含まれ得る。とりわけ、白血球停滞及び中枢神経系（ＣＮＳ）の関与、白血球増加症、残存疾患もまた、ＡＭＬに関連する合併症又は疾患とみなされる。
本明細書に開示された組成物は、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）をターゲティングするために使用され得る。ＭＤＳＣは、免疫抑制性腫瘍微小環境において主要なプレーヤーであり、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の抗腫瘍反応性を阻害することが見出されている。特定のＭＤＳＣは、ＣＤ３３の発現が高く、単球性ＭＤＳＣ及び未成熟ＭＤＳＣを含め、抗ＣＤ３３治療の標的とされ得る。
本明細書に開示された組成物はまた、ダウン症、トリソミー、ファンコニー貧血、ブルーム症候群、毛細血管拡張性運動失調症、ダイアモンド・ブラックファン貧血、シュワッハマン・ダイアモンド症候群、リ・フラウメニ症候群、神経線維腫症Ｉ型、重症先天性好中球減少症（コストマン症候群とも呼ばれる）などの、ＡＭＬのリスクに関連する他の病態又は遺伝的症候群の治療における使用も見出され得る。
本明細書に開示された組成物はまた、アルツハイマー病の治療における使用も見出され得る。
投与に関して、インビトロアッセイ及び／又は動物モデル研究からの結果に基づいて、治療有効量（本明細書において用量とも称される）が最初に推定され得る。そのような情報は、目的の対象における有用な用量をより正確に決定するために使用され得る。特定の対象に投与される実際の投与量は、標的、体重、状態の重症度、ＣＤ３３関連障害の種類、ＣＤ３３関連障害の病期、過去の又は併用される治療的介入、対象の特発性疾患及び投与経路を含む、身体的及び生理学的要因などのパラメーターを考慮して、医師、獣医又は研究者により決定され得る。
有用な用量は、０．１～５μｇ／ｋｇ又は０．５～１μｇ／ｋｇの範囲であり得る。他の例では、用量は、１μｇ／ｋｇ、１５μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、５５μｇ／ｋｇ、７０μｇ／ｋｇ、９０μｇ／ｋｇ、１５０μｇ／ｋｇ、３５０μｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ、７５０μｇ／ｋｇ、１０００μｇ／ｋｇ、０．１～５ｍｇ／ｋｇ又は０．５～１ｍｇ／ｋｇを含み得る。他の例では、用量は、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、７００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上を含み得る。
治療有効量の細胞ベースの組成物は、１０４～１０９細胞／ｋｇ体重又は１０３～１０１１細胞／ｋｇ体重を含み得る。投与するための治療有効量は、１０２個超の細胞、１０３個超の細胞、１０４個超の細胞、１０５個超の細胞、１０６個超の細胞、１０７個超の細胞、１０８個超の細胞、１０９個超の細胞、１０１０個超の細胞又は１０１１個超を含み得る。
治療有効量は、治療レジメンの過程の間、単一又は複数の用量を（例えば、毎日、隔日、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、毎週、２週間ごと、３週間ごと、毎月、２か月ごと、３か月ごと、４か月ごと、５か月ごと、６か月ごと、７か月ごと、８か月ごと、９か月ごと、１０か月ごと、１１か月ごと又は毎年）投与することにより達成され得る。特定の実施形態では、治療プロトコールは、臨床試験プロトコール又はＦＤＡによって承認された治療プロトコールによって指示され得る。
本明細書に記載されている医薬組成物は、注射、吸入、注入、灌流、洗浄又は摂取によって投与され得る。投与経路には、静脈内、皮内、動脈内、非経口、鼻腔内、結節内、リンパ内、腹腔内、病巣内、前立腺内、膣内、直腸内、局所、髄腔内、腫瘍内、筋肉内、小胞内、経口、皮下及び／又は舌下投与、より詳細には、静脈内、皮内、動脈内、非経口、鼻腔内、結節内、リンパ内、腹腔内、病巣内、前立腺内、膣内、直腸内、局所、髄腔内、腫瘍内、筋肉内、小胞内、経口、皮下及び／又は舌下注射が含まれ得る。
使用方法はまた、例えば、抗体が、放射性同位体コンジュゲートとして製剤化される場合、画像ベースの診断における本明細書に記載されている抗体の使用も含む。
（ｘ）対照集団に由来する参照レベル。本明細書に記載されている治療に関連するパラメーターについて得られた値は、対照集団から導出された参照レベルと比較され得、この比較は、本明細書に記載されている治療が、それを必要とする対象に有効であるかどうかを示し得る。参照レベルは、対照集団からの１つ以上の関連するデータセットから得られ得る。本明細書で使用される場合、「データセット」は、所望の条件下での試料（又は試料の集団）の評価から得られる数値のセットである。データセットの値は、例えば、試料から測定値を実験的に取得し、これらの測定値からデータセットを構成することによって得られ得る。当業者によって理解されるように、参照レベルは、例えば、個々のデータ点の収集から意味のある集合参照レベルに到達するために当該技術分野において有用であり、公知の任意の数学的又は統計的式、例えば、平均、中央値、平均の中央値などに基づき得る。或いは、参照レベル又は参照レベルを作製するためのデータセットは、検査室などのサービス提供者から得られ得る、又はデータセットが保存されているデータベース若しくはサーバーから得られ得る。
データセットからの参照レベルは、対照集団から導出された以前の測定値から導出され得る。「対照集団」は、同様の特定の特徴の対象又は試料の任意の分類である。分類は、例えば、臨床パラメーター、臨床評価、治療レジメン、疾患状態、状態の重症度などに従い得る。特定の実施形態では、分類は、年齢範囲（例えば、６０～６５歳）及び非免疫不全状態に基づく。特定の実施形態では、正常な対照集団には、試験対象と年齢が一致し、免疫が低下していない個体が含まれる。特定の実施形態では、年齢の一致は、状況下で臨床的に関連するように、例えば、０～１０歳、３０～４０歳、６０～６５歳、７０～８５歳などが含まれる。特定の実施形態では、対照集団は、ＣＤ３３関連障害を有し、治療有効量を投与されていない対照を含み得る。
特定の実施形態では、本明細書に記載されている治療に関連する特定のパラメーターの値についての関連する参照レベルは、本明細書に開示された治療が、それを必要とする対象に治療的に有効であるかどうかを決定するために対照集団における治療に関連する特定の対応するパラメーターの値に基づいて得られる。
特定の実施形態では、試料の値が、参照レベルと統計的に有意に異なる又は参照レベルと統計的に有意に異ならないかどうかに基づいて、結論が導き出される。差が偶然のみに基づいて発生すると予測されるレベルの範囲内にある場合、測定値は統計的に有意に異ならない。対照的に、統計的に有意な差又は増加は、偶然だけで発生すると予測されるものより大きいものである。統計的有意性又はその欠如は、当該技術分野において周知の様々な方法のいずれかによって決定され得る。統計的有意性の一般的に使用される尺度の例は、ｐ値である。ｐ値は、データ点がランダムな偶然のみの結果である、特定のデータ点に相当する所与の結果を得る確率を表す。結果は、多くの場合、０．０５以下のｐ値で有意である（ランダムな偶然ではない）とみなされる。特定の実施形態では、試料の値及び参照レベルが、統計的に有意に異ならない場合、試料の値は、正常な対照集団から導出された参照レベル「と同等である」。
以下の例示的な実施形態及び実施例は、本開示の特定の非限定的な実施形態を実証するために含まれる。当業者は、本開示に照らして、本開示の精神及び範囲から逸脱することなく、本明細書に開示された特定の実施形態に対して多くの変更を行うことができ、依然として同様又は類似の結果を得ることができることを認識する。
（ｘｉ）例示的な実施形態。
１．Ｎｏｒｔｈ、ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ又はＳｅｔ５に従って、６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント１、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５又は１３Ｅ１１の相補性決定領域（ＣＤＲ）セットを含む抗体又はその抗原結合断片。
２．６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント１、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５若しくは１３Ｅ１１の可変軽鎖、及び６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント１、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５若しくは１３Ｅ１１の対応する可変重鎖、又は
６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５、７Ｄ５、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５若しくは１３Ｅ１１の可変軽鎖と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖、及び６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント１、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５若しくは１３Ｅ１１の対応する可変重鎖と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖
を含む抗体又はその抗原結合断片。
３．抗原結合断片が、ＶＨ－ＶＬ配向又はＶＬ－ＶＨ配向のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）（例えば、図１８の配列番号１５２～１６１を参照のこと。）を含む、実施形態１又は２に記載の抗体又は抗原結合断片。
４．実施形態１～３のいずれかに記載のヒト化抗体又は抗原結合断片。
５．抗体又は抗原結合断片が、ＰＥＧ化されている、実施形態１～４のいずれかに記載の抗体又は抗原結合断片。
６．抗体がＦｃ修飾を含む、実施形態１～５のいずれかに記載の抗体又は抗原結合断片。
７．Ｆｃ修飾が、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ（ＧＡＳＤＡＬＩＥ）、ｈｕＩｇＧ４ ＰｒｏＡｌａＡｌａ、ｈｕＩｇＧ２ｍ４及び／又はｈｕＩｇＧ２ｓｉｇｍａ変異を含む、実施形態６に記載の抗体。
８．Ｖセットドメインの存在にかかわらず、膜貫通領域の１１５残基内のＣＤ３３のＣ２セットＩｇ様ドメインに結合する又はＶセットドメインの非存在下でのみＣ２セットＩｇ様ドメインに結合する、実施形態１～７のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
９．抗ＣＤ３３免疫毒素、抗ＣＤ３３抗体－薬物コンジュゲート、抗体－フルオロフォアコンジュゲート、抗ＣＤ３３抗体－放射性同位体コンジュゲート、抗ＣＤ３３二重特異性抗体、抗ＣＤ３３二重特異性免疫細胞誘導抗体、抗ＣＤ３３三重特異性抗体及び／又は抗ＣＤ３３四重特異性抗体の一部として、Ｎｏｒｔｈ、ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ又はＳｅｔ５に従って、６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント１、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５又は１３Ｅ１１の相補性決定領域（ＣＤＲ）セットを含む結合ドメインを含むＣＤ３３ターゲティング剤。
１０．抗ＣＤ３３免疫毒素、抗ＣＤ３３抗体－薬物コンジュゲート、抗体－フルオロフォアコンジュゲート、抗ＣＤ３３抗体－放射性同位体コンジュゲート、抗ＣＤ３３二重特異性抗体、抗ＣＤ３３二重特異性免疫細胞誘導抗体、抗ＣＤ３３三重特異性抗体及び／又は抗ＣＤ３３四重特異性抗体の一部として、６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント２、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５若しくは１３Ｅ１１の可変軽鎖、及び６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント２、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５若しくは１３Ｅ１１の対応する可変重鎖、又は
抗ＣＤ３３免疫毒素、抗ＣＤ３３抗体－薬物コンジュゲート、抗体－フルオロフォアコンジュゲート、抗ＣＤ３３抗体－放射性同位体コンジュゲート、抗ＣＤ３３二重特異性抗体、抗ＣＤ３３二重特異性免疫細胞誘導抗体、抗ＣＤ３３三重特異性抗体及び／又は抗ＣＤ３３四重特異性抗体の一部として、６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５、７Ｄ５、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５若しくは１３Ｅ１１の可変軽鎖と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖、及び６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント２、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５若しくは１３Ｅ１１の対応する可変重鎖と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖
を含む結合ドメインを含むＣＤ３３ターゲティング剤。
１１．ＣＤ３３ターゲティング剤が、抗ＣＤ３３免疫毒素を含み、毒素が、ホロ毒素又はヘミ毒素を含む、実施形態９又は１０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
１２．ＣＤ３３ターゲティング剤が、抗ＣＤ３３免疫毒素を含み、毒素が、アブリン、ブーガニン、ブリオジン１、ジフテリア毒素（ＤＴ）、ゲロニン、ヤドギリレクチン、モデシン、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質（ＰＡＰ）、シュードモナス外毒素（ＰＥ）、リシン及び／又はサポリンを含む、実施形態９～１１のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
１３．ＣＤ３３ターゲティング剤が、抗ＣＤ３３抗体－薬物コンジュゲートを含み、薬物が、モノメチルアウリスタチンＥ［ＭＭＡＥ］、ベドチン、ドラスタチン、アウリスタチン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ネモルビシン、ＰＮＵ－１５９６８２、アントラサイクリン、デュオカルマイシン、ビンカアルカロイド、タキサン、トリコテセン、ＣＣ１０６５、カンプトテシン、エリナフィド、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン及び／又はプロプラノロールを含む、実施形態９～１２のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
１４．ＣＤ３３ターゲティング剤が、抗ＣＤ３３抗体－放射性同位体コンジュゲートを含み、放射性同位体が、ヒ素－７２、ヒ素－７４、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、イットリウム－９０、ルテチウム－１７７、アスタチン－２１１、アクチニウム－２２５、ビスマス－２１２及び／又はビスマス－２１３を含む、実施形態９～１３のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
１５．ＣＤ３３ターゲティング剤が、抗ＣＤ３３抗体－放射性同位体コンジュゲートを含み、放射性同位体が、２２５Ａｃ、２２８Ａｃ、１１１Ａｇ、１２４Ａｍ、７２Ａｓ、７４Ａｓ、２１１Ａｔ、２０９Ａｔ、１９４Ａｕ、１２８Ｂａ、７Ｂｅ、２０６Ｂｉ、２４５Ｂｋ、２４６Ｂｋ、７６Ｂｒ、１１Ｃ、４７Ｃａ、２５４Ｃｆ、２４２Ｃｍ、５１Ｃｒ、６７Ｃｕ、１５３Ｄｙ、１５７Ｄｙ、１５９Ｄｙ、１６５Ｄｙ、１６６Ｄｙ、１７１Ｅｒ、２５０Ｅｓ、２５４Ｅｓ、１４７Ｅｕ、１５７Ｅｕ、５２Ｆｅ、５９Ｆｅ、２５１Ｆｍ、２５２Ｆｍ、２５３Ｆｍ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、１４６Ｇｄ、１５３Ｇｄ、６８Ｇｅ、１７０Ｈｆ、１７１Ｈｆ、１９３Ｈｇ、１９３ｍＨｇ、１６０ｍＨｏ、１３０Ｉ、１３１Ｉ、１３５Ｉ、１１４ｍＩｎ、１８５Ｉｒ、４２Ｋ、４３Ｋ、７６Ｋｒ、７９Ｋｒ、８１ｍＫｒ、１３２Ｌａ、２６２Ｌｒ、１６９Ｌｕ、１７４ｍＬｕ、１７６ｍＬｕ、２５７Ｍｄ、２６０Ｍｄ、２８Ｍｇ、５２Ｍｎ、９０Ｍｏ、２４Ｎａ、９５Ｎｂ、１３８Ｎｄ、５７Ｎｉ、６６Ｎｉ、２３４Ｎｐ、１５Ｏ、１８２Ｏｓ、１８９ｍＯｓ、１９１Ｏｓ、３２Ｐ、２０１Ｐｂ、１０１Ｐｄ、１４３Ｐｒ、１９１Ｐｔ、２４３Ｐｕ、２２５Ｒａ、８１Ｒｂ、１８８Ｒｅ、１０５Ｒｈ、２１１Ｒｎ、１０３Ｒｕ、３５Ｓ、４４Ｓｃ、７２Ｓｅ、１５３Ｓｍ、１２５Ｓｎ、９１Ｓｒ、１７３Ｔａ、１５４Ｔｂ、１２７Ｔｅ、２３４Ｔｈ、４５Ｔｉ、１６６Ｔｍ、２３０Ｕ、２３７Ｕ、２４０Ｕ、４８Ｖ、１７８Ｗ、１８１Ｗ、１８８Ｗ、１２５Ｘｅ、１２７Ｘｅ、１３３Ｘｅ、１３３ｍＸｅ、１３５Ｘｅ、８５ｍＹ、８６Ｙ、９０Ｙ、９３Ｙ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、６５Ｚｎ、７１ｍＺｎ、８６Ｚｒ、９５Ｚｒ及び／又は９７Ｚｒを含む、実施形態９～１４のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
１６．多重特異性抗体を含む、実施形態９～１５のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
１７．多重特異性抗体が、二重特異性抗体、三重特異性抗体又は四重特異性抗体を含む、実施形態１６に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
１８．多重特異性抗体が、免疫細胞を活性化する結合ドメイン（例えば、図１８の配列番号１及び１６２～１７１を参照のこと。）を含む、実施形態１６又は１７に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
１９．免疫細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞又はマクロファージである、実施形態１８に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
２０．Ｔ細胞が、ＣＤ３Ｔ細胞、ＣＤ４Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞及び／又はナイーブＴ細胞である、実施形態１９に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
２１．免疫細胞を活性化する結合ドメインが、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０、ＤＮＡＭ－１、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ１１９、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ２０９、Ｆ４／８０、ＩＦＧＲ２、Ｔｏｌｌ様受容体１－９、ＩＬ－４Ｒα又はＭＡＲＣＯに結合する、実施形態１８～２０のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
２２．結合ドメインが、Ｔ細胞を活性化し、ＯＫＴ３抗体、４Ｂ４－Ｄ７抗体、４Ｅ７－Ｃ９抗体、１８Ｆ５－Ｈ１０抗体のＣＤＲを含む、又はＣＤ３ＨｃＦｖ及びＣＤ３ＬｃＦｖを含む、実施形態１８～２１のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
２３．結合ドメインが、Ｔ細胞を活性化し、ＴＧＮ１４１２抗体のＣＤＲを含む、実施形態１８～２２のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
２４．結合ドメインが、Ｔ細胞を活性化し、ＯＫＴ８抗体のＣＤＲを含む、実施形態１８～２３のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
２５．結合ドメインが、Ｔ細胞を活性化し、ＴＣＲを含む、実施形態１８～２４のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
２６．６Ｈ９及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、
９Ｇ２及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、
１Ｈ７及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、
２Ｄ５及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、
５Ｄ１２及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、
３Ａ５バリアント１及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、又は
３Ａ５バリアント２及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、又は
７Ｄ５バリアント１及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、又は
７Ｄ５バリアント２及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、又は
８Ｆ５及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、又は
１２Ｂ１２及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、又は
１１Ｄ１１及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、又は
７Ｅ７及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、又は
１１Ｄ５及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット、又は
１３Ｅ１１及び配列番号１３９に記載の配列を有するＣＤ３ＨｃＦｖ及び配列番号１３８に記載の配列を有するＣＤ３ＬｃＦｖのＣＤＲセット
を有する、実施形態１８～２５のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
２７．配列番号１５４又は１５５に記載の配列を有する、実施形態１８～２６のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
２８．６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント１、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５又は１３Ｅ１１のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を含み、ｓｃＦｖが、ＶＨ－ＶＬ配向又はＶＬ－ＶＨ配向（例えば、図１８の配列番号１５２～１６１を参照のこと。）であり得る、実施形態９～２７のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
２９．リンカーをさらに含む、実施形態１～８のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原断片、又は実施形態９～２８のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
３０．リンカーが、Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカーである、実施形態２９に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
３１．Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカーが、（ＧｌｙｘＳｅｒｙ）ｎを含み、ｘ及びｙが、独立して、０～１０の整数であり、ただし、ｘ及びｙの両方が０であることはなく、ｎが、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０の整数である、実施形態３０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
３２．Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカーが、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号１０４）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号１０５）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）２（配列番号１０６）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）１（配列番号１０７）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）２（配列番号１０８）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）１（配列番号１０９）、（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）２（配列番号１１０）（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）１、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号１１１）、ＧＧＳＧＧＧＳＧＳＧ（配列番号１１２）又はＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１３）を含む、実施形態３０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
３３．対象への投与のために製剤化された、実施形態１～８若しくは２９のいずれかに記載の抗体若しくは抗原結合断片及び／又は実施形態９～３２のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤を含む組成物。
３４．実施形態１～８のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合断片、又は実施形態９～３２のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤を発現するように遺伝子修飾された細胞。
３５．インビボ又はエクスビボにおけるものである、実施形態３４に記載の細胞。
３６．Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、単球／マクロファージ、造血幹細胞（ＨＳＣ）又は造血前駆細胞（ＨＰＣ）である、実施形態３４又は３５に記載の細胞。
３７．ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞及び／又はナイーブＴ細胞から選択されるＴ細胞である、実施形態３４～３６のいずれかに記載の細胞。
３８．ＣＤ８＋Ｔ細胞である、実施形態３７に記載の細胞。
３９．実施形態３４～３８のいずれかに記載の細胞の集団及び薬学的に許容される担体を含む製剤。
４０．ＣＤ３３関連障害の治療を必要とする対象においてＣＤ３３関連障害を治療する方法であって、治療有効量の実施形態３３に記載の組成物及び／又は実施形態３９に記載の製剤を対象に投与することを含み、それによって、それを必要とする対象においてＣＤ３３関連障害を治療する、方法。
４１．ＣＤ３３関連障害が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を含む、実施形態４０に記載の方法。
４２．ＣＤ３３関連障害が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＬ）、肥満細胞白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）又は巨核球性白血病を含む、実施形態４０に記載の方法。
４３．製剤が、対象に対して自己由来又は同種異系である、実施形態４０～４２のいずれかに記載の方法。
４４．対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現するか又は欠くかを決定すること、並びに
対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現する場合、
６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメイン、及び
５Ｄ１２及び８Ｆ５のうちの１つ以上の結合ドメイン
を含む組成物を含む併用療法を選択することをさらに含む、実施形態４０～４３のいずれかに記載の方法。
４５．対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現するか又は欠くかを決定すること、並びに
対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現しない場合、
６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメイン、及び
１２Ｂ１２、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１及び７Ｅ７のうちの１つ以上の結合ドメイン
を含む組成物を含む併用療法を選択することをさらに含む、実施形態４０～４３のいずれかに記載の方法。
４６．ＣＤ３３発現細胞に対する免疫応答の活性化を必要とする対象において、ＣＤ３３発現細胞に対する免疫応答を活性化させる方法であって、治療有効量の実施形態３３に記載の組成物及び／又は実施形態３９に記載の製剤を対象に投与することを含み、それによって、それを必要とする対象においてＣＤ３３発現細胞に対する免疫応答を活性化させる、方法。
４７．ＣＤ３３発現細胞が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞を含む、実施形態４６に記載の方法。
４８．ＣＤ３３発現細胞が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＬ）、肥満細胞白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）又は巨核球性白血病細胞を含む、実施形態４６に記載の方法。
４９．対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現するか又は欠くかを決定すること、並びに
対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現する場合、
６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメイン、及び
５Ｄ１２及び８Ｆ５のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物
を含む併用療法を選択することをさらに含む、実施形態４６～４８のいずれかに記載の方法。
５０．対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現するか又は欠くかを決定すること、並びに
対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現しない場合、
６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメイン、及び
１２Ｂ１２、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１及び７Ｅ７のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物
を含む併用療法を選択することをさらに含む、実施形態４６～４８のいずれかに記載の方法。
５１．６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメイン、並びに５Ｄ１２及び８Ｆ５のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物を含むキット。
５２．６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメイン、並びに１２Ｂ１２、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１及び７Ｅ７のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物を含むキット。
５３．６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物、並びに５Ｄ１２及び８Ｆ５のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物を含むキット。
５４．６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物、並びに１２Ｂ１２、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１及び７Ｅ７のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物を含むキット。
５５．インビボ画像化における、並びに／又はインビトロ若しくはインビボでＣＤ３３発現細胞を濃縮、単離及び／若しくは検出するための、先行する実施形態のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合断片、又は先行する実施形態のいずれかに記載のＣＤ３３ターゲティング剤の使用。
（ｘｉｉ）実験例。概要。悪性障害及び非悪性障害においてＣＤ３３を標的とすることへの関心が高まっている。急性骨髄性白血病では、ＣＤ３３抗体－薬物コンジュゲートであるゲムツズマブオゾガマイシン（ＧＯ）による生存期間の延長により、この戦略が有効であることが確証されている。それでも、ＧＯは一部の患者にのみ有益であり、より強力なＣＤ３３指向治療法を開発する試みが促されている。１つの制限として、ＣＤ３３抗体は典型的に膜遠位Ｖセットドメインを認識する。このドメインが分子の細胞外部分内に異なって位置している、種々の人工ＣＤ３３タンパク質を使用して、膜近位のターゲティングエピトープをターゲティングすることが、ＣＤ３３抗体ベースの治療法のエフェクター機能を増強するかどうかを試験した。この考えと一致して、ＣＤ３３Ｖセット／ＣＤ３二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）及びＣＤ３３Ｖセット指向キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞は、全長ＣＤ３３を発現する細胞より、Ｃ２セットドメイン全体を欠くＣＤ３３バリアントを発現する細胞に対して、実質的に大きな細胞傷害性を誘発したが、ＧＯによって誘導された細胞傷害効果はＶセットドメインの位置とは無関係であった。したがって、ヒトＣＤ３３のＣ２セットドメインに対してマウス及びヒト抗体を惹起し、Ｖセットドメインの存在／非存在に関係なくＣＤ３３に結合した抗体を同定した（「ＣＤ３３ＰＡＮ抗体」）。これらの抗体は、ＣＤ３３に結合すると内在化し、ＣＤ３３ＰＡＮ／ＣＤ３ ＢｓＡｂとして、ＣＤ３３＋細胞に対して強力な細胞溶解効果をもたらした。まとめると、このデータにより、ＣＤ３３ＰＡＮ抗体ベースの治療法をさらに開発するための理論的根拠が得られる。
序論。ＣＤ３３（Ｓｉｇｌｅｃ－３）は、主に成熟している及び成熟した骨髄細胞並びにそれらの新生細胞対応物に提示される分化抗原である（Ｗａｌｔｅｒら、Ｂｌｏｏｄ．１１９（２６）：６１９８～６２０８頁、２０１２年；及びＤｕａｎら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３８：３６５～３９５頁、２０２０年）。この発現パターンにより、何よりもまず急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）において、ＣＤ３３＋細胞を治療的にターゲティングすることに長期間にわたる試みが行われてきたが（Ｗａｌｔｅｒら、Ｂｌｏｏｄ．１１９（２６）：６１９８～６２０８頁、２０１２年；Ｇｒｏｓｓｂａｒｄら、Ｂｌｏｏｄ．８０（４）：８６３～８７８頁、１９９２年；及びＬａｓｚｌｏら、Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｖ．２８（４）：１４３～１５３頁、２０１４年）、同様に、他の悪性腫瘍におけるＣＤ３３＋腫瘍細胞、ＣＤ３３＋骨髄由来サプレッサー細胞及び正常なＣＤ３３＋ミクログリア細胞においても行われてきた（Ｗａｌｔｅｒ、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２０（９）：９５５～９５８頁、２０２０年）。ＡＭＬでは、抗体－薬物コンジュゲートであるゲムツズマブオゾガマイシン（ＧＯ）により治療された一部の患者の生存期間が延長したことから、薬物標的としてＣＤ３３が有効であることが確証されている（Ｇｏｄｗｉｎら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ．３１（９）：１８５５～１８６８頁、２０１７年）。
ＧＯの成功及び限界により、より効果的なＣＤ３３指向治療法を開発するための進行中の研究が促進された。しかしながら、ＣＤ３３をターゲティングすることは、困難であることが証明され、いくつかの薬物は、有効性の欠如のために臨床的に失敗した。したがって、Ｔ細胞誘導二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞を含む、より強力な抗ＣＤ３３治療法を開発することに試みが集中されている。これらの試みの１つの重要な制限として、ＧＯを含む既存及び研究中の治療法は、ＣＤ３３のエクソン２にコードされた膜遠位Ｖセットドメイン内の免疫優性エピトープをほぼ独占的に認識する（図１）（Ｗａｌｔｅｒ、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ．２７（４）：３３９～３４８頁、２０１８年）。抗体の膜近位結合は、それらのエフェクター機能を増大させることができるので（Ｂｌｕｅｍｅｌら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５９（８）：１１９７～１２０９頁、２０１０年；Ｌｉｎ、Ｐｈａｒｍｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｐｅｒｓ Ｍｅｄ．３：５１～５９頁、２０１０年；Ｈａｓｏら、Ｂｌｏｏｄ．１２１（７）：１１６５～１１７４頁、２０１３年；Ｃｌｅａｒｙら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８（１０）：３９９９～４０１１頁、２０１７年）、膜近位Ｃ２セットドメインに対する抗体によりＣＤ３３をターゲティングすることは、免疫エフェクター細胞を誘導するＣＤ３３指向治療を最適化するはずである。ここで、この概念が実験的に試験され、一連のＣ２セットドメイン指向ＣＤ３３抗体及びそれに由来する治療法の創出が記載されている。
結果。細胞膜からの結合距離は、ＣＤ３３抗体の免疫エフェクター機能と相関する。標的エピトープと細胞膜との間の距離がＴ細胞誘導免疫療法の有効性に影響を与えるかどうかを調べるために、ヒトＣＤ３３のＶセットドメインが細胞膜から異なる距離に保持された一連の人工タンパク質を生成して、ＣＤ３３Ｖセット／ＣＤ３ ＢｓＡｂ又はＣＤ３３Ｖセット指向ＣＡＲ Ｔ細胞などのＶセットドメイン指向ＣＤ３３抗体ベースの治療によるターゲティングを可能にした（図２）。具体的には、ＣＤ３３標的エピトープを細胞膜に近づけるために、エクソン３及び４を除去することによってＣ２セットドメイン全体を欠いた人工ＣＤ３３タンパク質（ＣＤ３３ΔＥ３－４）を生成した。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９（Ｈｕｍｂｅｒｔら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ．３３（３）：７６２～８０８頁、２０１９年）により内因性ＣＤ３３が削除された、操作されたヒトＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞株を使用して、ＣＤ３３ＦＬ又はＣＤ３３ΔＥ３－４のいずれかを発現させた。最初の一連の実験では、比較的類似したレベルの標的分子を発現する亜系統を、種々の用量のＣＤ３３Ｖセット／ＣＤ３ ＢｓＡｂ及び免疫エフェクター細胞としての健康なドナーＴ細胞を用いた短期間のインビトロ細胞傷害性アッセイに供した。比較物として、ＧＯを使用し、これは、抗腫瘍効果のためにカリケアマイシン－γ１ペイロードによって誘導された毒性効果に完全に依存する（Ｗａｌｔｅｒら、Ｂｌｏｏｄ．１１９（２６）：６１９８～６２０８頁、２０１２年；Ｌａｓｚｌｏら、Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｖ．２８（４）：１４３～１５３頁、２０１４年；及びＧｏｄｗｉｎら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ．３１（９）：１８５５～１８６８頁、２０１７年）。図３Ａ～３Ｃに示されているように、ＣＤ３３Ｖセット／ＣＤ３ ＢｓＡｂは、ＣＤ３３ＦＬを発現する細胞よりもＣＤ３３ΔＥ３－４を発現するＡＭＬ及びＡＬＬ細胞に対して大きな細胞傷害性を発揮したが、ＧＯによって誘導された細胞傷害効果は同様であった。ＣＤ３３Ｖセット／ＣＤ３ ＢｓＡｂにより処理した場合、これらの同じＣＤ３３構築物を発現するＲＥＨ及びＲＳ４；１１細胞（ヒトＣＤ３３－Ｂ急性リンパ芽球性白血病［Ｂ－ＡＬＬ］細胞株）において同様の効果が見られた（ＲＳ４；１１細胞についてのデータを図４に示した。）。Ｔ細胞を誘導するＣＤ３３指向治療の有効性に対する標的エピトープ膜距離の重要性をさらに実証するために、ヒトＣＤ２２の種々の部分を使用してキメラタンパク質を生成し、ＣＤ３３標的エピトープと細胞膜との間の距離を延長した（図２）。図５に要約されているように、ＣＤ３３Ｖセット／ＣＤ３ ＢｓＡｂの細胞傷害効果は、ＣＤ３３ＦＬを発現する対となった細胞よりもＣＤ２２／ＣＤ３３ＦＬキメラタンパク質を発現するＡＭＬ細胞に対して低かった。まとめると、これらのデータは、ＣＤ３３抗体結合エピトープの位置を変化させると、ＣＤ３３抗体由来治療のエフェクター機能が変化することを実証し、Ｃ２セットドメイン特異的治療法を介したＣＤ３３の膜近位ターゲティングが、ＣＤ３３ターゲティングＴ細胞免疫療法の有効性を改善できることを示唆している。
Ｖセットドメインの存在に関係なく、ヒトＣＤ３３の膜近位Ｉｇ様Ｃ２セットドメインを認識する第１世代マウス抗体（「ＣＤ３３ＰＡＮ抗体」）の産生。ヒトＣＤ３３のＣ２セットドメインを認識する十分に特徴付けられた抗体は現在存在しないため、ヒトＣＤ３３ＦＬのＥＣＤ全体又はヒトＣＤ３３ΔＥ２のＥＣＤ全体に連結させたマウスＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む免疫原を注射したＢＡＬＢ／ｃ、ＣＤ１及びＦ１マウスにおいてこの特異性を有する抗体を惹起した。エピトープ特異性を確認するためにＣＤ３３ΔＥ２又はＣＤ３３ＦＬのいずれかを発現するように操作されたヒト急性白血病細胞株を使用したスクリーニングアッセイにおいて、ＣＤ３３ΔＥ２及びＣＤ３３ＦＬの両方への結合を示すいくつかのハイブリドーマと共にＣＤ３３ＦＬのみを認識するハイブリドーマを同定し、これらの抗体によって認識されたエピトープが、ＣＤ３３のＣ２セットドメインに位置し、Ｖセットドメインが発現されているか否かに関係なく、抗体にアクセス可能であることが実証された（図６Ａ～６Ｃの例を参照のこと。）。ヒトＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞（ＭＬ－１）及びＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９によりＣＤ３３を除去したＭＬ－１亜系統を用いた実験により、ヒトＣＤ３３に対する結合特異性が確認された。これまでに同定されたヒトＣＤ３３の全ての天然に存在するバリアントはＣ２セットドメインを含有するため、この結合パターンはＣＤ３３ＰＡＮ抗体と一致する（一方、一部のバリアント、例えば、ＣＤ３３ΔＥ２はＶセットドメインを欠く。）。
ＣＤ３３ＰＡＮ抗体の生物物理学的特性。ハイブリドーマ１Ｈ７を配列決定し、組換え抗体として生成した。ＲＥＨ（ヒトＣＤ３３－Ｂ－ＡＬＬ）細胞及びＣＤ３３ΔＥ２又はＣＤ３３ＦＬを発現するように操作された亜系統を使用することにより、組換え１Ｈ７はＣＤ３３ΔＥ２及びＣＤ３３ＦＬに結合することが示され、すなわち、Ｖセットドメインの存在下でもＣ２セットドメインを認識し、これは、ＣＤ３３ＰＡＮ抗体の明確な特徴である；図７）。Ｃ２セットドメイン結合と一致して、１Ｈ７は、唯一のＣＤ３３バリアントとしてＣＤ３３ΔＥ３－４を発現するように操作されたヒト急性白血病細胞を認識しなかったが、Ｖセットドメイン特異的抗体（クローンＰ６７．６）は認識した。Ｃａｒｔｅｒｒａ及びＢｉａｃｏｒｅによる生物物理学的特性研究の要約を図８に示す。一例として、１Ｈ７の場合、Ｂｉａｃｏｒｅによる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）は、ＣＤ３３ＦＬ及びＣＤ３３ΔＥ２への結合について５．３５ｎＭ及び２８０ｎＭのＫＤを示した（図９）。１Ｈ７は、ＣＤ３３のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介欠失を伴うＡＭＬ細胞への適切なネガティブな結合を示し（図１０）、全てのＣＤ３３ ｒｓ１２４５９４１９遺伝子型を包含する様々なＡＭＬ細胞株に結合した（図１１）。さらなる特徴付けのために、１Ｈ７を、抗体内在化及びＣＤ３３抗原調節実験に供した。図１２Ａ、１２Ｂに示されているように、１Ｈ７は、ＧＯにおいて使用した親マウスＣＤ３３Ｖセット抗体であるＰ６７．６と同様の反応速度でＭＬ－１及びＴＨＰ－１細胞に内在化したが、ＨＬ－６０細胞では、１Ｈ７はＰ６７．６よりも急速に内在化した（Ｗａｌｔｅｒら、Ｂｌｏｏｄ．１１９（２６）：６１９８～６２０８頁、２０１２年；Ｌａｓｚｌｏら、Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｖ．２８（４）：１４３～１５３頁、２０１４年；及びＧｏｄｗｉｎら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ．３１（９）：１８５５～１８６８頁、２０１７年）。また、ＣＤ３３の細胞表面密度が１Ｈ７又はＰ６７．６のいずれかに２４時間曝露した際に減少した程度も同様であった（図１２Ａ、１２Ｂ）。まとめると、これらのデータは、ＣＤ３３ＰＡＮ抗体が内在化し、有毒なペイロードの送達に適するようになることを示す。
ＣＤ３３ＰＡＮ／ＣＤ３ ＢｓＡｂの開発及び特徴付け。ＣＤ３３ＰＡＮ抗体ベースの治療法が、細胞傷害特性を有するかどうかを判断するために、ＣＤ３３ＰＡＮ／ＣＤ３ ＢｓＡｂを、標準的なｓｃＦｖ－ｓｃＦｖフォーマットの１Ｈ７配列を用いて構築した（Ｇｏｄｗｉｎら、Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ．１８９（１）：ｅ９－ｅ１３、２０２０年）。エフェクター細胞として健康な成人ドナーからの末梢血由来Ｔ細胞を使用して、インビトロ短期細胞傷害性アッセイを実施した。この１Ｈ７／ＣＤ３ ＢｓＡｂは、ｒｓ１２４５９４１９遺伝子型ＴＴを有するＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞を含むＡＭＬ細胞株に対して活性を示したが（図１４）、ＣＤ３３のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介欠失を伴うＭＬ－１細胞に対して細胞溶解効果を示さなかった（図１５）。さらに、二価ＩｇＧ－ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１Ｈ７は、ＲＥＨ細胞及びＣＤ３３ΔＥ２を過剰発現するＭＬ－１細胞に対して効果的であり、このＢｓＡｂのＣ２セットドメイン特異性を確認した（図１６）。１Ｈ７／ＣＤ３ ＢｓＡｂの活性をより広範に評価するために、これを、一次患者ＡＭＬ検体のパネルに対してインビトロで試験した。合計２０検体を試験し、１１検体が４８時間での生存率に基づいて事前に定義された包含基準を満たした（閾値＞３５％、以前の研究に使用されたものと同様の閾値である（Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎら、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．１０（８）：ｅ０１３５９４５、２０１５年））。図１７に示されているように、１Ｈ７／ＣＤ３ ＢｓＡｂは、これらの研究において、ＡＭＬ患者からの一次芽球に対して用量依存性の細胞傷害性を誘導した。まとめると、これらのデータは、ＣＤ３３ＰＡＮ抗体が、Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞を作用機序として誘導する治療法の基礎として機能し得ることを示す。
（ｘｉｉｉ）最終パラグラフ。本明細書に提供されている核酸及びアミノ酸配列は、３７ Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８２２において規定され、ＷＩＰＯ Ｓｔａｎｄａｒｄ ＳＴ．２５（１９９８年）、付録２、表１及び３の表に示されているヌクレオチド塩基及びアミノ酸残基についての略号を使用して示されている。各核酸配列の１つの鎖だけが示されているが、適切である実施形態では相補鎖も含まれるものとして理解される。
本明細書で明示的に提供されていない範囲で、本明細書で開示されているタンパク質についてのコード配列及び本明細書で開示されているコード配列についてのタンパク質配列は、当業者によって容易に導出され得る。
所与のＣＤＲ又はＦＲの正確なアミノ酸配列境界は、いくつかの周知スキームのいずれかを使用して容易に決定され得、そのようなスキームには、Ｋａｂａｔら（１９９１年）「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ．（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら（１９９７年）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７～９４８頁（Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム）；Ｍａｃｃａｌｌｕｍら（１９９６年）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２：７３２～７４５頁（Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けスキーム）；Ｍａｒｔｉｎら（１９８９年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８６：９２６８～９２７２頁（ＡｂＭ番号付けスキーム）；Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ Ｐら（２００３年）Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７（１）：５５～７７頁（ＩＭＧＴ番号付けスキーム）；並びにＨｏｎｅｇｇｅｒ及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ（２００１年）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３０９（３）：６５７～６７０頁（「Ａｈｏ」番号付けスキーム）に記載されているものが含まれる。所与のＣＤＲ又はＦＲの境界は、同定に使用されるスキームによって変わり得る。例えば、Ｋａｂａｔスキームは、構造アラインメントに基づき、その一方でＣｈｏｔｈｉａスキームは、構造情報に基づく。Ｋａｂａｔスキーム及びＣｈｏｔｈｉａスキームの両方についての番号付けは、最も一般的な抗体領域配列長に基づくものであり、挿入には挿入文字、例えば「３０ａ」によって対応し、一部の抗体には欠失が出現する。２つのスキームは、ある特定の挿入及び欠失（「インデル」）を異なる位置に配置するため、結果として異なる番号付けになる。Ｃｏｎｔａｃｔスキームは、複雑な結晶構造の分析に基づくものであり、多くの点でＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームと類似している。特定の実施形態では、本明細書に開示されている抗体ＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔ番号付けに従う。
本明細書で開示及び参照されている配列のバリアントも含まれる。生物活性を失わずにどのアミノ酸残基を置換、挿入、又は削除できるかを決定する指針は、ＤＮＡＳＴＡＲ（商標）（Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）ソフトウェアなどの当該技術分野において周知のコンピュータープログラムを使用して見出すことができる。好ましくは、本明細書に開示されているタンパク質バリアントにおけるアミノ酸変化は、保存的アミノ酸変化、すなわち、同様に帯電した又は帯電していないアミノ酸の置換である。保存的アミノ酸変化には、それらの側鎖において関連するアミノ酸ファミリーの１つの置換が含まれる。
抗体のバリアントには、タンパク質の結合に悪影響を及ぼさない１つ以上の保存的アミノ酸置換又は１つ以上の非保存的置換を有するものが含まれ得る。
特定の実施形態では、ＶＬ領域は、開示されたＶＬに由来し得る又はそれに基づき得、開示されたＶＬと比較した場合に、１つ以上の（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個の）挿入、１つ以上の（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個の）欠失、１つ以上の（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個の）アミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）又は上記において言及された変化の組合せを含み得る。挿入、欠失又は置換は、各ＣＤＲが、変化を含まない、又は１つ、２つ若しくは３つ以下の変化を含み、修飾されたＶＬ領域を含む抗体が、その標的エピトープに、野生型結合ドメインと同様の親和性により、なおも特異的に結合し得ることを条件として、この領域のアミノ末端若しくはカルボキシ末端又は両方の末端を含む、ＶＬ領域内の任意の場所に存在し得る。
特定の実施形態では、ＶＨ領域は、開示されたＶＨに由来し得る又はそれに基づき得、本明細書に開示されたＶＨと比較した場合に、１つ以上の（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個の）挿入、１つ以上の（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個の）欠失、１つ以上の（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個の）アミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換又は非保存的アミノ酸置換）又は上記において言及された変化の組合せを含み得る。挿入、欠失又は置換は、各ＣＤＲが、変化を含まない、又は１つ、２つ若しくは３つ以下の変化を含み、修飾されたＶＨ領域を含む抗体が、その標的エピトープに、野生型結合ドメインと同様の親和性により、なおも特異的に結合し得ることを条件として、この領域のアミノ末端若しくはカルボキシ末端又は両方の末端を含む、ＶＨ領域内の任意の場所に存在し得る。
特定の実施形態では、保存的アミノ酸置換は、参照配列の構造特徴を、実質的に変化させない場合がある（例えば、置換アミノ酸は、参照配列内において生じる螺旋を切断する、又は参照配列を特徴付ける他の種類の二次構造を破壊する傾向がないものとする。）。当該技術分野において認識されている、ポリペプチドの二次構造及び三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４年））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ ＆ Ｊ．Ｔｏｏｚｅ、ｅｄｓ．、Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９９１年））；並びにＴｈｏｒｎｔｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５４：１０５（１９９１年）に記載されている。
ペプチド又はタンパク質において、アミノ酸の適切な保存的置換は当業者に公知であり、一般に、得られる分子の生物学的活性を変化させずに行うことができる。当業者は、一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸置換が、生物学的活性を実質的に変化させないことを認識する（例えば、Ｗａｔｓｏｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ、第４版、１９８７年、Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．、２２４頁を参照のこと。）。天然に存在するアミノ酸は、一般に、以下のような保存的置換ファミリーに分類される：群１：アラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、セリン（Ｓｅｒ）及びトレオニン（Ｔｈｒ）；群２：（酸性）：アスパラギン酸（Ａｓｐ）及びグルタミン酸（Ｇｌｕ）；群３：（酸性；極性負電荷残基及びそれらのアミドとしても分類される）：アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、Ａｓｐ及びＧｌｕ；群４：Ｇｌｎ及びＡｓｎ；群５：（塩基性；極性正電荷残基としても分類される）：アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）及びヒスチジン（Ｈｉｓ）；群６（大きな脂肪族、非極性残基）：イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、バリン（Ｖａｌ）及びシステイン（Ｃｙｓ）；群７（非電荷極性）：チロシン（Ｔｙｒ）、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ及びＴｈｒ；群８（大きな芳香族残基）：フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）及びＴｙｒ；群９（非極性）：プロリン（Ｐｒｏ）、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ及びＴｒｐ；群１１（脂肪族）：Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅ；群１０（小さな脂肪族、非極性又はわずかに極性の残基）：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ及びＧｌｙ；並びに群１２（硫黄含有）：Ｍｅｔ及びＣｙｓ。さらなる情報は、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ（１９８４年）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙに見出され得る。
このような変更を行う場合、アミノ酸のハイドロパシー指数が考慮され得る。相互作用的な生物学的機能をタンパク質に付与する上でのハイドロパシーアミノ酸指数の重要性は、当該技術分野において一般に理解されている（Ｋｙｔｅ及びＤｏｏｌｉｔｔｌｅ、１９８２年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７（１）、１０５～３２頁）。各アミノ酸には、その疎水性特徴及び電荷特徴に基づいてハイドロパシー指数が割り当てられている（Ｋｙｔｅ及びＤｏｏｌｉｔｔｌｅ、１９８２年）。これらの値は下記のものである：Ｉｌｅ（＋４．５）、Ｖａｌ（＋４．２）、Ｌｅｕ（＋３．８）、Ｐｈｅ（＋２．８）、Ｃｙｓ（＋２．５）、Ｍｅｔ（＋１．９）、Ａｌａ（＋１．８）、Ｇｌｙ（－０．４）、Ｔｈｒ（－０．７）、Ｓｅｒ（－０．８）、Ｔｒｐ（－０．９）、Ｔｙｒ（－１．３）、Ｐｒｏ（－１．６）、Ｈｉｓ（－３．２）、グルタミン酸（－３．５）、Ｇｌｎ（－３．５）、アスパラギン酸（－３．５）、Ａｓｎ（－３．５）、Ｌｙｓ（－３．９）及びＡｒｇ（－４．５）。
当該技術分野では、ある特定のアミノ酸を同様のハイドロパシー指数又はスコアを有する他のアミノ酸によって置換し、同様の生物学的活性を有するタンパク質を依然として得ることができること、すなわち、生物学的機能的に同等のタンパク質を依然として得ることができることが知られている。そのような変更を行う場合、ハイドロパシー指数が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内であるアミノ酸の置換が特に好ましく、±０．５以内であるアミノ酸の置換がさらに特に好ましい。当該技術分野において、同様のアミノ酸の置換は、親水性に基づいても効率的に行われ得ることも理解される。
米国特許第４，５５４，１０１号に詳述されているように、アミノ酸残基には下記の親水性値が割り当てられている：Ａｒｇ（＋３．０）、Ｌｙｓ（＋３．０）、アスパラギン酸（＋３．０±１）、グルタミン酸（＋３．０±１）、Ｓｅｒ（＋０．３）、Ａｓｎ（＋０．２）、Ｇｌｎ（＋０．２）、Ｇｌｙ（０）、Ｔｈｒ（－０．４）、Ｐｒｏ（－０．５±１）、Ａｌａ（－０．５）、Ｈｉｓ（－０．５）、Ｃｙｓ（－１．０）、Ｍｅｔ（－１．３）、Ｖａｌ（－１．５）、Ｌｅｕ（－１．８）、Ｉｌｅ（－１．８）、Ｔｙｒ（－２．３）、Ｐｈｅ（－２．５）、Ｔｒｐ（－３．４）。アミノ酸を同様の親水性値を有する別のアミノ酸に置換し、生物学的に同等のタンパク質、具体的には免疫学的に同等のタンパク質を依然として得ることができることは理解される。そのような変更では、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、親水性値が±１以内であるアミノ酸の置換が特に好ましく、親水性値が±０．５以内であるアミノ酸の置換がさらに特に好ましい。
上に概要が示されているように、アミノ酸置換は、アミノ酸側鎖置換基の関連類似性、例えば、その疎水性、親水性、電荷、サイズなどに基づくものであり得る。
他の箇所に示されているように、遺伝子配列のバリアントには、コドン最適化バリアント、配列多型、スプライスバリアント及び／又は統計的に有意な程度にコードタンパク質の機能に影響を与えない変異が含まれ得る。
本明細書に開示されているタンパク質、核酸及び遺伝子配列のバリアントには、本明細書に開示されているタンパク質、核酸又は遺伝子配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、８０％の配列同一性、８５％の配列、９０％の配列同一性、９５％の配列同一性、９６％の配列同一性、９７％の配列同一性、９８％の配列同一性又は９９％の配列同一性を有する配列も含まれる。
特定の実施形態では、バリアントは、本明細書に開示されている抗体配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％の配列同一性を有する配列を含む又はそれらの配列である。特定の実施形態では、バリアントは、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び／若しくは重鎖可変領域（ＶＨ）又は両方に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％の配列同一性を有する配列を含む又はそれらの配列であり、各ＣＤＲは、ＶセットＩｇ様ドメインの存在若しくは非存在に関係なくＣ２セットＩｇ様ＣＤ３３エピトープに特異的に結合する又は本明細書に記載されている抗体のエピトープ特異性に従ってＶセットＩｇ様ドメインに結合する、本明細書に開示されている参照抗体又はその断片若しくは誘導体から、変化を含まない、又は１つ、２つ若しくは３つ以下の変化を含む。
「配列同一性％」とは、２つ以上の配列を比較することによって決定されるそれらの配列の間の関連性を指す。当該技術分野では、「同一性」は、タンパク質配列の鎖間の一致、核酸配列の鎖間の一致又は遺伝子配列の鎖間の一致によって決定されるそのような配列の間の配列関連度も意味する。「同一性」（「類似性」と称されることが多い）は、公知の方法によって容易に計算され得、こうした方法には、（限定されないが）Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．、ｅｄ．）Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ（１９８８年）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．、ｅｄ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ（１９９４年）；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ、Ｐａｒｔ Ｉ（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．及びＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．、ｅｄｓ．）Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、ＮＪ（１９９４年）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ，Ｇ．、ｅｄ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８７年）；並びにＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．及びＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．、ｅｄｓ．）Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ（１９９２年）に記載されているものが含まれる。同一性を決定するための好ましい方法は、被検配列間の一致が最良となるように設計される。同一性及び類似性を決定するための方法は、公的に利用可能なコンピュータープログラムにおいて体系化されている。配列アライメント及び同一性パーセント計算は、ＬＡＳＥＲＧＥＮＥバイオインフォマティクスコンピューティングスイート（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）のＭｅｇａｌｉｇｎプログラムを使用して実施され得る。デフォルトパラメーター（ギャップペナルティ＝１０、ギャップ長ペナルティ＝１０）を用いてＣｌｕｓｔａｌアライメント法（Ｈｉｇｇｉｎｓ及びＳｈａｒｐ ＣＡＢＩＯＳ、５、１５１～１５３頁（１９８９年））を使用して多重配列アライメントも実施され得る。関連プログラムには、ＧＣＧプログラムスイート（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ ９．０、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）；ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３～４１０頁（１９９０年）；ＤＮＡＳＴＡＲ（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）；及びＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムが組み込まれたＦＡＳＴＡプログラム（Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．、［Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｓｙｍｐ．］（１９９４年）、Ｍｅｅｔｉｎｇ Ｄａｔｅ １９９２年、１１１～２０頁、編集者：Ｓｕｈａｉ，Ｓａｎｄｏｒ、出版社：Ｐｌｅｎｕｍ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．）も含まれる。本開示の文脈内では、解析に配列解析ソフトウェアが使用される場合、解析の結果は言及プログラムの「デフォルト値」に基づくものであることが理解される。本明細書で使用される場合、「デフォルト値」は、任意の一連の値又はパラメーターを意味し、こうした一連の値又はパラメーターは、最初の初期化時にソフトウェアに最初に設定されるものである。
バリアントには、本明細書に開示された配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の下でハイブリダイズし、参照配列と同じ機能を与える核酸分子も含まれる。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の例には、５０％のホルムアミド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハート溶液、１０％の硫酸デキストラン及び２０μｇ／ｍｌの変性断片化サケ精子ＤＮＡを含む４２℃の溶液中で一晩のインキュベートを行い、その後に５０℃の０．１×ＳＳＣ中でフィルターを洗浄するものが含まれる。ハイブリダイゼーション及びシグナル検出のストリンジェンシーの変更は、ホルムアミド濃度（ホルムアミドのパーセントを下げるとストリンジェンシーが低下する。）、塩条件又は温度を操作することによって主に達成される。例えば、中程度に高いストリンジェンシー条件には、６×ＳＳＰＥ（２０×ＳＳＰＥ＝３ＭのＮａＣｌ、０．２ＭのＮａＨ２ＰＯ４、０．０２ＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）、０．５％のＳＤＳ、３０％のホルムアミド、１００μｇ／ｍｌのサケ精子ブロッキングＤＮＡを含む３７℃の溶液中で一晩のインキュベートを行い、その後に１×ＳＳＰＥ、０．１％のＳＤＳを用いて５０℃での洗浄を行うものが含まれる。さらに、ストリンジェンシーをさらに下げるには、ストリンジェントなハイブリダイゼーションの後に実施される洗浄が、塩濃度を高めて（例えば、５×ＳＳＣ）行われ得る。上記の条件の変形形態は、ハイブリダイゼーション実験でのバックグラウンドの抑制に使用される代替のブロッキング試薬を含め、及び／又はそれで置き換えることによって達成され得る。典型的なブロッキング試薬には、デンハート試薬、ＢＬＯＴＴＯ、ヘパリン、変性サケ精子ＤＮＡ及び商業的に利用可能な専売製剤が含まれる。特定のブロッキング試薬を含めるには、適合性に関する問題に起因して上記のハイブリダイゼーション条件を改変する必要があり得る。
「特異的に結合する」とは、結合ドメイン（例えば、二重特異性抗体結合ドメイン又はナノ粒子選択細胞をターゲティングするリガンドのもの）とその対応結合分子とが、関連環境試料中のいずれの他の分子又は成分とも顕著に会合することなく１０５Ｍ－１以上の親和性又はＫａ（すなわち、１／Ｍの単位を有する特定の結合相互作用の平衡結合定数）で会合することを指す。結合ドメインは、「高親和性」又は「低親和性」として分類され得る。特定の実施形態では、「高親和性」結合ドメインとは、Ｋａが少なくとも１０７Ｍ－１、少なくとも１０８Ｍ－１、少なくとも１０９Ｍ－１、少なくとも１０１０Ｍ－１、少なくとも１０１１Ｍ－１、少なくとも１０１２Ｍ－１又は少なくとも１０１３Ｍ－１である結合ドメインを指す。特定の実施形態では、「低親和性」結合ドメインとは、Ｋａが最大１０７Ｍ－１、最大１０６Ｍ－１、最大１０５Ｍ－１である結合ドメインを指す。或いは、親和性は、Ｍの単位を有する特定の結合相互作用の平衡解離定数（Ｋｄ）（例えば、１０－５Ｍ～１０－１３Ｍ）として定義され得る。ある特定の実施形態では、結合ドメインは、「親和性の増強」が行われたものであり得、これは、野生型（又は親）結合ドメインより対応結合分子への結合が強まるように結合ドメインが選択又は操作されることを指す。例えば、親和性の増強は、参照結合ドメインより対応結合分子に対するＫａ（平衡会合定数）が大きいことに起因し得る、又は参照結合ドメインのものより対応結合分子に対するＫｄ（解離定数）が小さいことに起因し得る、又は参照結合ドメインのものより対応結合分子に対するｏｆｆ速度（Ｋｏｆｆ）が低いことに起因し得る。特定の対応結合分子に特異的に結合する結合ドメインを検出するため、並びに結合親和性を決定するための様々なアッセイ、例えば、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ及びＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析が知られている（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら、１９４９年、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０頁；及び米国特許第５，２８３，１７３号、同第５，４６８，６１４号又は同等の文献も参照のこと。）。
別段の指定がない限り、本開示の実施は、免疫学、分子生物学、微生物学、細胞生物学及び組換えＤＮＡの従来の技術を用いることができる。これらの方法は、下記の刊行物に記載されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版（１９８９年）；Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、（１９８７年）；ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ＩＮ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｍ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎら、ＰＣＲ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（１９９１年）；ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎら、ｅｄｓ．ＰＣＲ ２：Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、（１９９５年）；Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ、ｅｄｓ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、（１９８８年）；並びにＲ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、ｅｄ．Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（１９８７年）を参照のこと。
当業者によって理解されるように、本明細書に開示された各実施形態は、その特定の記載の要素、工程、成分又は構成要素を含む、それから本質的になる、又はそれからなり得る。したがって、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」又は「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）、からなる、又はから本質的になる」を記載するものと解釈すべきである。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」という移行用語は、主要量である場合でさえも、不特定の要素、工程、成分又は構成要素を含むこと、それに限定されないこと、及びをそれ含むことが可能であることを意味する。「からなる」という移行句は、特定されない要素、工程、成分又は構成要素はいずれも除外するものである。「から本質的になる」という移行句は、特定の要素、工程、成分又は構成要素、及び実施形態に実質的に影響を与えないものに実施形態の範囲を限定するものである。実質的な影響があれば、抗体と抗原との結合が統計的に有意に低減されることになる。
別段の指定がない限り、本明細書及び特許請求の範囲において使用される成分量、特性、例えば、分子量、反応条件などを表す全ての数は、全ての場合において「約」という用語によって修飾されていると理解されるものとする。したがって、矛盾する指定がない限り、本明細書及び添付の特許請求の範囲に示されている数値パラメーターは、本発明によって得ようとする所望の特性に応じて変動し得る近似値である。最低でも、特許請求の範囲への均等論の適用を制限することは意図しないが、少なくとも、報告される有効桁の数を踏まえ、通常の丸め手法を適用することによって、各数値パラメーターを解釈すべきである。さらに明瞭化することが求められる場合、「約」という用語は、記載の数値又は範囲と共に使用される場合、当業者によって合理的に理解される意味を有し、すなわち、記載の値又は範囲よりいくらか多い又はいくらか少ないことを示し、記載の値の±２０％の範囲内、記載の値の±１９％の範囲内、記載の値の±１８％の範囲内、記載の値の±１７％の範囲内、記載の値の±１６％の範囲内、記載の値の±１５％の範囲内、記載の値の±１４％の範囲内、記載の値の±１３％の範囲内、記載の値の±１２％の範囲内、記載の値の±１１％の範囲内、記載の値の±１０％の範囲内、記載の値の±９％の範囲内、記載の値の±８％の範囲内、記載の値の±７％の範囲内、記載の値の±６％の範囲内、記載の値の±５％の範囲内、記載の値の±４％の範囲内、記載の値の±３％の範囲内、記載の値の±２％の範囲内又は記載の値の±１％の範囲内である。
本発明の広い範囲を示す数値範囲及びパラメーターが近似であるかにかかわらず、具体例に示されている数値は可能な限り正確に報告されている。しかしながら、いずれの数値も、そのそれぞれの試験測定において見られる標準偏差に必然的に起因するある特定の誤差を本質的に含む。
本発明について記載する文脈において（特に、以下の特許請求の範囲の文脈において）使用された、”ａ”、”ａｎ”、”ｔｈｅ”という用語及び同様の指示対象は、本明細書に別段の指定がない限り、又は文脈上明確に矛盾しない限り、単数及び複数の両方を含むと解釈されるものとする。本明細書での値の範囲の記載は、単に、そうした範囲に入るそれぞれの個々の値に個別に言及することを簡潔化する方法とすることを意図するものにすぎない。本明細書に別段の指定がない限り、それぞれの個別値は、それが本明細書に個別に記載されている場合と同様に本明細書に組み込まれる。本明細書に別段の指定がない限り、又はその他の状況で文脈上明確に矛盾しない限り、本明細書に記載されている方法は全て、任意の適切な順序で実施することができる。本明細書で提供されている例又は例示の言葉（例えば、「など」）のいずれか又は全ての使用は、単に、本発明の理解を容易にすることを意図するものにすぎず、そうした言葉を使用せずに請求される本発明の範囲を限定するものではない。本明細書のいずれの言葉も、本発明の実施に必要不可欠ないずれかの非請求要素を示すものとして解釈してはならない。
本明細書に開示されている本発明の代替の要素又は実施形態を群化することは、限定とは解釈されない。それぞれの群メンバーは、個別に言及及び請求され得る、又は他の群のメンバー若しくは本明細書に見出される他の要素との任意の組み合わせで言及及び請求され得る。利便性及び／又は特許性の理由から、群のメンバーの１つ以上が、群に含められ得る、又は群から除外され得るものと予測される。いずれかのそのような包含又は除外が生じた場合、本明細書は、改変された群を含むものと見なされ、したがって、添付の特許請求の範囲において使用される全てのマーカッシュ群の記述を満たす。
本発明の実施に最良の様式であると本発明者らが認識するものを含めて、本明細書には本発明のある特定の実施形態が記載されている。当然のことながら、前述の説明を読めば、こうした記載の実施形態に対する変形形態が当業者に明らかになる。本発明者らは、そのような変形形態を当業者が必要に応じて利用することを予想し、本発明者らは、本明細書に具体的に記載されているものとは異なる様式で本発明を実施することを意図する。したがって、本発明は、本明細書に添付される特許請求の範囲に記載の主題の改変形態及び均等物を全て、適用法によって許容されるものとして含む。さらに、本明細書に別段の指定がない限り、又はその他の状況で文脈上明確に矛盾しない限り、上記の要素の任意の組合せがその可能な全ての変形形態において本発明に含まれる。
さらに、本明細書を通じて特許、印刷刊行物、学術論文及び他の文書（本明細書での参照物）への参照が多数なされている。そうした参照物はそれぞれ、それらの全体がそれらの参照教示内容を対象として参照によって本明細書に個別に組み込まれる。
最後に、本明細書に開示されている本発明の実施形態は本発明の原理を例示するものであることが理解される。利用され得る他の改変形態も本発明の範囲に含まれる。したがって、例として、限定されないが、本明細書の教示内容に従って本発明の代替構成が利用され得る。したがって、本発明は、明確に提示及び記載されているものに限定されない。
本明細書に示されている詳細は例としてのものであり、本発明の好ましい実施形態の例示的な議論を目的とするものにすぎず、本発明の様々な実施形態の原理及び概念的側面の説明として最も有用かつ理解が容易であると考えられるものを提供するために提示される。この点に関して、本発明の基礎的理解に必要なものよりも詳細に本発明の構造詳細を示そうとしているわけではなく、説明を図面及び／又は例と併用することで、本発明のいくつかの形態が実施の際にどのように具体化し得るかを当業者に明らかにしようとするものである。
本開示において使用される定義及び説明は、以下の例の中で明確かつ曖昧さを残さずに改変されない限り、又は意味を適用するといずれかの解釈が無意味若しくは本質的に無意味となる場合、任意の将来の解釈において優先される意図及び意向を有するものである。用語の解釈を当てはめると当該用語が無意味又は本質的に無意味になる場合、Ｗｅｂｓｔｅｒ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ、第３版又は当業者に知られている辞書、例えば、Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｅｄｓ．Ａｔｔｗｏｏｄ Ｔら、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、２００６年）から定義が取得されるものとする。

Claims (59)

  1. （ｉ）配列番号２０に記載の配列を有するＣＤＲＬ１、
    配列番号１５に記載の配列を有するＣＤＲＬ２、
    配列番号１６に記載の配列を有するＣＤＲＬ３、
    配列番号２１に記載の配列を有するＣＤＲＨ１、
    配列番号２２に記載の配列を有するＣＤＲＨ２、及び
    配列番号２３に記載の配列を有するＣＤＲＨ３、
    （ｉｉ）配列番号２５４に記載の配列を有するＣＤＲＬ１
    配列ＹＴＳを有するＣＤＲＬ２、
    配列番号１６に記載の配列を有するＣＤＲＬ３、
    配列番号２５４に記載の配列を有するＣＤＲＨ１、
    配列番号２５５に記載の配列を有するＣＤＲＨ２、及び
    配列番号２３に記載の配列を有するＣＤＲＨ３、
    （ｉｉｉ）配列番号２０に記載の配列を有するＣＤＲＬ１、
    配列番号１８７に記載の配列を有するＣＤＲＬ２、
    配列番号１６に記載の配列を有するＣＤＲＬ３、
    配列番号２９１に記載の配列を有するＣＤＲＨ１、
    配列番号２９２に記載の配列を有するＣＤＲＨ２、及び
    配列番号２９３に記載の配列を有するＣＤＲＨ３、又は
    （ｉｖ）配列番号２０に記載の配列を有するＣＤＲＬ１、
    配列番号１８７に記載の配列を有するＣＤＲＬ２、
    配列番号１６に記載の配列を有するＣＤＲＬ３、
    配列番号３２５に記載の配列を有するＣＤＲＨ１、
    配列番号３２６に記載の配列を有するＣＤＲＨ２、及び
    配列番号２９３に記載の配列を有するＣＤＲＨ３
    を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）のセットを含む抗体又はその抗原結合断片。
  2. 配列番号４０に記載の配列を有する可変軽鎖及び配列番号４１に記載の配列を有する可変重鎖、又は
    配列番号４０に記載の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖及び配列番号４１に記載の配列を有する可変重鎖と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖
    を有する、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  3. 抗原結合断片が、ＶＨ－ＶＬ配向又はＶＬ－ＶＨ配向の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  4. ｓｃＦｖが、配列番号１５４又は１５５に記載の配列を有する、請求項３に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  5. ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインを有する二重特異性抗体の一部としての、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  6. 第２の結合ドメインが、
    配列番号１３８に記載の配列を有する可変軽鎖及び配列番号１３９に記載の配列を有する可変重鎖、又は
    配列番号１３８に記載の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖及び配列番号１３９に記載の配列を有する可変重鎖と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖
    を有する、請求項５に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  7. 二重特異性抗体が、配列番号１６４又は１６５に記載の配列を有する、請求項５に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  8. ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、Ｎｏｒｔｈ又はＣｈｏｔｈｉａによって定義される６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、５Ｄ１２、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント１、７Ｄ５バリアント２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５又は１３Ｅ１１の相補性決定領域（ＣＤＲ）セットを含む抗体又はその抗原結合断片。
  9. 抗ＣＤ３３免疫毒素、抗ＣＤ３３抗体－薬物コンジュゲート、抗体－フルオロフォアコンジュゲート、抗ＣＤ３３抗体－放射性同位体コンジュゲート、抗ＣＤ３３二重特異性抗体、抗ＣＤ３３二重特異性免疫細胞誘導抗体、抗ＣＤ３３三重特異性抗体及び／又は抗ＣＤ３３四重特異性抗体の一部として、ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、Ｎｏｒｔｈ又はＣｈｏｔｈｉａによって定義される６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント１、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５又は１３Ｅ１１の相補性決定領域（ＣＤＲ）セットを含む結合ドメインを含むＣＤ３３ターゲティング剤。
  10. 抗ＣＤ３３免疫毒素、抗ＣＤ３３抗体－薬物コンジュゲート、抗体－フルオロフォアコンジュゲート、抗ＣＤ３３抗ＣＤ３３抗体－放射性同位体コンジュゲート、抗ＣＤ３３二重特異性抗体、抗ＣＤ３３二重特異性免疫細胞誘導抗体、抗ＣＤ３３三重特異性抗体及び／又は抗ＣＤ３３四重特異性抗体の一部として、
    ６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント１、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５若しくは１３Ｅ１１の可変軽鎖、及び６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、５Ｄ１２、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント１、７Ｄ５バリアント２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５若しくは１３Ｅ１１の対応する可変重鎖、又は
    ６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント１、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５若しくは１３Ｅ１１の可変軽鎖と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列、及び６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント１、７Ｄ５バリアント２、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５若しくは１３Ｅ１１の対応する可変重鎖と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列
    を含む結合ドメインを含むＣＤ３３ターゲティング剤。
  11. ＣＤ３３ターゲティング剤が、抗ＣＤ３３免疫毒素を含み、毒素が、ホロ毒素又はヘミ毒素を含む、請求項９又は１０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  12. ＣＤ３３ターゲティング剤が、抗ＣＤ３３免疫毒素を含み、毒素が、アブリン、ブーガニン、ブリオジン１、ジフテリア毒素（ＤＴ）、ゲロニン、ヤドギリレクチン、モデシン、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質（ＰＡＰ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素（ＰＥ）、リシン及び／又はサポリンを含む、請求項９又は１０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  13. ＣＤ３３ターゲティング剤が、抗ＣＤ３３抗体－薬物コンジュゲートを含み、薬物が、モノメチルアウリスタチンＥ［ＭＭＡＥ］、ベドチン、ドラスタチン、アウリスタチン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ネモルビシン、ＰＮＵ－１５９６８２、アントラサイクリン、デュオカルマイシン、ビンカアルカロイド、タキサン、トリコテセン、ＣＣ１０６５、カンプトテシン、エリナフィド、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン及び／又はプロプラノロールを含む、請求項９又は１０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  14. ＣＤ３３ターゲティング剤が、抗ＣＤ３３抗体－放射性同位体コンジュゲートを含み、放射性同位体が、ヒ素－７２、ヒ素－７４、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、イットリウム－９０、ルテチウム－１７７、アスタチン－２１１、アクチニウム－２２５、ビスマス－２１２及び／又はビスマス－２１３を含む、請求項９又は１０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  15. ＣＤ３３ターゲティング剤が、抗ＣＤ３３抗体－放射性同位体コンジュゲートを含み、放射性同位体が、２２５Ａｃ、２２８Ａｃ、１１１Ａｇ、１２４Ａｍ、７２Ａｓ、７４Ａｓ、２１１Ａｔ、２０９Ａｔ、１９４Ａｕ、１２８Ｂａ、７Ｂｅ、２０６Ｂｉ、２４５Ｂｋ、２４６Ｂｋ、７６Ｂｒ、１１Ｃ、４７Ｃａ、２５４Ｃｆ、２４２Ｃｍ、５１Ｃｒ、６７Ｃｕ、１５３Ｄｙ、１５７Ｄｙ、１５９Ｄｙ、１６５Ｄｙ、１６６Ｄｙ、１７１Ｅｒ、２５０Ｅｓ、２５４Ｅｓ、１４７Ｅｕ、１５７Ｅｕ、５２Ｆｅ、５９Ｆｅ、２５１Ｆｍ、２５２Ｆｍ、２５３Ｆｍ、６６Ｇａ、７２Ｇａ、１４６Ｇｄ、１５３Ｇｄ、６８Ｇｅ、１７０Ｈｆ、１７１Ｈｆ、１９３Ｈｇ、１９３ｍＨｇ、１６０ｍＨｏ、１３０Ｉ、１３１Ｉ、１３５Ｉ、１１４ｍＩｎ、１８５Ｉｒ、４２Ｋ、４３Ｋ、７６Ｋｒ、７９Ｋｒ、８１ｍＫｒ、１３２Ｌａ、２６２Ｌｒ、１６９Ｌｕ、１７４ｍＬｕ、１７６ｍＬｕ、２５７Ｍｄ、２６０Ｍｄ、２８Ｍｇ、５２Ｍｎ、９０Ｍｏ、２４Ｎａ、９５Ｎｂ、１３８Ｎｄ、５７Ｎｉ、６６Ｎｉ、２３４Ｎｐ、１５Ｏ、１８２Ｏｓ、１８９ｍＯｓ、１９１Ｏｓ、３２Ｐ、２０１Ｐｂ、１０１Ｐｄ、１４３Ｐｒ、１９１Ｐｔ、２４３Ｐｕ、２２５Ｒａ、８１Ｒｂ、１８８Ｒｅ、１０５Ｒｈ、２１１Ｒｎ、１０３Ｒｕ、３５Ｓ、４４Ｓｃ、７２Ｓｅ、１５３Ｓｍ、１２５Ｓｎ、９１Ｓｒ、１７３Ｔａ、１５４Ｔｂ、１２７Ｔｅ、２３４Ｔｈ、４５Ｔｉ、１６６Ｔｍ、２３０Ｕ、２３７Ｕ、２４０Ｕ、４８Ｖ、１７８Ｗ、１８１Ｗ、１８８Ｗ、１２５Ｘｅ、１２７Ｘｅ、１３３Ｘｅ、１３３ｍＸｅ、１３５Ｘｅ、８５ｍＹ、８６Ｙ、９０Ｙ、９３Ｙ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、６５Ｚｎ、７１ｍＺｎ、８６Ｚｒ、９５Ｚｒ及び／又は９７Ｚｒを含む、請求項９又は１０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  16. 多重特異性抗体を含む、請求項９又は１０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  17. 多重特異性抗体が、二重特異性抗体、三重特異性抗体又は四重特異性抗体を含む、請求項１６に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  18. 多重特異性抗体が、免疫細胞を活性化する結合ドメインを含む、請求項１６に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  19. 免疫細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞又はマクロファージである、請求項１７に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  20. Ｔ細胞が、ＣＤ３Ｔ細胞、ＣＤ４Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞及び／又はナイーブＴ細胞である、請求項１９に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  21. 免疫細胞を活性化する結合ドメインが、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０、ＤＮＡＭ－１、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ１１９、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ２０９、Ｆ４／８０、ＩＦＧＲ２、Ｔｏｌｌ様受容体１－９、ＩＬ－４Ｒα又はＭＡＲＣＯに結合する、請求項１８に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  22. 配列番号１又は１６２～１７１のいずれかに記載の配列を有する、請求項１８に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  23. 結合ドメインが、Ｔ細胞を活性化し、ＯＫＴ３抗体、４Ｂ４－Ｄ７抗体、４Ｅ７－Ｃ９抗体又は１８Ｆ５－Ｈ１０抗体のＣＤＲを含む、請求項１８に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  24. 結合ドメインが、Ｔ細胞を活性化し、ＴＧＮ１４１２抗体のＣＤＲを含む、請求項１８に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  25. 結合ドメインが、Ｔ細胞を活性化し、ＯＫＴ８抗体のＣＤＲを含む、請求項１８に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  26. 結合ドメインが、Ｔ細胞を活性化し、ＴＣＲを含む、請求項１８に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  27. ６Ｈ９、９Ｇ２、１Ｈ７、２Ｄ５、３Ａ５バリアント１、３Ａ５バリアント２、７Ｄ５バリアント１、７Ｄ５バリアント２、５Ｄ１２、８Ｆ５、１２Ｂ１２、１１Ｄ１１、７Ｅ７、１１Ｄ５又は１３Ｅ１１のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を含む、請求項９又は１０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  28. ｓｃＦｖが、配列番号１５２～１６１のいずれか１つに記載の配列を有する、請求項２７に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  29. リンカーをさらに含む、請求項１に記載の抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項９若しくは１０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  30. リンカーが、Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカーである、請求項２９に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  31. Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカーが、（ＧｌｙｘＳｅｒｙ）ｎを含み、ｘ及びｙが、独立して、０～１０の整数であり、ただし、ｘ及びｙの両方が０であることはなく、ｎが、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０の整数である、請求項３０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  32. Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカーが、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号１０４）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号１０５）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）２（配列番号１０６）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）１（配列番号１０７）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）２（配列番号１０８）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）１（配列番号１０９）、（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）２（配列番号１１０）又は（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）１、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号１１１）、ＧＧＳＧＧＧＳＧＳＧ（配列番号１１２）又はＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１３）を含む、請求項３０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤。
  33. 請求項８に記載のヒト化抗体又は抗原結合断片。
  34. ＰＥＧ化されている、請求項８に記載の抗体又は抗原結合断片。
  35. 抗体がＦｃ修飾を含む、請求項８に記載の抗体又は抗原結合断片。
  36. Ｆｃ修飾が、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ（ＧＡＳＤＡＬＩＥ）変異、ｈｕＩｇＧ４ ＰｒｏＡｌａＡｌａ、ｈｕＩｇＧ２ｍ４及び／又はｈｕＩｇＧ２ｓｉｇｍａ変異を含む、請求項３５に記載の抗体又は抗原結合断片。
  37. 対象への投与のために製剤化された、請求項８に記載の抗体若しくはその抗原結合断片及び／又は請求項９若しくは１０に記載のＣＤ３３ターゲティング剤を含む組成物。
  38. 請求項８に記載の抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項１６に記載の多重特異性抗体を発現するように遺伝子修飾された細胞。
  39. インビボ又はエクスビボにおけるものである、請求項３８に記載の細胞。
  40. Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、単球／マクロファージ、造血幹細胞（ＨＳＣ）又は造血前駆細胞（ＨＰＣ）である、請求項３８に記載の細胞。
  41. ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞及び／又はナイーブＴ細胞から選択されるＴ細胞である、請求項３８に記載の細胞。
  42. ＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項３８に記載の細胞。
  43. 請求項３８に記載の細胞の集団及び薬学的に許容される担体を含む製剤。
  44. ＣＤ３３関連障害の治療を必要とする対象においてＣＤ３３関連障害を治療する方法であって、治療有効量の請求項３７に記載の組成物及び／又は請求項４３に記載の製剤を対象に投与することを含み、それによって、それを必要とする対象においてＣＤ３３関連障害を治療する、方法。
  45. ＣＤ３３関連障害が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を含む、請求項４４に記載の方法。
  46. ＣＤ３３関連障害が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＬ）、肥満細胞白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）又は巨核球性白血病を含む、請求項４４に記載の方法。
  47. 製剤中の細胞の集団が、対象に対して自己由来又は同種異系である、請求項４４に記載の方法。
  48. 対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現するか又は欠くかを決定すること、並びに対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現する場合、
    ６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメイン、及び５Ｄ１２及び８Ｆ５のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物
    を含む併用療法を選択することをさらに含む、請求項４４に記載の方法。
  49. 対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現するか又は欠くかを決定すること、並びに対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現しない場合、
    ６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメイン、及び１２Ｂ１２、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１及び７Ｅ７のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物を含む併用療法を選択することをさらに含む、請求項４４に記載の方法。
  50. ＣＤ３３発現細胞に対する免疫応答の活性化を必要とする対象において、ＣＤ３３発現細胞に対する免疫応答を活性化させる方法であって、治療有効量の請求項３７に記載の組成物及び／又は請求項４３に記載の製剤を対象に投与することを含み、それによって、それを必要とする対象においてＣＤ３３発現細胞に対する免疫応答を活性化させる、方法。
  51. ＣＤ３３発現細胞が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞を含む、請求項５０に記載の方法。
  52. ＣＤ３３発現細胞が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＬ）、肥満細胞白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）又は巨核球性白血病細胞を含む、請求項５０に記載の方法。
  53. 製剤中の細胞の集団が、対象に対して自己由来又は同種異系である、請求項５０に記載の方法。
  54. 対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現するか又は欠くかを決定すること、並びに対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現する場合、
    ６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメイン、及び５Ｄ１２及び８Ｆ５のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物
    を含む併用療法を選択することをさらに含む、請求項５０に記載の方法。
  55. 対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現するか又は欠くかを決定すること、並びに対象が、ＣＤ３３のＶセットドメインを発現しない場合、
    ６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメイン、及び１２Ｂ１２、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１及び７Ｅ７のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物
    を含む併用療法を選択することをさらに含む、請求項５０に記載の方法。
  56. ６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメイン、並びに５Ｄ１２及び８Ｆ５のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物を含むキット。
  57. ６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメイン、並びに１２Ｂ１２、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１及び７Ｅ７のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物を含むキット。
  58. ６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物、並びに５Ｄ１２及び８Ｆ５のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物を含むキット。
  59. ６Ｈ９、９Ｇ２、３Ａ５、７Ｄ５、１Ｈ７及び２Ｄ５のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物、並びに１２Ｂ１２、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１１Ｄ１１及び７Ｅ７のうちの１つ以上の結合ドメインを含む組成物を含むキット。
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