JP2021500867A5 - - Google Patents

Description

一部のそのような方法では、ヌクレアーゼ剤は、Ｃａｓタンパク質（例えば、Ｃａｓ９タンパク質）およびガイドＲＮＡを含む。一部のそのような方法では、標的化ベクターは長さが少なくとも１０ｋｂであるか、または５’および３’相同アームの合計が少なくとも１０ｋｂの長さである、大きな標的化ベクターである。一部のそのような方法では、非ヒト動物は、マウスまたはラットである。一部のそのような方法では、非ヒト動物は、マウスである。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
ＴＴＲコード配列と非コード配列の両方を含むヒトＴＴＲ配列を含む遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座をそのゲノムに含む、非ヒト動物。
（項目２）
Ｔｔｒコード配列と非コード配列の両方を含む前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座のある領域が欠失し、ＴＴＲコード配列と非コード配列の両方を含む対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられている、項目１に記載の非ヒト動物。
（項目３）
前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が内因性Ｔｔｒプロモーターを含み、前記ヒトＴＴＲ配列が前記内因性Ｔｔｒプロモーターに作動可能に連結されている、項目１または２に記載の非ヒト動物。
（項目４）
前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の少なくとも１つのイントロンおよび少なくとも１つのエクソンが欠失し、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられている、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目５）
前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の前記Ｔｔｒコード配列全体が欠失し、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられている、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目６）
Ｔｔｒ開始コドンからＴｔｒ停止コドンまでの前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の領域が欠失し、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられている、項目５に記載の非ヒト動物。
（項目７）
前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座がヒトＴＴＲ ３’非翻訳領域を含む、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目８）
内因性Ｔｔｒ ５’非翻訳領域は欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられていない、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目９）
前記Ｔｔｒ開始コドンから前記Ｔｔｒ停止コドンまでの前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の領域が欠失し、前記対応するヒトＴＴＲ配列およびヒトＴＴＲ ３’非翻訳領域を含むヒトＴＴＲ配列で置き換えられており、
前記内因性Ｔｔｒ ５’非翻訳領域は欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられておらず、
前記内因性Ｔｔｒプロモーターは欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられていない、
前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目１０）
（ｉ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座の前記ヒトＴＴＲ配列が、配列番号１８に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含むか；または
（ｉｉ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が、配列番号１に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含むタンパク質をコードし；
（ｉｉｉ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が、配列番号９０に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含むコード配列を含むか；または、
（ｉｖ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が、配列番号１４または１５に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含む、
項目９に記載の非ヒト動物。
（項目１１）
前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座がシグナルペプチドを含むトランスサイレチン前駆体タンパク質をコードし、前記シグナルペプチドをコードする前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の領域が欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられていない、項目１から４のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
（項目１２）
前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の第１のエクソンが欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられていない、項目１１に記載の非ヒト動物。
（項目１３）
前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の第１のエクソンおよび第１のイントロンが欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられていない、項目１２に記載の非ヒト動物。
（項目１４）
第２のＴｔｒエクソンの開始からＴｔｒ停止コドンまでの前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の領域が欠失し、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられている、項目１１から１３のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
（項目１５）
前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座がヒトＴＴＲ ３’非翻訳領域を含む、項目１１から１４のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
（項目１６）
前記第２のＴｔｒエクソンから前記Ｔｔｒ停止コドンまでの前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の領域が欠失し、前記対応するヒトＴＴＲ配列およびヒトＴＴＲ ３’非翻訳領域を含むヒトＴＴＲ配列で置き換えられており、
前記内因性Ｔｔｒ ５’非翻訳領域が欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられておらず、
前記内因性Ｔｔｒプロモーターが欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられていない、
項目１１から１５のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
（項目１７）
（ｉ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座の前記ヒトＴＴＲ配列が、配列番号１９に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含むか；または
（ｉｉ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が、配列番号２に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含むタンパク質をコードし；
（ｉｉｉ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が、配列番号９１に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含むコード配列を含むか；または
（ｉｖ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が、配列番号１６または１７に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含む、
項目１６に記載の非ヒト動物。
（項目１８）
前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が選択カセットもレポーター遺伝子も含まない、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目１９）
前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座についてホモ接合性である、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目２０）
哺乳動物である、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目２１）
ラットまたはマウスである、項目２０に記載の非ヒト動物。
（項目２２）
マウスである、項目２１に記載の非ヒト動物。
（項目２３）
ｉｎ ｖｉｖｏでヒトＴＴＲ標的化試薬の活性を評価する方法であって、
（ａ）項目１から２２のいずれか一項に記載の非ヒト動物に前記ヒトＴＴＲ標的化試薬を投与すること；および
（ｂ）前記非ヒト動物における前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の活性を評価すること
を含む方法。
（項目２４）
前記投与することが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）媒介性送達、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）媒介性送達または流体力学的送達（ＨＤＤ）を含む、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記投与することがＬＮＰ媒介性送達を含む、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記ＬＮＰの用量が約０．１ｍｇ／ｋｇから約２ｍｇ／ｋｇの間にある、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記投与することがＡＡＶ８媒介性送達を含む、項目２４に記載の方法。
（項目２８）
ステップ（ｂ）が、前記非ヒト動物から肝臓を単離し、前記肝臓における前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の活性を評価することを含む、項目２３から２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
ステップ（ｂ）が、前記肝臓以外の臓器または組織における前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の活性を評価することをさらに含む、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記ヒトＴＴＲ標的化試薬がゲノム編集剤であり、前記評価することが前記遺伝子改変Ｔｔｒ遺伝子座の改変を評価することを含む、項目２３から２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記評価することが、前記遺伝子改変Ｔｔｒ遺伝子座内の挿入または欠失の頻度を測定することを含む、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記評価することが、前記遺伝子改変Ｔｔｒ遺伝子座によってコードされるＴｔｒメッセンジャーＲＮＡの発現を測定することを含む、項目２３から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記評価することが、前記遺伝子改変Ｔｔｒ遺伝子座によってコードされるＴＴＲタンパク質の発現を測定することを含む、項目２３から３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記ＴＴＲタンパク質の発現を評価することが、前記非ヒト動物における前記ＴＴＲタンパク質の血清レベルを測定することを含む、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記活性が前記非ヒト動物の前記肝臓で評価される、項目３０から３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記ヒトＴＴＲ標的化試薬が、ヒトＴＴＲ遺伝子のある領域を標的にするように設計されたヌクレアーゼ剤を含む、項目２３から３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記ヌクレアーゼ剤が、Ｃａｓタンパク質、および前記ヒトＴＴＲ遺伝子におけるガイドＲＮＡ標的配列を標的にするように設計されたガイドＲＮＡを含む、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記Ｃａｓタンパク質がＣａｓ９タンパク質である、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記ヒトＴＴＲ標的化試薬が外因性ドナー核酸をさらに含み、前記外因性ドナー核酸が前記ヒトＴＴＲ遺伝子と組み換わるように設計されている、項目３６から３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記外因性ドナー核酸が一本鎖オリゴデオキシヌクレオチド（ｓｓＯＤＮ）である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
ｉｎ ｖｉｖｏでヒトＴＴＲ標的化試薬の活性を最適化する方法であって、
（Ｉ）ＴＴＲコード配列と非コード配列の両方を含むヒトＴＴＲ配列を含む遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座をそのゲノムに含む第１の非ヒト動物において、項目２３から４０のいずれか一項に記載の方法を１回目に実行すること、
（ＩＩ）ＴＴＲコード配列と非コード配列の両方を含む前記ヒトＴＴＲ配列を含む前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座をそのゲノムに含む第２の非ヒト動物において、変数を変更し、ステップ（Ｉ）の方法を変更した前記変数で２回目に実行すること；および
（ＩＩＩ）ステップ（Ｉ）の前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の活性をステップ（ＩＩ）の前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の活性と比較し、より高い活性をもたらす方法を選択すること
を含む方法。
（項目４２）
ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数が、前記ヒトＴＴＲ標的化試薬を前記非ヒト動物に導入する送達方法である、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記投与することがＬＮＰ媒介性送達を含み、ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数がＬＮＰ製剤である、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数が、前記ヒトＴＴＲ標的化試薬を前記非ヒト動物に導入する投与経路である、項目４１に記載の方法。
（項目４５）
ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の濃度または量である、項目４１に記載の方法。
（項目４６）
ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の形態である、項目４１に記載の方法。
（項目４７）
ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ヒトＴＴＲ標的化試薬である、項目４１に記載の方法。
（項目４８）
前記ヒトＴＴＲ標的化試薬が、Ｃａｓタンパク質、およびヒトＴＴＲ遺伝子のガイドＲＮＡ標的配列を標的にするように設計されたガイドＲＮＡを含む、項目４１に記載の方法。
（項目４９）
ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数が、ガイドＲＮＡ配列または前記ガイドＲＮＡ標的配列である、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記Ｃａｓタンパク質および前記ガイドＲＮＡの各々がＲＮＡの形態で投与され、ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数がＣａｓ ｍＲＮＡのガイドＲＮＡに対する比である、項目４８に記載の方法。
（項目５１）
ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数がガイドＲＮＡの改変である、項目４８に記載の方法。
（項目５２）
項目１から２２のいずれか一項に記載の非ヒト動物を作製する方法であって、
（ａ）非ヒト動物胚性幹（ＥＳ）細胞に：
（ｉ）前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の標的配列を標的にするヌクレアーゼ剤；および
（ｉｉ）前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の５’標的配列に対応する５’相同アームおよび前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の３’標的配列に対応する３’相同アームによって挟まれた前記ヒトＴＴＲ配列を含む核酸挿入断片を含む標的化ベクター
を導入するステップであって、前記標的化ベクターは、前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座で組み換えて、前記ヒトＴＴＲ配列を含む前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座をそのゲノムに含む遺伝子改変非ヒトＥＳ細胞を生成する、ステップと；
（ｂ）前記遺伝子改変非ヒトＥＳ細胞を非ヒト動物宿主の胚に導入するステップと；
（ｃ）代理母で前記非ヒト動物宿主の胚を懐胎させるステップであって、前記代理母が、前記ヒトＴＴＲ配列を含む前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座をそのゲノムに含むＦ０後代の遺伝子改変非ヒト動物を生成するステップと
を含む方法。
（項目５３）
前記ヌクレアーゼ剤がＣａｓタンパク質およびガイドＲＮＡを含む、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記Ｃａｓタンパク質がＣａｓ９タンパク質である、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記標的化ベクターは、長さが少なくとも１０ｋｂであるか、または前記５’および３’相同アームの長さの合計が少なくとも１０ｋｂである、大きな標的化ベクターである、項目５２から５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記非ヒト動物がマウスまたはラットである、項目５２から５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記非ヒト動物がマウスである、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
ＴＴＲコード配列と非コード配列の両方を含むヒトＴＴＲ配列を含む遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座をそのゲノムに含む、非ヒト動物細胞。
（項目５９）
ＴＴＲコード配列と非コード配列の両方を含むヒトＴＴＲ配列を含む遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座を含む、非ヒト動物ゲノム。
（項目６０）
内因性非ヒト動物Ｔｔｒ遺伝子座の５’標的配列に対応する５’相同アームおよび前記内因性非ヒト動物Ｔｔｒ遺伝子座の３’標的配列に対応する３’相同アームによって挟まれた、ＴＴＲコード配列と非コード配列の両方を含むヒトＴＴＲ配列を含む核酸挿入断片を含む標的化ベクター。

Claims (45)

1. ＴＴＲコード配列と非コード配列の両方を含むヒトＴＴＲ配列を含む遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座をそのゲノムに含む、非ヒト動物。
2. Ｔｔｒコード配列と非コード配列の両方を含む前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座のある領域が欠失し、ＴＴＲコード配列と非コード配列の両方を含む対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられている、請求項１に記載の非ヒト動物。
3. 前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が内因性Ｔｔｒプロモーターを含み、前記ヒトＴＴＲ配列が前記内因性Ｔｔｒプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１または２に記載の非ヒト動物。
4. 前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の少なくとも１つのイントロンおよび少なくとも１つのエクソンが欠失し、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられている、請求項１から３のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
5. 前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の前記Ｔｔｒコード配列全体が欠失し、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられている、請求項１から４のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
6. Ｔｔｒ開始コドンからＴｔｒ停止コドンまでの前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の領域が欠失し、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられている、請求項５に記載の非ヒト動物。
7. 前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座がヒトＴＴＲ ３’非翻訳領域を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
8. 内因性Ｔｔｒ ５’非翻訳領域は欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられていない、請求項１から７のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
9. 前記Ｔｔｒ開始コドンから前記Ｔｔｒ停止コドンまでの前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の領域が欠失し、前記対応するヒトＴＴＲ配列およびヒトＴＴＲ ３’非翻訳領域を含むヒトＴＴＲ配列で置き換えられており、
   前記内因性Ｔｔｒ ５’非翻訳領域は欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられておらず、
   前記内因性Ｔｔｒプロモーターは欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられていない、
   請求項１から８のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
10. （ｉ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座の前記ヒトＴＴＲ配列が、配列番号１８に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含むか；または
    （ｉｉ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が、配列番号１に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含むタンパク質をコードし；
    （ｉｉｉ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が、配列番号９０に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含むコード配列を含むか；または、
    （ｉｖ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が、配列番号１４または１５に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含む、
    請求項９に記載の非ヒト動物。
11. 前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座がシグナルペプチドを含むトランスサイレチン前駆体タンパク質をコードし、前記シグナルペプチドをコードする前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の領域が欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられていない、請求項１から４のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
12. 前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の第１のエクソンが欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられていない、請求項１１に記載の非ヒト動物。
13. 前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の第１のエクソンおよび第１のイントロンが欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられていない、請求項１２に記載の非ヒト動物。
14. 第２のＴｔｒエクソンの開始からＴｔｒ停止コドンまでの前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の領域が欠失し、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられている、請求項１１から１３のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
15. 前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座がヒトＴＴＲ ３’非翻訳領域を含む、請求項１１から１４のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
16. 前記第２のＴｔｒエクソンから前記Ｔｔｒ停止コドンまでの前記内因性Ｔｔｒ遺伝子座の領域が欠失し、前記対応するヒトＴＴＲ配列およびヒトＴＴＲ ３’非翻訳領域を含むヒトＴＴＲ配列で置き換えられており、
    前記内因性Ｔｔｒ ５’非翻訳領域が欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられておらず、
    前記内因性Ｔｔｒプロモーターが欠失しておらず、前記対応するヒトＴＴＲ配列で置き換えられていない、
    請求項１１から１５のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
17. （ｉ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座の前記ヒトＴＴＲ配列が、配列番号１９に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含むか；または
    （ｉｉ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が、配列番号２に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含むタンパク質をコードし；
    （ｉｉｉ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が、配列番号９１に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含むコード配列を含むか；または
    （ｉｖ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が、配列番号１６または１７に示す配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含む、
    請求項１６に記載の非ヒト動物。
18. 前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座が選択カセットもレポーター遺伝子も含まない、請求項１から１７のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
19. 前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座についてホモ接合性である、請求項１から１８のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
20. 哺乳動物である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
21. ラットまたはマウスである、請求項２０に記載の非ヒト動物。
22. 前記マウスである、請求項２１に記載の非ヒト動物。
23. ｉｎ ｖｉｖｏでヒトＴＴＲ標的化試薬の活性を評価する方法であって、
    （ａ）請求項１から２２のいずれか一項に記載の非ヒト動物に前記ヒトＴＴＲ標的化試薬を投与すること；および
    （ｂ）前記非ヒト動物における前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の活性を評価すること
    を含む方法。
24. 前記投与することが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）媒介性送達、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）媒介性送達または流体力学的送達（ＨＤＤ）を含む、請求項２３に記載の方法。
25. 前記投与することがＬＮＰ媒介性送達を含む、請求項２４に記載の方法。
26. 前記ＬＮＰの用量が約０．１ｍｇ／ｋｇから約２ｍｇ／ｋｇの間にある、請求項２５に記載の方法。
27. 前記投与することがＡＡＶ８媒介性送達を含む、請求項２４に記載の方法。
28. ステップ（ｂ）が、前記非ヒト動物から肝臓を単離し、前記肝臓における前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の活性を評価することを含む、請求項２３から２７のいずれか一項に記載の方法。
29. ステップ（ｂ）が、前記肝臓以外の臓器または組織における前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の活性を評価することをさらに含む、請求項２８に記載の方法。
30. 前記ヒトＴＴＲ標的化試薬がゲノム編集剤であり、前記評価することが前記遺伝子改変Ｔｔｒ遺伝子座の改変を評価することを含む、請求項２３から２９のいずれか一項に記載の方法。
31. 前記評価することが、前記遺伝子改変Ｔｔｒ遺伝子座内の挿入または欠失の頻度を測定することを含む、請求項３０に記載の方法。
32. 前記評価することが、前記遺伝子改変Ｔｔｒ遺伝子座によってコードされるＴｔｒメッセンジャーＲＮＡの発現を測定することを含む、請求項２３から３１のいずれか一項に記載の方法。
33. 前記評価することが、前記遺伝子改変Ｔｔｒ遺伝子座によってコードされるＴＴＲタンパク質の発現を測定することを含む、請求項２３から３２のいずれか一項に記載の方法。
34. 前記ＴＴＲタンパク質の発現を評価することが、前記非ヒト動物における前記ＴＴＲタンパク質の血清レベルを測定することを含む、請求項３３に記載の方法。
35. 前記活性が前記非ヒト動物の前記肝臓で評価される、請求項３０から３３のいずれか一項に記載の方法。
36. 前記ヒトＴＴＲ標的化試薬が、ヒトＴＴＲ遺伝子のある領域を標的にするように設計されたヌクレアーゼ剤を含む、請求項２３から３５のいずれか一項に記載の方法。
37. 前記ヌクレアーゼ剤が、Ｃａｓタンパク質、および前記ヒトＴＴＲ遺伝子におけるガイドＲＮＡ標的配列を標的にするように設計されたガイドＲＮＡを含む、請求項３６に記載の方法。
38. 前記Ｃａｓタンパク質がＣａｓ９タンパク質である、請求項３７に記載の方法。
39. 前記ヒトＴＴＲ標的化試薬が外因性ドナー核酸をさらに含み、前記外因性ドナー核酸が前記ヒトＴＴＲ遺伝子と組み換わるように設計されている、請求項３６から３８のいずれか一項に記載の方法。
40. 前記外因性ドナー核酸が一本鎖オリゴデオキシヌクレオチド（ｓｓＯＤＮ）である、請求項３９に記載の方法。
41. ｉｎ ｖｉｖｏでヒトＴＴＲ標的化試薬の活性を最適化する方法であって、
    （Ｉ）ＴＴＲコード配列と非コード配列の両方を含むヒトＴＴＲ配列を含む遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座をそのゲノムに含む第１の非ヒト動物において、請求項２３から４０のいずれか一項に記載の方法を１回目に実行すること、
    （ＩＩ）ＴＴＲコード配列と非コード配列の両方を含む前記ヒトＴＴＲ配列を含む前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座をそのゲノムに含む第２の非ヒト動物において、変数を変更し、ステップ（Ｉ）の方法を変更した前記変数で２回目に実行すること；および
    （ＩＩＩ）ステップ（Ｉ）の前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の活性をステップ（ＩＩ）の前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の活性と比較し、より高い活性をもたらす方法を選択すること
    を含む方法。
42. （Ｉ）ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数が、前記ヒトＴＴＲ標的化試薬を前記非ヒト動物に導入する送達方法であり、必要に応じて、前記投与することがＬＮＰ媒介性送達を含み、ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数がＬＮＰ製剤である；
    （ＩＩ）ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数が、前記ヒトＴＴＲ標的化試薬を前記非ヒト動物に導入する投与経路である；
    （ＩＩＩ）ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の濃度または量である；
    （ＩＶ）ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ヒトＴＴＲ標的化試薬の形態である；
    （Ｖ）ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ヒトＴＴＲ標的化試薬である；あるいは
    （ＶＩ）前記ヒトＴＴＲ標的化試薬が、Ｃａｓタンパク質、およびヒトＴＴＲ遺伝子のガイドＲＮＡ標的配列を標的にするように設計されたガイドＲＮＡを含み、ここで
    （１）ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数が、ガイドＲＮＡ配列または前記ガイドＲＮＡ標的配列である；
    （２）前記Ｃａｓタンパク質および前記ガイドＲＮＡの各々がＲＮＡの形態で投与され、ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数がＣａｓ ｍＲＮＡのガイドＲＮＡに対する比である：または
    （３）ステップ（ＩＩ）の変更した前記変数がガイドＲＮＡの改変である、請求項４１に記載の方法。
43. 請求項１から２２のいずれか一項に記載の非ヒト動物を作製するための方法であって、
    （Ｉ）
    （ａ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座を含むように非ヒト動物の多能性幹細胞のゲノムを改変するステップと；
    （ｂ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座を含む遺伝子改変非ヒト動物多能性幹細胞を同定または選択するステップと；
    （ｃ）前記遺伝子改変非ヒト動物多能性幹細胞を非ヒト動物宿主の胚に導入するステップと；
    （ｄ）前記非ヒト動物宿主の胚を代理非ヒト動物母に埋め込み、懐胎させるステップと
    を含む、あるいは
    （ＩＩ）
    （ａ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座を含むように非ヒト動物の１細胞期胚のゲノムを改変するステップと；
    （ｂ）前記遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座を含む遺伝子改変非ヒト動物１細胞期胚を選択するステップと；
    （ｃ）前記遺伝子改変非ヒト動物１細胞期胚を代理非ヒト動物母に埋め込み、懐胎させるステップと
    を含む方法。
44. ＴＴＲコード配列と非コード配列の両方を含むヒトＴＴＲ配列を含む遺伝子改変内因性Ｔｔｒ遺伝子座をそのゲノムに含む、非ヒト動物細胞。
45. 内因性非ヒト動物Ｔｔｒ遺伝子座の５’標的配列に対応する５’相同アームおよび前記内因性非ヒト動物Ｔｔｒ遺伝子座の３’標的配列に対応する３’相同アームによって挟まれた、ＴＴＲコード配列と非コード配列の両方を含むヒトＴＴＲ配列を含む核酸挿入断片を含む標的化ベクター。