RU2019143568A - Способы и композиции для оценки crispr/cas-индуцированной рекомбинации с экзогенной донорной нуклеиновой кислотой in vivo - Google Patents

Способы и композиции для оценки crispr/cas-индуцированной рекомбинации с экзогенной донорной нуклеиновой кислотой in vivo Download PDF

Info

Publication number
RU2019143568A
RU2019143568A RU2019143568A RU2019143568A RU2019143568A RU 2019143568 A RU2019143568 A RU 2019143568A RU 2019143568 A RU2019143568 A RU 2019143568A RU 2019143568 A RU2019143568 A RU 2019143568A RU 2019143568 A RU2019143568 A RU 2019143568A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
human animal
reporter
crispr
protein
nucleic acid
Prior art date
Application number
RU2019143568A
Other languages
English (en)
Inventor
Гочунь ГУН
Шарлин ХАНТ
Сюзанн ХАРТФОРД
Хосе РОХАС
Дэвид ФРЕНДЭВЭЙ
Брайан Замбрович
Эндрю Дж. МЕРФИ
Original Assignee
Регенерон Фармасьютикалс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Регенерон Фармасьютикалс, Инк. filed Critical Регенерон Фармасьютикалс, Инк.
Publication of RU2019143568A publication Critical patent/RU2019143568A/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6897—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids involving reporter genes operably linked to promoters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
    • A61K49/0008—Screening agents using (non-human) animal models or transgenic animal models or chimeric hosts, e.g. Alzheimer disease animal model, transgenic model for heart failure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
    • C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2468—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1) acting on beta-galactose-glycoside bonds, e.g. carrageenases (3.2.1.83; 3.2.1.157); beta-agarase (3.2.1.81)
    • C12N9/2471—Beta-galactosidase (3.2.1.23), i.e. exo-(1-->4)-beta-D-galactanase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/072—Animals genetically altered by homologous recombination maintaining or altering function, i.e. knock in
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/0393—Animal model comprising a reporter system for screening tests
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/20—Type of nucleic acid involving clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPRs]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/80—Vectors containing sites for inducing double-stranded breaks, e.g. meganuclease restriction sites
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01023—Beta-galactosidase (3.2.1.23), i.e. exo-(1-->4)-beta-D-galactanase

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Claims (71)

1. Отличное от человека животное, содержащее CRISPR-репортер, подходящий для оценки CRISPR/Cas-индуцированной рекомбинации CRISPR-репортера с экзогенной донорной нуклеиновой кислотой, причем CRISPR-репортер интегрирован в целевой геномный локус и содержит последовательность-мишень для направляющей РНК и последовательность, кодирующую каталитически неактивный репортерный белок.
2. Отличное от человека животное по п.1, где последовательность-мишень для направляющей РНК находится в пределах последовательности, кодирующей каталитически неактивный репортерный белок.
3. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, где кодирующая последовательность для каталитически неактивного репортерного белка может быть изменена с образованием кодирующей последовательности для каталитически активного репортерного белка путем изменения одного кодона.
4. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, где каталитически неактивный репортерный белок представляет собой каталитически неактивную бета-галактозидазу.
5. Отличное от человека животное по п.4, где каталитически неактивный репортерный белок представляет собой мутант E538Q бета-галактозидазы.
6. Отличное от человека животное по п.5, где последовательность-мишень для направляющей РНК находится в пределах приблизительно 500 пар оснований от кодона, кодирующего мутацию E538Q в бета-галактозидазе.
7. Отличное от человека животное по любому из пп.4-6, где последовательность-мишень для направляющей РНК находится в пределах последовательности, кодирующей каталитически неактивную бета-галактозидазу, и содержит SEQ ID NO: 21.
8. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, где CRISPR-репортер функционально связан с эндогенным промотором в целевом геномном локусе.
9. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, где 5’-конец CRISPR-репортера дополнительно содержит 3’-последовательность для сплайсинга.
10. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, где CRISPR-репортер дополнительно содержит селективную кассету.
11. Отличное от человека животное по п.10, где селективная кассета фланкирована сайтами распознавания рекомбиназы.
12. Отличное от человека животное по п.10 или 11, где селективная кассета содержит ген устойчивости к лекарственному средству.
13. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, где отличное от человека животное представляет собой крысу или мышь.
14. Отличное от человека животное по п.13, где отличное от человека животное представляет собой мышь.
15. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, где целевой геномный локус представляет собой локус «безопасная гавань».
16. Отличное от человека животное по п.15, где локус «безопасная гавань» представляет собой локус Rosa26.
17. Отличное от человека животное по п.16, где CRISPR-репортер вставлен в первый интрон локуса Rosa26.
18. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, где отличное от человека животное представляет собой мышь, и
причем целевой геномный локус представляет собой локус Rosa26, и
причем CRISPR-репортер функционально связан с эндогенным промотором Rosa26, вставлен в первый интрон локуса Rosa26 и содержит, в направлении от 5’ к 3’:
(a) 3’-последовательность для сплайсинга; и
(b) последовательность, кодирующую каталитически неактивный мутант E538Q бета-галактозидазы, содержащую последовательность-мишень для направляющей РНК, содержащую SEQ ID NO: 21.
19. Отличное от человека животное по п.18, где CRISPR-репортер дополнительно содержит:
(c) селективную кассету, фланкированную сайтами loxP, причем селективная кассета содержит, в направлении от 5’ к 3’:
(i) промотор гена убиквитина человека;
(ii) последовательность, кодирующую неомицин-фосфотрансферазу; и
(iii) сигнал полиаденилирования.
20. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, где отличное от человека животное является гомозиготным по CRISPR-репортеру в целевом геномном локусе.
21. Отличное от человека животное по любому из пп.1-19, где отличное от человека животное является гетерозиготным по CRISPR-репортеру в целевом геномном локусе.
22. Способ тестирования CRISPR/Cas-индуцированной рекомбинации геномной нуклеиновой кислоты с экзогенной донорной нуклеиновой кислотой in vivo, предусматривающий:
(a) введение отличному от человека животному по любому из пп.1-21:
(i) направляющей РНК, сконструированной для нацеливания на последовательность-мишень для направляющей РНК в CRISPR-репортере;
(ii) белка Cas; и
(iii) экзогенной донорной нуклеиновой кислоты, способной к репарации кодирующей последовательности для каталитически неактивного репортерного белка и способной делать репортерный белок каталитически активным; и
(b) измерение активности или уровня экспрессии репортерного белка.
23. Способ по п.22, в котором белок Cas представляет собой белок Cas9.
24. Способ по п.22 или 23, в котором белок Cas вводят отличному от человека животному в форме белка.
25. Способ по п.22 или 23, в котором белок Cas вводят отличному от человека животному в форме матричной РНК, кодирующей белок Cas.
26. Способ по п.22 или 23, в котором белок Cas вводят отличному от человека животному в форме ДНК, кодирующей белок Cas, причем ДНК функционально связана с промотором, активным в одном или нескольких типах клеток у отличного от человека животного.
27. Способ по любому из пп.22-26, в котором репортерный белок на стадии (b) представляет собой белок бета-галактозидазу, и стадия (b) предусматривает анализ с гистохимическим окрашиванием.
28. Способ по любому из пп.22-27, в котором экзогенная донорная нуклеиновая кислота представляет собой однонитевой дезоксинуклеотид.
29. Способ по любому из пп.22-28, в котором репортерный белок на стадии (b) представляет собой белок бета-галактозидазу, и экзогенная донорная нуклеиновая кислота содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3.
30. Способ по любому из пп.22-29, в котором направляющую РНК вводят в форме РНК.
31. Способ по любому из пп.22-29, в котором направляющую РНК вводят отличному от человека животному в форме ДНК, кодирующей направляющую РНК, причем ДНК функционально связана с промотором, активным в одном или нескольких типах клеток у отличного от человека животного.
32. Способ по любому из пп.22-31, в котором репортерный белок на стадии (b) представляет собой белок бета-галактозидазу, и направляющая РНК содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 14.
33. Способ по любому из пп.22-32, в котором введение предусматривает опосредованную аденоассоциированным вирусом (AAV) доставку, опосредованную липидными наночастицами доставку или гидродинамическую доставку.
34. Способ по п.33, в котором введение предусматривает AAV-опосредованную доставку.
35. Способ по п.34, в котором введение предусматривает AAV8-опосредованную доставку, и стадия (b) предусматривает измерение активности репортерного белка в печени отличного от человека животного.
36. Способ оптимизации способности CRISPR/Cas индуцировать рекомбинацию целевой геномной нуклеиновой кислоты с экзогенной донорной нуклеиновой кислотой in vivo, предусматривающий:
(I) осуществление способа по любому из пп.22-35 первый раз у первого отличного от человека животного;
(II) изменение переменной и осуществление способа из стадии (I) второй раз с измененной переменной у второго отличного от человека животного; и
(III) сравнение активности или экспрессии репортерного белка на стадии (I) с активностью или экспрессии по меньшей мере одного из репортерных белков на стадии (II) и выбор способа, обеспечивающего более высокие активность или экспрессию репортерного белка.
37. Способ по п.36, в котором измененной переменной на стадии (II) является способ доставки для введения одного или нескольких из направляющей РНК, белка Cas и экзогенной донорной нуклеиновой кислоты отличному от человека животному.
38. Способ по п.36, в котором измененной переменной на стадии (II) является путь введения для введения одного или нескольких из направляющей РНК, белка Cas и экзогенной донорной нуклеиновой кислоты отличному от человека животному.
39. Способ по п.36, в котором измененной переменной на стадии (II) является концентрация или количество одного или нескольких из направляющей РНК, белка Cas и экзогенной донорной нуклеиновой кислоты, вводимых отличному от человека животному.
40. Способ по п.36, в котором измененной переменной на стадии (II) является экзогенная донорная нуклеиновая кислота, вводимая отличному от человека животному.
41. Способ по п.36, в котором измененной переменной на стадии (II) является концентрация или количество направляющей РНК, вводимой отличному от человека животному, относительно концентрации или количества белка Cas, вводимого отличному от человека животному.
42. Способ по п.36, в котором измененной переменной на стадии (II) является направляющая РНК, вводимая отличному от человека животному.
43. Способ по п.36, в котором измененной переменной на стадии (II) является белок Cas, вводимый отличному от человека животному.
44. Клетка отличного от человека животного, содержащая CRISPR-репортер, подходящий для оценки CRISPR/Cas-индуцированной рекомбинации CRISPR-репортера с экзогенной донорной нуклеиновой кислотой, причем CRISPR-репортер интегрирован в целевой геномный локус и содержит последовательность-мишень для направляющей РНК и последовательность, кодирующую каталитически неактивный репортерный белок.
45. Геном отличного от человека животного, содержащий CRISPR-репортер, подходящий для оценки CRISPR/Cas-индуцированной рекомбинации CRISPR-репортера с экзогенной донорной нуклеиновой кислотой, причем CRISPR-репортер интегрирован в целевой геномный локус и содержит последовательность-мишень для направляющей РНК и последовательность, кодирующую каталитически неактивный репортерный белок.
46. Направленный вектор, содержащий CRISPR-репортер, фланкированный плечами гомологии, причем CRISPR-репортер является подходящим для оценки CRISPR/Cas-индуцированной рекомбинации CRISPR-репортера с экзогенной донорной нуклеиновой кислотой, причем CRISPR-репортер содержит последовательность-мишень для направляющей РНК и последовательность, кодирующую каталитически неактивный репортерный белок, и причем плечи гомологии являются подходящими для управления рекомбинацией с требуемым целевым геномным локусом для содействия интеграции в геном.
47. Способ получения отличного от человека животного по любому из пп.1-21, предусматривающий:
(a) модификацию генома плюрипотентной клетки отличного от человека животного для содержания CRISPR-репортера, интегрированного в целевой геномный локус, причем CRISPR-репортер является подходящим для оценки CRISPR/Cas-индуцированной рекомбинации CRISPR-репортера с экзогенной донорной нуклеиновой кислотой, и причем CRISPR-репортер содержит последовательность-мишень для направляющей РНК и последовательность, кодирующую каталитически неактивный репортерный белок;
(b) идентификацию или отбор генетически модифицированной плюрипотентной клетки отличного от человека животного, содержащей CRISPR-репортер;
(c) введение генетически модифицированной плюрипотентной клетки отличного от человека животного в эмбрион-хозяин отличного от человека животного; и
(d) имплантирование и обеспечение вынашивания эмбриона-хозяина отличного от человека животного суррогатной матерью.
48. Способ получения отличного от человека животного по любому из пп.1-21, предусматривающий:
(a) модификацию генома одноклеточного эмбриона отличного от человека животного для содержания CRISPR-репортера, интегрированного в целевой геномный локус, причем CRISPR-репортер является подходящим для оценки CRISPR/Cas-индуцированной рекомбинации CRISPR-репортера с экзогенной донорной нуклеиновой кислотой, и причем CRISPR-репортер содержит последовательность-мишень для направляющей РНК и последовательность, кодирующую каталитически неактивный репортерный белок;
(b) отбор генетически модифицированного одноклеточного эмбриона отличного от человека животного; и
(c) имплантирование и обеспечение вынашивания генетически модифицированного одноклеточного эмбриона отличного от человека животного суррогатной матерью.
RU2019143568A 2017-07-31 2018-07-31 Способы и композиции для оценки crispr/cas-индуцированной рекомбинации с экзогенной донорной нуклеиновой кислотой in vivo RU2019143568A (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762539285P 2017-07-31 2017-07-31
US62/539,285 2017-07-31
PCT/US2018/044612 WO2019028029A1 (en) 2017-07-31 2018-07-31 EVALUATION OF CRISPR / CAS INDUCED RECOMBINATION WITH IN VIVO EXOGENIC DONOR NUCLEIC ACID

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2019143568A true RU2019143568A (ru) 2021-09-02

Family

ID=63524356

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019143568A RU2019143568A (ru) 2017-07-31 2018-07-31 Способы и композиции для оценки crispr/cas-индуцированной рекомбинации с экзогенной донорной нуклеиновой кислотой in vivo

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20190032156A1 (ru)
EP (1) EP3585161A1 (ru)
JP (1) JP2020530990A (ru)
KR (1) KR20200032117A (ru)
CN (1) CN110891419A (ru)
AU (1) AU2018309714A1 (ru)
BR (1) BR112019027673A2 (ru)
CA (1) CA3065579A1 (ru)
IL (1) IL272335A (ru)
RU (1) RU2019143568A (ru)
SG (1) SG11201911619YA (ru)
WO (1) WO2019028029A1 (ru)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11201912236YA (en) * 2017-07-31 2020-01-30 Regeneron Pharma Crispr reporter non-human animals and uses thereof
DE112019005166T5 (de) 2018-10-16 2021-07-29 Blueallele, Llc Verfahren zur gezielten insertion von dna in gene
CA3144459A1 (en) 2019-07-10 2021-01-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions comprising reduced level of host cell proteins
TW202145884A (zh) 2020-03-04 2021-12-16 美商再生元醫藥公司 Ｂ４ｇａｌｔ１介導功能之囓齒動物模型
EP4149503A1 (en) * 2020-05-13 2023-03-22 Lysogene Compositions and methods for treating gm1 gangliosidosis and other disorders

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU8587598A (en) 1997-07-26 1999-02-16 Wisconsin Alumni Research Foundation Trans-species nuclear transfer
US20050144655A1 (en) 2000-10-31 2005-06-30 Economides Aris N. Methods of modifying eukaryotic cells
AUPR451401A0 (en) 2001-04-20 2001-05-24 Monash University A method of nuclear transfer
ATE347593T1 (de) 2002-01-23 2006-12-15 Univ Utah Res Found Zielgerichtete chromosomale mutagenese mit zinkfingernukleasen
EP2368982A3 (en) 2002-03-21 2011-10-12 Sangamo BioSciences, Inc. Methods and compositions for using zinc finger endonucleases to enhance homologous recombination
US7612250B2 (en) 2002-07-29 2009-11-03 Trustees Of Tufts College Nuclear transfer embryo formation method
WO2004037977A2 (en) 2002-09-05 2004-05-06 California Institute Of Thechnology Use of chimeric nucleases to stimulate gene targeting
US7888121B2 (en) 2003-08-08 2011-02-15 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for targeted cleavage and recombination
US8409861B2 (en) 2003-08-08 2013-04-02 Sangamo Biosciences, Inc. Targeted deletion of cellular DNA sequences
US7972854B2 (en) 2004-02-05 2011-07-05 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for targeted cleavage and recombination
EP1789095A2 (en) 2004-09-16 2007-05-30 Sangamo Biosciences Inc. Compositions and methods for protein production
CA2583750C (en) 2004-10-19 2015-11-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for generating a rodent having a genetic modification
CA2651494C (en) 2006-05-25 2015-09-29 Sangamo Biosciences, Inc. Engineered cleavage half-domains
JP5551432B2 (ja) 2006-05-25 2014-07-16 サンガモ バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド 遺伝子不活性化のための方法と組成物
JP4692417B2 (ja) 2006-06-30 2011-06-01 富士ゼロックス株式会社 画像形成装置
CN101117633B (zh) 2006-08-03 2011-07-20 上海交通大学附属儿童医院 一种细胞核移植方法
ATE489465T1 (de) 2007-04-26 2010-12-15 Sangamo Biosciences Inc Gezielte integration in die ppp1r12c-position
WO2008149176A1 (en) 2007-06-06 2008-12-11 Cellectis Meganuclease variants cleaving a dna target sequence from the mouse rosa26 locus and uses thereof
WO2009126161A1 (en) 2008-04-11 2009-10-15 Utc Fuel Cells, Llc Fuel cell and bipolar plate having manifold sump
CA2796600C (en) 2010-04-26 2019-08-13 Sangamo Biosciences, Inc. Genome editing of a rosa locus using zinc-finger nucleases
EP3156062A1 (en) 2010-05-17 2017-04-19 Sangamo BioSciences, Inc. Novel dna-binding proteins and uses thereof
US9394545B2 (en) 2011-09-21 2016-07-19 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for regulation of transgene expression
JP6188703B2 (ja) 2011-10-27 2017-08-30 サンガモ セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｈｐｒｔ遺伝子座を修飾するための方法および組成物
US9637739B2 (en) 2012-03-20 2017-05-02 Vilnius University RNA-directed DNA cleavage by the Cas9-crRNA complex
WO2013141680A1 (en) 2012-03-20 2013-09-26 Vilnius University RNA-DIRECTED DNA CLEAVAGE BY THE Cas9-crRNA COMPLEX
DK2847335T3 (en) 2012-04-25 2018-08-13 Regeneron Pharma NUCLEASED MEDIUM TARGETING WITH LARGE TARGET VECTORS
ES2728782T3 (es) 2012-05-25 2019-10-28 Univ California Métodos y composiciones para la modificación de ADN objetivo dirigida por ARN y para la modulación de la transcripción dirigida por ARN
WO2014033644A2 (en) 2012-08-28 2014-03-06 Novartis Ag Methods of nuclease-based genetic engineering
CN116064532A (zh) 2012-10-23 2023-05-05 基因工具股份有限公司 用于切割靶dna的组合物及其用途
KR102243092B1 (ko) 2012-12-06 2021-04-22 시그마-알드리치 컴퍼니., 엘엘씨 Crispr-기초된 유전체 변형과 조절
US8697359B1 (en) 2012-12-12 2014-04-15 The Broad Institute, Inc. CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products
DK3327127T3 (da) 2012-12-12 2021-06-28 Broad Inst Inc Fremføring, modificering og optimering af systemer, fremgangsmåder og sammensætninger til sekvensmanipulation og terapeutiske anvendelser
IL308158A (en) 2012-12-17 2023-12-01 Harvard College RNA-guided human genome engineering
SG10201706741VA (en) 2013-02-20 2017-10-30 Regeneron Pharma Genetic modification of rats
EP2922393B2 (en) 2013-02-27 2022-12-28 Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) Gene editing in the oocyte by cas9 nucleases
JP6980380B2 (ja) 2013-03-15 2021-12-15 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 短縮ガイドＲＮＡ（ｔｒｕ−ｇＲＮＡ）を用いたＲＮＡ誘導型ゲノム編集の特異性の増大
WO2014165825A2 (en) 2013-04-04 2014-10-09 President And Fellows Of Harvard College Therapeutic uses of genome editing with crispr/cas systems
US20160237455A1 (en) 2013-09-27 2016-08-18 Editas Medicine, Inc. Crispr-related methods and compositions
WO2015057980A1 (en) 2013-10-17 2015-04-23 Sangamo Biosciences, Inc. Delivery methods and compositions for nuclease-mediated genome engineering
RU2685914C1 (ru) 2013-12-11 2019-04-23 Регенерон Фармасьютикалс, Инк. Способы и композиции для направленной модификации генома
AU2015218576B2 (en) 2014-02-24 2020-02-27 Sangamo Therapeutics, Inc. Methods and compositions for nuclease-mediated targeted integration
CA2952697A1 (en) 2014-06-16 2015-12-23 The Johns Hopkins University Compositions and methods for the expression of crispr guide rnas using the h1 promoter
US20150376586A1 (en) 2014-06-25 2015-12-31 Caribou Biosciences, Inc. RNA Modification to Engineer Cas9 Activity
ES2949172T3 (es) 2014-07-16 2023-09-26 Novartis Ag Método de encapsulamiento de un ácido nucleico en un hospedante de nanopartículas lipídicas
WO2016106236A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 The Broad Institute Inc. Rna-targeting system
US9790490B2 (en) 2015-06-18 2017-10-17 The Broad Institute Inc. CRISPR enzymes and systems
US11905521B2 (en) * 2015-11-17 2024-02-20 The Chinese University Of Hong Kong Methods and systems for targeted gene manipulation
US10240145B2 (en) * 2015-11-25 2019-03-26 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University CRISPR/Cas-mediated genome editing to treat EGFR-mutant lung cancer
CA3018978A1 (en) 2016-03-30 2017-10-05 Intellia Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations for crispr/cas components

Also Published As

Publication number Publication date
AU2018309714A1 (en) 2020-01-30
US20190032156A1 (en) 2019-01-31
CA3065579A1 (en) 2019-02-07
SG11201911619YA (en) 2020-01-30
BR112019027673A2 (pt) 2020-09-15
CN110891419A (zh) 2020-03-17
WO2019028029A1 (en) 2019-02-07
KR20200032117A (ko) 2020-03-25
IL272335A (en) 2020-03-31
EP3585161A1 (en) 2020-01-01
JP2020530990A (ja) 2020-11-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2019143568A (ru) Способы и композиции для оценки crispr/cas-индуцированной рекомбинации с экзогенной донорной нуклеиновой кислотой in vivo
JP2020533957A5 (ru)
Lim et al. Conditional Gata2 inactivation results in HSC loss and lymphatic mispatterning
JP2020532952A5 (ru)
WO2019028023A4 (en) Crispr reporter non-human animals and uses thereof
Raben et al. Targeted disruption of the acid α-glucosidase gene in mice causes an illness with critical features of both infantile and adult human glycogen storage disease type II
Chiu et al. Transgenic mice that express Cre recombinase in osteoclasts
Kile et al. Functional analysis of Asb-1 using genetic modification in mice
Yamasaki et al. Characterization of P-glycoprotein humanized mice generated by chromosome engineering technology: its utility for prediction of drug distribution to the brain in humans
Sakurai et al. A non-inheritable maternal Cas9-based multiple-gene editing system in mice
Nishizono et al. Methodologies and challenges for CRISPR/Cas9 mediated genome editing of the mammalian brain
Lapinski et al. Generation of mice with a conditional allele of the p120 Ras GTPase‐activating protein
Kazenwadel et al. A Prox1 enhancer represses haematopoiesis in the lymphatic vasculature
US6262337B1 (en) Transgenic animal with recombinant vascular endothelial growth factor B (VEGF-B DNA) and uses thereof
JPWO2010010887A1 (ja) 組織発現プロモーター
JPWO2019067875A5 (ru)
Karpova et al. A FTZ-F1-containing yeast artificial chromosome recapitulates expression of steroidogenic factor 1 in vivo
EP4138550A1 (en) Non-human animals having a humanized cxcl13 gene
CN115279184A (zh) B4galt1介导的功能的啮齿动物模型
WO2011126126A1 (ja) Ｇｍ１遺伝子産物欠損非ヒト動物及びその利用法
RU2021130741A (ru) Животные, отличные от человека, содержащие гуманизированный локус альбумина
Goodridge The new metabolism: molecular genetics in the analysis of metabolic regulation 1
US20220104469A1 (en) Rodent animals expressing human cr1
US20220217956A1 (en) Rodent Model Of Increased Bone Mineral Density
CN114045290B (zh) 角朊蛋白基因修饰小鼠动物模型的构建方法和应用