JP2021011439A - コラーゲン産生促進用組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
近年、皮膚の弾力性や、シワの改善を目的としてコラーゲンやコラーゲンの加水分解物を経口摂取することが行われており、「美容ドリンク」や「美肌飲料」などの名称でコラーゲンやコラーゲンの加水分解物を含む飲料が市販されている。これらの飲料は、1回あたりコラーゲン換算で900〜10000mgを摂取することが効果的であるといわれている。
経口摂取したコラーゲンやコラーゲンペプチドがどのような作用機序で皮膚の弾力性やシワの改善に働くのか、詳細な機構は明らかになっていないが、一部のコラーゲンペプチドが、コラーゲンを経口摂取すると血液中に出現することが知られている。そしてそのコラーゲンペプチドが線維芽細胞のI型コラーゲンの産生を促進することも知られている。
特許文献2には、前記のコラーゲントリペプチドとフラボノイドの一種であるシリマリンとリンゴ抽出物が、コラーゲンと線維芽細胞を含むコラーゲンゲルを収縮させ、シワ改善に用いることができることが記載されている。
特許文献3には、Gly−Pro−Hyp、Gly−His−Lys、Lys−Thr−Thr−Lys−Ser、またはGly−Glu−Pro−Argの構造を有するコラーゲン由来のペプチドがシリビンと相乗的にI型コラーゲンの産生を促進することが記載されている。
特許文献4では、コラーゲンを経口摂取した直後に血液中に出現する複数のトリペプチド又はジペプチドを合成して、Ala−Hyp−Gly、Pro−Hyp−Gly、Pro−Hyp、Leu−Hyp、Ala−Hypのジペプチドまたはトリペプチドが培養マウス線維芽細胞に対してコラーゲン合成を促進することを確認して、その結果に基づき、皮膚コラーゲン産生促進剤として利用することを提案している。
特許文献5にはGly−Pro、Pro−Gly、Pro−Hyp、Hyp−Gly、Gly−Hypのいずれかの配列を有するジペプチドを有効成分とするコラーゲン産生促進剤が記載されている。
このように、これまでの研究開発から、コラーゲンタンパク質の加水分解物やコラーゲンペプチド、アミノ酸など多くの物質がコラーゲン産生促進作用を有することが明らかとなっており、引き続き有用な物質の探索が行われている。
特許文献7には、特許文献6と同様の抽出物であって、ドッグローズ、アポテカリーズローズ、スイートブライヤー、ダマスクバラ、セイヨウバラ及びハマナシから選ばれる少なくとも1種のバラ科植物のつぼみ又は花弁を水、親水性有機溶媒又はこれらの混合液により抽出処理して得られた抽出物が記載されている。そして、この抽出物に抗インフルエンザウィルス作用を見いだし、これを有効成分とする抗インフルエンザウィルス剤及びこれを配合した飲食品の発明が記載されている。
本発明は、コラーゲンペプチドに含有されているトリペプチドであるGly−Pro−Hyp(以下「GPO」)及びGly−Pro−Ala(以下「GPA」)とバラ科バラ属の植物の花弁及び/またはつぼみのエキスを併用すると、極めて強いコラーゲン産生促進作用を発揮することを見出したことからなされたものである。
すなわち、本発明は、バラ科バラ属の植物の花弁及び/又はつぼみのエキスとトリペプチドであるGPO及びGPAを含有する新規な組成物を提供することを課題とする。
(1) バラ科バラ属の植物の花弁及び/又はつぼみのエキスと、Gly−Pro−Hyp及びGly−Pro−Alaの配列を有する2種類のトリペプチドを有効成分として含有するコラーゲン産生促進用組成物。
(2)バラ科バラ属の植物の花弁及び/又はつぼみのエキス1質量部あたりGly−Pro−Hyp及びGly−Pro−Alaの配列を有する2種類のトリペプチドをあわせて1〜200質量部含有する(1)に記載の組成物。
(3)バラ科バラ属の植物が、ガリカローズ、ドッグローズ、アポテカリーズローズ、スイートブライヤー、ダマスクバラ、セイヨウバラ及びハマナシから選ばれる1種以上である(1)又は(2)に記載の組成物。
(4)バラ科バラ属の植物の花弁及び/又はつぼみのエキスが水、親水性有機溶媒又はこれらの混合液により抽出処理して得られたエキスである(1)〜(3)のいずれかに記載の組成物。
またバラ科バラ属の植物の花弁及び/又はつぼみのエキスの有する抗菌性や抗ウイルス作用をあわせ持つため、感染症の防御や、感染予後体力回復のための飲食品としても使用可能である。さらにまた、本発明の組成物は、原料とする成分の食経験が長く、安全性が確認されているため、飲食品として経口で摂取することができる。
本発明の組成物について説明する。
バラ科バラ属の植物の花弁及び/又はつぼみは、どのような品種から採取したものでもかまわないが、園芸種として大量に栽培されているものが産業上好ましい。このようなものとして特にガリカローズ(Rosa gallica)、ドッグローズ(Rosa canina)、アポテカリーズローズ(Rosa gallica officinalis)、スイートブライヤー(Rosa rubiginosa)、ダマスクバラ(Rosa damascena trigintipetala)、セイヨウバラ(Rosa centifolia)及びハマナシ(Rosa rugosarubra)が好ましい。
本発明に用いるバラ科バラ属の植物のエキスは、市販されているものを使用することができる。本発明に適した、バラのつぼみのエキスの噴霧乾燥品である丸善製薬株式会社製の「ローズバッツエキスパウダーMF」を例示できる。
本発明に用いるバラ科バラ属の植物エキスは、ポリフェノールとして5質量%以上含有し、好ましくは10〜80質量%、特に好ましくは10〜20質量%含有するものである。
なお、本発明に用いるバラ科バラ属の植物のエキス量は、植物抽出物由来の固形分相当量を指す。
本発明のトリペプチドのアミノ酸配列は、Gly−Pro−Hyp及びGly−Pro−Alaの両成分を含有する。
また、GPO:GPAの比率が1:1〜3:1であるものが好ましいがこの限りではない。
<1.トリペプチドGPO及びGPAの1:1混合物とバラつぼみエキスの併用効果確認試験>
(1)試験試料(サンプル)
バラ科バラ属の植物の花弁及び/又はつぼみのエキスとして、丸善製薬株式会社が販売
しているローズバッツエキスパウダーMFを用いた。またトリペプチドとして、Gly−Pro−Hyp(GPO)配列表配列番号1及びGly−Pro−Ala(GPA)配列表配列番号2を用いた。GPO、GPAは化学合成品の試薬純度のものを用いた。
1)使用細胞
正常ヒト皮膚線維芽細胞(NHDF:ロンザジャパン株式会社)
細胞は37℃、5%二酸化炭素、95%空気の条件下で培養を行った。培地は非働化したウシ胎児血清(FBS)(Hyclone laboratories)10%、penicilin−Streptmycin(Sigma Aldrich)1%を添加したダルベッコ改変イーグル培地(高グルコース含有、life technologies)を用いた。以降、この培地を「基礎培地」と表記する。通常培養には10cmまたは15cmディッシュを用い、継代時の細胞剥離には0.05%Trypsin−EDTA(Sigma Aldrich)を使用した。
試験試料は培地で溶解した。UVA照射前は基礎培地を用い、UVA照射後はFBS不含基礎培地を用いた。
試験試料の最終濃度
下記表1の濃度で試験を実施した。
添加による影響を確認するため形態観察を行った。形態観察には倒立型システム顕微鏡(OLYMPUS IX70)を用いて行った。
24wellプレートに細胞を1×105cells/500μL/wellで播種した。1日前培養した後、評価試料を含む基礎培地500μLと交換して1日培養した。その後、ハンクス平衡塩溶液(HBSS、カルシウム・マグネシウム含有、フェノールレッド不含)500μLに置換し、蓋を取ったディッシュをUVA照射ランプの下に一列に置いて12J/cm2照射した(約132分)。照射後、HBSSを取り除き、サンプル入りのFBS不含基礎培地500μLと交換して2日間培養した。培地を回収し、−80℃中に保存した。培地回収後、ディッシュを500μLのリン酸緩衝生理食塩水で3回洗浄し、0.1Nの水酸化ナトリウム溶液200μLで懸濁し、細胞を回収した。
回収した培地は4℃、10,000×gで10分間遠心し、その上清中のI型コラーゲン量をCollagen Type I, Human, ELISA Kit(株式会社エーセル)を用いて測定した。細胞懸濁液は4℃、10,000×gで10分間遠心し、その上清中のタンパク量をPierce BCA Protein Assay kit (Thermo Fisher SCIENTIFIC)を用いて測定した。培地中のI型コラーゲン量は細胞タンパク量で補正した。また測定結果はコントロール(無添加)細胞のコラーゲン産生量に対する増加量を求め、増加率%を得た。なお結果は、3回試験した結果のコラーゲン産生増加率の平均値で示す。
試験結果を表1及び図1に示す。
相乗効果有りの評価:相加効果の理論値<実測値の場合を相乗効果「有」として判定した。
相加効果の理論値=(A/D−1)×100+(B/D−1)×100
実測値=(C/D−1)×100
A:バラつぼみエキス単独添加によるI型コラーゲン産生量
B:トリペプチド混合物添加によるI型コラーゲン産生量
C:バラつぼみエキスとトリペプチド混合物の併用によるI型コラーゲン産生量
D:コントロール群(無添加サンプル)のI型コラーゲン産生量
併用効果の判定表を、下記の表2に示す。
(1)試験試料(サンプル)
バラ科バラ属の植物の花弁及び/又はつぼみのエキスとして、丸善製薬株式会社が販売
しているローズバッツエキスパウダーMFを用いた。またトリペプチドとして、試験1と同様にGPOとGPAを用いた。
1)使用細胞
正常ヒト皮膚線維芽細胞(NHDF:ロンザジャパン株式会社)
細胞は37℃、5%二酸化炭素、95%空気の条件下で培養を行った。培地は非働化したウシ胎児血清(FBS)(Hyclone laboratories)10%、penicilin−Streptmycin(Sigma Aldrich)1%を添加したダルベッコ改変イーグル培地(高グルコース含有、life technologies)を用いた。通常培養には10cmまたは15cmディッシュを用い、継代時の細胞剥離には0.05%Trypsin−EDTA(Sigma Aldrich)を使用した。
試験試料は培地で溶解した。UVA照射前は基礎培地を用い、UVA照射後はFBS
不含基礎培地を用いた。
試験試料の最終濃度
下記表3の濃度で試験を実施した。
添加による影響を確認するため形態観察を行った。形態観察には倒立型システム顕微鏡(OLYMPUS IX70)を用いて行った。
24wellプレートに細胞を1×105cells/500μL/wellで播種した。1日前培養した後、サンプル入り基礎培地500μLと交換して1日培養した。その後、ハンクス平衡塩溶液(HBSS、カルシウム・マグネシウム含有、フェノールレッド不含)500μLに置換し、蓋を取ったディッシュをUVA照射ランプの下に一列に置いて12J/cm2照射した(約132分)。照射後、HBSSを取り除き、サンプル入りのFBS不含基礎培地500μLと交換して2日間培養した。培地を回収し、−80℃中に保存した。培地回収後、ディッシュを500μLのリン酸緩衝生理食塩水で3回洗浄し、0.1Nの水酸化ナトリウム溶液200μLで懸濁し、細胞を回収した。
試験結果を表3及び図2に示す。
相乗効果有りの評価:相加効果の理論値<実測値の場合を相乗効果「有」として判定した。
相加効果の理論値=(A/D−1)×100+(B/D−1)×100
実測値=(C/D−1)×100
A:バラつぼみエキス単独添加によるI型コラーゲン産生量
B:トリペプチド混合物添加によるI型コラーゲン産生量
C:バラつぼみエキスとトリペプチド混合物の併用によるI型コラーゲン産生量
D:コントロール群(無添加サンプル)のI型コラーゲン産生量
併用効果の判定表を、下記の表4に示す。
以上の試験1及び2から次の点が明らかとなった。
(1)バラつぼみエキスとGPO、GPAの混合物を併用すると生体のコラーゲン産生が相乗的に促進される。
(2)トリペプチドGPOとGPAの配合比率は、GPO:GPAの比率が1:1又は2:1の比率になるように混合して試験したが、いずれの場合もバラつぼみエキスと併用することでコラーゲン産生が相乗的に増加した。
バラ科バラ属の植物のつぼみのエキスの製造例
アポテカリーズローズのつぼみ(Rosa gallica officinalis)300gに50質量%エタノールを2000mL加え、還流冷却器を付けて、80℃にて1時間抽出した後、濾紙で濾過して抽出液1を得た。また、抽出残渣に50重量%エタノール1500mLを加え、同様に還流冷却器を付けて、80℃にて1時間抽出した後、濾紙で濾過して抽出液2を得た。得られた抽出液1、2を合せて減圧下で濃縮、乾燥させて粉末エキス100gを得た(収率33.3%)。
バラ科バラ属の植物のつぼみのエキスの製造例
セイヨウバラのつぼみ(Rosa centifolia)300gに水2000mLを加え、90℃にて1時間抽出を行った後、濾紙にて濾過し、抽出液を得た。得られた抽出液を減圧下で濃縮、乾燥させて、製造例2の粉末エキス100gを得た(収率33.3%)。
Claims (4)
- バラ科バラ属の植物の花弁及び/又はつぼみのエキスと、Gly−Pro−Hyp及びGly−Pro−Alaの配列を有する2種類のトリペプチドを有効成分として含有するコラーゲン産生促進用組成物。
- バラ科バラ属の植物の花弁及び/又はつぼみのエキス1質量部あたりGly−Pro−Hyp及びGly−Pro−Alaの配列を有する2種類のトリペプチドをあわせて1〜200質量部含有する請求項1に記載の組成物。
- バラ科バラ属の植物が、ガリカローズ、ドッグローズ、アポテカリーズローズ、スイートブライヤー、ダマスクバラ、セイヨウバラ及びハマナシから選ばれる1種以上である請求項1又は2に記載の組成物。
- バラ科バラ属の植物の花弁及び/又はつぼみのエキスが水、親水性有機溶媒又はこれらの混合液により抽出処理して得られたエキスである請求項1〜3のいずれかに記載の組成物。
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