CN112167634A - 用于促进胶原蛋白产生的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明的课题在于提供用于促进胶原蛋白产生的组合物。作为解决方法,提供一种用于促进胶原蛋白产生的组合物,其特征在于,含有蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物,以及具有Gly‑Pro‑Hyp及Gly‑Pro‑Ala序列的2种三肽作为有效成分。
Description
技术领域
本发明涉及用于促进机体胶原蛋白产生的新型组合物。
背景技术
胶原蛋白是由成纤维细胞向细胞外分泌的蛋白质。胶原蛋白在对于机体中的各种结缔组织给予力学上的强度方面发挥作用,肌腱的主成分由胶原蛋白纤维整齐无间隙排列而成,因此可经受非常强的力。此外,在皮肤中,称真皮的干燥重量中约70%被胶原蛋白占据,在维持皮肤的弹性或柔软性方面发挥重要作用。此外,已明确胶原蛋白还承担用于对与其接触的细胞传递增殖、分化信号的信息传递的作用。已知胶原蛋白存在各种类型,报告有30种以上的类型。其中,构成胶原蛋白的纤维性的基础类型为I型胶原蛋白,为机体的主要构成成分。在脊椎动物中,为以最大量存在的胶原蛋白,可达85%~90%,大量含有于骨骼中,发挥维持骨骼弹力的作用。此外在皮肤的真皮中也非常多,有通过I型胶原蛋白的粗纤维而产生皮肤的强度的作用。
近年来,以皮肤弹性、皱纹的改善为目的而实行对胶原蛋白或胶原蛋白的水解物的经口摄取,以“美容饮料”或“美肤饮料”等名称,市售有含有胶原蛋白或胶原蛋白的水解物的饮料。称这些饮料以胶原蛋白换算计每次摄取900~10000mg有效。
经口摄取后的胶原蛋白或胶原蛋白肽以怎样的作用机制作用于皮肤的弹性或皱纹的改善,详细的结构尚不明确,然而已知若经口摄取胶原蛋白,则一部分胶原蛋白肽出现于血液中。且已知该胶原蛋白肽促进成纤维细胞的I型胶原蛋白的产生。
专利文献1中记载有一种技术,通过胶原酶对胶原蛋白进行酶分解时所得的具有Gly-Pro-Hyp结构的三肽(胶原蛋白三肽)具有机体胶原蛋白合成促进作用,该技术利用含有此物质的胶原蛋白水解物作为胶原蛋白合成促进剂。
专利文献2中记载,上述胶原蛋白三肽和类黄酮的一种的水飞蓟素以及苹果萃取物,使含有胶原蛋白和成纤维细胞的胶原蛋白凝胶收缩,可用于改善皱纹。
专利文献3中记载,具有Gly-Pro-Hyp、Gly-His-Lys、Lys-Thr-Thr-Lys-Ser或Gly-Glu-Pro-Arg结构的来自胶原蛋白的肽与水飞蓟宾相乘地促进I型胶原蛋白的产生。
专利文献4中确认,经口摄取胶原蛋白后不久,合成多个血液中出现的三肽或二肽,Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Pro-Hyp、Leu-Hyp、Ala-Hyp的二肽或三肽相对于培养小鼠成纤维细胞促进胶原蛋白合成,基于该结果,提案有作为皮肤胶原蛋白产生促进剂的利用。
专利文献5中记载有一种以具有Gly-Pro、Pro-Gly、Pro-Hyp、Hyp-Gly、Gly-Hyp中的任一种序列的二肽为有效成分的胶原蛋白产生促进剂。
如此,由至今为止的研究开发,明确了胶原蛋白蛋白质的水解物或胶原蛋白肽、氨基酸等多种物质具有胶原蛋白产生促进作用,并正在继续探索有用的物质。
另一方面,在蔷薇科蔷薇属植物的花瓣或花蕾的萃取物中观察到各种作用。并且,已知可将其调配于化妆品或健康食品中。专利文献6中记载有通过水、亲水性有机溶剂或它们的混合液对选自狗牙蔷薇、法国蔷薇变种、锈红蔷薇、大马士革蔷薇、百叶蔷薇及皱叶蔷薇中的至少1种蔷薇科蔷薇属植物的花蕾或花瓣进行萃取处理而得的萃取物作为有效成分的抗菌作用组合物或饮食品。
专利文献7记载有与专利文献6相同的萃取物,通过水、亲水性有机溶剂或它们的混合液对选自狗牙蔷薇、法国蔷薇变种、锈红蔷薇、大马士革蔷薇、百叶蔷薇及皱叶蔷薇中的至少1种蔷薇科植物的花蕾或花瓣进行萃取处理而得。并且,在该萃取物中发现抗流感病毒作用,记载有将其作为有效成分的抗流感病毒剂及调配其的饮食品的发明。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本专利第3802721号公报
专利文献2:日本专利第5572406号公报
专利文献3:日本专利第4033877号公报
专利文献4:日本专利第4995155号公报
专利文献5:日本特开2016-169199号公报
专利文献6:日本专利第4633226号公报
专利文献7:日本特开2002-145790号公报
发明内容
本发明者等注目于胶原蛋白肽的胶原蛋白产生促进功能的增强。并且已经确认了若在胶原蛋白肽中并用蔷薇花蕾萃取物,则能提高胶原蛋白肽的胶原蛋白产生能力。
本发明为发现当并用胶原蛋白肽中所含的作为三肽的Gly-Pro-Hyp(以下“GPO”)及Gly-Pro-Ala(以下“GPA”)和蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物时,可发挥极强的胶原蛋白产生促进作用的产物。
即,本发明的课题在于,提供一种含有蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物和作为三肽的GPO及GPA的新型组合物。
本发明的主要构成,如下所示。
(1)一种用于促进胶原蛋白产生的组合物,其特征在于,含有蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物,以及具有Gly-Pro-Hyp及Gly-Pro-Ala序列的2种三肽作为有效成分。
(2)根据(1)所述的用于促进胶原蛋白产生的组合物,其特征在于,蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物每1质量份总计含有1~200质量份的具有Gly-Pro-Hyp及Gly-Pro-Ala序列的2种三肽。
(3)根据(1)或(2)所述的用于促进胶原蛋白产生的组合物,其特征在于,蔷薇科蔷薇属植物为选自法国蔷薇、狗牙蔷薇、法国蔷薇变种、锈红蔷薇、大马士革蔷薇、百叶蔷薇及皱叶蔷薇中的1种以上。
(4)根据(1)~(3)中任一项所述的用于促进胶原蛋白产生的组合物,其特征在于,蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物为通过水、亲水性有机溶剂或它们的混合液萃取处理而得的萃取物。
本发明的组合物具有促进机体胶原蛋白产生的作用。且,就本发明的组合物而言,蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物所示的胶原蛋白产生促进作用及具有Gly-Pro-Hyp及Gly-Pro-Ala序列的2种三肽所示的胶原蛋白产生促进作用相乘地发挥作用,发挥远远超过两者所示的胶原蛋白产生促进作用的高胶原蛋白产生促进作用。
此外,由于同时具有蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物所具有的抗菌性或抗病毒作用,因此也可作为用于感染症的防御、感染预后体力恢复的饮食品使用。此外,进一步,本发明的组合物作为原料的成分的食用经验悠久,可确认安全性,因此可作为饮食品经口摄取。
附图说明
图1为表示基于蔷薇花蕾萃取物和Gly-Pro-Hyp(GPO)、Gly-Pro-Ala(GPA)1:1混合物的I型胶原蛋白产生促进试验的结果的图表。
图2为表示基于蔷薇花蕾萃取物和Gly-Pro-Hyp(GPO)、Gly-Pro-Ala(GPA)2:1混合物的I型胶原蛋白产生促进试验的结果的图表。
具体实施方式
本发明涉及含有蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物和三肽的用于促进胶原蛋白产生的组合物。
针对本发明的组合物进行说明。
蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾,从哪个品种采集皆可,产业上优选作为园艺种大量栽培的品种。作为这样的品种,特别优选法国蔷薇(Rosa gallica)、狗牙蔷薇(Rosacanina)、法国蔷薇变种(Rosa gallica officinalis)、锈红蔷薇(Rosa rubiginosa)、大马士革蔷薇(Rosa damascena trigintipetala)、百叶蔷薇(Rosa centifolia)及皱叶蔷薇(Rosa rugosarubra)。
例如,可直接将生的或干燥后的蔷薇科蔷薇属植物的花瓣或花蕾,直接或使用粗碎机进行粉碎提供给溶剂萃取而得。作为萃取所用溶剂,优选于室温乃至溶剂的沸点以下的温度下使用水或亲水性有机溶剂及它们的混合液。具体而言,可使用甲醇、乙醇等低级醇;丙酮、甲基乙基酮等低级脂肪族酮;1,3-丁二醇、丙二醇等碳数2~4的多元醇及这些亲水性有机溶剂和水的混合溶剂等。另外,当使用水和亲水性有机溶剂的混合类溶剂时,低级醇的情况下相对于水10质量份优选添加1~90质量份,低级脂肪族酮的情况下相对于水10质量份优选添加1~40质量份,多元醇的情况下相对于水10质量份优选添加10~90质量份。
此时,萃取处理可于室温乃至环流加热下使用任意的装置来实施。例如,向满载萃取溶剂的处理槽中投入蔷薇科蔷薇属植物的花蕾(或花瓣),根据需要一边不时搅拌,一边静止30分钟~2小时溶出可溶性成分后,过滤去除固体物,从得到的萃取液中蒸馏去除萃取溶剂,通过干燥得到红褐色的蔷薇萃取物。就萃取条件而言,作为萃取溶剂使用水时,通常为50~90℃下30分钟~2小时左右。此外,作为萃取溶剂使用水和乙醇的混合溶剂时,通常为40~80℃下30分钟~2小时左右。另外,用溶剂进行萃取而得的萃取液,若萃取溶剂为安全性高的物质,则可直接调配作为本发明的有效成分使用。在专利文献6中,公开有具体的制造方法,可依照其获得适合本发明的萃取物。
如此而得的蔷薇科蔷薇属植物的萃取物,具有来自原料的良好风味,可直接利用于本发明,也可根据需要,以脱色等为目的实施精制,根据调配用途,而以醇或其他有机溶剂的溶液或水溶液的方式利用。
本发明所用的蔷薇科蔷薇属植物的萃取物,可根据需要添加糊精或环糊精,也可通过喷雾干燥等干燥方法粉末化。
本发明所用的蔷薇科蔷薇属植物的萃取物可使用市售的物质。可例示适合本发明的蔷薇花蕾的萃取物的喷雾干燥品,即丸善制药株式会社制造的“Rose Butts Extract PowderMF”。
本发明所用的蔷薇科蔷薇属植物的萃取物,为含有5质量%以上多酚的物质,优选为含有10~80质量%多酚的物质,特别优选为含有10~20质量%多酚的物质。
另外,本发明所用的蔷薇科蔷薇属植物的萃取物量是指来自植物萃取物的固体成分相当量。
本发明所用的三肽优选通过胶原蛋白的酶水解而得的胶原蛋白肽中所含的三肽,来自猪、牛等动物,来自鱼中的任一种皆可使用。此外,也可为合成品。
本发明的三肽的氨基酸序列含有Gly-Pro-Hyp及Gly-Pro-Ala两个成分。
此外,GPO:GPA的比例优选为1:1~3:1但不限定于此。
就本发明而言,通过蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物和三肽的相乗作用促进胶原蛋白产生。为了得到这样的相乗效果,就蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物和胶原蛋白三肽(GPO及GPA的合计)的调配比而言,制成相对于蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物1质量份含有1~300质量份,优选含有1~200质量份,特别优选含有5~150质量份的组合物。
将该组合物添加于饮食品中时,添加量为0.01质量%以上,优选为0.5~95质量%,特别优选为5~90质量%。当制成医药品时,由于调配量根据症状及作为对象的年龄、体重、投用剂型而不同,因此无法明确地决定。
作为食品,除通常的食品以外,作为营养补充食品、功能性食品、健康食品、特定保健用食品等,优选例如片剂、胶囊、粉末等形态。另外,也可调配于像果汁一般的饮料、果冻。
在医药品用途中,关于投用,在将有效成分经口投用、非经口投用时,可与适合直肠内投用、注射等投用方法的固体或液体的医药用无毒性载体混合,以惯用的医药制剂的形态投用。作为形态,例如可列举粉末、散剂、颗粒、片剂、胶囊等固体剂、溶液剂、悬浊剂、乳剂等液体剂、冷冻干燥制剂等。这些制剂可通过常规方法进行制备。作为上述医药品用载体,例如可列举葡萄糖、乳糖、蔗糖、淀粉、甘露糖醇、糊精、脂肪酸甘油酯、聚乙二醇、羟乙基淀粉、乙二醇、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯、氨基酸、明胶、白蛋白、水、生理盐水等。根据需要可适当添加稳定剂、湿润剂、乳化剂、结合剂、张力剂等添加剂。
实施例
以下示出使用本发明的组合物的胶原蛋白产生促进试验例及比较试验例,具体地说明本发明。
<1.三肽GPO及GPA的1:1混合物与蔷薇花蕾萃取物的并用效果确认试验>
(1)试验样本(样品)
作为蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物,使用丸善制药株式会社销售的Rose Butts Extract Powder MF。此外,作为三肽使用Gly-Pro-Hyp(GPO)序列表序列号1及Gly-Pro-Ala(GPA)序列表序列号2。GPO、GPA使用化学合成品的试剂纯度的物质。
(2)试验方法
1)使用细胞
正常人类皮肤成纤维细胞(NHDF:Lonza日本株式会社)
2)细胞培养
细胞在37℃、5%二氧化碳、95%空气的条件下进行培养。培养基使用添加非活化的牛胎儿血清(FBS)(Hyclone laboratories)10%、盘尼西林-链霉素(Sigma Aldrich)1%的达尔伯克改良伊格尔培养基(富含葡萄糖,life technologies)。以下,将该培养基记为“基础培养基”。一般培养中使用10cm或15cm培养皿,继代时的细胞剥离中使用0.05%Trypsin-EDTA(Sigma Aldrich)。
(3)试验样本制备
试验样本溶解于培养基中。UVA照射前使用基础培养基,UVA照射后使用不含FBS的基础培养基。
试验样本的最终浓度
以下表1的浓度实施试验。
(4)细胞的形态观察
为了确认因添加而导致的影响而实施形态观察。形态观察中使用倒立型系统显微镜(OLYMPUS IX70)。
(5)胶原蛋白产生量的确认试验
以1×105cells/500μL/well的比例向24孔板播种细胞。进行1天的前培养后,交换为含有试验样本的基础培养基500μL并培养1天。然后置换为Hank’s平衡盐溶液(HBSS,含有钙、镁,不含酚红)500μL,将取掉盖子的培养皿于UVA照射灯下排成一列,进行12J/cm2的照射(约132分)。照射后,去除HBSS,交换为加入样品的不含FBS的基础培养基500μL并培养2天。回收培养基并于-80℃中保存。培养基回收后,用500μL的磷酸缓冲生理盐水对培养皿进行3次清洗,并悬浊于0.1N的氢氧化钠溶液200μL中,回收细胞。
回收后的培养基以4℃、10,000×g的条件离心10分钟,使用人类I型胶原蛋白ELISA试剂盒(株式会社ACEL)测定其上清液中的I型胶原蛋白量。细胞悬浊液以4℃、10,000×g的条件离心10分钟,使用Pierce BCA蛋白浓度测定试剂盒(Thermo Fisher SCIENTIFIC)测定其上清液中的蛋白量。培养基中的I型胶原蛋白量用细胞蛋白量进行校正。此外,测定结果相对于对照组(无添加)细胞的胶原蛋白产生量计算增加量,获得增加率%。另外,结果以3次试验结果的胶原蛋白产生增加率的平均值进行表示。
(6)试验结果
试验结果示于表1及图1。
[表1]
由表1及图1,明确了蔷薇花蕾萃取物和GPO与GPA1:1混合三肽的并用可显著促进胶原蛋白产生。
此外,基于GPO与GPA1:1混合三肽和蔷薇花蕾萃取物并用的I型胶原蛋白产生相乘效果的评价,根据以下标准进行判定。
有相乘效果的评价:相加效果的理论值<实测值时判定为“有”相乗效果。
相加效果的理论值=(A/D-1)×100+(B/D-1)×100
实测值=(C/D-1)×100
A:基于蔷薇花蕾萃取物单独添加的I型胶原蛋白产生量
B:基于三肽混合物添加的I型胶原蛋白产生量
C:并用蔷薇花蕾萃取物和三肽混合物的I型胶原蛋白产生量
D:对照组(无添加样品)的I型胶原蛋白产生量
并用效果的判定表示于下述表2。
[表2]
确认了通过蔷薇花蕾萃取物和三肽GPO、GPA混合物的并用,I型胶原蛋白的产生量以相乘的方式提高。
<2.三肽GPO及GPA的2:1混合物和蔷薇花蕾萃取物的并用效果确认试验>
(1)试验样本(样品)
作为蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物,使用丸善制药株式会社销售的Rose Butts Extract Powder MF。此外,作为三肽使用与试验1相同的GPO和GPA。
(2)试验方法
1)使用细胞
正常人类皮肤成纤维细胞(NHDF:Lonza日本株式会社)
2)细胞培养
细胞在37℃、5%二氧化碳、95%空气的条件下进行培养。培养基使用添加非活化的牛胎儿血清(FBS)(Hyclone laboratories)10%、盘尼西林-链霉素(Sigma Aldrich)1%的达尔伯克改良伊格尔培养基(富含葡萄糖,life technologies)。一般培养中使用10cm或15cm培养皿,继代时的细胞剥离中使用0.05%Trypsin-EDTA(Sigma Aldrich)。
(3)试验样本制备
试验样本溶解于培养基中。UVA照射前使用基础培养基,UVA照射后使用不含FBS的基础培养基。
试验样本的最终浓度
以下表3的浓度实施试验。
(4)细胞的形态观察
为了确认因添加而导致的影响而实施形态观察。形态观察中使用倒立型系统显微镜(OLYMPUS IX70)。
(5)胶原蛋白产生量的确认试验
以1×105cells/500μL/well的比例向24孔板播种细胞。进行1天的前培养后,交换为含有样品的基础培养基500μL并培养1天。然后置换为Hank’s平衡盐溶液(HBSS,含有钙、镁,不含酚红)500μL,将取掉盖子的培养皿于UVA照射灯下排成一列,进行12J/cm2的照射(约132分)。照射后,去除HBSS,交换为加入样品的不含FBS的基础培养基500μL并培养2天。回收培养基并于-80℃中保存。培养基回收后,用500μL的磷酸缓冲生理盐水对培养皿进行3次清洗,并悬浊于0.1N的氢氧化钠溶液200μL中,回收细胞。
回收后的培养基以4℃、10,000×g的条件离心10分钟,使用人类I型胶原蛋白ELISA试剂盒(株式会社ACEL)测定其上清液中的I型胶原蛋白量。细胞悬浊液以4℃、10,000×g的条件离心10分钟,使用Pierce BCA蛋白浓度测定试剂盒(Thermo FisherSCIENTIFIC)测定其上清液中的蛋白量。培养基中的I型胶原蛋白量用细胞蛋白量进行校正。此外,测定结果相对于对照组(无添加)细胞的胶原蛋白产生量计算增加量,获得增加率%。另外,结果以3次试验结果的胶原蛋白产生增加率的平均值进行表示。
(6)试验结果
试验结果示于表3及图2。
[表3]
由表3及图2,明确了蔷薇花蕾萃取物和GPO与GPA2:1混合三肽的并用可促进胶原蛋白产生。
此外,基于GPO与GPA2:1混合三肽和蔷薇花蕾萃取物并用的I型胶原蛋白产生相乘效果的评价,根据以下标准进行判定。
有相乘效果的评价:相加效果的理论值<实测值时判定为“有”相乗效果。
相加效果的理论值=(A/D-1)×100+(B/D-1)×100
实测值=(C/D-1)×100
A:基于蔷薇花蕾萃取物单独添加的I型胶原蛋白产生量
B:基于三肽混合物添加的I型胶原蛋白产生量
C:并用蔷薇花蕾萃取物和三肽混合物的I型胶原蛋白产生量
D:对照组(无添加样品)的I型胶原蛋白产生量
并用效果的判定表示于下述表2。
[表4]
确认了通过蔷薇花蕾萃取物和三肽GPO、GPA混合物的并用,I型胶原蛋白的产生量以相乘的方式提高。
<3.试验结果汇总>
由以上试验1及2明确了以下两点。
(1)当并用蔷薇花蕾萃取物和GPO、GPA的混合物时,,机体的胶原蛋白产生以相乘的方式得到促进。
(2)就三肽GPO和GPA的调配比例而言,以GPO:GPA的比例为1:1或2:1的比例混合进行了试验,通过与蔷薇花蕾萃取物并用任何一种情况下,胶原蛋白产生皆以相乘的方式增加。
参考制造例1
蔷薇科蔷薇属植物的花蕾萃取物的制造例
向法国蔷薇变种的花蕾(Rosa gallica officinalis)300g中加入2000mL的50质量%乙醇,配备环流冷却器,于80℃下萃取1小时后,用滤纸过滤得到萃取液1。此外,向萃取残渣中加入1500mL的50重量%乙醇,同样配备环流冷却器,于80℃下萃取1小时后,用滤纸过滤得到萃取液2。将得到的萃取液1、2一起在减压下浓缩,使其干燥得到粉末萃取物100g(收率33.3%)。
参考制造例2
蔷薇科蔷薇属植物的花蕾萃取物的制造例
向百叶蔷薇的花蕾(Rosa centifolia)300g加入2000mL的水,于90℃下萃取1小时后,用滤纸进行过滤,得到萃取液。将得到的萃取液在减压下浓缩,使其干燥得到制造例2的粉末萃取物100g(收率33.3%)。
序列表
<110> 株式会社FANCL
<120> 用于促进胶原蛋白产生的组合物
<130> PF39-020
<160> 2
<170> PatentIn version 3.1
<210> 1
<211> 3
<212> PRT
<213> 人造的
<220>
<223> 合成肽
<400> 1
Gly Pro Hyp
1
<210> 2
<211> 3
<212> PRT
<213> 人造的
<220>
<223> 合成肽
<400> 2
Gly Pro Ala
1
Claims (4)
1.一种用于促进胶原蛋白产生的组合物,其特征在于,含有蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物,以及具有Gly-Pro-Hyp及Gly-Pro-Ala序列的2种三肽作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的用于促进胶原蛋白产生的组合物,其特征在于,蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物每1质量份总计含有1~200质量份的具有Gly-Pro-Hyp及Gly-Pro-Ala序列的2种三肽。
3.根据权利要求1或2所述的用于促进胶原蛋白产生的组合物,其特征在于,蔷薇科蔷薇属植物为选自法国蔷薇、狗牙蔷薇、法国蔷薇变种、锈红蔷薇、大马士革蔷薇、百叶蔷薇及皱叶蔷薇中的1种以上。
4.根据权利要求1~3中任一项所述的用于促进胶原蛋白产生的组合物,其特征在于,蔷薇科蔷薇属植物的花瓣及/或花蕾的萃取物为通过水、亲水性有机溶剂或它们的混合液萃取处理而得的萃取物。
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