KR101967922B1 - 무궁화 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물 - Google Patents
무궁화 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 무궁화 추출물을 유효성분으로 함유하는, 피부 보습용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 조성물은 세포 독성이 없고, 히알루론산의 합성을 증가하여 피부 보습에 개선 효과가 있으며, 특히, 잎과 종자의 혼합 추출물에서 피부 보습에 가장 높은 시너지 효과가 있다. 종합적으로, 본 발명의 조성물은 피부에 수분감을 증가시켜주고, 촉촉한 상태를 유지시키는데 효과적으로 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 세포 독성이 없고, 히알루론산의 합성을 증가하여 피부 보습에 개선 효과가 있으며, 특히, 잎과 종자의 혼합 추출물에서 피부 보습에 가장 높은 시너지 효과가 있다. 종합적으로, 본 발명의 조성물은 피부에 수분감을 증가시켜주고, 촉촉한 상태를 유지시키는데 효과적으로 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 피부 보습용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 무궁화 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물에 관한 것이다.
일반적으로 피부에 사용되는 보습용 화장료 조성물은 사람의 모발이나 피부 등에 수분을 일정량 유지함으로써 부드럽고 생기있게 하며, 갈라짐, 건조함 등의 손상을 방지해주는 역할을 한다. 즉, 피부 보습용 화장료 조성물은 피부나 모발에 일정량 이상의 수분을 공급하거나 수분이 유지함으로써 피부나 모발을 미화하고, 건강하게 유지하기 위한 목적으로 사용된다.
피부는 수분 유지에 필수적인 기능을 하는 기관으로, 수분 조절에 대략 2/3 정도의 비중을 담당하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 화장품 분야에서는 수분의 공급, 유지, 즉 보습과 관련된 기능성 연구가 활발하게 진행되고 있다. 또한, 최근에는 천연물 등으로부터 얻은 생리 활성 물질을 화장료에 도입하여 피부 자체의 고유 방어 기능을 더욱 강화함으로써 피부의 보습력을 증가시키는 화장품의 개발이 활발하게 진행되는 추세이다.
한편, 우리나라의 국화인 무궁화(Mugunghwa; Hibiscus syriacus L.)는 국내에서만 약 200여종이 있는 것으로 알려져 있으며, 목근피(Hibiscus syriacus bark)는 무궁화의 뿌리 및 줄기 껍질 부분으로 예로부터 한방에서 소염, 항균 등의 효능을 가진 약용식물로 이용되고 있다. 그러나, 무궁화가 우리나라의 국화임에도 불구하고 현재까지 국내에서는 무궁화의 재배 및 육종에 관한 연구만 주로 이루어지고 있고, 무궁화를 이용한 다양한 생리활성 연구가 미흡하며, 특히 생활 속에 적용 가능한 기능성 화장품 또는 식품 등의 원료로서 개발 가능한 연구 결과는 거의 없다.
이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 피부 보습 효과가 우수한 물질에 관하여 연구를 수행하였으며, 국내 자생 식물체 중 특히 무궁화 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물이 우수한 보습 효과를 나타냄을 규명하여, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 주된 목적은 무궁화 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 무궁화 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 무궁화 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 무궁화 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 피부 보습 효과가 우수한 물질에 관하여 연구를 수행하였으며, 국내 자생 식물체 중 특히 무궁화 추출물이 인간각질형성세포에서 히알루론산의 생성을 유의하게 증가시키고, 보습 관련 유전자인 Filaggrin 및 Hyaluronan synthase-3 유전자의 발현을 유의하게 증가시킴으로써, 우수한 보습 효과가 있음을 증명하였다.
본 발명의 "무궁화(Hibiscus syriacus)"는 한반도 전역에서 자생하는 쌍떡잎식물 아욱목 아욱과의 낙엽관목을 의미한다. 본 발명의 상기 무궁화 추출물은, 무궁화의 천연, 잡종 또는 변종 식물로부터 추출될 수 있고, 식물 조직 배양물에서도 추출할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "피부 보습" 이란 피부에 수분감을 증가시켜주고, 촉촉한 상태를 유지시키는 것을 의미한다. 본 발명의 무궁화 추출물의 우수한 수분 보유능 효과를 나타내었는바, 이로부터 본 발명의 무궁화 추출물을 포함하는 조성물은 피부 보습 용도로 사용될 수 있음을 확인하였다.
본 발명에서 사용되는 용어, "추출물"은 식물의 추출 처리로 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 상기 추출물은 바람직하게 추출 후 건조 분말 형태로 제조되어 사용될 수 있다.
본 발명의 상기 무궁화의 추출에 있어서, 상기 추출물을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 추출방법을 병용하여 수행될 수 있다.
본 발명에서 상기 무궁화를 추출하는데 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물; 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올 등의 C1 내지 C4의 저급 알코올; 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 등의 다가 알코올; 및 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매; 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으며, 바람직하게, 물, 저급알코올, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸아세테이트를 단독으로 사용하거나 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 열수 추출 또는 냉침 추출한 추출물은 부유하는 고체 입자를 제거하기 위해 여과, 예를 들어 나일론 등을 이용해 입자를 걸러내거나 냉동여과법 등을 이용해 여과한 후, 그대로 사용하거나 이를 동결건조, 열풍건조, 분무건조 등을 이용해 건조하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "분획물"은 여러 다양한 구성성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 분획 방법의 비제한적인 예로는, 무궁화를 추출하여 얻은 추출물에 소정의 용매를 처리하여 상기 추출물로부터 분획물을 얻는 방법을 들 수 있다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 데에 사용되는 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 알코올 등의 극성 용매; 헥산(Hexane), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 디클로로메탄(Dichloromethane) 등의 비극성 용매 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합하여 사용될 수 있다. 상기 분획 용매 중 알코올을 사용하는 경우에는 구체적으로는 C1 내지 C4의 알코올을 사용할 수 있다.
본 발명의 피부 보습용 화장료 조성물에서, 상기 무궁화 추출물은 종자, 잎, 및 꽃 추출물 각각이 모두 피부 보습에 효과적이므로, 종자, 잎, 및 꽃에서 선택된 어느 하나의 부위를 대상을 추출한 무궁화 추출물을 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 피부 보습용 화장료 조성물에서, 상기 무궁화 추출물은 바람직하게는 종자 및 잎의 혼합 부위를 대상을 추출한 무궁화 추출물을 사용하는 것이 바람직하다. 본 발명의 실시예에서는 종자 및 잎의 혼합 추출물을 사용하는 경우, 잎 또는 꽃 부위의 각각의 추출물과 비교하여 2배 이상의 보습 효과를 얻을 수 있는 것으로 나타났다.
또한, 본 발명의 피부 보습용 화장료 조성물에서, 상기 종자 및 잎은 1: 0.5 내지 2의 중량비로 혼합되는 것이 바람직하며, 상기 범위 내에서 최적의 피부 보습 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명의 피부 보습용 화장료 조성물에서, 상기 조성물은 용액, 외용연고, 크림, 폼, 영양화장수, 유연화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 제형에 따라 다양하다.
본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일이 이용될 수 있으며, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 비누인 경우에는 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알콜, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에서, 무궁화 추출물은 구체적으로는 건조 중량으로, 화장료 조성물 총 중량의 0.001 내지 50 중량%로 포함될 수 있으며, 보다 구체적으로는 0.005 내지 10 중량%로 포함될 수 있다. 상기 범위 내에서 우수한 피부 보습용 효능을 나타내는 이점이 있으며, 조성물의 제형이 안정화되는 이점이 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 무궁화 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 식품 조성물을 제공한다. 본 발명의 무궁화 추출물, 피부 보습은 상기에서 설명한 바와 같다. 상기 식품 조성물은 건강기능식품의 형태로 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 무궁화 추출물을 포함하는 동식물, 이의 추출물, 이의 분획물 또는 이의 가공물의 형태로 포함될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 유효성분 이외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조첨가제를 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물에는 건강기능식품이 포함될 수 있다. 본 발명에 있어서, "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 “기능성”이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법으로 제조 가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 피부 보습 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
본 발명의 건강기능식품이 취할 수 있는 형태에는 제한이 없으며, 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있고, 기능성 식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용이 가능하다. 아울러 본 발명의 건강기능식품은 당업자의 선택에 따라 식품에 포함될 수 있는 적절한 기타 보조성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 동물을 위한 사료로 이용되는 식품도 포함한다.
또한, 본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 무궁화 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 의약외품 조성물을 제공한다. 본 발명의 무궁화 추출물, 피부 보습은 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명의 의약외품 조성물에는 상기 성분 외에 필요에 따라 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더욱 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제는 본 발명의 효과를 해하지 않는 한 제한되지 않으며, 예를 들어 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제, 윤활제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제의 대표적인 예로는, 락토즈, 덱스트로스, 슈크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 전분, 젤라틴, 글리세린, 아카시아 고무, 알지네이트, 칼슘포스페이트, 칼슘카보네이트, 칼슘실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 식물성 오일, 주사가능한 에스테르, 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우리지 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명의 무궁화 추출물을 의약외품으로 사용하는 경우, 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 예컨대, 공지의 보습 성분을 포함할 수 있을 것이다. 추가적인 보습 성분을 포함하게 되면 본 발명 조성물의 보습 효과는 더욱 증가할 수 있다. 상기 성분 추가 시에는 복합 사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다. 상기 의약외품 조성물은 당업계에 공지된 보습 성분으로서, 레티노산, TGF, 동물 태반 유래의 단백질, 베툴린산 및 클로렐라 추출물; 및 이들의 유도체와 각종 식물 추출물로 구성되는 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 성분을 추가로 포함할 수 있다. 추가 성분은 전체 조성물 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 10 중량%로 포함될 수 있을 것이며, 상기 함량 범위는 피부 안전성, 본 발명의 무궁화 추출물의 제형화 시의 용이성 등의 요건에 따라 조절될 수 있을 것이다.
본 발명의 의약외품 조성물은 소독 청결제, 샤워폼, 연고액, 물티슈, 코팅제 등을 예시할 수 있으나 이에 제한되는 것이 아니며, 의약외품의 제제화 방법, 용량, 이용방법, 구성성분 등은 기술 분야에 공지된 통상의 기술로부터 적절히 선택될 수 있다.
또한, 본 발명의 무궁화 추출물은 개체의 피부에 도포하는 단계를 포함하는, 피부 보습 방법에 사용될 수 있다. 상기 개체는 쥐, 가축, 인간 등을 포함하는 포유동물을 제한 없이 포함한다.
이상 설명한 바와 같이, 본 발명의 조성물은 세포 독성이 없고, 히알루론산의 합성을 증가하여 피부 보습에 개선 효과가 있으며, 특히, 잎과 종자의 혼합 추출물에서 피부 보습에 가장 높은 시너지 효과가 있다. 종합적으로, 본 발명의 조성물은 피부에 수분감을 증가시켜주고, 촉촉한 상태를 유지시키는데 효과적으로 사용될 수 있다.
도 1은 무궁화 추출물을 인간각질형성세포에 처리한 후 세포 생존율의 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 무궁화 추출물을 인간각질형성세포에 처리한 후 히알루론산의 생성량 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 3은 무궁화 추출물을 인간각질형성세포에 처리한 후 보습 관련 유전자의 발현량을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 무궁화 추출물을 인간각질형성세포에 처리한 후 히알루론산의 생성량 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 3은 무궁화 추출물을 인간각질형성세포에 처리한 후 보습 관련 유전자의 발현량을 측정하여 나타낸 그래프이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.
실시예
: 무궁화 추출물의 제조
무궁화의 잎 0.5kg을 정제수로 세척하고 건조시킨 다음, 분쇄하고 세말화하여 분말을 얻었다. 분말화된 무궁화에 10배 중량의 에탄올을 가한 후, 하룻밤 동안 교반시키며 에탄올 용매 추출한 후, 여과하여 그 상등액을 동결건조하여 추출물을 수득하였다.
사용되는 무궁화의 부위를 달리하여 상기와 같은 방법으로 무궁화 각 부위에 따른 추출물을 수득하였다.
[표 1]
실험예
1. 무궁화 추출물이 세포성장에 미치는 효과 검증
무궁화 추출물이 인간각질형성세포(HaCaT, Human immortalized keratinocyte)의 생장에 미치는 효과를 아래와 같은 방법으로 확인하였다.
우선, 10% FBS(fetal bovine serum, Cambrex)가 포함된 전용 배지인 DMEM(Dulbeccos modified Eagles medium) 배지에 인간각질형성세포를 24 well 세포 배양 접시에 1×105 농도로 접종한 후 24시간 동안, 37℃, 5% CO2 습윤 조건 하에서 배양하였다. 이후, 배지를 제거하고 무혈청 DMEM 배지로 희석한 실시예 1-1 내지 1-5의 무궁화 추출물을 농도별(10 및 50 ㎍/mL)로 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후, 1 mg/mL의 MTT를 처리하고 2시간 후, 세포에 MTT 처리로 인해 생성된 포마잔(formazan)을 DMSO로 녹여 570nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 인간각질형성세포에 무궁화의 각 부위별 추출물을 처리한 경우, 무궁화 추출물이 인간각질형성세포의 세포 생존율에 크게 영향을 미치지 않는 것으로 확인되었으며, 이를 통해 무궁화 추출물이 인체에 독성을 나타내지 않음을 확인할 수 있었다(도 1 참조).
실험예
2. 히알루론산(
Hyaluronan
) 합성 촉진
상기 실시예에 따라 제조된 무궁화 추출물이 Hyaluronan 생성량에 미치는 영향을 실험하였다.
인간각질형성세포를 24 well 세포배양접시에 1㎖의 배양액을 넣고 약 1×105의 농도로 세포를 접종한 후, 37℃, 5% CO2 환경에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 무궁화 추출물(10, 및 50㎍/㎖)을 포함한 배지로 교체하여 24시간 배양하였다. 이후 배양액을 회수(harvest)하여 4℃, 7,500rpm 환경에서 5분간 원심분리(centrifuge)한 뒤, ELISA 방법을 이용하여 Hyaluronan(Hyaluronan kit, R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA)의 발현량을 확인하였다.
히알루론산(HA, Hyaluronan, Hyaluronic acid)은 주로 표피 각질형성세포와 진피 섬유아세포에 의해 합성되며, 수분과 결합하여 세포가 정상적으로 활동할 수 있는 환경을 조성하는 중요한 역할을 하는 물질이다. 피부에서 히알루론산의 감소는 피부 탄력 저하 및 수분 함유량 감소의 직접적인 원인 중 하나이다. 따라서 본 실험예에서는 인간각질형성세포 내에서 히알루론산의 생성량을 확인하였다. 그 결과, 시료 무처리군(Nor)이나, 용매 대조군(Con)에 비해 실시예 1-1 내지 1-5의 무궁화 추출물의 처리군에서는 히알루론산(Hyaluronan)의 생성량이 농도 의존적으로 증가하는 양상을 확인하였다(도 2 참조).
또한, 무궁화 부위별로 히알루론산 생성량(Hyaluronan)을 비교해보면, 잎과 꽃 추출물이 유사한 정도의 히알루론산(Hyaluronan) 생성량의 증가 효과를 나타내었고, 종자 추출물에서 잎과 꽃 추출물에 비해 20% 정도 개선된 히알루론산 생성량의 증가 효과를 나타내었으며, 잎과 종자의 혼합 추출물에서 무처리군에 비해 3배 이상 증가한 가장 높은 히알루론산 생성량 증가 효과를 나타내는 것이 관찰되었다.
실험예
3.
Filaggrin
및
Hyaluronan
synthase
-3 유전자 발현 분석
상기 실시예에 따라 제조된 무궁화 추출물이 Filaggrin(FLG, 각질층 형성 인자) 및 Hyaluronan synthase-3(HAS-3, 피부보습 인자) 유전자 발현에 미치는 영향을 실험하였다.
먼저, 100mm 세포 배양 접시에 인간각질형성세포를 10% FBS를 첨가한 DMEM 배지에 1×106 세포 농도로 접종하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양하여 상기 실시예 1-1 내지 1-5의 추출물을 각각 10μg/mL 및 50μg/mL 농도가 되도록 DMEM 배지에 희석하여 제조한 희석용액을 첨가하여 24시간 동안 동일 조건에서 배양하였다. 이후 Trizol reagent(invitrogen, USA)를 이용하여 세포를 회수하여 RNA를 분리하였다. RT-PCR 방법을 이용하여 Filaggrin 및 hyaluronan synthase-3의 mRNA 발현량을 확인하였다. 사용한 프라이머는 다음과 같다:
- Filaggrin : 정방향 5′-AAG CTT CAT GGT GAT GCG AC-3′, 역방향 5′-TCA AGC AGA AGA GGA AGG CA-3′
- Hyaluronan synthase-3: 정방향 5′-CCC AGC CAG ATT TGT TGA TG-3′, 역방향 5′-AGT GGT CAC GGG TTT CTT CC-3′
- GAPDH: 정방향 5'-ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC-3', 역방향 5'-CCA CCA CCC TGT TGC TGT AG-3'.
상기와 같은 프라이머를 이용하여 RT-PCR 수행하고, 그 결과를 도 3에 정리하였다.
필라그린은 표피 과립층에서 케라토히알린과립(keratohyalin granule)을 형성하는 단백질인 프로필라그린(profilaggrin)의 형태로 존재하다가, 각질형성세포의 최종분화과정에서 필라그린으로 분해된 후에 각질세포막을 형성할 때 케라틴 필라멘트를 응집하여 각질세포의 단단하고 편평한 구조를 만듦으로써 피부장벽에서 벽돌(brick)의 역할을 수행하게 된다.
또한, 히알루론산(HA, Hyaluronan, Hyaluronic acid)은 탄수화물 형태의 성분으로 진피층 및 표피 내에서 수분과 결합하여 세포가 정상적으로 활동할 수 있는 환경을 조성하는 중요한 역할을 하는 물질이다. 진피층 및 표피에 존재하는 생리활성 물질의 하나인 히알루론산은 섬유아세포에서 합성되는 물질로 히알루론산 합성효소(Hyaluronan synthase)에 의해 생산된다.
따라서, 본 실험예에서는 피부 보습과 직접적으로 관련된 인간각질형성세포 내에서 필라그린과 히알루론산 합성효소의 mRNA 발현을 확인하였다. 그 결과, 시료 무처리군에 비해 실시예 1-1 내지 1-5의 무궁화 추출물의 처리군에서는 필라그린(filaggrin) 및 히알루론산 합성효소(hyaluronan synthase-3)의 mRNA 발현량이 약 2배 정도 증가하는 양상을 확인하였다(도 3 참조).
상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 무궁화 추출물을 포함하는 피부 보습용 조성물은 세포 독성이 없고, 각질형성 및 히알루론산의 합성을 증가하여 피부 보습에 개선 효과가 있음을 확인할 수 있었으며, 특히, 잎과 종자의 혼합 추출물에서 피부 보습에 가장 높은 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다.
따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
Claims (7)
- 무궁화 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하되,
상기 무궁화 추출물은 종자 및 잎의 혼합 부위를 대상으로 추출한 무궁화 추출물인 것을 특징으로 하고,
상기 종자 및 잎은 1: 0.5 내지 2의 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는,
피부 보습용 화장료 조성물. - 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 용액, 외용연고, 크림, 폼, 영양화장수, 유연화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 보습용 화장료 조성물. - 무궁화 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하되,
상기 무궁화 추출물은 종자 및 잎의 혼합 부위를 대상으로 추출한 무궁화 추출물인 것을 특징으로 하고,
상기 종자 및 잎은 1: 0.5 내지 2의 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는,
피부 보습용 식품 조성물. - 무궁화 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하되,
상기 무궁화 추출물은 종자 및 잎의 혼합 부위를 대상으로 추출한 무궁화 추출물인 것을 특징으로 하고,
상기 종자 및 잎은 1: 0.5 내지 2의 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는,
피부 보습용 의약외품 조성물.
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|---|---|---|---|---|
| KR102366932B1 (ko) | 2021-03-17 | 2022-02-25 | (주)에스디생명공학 | 무궁화 연화 꽃잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증, 보습, 피부 주름 개선 및 피부 상처 재생용 조성물 |
| KR20240023246A (ko) | 2022-08-10 | 2024-02-21 | 대한민국(산림청 국립산림과학원장) | 무궁화 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물 |
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2018
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