JP2020507331A5 - - Google Patents
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Description
Claims (23)
- (i)少なくとも4つの別個の組換え標的部位(RTS)と、(ii)E1A、E1B又はそれらの組み合わせを含むアデノウイルス(Ad)遺伝子と、(iii)前記Ad遺伝子に作動可能に連結されるプロモーターとを含み、前記RTS、前記Ad遺伝子及び前記プロモーターが染色体に組み込まれている哺乳動物細胞。
- マウス細胞、ヒト細胞、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞、CHO−K1細胞、CHO−DXB11細胞、CHO−DG44細胞、すべてのバリアントを含むCHOK1SV(商標)細胞、すべてのバリアントを含むCHOK1SV GS−KO(商標)(グルタミン合成酵素ノックアウト)細胞、付着適応及び懸濁適応バリアントを含むHEK293細胞、ヒーラ細胞又はHT1080細胞である、請求項1に記載の細胞。
- 4つのRTSを含む、請求項1又は2に記載の細胞。
- 6つのRTSを含む、請求項1又は2に記載の細胞。
- 少なくとも1つのRTSが、配列番号1〜30からなる群から選択される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の細胞。
- 少なくとも1つのRTS、前記Ad遺伝子及び前記プロモーターが、単一の染色体座位に組み込まれている、請求項1〜5のいずれか一項に記載の細胞。
- 前記染色体座位が、Fer1L4、ROSA26、HGPRT、DHFR、COSMC、LDHa、MGAT1、GRIK1、NL1、NL2、X染色体上のMID1の第1イントロン、又は発現増強及び安定性領域である、請求項6に記載の細胞。
- 部位特異的リコンビナーゼ遺伝子を更に含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の細胞。
- 前記部位特異的リコンビナーゼ遺伝子が、染色体に組み込まれている、請求項8に記載の細胞。
- 第2のAd遺伝子を更に含み、前記第2のAd遺伝子が染色体に組み込まれている、請求項1〜9のいずれか一項に記載の細胞。
- 前記第2のAd遺伝子が、E1A、E1B、E2A、E4、VA、MIR342又はそれらの組み合わせを含む、請求項10に記載の細胞。
- 前記第2のAd遺伝子が、2つの前記RTSの間に位置する、請求項10又は11に記載の細胞。
- アデノ随伴ウイルス(AAV)遺伝子を更に含み、前記AAV遺伝子が染色体に組み込まれている、請求項1〜12のいずれか一項に記載の細胞。
- 前記AAV遺伝子が、2つの前記RTSの間に位置する、請求項13に記載の細胞。
- AAVベクターカセットを更に含み、前記AAVベクターカセットが染色体に組み込まれている、請求項1〜14のいずれか一項に記載の細胞。
- 前記AAVベクターカセットが、レポーター遺伝子、選択遺伝子、治療目的遺伝子又はそれらの組み合わせを含む、請求項15に記載の細胞。
- ヘルパーウイルスを実質的に含まない、請求項1〜16のいずれか一項に記載の細胞。
- (i)少なくとも4つの別個の組換え標的部位(RTS)と、(ii)アデノウイルス(Ad)遺伝子E2A、E4、VA、MIR342又はそれらの組み合わせと、(iii)前記Ad遺伝子に作動可能に連結されるプロモーターとを含み、前記RTS、前記Ad遺伝子及び前記プロモーターが染色体に組み込まれている哺乳動物細胞。
- (i)少なくとも4つの別個の組換え標的部位(RTS)と、(ii)Rep、Cap又はそれらの組み合わせを含むアデノ随伴ウイルス(AAV)遺伝子とを含み、前記RTS及び前記AAV遺伝子が染色体に組み込まれている哺乳動物細胞。
- a.6つの別個の組換え標的部位(RTS)と、
b.E1A及びE1Bを含むアデノウイルス(Ad)遺伝子と、
c.前記Ad遺伝子に作動可能に連結されるプロモーターであって、前記RTS、前記Ad遺伝子及び前記プロモーターが染色体に組み込まれている、前記プロモーターと、
d.E2A、E4、VA及びMIR342を含む第2のAd遺伝子であって、2つの前記RTSの間に位置する、前記第2のAd遺伝子と、
e.Rep及びCapを含むアデノ随伴ウイルス(AAV)遺伝子であって、2つの前記RTSの間に位置する、前記AAV遺伝子と、
f.レポーター遺伝子、選択遺伝子又は治療目的遺伝子を含み、2つの前記RTSの間に位置する、AAVベクターカセットと
を含む、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞。 - E1A及びE1Bを含むアデノウイルス(Ad)遺伝子及び前記Ad遺伝子に作動可能に連結されるプロモーターと、E2A、E4、VA及びMIR342を含む第2のAd遺伝子と、Rep及びCapを含むアデノ随伴ウイルス(AAV)遺伝子と、レポーター遺伝子、選択遺伝子、治療目的遺伝子又はそれらの組み合わせを含むAAVベクターカセットとを含むチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞。
- 組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)プロデューサー細胞を生産する方法であって、
a.少なくとも4つの別個の組換え標的部位(RTS)と、E1A、E1B又はそれらの組み合わせを含むアデノウイルス(Ad)遺伝子と、前記Ad遺伝子に作動可能に連結されるプロモーターとを含み、前記RTS、前記Ad遺伝子及び前記プロモーターが染色体に組み込まれている細胞を用意するステップと、
b.(a)で用意された前記細胞に、アデノ随伴ウイルス(AAV)遺伝子、第2のAd遺伝子、AAVベクターカセット又はそれらの組み合わせをコードする交換可能なカセットを含むベクターをトランスフェクトするステップと、
c.染色体に前記交換可能なカセットを組み込むステップと、
d.前記染色体に組み込まれた前記交換可能なカセットを有するrAAVプロデューサー細胞を選択するステップと
を含む方法。 - 組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)を生産する方法であって、(i)宿主細胞にrAAVを感染させるステップと、(ii)AAVベクターカセットでパッケージングされたrAAVを生産するステップと、(iii)前記パッケージングされたrAAVを精製するステップとを含み、前記宿主細胞が、
a.少なくとも4つの別個の組換え標的部位(RTS)と、
b.E1A、E1B又はそれらの組み合わせを含むアデノウイルス(Ad)遺伝子と、
c.前記Ad遺伝子に作動可能に連結されるプロモーターであって、前記RTS、前記Ad遺伝子及び前記プロモーターが染色体に組み込まれている、前記プロモーターと、
d.E1A、E1B、E2A、E4、VA、MIR342又はそれらの組み合わせを含む第2のAd遺伝子と、
e.Rep、Cap又はそれらの組み合わせを含むアデノ随伴ウイルス(AAV)遺伝子と、
f.レポーター遺伝子、選択遺伝子、治療目的遺伝子又はそれらの組み合わせを含むAAVベクターカセットと
を含む、方法。
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