JP2020202856A - 人工組織前駆体及びそれを調製する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(I)管状(例えば、円形の管の形状で、例えば、側壁に開口部を有する又は有しない管の形状)の生物学的構築物を調製する工程;そして
(II)管状生物学的構築物を管状固体支持体の内壁に付着させる工程
を含む。
(1)その表面の全部又は一部に付着した第1の成分を有する1つ以上のマイクロカプセルを提供する工程;好ましくは、第1の成分は第1の薬剤に含まれる;
(2)仮支持体の表面の所定の領域に第2の成分を含む第2の薬剤を塗布する工程であって、第1の成分と第2の成分とが接触した場合に粘着作用を達成する粘着作用を生じさせ、一時的な支持体は、管状又は円筒状(例えば、側壁に開口部を有しない円形管、側壁に開口部を有する円形管、円柱又は円周の一部に沿って配置される円柱)支持体であり、所定の領域は仮支持体の曲面上に位置する。場合により、第2の薬剤をコーティングする前に仮支持体の表面の所定の領域に基材材料をコーティングする工程;
(3)工程(1)において第1成分が表面に付着したマイクロカプセルを第2剤でコーティングされた所定領域に配置し、マイクロカプセルの表面の第1成分と接触させる工程、それにより、第1の層構造が管状構造である第1の層構造にマイクロカプセルを組み立てる(付着させる)工程;
場合により、この方法は、以下の工程をさらに含む:
(4)前の工程で形成された構造上に第2の薬剤をコーティングする工程;
(5)工程(1)で表面の全部又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、前工程で作製した構造体上に置き、マイクロカプセル表面の第1成分が、粘着性の効果を生じさせて、前の工程で製造された構造上の別の層構造にマイクロカプセルを組み立てる(付着させる)工程;そして
(6)任意に、工程(4)及び(5)を1回以上繰り返す工程
が含まれ、それにより、管状生物学的構築物を得る。
(I)管状(例えば、円形の管の形状で、例えば、側壁に開口部を有する又は有しない管の形状)の生物学的構築物を調製する工程;そして
(II)管状生物学的構築物を管状固体支持体の内壁に付着させる工程
ことを含む。
(1)その表面の全部又は一部に付着した第1の成分を有する1つ以上のマイクロカプセルを提供する工程;好ましくは、第1の成分は第1の薬剤に含まれる;
(2)仮支持体の表面上に所定の環状(例えば円形又は環帯の扇形)パターンを第2の成分を含む第2の薬剤で描かれ、粘着性効果を生じさせて、第1の構成要素と第2の構成要素とは互いに接触している。ここで、前記仮支持体は少なくとも1つの平面を有し、前記環状パターンは前記仮支持体の平面上に位置する;
(3)工程(1)において第1成分が表面に付着したマイクロカプセルを第2剤で描いた所定の環状パターン上に載置してマイクロカプセル表面の第1成分を接触させ、それにより、第1の層構造が環状構造である第1の層構造にマイクロカプセルを組み立てる(付着させる)工程;
(4)環状構造の上に第2の薬剤をコーティングする工程;
(5)工程(1)で表面の全部又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、前工程で作製した構造体上に置き、マイクロカプセル表面の第1成分が、粘着性の効果を生じさせて、前の工程で製造された構造上の別の層構造にマイクロカプセルを組み立てる(付着させる)工程;そして
(6)任意に、工程(4)及び(5)を1回以上繰り返す工程
が含まれ、それにより、管状生物学的構築物を得る。
(I)シート状(例えば、平面シートの形状、又は湾曲シートの形状)の生物学的構築物を調製する工程;そして
(II)シート状の生物学的構築物をシート状の固体支持体に取り付ける工程
を含む。
(1)その表面の全部又は一部に付着した第1の成分を有する1つ以上のマイクロカプセルを提供する工程;好ましくは、第1の成分は、第1の薬剤に含まれる;
(2)仮支持体の表面の所定の領域に第2の成分を含む第2の薬剤を塗布する工程であって、第1の成分と第2の成分とが接触した場合に粘着作用を達成する粘着作用を生じさせ、仮支持体は少なくとも1つの平面を有し、所定領域は仮支持体の平面上に位置する;
(3)工程(1)において第1成分が表面に付着したマイクロカプセルを第2剤でコーティングされた所定領域に配置し、マイクロカプセルの表面の第1成分と接触させる工程第1の層構造がシート状構造であり、それにより第1の層構造にマイクロカプセルを組み立てる(付着する)工程;
場合により、この方法は、以下の工程をさらに含む:
(4)前の工程で形成された構造上に第2の薬剤をコーティングする工程;
(5)工程(1)で表面の全部又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、前工程で作製した構造体上に置き、マイクロカプセル表面の第1成分が、粘着性の効果を生じさせて、前の工程で製造された構造上の別の層構造にマイクロカプセルを組み立てる(付着させる)工程;そして
(6)任意に、工程(4)及び(5)を1回以上繰り返すことにより、平面状のシート状生物学的構築物を得る工程;
を含み、
場合により、この方法は、湾曲したシート状の生物学的構築物を得るために、平面状のシート状生物学的構築物を曲げる工程をさらに含む。
(I)上記シート状生物学的構築物を調製する方法に従って、シート状生物学的構築物を調製する工程;そして
(II)固体支持体を調製するための材料(例えば、生体適合性材料)を提供し、及びシート状生物学的構築物上にシート状固体支持体を調製する工程
を含む
(I)上記シート状生物学的構築物を調製する方法に従って、シート状生物学的構築物を調製する工程;
(II)工程(I)で調製されたシート状生物学的構築物を曲げ、及び/又はシート状生物学的構築物の縁を付着して管状生物学的構築物を得る工程;そして
(III)管状生物学的構築物を管状固体支持体の内壁に付着させる工程
を含む。
(I)上記項目のいずれかに記載の管状生物学的構築物を調製するための方法に従って、管状生物学的構築物を調製する工程;
又は上記のようなシート状の生物学的構築物を調製するための方法に従って、シート状の生物学的構築物を調製し;シート状の生物学的構築物を曲げ、及び/又はシート状の生物学的構築物の縁を付着させて管状生物学的構築物を得る工程;そして
(II)固体支持体を調製するための材料(例えば、生体適合性材料)を提供し、及び管状生物学的構築物の外壁上に管状固体支持体を調製する工程
を含む。
(1)その表面の全部又は一部に付着した第1成分を有する1つ以上のマイクロカプセルを提供する工程;好ましくは、第1の成分は第1の薬剤に含まれる;
(2)固体支持体を準備し、固体支持体の表面の所定領域に第2成分を含む第2の薬剤をコーティングする工程、ここで、第1成分及び第2成分が互いに接触している場合に、粘着性作用が生じ、付着作用を達成することができる;
(3)工程(1)において、表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、第2剤で被覆された所定領域に配置し、それにより、マイクロカプセルの表面の第1成分を、所定領域上の第2成分と接触させて、粘着性作用を生じさせ、それにより、マイクロカプセルを固体支持体の表面上の第1の層構造にアセンブルさせる(付着させる)。
場合により、この方法は、以下の工程をさらに含む;
(4)前工程で形成された構造上に第2の薬剤をコーティングする;そして、
(5)工程(1)において、表面の全部又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、前工程で作製した構造体上に置き、それにより、マイクロカプセル表面上の第1成分が、前工程において生成された構造上の第2成分と接触して、前工程で生成された構造上の別の層構造にマイクロカプセルをアセンブルさせる(付着させる);そして、
(6)任意に、工程(4)及び(5)を1回以上繰り返す工程
を含み、それにより人工組織前駆体を得る。
(1)フィブリノーゲン及びトロンビン;
(2)アルギン酸塩(例えば、アルギン酸ナトリウム)又は酸化アルギン酸塩(例えば、酸化アルギン酸ナトリウム)、及びCa2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む物質(例えば、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む溶液又は半固体(例えば、ゲル));
(3)マレイミド基含有分子(例えば、マレイミド基を含むポリエチレングリコール(MAL−PEG))及び遊離チオール基含有分子(例えば、遊離チオール基を含むポリエチレングリコール(PEG−SH));
(4)アニオン含有物質(例えば、アニオンを含む溶液又は半固体(例えば、ゲル))及びα−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート、n−オクチルα−シアノアクリレート);
(5)フィブリノーゲン及びα−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート、n−オクチルα−シアノアクリレート);
(6)血清アルブミン(例えば、ウシ血清アルブミン)及びグルタルアルデヒド;
(7)カルバメート基(−NHCOO−)を含むか、又はイソシアネート基(−NCO)を含む分子(例えば、カルバメート基を含むポリエチレングリコール、又はイソシアネート基を含むポリエチレングリコール)及び反応性水素を含む分子(例えば、カルボキシル含有ポリエチレングリコール);
(8)ゼラチン−レゾルシノール及びグルタルアルデヒド;
(9)カルボジイミド架橋ゼラチン及びポリ−L−グルタミン酸(PLGA);そして
(10)アミノ化ゼラチン及び多糖アルデヒド。
(1)フィブリノーゲン及びトロンビン;
(2)アルギン酸塩(例えば、アルギン酸ナトリウム)又は酸化アルギン酸塩(例えば、酸化アルギン酸ナトリウム)、及びCa2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む物質(例えば、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む溶液又は半固体(例えば、ゲル));
(3)マレイミド基含有分子(例えば、マレイミド基を含むポリエチレングリコール(MAL−PEG))及び遊離チオール基含有分子(例えば、遊離チオール基を含むポリエチレングリコール(PEG−SH);
(4)アニオン含有物質(例えば、アニオンを含む溶液又は半固体(例えば、ゲル))及びα−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート、n−オクチルα−シアノアクリレート);
(5)フィブリノーゲン及びα−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート、n−オクチルα−シアノアクリレート):
(6)血清アルブミン(例えば、ウシ血清アルブミン)及びグルタルアルデヒド;
(7)カルバメート基(−NHCOO−)を含むか、又はイソシアネート基(−NCO)を含む分子(例えば、カルバメート基を含むポリエチレングリコール、又はイソシアネート基を含むポリエチレングリコール)及び反応性水素を含む分子(例えば、カルボキシル含有ポリエチレングリコール);
(8)ゼラチン−レゾルシノール及びグルタルアルデヒド;
(9)カルボジイミド架橋ゼラチン及びポリ−L−グルタミン酸(PLGA);そして
(10)アミノ化ゼラチン及び多糖アルデヒド。
−細胞増殖と関連したサイトカイン、例えば、インスリン、インスリン様増殖因子(例えば、IGF−I、IGF−II)、形質転換増殖因子(例えば、TGFα及びTGFβ)、血管内皮増殖因子、上皮細胞増殖因子、線維芽細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、骨肉腫由来増殖因子、成長ホルモン放出阻害因子、神経成長因子、インターロイキン(例えば、IL−1、IL−11、IL−3)、エリスロポイエチン、コロニー刺激因子、神経栄養因子、コルチゾール、チロキシン、又はそれらの任意の組み合わせ;
−分化と関連したサイトカイン、例えば、Oct3/4、Sox2、Klf4、c−Myc、GATA4、TSP1、ベータ−グリセロリン酸ナトリウム、デキサメタゾン、ビタミンC、インスリン、IBMX、インドメタシン、血小板由来増殖因子BB(PDGF−1)、5−アザシチジン、又はそれらの任意の組み合わせ;
−細胞遊走と関連したサイトカイン、例えば、サイクリックアデノシン一リン酸、ホスファチジルイノシトール三リン酸、間質細胞由来因子−1、N−カドヘリン、核因子κB、オステオネクチン、トロンボキサンA2、Ras、又はそれらの任意の組み合わせ;及び/又は
−細胞代謝と関連したサイトカイン、例えば、インスリン増殖因子1、TRIP−Br2、DKK−1、sRANKL、OPG、TRACP−5b、ALP、SIRT1(2−7)、PGC−1α、PGC−1β、OPG、IL−3、IL−4、IL−6、TGF−β、PGE2、G−CSF、TNF−α、又はそれらの任意の組み合わせ。
(1)固体支持体を調製するために使用される材料(例えば、生分解性材料)を適当な溶媒(クロロホルム、テトラヒドロフラン、N,N−ジメチルアセトアミドなどの有機溶媒)中に溶解して、調製液を製剤化し;
(2)鋳型を調製液に浸漬した後、鋳型を取り出し、鋳型上の溶媒を揮発させ;そして
(3)工程(2)を複数回繰り返して固体支持体を得て;
場合により、該プロセスは、固体支持体を乾燥、切断及び/又は滅菌させる工程をさらに含む。
(1)固体支持体を調製するために用いられる材料(例えば、生分解性材料)を適切な溶媒(例えば、クロロホルムなどの有機溶媒)に溶解して調製溶液を調製する工程;
(2)電気紡糸装置中で調製溶液を紡糸して固体支持体を形成する工程;そして
(3)溶媒が揮発した後、固体支持体を電界紡糸装置から分離する工程。
軟組織用の医療用付着剤、例えば、オクチル2−シアノアクリレートを主成分とする組織付着剤;フィブリン付着剤(FS、主にフィブリノーゲン+トロンビン、Ca2+及び第VIII因子を含む);
硬組織用の医療用付着剤、例えば、歯科用の合成樹脂付着剤、例えば、(1)メタクリレート類:4−EMTA(4−メタクリロイルオキシエチルトリメリテート)、phenyp(メタクリロイルオキシエチルフェニルホスフェート)、Bis−GMA(ビス−グリシジルメタクリレート)などであり、これらは齲蝕の充填及び象牙質の結合に使用される、
(2)ポリアクリル酸塩+酸化亜鉛又は特殊なガラスフィラーのようなポリカルボン酸(これは主に歯の穴を満たし、ポリメチルメタクリレートで結合し修復するために使用される); 骨付着剤(アクリル系セメントとポリメチルメタクリル(PMMA)等を主成分とする骨セメントとして一般に知られている)。
(I)管状(例えば、円形管状で、例えば、側壁に開口部を有する又は有しない管の形状)の生物学的構築物を調製する工程;そして
(II)管状生物学的構築物を管状固体支持体の内壁に付着させる工程を含む。
(1)マイクロカプセルの表面の全体又は一部に付着した第の成分を有する1つ以上のマイクロカプセルを提供する工程;好ましくは、第1成分は第1の薬剤に含まれる;
(2)一時支持体の表面の所定の領域に第2成分を含む第2の薬剤をコーティングする工程であって、第1成分と第2成分とが接触した場合に粘着作用を達成する粘着作用を生じさせ;一次支持体は、管状又は円筒状の支持体(例えば、側壁に開口部を有しない円形管、側壁に開口部を有する円形管、円筒又は円周の一部に沿って配置される円柱)であり、所定の領域は一次支持体の曲面上に位置する;場合により、第2の薬剤をコーティングする前に、一時的支持体の表面の所定の領域に基材材料をコーティングすることを含む。
(3)第2の薬剤でコーティングされた所定領域上に、工程(1)において表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを配置し、それにより、マイクロカプセルの表面上の第1成分は、所定領域上の第2成分と接触させて、粘性効果を生じさせ、それにより、管構造である第1の層構造にマイクロカプセルをアセンブル(付着)させ;
場合により、この方法は、以下の工程をさらに含む:
(4)前工程で形成された構造上に第2の薬剤をコーティングする工程;
(5)前工程において生じさせた構造上に、工程(1)において表面の全体又は一部に付着させた第1成分を有するマイクロカプセルを配置し、それにより、マイクロカプセルの表面上の第1成分は、前工程において生じさせた構造上の第2成分と接触させて、粘性効果を生じさせ、それにより、前工程で生じさせた構造上の別の層構造にマイクロカプセルをアセンブル(付着)させる工程;
(6)場合により、工程(4)及び(5)を1回以上、例えば少なくとも1回、少なくとも2回、少なくとも3回、少なくとも4回、少なくとも5回、少なくとも10回、少なくとも15回、少なくとも20回、少なくとも30回、少なくとも40回、少なくとも50回、少なくとも100回、少なくとも200回、少なくとも500回以上反復する工程;
それにより、管状生物学的構築物を得る。
(1)3Dバイオプリンタの第1のインクカートリッジにおいて表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを提供し、3Dバイオプリンタの第2のインクカートリッジに第2成分を含む第2の薬剤を提供する工程であって、ここで、第1成分と第2成分とが接触しているときに付着作用を達成するために粘着性作用を生じさせることができ、
(2)3Dバイオプリナーの第2のインクカートリッジに接続された第2のプリンタヘッドを介して、回転ロッドの曲面の所定の領域に第2の薬剤をプリントする工程;場合により、第2の薬剤をプリントする前に所定の領域に基質材料をプリントする工程;
(3)マイクロカプセルの表面の第1成分が、所定領域の第2成分と接触するように、3Dプリンタの第1のプリンタヘッドを介して、工程(2)で第2剤がプリントされた所定領域に工程(1)でマイクロカプセルをプリントし、粘着作用を生じさせ、それにより、第1の層構造にマイクロカプセルをアセンブルする(付着させる)工程;
場合により、該方法は、以下の工程をさらに含む:
(4)前工程で形成された構造上に第2の薬剤を第2のプリンタヘッドを介してプリントする工程;
(5)マイクロカプセルの表面上の第1成分が、前工程で生成された構造上の第2成分と接触するように、第1のプリンタヘッドを介して、前工程で生成された構造上に工程(1)のマイクロカプセルをプリントし、粘性作用を生じさせ、それにより、前工程で生成された構造上の別の層構造にマイクロカプセルをアセンブルする(付着させる)工程;そして
(6)場合により、工程(4)及び(5)を1回以上、例えば、少なくとも1回、少なくとも2回、少なくとも3回、少なくとも4回、少なくとも5回、少なくとも10回、少なくとも15回、少なくとも20回、少なくとも30回、少なくとも40回、少なくとも50回、少なくとも100回、少なくとも200回、少なくとも500回、又はそれ以上で反復する工程
を含み、それにより、管状生物学的構築物を得る。
(I)管状(例えば、円形管の形状で、例えば、側壁に開口部を有する又は有しない管の形状)の生物学的構築物を調製する工程;そして
(II)管状生物学的構築物を管状固体支持体の内壁に付着させる工程
を含む。
(1)表面の全体又は一部に付着した第1成分を有する1つ以上のマイクロカプセルを提供する工程、好ましくは、第1成分は第1の薬剤に含まれる;
(2)一時的支持体の表面上に所定の環状(例えば円形又は環帯扇形)パターンを第2成分を含む第2の薬剤で描かれ、それにより、第1の構成要素と第2の構成要素が互いに接触している場合に、粘着性作用を生じさせて、付着作用を達成することができる工程;前記一時的支持体は少なくとも1つの平面を有し、前記環状パターンは一時的支持体の平面上に位置される;
(3)工程(1)において、表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、第2の薬剤を用いて描かれた所定の環状パターン上に配置し、それにより、マイクロカプセルの表面の第1成分が、環状パターンの第2成分と接触して、粘着性作用を生じさせ、それにより、第1の層構造にマイクロカプセルをアセンブル(付着)させる工程、第1の層構造は環状構造である;
(4)環状構造上に第2の薬剤をコーティングする工程;
(5)工程(1)において、表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、前工程において生成された構造上に配置し、それにより、マイクロカプセルの表面の第1成分が、前工程において生成された構造上の第2成分と接触して、粘着性作用を生じさせ、それにより、前工程において生成された構造上の別の層構造にマイクロカプセルをアセンブル(付着)させる工程;そして
(6)場合により、工程(4)及び(5)を1回以上、例えば、少なくとも1回、少なくとも2回、少なくとも3回、少なくとも4回、少なくとも5回、少なくとも10回、少なくとも15回、少なくとも20回、少なくとも30回、少なくとも40回、少なくとも50回、少なくとも100回、少なくとも200回、少なくとも500回、又はそれ以上で反復する工程
を含み、それにより、管状生物学的構築物を得る。
(1)3Dバイオプリンタの第1のインクカートリッジにおいて表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを提供し、3Dバイオプリンタの第2のインクカートリッジに第2成分を含む第2の薬剤を提供する工程であって、ここで、第1成分と第2成分とが接触しているときに付着作用を達成するために粘着性作用を生じさせることができ、
(2)3Dバイオプリナーの第2のインクカートリッジに接続された第2のプリンタヘッドを介して、プリンティングプラットフォーム上に第2の薬剤で環状パターン(例えば、円形環状又は環帯扇形)を描く工程;
(3)マイクロカプセルの表面の第1成分が、環状パターンの第2成分と接触するように、3Dプリンタの第1のプリンタヘッドを介して、工程(2)において描かれた環状パターン上に工程(1)においてマイクロカプセルをプリントして、粘着作用を生じさせ、それにより、第1の層構造にマイクロカプセルをアセンブルする(付着させる)工程;
場合により、該方法は、以下の工程をさらに含む:
(4)前工程で形成された構造上に第2の薬剤を第2のプリンタヘッドを介してプリントする工程;
(5)マイクロカプセルの表面上の第1成分が、前工程で生成された構造上の第2成分と接触するように、第1のプリンタヘッドを介して、前工程で生成された構造上に工程(1)のマイクロカプセルをプリントし、粘性作用を生じさせ、それにより、前工程で生成された構造上の別の層構造にマイクロカプセルをアセンブルする(付着させる)工程;そして
(6)場合により、工程(4)及び(5)を1回以上、例えば、少なくとも1回、少なくとも2回、少なくとも3回、少なくとも4回、少なくとも5回、少なくとも10回、少なくとも15回、少なくとも20回、少なくとも30回、少なくとも40回、少なくとも50回、少なくとも100回、少なくとも200回、少なくとも500回、又はそれ以上で反復する工程
を含み、それにより、管状生物学的構築物を得る。
(I)シート状(例えば、平面シートの形状、又は湾曲シートの形状)の生物学的構築物を調製する工程;そして
(II)シート状生物学的構築物をシート状の固体支持体に付着させる工程を含む。
(1)表面の全体又は一部に付着した第1成分を有する1つ以上のマイクロカプセルを提供する工程;好ましくは、第1成分は第1の薬剤に含まれる;
(2)一時支持体の表面の所定の領域に第2成分を含む第2の薬剤をコーティングする工程であって、第1成分と第2成分が接触した場合に粘着作用を達成する粘着作用を生じさせ工程、 前記一時的支持体は少なくとも1つの平面を有し、前記所定領域は前記一時的支持体の平面上に位置する;
(3)工程(1)において表面の全体又は一部に付着させた第1成分を有するマイクロカプセルを、第2の剤でコーティングされた所定領域に配置し、それにより、マイクロカプセルの表面の第1成分が、所定領域で第2成分と接触して、粘着性作用を生じさせ、それにより、マイクロカプセルを第1の層構造にアセンブルさせる(付着させる)工程、第1の層構造はシート状の構造である;
場合により、この方法は、以下の工程をさらに含む:
(4)前工程で形成された構造上に第2の薬剤をコーティングする工程;
(5)工程(1)で表面の全部又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、前工程で作製した構造体上に置き、それにより、マイクロカプセル表面の第1成分が、前工程で生成された構造上の第2成分と接触して、それにより、マイクロカプセルを前工程で生成された構造上の別の層構造にアセンブルされる(付着される);そして
(6)場合により、工程(4)及び(5)を1回以上、例えば、少なくとも1回、少なくとも2回、少なくとも3回、少なくとも4回、少なくとも5回、少なくとも10回、少なくとも15回、少なくとも20回、少なくとも30回、少なくとも40回、少なくとも50回、少なくとも100回、少なくとも200回、少なくとも500回、又はそれ以上で反復する工程
を含み、それにより、平面上のシート状生物学的構築物を得ることを含み、
場合により、この方法は、湾曲したシート状の生物学的構築物を得るために、平面状のシート状生物学的構築物を曲げる工程をさらに含む。
(1)3Dバイオプリンタの第1のインクカートリッジにおいて表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを提供し、3Dバイオプリンタの第2のインクカートリッジに第2成分を含む第2の薬剤を提供する工程であって、ここで、第1成分と第2成分とが接触しているときに付着作用を達成するために粘着性作用を生じさせることができ、
(2)3Dバイオプリンタの第2のインクカートリッジに接続した第2のプリンタヘッドを介して、プリンティングプラットフォームの所定領域に第2の薬剤をプリンティングする工程;
(3)マイクロカプセルの表面の第1成分が、所定領域の第2成分と接触するように、3Dプリンタの第1のプリンタヘッドを介して、工程(2)で第2剤がプリントされた所定領域に工程(1)でマイクロカプセルをプリントし、粘着作用を生じさせ、それにより、第1の層構造にマイクロカプセルをアセンブルする(付着させる)工程;
場合により、該方法は、以下の工程をさらに含む:
(4)前工程で形成された構造上に第2の薬剤を第2のプリンタヘッドを介してプリントする工程;
(5)マイクロカプセルの表面上の第1成分が、前工程で生成された構造上の第2成分と接触するように、第1のプリンタヘッドを介して、前工程で生成された構造上に工程(1)のマイクロカプセルをプリントし、粘性作用を生じさせ、それにより、前工程で生成された構造上の別の層構造にマイクロカプセルをアセンブルする(付着させる)工程;そして
(6)場合により、工程(4)及び(5)を1回以上、例えば、少なくとも1回、少なくとも2回、少なくとも3回、少なくとも4回、少なくとも5回、少なくとも10回、少なくとも15回、少なくとも20回、少なくとも30回、少なくとも40回、少なくとも50回、少なくとも100回、少なくとも200回、少なくとも500回、又はそれ以上で反復する工程
を含み、それにより、シート状生物学的構築物を得る。
(1)3Dバイオプリンタの第1のインクカートリッジにおいて表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを提供し、3Dバイオプリンタの第2のインクカートリッジに第2成分を含む第2の薬剤を提供する工程であって、ここで、第1成分と第2成分とが接触しているときに付着作用を達成するために粘着性作用を生じさせることができ、
(2)3Dバイオプリンタの第2のインクカートリッジに接続した第2のプリンタヘッドを介して、プリンティングプラットフォームの所定領域に第2の薬剤をプリンティングする工程;
(3)マイクロカプセルの表面の第1成分が、所定領域の第2成分と接触するように、3Dプリンタの第1のプリンタヘッドを介して、工程(2)で第2剤がプリントされた所定領域に工程(1)でマイクロカプセルをプリントし、粘着作用を生じさせ、それにより、第1の層構造にマイクロカプセルをアセンブルする(付着させる)工程;
場合により、該方法は、以下の工程をさらに含む:
(4)前工程で形成された構造上に第2の薬剤を第2のプリンタヘッドを介してプリントする工程;
(5)マイクロカプセルの表面上の第1成分が、前工程で生成された構造上の第2成分と接触するように、第1のプリンタヘッドを介して、前工程で生成された構造上に工程(1)のマイクロカプセルをプリントし、粘性作用を生じさせ、それにより、前工程で生成された構造上の別の層構造にマイクロカプセルをアセンブルする(付着させる)工程;そして
(6)場合により、工程(4)及び(5)を1回以上、例えば、少なくとも1回、少なくとも2回、少なくとも3回、少なくとも4回、少なくとも5回、少なくとも10回、少なくとも15回、少なくとも20回、少なくとも30回、少なくとも40回、少なくとも50回、少なくとも100回、少なくとも200回、少なくとも500回、又はそれ以上で反復する工程
を含み、それにより、シート状生物学的構築物を得る。
(I)方法3においてシート状生物学的構築物を調製する方法に従ってシート状生物学的構築物を調製する工程;そして
(II)固体支持体を調製するための材料(例えば、生体適合性材料)を提供し、及びシート状生物学的構築物上にシート状固体支持体を調製する工程。
(I)方法3のシート状生物学的構築物を調製する方法に従ってシート状生物学的構築物を調製する工程;
(II)工程(I)で調製されたシート状生物学的構築物を曲げ、及び/又はシート状生物学的構築物のエッジを付着して管状生物学的構築物を得る工程;そして
(III)管状生物学的構築物を管状固体支持体の内壁に付着させる工程。
(I)方法1又は方法2において管状生物学的構築物を調製する方法に従って調製された管状生物学的構築物を調製する工程;
方法3のシート状生物学的構築物の調製方法に従ってシート状生物学的構築物を調製し;次に、シート状の生物学的構築物を曲げ、及び/又はシート状生物学的構築物のエッジを付着させて管状生物学的構築物を得る工程;そして
(II)固体支持体を調製するための材料(例えば、生体適合性材料)を提供し、及び管状生物学的構築物の外壁上に管状固体支持体を調製する工程。
1)医療用付着剤が固化するまで、生物学的構築物の表面に医療用付着剤の層を吹き付ける工程;
2)医療用付着剤を噴霧した生物学的構築物の表面に細胞培養培地を滴下し、培地を均一に塗抹する工程;
3)医療用付着剤を再び噴霧する工程、ここで、医療用付着剤は、培地中のアニオンの作用下で急速に凝固する;
4)任意に、工程2)及び3)を繰り返す工程。
(1)表面の全体又は一部に付着した第1成分を有する1つ以上のマイクロカプセルを提供する工程;いくつかの好ましい実施形態では、第1成分は第1の薬剤に含まれる;
(2)固体支持体を提供し、固体支持体の表面の所定領域に第2成分を含む第2の薬剤をコーティングする工程、ここで、第1成分及び第2成分が互いに接触している場合に、粘着性作用は、付着作用を達成するために生じされ得る。
(3)工程(1)において表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを第2剤で被覆された所定領域に配置し、それにより、マイクロカプセルの表面の第1成分が、粘着性作用を生じさせ、それによりマイクロカプセルを固体支持体の表面上の第1の層構造にアセンブルさせる(付着させる)工程;
場合により、この方法は、以下の工程をさらに含む:
(4)前工程で形成された構造上に第2の薬剤をコーティングする工程;
(5)工程(1)で表面の全部又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、前工程で作製した構造体上に配置し、それにより、マイクロカプセルの表面の第1成分は、前工程で生成した構造物上で第2成分と接触させて、それにより、マイクロカプセルを前工程で生成された構造上の別の層構造にアセンブルさせる(付着させる);そして
(6)場合により、工程(4)及び(5)を1回以上、例えば、少なくとも1回、少なくとも2回、少なくとも3回、少なくとも4回、少なくとも5回、少なくとも10回、少なくとも15回、少なくとも20回、少なくとも30回、少なくとも40回、少なくとも50回、少なくとも100回、少なくとも200回、少なくとも500回、又はそれ以上で反復する工程
を含み、それにより、人工組織前駆体を得る。
(1)3Dバイオプリンタの第1のインクカートリッジにおいて表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを提供し、3Dバイオプリンタの第2のインクカートリッジに第2成分を含む第2の薬剤を提供する工程であって、ここで、第1成分と第2成分とが接触しているときに付着作用を達成するために粘着性作用を生じさせることができ、
(2)3Dバイオプリンタの第2のインクカートリッジに接続した第2のプリンタヘッドを介して、固相支持体の所定領域に第2の薬剤をプリンティングする工程;
(3)マイクロカプセルの表面の第1成分が、所定領域の第2成分と接触するように、3Dプリンタの第1のプリンタヘッドを介して、工程(2)で第2剤がプリントされた所定領域に工程(1)でマイクロカプセルをプリントし、粘着作用を生じさせ、それにより、第1の層構造にマイクロカプセルをアセンブルする(付着させる)工程;
場合により、該方法は、以下の工程をさらに含む:
(4)前工程で形成された構造上に第2の薬剤を第2のプリンタヘッドを介してプリントする工程;
(5)マイクロカプセルの表面上の第1成分が、前工程で生成された構造上の第2成分と接触するように、第1のプリンタヘッドを介して、前工程で生成された構造上に工程(1)のマイクロカプセルをプリントし、粘性作用を生じさせ、それにより、前工程で生成された構造上の別の層構造にマイクロカプセルをアセンブルする(付着させる)工程;そして
(6)場合により、工程(4)及び(5)を1回以上、例えば、少なくとも1回、少なくとも2回、少なくとも3回、少なくとも4回、少なくとも5回、少なくとも10回、少なくとも15回、少なくとも20回、少なくとも30回、少なくとも40回、少なくとも50回、少なくとも100回、少なくとも200回、少なくとも500回、又はそれ以上で反復する工程
を含み、それにより、人工組織前駆体を得る。
(1)フィブリノーゲン及びトロンビン;
(2)アルギン酸塩(例えば、アルギン酸ナトリウム)又は酸化アルギン酸塩(例えば、酸化アルギン酸ナトリウム)、及びCa2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む物質(例えば、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む溶液又は半固体(例えば、ゲル));
(3)マレイミド基含有分子(例えば、マレイミド基を含むポリエチレングリコール(MAL−PEG))及び遊離チオール基含有分子(例えば、遊離チオール基を含むポリエチレングリコール(PEG−SH));
(4)アニオン含有物質(例えば、アニオンを含む溶液又は半固体(例えば、ゲル))及びα−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート、n−オクチルα−シアノアクリレート);
(5)フィブリノーゲン及びα−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート、n−オクチルα−シアノアクリレート);
(6)血清アルブミン(例えば、ウシ血清アルブミン)及びグルタルアルデヒド;
(7)カルバメート基(−NHCOO−)を含むか、又はイソシアネート基(−NCO)を含む分子(例えば、カルバメート基を含むポリエチレングリコール、又はイソシアネート基を含むポリエチレングリコール)及び反応性水素を含む分子(例えば、カルボキシル含有ポリエチレングリコール);
(8)ゼラチン−レゾルシノール及びグルタルアルデヒド;
(9)カルボジイミド架橋ゼラチン及びポリ−L−グルタミン酸(PLGA);そして
(10)アミノ化ゼラチン及び多糖アルデヒド。
(1)フィブリノーゲン及びトロンビン;
(2)アルギン酸塩(例えば、アルギン酸ナトリウム)又は酸化アルギン酸塩(例えば、酸化アルギン酸ナトリウム)、及びCa2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む物質(例えば、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む溶液又は半固体(例えば、ゲル));
(3)マレイミド基含有分子(例えば、マレイミド基を含むポリエチレングリコール(MAL−PEG))及び遊離チオール基含有分子(例えば、遊離チオール基を含むポリエチレングリコール(PEG−SH));
(4)アニオン含有物質(例えば、アニオンを含む溶液又は半固体(例えば、ゲル))及びα−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート、n−オクチルα−シアノアクリレート);
(5)フィブリノーゲン及びα−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート、n−オクチルα−シアノアクリレート);
(6)血清アルブミン(例えば、ウシ血清アルブミン)及びグルタルアルデヒド;
(7)カルバメート基(−NHCOO−)を含むか、又はイソシアネート基(−NCO)を含む分子(例えば、カルバメート基を含むポリエチレングリコール、又はイソシアネート基を含むポリエチレングリコール)及び反応性水素を含む分子(例えば、カルボキシル含有ポリエチレングリコール);
(8)ゼラチン−レゾルシノール及びグルタルアルデヒド;
(9)カルボジイミド架橋ゼラチン及びポリ−L−グルタミン酸(PLGA);そして
(10)アミノ化ゼラチン及び多糖アルデヒド。
従来技術と比較して、本発明の技術的解決法は、以下の1つ以上の有利な効果を有する:
1.本発明の人工組織前駆体では、マイクロカプセル中の細胞の数は一般に一貫しており、マイクロカプセルは、細胞の分化及び/又は増殖のための適切な微環境を提供し、その分化能を維持し、構築された組織内の細胞はより均一に分布し、完全な構造及び機能を有する組織の形成を促進する。
2.本発明の人工組織前駆体は、安定した構造を形成し、その中に封入された細胞が特定の位置に留まることができる。マイクロカプセルは、細胞に機械的保護を提供し、その結果、細胞は、人工組織前駆体の調製中及び容易に損傷又は脱落することなく体内への移植後に、内腔内の体液の衝撃に耐えることができる。
3.本発明の人工組織では、細胞は均一に分布しており、人工組織は完全な構造及び機能を形成しやすい。
4.いくつかの好ましい実施形態では、脂肪由来間葉系幹細胞を用いて人工組織前駆体を調製する。脂肪由来の間葉系幹細胞は容易に入手可能であり、非常に安全である。脂肪由来の間葉系幹細胞はインビトロ及びインビボ研究で使用されているので、脂肪由来間葉系幹細胞の腫瘍形成性に関する報告は見出されていない。
5.本発明の人工組織前駆体は、個人化された調製を達成するために患者の要求に従ってカスタマイズすることができる。
6.本発明の人工組織前駆体では、固体支持体は、相対運動なしに、マイクロカプセル又はマイクロカプセルからなる生物学的構築物に密着している。
本発明は、ここで、本発明を説明することを目的とするが、本発明を限定するものではない以下の実施例を参照して説明する。
1.脂肪由来間葉系幹細胞の回収と培養
(1)脂肪由来間葉系幹細胞の回収:アカゲザルを動物モデルとして用い、脂肪組織をマウスから切り取り、50mL遠心チューブに入れた。脂肪組織を膵酵素で消化し、遠心分離して脂肪由来の間葉系幹細胞を回収した。
(2)無血清ロンザ培地で培養して脂肪由来間葉系幹細胞を増幅する。初代培養で得られた第4世代の細胞の顕微鏡写真を図6に示し、この図から分かるように、細胞の形態は均一であり、細胞の増殖状態は良好であった。遠心分離により細胞を回収した。
ウシI型コラーゲンを溶液の調製に用いた。
(1)100mLのビーカー及び撹拌磁石を高温で滅菌処理した。
(2)容器の外面を滅菌し、容器を生物学的に安全なキャビネットに入れた。
(3)Co60照射で滅菌した固体コラーゲン0.5gをビーカーに入れ、滅菌脱イオン水(0.22μmフィルターでろ過したもの)の25mLをビーカーに添加した。
(4)固体コラーゲンをマグネチックスターラーで攪拌して水に浸した。
(5)酢酸溶液(0.22μmフィルターでろ過)をpH=3に滴下した。そして、
(6)固体コラーゲンが完全に溶解するまで溶液を攪拌し、4℃で保存した。
注:原材料が固体コラーゲンであった場合、上記の手順に従うことができた。原材料がコラーゲン溶液であれば、溶液は直接使用することも、希釈して使用することもできる。
実際に使用されている濃度に応じて、コラーゲン溶液を超純水(0.22μmフィルターでろ過したもの)で希釈することができる。
(1)U底を有する超疎水性ウェルプレートの調製:U底を有するウェルプレートを超清浄室にてアルコールで洗浄した後、過酸化水素/濃硫酸溶液(30%v/v)、H2O2:H2SO4=1:3)で80℃にて1時間処理した。U底を有するヒドロキシル化したウェルプレートを1%の1H,1H,2H,2H−ペルフルオロデシルトリエトキシシラン(Sigmaから購入)の溶液に入れ、次いで100℃のオーブン中で4時間加熱して珪化させた。最後に、U底を有するウェルプレートを洗浄し、乾燥させた。
(2)種菌を含むコラーゲン溶液の調製:NaOH溶液(4mol/L)の45μLをI型コラーゲンI(4mg/mL)の1mLと混合して、pH=7のコラーゲン溶液を調製した。アカゲザル脂肪由来の間葉系幹細胞と混合して細胞懸濁液(総細胞濃度2×107細胞/mL)を形成させた。
(3)ポリリジン溶液の調製:ポリリジン(Sigmaより購入、数平均分子量(Mn)150,000〜300,000)を、pH7.2のDMEM高グルコース培地に溶解し、濃度が1重量%であるポリリジン溶液を得た。
(4)コラーゲンの滴下(コア構造の形成):ナノリットルレベルの液体を吸入・吐出できる電子吸引装置を用いて、シード細胞を含むコラーゲン溶液0.1μLを正確に吸引して超疎水性ウェルに滴下した。工程(1)で調製したUボトムプレートを用いて液滴を形成させ、液滴を37℃の一定温度で30分間保持して成形させた。オプションの電子式吸引装置は、Eppendorf Xplorer0.5−10μL又はTransferpette Electronic0.5−10μLであり、装置はその分離機能に依存して0.1μLの最小容量を有していた。又はSGEの1μL又は0.5μLのオートサンプラーを使用して、0.1μLの液体滴定を10回又は5回実施した。特に、精度を向上させるために、滴定のために特別な円錐針を使用することができる。
(5)ポリリジン溶液の滴下(シェル構造の形成):吸引端を置換した後、工程(3)で調製したポリリジン溶液0.5μLを正確に抜き取り、10分間反応させて、図7に示す形態のアカゲザル脂肪由来間葉系幹細胞を含むバイオブロックを形成させた。図8は、バイオ共鳴顕微鏡法により採取したアカゲザル由来の間葉系幹細胞を含むバイオブロックの写真であって、前記バイオブロックのシェルを代表する緑色の蛍光及び前記脂肪由来の間葉系幹細胞を表す赤色蛍光を含む。
1.準備プロセス:
(1)第1の薬剤としてのフィブリノーゲン溶液(5wt%)の調製:フィブリノーゲン0.1gを秤量し、2mLの生理食塩水に溶解した(十分な溶解のために37℃の水浴中で十分に加温したもの)。その後、フィブリノーゲン溶液を0.22μmフィルターでろ過して滅菌した。ろ過されたフィブリノーゲン溶液は、将来の使用のために貯蔵された。
(2)第2の薬剤としてのトロンビン溶液(2000U/mL)の調製:0.0011gのCaCl2を秤量し、2000Uトロンビン(Ca2+濃度は10mmol/mL)に加え、次いで1mLの生理食塩水を添加して溶解した。続いて、トロンビン溶液を滅菌のために0.22μmフィルターで濾過し、将来の使用のために貯蔵した。
(3)アカゲザル脂肪由来の間葉系幹細胞を含む実施例1で調製したバイオブロックを、5%フィブリノーゲン溶液(第1剤として使用)に5分間浸漬し、フィブリノーゲン分子を表面に付着/バイオブロックした(必要に応じて、アセンブリを容易にするために穏やかな振盪を行うことができる)。この溶液にH−DMEM培地を加え、バイオブロックをさらに5分間浸漬して、未結合フィブリノーゲン分子をバイオブロックの表面から除去し、浸漬したバイオブロックを得た。
(4)REVOTEK血管バイオプリンタを用いて、厚さ1mmのゼラチン層を4℃で回転棒にプリントした。ゼラチンが固化した後、トロンビン溶液(第2の薬剤として使用)をゼラチンの表面に噴霧した。
(5)バイオブロックをゼラチンの表面にプリントした。トロンビンの作用下でバイオブロック表面のフィブリノーゲン同士を架橋させることにより、バイオブロックを一体化して側壁に開口部を有さない丸い管状の生物学的構築物を形成させ、構築物の長さは20mm、直径は6mm、壁厚は1mmであった。
(6)回転ロッドを37℃に加熱し、管状構造物を回転ロッドから除去した。
(7)管状生物学的構築物の外壁に医療用付着剤の層(医療用ECタイプのバイユン医療用付着剤)をスプレーした。膨張したポリテトラフルオロエチレン管状固体支持体を管状生物学的構築物の外側にスリーブ状にし、生物学的構築物の外壁を医療用付着剤を介して伸展したポリテトラフルオロエチレン管状固体支持体の内壁に付着させて、図9に示される形態を有する人工血管前駆体を得た。
工程(1):アカゲザルを腹腔大動脈を露出させるように開腹手術に付した。
工程(2):腹部大動脈を切断し、2つの切断端をそれぞれ人工血管前駆体の端部で縫合した。
工程(3):動物の腹部の傷を縫合した。
手術5日後に人工血管を取り出した。図10Aは人工血管の形態を示している。図10Bは管状支持体を除去して得られた血管組織を示し、図10Cは組織の縦断面の形態を示した。組織をHE染色し、免疫組織化学的に染色し正常血管と比較し、その結果を図11〜図13に示した。
1.管状ポリカプロラクトン固体支持体の調製
工程(1):ポリカプロラクトンを秤量し、テトラヒドロフランに溶解して濃度2wt%の調製液を調製した。
工程(2):人工血管型を調製液に浸漬してゆっくりと取り出した。溶媒を蒸発させた後、管壁の厚さが0.5mmの管状ポリカプロラクトン固体支持体が得られるまで手順を繰り返した。
工程(3):管状ポリカプロラクトン固体支持体を金型から取り出し、超純水ですすいだ。
工程(4):管状ポリカプロラクトン固体支持体を乾燥させ、所望の長さに切断し、そして将来の使用のためにエチレンオキシドで滅菌した。
実施例1で調製したアカゲザル由来の間葉系幹細胞を含むバイオブロックと管状ポリカプロラクトン固体支持体を用いて、実施例2の工程に従い、3Dプリンタで側壁に開口のない円形管状の生体構造物を作製した。管状ポリカプロラクトン固体支持体を、管状生物学的構築物の外側にスリーブ状にした。医療用付着剤(医療用ECタイプのバイユン(Baiyun)医療用付着剤)を用いて、生体構造の外壁を管状ポリカプロラクトン固体支持体の内壁に付着させて人工血管前駆体を得た。
実施例3で調製した人工血管前駆体をアカゲザルに移植し、6日後に形成された人工血管の形態及び血流方向を調べ、その結果を図14に示した。図14Aは、超音波検査の結果を示す。この図から分かるように、人工血管の内腔には障害はなかった。図14Bはカラードップラーイメージングの結果を示し、その結果、人工血管の両側の血流が同じ方向であり、その血管が妨げられていないことが証明された。
1.準備プロセス:
(1)実施例1のバイオブロックを5%フィブリノーゲン溶液に5分間浸漬し、次いでフィブリノーゲン溶液を除去し、H−DMEM培地を添加し、バイオブロックをさらに5分間浸漬した。
(2)管状固体支持体として、長さ1cmの発泡ポリテトラフルオロエチレン人工血管(ゴア人工血管、モデル:S0604、シリアル番号:3425)を用い、医療用付着剤バイユン医療用付着剤)を延伸し、延伸ポリテトラフルオロエチレン血管の内壁に均一にコーティングした。
(3)バイオブロックを展開ポリテトラフルオロエチレン製血管の内壁に1枚ずつ貼り付け、バイオブロックと発泡ポリテトラフルオロエチレン製血管とを医療用付着剤の作用により強固に付着させ、人工血管前駆体を得た。
人工血管前駆体をアカゲザルに移植し、14日後に採取し、免疫組織染色法を用いて検査した。結果を図16A及び図16Bに示した(図中の尺度は50μmであった)。図16Aは、α−SMA染色の結果を示している。図中の太い矢印で示すように、脂肪由来の間葉系幹細胞は人工血管の平滑筋細胞に分化していた。図16Bは、CD31染色の結果を示す。図中の細い矢印で示すように、脂肪由来の間葉系幹細胞は人工血管の内皮細胞に分化していた。
(1)U底を有する超疎水性ウェルプレートの調製:U底を有するウェルプレートを超清浄室でアルコールで洗浄した後、過酸化水素/濃硫酸溶液(30%v/v)、H2O2:H2SO4=1:3)で80℃で1時間処理した。U底を有するヒドロキシル化したウェルプレートを1%の1H,1H,2H,2H−ペルフルオロデシルトリエトキシシラン(Sigmaから購入)の溶液に入れ、次いで100℃のオーブン中で4時間加熱して珪化させた。最後に、U底を有するウェルプレートを洗浄し、風乾した。
(2)種菌を含むコラーゲン溶液の調製:NaOH溶液(4mol/L)45μLをI型コラーゲンI(4mg/mL)1mLと混合して、pH=7のコラーゲン溶液を調製した。実施例1で採取したアカゲザル由来の間葉系幹細胞を混合して細胞懸濁液(総細胞濃度2×107個/mL)を調製した。
(3)コラーゲンの脱落(コア構造の形成):ナノリットルレベルの液体を吸引して排出する電子吸引装置を用いて、種菌を含むコラーゲン溶液0.1μLを正確に吸引して超疎水性ウェルに滴下した(1)で調製したU底プレートを用いて液滴を形成させ、37℃の一定温度で30分間保温して、アカゲザル由来間葉系幹細胞を含むマイクロカプセルを得た。
1.準備プロセス:
(1)実施例5のマイクロカプセルを5%フィブリノーゲン溶液に5分間浸漬した後、フィブリノーゲン溶液を除去し、H−DMEM培地を加え、さらに5分間浸漬した。
(2)管状固体支持体として、長さ1cmの発泡ポリテトラフルオロエチレン人工血管(ゴア人工血管、モデル:S0604、シリアル番号:3425)を用い、医療用付着剤バイユン医療用付着剤)を延伸し、延伸ポリテトラフルオロエチレン血管の内壁に均一にコーティングした。
(3)発泡ポリテトラフルオロエチレン製血管の内壁にマイクロカプセルを1枚ずつ貼り付け、医療用付着剤の作用でマイクロカプセルと発泡ポリテトラフルオロエチレン製血管とを強固に付着させて人工血管前駆体を得た。
人工血管前駆体をアカゲザルに移植し、14日後に採取した。得られた人工血管の断面図を図17Aに示す。検査のために免疫組織化学染色方法を用いた。結果を図17B及び図17Cに示す(図中の尺度は50μmであった)。図17Bは、α−SMA染色の結果を示す。図中の太い矢印で示すように、脂肪由来の間葉系幹細胞は人工血管の平滑筋細胞に分化していた。図17CはCD31染色の結果を示す。図中の細い矢印で示すように、脂肪由来の間葉系幹細胞は人工血管の内皮細胞に分化していた。
(1)実施例1のバイオブロックを5%フィブリノーゲン溶液に5分間浸漬し、次いでフィブリノーゲン溶液を除去し、H−DMEM培地を添加し、バイオブロックをさらに5分間浸漬した。
(2)外径4mmの回転棒を用意し、工程(1)で作製したバイオブロックを回転棒に1枚ずつプリントして管状の生体構造物を作製した。
(3)8μLの医療用付着剤を吸引し、管状生物構造物の外壁に均一にコーティングした。
(4)長さ1cm、内径6mmの発泡ポリテトラフルオロエチレン製人工血管を用意し、医療用付着剤8μLを吸引し、人工血管の内壁に均一に塗布した。人工血管は、管状の生物学的構築物の上から左から右にスリーブされた。人工血管の内壁にコーティングされた医療用付着剤をアニオンの作用により硬化させ、人工血管と管状生物構造物とを付着させて人工血管前駆体を形成させた。
実施例1で調製した分解性ポリ乳酸管状支持体及びバイオブロックを用いて、人工血管前駆体を調製した。図19は調製プロセスを示している。図19A及び図19Bは、電界紡糸プロセスによってポリ乳酸を基材とした管状固体支持体を示している。図19Cは、ポリ乳酸管状支持体を切断し、管状支持体の一方の側に医療用付着剤を滴下し、管状支持体の他方側の対応する位置にバイオブロックを配置する手順を示した。図19Dは、医療用付着剤が管壁を貫通してバイオブロックと内壁が付着して人工血管前駆体を得ることができることを示した。上記の手順は、観察と撮影の便宜のためだけであった。実際の調製プロセスでは、医療用付着剤がポリ乳酸管状固体支持体の外壁上に滴下され、医療用付着剤が内壁を貫通する。医療用付着剤は、電気紡糸されたポリ乳酸の壁を通り抜けることができ、それによってバイオブロックが固定化された。上記の結果は、一方では、ポリ乳酸を固体支持体として使用することができ、一方、医療用付着剤は、多孔質構造の透過性のために、電気紡糸によって得られた固体支持体の壁を貫通することができた固体支持体の一方の面に医療用付着剤を滴下し、他方の側にバイオブロックを配置して、バイオブロックを固定化して人工組織前駆体を得ることができる。
1.マウス骨髄間葉系幹細胞を含むバイオブロックの調製
コラーゲンを含むコア及びアルギン酸ナトリウムを含むシェルを有するマウス骨髄間葉系幹細胞を含むバイオブロックを調製した。バイオブロックを調製する方法は、中国特許出願第201610211570.4号に記載されている。
2.管状生物学的構築物の調製
(1)フィブリノーゲン溶液(5wt%)の調製:フィブリノーゲン0.1gを秤量し、2mlの生理食塩水に溶解した(必要に応じて十分に溶解するために37℃の水浴中で加温したもの)。その後、フィブリノーゲン溶液を0.22μmフィルターでろ過して滅菌した。濾過されたフィブリノーゲン溶液(第1の薬剤として使用される)は、将来の使用のために貯蔵された。
(2)トロンビン溶液(2000U/mL)の調製:0.0011gのCaCl2を秤量し、2000Uトロンビン(Ca2+濃度10mmol/mL)に加え、生理食塩水1mLを加えて溶解させた;続いて、トロンビン溶液を滅菌のために0.22μmフィルターで濾過し、将来の使用のために貯蔵した。
(3)ゼラチン溶液(10wt%)の調製ゼラチン1gを秤量し、10mLの滅菌水に加え、37℃の水浴に完全に溶解させた。ゼラチン溶液を滅菌のため0.22μmフィルターでろ過し、将来の使用のために貯蔵した。
(4)トロンビン溶液1mLとゼラチン溶液1mLとを均一に混合し、その後の使用のために37℃の水浴に入れ、第2剤とした。
(5)バイオブロックを第1剤に10分間浸漬し、フィブリノーゲン分子を表面に付着・集合させた(必要に応じて、穏やかに振盪して組立を容易にする)。次いで、バイオブロックを細胞培養培地に5分間浸漬して、表面上の未結合フィブリノーゲン分子を洗い流して、浸漬したバイオブロックを得た。
(6)フィブリノーゲンとトロンビンとの凝固反応を利用して所定の立体構造を形成することにより、バイオブロックを連結して組み立てた。構築工程は次のとおりである。
a.0℃の氷浴(必要に応じて管状構造を構築するための補助材料としてゼラチン溶液を環の外側に充填することができる)中のガラスプレート中に第2の薬剤で環状パターンを描いた。
b.バイオブロックを環状パターンに沿って配置し、3秒間静置して、バイオブロック(第1の層)によって形成された環状構造を形成した。
c.第2剤を環状構造の上面に滴下して環状パターンを描画した。
d.バイオブロックを環状パターンに沿って配置し、3秒間静置して、バイオブロック(第2の層)によって形成された環状構造を形成した。
e.必要に応じて工程cdを繰り返して、異なる数の層を有する環状構造を形成し、バイオブロック、すなわち、側壁に開口のない丸い管状構造(必要であれば、補助材料を含む管状構造を配置することができる37℃の環境下でインキュベートし、補助物質を洗い流した)。
実施例10〜14では、アカゲザルを動物モデルとして使用し、バイオブロック及び発泡ポリテトラフルオロエチレンを含む、実施例2で調製した人工血管前駆体(血管インプラントとして使用した)をアカゲザルに移植し、状況を移植後に評価した。
11頭のアカゲザルはNO.1〜NO.11と番号が付けられ、NO.11は対照群であった。人工血管前駆体及び自己腹部大動脈はNO.1〜NO.10であった。10頭のアカゲザルに血管吻合を施した。
アカゲザルの人工血管前駆体及び自己腹部大動脈に血管吻合を施した。アカゲザルは4群に分けられ、アカゲザルの血管インプラントと自己由来血管との間の接合部は、移植後7、14、21及び28日にそれぞれ採取された。接合部の組織構造をHE染色法を用いて観察し、CD31及びα−SMAの発現をそれぞれ免疫組織化学染色法を用いて検出した。
アカゲザルの人工血管前駆体及び自己腹部大動脈に血管吻合を施した。アカゲザルを4つの群に分け、移植後5、7、21及び28日目に血管インプラントを採取した。シリウスレッド染色法を用いて血管コラーゲンを染色し、その結果を図27に示し、図の尺度は100μmであった。結果は、コラーゲンの発現が移植の5日後に現れたことを示した。時間が増加するにつれて、発現したコラーゲンは徐々に増加し、剥離して正常な血管のようなコラーゲン構造を形成し始めた。
アカゲザルの人工血管前駆体及び自己腹部大動脈に血管吻合を施した。移植後5日目、18日目及び61日目に血管インプラントを検出し、その結果を図28に示す。1列目の画像に超音波検査の結果を示し、カラードプラ画像の結果は、2列目の写真に示されている。結果を以下を示す:血管インプラントの血管は塞がれておらず、血流は連続的であり、内腔の内面は血栓や異常増殖のない平滑であり、正常血管との接合部には狭窄は存在しなかった。
アカゲザルの人工血管前駆体及び自己腹部大動脈に血管吻合を施した。移植後19日目及び62日目に増大CTを用いて血管インプラントを検出し、結果を図29に示した。結果は、血管インプラントでは血流が妨げられることなくスムーズに流れたことを示している。
(1)市販の発泡ポリテトラフルオロエチレン製人工血管(肉厚0.56mm、内径8mm)を長さ4cm、幅1cmの略一定の曲率を有するシート状に切断し、図30Aに示すようなシート状の固体支持体;
(2)医療用付着剤の層(医療用ECタイプのバイユン医療用付着剤)をシート状固体支持体上に噴霧した;
(3)実施例1で調製したアカゲザル由来間葉系幹細胞を含むバイオブロックを5%フィブリノーゲン溶液に5分間浸漬した後、フィブリノーゲン溶液を除去した後、H−DMEM培地を添加し、バイオブロックをさらに5分間浸漬した。
(4)図30Bに示すように、3Dバイオプリンタを用いてシート状固体支持体を覆うように浸漬したバイオブロックを1枚ずつ医療用付着剤上にプリントし、血管パッチ前駆体を形成した。
(1)実施例3の方法に従って厚さ0.5mmの平板状のポリカプロラクトン固体支持体を作製し、長さ3.5cm、幅1cmの略長方形のシート状に切断し、図30Cに示す;
(2)医療用付着剤の層(医療用ECタイプの白雲医療用付着剤)をシート状固体支持体上に噴霧した;
(3)実施例5で調製したアカゲザル由来間葉系幹細胞を含むマイクロカプセルを3Dバイオプリンタを用いて1枚ずつプリントしてシート状固体支持体を覆うことにより血管パッチ前駆体を形成し、図30Dに示す。
アカゲザルを動物モデルとして使用し、実施例15及び16で調製した血管パッチ前駆細胞をインビボで移植した。アカゲザルの腹部大動脈に血管欠損が生じた後、血管パッチ前駆細胞を特定の血管欠損に応じて適切な長方形に切断し、血管パッチ前駆細胞を欠損部位に縫合した。
1.バイオブロックの調製
(1)U底を有する超疎水性ウェルプレートの調製:U底を有するウェルプレートを超清浄室でアルコールで洗浄した後、過酸化水素/濃硫酸溶液(30%v/v)、H2O2:H2SO4=1:3)で80℃で1時間処理した。U底を有するヒドロキシル化したウェルプレートを1%の1H,1H,2H,2H−ペルフルオロデシルトリエトキシシラン(Sigmaから購入)の溶液に入れ、次いで100℃のオーブン中で4時間加熱して珪化させた。最後に、U底を有するウェルプレートを洗浄し、風乾した。
(2)種菌を含むコラーゲン溶液の調製:NaOH溶液(4mol/L)の45μLをI型コラーゲンI(4mg/mL)の1mLと混合してpH=7のコラーゲン溶液を調製した。この溶液を、遠心分離により得られたアカゲザル脂肪由来間葉系幹細胞と混合し、細胞懸濁液(総細胞濃度は、2細胞×107/mLである)を形成させた。
(3)ポリリジン溶液の調製:ポリリジン(Sigmaより購入、数平均分子量(Mn)150,000〜300,000)をpH7.2のH−DMEM培地に溶解し、濃度が1重量%であるポリリジン溶液を得た。
(4)アルギン酸ナトリウム溶液の調製:アルギン酸ナトリウム(Sigma社より購入)をpH7.2のH−DMEM培地に溶解し、濃度が1重量%であるアルギン酸ナトリウム溶液を調製した。
(5)コラーゲンの脱落(コア構造の形成):ナノリットルレベルの液体を吸引吐出できる電子吸引装置を用いて、0.1μLのI型コラーゲン溶液を正確に吸引して、工程(1)で調製したU底を有する超疎水性ウェルプレートに滴下し、液滴を形成させた。液滴を37℃の一定温度で30分間保持して成形した。
(6)ポリリジン溶液の滴下:吸引端を置換した後、工程(3)で調製したポリリジン溶液0.5μLを正確に抜き取り、次に、超疎水性ウェルプレートの中心位置において、工程(5)で形成されたコアの表面上に滴下し、10分間反応させて、バイオブロックの第1シェルを形成させた。
(7)工程(6)の生成物をH−DMEM培地で2回リンスした。
(8)アルギン酸ナトリウム溶液を滴下:吸引端を置換後、工程(4)で調製したポリリジン溶液の0.5μLを正確に抜き取り、次に、工程(6)で形成したシェルの表面に10分間反応させてバイオブロックの第2のシェルを形成させ、2つのシェルを有するバイオブロックを得た。調製したバイオブロックの直径は約300μmであった。必要に応じて、調製したバイオブロックをPBSに入れて、バイオブロックの懸濁液を形成させた。
Piuma Nanoindenterを用いてバイオブロックの弾性係数を測定した。
2.1 試験試料の調製
(1)バイオブロックの懸濁液1mLをプラスチック製培養皿の中央にピペットで引き出し、滴下した。
(2)10分間放置した後、液体を排出し、培養皿の底にバイオブロックが吸着していることが分かった。
(3)プローブが徐々にバイオブロックの表面に近づくように、ナノインデンターのプラットフォームを動かした。プローブがバイオブロックに近接しているときに、プローブとバイオブロックとの間に水滴が引き込まれ、バイオブロックが正常な生理学的状態にあることを確実した。
(4)このとき、バイオブロックは底面に吸着して移動できず、測定が可能であった(図34参照)。
図35は、バイオブロックの有効ヤング率が24.77kPaである、本実施例で製造されたバイオブロックの応力−凹み曲線を示している。
1.コラーゲン溶液の調製(溶液A)
ウシI型コラーゲンは、バイオインキの担体としてのコラーゲン溶液の調製に用いられた。
(1)100mLのビーカー及び撹拌磁石を高温で滅菌処理した。
(2)容器の外面を滅菌し、容器を生物学的に安全なキャビネットに入れた。
(3)Co60照射で滅菌した固体コラーゲン0.5gをビーカーに入れ、滅菌脱イオン水(0.22μmフィルターでろ過したもの)25mLをビーカーに添加した。
(4)固体コラーゲンをマグネチックスターラーで攪拌して水に浸した。
(5)酢酸溶液(0.22μmフィルターでろ過)をpH=3に滴下した。
(6)固体コラーゲンが完全に溶解するまで溶液を撹拌した。
(7)に示すように、コラーゲン溶液の濃度を調整した。特別な必要がなければ、コラーゲン溶液の濃度は約2重量%であった。コラーゲン溶液を標識し、溶液Aと命名し、4℃で保存した。
2.1 準備
(1)溶液Aを1:1の体積比でバイオブロックと混合してバイオインクA(バイオインク)を調製し、このバイオインクAをプリントインクカートリッジAに充填し、インクカートリッジの温度を4℃に保ち、
(2)プリント用インクカートリッジBに市販の白雲医療用付着剤をインクBとして充填し、インクカートリッジの温度を室温に保ち、
(3)インクカートリッジA、Bを対応するプリンタヘッドに接続し、
(4)患者の画像検査の結果に基づいて、血管の必要径を求め、対応する回転装置を選択して設置した。
(5)3次元バイオプリンタの自己診断プログラムの起動、プリンタヘッドの高さの測定、3次元バイオプリンタの各種メンバーの正常動作の確認を行った。
(6)直径、長さ、プリント順序、プリントされた厚さ、回転装置の温度、プリンタヘッドの温度を含むパラメータがコンピュータワークステーションに設定された。
図36は、実施例で用いた3Dバイオプリンタの主要な構造を模式的に示している。
(1)3Dバイオプリンタの準備プログラムが開始された。
(2)プリンタヘッドAを回転させて、回転装置の回転ロッド上に長さ20mm、厚さ約1mmの管状の生体構造物を形成させた(図37に示される);
(3)プリンタヘッドBを作動させて、インクAから形成された生物学的構築物上にインクBを均一に噴霧した。
(4)サイズが一致するGore発泡ポリテトラフルオロエチレン人工血管を、管状の固体支持体として使用し、これを組み立てる管状の生物学的構築物の外面にスリーブを付け、次いで両者をインクB(医療用付着剤)を用いて人工血管前駆体を形成し(図38に示すように)、人工血管前駆体を回転ロッドから除去した。
3.1 手術手順
(1)ナイフが出血を止めて止めることができるので、高周波電気外科用ナイフが推奨されることにより、腹部の中心線に沿う5〜7cmの長手方向の皮膚切開が切断された。皮下組織及び筋層を腹膜まで分離した。腹腔に入って開口した後、小腸を静かにひっくり返し、脱水を避けるために生理食塩水で濡らしたガーゼで包んで腹部大動脈を露出させた。
(2)抗凝固のために0.5mg.kg−1のヘパリンナトリウムを静注した。
(3)2本の0−0縫合糸が動脈の下を通過し、一方は腸間膜動脈の下部付近にあり、他方は一般的な腸骨動脈の枝の近くにあり、血液を遮断するための結紮に用いられ、必要に応じて流した。
(4)動脈クリップを、腎下部腹部大動脈の血流を遮断するために使用し、2つの動脈クリップ間の距離は約3cmであり、その中央から約2cmの腹部大動脈を切断した。
(5)2cmの長さを有する人工血管前駆体を、アカゲザルの自己腹部大動脈に7−0のポリエチレン縫合糸でエンド・トゥ・エンド吻合して縫合した。
(6)大動脈の遠位端の動脈クリップを緩めて、人工血管前駆体の空気を空にした。
(7)大動脈の近位端の動脈クリップを緩め、縫合糸に造血がなくなるまで出血を防ぐために縫合糸を滅菌ガーゼで数分間圧迫した。
(8)遠位大動脈のパルスが検出された。パルスが正常であれば、移植は成功した。図39は、移植された人工血管前駆体を示した。
インビボ移植の170日後、血管インプラントをサンプリングした。インプラント内皮細胞及び平滑筋細胞の形成は、免疫蛍光法によって検出された。
Claims (37)
- 固体支持体及び複数のマイクロカプセルを含む人工組織前駆体であって、ここで、少なくとも1つのマイクロカプセルは固体支持体に結合され、マイクロカプセルは細胞及び細胞をカプセル化する生体適合性材料を含み、
好ましくは、人工組織前駆体は内腔(例えば、循環内腔、消化内腔、呼吸内腔、泌尿器内腔又は生殖器内腔)前駆体であり;
好ましくは、内腔は、上皮細胞(例えば、血管、食道、気管、胃、胆管、腸(小腸及び大腸を含み、例えば、十二指腸、空腸、回腸、盲腸(虫垂を含む)、上行結腸、右疝痛屈曲、横行結腸、左疝痛屈曲、下行結腸、S状結腸又は直腸など)、卵管、血管精管、尿管、膀胱又はリンパ管)を含む内腔であり;
好ましくは、人工組織前駆体は管状又はシート状であり;
好ましくは、複数のマイクロカプセルは1つ以上の生物学的構築物を形成し;
好ましくは、1つ以上の生物学的構築物は固体支持体に結合されている、上記人工組織前駆体。 - 前記マイクロカプセルが、生理学的条件下(例えば4〜37℃、例えば6〜8のpH、例えば生理学的条件下で流体剪断を有する)で安定な構造を有し、
好ましくは、マイクロカプセルが、吸引又は圧縮中のマイクロカプセルの断片化を回避する機械的強度を有し;
好ましくは、マイクロカプセルが、封入された細胞の機械的保護を提供し、細胞の生活活動のための微小環境(例えば、栄養素)を提供することができ;
好ましくは、マイクロカプセルがバイオブロックであり;
好ましくは、マイクロカプセルが、それぞれ独立して、20〜2000μm、例えば、30〜1900μm、40〜1800μm、50〜1700μm、60〜1600μm、70〜1500μm、80〜1400μm、90〜1300μm、100〜1200μm、200〜1000μm、300〜800μm、400〜600μm又は100〜500μmのサイズを有し;
マイクロカプセルが、それぞれ独立して球状であり、又は所望の形状(例えば、立方体、直角プリズム、六角柱、円柱又は不規則形状)を有し;
好ましくが、マイクロカプセルが、それぞれ独立して、固体又はゲル状態などの半固体であり;
好ましくが、マイクロカプセルが混合物の形態で存在し;
好ましくが、マイクロカプセルが分離したマイクロカプセルであり;
好ましくが、マイクロカプセルは容器中に提供される、請求項1に記載の人工組織前駆体。 - 前記マイクロカプセルが、上皮細胞、例えば、内皮細胞(例えば、血管内皮細胞)、平滑筋細胞(例えば、血管平滑筋細胞)及び/又は未分化細胞を含み;
好ましくは、マイクロカプセル中の細胞が、未分化細胞、例えば、幹細胞(例えば、脂肪由来間葉系幹細胞、骨髄間葉系幹細胞、誘導された多能性幹細胞及び胚性幹細胞)であり;
好ましくは、未分化細胞が、上皮細胞(例えば、内皮細胞)及び/又は平滑筋細胞に分化することができ;
好ましくは、未分化細胞が、幹細胞(例えば、脂肪由来間葉系幹細胞、骨髄間葉系幹細胞、誘導された多能性幹細胞及び胚性幹細胞)及び前駆体(例えば、内皮前駆体)の1つ以上から選択され;
好ましくは、細胞が、動物、例えば哺乳動物、例えばヒト、類人猿、サル、ゴリラ、ウシ、ブタ、イヌ、ヒツジ及びヤギから得られ;
好ましくは、細胞が、結合組織(例えば、緩い結合組織、緻密な結合組織、弾性組織、網状結合組織及び脂肪組織)、筋組織(例えば、骨格筋、平滑筋及び心筋)、泌尿生殖器系組織、胃腸組織、肺組織、骨組織、神経組織及び上皮組織(例えば、単純上皮及び重層上皮)、内胚葉由来組織、中胚葉由来組織及び外胚葉由来組織からなる群から選択される組織由来であり;
好ましくは、マイクロカプセルが、それぞれ独立して、1つ以上の細胞、例えば、1〜106細胞、例えば、10〜900、20〜800、30〜700、40〜600、50〜500、60〜400、70〜300、80〜200、10〜100、10〜103、10〜104、10〜105、10〜106細胞を含む、請求項1又は2に記載の人工組織前駆体。 - 前記マイクロカプセルが、細胞及び前記細胞をカプセル化するコアを含み、
好ましくは、コアが、細胞の生活活動のための微小環境(例えば、栄養素)を提供し;
好ましくは、コアが生分解性材料でできていて;
好ましくは、マイクロカプセルが、コアを包囲するシェルをさらに含み;
好ましくは、シェルが、マイクロカプセルに機械的な保護を与えることができ;
好ましくは、シェルが、細胞の生活活動のための微小環境(例えば、栄養素)を提供することができ;
好ましくは、コア及び/又はシェルが処理され(例えば、コア及び/又はシェルの機械的特性を改善するために、コア固定溶液又はシェル固定溶液で処理され);
好ましくは、シェルが、生分解性材料でできていて;
好ましくは、シェルが透過性であり、例えば、シェルが、水、酸素、及び栄養素(例えば、当、例えばグルコース、脂肪、タンパク質、アミノ酸、短いペプチド、ミネラル、ビタミン、サイトカイン又はヌクレオチド)に対して透過性であり;
好ましくは、シェルが、マイクロカプセルの内側及び外側の物質の交換のためのチャネル又は孔を有し;
好ましくは、シェルが、0.1〜50μm、例えば、0.1〜0.5、0.5〜1、1〜2、2〜5、5〜10、10〜15、15〜20、20〜25、25〜30、30〜50、50〜100、100〜200、200〜300、300〜400、400〜500、0.1〜1、1〜5、1〜10、5〜10、10〜20、10〜30、5〜20又は1〜20μmの厚さを有し;
好ましくは、マイクロカプセル、マイクロカプセルのコア、又はマイクロカプセルのシェルが、それぞれ独立して、0.01〜0.02、0.02〜0.03、0.03〜0.04、0.04〜0.05、0.05〜0.06、0.06〜0.07、0.07〜0.08、0.08〜0.09、0.09〜0.1、0.1〜0.15、0.15〜0.2、0.2〜0.3、0.3〜0.4、0.01〜0.4、0.01〜0.05、0.05〜0.1、0.1〜0.2、0.2〜0.4、0.05〜0.15又は0.06〜0.1GPaの硬度を有し;
好ましくは、マイクロカプセル、マイクロカプセルのコア、又はマイクロカプセルのシェルが、それぞれ独立して、0.01〜0.1GPa又は0.01〜0.4GPaの硬度を有し;
好ましくは、マイクロカプセル、マイクロカプセルのコア、又はマイクロカプセルのシェルが、それぞれ独立して、0.01〜0.05、0.05〜0.1、0.1〜0.5、0.5〜0.8、0.8〜1、1〜1.2、1.2〜1.4、1.4〜1.6、1.6〜1.8、1.8〜2、2〜2.4、2.4〜2.8、2.8〜3.2、3.2〜4、4〜10、10〜20、20〜30、30〜40、40〜50、50〜80、80〜100、0.5〜4、0.5〜1、1〜1.5、1.5〜2、2〜3、0.8〜1.6、1.4〜2.4、0.8〜3.2、0.01〜100、1〜100、10〜100又は0.5〜50MPaの弾性係数を有し;
好ましくは、マイクロカプセル、マイクロカプセルのコア、又はマイクロカプセルのシェルが、それぞれ独立して、0.01〜1、0.01〜10又は0.01〜100MPaの弾性係数を有する、請求項1〜3のいずれか一項に記載の人工組織前駆体。 - 前記生体適合性材料が生分解性材料を含み;
好ましくは、生分解性材料が分解性の生体材料であり;
好ましくは、生分解性材料が、天然に存在する材料(例えば、動物又は植物に由来する天然に存在する生分解性材料)、合成材料、組換えによって生成された材料、改質材料又はそれらの任意の組み合わせであり;
好ましくは、生分解性材料が、天然に存在する生分解性材料、例えば、コラーゲン、フィブリン、キトサン、アルギン酸塩(例えば、アルギン酸ナトリウム又はアルギン酸カルシウム)、デンプン、ヒアルロン酸、ラミニン、アガロース、ゼラチン、デキストラン、キチン、セルロース(例えば、バクテリアセルロース)、シルクフィブロイン、コンドロイチン硫酸、ヘパリン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、ムコ多糖類、ムチン又はそれらの任意の組み合わせ;修飾された生分解性材料、例えば、修飾されたアルギン酸塩、例えば、酸化アルギン酸塩(例えば、酸化アルギン酸ナトリウム)、修飾ゼラチン(例えば、ジアルデヒドデンプン(DAS)で架橋された修飾ゼラチン)修飾セルロース(例えば、カルボキシメチルセルロース又は酸化再生セルロース)又はそれらの任意の組み合わせ;及び/又は合成生分解性材料、例えば、ポリホスファゼン、ポリアクリル酸及びその誘導体(例えば、ポリメタクリル酸、アクリル酸とメタクリル酸との共重合体)、ポリ乳酸(PLA)、ポリグリコール酸(PGA)、ポリ(乳酸−co−グリコール酸)(PLGA)、ポリオルトエステル(POE)、ポリカプロラクトン(PCL)、ポリヒドロキシブチラート(PHB)、ポリアミノ酸(例えば、ポリリジン)、分解性ポリウレタン(例えば、デンプン修飾ポリウレタン)、ポリヒドロキシアルカノエート(PHA)、ポリヒドロキシバレレート(PHV)、ポリブチレンスクシネート(PBS)、ポリビニルアルコール、ポリジオキサノン、ポリ(1,4−ジオキサン−2−オン)、ポリ(p−ジオキサノン)、ポリブチレンカーボネート又はそれらの任意の組み合わせを含み;
好ましくは、生分解性材料が、酵素(例えば、細胞によって分泌される酵素)によって分解され得て;
好ましくは、生分解性材料の分解が、細胞の生命活動を維持又は促進する栄養素を提供することができる、請求項1〜4のいずれか一項に記載の人工組織前駆体。 - 前記マイクロカプセルが、栄養素、細胞外マトリックス、サイトカイン、及び/又は医薬として活性な成分などの追加薬剤をさらに含み、
好ましくは、追加薬剤が、細胞の増殖、分化、遊走、分泌及び/又は代謝を調節(例えば、促進)し、又は細胞の幹細胞性を維持することができ;
好ましくは、栄養素が、限定されないが、微量元素、ヌクレオチド、アミノ酸、ポリペプチド、炭水化物(例えば、単糖、オリゴ糖又は多糖)、脂質又はビタミンを含み;
好ましくは、細胞外マトリックスが、グリコサミノグリカン及びプロテオグリカンなどの多糖類;コラーゲン及びエラスチンなどの構造タンパク質;フィブロネクチン及びラミニンなどの付着タンパク質からなる群から選択され;
好ましくは、サイトカインが、細胞の増殖、分化、遊走、分泌及び/又は代謝を調節するためのサイトカインであり、限定されないが、未分化細胞を平滑筋細胞又は内皮細胞に分化を誘導することができるサイトトキシン、例えばTGF−α1、PDGF−BB、VEGF又はb−FGFであり;
好ましくは、医薬として活性な成分が、細胞の増殖、分化、遊走、分泌及び/又は代謝を調節(例えば、促進)することができる薬剤であるか、又は薬剤が細胞の幹細胞性を維持することができ;
好ましくは、医薬として活性な成分が、rhIL−2、rhIL−11、rhEPO、IFN−α、IFN−β、IFN−γ、G−CSF、GM−CSF、rHuEPO、sTNF−R1及びrhTNF−αからなる群より選択される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の人工組織前駆体。 - 前記固体支持体が生体適合性材料から作製され、
好ましくは、生体適合性材料は生分解性材料を含み;
好ましくは、生分解性材料は分解性を有する生体材料であり;
好ましくは、生分解性材料は、天然に存在する生分解性材料(例えば、コラーゲン、ゼラチン、キトサン、ポリヒドロキシブチレート(PHB)、キチン、アルギン酸塩(例えば、アルギン酸ナトリウム)、デンプンベースの生体材料(例えば、多糖デンプン)、セルロース(例えば、バクテリアセルロース)、シルクタンパク質又はそれらの任意の組み合わせ)であり;
好ましくは、天然に存在する生分解性材料はデンプンであり;
好ましくは、生分解性材料は、修飾された生分解性材料であり、例えば、修飾アルギン酸塩、例えば、酸化アルギン酸塩(例えば、酸化アルギン酸ナトリウム)、修飾ゼラチン(例えば、ジアルデヒドデンプン(DAS)で架橋された修飾ゼラチン)、修飾セルロース(例えば、カルボキシメチルセルロース又は酸化再生セルロース)又はそれらの任意の組み合わせであり;
好ましくは、生分解性材料は、合成生分解性材料、例えば、脂肪族ポリエステル(例えば、ポリ乳酸(PLA)、ポリカプロラクトン(PCL)、ポリヒドロキシアルカノエート(PHA)、ポリヒドロキシバレレート(PHV)、ポリヒドロキシブチラート(PHB)、ポリブチレンスクシネート(PBS))、ポリグリコール酸(PGA)、ポリ(乳酸−co−グリコール酸)(PLGA)、ポリオルトエステル(POE)、生分解性ポリウレタン(例えば、デンプン修飾ポリウレタン)、ポリビニルアルコール、ポリ(p−ジオキシシクロヘキサノン)、ポリ(p−ジオキソヘテロシクロヘキサノン)、ポリジオキサノン、ポリブチレンカーボネート、ポリホスファゼン又はそれらの任意の組み合わせであり;
好ましくは、合成生分解性材料は、ポリカプロラクトン(PCL)、ポリ乳酸(PLA)、ポリ(乳酸−co−グリコール酸)(PLGA)、ポリグリコール酸(PGA)及び分解性ポリウレタンからなる群から選択され;
好ましくは、生分解性材料は、酵素(例えば、細胞によって分泌される酵素)によって分解され得て;
好ましくは、生分解性材料は1〜12ヶ月のインビボ分解時間を有し;
好ましくは、生体適合性材料は、非生分解性材料(例えば、ナイロン、テリレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリテトラフルオロエチレン、シリコーンゴム、フルオロカーボンシリコーンゴム、天然ゴム、ポリアクリレート、芳香族ポリエステル(例えば、ポリエチレンテレフタレート(PET))、非分解性ポリウレタン、ポリエーテルエーテルケトン、ポリアクリロニトリル、ポリシロキサン、ポリオキシメチレン、ポリ塩化ビニル又はそれらの任意の組み合わせ)をさらに含み;
好ましくは、非生分解性材料は生体不活性であり:
好ましくは、生体適合性材料は、非生分解性材料(例えば、ナイロン、テリレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリテトラフルオロエチレン、シリコーンゴム、フルオロカーボンシリコーンゴム、天然ゴム、ポリアクリレート、芳香族ポリエステル(例えば、ポリエチレンテレフタレート(PET))、非分解性ポリウレタン、ポリエーテルエーテルケトン、ポリアクリロニトリル、ポリシロキサン、ポリオキシメチレン、ポリ塩化ビニル又はそれらの任意の組み合わせ)を含み;
好ましくは、非生分解性材料は生体不活性であり;
好ましくは、固体支持体は、管状固体支持体又はシート状固体支持体であり;
好ましくは、固体支持体は、生物学的構築物の表面上に調製され;
好ましくは、固体支持体は、エレクトロスピニング、押出し鍛造、3Dプリント又はスプレーによって調製される、請求項1〜6のいずれか一項に記載の人工組織前駆体。 - 人工組織前駆体が、管(例えば、円形管の形態で、例えば、側壁に開口部を有するか又は有しない管の形態で)であり、固体支持体が管状固体支持体であり(例えば、円形管の形態で、例えば、側壁に開口部を有するか又は有しない管の形態で)、複数のマイクロカプセルは、1つ以上の管状生物学的構築物を形成する(例えば、円形管の形態で、例えば、側壁に開口部を有するか又は有しない管の形態で)、少なくとも1つの管状生物学的構築物は、管状固体支持体の内壁に取り付けられた外壁を有し、
好ましくは、人工組織前駆体は、管状固体支持体と、側壁に開口部を有さない管状生物学的構築物とを含み、管状生物学的構築物は、管状固体支持体の内壁に取り付けられた外壁を有し;
好ましくは、人工組織前駆体は、複数の管状生物学的構築物を含み;
好ましくは、人工組織前駆体は、管状固体支持体と、側壁に開口部を有さない複数の管状生物学的構築物を含み、管状生物学的構築物は、管状固体支持体の内側にあり、管状固体支持体の軸方向に沿って整列し、各管状生物学的構築物の外壁は、管状固体支持体の内壁に付着されていて;
好ましくは、人工組織前駆体は、管状固体支持体と、側壁に開口部を有さない複数の管状生物学的構築物とを含み、管状生物学的構築物は、管状固体支持体の内側にあり、管状固体支持体と同軸に配置され、最も外側の管状の生物学的構築物の壁は、管状の固体支持体の内壁に取り付けられていて;
好ましくは、人工組織前駆体は、管状固体支持体及び複数の管状生物学的構築物を含み、各管状生物学的構築物は側壁に開口部を有し、管状生物学的構築物は管状固体支持体の内側にあり、管状固体支持体及び各管状生物学的構築物の外壁は、管状固体支持体の内壁に取り付けられていて;
好ましくは、人工組織前駆体は、管状固体支持体及び複数の管状生物学的構築物を含み、各管状生物学的構築物は、側壁に開口を有し、管状生物学的構築物は、管状固体支持体の内側であり、支持され、半径方向に整列され、最外の管状の生物学的構築物の外壁は、管状固体支持体の内壁に付着され;
好ましくは、人工組織前駆体は、管状固体支持体及び複数の管状生物学的構築物を含み、各管状生物学的構築物は、側壁に開口を有し、管状生物学的構築物は、管状固体支持体の内側であり、各管状生物学的構築物の外壁は、管状固体支持体の内壁に取り付けられていて;
好ましくは、人工組織前駆体は、管状固体支持体、側壁に開口を有する管状生物学的構築物、及び側壁に開口を有さない管状生物学的構築物を含む、請求項1〜7のいずれか1項に記載の人工組織前駆体。 - 前記人工組織前駆体は、1cm〜40cmの長さを有し;
好ましくは、人工組織前駆体は、1mm〜3cm(例えば、1〜6mm、6〜8mm、8〜10mm、10〜12mm又は12mm〜3cm)の内径を有し;
好ましくは、人工組織前駆体は、均一又は不均一な厚さを有し;
好ましくは、管状固体支持体は1cm〜40cmの長さを有し;
好ましくは、管状固体支持体は、1mm〜3cm(例えば、1〜6mm、6〜8mm、8〜10mm、10〜12mm又は12mm〜3cm)の内径を有する。
好ましくは、管状固体支持体の厚さは200μm〜1mmであり;
好ましくは、管状固体支持体は、側壁に開口を有する円形管であり、開口は管状固体支持体の軸方向に沿った両端を通り、管状固体支持体の半径方向部分は環帯扇形の形状であり;好ましくは、環帯扇形は、0°より大きく360°未満の中心角を有し;
好ましくは、管状生物学的構築物は、1cm〜40cmの長さを有し:
好ましくは、管状生物学的構築物は、1mm〜3cmの内径(例えば、1〜6mm、6〜8mm、8〜10mm、10〜12mm又は12mm〜3cm)を有し;
好ましくは、管状生物学的構築物は200μm〜1mmの厚さを有し;
好ましくは、管状生物学的構築物は、側壁に開口部を有する丸い管であり、開口部は、管状生物学的構築物の軸方向に沿った両端を通り、管状生物学的構築物の半径方向部分は、環帯扇形の形状であり;好ましくは、環帯扇形は0°より大きく360°未満の中心角を有する、請求項8に記載の人工組織前駆体。 - 前記人工組織前駆体がシートの形態であり、前記固体支持体がシート状の固体支持体であり、前記複数のマイクロカプセルが1つ以上のシート状支持体を形成し、少なくとも1つのシート状生物学的構築物がシート状固体支持体に付着されており、
好ましくは、シート状固体支持体は、平面シート又は湾曲シートであり;
好ましくは、シート状生物学的構築物は、平面シート又は湾曲シートであり;
好ましくは、人工組織前駆体は、シート状固体支持体及びシート状生物学的構築物を含み、ここで、シート状生物学的構築物は、シート状固体支持体の表面に付着した表面を有し;
好ましくは、人工組織前駆体は、シート状固体支持体と、複数のシート状生物学的構築物とを含み、ここで、複数のシート状生物学的構築物は、シート状固体支持体の一方の側に位置し、シート状の生物学的構築物は各々、シート状の固体支持体の表面に付着した表面を有し;
好ましくは、人工組織前駆体は、シート状固体支持体と、複数のシート状生物学的構築物とを含み、ここで、複数のシート状生物学的構築物は、シート状固体支持体の一方の側に積層され、生物学的構築物は、シート状固体支持体の表面に付着した表面を有する、請求項1〜7のいずれか1項に記載の人工組織前駆体。 - 前記人工組織前駆体が、円形シート、楕円形シート、平行四辺形(例えば、長方形)シート、扇形シート又は不規則シートであり、
好ましくは、人工組織前駆体は、0.5mm〜3mmの厚さを有し;
好ましくは、人工組織前駆体は、0.5cm2〜5cm2の面積を有し;
好ましくは、人工組織前駆体は、均一又は不均一な厚さを有し;
好ましくは、シート状固体支持体は、丸形シート、楕円形シート、平行四辺形(例えば、長方形)シート、扇形シート又は不規則シートであり;
好ましくは、シート状固体支持体は、0.5mm〜3mmの厚さを有し;
好ましくは、シート状固体支持体は、0.5cm2〜5cm2の面積を有し;
好ましくは、シート状生物学的構築物は、丸形シート、楕円形シート、平行四辺形(例えば、長方形)シート、扇形シート又は不規則なシートであり;
好ましくは、シート状生物学的構築物は、20μm〜3mmの厚さを有し;
好ましくは、シート状生物学的構築物は、0.5cm2〜5cm2の面積を有する、請求項10に記載の人工組織前駆体。 - 少なくとも1つのマイクロカプセル又は少なくとも1つの生物学的構築物が固体支持体で固定されて、
好ましくは、少なくとも1つのマイクロカプセル又は少なくとも1つの生物学的構築物が固体支持体に化学的に付着され;
好ましくは、少なくとも1つの生物学的構築物が付着剤を用いて固体支持体に付着され;
より好ましくは、付着剤は医療用付着剤であり;
好ましくは、医療用付着剤は、軟組織用の医療用付着剤及び硬質組織用の医療用付着剤(例えば、歯科又は整形外科用の医療用付着剤)からなる群から選択され;
好ましくは、医療用付着剤は、主成分として、オクチル2−シアノアクリレートを主成分とする組織付着剤、フィブリン付着剤、合成樹脂付着剤(例えば、メタクリレート系付着剤又はポリカルボン酸系付着剤)、骨付着剤及びポリメチルメタクリル酸エステルからなる群から選択され;
好ましくは、医療用付着剤は、α−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート又はオクチルα−シアノアクリレート、例えばn−オクチルα−シアノアクリレート)を含む、請求項1〜11のいずれか1項に記載の人工組織前駆体。 - 前記人工組織前駆体が管の形態であり、ここで、以下:
(I)管状(例えば、円形管の形状で、例えば、側壁に開口部を有する又は有しない管の形状)の生物学的構築物を調製する工程;そして
(II)管状生物学的構築物を管状固体支持体の内壁に付着させる工程;
好ましくは、管状生物学的構築物は、以下の工程を含む方法によって調製される:
(1)マイクロカプセルの表面の全部又は一部に付着した第1の成分を有する1つ以上のマイクロカプセルを提供する工程;好ましくは、第1の成分は第1の薬剤に含まれ;
(2)一時的支持体の表面の所定の領域に第2の成分を含む第2の薬剤を塗布する工程であって、第1の成分と第2の成分とが互いに接触した場合に、付着作用を達成する粘着作用を生じさせ、一時的支持体は、管状又は円筒状の支持体(例えば、側壁に開口部を有しない円形管、側壁に開口部を有する円形管、円周の一部に沿って配置される円柱又は円柱)であり、所定領域が、前記一時的支持体の曲面上に位置し、場合により、第2の薬剤をコーティングする前に一時的支持体の表面の所定の領域に基材材料をコーティングする工程;
(3)工程(1)において表面の全体又は一部に付着させた第1成分を有するマイクロカプセルを、第2の薬剤でコーティングした所定領域に配置し、それにより、マイクロカプセルの表面の第1成分が、粘性効果を生じさせるために所定領域に第2成分と接触され、それにより、第1の層構造体を管状構造体とする第1の層構造体にアセンブルさせる(付着させる)工程を含み;
場合により前記方法は、以下の工程をさらに含む:
(4)前工程で形成された構造上に第2の薬剤をコーティングする工程;
(5)工程(1)で表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、前工程で作製した構造体上に置き、それにより、マイクロカプセルの表面の第1成分が、第2成分と接触され、それにより、マイクロカプセルを前工程で生成された構造上の別の層構造にアセンブルさせる(付着させる)工程;
それにより、管状生物学的構築物を得る工程;
(6)場合により、工程(4)及び(5)を1回以上繰り返す工程;
管状生物学的構築物を得る工程;
場合により、該方法は、側壁に開口を有する丸形の管状生物学的構築物を付着して、側壁に開口を有さない丸形の管状生物学的構築物を提供する工程;
場合により、該方法は、前記一時的支持体から前記管状生物学的構築物を分離する工程;
好ましくは、一時的支持体は3Dプリンタの回転ロッドなどの曲面を有するプリンティングプラットフォームであり、
好ましくは、基板材料は、ゼラチン、ポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)、ポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)−ポリエチレングリコールブロックコポリマー、ポリエチレングリコールコポリマー(例えば、ポリビニルアルコール−ポリエチレングリコールコポリマー)、ポリヒドロキシエチルアクリレート、アガロース、マトリゲル、キトサン/グリセロリン酸ナトリウムシリーズ又はプルロニックF127などの温度感受性材料であり;
好ましくは、一時的支持体は、温度感受性材料(例えば、ゼラチン、ポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)、ポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)−ポリエチレングリコールブロックコポリマー、ポリエチレングリコールコポリマー(例えば、ポリビニルアルコール−ポリエチレングリコールコポリマー)、ポリヒドロキシエチルアクリレート、アガロース、マトリゲル、キトサン/グリセロリン酸ナトリウムシリーズ又はプルロニックF127)から作製された円筒状又は丸形の管であり;
好ましくは、前記一時的支持体はシリンダであり、前記所定領域は前記シリンダの側面全体であり;
前記一時的支持体はシリンダであり、前記所定領域は前記シリンダの展開されていない側面の矩形であり、前記所定領域は前記シリンダの軸方向において前記シリンダの側面を通り;
前記一時的支持体はシリンダであり、前記所定領域は前記シリンダの展開されていない側面の矩形であり、前記所定領域は前記シリンダの周方向において前記シリンダの側面を通り、
前記一時的支持体はシリンダであり、前記所定領域は前記シリンダの展開されていない側面の矩形であり、前記所定領域は前記シリンダの軸方向又は周方向において前記シリンダの側面を通過せず、
好ましくは、工程(3)において、第1成分が表面に付着したマイクロカプセルを、工程(2)の第2の薬剤でコーティングされた所定の領域に置いた後、0.1〜60秒放置し;
好ましくは、管状生物学的構築物は、3Dバイオプリンタによって調製される、請求項1〜12のいずれか一項に記載の人工組織前駆体の調製方法。 - 前記人工組織前駆体が管の形態であり、以下の工程:
(I)管状(例えば、円形の管の形状で、例えば、側壁に開口部を有する又は有しない管の形状)の生物学的構築物を調製する工程;そして
(II)管状生物学的構築物を管状固体支持体の内壁に付着させる工程;
管状生物学的構築物は、以下の工程を含む方法によって調製される:
(1)表面の全体又は一部に付着した第1の成分を有する1つ以上のマイクロカプセルを提供する工程;好ましくは、第1の成分は第1の薬剤に含まれる;
(2)一時的支持体の表面上に所定の環状(例えば円形又は環帯扇形)パターンを第2の成分を含む第2の薬剤で描かれ、粘着性効果を生じさせて、第1の構成要素と第2の構成要素とは互いに接触させ、前記一時的支持体は少なくとも1つの平面を有し、前記環状パターンは前記一時的支持体の平面上に位置する工程;
(3)工程(1)において、表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、第2の薬剤で描かれた所定の環状パターン上に配置し、それによりマイクロカプセルの表面の第1成分が、環状パターン上の第2の成分と接触されて、粘着作用を提供し、それにより環状構造である第1の層構造にマイクロカプセルをアセンブルする(付着する)工程;
(4)環状構造上に第2の薬剤をコーティングする工程;
(5)工程(1)において、表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、前工程において提供された構造に配置し、それによりマイクロカプセルの表面の第1成分が、前工程において提供された構造上の第2の成分と接触されて、粘着作用を提供し、それにより前工程において提供された構造上の別の層構造にマイクロカプセルをアセンブルする(付着する)工程;
(6)場合により、工程(4)及び(5)を1回以上繰り返す工程;
それにより管状生物学的構築物を得る工程;
場合により、該方法は、側壁に開口を有する丸形の管状生物学的構築物を付着して、側壁に開口を有さない丸形の管状生物学的構築物を提供し;
好ましくは、一時的支持体は3Dプリンタのプリンティングプラットフォームであり、
好ましくは、工程(3)において、表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、工程(2)の第2の薬剤で描かれた所定の環状パターン上に配置した後、0.1〜60秒放置し;
好ましくは、管状生物学的構築物は3Dバイオプリンタによって調製される、請求項1〜12のいずれか一項に記載の人工組織前駆体の調製方法。 - 前記人工組織前駆体がシートの形態であり、以下の工程:
(I)シート状(例えば、平面シートの形態、又は湾曲シートの形態)の生物学的構築物を調製する工程;そして
(II)シート状の生物学的構築物をシート状の固体支持体に付着させる工程;
好ましくは、シート状の生物学的構築物は、以下の工程を含む方法によって調製される:
(1)表面の全体又は一部に付着した第1の成分を有する1つ以上のマイクロカプセルを提供する工程;好ましくは、第1の成分は第1の薬剤に含まれる;
(2)一時的支持体の表面の所定領域に第2成分を含む第2の薬剤をコーティングし、第1の成分と第2の成分とが接触しているときに粘着作用を達成するために粘着性効果を生じさせることができ;前記一時的支持体は少なくとも1つの平面を有し、前記所定領域は前記一時的支持体の平面上に位置する;
(3)工程(1)において表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、第2の薬剤でコーティングされた所定領域に配置し、それによりマイクロカプセルの表面の第1成分は、所定領域上で第2成分と接触されて、粘着性作用を生じさせ、それにより、マイクロカプセルを第1の層構造にアセンブルさせる(付着させる)工程であって、第1の層構造は平面的なシート状の構造であり;
場合により、該方法は、以下の工程をさらに含む:
(4)前工程で形成された構造上に第2の薬剤をコーティングする工程;
(5)工程(1)において表面の全部又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、前工程で生成させた構造体上に配置し、それによりマイクロカプセル表面の第1成分が、前工程において生成された構造上の第2成分と接触するようにして、それによりマイクロカプセルを前工程で生成された構造上の別の層構造にアセンブルする(付着する)工程;そして
(6)場合により、工程(4)及び(5)を1回以上繰り返して、平面状のシート状生物学的構築物を得る工程;
場合により、該方法は、湾曲したシート状の生物学的構築物を得るために、平面状のシート状の生物学的構築物を曲げることをさらに含み;
好ましくは、所定の領域は、平行四辺形(例えば、矩形)領域、円形領域、楕円形領域、扇形領域又は不規則領域であり;
好ましくは、一時的支持体は3Dプリンタのプリンティングプラットフォームであり;
好ましくは、工程(3)において、表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルは、工程(2)において第2の薬剤がコーティングされた所定領域に配置された後、0.1〜60秒放置され;
好ましくは、シート状の生物学的構築物は、3Dバイオプリンタを使用して調製される、請求項1〜12のいずれか1項に記載の人工組織前駆体の調製方法。 - 人工組織前駆体がシートの形態であり、以下の工程:
(I)請求項15に記載のシート状の生物学的構築物の調製方法に従ってシート状の生物学的構築物を調製する工程;そして
(II)固体支持体を調製するための材料(例えば、生体適合性材料)を提供し、シート状の生物学的構築物上にシート状固体支持体を調製する工程であって、
好ましくは、シート状の固体支持体は、3Dプリンティング又は噴霧プロセスによって調製される工程を含む、請求項1〜12のいずれか1項に記載の人工組織前駆体の調製方法。 - 前記人工組織前駆体が管の形態であり、以下の工程:
(I)請求項15に記載のシート状の生物学的構築物の調製方法に従ってシート状の生物学的構築物を調製する工程;
(II)工程(I)で調製されたシート状の生物学的構築物を曲げ、及び/又はシート状の生物学的構築物のエッジを付着して管状生物学的構築物を得る工程;そして
(III)管状生物学的構築物を管状固体支持体の内壁に付着させる工程
を含み、請求項1〜12のいずれか一項に記載の人工組織前駆体の調製方法。 - 前記人工組織前駆体が管の形態であり、以下の工程:
(I)請求項13又は14に記載の管状生物学的構築物を調製するための方法に従って、管状生物学的構築物を調製する工程;
又は請求項15に記載のシート状の生物学的構築物の調製方法に従って、シート状生物学的構築物を調製し;次に、シート状の生物学的構築物を曲げ、及び/又はシート状の生物学的構築物のエッジを付着させて管状生物学的構築物を得る工程;そして
(II)固体支持体を調製するための材料(例えば、生体適合性材料)を提供し、管状生物学的構築物の外壁上に管状固体支持体を調製する工程;
好ましくは、管状固体支持体は、3Dプリンティング又は噴霧プロセスによって調製される
を含む、請求項1〜12のいずれか1項に記載の人工組織前駆体の調製方法。 - 以下の工程:
(1)表面の全体又は一部に付着した第1の成分を有する1つ以上のマイクロカプセルを提供する工程;好ましくは、第1の成分は第1の薬剤に含まれる;
(2)固体支持体を調製し、固体支持体の表面の所定領域上に第2成分を含む第2の薬剤をコーティングする工程であって、第1成分及び第2成分が互いに接触している場合、粘性作用は、付着作用を達成するために生成し得る;
(3)工程(1)において表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、第2の薬剤でコーティングされた所定領域に配置し、それによりマイクロカプセルの表面の第1成分が、所定領域上で第2成分と接触されて、粘着性作用を生じさせ、それによりマイクロカプセルを固体支持体の表面上の第1の層構造にアセンブルする(付着させる)工程;
場合により、該方法は、以下の工程をさらに含む:
(4)前工程で形成された構造上に第2の薬剤をコーティングする工程;
(5)工程(1)で表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルを、前工程で生成した構造上に配置し、それによりマイクロカプセル表面上の第1成分が、前工程において生成された構造上の第2成分と接触するようにし、それによりマイクロカプセルを前工程で生成された構造上の別の層構造にアセンブルする(付着する)工程;そして
(6)場合により、工程(4)及び(5)を1回以上繰り返し、それにより人工組織前駆体を得る工程;
好ましくは、固体支持体は管状又はシート状の支持体であり;
好ましくは、固体支持体は管状支持体であり、所定領域は固体支持体の内壁に位置し;
好ましくは、工程(3)において、表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルは、工程(2)において第2の薬剤がコーティングされた所定領域に載置された後、0.1〜60秒放置され;
好ましくは、3Dバイオプリンタを用いて人工組織前駆体を調製する工程
を含む、請求項1〜12のいずれか1項に記載の人工組織前駆体の調製方法。 - 第1成分及び/又は第2成分は、生体適合性材料、生体由来材料及び/又は生分解性材料であり;
好ましくは、第1成分と第2成分との接触に起因する粘性作用は、2つのマイクロカプセルを一緒に付着させて、生物学的構築物を形成するために使用することができ、このようにして得られた生物学的構築物は、10Pa以上、例えば20Pa以上、30Pa以上、40Pa以上、50Pa以上、60Pa以上、70Pa以上、80Pa以上、90Pa以上、100Pa以上、200Pa以上、300Pa以上、400Pa以上、500Pa以上、600Pa以上、700Pa以上、800Pa以上、900Pa以上、又は1000Pa以上の引張り弾性率を有し;
好ましくは、第1成分と第2成分との組み合わせは、以下から選択される:
(1)フィブリノーゲン及びトロンビン;
(2)アルギン酸塩(例えば、アルギン酸ナトリウム)又は酸化アルギン酸塩(例えば、酸化アルギン酸ナトリウム)、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+、Fe3+(例えば、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む溶液又は半固体(例えば、ゲル));
(3)マレイミド基含有分子(例えば、マレイミド基を含むポリエチレングリコール(MAL−PEG))及び遊離チオール基含有分子(例えば、遊離チオール基を含むポリエチレングリコール(PEG−SH));
(4)アニオン含有材料(例えば、アニオンを含む溶液又は半固体(例えば、ゲル))及びシアノアクα−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート又はn−オクチルα−シアノアクリレート);
(5)フィブリノーゲン及びα−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート又はn−オクチルα−シアノアクリレート);
(6)血清アルブミン(例えば、ウシ血清アルブミン)及びグルタルアルデヒド;
(7)カルバメート基(−NHCOO−)を含むか、又はイソシアネート基(−NCO)を含む分子(例えば、カルバメート基を含むポリエチレングリコール、又はイソシアネート基を含むポリエチレングリコール)及び反応性水素を含む分子(例えば、カルボキシル−含有ポリエチレングリコール);
(8)ゼラチン−レゾルシノール及びグルタルアルデヒド;
(9)カルボジイミド架橋ゼラチン及びポリ−L−グルタミン酸(PLGA);そして
(10)アミノ化ゼラチン及びアルデヒド多糖類;
好ましくは、第1成分はフィブリノーゲンであり、第2成分はトロンビンであり;又は
第1の成分は、アルギン酸塩(例えば、アルギン酸ナトリウム)又は酸化アルギン酸塩(例えば、酸化アルギン酸ナトリウム)であり、第2成分は、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む物質であり、例えば、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む溶液又は半固体(例えば、ゲル)であり、又は
第1成分は、マレイミド基含有分子(例えば、マレイミド基を含むポリエチレングリコール(MAL−PEG))であり、第2の成分は、遊離チオール基含有分子(例えば、遊離チオール基を含むポリエチレングリコール(PEG−SH))であり;又は
好ましくは、第1成分は、アニオン含有材料(例えば、アニオンを含む溶液又は半固体(例えば、ゲル))であり、第2成分は、α−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート又はn−オクチルα−シアノアクリレート)であり:又は、
好ましくは、第1成分はフィブリノーゲンであり、第2成分はα−シアノアクリレート(例えばメチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート又はn−オクチルα−シアノアクリレート)であり;又は、
好ましくは、第1成分は血清アルブミン(例えば、ウシ血清アルブミン)であり、第2の成分はグルタルアルデヒドであり;又は
好ましくは、カルバメート基(−NHCOO−)を含むか、又はイソシアネート基(−NCO)を含む分子(例えば、カルバメート基を含むポリエチレングリコール、又はイソシアネート基を含むポリエチレングリコール)であり、第2成分は、反応性水素(例えば、カルボキシル含有ポリエチレングリコール)を含む分子;又は、
好ましくは、第1成分はゼラチン−レゾルシノールであり、第2成分はグルタルアルデヒドであり;又は、
好ましくは、第1成分はカルボジイミド架橋ゼラチンであり、第2成分はポリ−L−グルタミン酸(PLGA)であり;又は、
好ましくは、第1成分はアミノ化ゼラチンであり、第2の成分は多糖アルデヒドであり;
好ましくは、第1の薬剤において、第1成分は、0.01重量%〜50重量%の濃度を有し;
好ましくは、第2の薬剤において、第2成分は、0.01重量%〜50重量%の濃度を有し;
好ましくは、第2の薬剤は、液体又は半固体(例えば、ゲル)であり;
好ましくは、第2の薬剤は、1〜1000Pa.s、例えば30〜160Pa.sの粘度を有し;
好ましくは、第2の薬剤は、第3成分をさらに含み、第3成分は粘着付与剤であり;
好ましくは、粘着付与剤は、第2の薬剤の粘性を調整するために使用され;
好ましくは、粘着付与剤は、ゼラチン、ブロックポリマーF−127、アガロース、ポリエチレングリコール、グアーガム、ポリビニルアルコール、キトサン、コラーゲン、ヒアルロン酸、キチン、セルロース及びそれらの誘導体(ヒドロキシプロピルセルロースなど)、ポリアミノ酸、ポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)−ポリエチレングリコールブロックコポリマー、ポリエチレングリコールコポリマー(例えば、ポリビニルアルコール−ポリエチレングリコールコポリマー)、アルギン酸塩(例えば、アルギン酸ナトリウム)、修飾アルギン酸塩(例えば、酸化アルギン酸ナトリウムなどの酸化アルギン酸塩)、マトリゲル、キトサン/グリセロリン酸ナトリウムシリーズ、及びポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)(PNIPAAm)ヒドロゲルからなる群から選択され;
好ましくは、第3成分は、生体適合性材料、生体由来材料、生分解性材料、及び/又は温度感受性材料であり;
好ましくは、温度感受性材料は、ゼラチン、ポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)、ポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)−ポリエチレングリコールブロックコポリマー、ポリエチレングリコールコポリマー(例えば、ポリビニルアルコール−ポリエチレングリコールコポリマー)、アガロース、マトリゲル、キトサン/グリセロリン酸ナトリウムシリーズ、Pluronic F127及びポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)(PNIPAAm)ヒドロゲルからなる群から選択され;
好ましくは、第3成分は、0.01〜50重量%の濃度を有する、請求項13〜19のいずれか1項に記載の人工組織前駆体の調製方法。 - 工程(1)において、表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルは、第1成分を含む第1の薬剤をマイクロカプセルの表面に被覆することにより得られる、請求項13〜19のいずれか1項に記載の方法。
- 工程(1)において、表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルは、第1成分を含む第1の薬剤にマイクロカプセルを浸漬することにより得られ、
好ましくは、マイクロカプセルは、第1の薬剤に1〜30分間、例えば、1〜5分間、5〜10分間、10〜15分間、15〜20分間、20〜25分間又は25〜30分間浸漬され;
好ましくは、工程(1)において、マイクロカプセルは、振とう又は振動条件下で第1の薬剤に浸漬され;
好ましくは、工程(1)は、室温(例えば15〜37℃)又は低温(例えば4〜15℃)で実施され;
好ましくは、工程(1)は、第1の薬剤がマイクロカプセルの表面の全体又は一部に付着した後に、マイクロカプセルを洗浄する工程をさらに含み;
好ましくは、マイクロカプセルを緩衝液(例えば、生理学的緩衝液)又は培地溶液で洗浄し;
好ましくは、洗浄工程は1〜5分間又は5〜10分間行われ;
好ましくは、洗浄工程は室温(例えば15〜37℃)又は低温(例えば4〜15℃)で実施される、請求項13〜19のいずれか1項に記載の方法。 - 工程(3)は、室温(例えば15〜37℃)又は低温(例えば4〜15℃)で実施され;
好ましくは、工程(5)において、表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルは、前工程で生成された構造体上に置いた後、0.1〜60秒(例えば、0.1〜1秒、1〜5秒、5〜10秒、15〜20秒、20〜25秒、25〜30秒、30〜35秒、35〜40秒、40〜45秒、45〜50秒、50〜55秒又は55〜60秒)間、放置され;
好ましくは、工程(5)は室温(例えば15〜37℃)又は低温(例えば4〜15℃)で実施される、請求項13〜19のいずれか1項に記載の方法。 - 工程(2)〜(6)の間に、生成された構造体の内側又は外側に補助物質が添加され、
好ましくは、補助物質は細胞を含有せず;
好ましくは、補助物質は生体適合性及び/又は生分解性であり;
好ましくは、補助材料は温度感受性材料であり;
好ましくは、温度感受性材料は、ゼラチン、ポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)、ポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)−ポリエチレングリコールブロックコポリマー、ポリエチレングリコールコポリマー(例えば、ポリビニルアルコール−ポリエチレングリコールコポリマー)、アガロース、マトリゲル、キトサン/グリセロリン酸ナトリウムシリーズ及びPluronic F127からなる群から選択される、請求項13〜19のいずれか1項に記載の方法。 - 工程(5)で使用される表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルは、工程(1)で使用される表面の全体又は一部に付着した第1成分を有するマイクロカプセルと同一又は異なり;
好ましくは、異なるマイクロカプセルは異なる細胞を含み、及び/又は異なる第1成分と付着する、請求項13〜19のいずれかに記載の方法。 - バイオプリンティングプロセスによって実施され;
好ましくは、バイオプリンティングプロセスは、プリンター(例えば、3Dバイオプリンター)を用いて行われ;あるいは、バイオプリンティングプロセスは、自動化された又は自動化されていない機械プロセスを用いて実施され;又は、バイオプリンティングプロセスは、手動配置若しくは手動堆積によって(例えば、ピペットを使用することによって)実行され;
好ましくは、マイクロカプセルは、押出プリンティングプロセス又はモジュラープリンティングプロセスのいずれかを用いてプリントされ;
好ましくは、第2の薬剤は、モジュラープリンティングプロセス、押出プリンティングプロセス、又はインクジェットプリンティングプロセスを使用してプリントされ;
好ましくは、補助物質は、モジュラープリンティングプロセス、押出プリンティングプロセス、又はインクジェットプリンティングプロセスを使用してプリントされる、請求項13〜25のいずれか1項に記載の方法。 - 生物学的構築物を固体支持体で固定する工程を含み;
好ましくは、生物学的構築物は、固体支持体に化学的に結合され;
好ましくは、生物学的構築物は、付着剤を用いて固体支持体に付着され;
好ましくは、付着剤は、α−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート又はオクチルα−シアノアクリレート)である、請求項13〜15及び17のいずれか1項に記載の方法。 - 請求項13〜15のいずれか1項に記載の生物学的構築物の調製方法によって得られる生物学的構築物。
- 互いに別個にされた、マイクロカプセル、第1の薬剤及び第2の薬剤を含む、人工組織前駆体を調製するのに有用なキットであって、マイクロカプセルは、細胞、及び細胞をカプセル化する生体適合性材料を含み、第1の薬剤は第1成分を含み、第2の薬剤は第2成分を含み、第1成分が第2成分に接触した場合、粘着性作用が生じて、付着効果を達成することができ、
好ましくは、第1成分と第2成分の接触から生じる粘着性作用を用いて、2つのマイクロカプセルを一緒に付着させて、生物学的構築物を形成することができ、このようにして得られた生物学的構築物は、10Pa以上(例えば、100Pa以上)の引張り弾性率を有し;
好ましくは、第1成分及び/又は第2成分は、生体適合性材料、生体由来材料及び/又は生分解性材料であり;
好ましくは、第1成分及び第2成分の組み合わせは、
(1)フィブリノーゲン及びトロンビン;
(2)アルギン酸塩(例えば、アルギン酸ナトリウム)又は酸素化アルギン酸塩(例えば、酸化アルギン酸ナトリウム)、及びCa2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む物質(例えば、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む溶液又は半固体(例えば、ゲル);
(3)マレイミド基含有分子(例えば、マレイミド基を含むポリエチレングリコール(MAL−PEG))及び遊離チオール基含有分子(例えば、遊離チオール基を含むポリエチレングリコール(PEG−SH);
(4)アニオン含有物質(例えば、アニオンを含有する溶液又は半固体(例えば、ゲル)及びα−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート又はn−オクチルα−シアノアクリレート);
(5)フィブリノーゲン及びα−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート又はn−オクチルα−シアノアクリレート)。
(6)血清アルブミン(例えば、ウシ血清アルブミン)及びグルタルアルデヒド;
(7)カルバメート基(−NHCOO−)を含か又はイソシアネート基(−NCO)を含む分子(例えば、カルバメート基を含むポリエチレングリコール、又はイソシアネート基を含むポリエチレングリコール)及び反応性水素を含む分子(例えば、カルボキシル含有ポリエチレングリコール);
(8)ゼラチン−レゾルシノール及びグルタルアルデヒド;
(9)カルボジイミド架橋ゼラチン及びポリ−L−グルタミン酸(PLGA);そして
(10)アミノ化ゼラチン及び多糖アルデヒド
から選択される、上記キット。 - 第1成分がフィブリノーゲンであり、第2成分がトロンビンであり;又は
第1成分がアルギン酸塩(例えば、アルギン酸ナトリウム)又は酸化アルギン酸塩(例えば、酸化アルギン酸ナトリウム)であり、第2成分は、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む物質、例えば、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+又はFe3+を含む溶液若しくは半固体(例えば、ゲル)であり;又は
第1成分はマレイミド基含有分子(例えば、マレイミド基を含むポリエチレングリコール(MAL−PEG))であり、第2成分は遊離チオール基含有分子(例えば遊離チオール基を含むポリエチレングリコール(PEG−SH))であり;又は、
好ましくは、第1成分は、アニオン含有物質(例えば、アニオンを含む溶液又は半固体(例えば、ゲル))であり、第2成分は、α−シアノアクリレート(例えば、メチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート又はn−オクチルα−シアノアクリレート)であり;又は、
好ましくは、第1成分はフィブリノーゲンであり、第2成分はα−シアノアクリレート(例えばメチルα−シアノアクリレート、エチルα−シアノアクリレート、イソブチルα−シアノアクリレート、イソヘキシルα−シアノアクリレート又はn−オクチルα−シアノアクリレート)であり;又は、
好ましくは、第1成分は血清アルブミン(例えば、ウシ血清アルブミン)であり、第2成分はグルタルアルデヒドであり;又は
好ましくは、第1成分は、カルバメート基(−NHCOO−)を含むか、又はイソシアネート基(−NCO)を含む分子(例えば、カルバメート基を含むポリエチレングリコール又はイソシアネート基を含むポリエチレングリコール)であり、第2成分は、反応性水素を含む分子(例えば、カルボキシル含有ポリエチレングリコール)であり;又は、
好ましくは、第1成分はゼラチン−レゾルシノールであり、第2成分はグルタルアルデヒドであり;又は、
好ましくは、第1成分はカルボジイミド架橋ゼラチンであり、第2成分はポリ−L−グルタミン酸(PLGA)であり;又は、
好ましくは、第1成分はアミノ化ゼラチンであり、第2成分は多糖アルデヒドであり;
好ましくは、第1の薬剤において、第1成分は、0.01重量%〜50重量%の濃度を有し;
好ましくは、第2の薬剤において、第2成分は、0.01重量%〜50重量%の濃度を有し;
好ましくは、第2の薬剤は、液体又は半固体(例えば、ゲル)であり;
好ましくは、第2の薬剤は、1〜1000Pa.sの粘度、例えば30〜160Pa.sの粘度を有し;
好ましくは、第2の薬剤は、第3成分をさらに含み、第3成分は粘着付与剤であり;
好ましくは、粘着付与剤は、第2の薬剤の粘度を調整するために使用され;
好ましくは、第3成分(すなわち、粘着付与剤)は、ゼラチン、ブロックポリマーF−127、アガロース、ポリエチレングリコール、グアーガム、ポリビニルアルコール、キトサン、コラーゲン、ヒアルロン酸、キチン、セルロース及びその誘導体(例えば、ヒドロキシプロピルセルロース)、ポリアミノ酸、ポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)−ポリエチレングリコールブロックコポリマー、ポリエチレングリコールコポリマー(例えば、ポリビニルアルコール−ポリエチレングリコールコポリマー)、アルギン酸塩(例えば、アルギン酸ナトリウム)、修飾アルギン酸塩(例えば、酸化アルギン酸塩、例えば、酸化アルギン酸ナトリウム)、マトリゲル、キトサン/グリセロリン酸ナトリウムシリーズ及びポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)(PNIPAAm)ハイドロゲルからなる群から選択され;
好ましくは、第3成分は生体適合性材料;生体由来材料;生分解性材料及び/又は温度感受性材料であり;
好ましくは、ゼラチン、ポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)−ポリエチレングリコールブロックコポリマー、ポリエチレングリコールコポリマー(例えば、ポリビニルアルコール−ポリエチレングリコールコポリマー)、アガロース、マトリゲル、キトサン/グリセロリン酸ナトリウムシリーズ、Pluronic F127及びポリ(N−イソプロピルアクリルアミド)(PNIPAAm)ヒドロゲルからなる群から選択され;
好ましくは、第3成分は0.01〜50重量%の濃度を有する、請求項29に記載のキット。 - 前記マイクロカプセルが、請求項2〜6のいずれか1項において定義されるマイクロカプセルである、請求項30に記載のキット。
- 請求項29〜31のいずれか1項において定義される1つ以上のキットを含む人工組織前駆体を調製するために有用なパッケージであって、
好ましくは、第1の薬剤と第2の薬剤との同じ組み合わせが異なるキットで使用され;
好ましくは、第1の薬剤と第2の薬剤との異なる組み合わせが異なるキットにおいて使用される、上記パッケージ。 - 請求項1〜12のいずれか1項に記載の人工組織前駆体を培養(例えば、インビトロ培養又はインビボ培養)して得られたる人工組織であって、
好ましくは、人工組織は人工内腔であり;
好ましくは、内腔は、上皮細胞(例えば、血管、食道、気管、胃、胆管、腸(小腸及び大腸を含み、例えば、十二指腸、空腸、回腸、盲腸(虫垂を含む)、上行結腸、右疝痛屈曲、横行結腸、左疝痛屈曲、下行結腸、S状結腸又は直腸)、卵管、血管精管、尿管、膀胱又はリンパ管)を含む内腔であり;
好ましくは、人工内腔は、管状の人工内腔又はシート状の人工内腔であり;
好ましくは、人工内腔は、人工血管又は血管パッチであり;
好ましくは、人工組織前駆体は、マイクロカプセル内の細胞の増殖、分化、遊走、分泌及び/又は代謝を可能にする条件下で培養され、
例えば、人工組織前駆体は、1〜3日、3〜5日、5〜7日、7〜10日、10〜14日、14〜21日、21〜28日、1〜7日、7〜14日又は14〜28日間培養され;
例えば、人工組織前駆体は3Dインキュベーター又はバイオリアクター内で培養され;
好ましくは、人工組織前駆体は非ヒト被験体に移植され、非ヒト被験体で培養され;
好ましくは、非ヒト被験体は、ウシ、ウマ、ヤギ、イノシシ、イヌ、ネコ、げっ歯類又は霊長類などの哺乳動物である、上記人工組織。 - 請求項1〜12のいずれか1項に記載の人工組織前駆体(例えば、管状人工組織前駆体又はシート状人工組織前駆体)又は請求項33に記載の人工内腔を含む内腔インプラントであって、
好ましくは、内腔インプラントは、請求項1〜12のいずれか1項に記載の1つ以上の(例えば、2、3、4又は5つの)人工組織前駆体(例えば、管状人工組織前駆体又はシート状人工組織前駆体)、又は請求項33に記載の1つ以上の(例えば、2、3、4又は5つの)人工内腔(例えば、管状人工内腔又はシート状人工内腔)を含み;
好ましくは、内腔インプラントは、複数の管状人工組織前駆体が流体連通している、請求項1〜12のいずれか1項に記載の複数の(例えば、2、3、4又は5つの)管状人工組織前駆体を含み;
好ましくは、内腔インプラントは、複数の管状人工内腔が流体連通している、請求項33に記載の複数の(例えば、2、3、4又は5つの)管状人工内腔を含み;
好ましくは、内腔インプラントは、線状管状構造又は分岐状管状構造を有し;
好ましくは、内腔インプラントは、X字形管、Y字形管又はT字形管の形態であり;
好ましくは、内腔は、上皮細胞(例えば、血管、食道、気管、胃、胆管、腸(小腸及び大腸を含み、例えば、十二指腸、空腸、回腸、盲腸(虫垂を含む)、上行結腸、右疝痛屈曲、横行結腸、左疝痛屈曲、下行結腸、S状結腸又は直腸)、卵管、血管精管、尿管、膀胱又はリンパ管)を含み;
好ましくは、上皮細胞を含む内腔は血管であり;
好ましくは、内腔インプラントは、請求項33に記載の人工血管又は血管パッチを含む血管インプラントであり、
好ましくは、内腔インプラントは、医薬として活性な成分(例えば、血栓症、石灰化、感染及び/又は拒絶を予防するための医薬として活性な成分)をさらに含み;
好ましくは、内腔インプラントは、内腔内の流体パラメータを検出するための検知デバイスをさらに備え;
好ましくは、内腔インプラントは、内腔内の流体パラメータを調整するための調整デバイスをさらに備え;
好ましくは、内腔内インプラントは、被験体に移植され;
好ましくは、被験体は、心血管疾患、脳血管疾患、末梢血管疾患、整形外科疾患、泌尿器疾患及び腫瘍疾患からなる群から選択される1種以上の疾患を被っていて;
好ましくは、被験体は、冠状動脈性心疾患、脳虚血性脳卒中、血管腫、悪性腫瘍による血管の浸潤、閉塞性血栓血管炎、閉塞した血液輸送及び慢性腎不全により引き起こされる整形外科疾患からなる群から選択される1種以上の疾患を被っていて;
好ましくは、被験体は、ウシ、ウマ、ヤギ、イノシシ、イヌ、ネコ、げっ歯類又は霊長類などの哺乳動物であり;ここで、好ましい被験体はヒトである、上記内腔インプラント。 - 請求項33に記載の人工内腔(例えば、人工血管)を含む内腔(例えば、血管)モデルであって、
好ましくは、内腔モデルは、請求項33に記載の1つ以上の(例えば、2、3、4又は5つの)人工内腔(例えば、管状人工内腔、例えば、人工血管)を含み;
好ましくは、内腔モデルは、複数の管状人工内腔が流体連通する、請求項33に記載の複数の(例えば、2、3、4又は5つの)管状人工内腔の複数を含み;
好ましくは、内腔モデルは、線形管状構造又は分岐管状構造を有し;
好ましくは、内腔モデルは、X字形管、Y字形管又はT字形管の形態であり;
好ましくは、内腔モデルは、内腔内の流体パラメータを検出するための検知デバイスをさらに備え、
好ましくは、内腔モデルは、内腔内の流体パラメータを調整するための調整デバイスをさらに備え、
好ましくは、内腔モデルは、医学的指導のデモンストレーション、薬物のスクリーニング(例えば、薬物の有効成分などの血管疾患を予防及び/又は治療するために使用される薬物)、生物学的研究又は医学的研究(例えば、血管流体機構の研究)において使用される、上記内腔モデル。 - 人工組織、内腔インプラント又は内腔モデルの製造における、請求項1〜12のいずれか1項に記載の人工組織前駆体の使用であって、
好ましくは、人工組織は、請求項33に記載の人工組織(例えば、人工内腔)であり;
好ましくは、内腔インプラントは、請求項34に記載の内腔インプラントであり;
好ましくは、内腔モデルは、請求項35に記載の内腔モデルである、上記使用。 - 内腔インプラント又は内腔モデルの製造における、請求項33に記載の人工組織の使用であって、
好ましくは、内腔インプラントは、請求項34に記載の内腔インプラントであり;
好ましくは、内腔モデルは、請求項35に記載の内腔モデルである、上記使用。
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