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Description
一局面において、本明細書で記載されるのは、本明細書で記載される方法のうちのいずれかによって生成される結合体化免疫グロブリンである。一実施形態において、上記方法は、機能的作用物質をアシルドナー基質の反応性基に結合体化する前に、アシルドナー基質のグルタミン残基に結合体化した免疫グロブリンを精製するステップをさらに包含する。一実施形態において、上記精製するステップは、サイズベースの方法（例えば、クロマトグラフィーまたはダイアフィルトレーション）を含む。別の実施形態において、上記精製するステップは、電荷ベースの分離（例えば、アニオン交換またはカチオン交換クロマトグラフィー）を含む。別の実施形態において、上記精製するステップは、アフィニティーベースのステップ（例えば、プロテインＡまたはプロテインＧクロマトグラフィーおよび疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ））を含む。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
結合体化免疫グロブリンを生成するための方法であって、該方法は、
免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、微生物のトランスグルタミナーゼおよびアシルドナー基質を含む機能的作用物質とを接触させるステップであって、
ａ）ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、
ｂ）ここで該アシルドナー基質は、グルタミン残基を含み、そして
ｃ）ここで該機能的作用物質は、治療剤または診断剤である、
ステップを包含し、
ここで該微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該操作されたリジン残基を、該機能的作用物質上の該アシルドナー基質の該グルタミン残基に結合体化し、それによって該結合体化免疫グロブリンを生成する、方法。
（項目２）
結合体化免疫グロブリンを生成するための方法であって、該方法は、
ｉ）免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、微生物のトランスグルタミナーゼおよびアシルドナー基質とを接触させるステップであって、
ａ）ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、そして
ｂ）ここで該アシルドナー基質は、グルタミン残基および反応性基を含み、ここで該微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該操作されたリジン残基を、該アシルドナー基質の該グルタミン残基に結合体化する、
ステップ、ならびに
ｉｉ）機能的作用物質を該アシルドナー基質の該反応性基に結合体化するステップであって、ここで該機能的作用物質は、治療剤または診断剤であり、それによって該結合体化免疫グロブリンを生成する、ステップ、
を包含する方法。
（項目３）
前記アシルドナー基質の前記反応性基は、クリックケミストリーによって前記機能的作用物質に結合体化される、項目２に記載の方法。
（項目４）
リジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、以下：
前記免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分の重鎖上のスレオニン１３５（Ｔ１３５Ｋ）、セリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）、ロイシン１９３（Ｌ１９３Ｋ）、アスパラギン酸２２１（Ｄ２２１Ｋ）、スレオニン２２３（Ｔ２２３Ｋ）、ヒスチジン２２４（Ｈ２２４Ｋ）、スレオニン２２５（Ｔ２２５Ｋ）、メチオニン２５２（Ｍ２５２Ｋ）、アスパラギン２９７（Ｎ２９７Ｋ）、もしくはプロリン４４５（Ｐ４４５Ｋ）、
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のκ軽鎖上のロイシン２０１（Ｌ２０１Ｋ）もしくはセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）、または
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のλ軽鎖上のグルタミン酸２１３（Ｅ２１３Ｋ）、
からなる群より選択される、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５）
前記重鎖は、そのＣ末端に４４８位において付加されたアミノ酸残基をさらに含み、ここで該アミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記Ｃ末端に４４８位において付加された前記アミノ酸残基は、ロイシンである、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記リジン残基挿入は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１９１とセリン１９２との間、またはセリン１９２とロイシン１９３との間に挿入されたリジン残基である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目８）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、抗原結合性フラグメント（Ｆａｂ）であり、ここで、リジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン酸２２１（Ｄ２２１Ｋ）、スレオニン２２３（Ｔ２２３Ｋ）、ヒスチジン２２４（Ｈ２２４Ｋ）、スレオニン２２５（Ｔ２２５Ｋ）、プロリン２２８（Ｐ２２８Ｋ）、プロリン２３０（Ｐ２３０Ｋ）、およびグルタミン酸２３３（Ｅ２３３Ｋ）からなる群より選択される、項目１または項目２に記載の方法。
（項目９）
前記Ｆａｂは、ヒンジ領域全体を含む、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記Ｆａｂは、短縮型ヒンジ領域を含む、項目８に記載の方法。
（項目１１）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第２の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第２の操作されたリジン残基は、第２のリジン残基挿入または第２のリジン残基に変異された第２の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで前記微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該第２の操作されたリジン残基を、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化する、項目１または項目２に記載の方法。
（項目１２）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のスレオニン１３５（Ｔ１３５Ｋ）であり、そして前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のロイシン２０１（Ｌ２０１Ｋ）である、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のスレオニン１３５（Ｔ１３５Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）である、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
前記重鎖は、そのＣ末端に４４８位において付加されたアミノ酸残基をさらに含み、ここで該アミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目１３または項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記Ｃ末端に４４８位において付加された前記アミノ酸残基は、ロイシンである、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第３の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第３の操作されたリジン残基は、第３のリジン残基挿入または第３のリジン残基に変異された第３の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで前記微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該第３の操作されたリジン残基を、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化する、項目１１に記載の方法。
（項目１８）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン２９７（Ｎ２９７Ｋ）であり、そして前記第３の操作されたリジン残基に変異された前記第３の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）である、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第４の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第４の操作されたリジン残基は、第４のリジン残基挿入またはリジン残基に変異された第４の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで前記微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該第４の操作されたリジン残基を、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化する、項目１７に記載の方法。
（項目２０）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン２９７（Ｎ２９７Ｋ）であり、前記第３の操作されたリジン残基に変異された前記第３の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）であり、前記第４の操作されたリジン残基に変異された前記第４の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のプロリン４４５（Ｐ４４５Ｋ）である、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記操作されたリジン残基の後ろにあるアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目１または項目２に記載の方法。
（項目２２）
前記操作されたリジン残基の前にあるアミノ酸残基は、酸性アミノ酸残基ではない、項目１または項目２に記載の方法。
（項目２３）
前記操作されたリジン残基の前にあるアミノ酸残基は、
非酸性アミノ酸残基挿入、または
非酸性アミノ酸残基に変異された天然酸性アミノ酸残基
である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目２４）
前記操作されたリジン残基の後ろにあるアミノ酸残基は、
アミノ酸残基挿入であって、ここで該アミノ酸残基挿入は、非酸性アミノ酸残基挿入および非プロリン残基挿入であるアミノ酸残基挿入、または
非酸性アミノ酸残基および非プロリン残基挿入に変異された、天然酸性アミノ酸残基または天然プロリン残基
である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目２５）
前記非酸性アミノ酸残基は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンである、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
前記非酸性アミノ酸残基挿入は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファン挿入である、項目２３または項目２４に記載の方法。
（項目２７）
前記非酸性アミノ酸および非プロリン残基は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンである、項目２４に記載の方法。
（項目２８）
前記天然酸性アミノ酸残基は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である、項目２３または項目２４に記載の方法。
（項目２９）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、そのＣ末端に４４８位において付加された少なくとも１個のアミノ酸残基をさらに含む重鎖を含み、ここで該少なくとも１個のアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目１または２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３０）
前記Ｃ末端に４４８位において付加された前記少なくとも１個のアミノ酸残基は、ロイシンである、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、システイン２１４の後ろに１〜４個のさらなるアミノ酸の挿入を含む軽鎖を含み、ここで、前記リジン残基挿入は、該１〜４個のさらなるアミノ酸の後ろに挿入されたリジン残基であり、ここで、ロイシン残基は、該リジン残基の後ろに挿入されている、項目１または項目２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
システイン２１４の後ろの１〜４個のさらなるアミノ酸の前記挿入、該１〜４個のさらなるアミノ酸の後ろに挿入されている前記リジン残基、および該リジン残基の後ろに挿入されている前記ロイシン残基は、ＧＫＬ、ＧＧＫＬ、ＧＧＳＫＬ、およびＧＧＳＧＫＬからなる群より選択される配列を含む、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、１つの式（Ｉ）または（ＩＩ）：
（Ｚ） ｍ −Ｇｌｎ−（Ｌ） ｎ −（Ｙ） （Ｉ）
（Ｙ）−（Ｌ） ｎ −Ｇｌｎ−（Ｚ） ｍ （ＩＩ）
に従い、ここで
Ｚは、カルボキシルベンジルオキシ（ＣＢＺ）基またはアミノ酸残基であり；
Ｇｌｎは、グルタミンアミノ酸残基であり；
各Ｌは、独立して、１〜２０個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの１個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そしてここで各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されてもよいか；または各Ｌは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり；
ｍは、０〜５の整数であり；
ｎは、０〜５の整数であり；そして
Ｙは、機能的作用物質である、
項目１に記載の方法。
（項目３４）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式（Ｉ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；各Ｌは、独立して、ポリエチレングリコール部分（ＰＥＧ）（−Ｏ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）、エチルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）またはプロピルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ３ ）−）であり；ｎは、０、１、２、３、４または５である、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式（Ｉ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり、Ｌは、アミノ酸である、項目３３に記載の方法。
（項目３６）
Ｌは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり；そしてｎは、０である、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
Ｌは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり；そしてｎは、１である、項目３５に記載の方法。
（項目３８）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式（ＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ｍは、１であり；ｎは、１、２または３であり；そして少なくとも１個のＬは、Ｇｌｙである、項目３３に記載の方法。
（項目３９）
前記機能的作用物質Ｙは、オーリスタチンＦである、項目３３に記載の方法。
（項目４０）
前記アシルドナー基質は、１つの式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）：
（Ｚ） ｍ −Ｇｌｎ−（Ｌ） ｎ −（Ｘ） （ＩＩＩ）
（Ｘ）−（Ｌ） ｎ −Ｇｌｎ−（Ｚ） ｍ （ＩＶ）
に従い、ここで
Ｚは、カルボキシルベンジルオキシ（ＣＢＺ）基またはアミノ酸残基であり；
Ｇｌｎは、グルタミンアミノ酸残基であり；
各Ｌは、独立して、１〜２０個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの１個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そして各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されていてもよいか；または各Ｌは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり；
ｍは、０〜５の整数であり；
ｎは、０〜５の整数であり；そして
Ｘは、反応性基である、
項目２に記載の方法。
（項目４１）
前記アシルドナー基質は、式（ＩＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ここで各Ｌは、独立して、ポリエチレングリコール部分（ＰＥＧ）（−Ｏ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）、エチルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）またはプロピルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ３ ）−）であり；そしてｎは、０、１、２、３、４、または５である、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記アシルドナー基質は、式（ＩＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり、１個またはこれより多くのＬは、アミノ酸である、項目４０に記載の方法。
（項目４３）
Ｌは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり；そしてｎは、１である、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
は、１であり；そしてｎは、０である、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
前記アシルドナー基質は、式（ＩＶ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ｍは、１であり；ｎは、１、２または３であり；そして少なくとも１個のＬは、Ｇｌｙである、項目４０に記載の方法。
（項目４６）
Ｘは、（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イルメタノール（ＢＣＮ）、
（ジベンゾシクロオクチン；ＤＢＣＯ）、トランス−シクロオクテン（ＴＣＯ）、アジド（Ｎ ３ ）、アルキン、テトラジンメチルシクロプロペン、ノルボルネン、ヒドラジド／ヒドラジン、およびアルデヒドからなる群より選択される反応性基である、項目４０に記載の方法。
（項目４７）
前記治療剤は、抗体またはその抗原結合部分、化学療法剤、薬物剤、放射性薬剤、細胞傷害性薬剤、抗生物質、低分子、核酸、またはポリペプチドである、項目１または項目２に記載の方法。
（項目４８）
前記診断剤は、発蛍光団、蛍光色素、放射性核種、または酵素である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目４９）
前記微生物のトランスグルタミナーゼは、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｍｏｂａｒａｅｎｓｉｓ微生物のトランスグルタミナーゼである、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５０）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＧ １ 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５１）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＧ ２ 、ＩｇＧ ３ 、もしくはＩｇＧ ４ 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５２）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＡ １ 、ＩｇＡ ２ 、もしくはＩｇＭ免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５３）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＤもしくはＩｇＥ免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５４）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、抗原結合性フラグメント（Ｆａｂ）である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５５）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ヒト免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分、またはヒト化免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分である、前記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目５６）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、キメラ免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分、または非ヒト免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分である、前記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目５７）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、２本の重鎖および２本の軽鎖を含む、前記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目５８）
前記機能的作用物質 対 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の比は、１：１〜１００：１または１：１〜２００：１である、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目５９）
免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、機能的作用物質とを含む結合体化免疫グロブリンであって、
ａ）ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、
ｂ）該機能的作用物質はアシルドナー基質を含み、ここで該アシルドナー基質は、グルタミン残基を含み、そして
ｃ）該機能的作用物質は、治療剤または診断剤であり、
ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該操作されたリジン残基は、該機能的作用物質の該アシルドナー基質の該グルタミン残基に結合体化されている、結合体化免疫グロブリン。
（項目６０）
免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、機能的作用物質とを含む結合体化免疫グロブリンであって、
ａ）ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、そして
ｂ）該操作されたリジン残基はアシルドナー基質上のグルタミン残基に結合体化されており、ここで該アシルドナー基質は、さらに反応性基を含み、
ｃ）該反応性基は機能的作用物質に結合体化されており、ここで該機能的作用物質は、治療剤または診断剤である、
結合体化免疫グロブリン。
（項目６１）
リジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、以下：
前記免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分の重鎖上のスレオニン１３５（Ｔ１３５Ｋ）、セリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）、ロイシン１９３（Ｌ１９３Ｋ）、アスパラギン酸２２１（Ｄ２２１Ｋ）、スレオニン２２３（Ｔ２２３Ｋ）、ヒスチジン２２４（Ｈ２２４Ｋ）、スレオニン２２５（Ｔ２２５Ｋ）、メチオニン２５２（Ｍ２５２Ｋ）、アスパラギン２９７（Ｎ２９７Ｋ）、もしくはプロリン４４５（Ｐ４４５Ｋ）、
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のκ軽鎖上のロイシン２０１（Ｌ２０１Ｋ）もしくはセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）、または
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のλ軽鎖上のグルタミン酸２１３（Ｅ２１３Ｋ）、
からなる群より選択される、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６２）
前記重鎖は、そのＣ末端に４４８位において付加されたアミノ酸残基をさらに含み、ここで該アミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目６１に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６３）
前記Ｃ末端に４４８位において付加された少なくとも１つのアミノ酸残基は、ロイシンである、項目６２に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６４）
前記リジン残基挿入は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１９１とセリン１９２との間、またはセリン１９２とロイシン１９３との間に挿入されたリジン残基である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６５）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、抗原結合性フラグメント（Ｆａｂ）であり、ここで、リジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン酸２２１（Ｄ２２１Ｋ）、スレオニン２２３（Ｔ２２３Ｋ）、ヒスチジン２２４（Ｈ２２４Ｋ）、スレオニン２２５（Ｔ２２５Ｋ）、プロリン２２８（Ｐ２２８Ｋ）、プロリン２３０（Ｐ２３０Ｋ）、およびグルタミン酸２３３（Ｅ２３３Ｋ）からなる群より選択される、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６６）
前記Ｆａｂは、ヒンジ領域全体を含む、項目６５に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６７）
前記Ｆａｂは、短縮型ヒンジ領域を含む、項目６５に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６８）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第２の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第２の操作されたリジン残基は、第２のリジン残基挿入またはリジン残基に変異された第２の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで該第２の操作されたリジン残基は、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化されている、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６９）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）である、項目６８に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７０）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のスレオニン１３５（Ｔ１３５Ｋ）であり、そして前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のロイシン２０１（Ｌ２０１Ｋ）である、項目６８に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７１）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のスレオニン１３５（Ｔ１３５Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）である、項目６８に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７２）
前記重鎖は、そのＣ末端に４４８位において付加された少なくとも１つのアミノ酸残基をさらに含み、ここで該救案くとも１つのアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目７０または項目７１に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７３）
前記Ｃ末端に４４８位において付加された前記少なくとも１つのアミノ酸残基は、ロイシンである、項目７２に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７４）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第３の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第３の操作されたリジン残基は、第３のリジン残基挿入またはリジン残基に変異された第３の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで該第３の操作されたリジン残基は、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化されている、項目６９に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７５）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン２９７（Ｎ２９７Ｋ）であり、そして前記第３の操作されたリジン残基に変異された前記第３の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）である、項目７４に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７６）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第４の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第４の操作されたリジン残基は、第４のリジン残基挿入またはリジン残基に変異された第４の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで該第４の操作されたリジン残基は、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化されている、項目７４に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７７）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン２９７（Ｎ２９７Ｋ）であり、前記第３の操作されたリジン残基に変異された前記第３の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）であり、前記第４の操作されたリジン残基に変異された前記第４の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のプロリン４４５（Ｐ４４５Ｋ）である、項目７６に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７８）
前記操作されたリジン残基の後ろにあるアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７９）
前記操作されたリジン残基の前にあるアミノ酸残基は、酸性アミノ酸残基ではない、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８０）
前記操作されたリジン残基の前にあるアミノ酸残基は、
非酸性アミノ酸残基挿入、または
非酸性アミノ酸残基に変異された天然酸性アミノ酸残基
である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８１）
前記操作されたリジン残基の後ろにあるアミノ酸残基は、
アミノ酸残基挿入であって、ここで該アミノ酸残基挿入は、非酸性アミノ酸残基挿入および非プロリン残基挿入であるアミノ酸残基挿入、または
非酸性アミノ酸残基および非プロリン残基挿入に変異された、天然酸性アミノ酸残基または天然プロリン残基
である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８２）
前記非酸性アミノ酸残基は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンである、項目８０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８３）
前記非酸性アミノ酸残基挿入は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファン挿入である、項目８０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８４）
前記非酸性アミノ酸および非プロリン残基は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンである、項目８１に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８５）
前記天然酸性アミノ酸残基は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である、項目８０または項目８１に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８６）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、そのＣ末端に４４８位において付加された少なくとも１個のアミノ酸残基をさらに含む重鎖を含み、ここで該少なくとも１個のアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目５９または６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８７）
前記Ｃ末端に４４８位において付加された前記少なくとも１個のアミノ酸残基は、ロイシンである、項目８６に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８８）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、システイン２１４の後ろに１〜４個のさらなるアミノ酸の挿入を含む軽鎖を含み、ここで、前記リジン残基挿入は、該１〜４個のさらなるアミノ酸の後ろに挿入されたリジン残基であり、ここで、ロイシン残基は、該リジン残基の後ろに挿入されている、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８９）
システイン２１４の後ろの１〜４個のさらなるアミノ酸の前記挿入、該１〜４個のさらなるアミノ酸の後ろに挿入されている前記リジン残基、および該リジン残基の後ろに挿入されている前記ロイシン残基は、ＧＫＬ、ＧＧＫＬ、ＧＧＳＫＬ、およびＧＧＳＧＫＬからなる群より選択される配列を含む、項目８８に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９０）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、１つの式（Ｉ）または（ＩＩ）：
（Ｚ） ｍ −Ｇｌｎ−（Ｌ） ｎ −（Ｙ） （Ｉ）
（Ｙ）−（Ｌ） ｎ −Ｇｌｎ−（Ｚ） ｍ （ＩＩ）
に従い、ここで
Ｚは、カルボキシルベンジルオキシ（ＣＢＺ）基またはアミノ酸残基であり；
Ｇｌｎは、グルタミンアミノ酸残基であり；
各Ｌは、独立して、１〜２０個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの１個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そしてここで各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されてもよいか；または各Ｌは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり；
ｍは、０〜５の整数であり；
ｎは、０〜５の整数であり；そして
Ｙは、機能的作用物質である、
項目５９に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９１）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式（Ｉ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；各Ｌは、独立して、ポリエチレングリコール部分（ＰＥＧ）（−Ｏ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）、エチルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）またはプロピルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ３ ）−）であり；ｎは、０、１、２、３、４または５である、項目９０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９２）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式（Ｉ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり、Ｌは、アミノ酸である、項目９０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９３）
Ｌは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり；そしてｎは、０である、項目９２に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９４）
Ｌは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり；そしてｎは、１である、項目９２に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９５）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式（ＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ｍは、１であり；ｎは、１、２または３であり；そして少なくとも１個のＬは、Ｇｌｙである、項目９０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９６）
前記機能的作用物質Ｙは、オーリスタチンＦである、項目９０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９７）
前記アシルドナー基質は、１つの式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）：
（Ｚ） ｍ −Ｇｌｎ−（Ｌ） ｎ −（Ｘ） （ＩＩＩ）
（Ｘ）−（Ｌ） ｎ −Ｇｌｎ−（Ｚ） ｍ （ＩＶ）
に従い、ここで
Ｚは、カルボキシルベンジルオキシ（ＣＢＺ）基またはアミノ酸残基であり；
Ｇｌｎは、グルタミンアミノ酸残基であり；
各Ｌは、独立して、１〜２０個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの１個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そして各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されていてもよいか；または各Ｌは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり；
ｍは、０〜５の整数であり；
ｎは、０〜５の整数であり；そして
Ｘは、反応性基である、
項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９８）
前記アシルドナー基質は、式（ＩＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ここで各Ｌは、独立して、ポリエチレングリコール部分（ＰＥＧ）（−Ｏ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）、エチルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）またはプロピルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ３ ）−）であり；そしてｎは、０、１、２、３、４、または５である、項目９７に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９９）
前記アシルドナー基質は、式（ＩＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり、１個またはこれより多くのＬは、アミノ酸である、項目９７に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１００）
Ｌは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり；そしてｎは、１である、項目９９に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０１）
ｍは、１であり；そしてｎは、０である、項目９９に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０２）
前記アシルドナー基質は、式（ＩＶ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ｍは、１であり；ｎは、１、２または３であり；そして少なくとも１個のＬは、Ｇｌｙである、項目９７に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０３）
Ｘは、（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イルメタノール（ＢＣＮ）、
（ジベンゾシクロオクチン；ＤＢＣＯ）、トランス−シクロオクテン（ＴＣＯ）、アジド（Ｎ ３ ）、アルキン、テトラジンメチルシクロプロペン、ノルボルネン、ヒドラジド／ヒドラジン、およびアルデヒドからなる群より選択される反応性基である、項目９７に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０４）
前記治療剤は、抗体またはその抗原結合部分、化学療法剤、薬物剤、放射性薬剤、細胞傷害性薬剤、抗生物質、低分子、核酸、またはポリペプチドである、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０５）
前記診断剤は、発蛍光団、蛍光色素、放射性核種、または酵素である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０６）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＧ １ 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０７）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＧ ２ 、ＩｇＧ ３ 、もしくはＩｇＧ ４ 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０８）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＡ １ 、ＩｇＡ ２ 、もしくはＩｇＭ免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０９）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＤもしくはＩｇＥ免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１０）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、抗原結合性フラグメント（Ｆａｂ）である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１１）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ヒト免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分、またはヒト化免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分である、項目５９〜１１０のいずれか１項に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１２）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、キメラ免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分、または非ヒト免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分である、項目５９〜１１０のいずれか１項に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１３）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、２本の重鎖および２本の軽鎖を含む、項目５９〜１１０のいずれか１項に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１４）
前記機能的作用物質 対 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の比は、１：１〜１００：１または１：１〜２００：１である、項目５９〜１１０のいずれかに記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１５）
前記機能的作用物質は、抗体またはその抗原結合部分であり、そしてここで前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分、および該機能的作用物質は、同じ抗原に結合するか、または異なる抗原に結合する、項目５８または項目５９に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１６）
項目５９〜１１５のいずれか１項に記載の結合体化免疫グロブリン、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、医薬組成物。
（項目１１７）
項目１〜５８のいずれか１項に記載の方法によって生成される、結合体化免疫グロブリン。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
結合体化免疫グロブリンを生成するための方法であって、該方法は、
免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、微生物のトランスグルタミナーゼおよびアシルドナー基質を含む機能的作用物質とを接触させるステップであって、
ａ）ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、
ｂ）ここで該アシルドナー基質は、グルタミン残基を含み、そして
ｃ）ここで該機能的作用物質は、治療剤または診断剤である、
ステップを包含し、
ここで該微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該操作されたリジン残基を、該機能的作用物質上の該アシルドナー基質の該グルタミン残基に結合体化し、それによって該結合体化免疫グロブリンを生成する、方法。
（項目２）
結合体化免疫グロブリンを生成するための方法であって、該方法は、
ｉ）免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、微生物のトランスグルタミナーゼおよびアシルドナー基質とを接触させるステップであって、
ａ）ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、そして
ｂ）ここで該アシルドナー基質は、グルタミン残基および反応性基を含み、ここで該微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該操作されたリジン残基を、該アシルドナー基質の該グルタミン残基に結合体化する、
ステップ、ならびに
ｉｉ）機能的作用物質を該アシルドナー基質の該反応性基に結合体化するステップであって、ここで該機能的作用物質は、治療剤または診断剤であり、それによって該結合体化免疫グロブリンを生成する、ステップ、
を包含する方法。
（項目３）
前記アシルドナー基質の前記反応性基は、クリックケミストリーによって前記機能的作用物質に結合体化される、項目２に記載の方法。
（項目４）
リジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、以下：
前記免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分の重鎖上のスレオニン１３５（Ｔ１３５Ｋ）、セリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）、ロイシン１９３（Ｌ１９３Ｋ）、アスパラギン酸２２１（Ｄ２２１Ｋ）、スレオニン２２３（Ｔ２２３Ｋ）、ヒスチジン２２４（Ｈ２２４Ｋ）、スレオニン２２５（Ｔ２２５Ｋ）、メチオニン２５２（Ｍ２５２Ｋ）、アスパラギン２９７（Ｎ２９７Ｋ）、もしくはプロリン４４５（Ｐ４４５Ｋ）、
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のκ軽鎖上のロイシン２０１（Ｌ２０１Ｋ）もしくはセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）、または
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のλ軽鎖上のグルタミン酸２１３（Ｅ２１３Ｋ）、
からなる群より選択される、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５）
前記重鎖は、そのＣ末端に４４８位において付加されたアミノ酸残基をさらに含み、ここで該アミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記Ｃ末端に４４８位において付加された前記アミノ酸残基は、ロイシンである、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記リジン残基挿入は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１９１とセリン１９２との間、またはセリン１９２とロイシン１９３との間に挿入されたリジン残基である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目８）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、抗原結合性フラグメント（Ｆａｂ）であり、ここで、リジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン酸２２１（Ｄ２２１Ｋ）、スレオニン２２３（Ｔ２２３Ｋ）、ヒスチジン２２４（Ｈ２２４Ｋ）、スレオニン２２５（Ｔ２２５Ｋ）、プロリン２２８（Ｐ２２８Ｋ）、プロリン２３０（Ｐ２３０Ｋ）、およびグルタミン酸２３３（Ｅ２３３Ｋ）からなる群より選択される、項目１または項目２に記載の方法。
（項目９）
前記Ｆａｂは、ヒンジ領域全体を含む、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記Ｆａｂは、短縮型ヒンジ領域を含む、項目８に記載の方法。
（項目１１）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第２の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第２の操作されたリジン残基は、第２のリジン残基挿入または第２のリジン残基に変異された第２の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで前記微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該第２の操作されたリジン残基を、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化する、項目１または項目２に記載の方法。
（項目１２）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のスレオニン１３５（Ｔ１３５Ｋ）であり、そして前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のロイシン２０１（Ｌ２０１Ｋ）である、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のスレオニン１３５（Ｔ１３５Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）である、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
前記重鎖は、そのＣ末端に４４８位において付加されたアミノ酸残基をさらに含み、ここで該アミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目１３または項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記Ｃ末端に４４８位において付加された前記アミノ酸残基は、ロイシンである、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第３の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第３の操作されたリジン残基は、第３のリジン残基挿入または第３のリジン残基に変異された第３の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで前記微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該第３の操作されたリジン残基を、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化する、項目１１に記載の方法。
（項目１８）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン２９７（Ｎ２９７Ｋ）であり、そして前記第３の操作されたリジン残基に変異された前記第３の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）である、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第４の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第４の操作されたリジン残基は、第４のリジン残基挿入またはリジン残基に変異された第４の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで前記微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該第４の操作されたリジン残基を、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化する、項目１７に記載の方法。
（項目２０）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン２９７（Ｎ２９７Ｋ）であり、前記第３の操作されたリジン残基に変異された前記第３の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）であり、前記第４の操作されたリジン残基に変異された前記第４の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のプロリン４４５（Ｐ４４５Ｋ）である、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記操作されたリジン残基の後ろにあるアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目１または項目２に記載の方法。
（項目２２）
前記操作されたリジン残基の前にあるアミノ酸残基は、酸性アミノ酸残基ではない、項目１または項目２に記載の方法。
（項目２３）
前記操作されたリジン残基の前にあるアミノ酸残基は、
非酸性アミノ酸残基挿入、または
非酸性アミノ酸残基に変異された天然酸性アミノ酸残基
である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目２４）
前記操作されたリジン残基の後ろにあるアミノ酸残基は、
アミノ酸残基挿入であって、ここで該アミノ酸残基挿入は、非酸性アミノ酸残基挿入および非プロリン残基挿入であるアミノ酸残基挿入、または
非酸性アミノ酸残基および非プロリン残基挿入に変異された、天然酸性アミノ酸残基または天然プロリン残基
である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目２５）
前記非酸性アミノ酸残基は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンである、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
前記非酸性アミノ酸残基挿入は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファン挿入である、項目２３または項目２４に記載の方法。
（項目２７）
前記非酸性アミノ酸および非プロリン残基は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンである、項目２４に記載の方法。
（項目２８）
前記天然酸性アミノ酸残基は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である、項目２３または項目２４に記載の方法。
（項目２９）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、そのＣ末端に４４８位において付加された少なくとも１個のアミノ酸残基をさらに含む重鎖を含み、ここで該少なくとも１個のアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目１または２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３０）
前記Ｃ末端に４４８位において付加された前記少なくとも１個のアミノ酸残基は、ロイシンである、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、システイン２１４の後ろに１〜４個のさらなるアミノ酸の挿入を含む軽鎖を含み、ここで、前記リジン残基挿入は、該１〜４個のさらなるアミノ酸の後ろに挿入されたリジン残基であり、ここで、ロイシン残基は、該リジン残基の後ろに挿入されている、項目１または項目２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
システイン２１４の後ろの１〜４個のさらなるアミノ酸の前記挿入、該１〜４個のさらなるアミノ酸の後ろに挿入されている前記リジン残基、および該リジン残基の後ろに挿入されている前記ロイシン残基は、ＧＫＬ、ＧＧＫＬ、ＧＧＳＫＬ、およびＧＧＳＧＫＬからなる群より選択される配列を含む、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、１つの式（Ｉ）または（ＩＩ）：
（Ｚ） ｍ −Ｇｌｎ−（Ｌ） ｎ −（Ｙ） （Ｉ）
（Ｙ）−（Ｌ） ｎ −Ｇｌｎ−（Ｚ） ｍ （ＩＩ）
に従い、ここで
Ｚは、カルボキシルベンジルオキシ（ＣＢＺ）基またはアミノ酸残基であり；
Ｇｌｎは、グルタミンアミノ酸残基であり；
各Ｌは、独立して、１〜２０個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの１個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そしてここで各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されてもよいか；または各Ｌは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり；
ｍは、０〜５の整数であり；
ｎは、０〜５の整数であり；そして
Ｙは、機能的作用物質である、
項目１に記載の方法。
（項目３４）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式（Ｉ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；各Ｌは、独立して、ポリエチレングリコール部分（ＰＥＧ）（−Ｏ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）、エチルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）またはプロピルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ３ ）−）であり；ｎは、０、１、２、３、４または５である、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式（Ｉ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり、Ｌは、アミノ酸である、項目３３に記載の方法。
（項目３６）
Ｌは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり；そしてｎは、０である、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
Ｌは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり；そしてｎは、１である、項目３５に記載の方法。
（項目３８）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式（ＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ｍは、１であり；ｎは、１、２または３であり；そして少なくとも１個のＬは、Ｇｌｙである、項目３３に記載の方法。
（項目３９）
前記機能的作用物質Ｙは、オーリスタチンＦである、項目３３に記載の方法。
（項目４０）
前記アシルドナー基質は、１つの式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）：
（Ｚ） ｍ −Ｇｌｎ−（Ｌ） ｎ −（Ｘ） （ＩＩＩ）
（Ｘ）−（Ｌ） ｎ −Ｇｌｎ−（Ｚ） ｍ （ＩＶ）
に従い、ここで
Ｚは、カルボキシルベンジルオキシ（ＣＢＺ）基またはアミノ酸残基であり；
Ｇｌｎは、グルタミンアミノ酸残基であり；
各Ｌは、独立して、１〜２０個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの１個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そして各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されていてもよいか；または各Ｌは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり；
ｍは、０〜５の整数であり；
ｎは、０〜５の整数であり；そして
Ｘは、反応性基である、
項目２に記載の方法。
（項目４１）
前記アシルドナー基質は、式（ＩＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ここで各Ｌは、独立して、ポリエチレングリコール部分（ＰＥＧ）（−Ｏ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）、エチルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）またはプロピルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ３ ）−）であり；そしてｎは、０、１、２、３、４、または５である、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記アシルドナー基質は、式（ＩＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり、１個またはこれより多くのＬは、アミノ酸である、項目４０に記載の方法。
（項目４３）
Ｌは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり；そしてｎは、１である、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
は、１であり；そしてｎは、０である、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
前記アシルドナー基質は、式（ＩＶ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ｍは、１であり；ｎは、１、２または３であり；そして少なくとも１個のＬは、Ｇｌｙである、項目４０に記載の方法。
（項目４６）
Ｘは、（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イルメタノール（ＢＣＮ）、
（ジベンゾシクロオクチン；ＤＢＣＯ）、トランス−シクロオクテン（ＴＣＯ）、アジド（Ｎ ３ ）、アルキン、テトラジンメチルシクロプロペン、ノルボルネン、ヒドラジド／ヒドラジン、およびアルデヒドからなる群より選択される反応性基である、項目４０に記載の方法。
（項目４７）
前記治療剤は、抗体またはその抗原結合部分、化学療法剤、薬物剤、放射性薬剤、細胞傷害性薬剤、抗生物質、低分子、核酸、またはポリペプチドである、項目１または項目２に記載の方法。
（項目４８）
前記診断剤は、発蛍光団、蛍光色素、放射性核種、または酵素である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目４９）
前記微生物のトランスグルタミナーゼは、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｍｏｂａｒａｅｎｓｉｓ微生物のトランスグルタミナーゼである、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５０）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＧ １ 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５１）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＧ ２ 、ＩｇＧ ３ 、もしくはＩｇＧ ４ 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５２）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＡ １ 、ＩｇＡ ２ 、もしくはＩｇＭ免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５３）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＤもしくはＩｇＥ免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５４）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、抗原結合性フラグメント（Ｆａｂ）である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目５５）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ヒト免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分、またはヒト化免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分である、前記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目５６）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、キメラ免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分、または非ヒト免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分である、前記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目５７）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、２本の重鎖および２本の軽鎖を含む、前記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目５８）
前記機能的作用物質 対 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の比は、１：１〜１００：１または１：１〜２００：１である、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目５９）
免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、機能的作用物質とを含む結合体化免疫グロブリンであって、
ａ）ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、
ｂ）該機能的作用物質はアシルドナー基質を含み、ここで該アシルドナー基質は、グルタミン残基を含み、そして
ｃ）該機能的作用物質は、治療剤または診断剤であり、
ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該操作されたリジン残基は、該機能的作用物質の該アシルドナー基質の該グルタミン残基に結合体化されている、結合体化免疫グロブリン。
（項目６０）
免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、機能的作用物質とを含む結合体化免疫グロブリンであって、
ａ）ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、そして
ｂ）該操作されたリジン残基はアシルドナー基質上のグルタミン残基に結合体化されており、ここで該アシルドナー基質は、さらに反応性基を含み、
ｃ）該反応性基は機能的作用物質に結合体化されており、ここで該機能的作用物質は、治療剤または診断剤である、
結合体化免疫グロブリン。
（項目６１）
リジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、以下：
前記免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分の重鎖上のスレオニン１３５（Ｔ１３５Ｋ）、セリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）、ロイシン１９３（Ｌ１９３Ｋ）、アスパラギン酸２２１（Ｄ２２１Ｋ）、スレオニン２２３（Ｔ２２３Ｋ）、ヒスチジン２２４（Ｈ２２４Ｋ）、スレオニン２２５（Ｔ２２５Ｋ）、メチオニン２５２（Ｍ２５２Ｋ）、アスパラギン２９７（Ｎ２９７Ｋ）、もしくはプロリン４４５（Ｐ４４５Ｋ）、
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のκ軽鎖上のロイシン２０１（Ｌ２０１Ｋ）もしくはセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）、または
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のλ軽鎖上のグルタミン酸２１３（Ｅ２１３Ｋ）、
からなる群より選択される、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６２）
前記重鎖は、そのＣ末端に４４８位において付加されたアミノ酸残基をさらに含み、ここで該アミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目６１に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６３）
前記Ｃ末端に４４８位において付加された少なくとも１つのアミノ酸残基は、ロイシンである、項目６２に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６４）
前記リジン残基挿入は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１９１とセリン１９２との間、またはセリン１９２とロイシン１９３との間に挿入されたリジン残基である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６５）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、抗原結合性フラグメント（Ｆａｂ）であり、ここで、リジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン酸２２１（Ｄ２２１Ｋ）、スレオニン２２３（Ｔ２２３Ｋ）、ヒスチジン２２４（Ｈ２２４Ｋ）、スレオニン２２５（Ｔ２２５Ｋ）、プロリン２２８（Ｐ２２８Ｋ）、プロリン２３０（Ｐ２３０Ｋ）、およびグルタミン酸２３３（Ｅ２３３Ｋ）からなる群より選択される、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６６）
前記Ｆａｂは、ヒンジ領域全体を含む、項目６５に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６７）
前記Ｆａｂは、短縮型ヒンジ領域を含む、項目６５に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６８）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第２の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第２の操作されたリジン残基は、第２のリジン残基挿入またはリジン残基に変異された第２の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで該第２の操作されたリジン残基は、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化されている、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目６９）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）である、項目６８に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７０）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のスレオニン１３５（Ｔ１３５Ｋ）であり、そして前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のロイシン２０１（Ｌ２０１Ｋ）である、項目６８に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７１）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のスレオニン１３５（Ｔ１３５Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）である、項目６８に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７２）
前記重鎖は、そのＣ末端に４４８位において付加された少なくとも１つのアミノ酸残基をさらに含み、ここで該救案くとも１つのアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目７０または項目７１に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７３）
前記Ｃ末端に４４８位において付加された前記少なくとも１つのアミノ酸残基は、ロイシンである、項目７２に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７４）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第３の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第３の操作されたリジン残基は、第３のリジン残基挿入またはリジン残基に変異された第３の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで該第３の操作されたリジン残基は、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化されている、項目６９に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７５）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン２９７（Ｎ２９７Ｋ）であり、そして前記第３の操作されたリジン残基に変異された前記第３の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）である、項目７４に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７６）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第４の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第４の操作されたリジン残基は、第４のリジン残基挿入またはリジン残基に変異された第４の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで該第４の操作されたリジン残基は、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化されている、項目７４に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７７）
前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）であり、前記第２の操作されたリジン残基に変異された前記第２の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン２９７（Ｎ２９７Ｋ）であり、前記第３の操作されたリジン残基に変異された前記第３の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）であり、前記第４の操作されたリジン残基に変異された前記第４の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のプロリン４４５（Ｐ４４５Ｋ）である、項目７６に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７８）
前記操作されたリジン残基の後ろにあるアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目７９）
前記操作されたリジン残基の前にあるアミノ酸残基は、酸性アミノ酸残基ではない、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８０）
前記操作されたリジン残基の前にあるアミノ酸残基は、
非酸性アミノ酸残基挿入、または
非酸性アミノ酸残基に変異された天然酸性アミノ酸残基
である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８１）
前記操作されたリジン残基の後ろにあるアミノ酸残基は、
アミノ酸残基挿入であって、ここで該アミノ酸残基挿入は、非酸性アミノ酸残基挿入および非プロリン残基挿入であるアミノ酸残基挿入、または
非酸性アミノ酸残基および非プロリン残基挿入に変異された、天然酸性アミノ酸残基または天然プロリン残基
である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８２）
前記非酸性アミノ酸残基は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンである、項目８０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８３）
前記非酸性アミノ酸残基挿入は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファン挿入である、項目８０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８４）
前記非酸性アミノ酸および非プロリン残基は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンである、項目８１に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８５）
前記天然酸性アミノ酸残基は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である、項目８０または項目８１に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８６）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、そのＣ末端に４４８位において付加された少なくとも１個のアミノ酸残基をさらに含む重鎖を含み、ここで該少なくとも１個のアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、項目５９または６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８７）
前記Ｃ末端に４４８位において付加された前記少なくとも１個のアミノ酸残基は、ロイシンである、項目８６に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８８）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、システイン２１４の後ろに１〜４個のさらなるアミノ酸の挿入を含む軽鎖を含み、ここで、前記リジン残基挿入は、該１〜４個のさらなるアミノ酸の後ろに挿入されたリジン残基であり、ここで、ロイシン残基は、該リジン残基の後ろに挿入されている、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目８９）
システイン２１４の後ろの１〜４個のさらなるアミノ酸の前記挿入、該１〜４個のさらなるアミノ酸の後ろに挿入されている前記リジン残基、および該リジン残基の後ろに挿入されている前記ロイシン残基は、ＧＫＬ、ＧＧＫＬ、ＧＧＳＫＬ、およびＧＧＳＧＫＬからなる群より選択される配列を含む、項目８８に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９０）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、１つの式（Ｉ）または（ＩＩ）：
（Ｚ） ｍ −Ｇｌｎ−（Ｌ） ｎ −（Ｙ） （Ｉ）
（Ｙ）−（Ｌ） ｎ −Ｇｌｎ−（Ｚ） ｍ （ＩＩ）
に従い、ここで
Ｚは、カルボキシルベンジルオキシ（ＣＢＺ）基またはアミノ酸残基であり；
Ｇｌｎは、グルタミンアミノ酸残基であり；
各Ｌは、独立して、１〜２０個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの１個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そしてここで各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されてもよいか；または各Ｌは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり；
ｍは、０〜５の整数であり；
ｎは、０〜５の整数であり；そして
Ｙは、機能的作用物質である、
項目５９に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９１）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式（Ｉ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；各Ｌは、独立して、ポリエチレングリコール部分（ＰＥＧ）（−Ｏ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）、エチルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）またはプロピルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ３ ）−）であり；ｎは、０、１、２、３、４または５である、項目９０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９２）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式（Ｉ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり、Ｌは、アミノ酸である、項目９０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９３）
Ｌは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり；そしてｎは、０である、項目９２に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９４）
Ｌは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり；そしてｎは、１である、項目９２に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９５）
前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式（ＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ｍは、１であり；ｎは、１、２または３であり；そして少なくとも１個のＬは、Ｇｌｙである、項目９０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９６）
前記機能的作用物質Ｙは、オーリスタチンＦである、項目９０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９７）
前記アシルドナー基質は、１つの式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）：
（Ｚ） ｍ −Ｇｌｎ−（Ｌ） ｎ −（Ｘ） （ＩＩＩ）
（Ｘ）−（Ｌ） ｎ −Ｇｌｎ−（Ｚ） ｍ （ＩＶ）
に従い、ここで
Ｚは、カルボキシルベンジルオキシ（ＣＢＺ）基またはアミノ酸残基であり；
Ｇｌｎは、グルタミンアミノ酸残基であり；
各Ｌは、独立して、１〜２０個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの１個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そして各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されていてもよいか；または各Ｌは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり；
ｍは、０〜５の整数であり；
ｎは、０〜５の整数であり；そして
Ｘは、反応性基である、
項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９８）
前記アシルドナー基質は、式（ＩＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ここで各Ｌは、独立して、ポリエチレングリコール部分（ＰＥＧ）（−Ｏ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）、エチルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）またはプロピルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ３ ）−）であり；そしてｎは、０、１、２、３、４、または５である、項目９７に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目９９）
前記アシルドナー基質は、式（ＩＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり、１個またはこれより多くのＬは、アミノ酸である、項目９７に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１００）
Ｌは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり；そしてｎは、１である、項目９９に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０１）
ｍは、１であり；そしてｎは、０である、項目９９に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０２）
前記アシルドナー基質は、式（ＩＶ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ｍは、１であり；ｎは、１、２または３であり；そして少なくとも１個のＬは、Ｇｌｙである、項目９７に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０３）
Ｘは、（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イルメタノール（ＢＣＮ）、
（ジベンゾシクロオクチン；ＤＢＣＯ）、トランス−シクロオクテン（ＴＣＯ）、アジド（Ｎ ３ ）、アルキン、テトラジンメチルシクロプロペン、ノルボルネン、ヒドラジド／ヒドラジン、およびアルデヒドからなる群より選択される反応性基である、項目９７に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０４）
前記治療剤は、抗体またはその抗原結合部分、化学療法剤、薬物剤、放射性薬剤、細胞傷害性薬剤、抗生物質、低分子、核酸、またはポリペプチドである、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０５）
前記診断剤は、発蛍光団、蛍光色素、放射性核種、または酵素である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０６）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＧ １ 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０７）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＧ ２ 、ＩｇＧ ３ 、もしくはＩｇＧ ４ 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０８）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＡ １ 、ＩｇＡ ２ 、もしくはＩｇＭ免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１０９）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ＩｇＤもしくはＩｇＥ免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１０）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、抗原結合性フラグメント（Ｆａｂ）である、項目５９または項目６０に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１１）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ヒト免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分、またはヒト化免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分である、項目５９〜１１０のいずれか１項に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１２）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、キメラ免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分、または非ヒト免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分である、項目５９〜１１０のいずれか１項に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１３）
前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、２本の重鎖および２本の軽鎖を含む、項目５９〜１１０のいずれか１項に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１４）
前記機能的作用物質 対 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の比は、１：１〜１００：１または１：１〜２００：１である、項目５９〜１１０のいずれかに記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１５）
前記機能的作用物質は、抗体またはその抗原結合部分であり、そしてここで前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分、および該機能的作用物質は、同じ抗原に結合するか、または異なる抗原に結合する、項目５８または項目５９に記載の結合体化免疫グロブリン。
（項目１１６）
項目５９〜１１５のいずれか１項に記載の結合体化免疫グロブリン、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、医薬組成物。
（項目１１７）
項目１〜５８のいずれか１項に記載の方法によって生成される、結合体化免疫グロブリン。
Claims (15)
- 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、機能的作用物質とを含む結合体化免疫グロブリンであって、ここで
ａ）該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、
ｂ）該機能的作用物質はアシルドナー基質を含み、ここで該アシルドナー基質は、グルタミン残基を含み、そして
ｃ）該機能的作用物質は、治療剤または診断剤であり、
ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該操作されたリジン残基は、該機能的作用物質の該アシルドナー基質の該グルタミン残基に結合体化されている、結合体化免疫グロブリン。 - 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、機能的作用物質とを含む結合体化免疫グロブリンであって、ここで
ａ）該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、
ｂ）該操作されたリジン残基はアシルドナー基質上のグルタミン残基に結合体化されており、ここで該アシルドナー基質は、さらに反応性基を含み、
ｃ）該反応性基は機能的作用物質に結合体化されており、ここで該機能的作用物質は、治療剤または診断剤である、
結合体化免疫グロブリン。 - リジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、以下：
前記免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分の重鎖上のスレオニン１３５（Ｔ１３５Ｋ）、セリン１３６（Ｓ１３６Ｋ）、ロイシン１９３（Ｌ１９３Ｋ）、アスパラギン酸２２１（Ｄ２２１Ｋ）、スレオニン２２３（Ｔ２２３Ｋ）、ヒスチジン２２４（Ｈ２２４Ｋ）、スレオニン２２５（Ｔ２２５Ｋ）、メチオニン２５２（Ｍ２５２Ｋ）、アスパラギン２９７（Ｎ２９７Ｋ）、もしくはプロリン４４５（Ｐ４４５Ｋ）、
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のκ軽鎖上のロイシン２０１（Ｌ２０１Ｋ）もしくはセリン２０２（Ｓ２０２Ｋ）、または
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のλ軽鎖上のグルタミン酸２１３（Ｅ２１３Ｋ）、
からなる群より選択される、請求項１または請求項２に記載の結合体化免疫グロブリン。 - 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第２の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第２の操作されたリジン残基は、第２のリジン残基挿入またはリジン残基に変異された第２の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで該第２の操作されたリジン残基は、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化されている、請求項１または請求項２に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記操作されたリジン残基の後ろにあるアミノ酸残基は、
（ｉ）プロリン残基でも酸性アミノ酸残基でもない、
（ｉｉ）アミノ酸残基挿入であって、ここで該アミノ酸残基挿入は、非酸性アミノ酸残基挿入または非プロリン残基挿入であるアミノ酸残基挿入である、または
（ｉｉｉ）非酸性アミノ酸残基または非プロリン残基に変異された、天然酸性アミノ酸残基または天然プロリン残基である、かつ/または
前記操作されたリジン残基の前にあるアミノ酸残基は、
（ｉ）酸性アミノ酸残基ではない、
（ｉｉ）非酸性アミノ酸残基挿入である、または
（ｉｉｉ）非酸性アミノ酸残基に変異された天然酸性アミノ酸残基である、
請求項１または請求項２に記載の結合体化免疫グロブリン。 - 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、そのＣ末端に４４８位において付加された少なくとも１個のアミノ酸残基をさらに含む重鎖を含み、ここで該少なくとも１個のアミノ酸残基は、プロリン残基でも酸性アミノ酸残基でもない、請求項１または２に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、１つの式（Ｉ）または（ＩＩ）：
（Ｚ） ｍ −Ｇｌｎ−（Ｌ） ｎ −（Ｙ） （Ｉ）
（Ｙ）−（Ｌ） ｎ −Ｇｌｎ−（Ｚ） ｍ （ＩＩ）
に従い、ここで
Ｚは、カルボキシルベンジルオキシ（ＣＢＺ）基またはアミノ酸残基であり；
Ｇｌｎは、グルタミンアミノ酸残基であり；
各Ｌは、独立して、１〜２０個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの１個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そしてここで各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されてもよい；または各Ｌは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり；
ｍは、０〜５の整数であり；
ｎは、０〜５の整数であり；そして
Ｙは、機能的作用物質である、
請求項１に記載の結合体化免疫グロブリン。 - 前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、
（ｉ）式（Ｉ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；各Ｌは、独立して、ポリエチレングリコール部分（ＰＥＧ）（−Ｏ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）、エチルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）またはプロピルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ３ ）−）であり；ｎは、０、１、２、３、４または５である、または
（ｉｉ）式（Ｉ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり、Ｌは、アミノ酸である、または
（ｉｉｉ）式（ＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ｍは、１であり；ｎは、１、２または３であり；そして少なくとも１個のＬは、Ｇｌｙである、
請求項７に記載の結合体化免疫グロブリン。 - 前記アシルドナー基質は、１つの式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）：
（Ｚ） ｍ −Ｇｌｎ−（Ｌ） ｎ −（Ｘ） （ＩＩＩ）
（Ｘ）−（Ｌ） ｎ −Ｇｌｎ−（Ｚ） ｍ （ＩＶ）
に従い、ここで
Ｚは、カルボキシルベンジルオキシ（ＣＢＺ）基またはアミノ酸残基であり；
Ｇｌｎは、グルタミンアミノ酸残基であり；
各Ｌは、独立して、１〜２０個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの１個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そして各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されていてもよいか；または各Ｌは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり；
ｍは、０〜５の整数であり；
ｎは、０〜５の整数であり；そして
Ｘは、反応性基である、
請求項２に記載の結合体化免疫グロブリン。 - 前記アシルドナー基質は、
（ｉ）式（ＩＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；各Ｌは、独立して、ポリエチレングリコール部分（ＰＥＧ）（−Ｏ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）、エチルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ２ ）−）またはプロピルアミン（−ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ３ ）−）であり；そしてｎは、０、１、２、３、４、または５である、または
（ｉｉ）式（ＩＩＩ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり、１個またはこれより多くのＬは、アミノ酸である、または
（ｉｉｉ）式（ＩＶ）に従い、ここでＺは、ＣＢＺ基であり；ｍは、１であり；ｎは、１、２または３であり；そして少なくとも１個のＬは、Ｇｌｙである、
請求項９に記載の結合体化免疫グロブリン。 - 前記治療剤は、抗体またはその抗原結合部分、化学療法剤、薬物剤、放射性薬剤、細胞傷害性薬剤、抗生物質、低分子、核酸、またはポリペプチドである、または
前記診断剤は、発蛍光団、蛍光色素、放射性核種、または酵素である、
請求項１または請求項２に記載の結合体化免疫グロブリン。 - 請求項１〜１１のいずれか１項に記載の結合体化免疫グロブリン、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、医薬組成物。
- 請求項１、７および８のいずれか１項に記載の結合体化免疫グロブリンを生成するための方法であって、該方法は、
免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、微生物のトランスグルタミナーゼおよびアシルドナー基質を含む機能的作用物質とを接触させるステップであって、
ａ）ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、
ｂ）ここで該アシルドナー基質は、グルタミン残基を含み、そして
ｃ）ここで該機能的作用物質は、治療剤または診断剤である、
ステップを包含し、
ここで該微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該操作されたリジン残基を、該機能的作用物質上の該アシルドナー基質の該グルタミン残基に結合体化し、それによって該結合体化免疫グロブリンを生成する、方法。 - 請求項２、９および１０のいずれか１項に結合体化免疫グロブリンを生成するための方法であって、該方法は、
ｉ）免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、微生物のトランスグルタミナーゼおよびアシルドナー基質とを接触させるステップであって、
ａ）ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、そして
ｂ）ここで該アシルドナー基質は、グルタミン残基および反応性基を含み、
ここで該微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該操作されたリジン残基を、該アシルドナー基質の該グルタミン残基に結合体化する、
ステップ、ならびに
ｉｉ）機能的作用物質を該アシルドナー基質の該反応性基に結合体化するステップであって、ここで該機能的作用物質は、治療剤または診断剤であり、それによって該結合体化免疫グロブリンを生成する、ステップ、
を包含する方法。 - 前記アシルドナー基質の前記反応性基は、クリックケミストリーによって前記機能的作用物質に結合体化される、請求項１４に記載の方法。
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