JP2019525897A - リジン結合体化免疫グロブリン - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2016年6月10日に出願された米国仮特許出願第62/348,410号に対する優先権を主張し、その内容全体が参考として本明細書に援用される。
本出願は、本出願とともに現在提出されている配列表を含み、そしてこの配列表は、その全体において本明細書に参考として援用される。
リジン結合体化免疫グロブリンおよびその作製法が本明細書で提供される。
引用リスト
非特許文献
(Z)m−Gln−(L)n−(Y) (I)
(Y)−(L)n−Gln−(Z)m (II)
に従い、
(Z)m−Gln−(L)n−(X) (III)
(X)−(L)n−Gln−(Z)m (IV)
に従い、ここでZは、カルボキシルベンジルオキシ(CBZ)基またはアミノ酸残基であり;Glnは、グルタミンアミノ酸残基であり;各Lは、独立して、1〜20個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの1個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そして各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されていてもよいか;または各Lは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり;mは、0〜5の整数であり;nは、0〜5の整数であり;そしてXは、反応性基である。
(Z)m−Gln−(L)n−(Y) (I)
(Y)−(L)n−Gln−(Z)m (II)
に従い、
(Z)m−Gln−(L)n−(X) (III)
(X)−(L)n−Gln−(Z)m (IV)
に従い、
開示される方法および結合体化免疫グロブリンは、添付の図面(これは、本開示の一部を形成する)と関連して行われる、以下の詳細な説明を参照することによってより容易に理解され得る。開示される方法および結合体化免疫グロブリンが、本明細書で記載されるおよび/または示される具体的実施形態に限定されず、本明細書で使用される用語法が、特定の実施形態を例示によって記載する目的に過ぎず、その特許請求される方法または結合体化免疫グロブリンの限定であることを意図しないことは、理解されるべきである。
(a)「参照配列」とは、配列比較のための基準として使用される規定の配列である。参照配列は、特定された配列の部分セットまたは全体であり得る;例えば、全長cDNAもしくは遺伝子配列のセグメント、または完全なcDNAもしくは遺伝子配列。ポリペプチドに関しては、参照ポリペプチド配列の例示的な長さとしては、少なくとも約16アミノ酸、少なくとも約20アミノ酸、少なくとも約25アミノ酸、少なくとも約35アミノ酸、少なくとも約50アミノ酸、または少なくとも約100アミノ酸が挙げられる。核酸に関しては、参照核酸配列の例示的な長さとしては、少なくとも約50ヌクレオチド、少なくとも約60ヌクレオチド、少なくとも約75ヌクレオチド、少なくとも約100ヌクレオチド、もしくは少なくとも約300ヌクレオチド、またはその程度もしくはそれらの間の任意の整数が挙げられる。
(b)「比較ウインドウ」とは、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の連続の特定されたセグメントへの言及を含み、ここでそのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、参照配列に対して比較され得、比較ウインドウにおけるポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の一部は、その2つの配列の最適アラインメントのために、参照配列(これは、付加、置換、または欠失を含まない)と比較して、付加、置換、または欠失(すなわち、ギャップ)を含み得る。例示的な比較ウインドウは、長さが少なくとも20個の連続するヌクレオチドまたはアミノ酸であり得、および必要に応じて、30個、40個、50個、100個、またはこれより長くてもよい。当業者は、そのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列にギャップを含めることに起因して、参照配列に対する誤解を招くような高い類似性を回避するために、ギャップペナルティーを代表的には導入し、マッチの数から差し引くことを理解する。
(c)比較のための配列のアラインメントの方法は、当該分野で周知である。比較のための配列の最適アラインメントは、Smith and Waterman, Adv. Appl. Math., 2: 482, 1981の局所的相同性アルゴリズムによって;Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol., 48: 443, 1970の相同性アラインメントアルゴリズムによって;Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 8: 2444, 1988の類似性検索法によって;Intelligenetics, Mountain View, Calif.によるPC/GeneプログラムにおけるCLUSTAL、Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 7 Science Dr., Madison, Wis., USAにおけるGAP、BESTFIT、BLAST、FASTA、およびTFASTAが挙げられるが、これらに限定されないこれらのアルゴリズムのコンピューター化された実行によって行われ得る;CLUSTALプログラムは、Higgins and Sharp, Gene, 73: 237−244, 1988; Corpet,ら, Nucleic Acids Research, 16:881−90, 1988; Huang,ら, Computer Applications in the Biosciences, 8:1−6, 1992;およびPearson,ら, Methods in Molecular Biology, 24:7−331, 1994によって十分に記載される。データベース類似性検索のために使用され得るプログラムのBLASTファミリーは、以下を含む:ヌクレオチドデータベース配列に対するヌクレオチド問い合わせ配列のためのBLASTN;タンパク質データベース配列に対するヌクレオチド問い合わせ配列のためのBLASTX;タンパク質データベース配列に対するタンパク質問い合わせ配列のためのBLASTP;ヌクレオチドデータベース配列に対するタンパク質問い合わせ配列のためのTBLASTN;およびヌクレオチドデータベース配列に対するヌクレオチド問い合わせ配列のためのTBLASTX。Current Protocols in Molecular Biology, 第19章, Ausubelら編, Greene Publishing and Wiley−Interscience, New York, 1995を参照のこと。上記のプログラムの新しいバージョンまたは新しいプログラムは全体として、将来的に確実に利用可能になり、本開示とともに使用され得る。
(d)「%同一性」とは、比較ウインドウにわたって2つの最適に整列された配列を比較することによって決定される値を意味し、ここでその比較ウインドウにおけるポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の一部は、その2つの配列の最適アラインメントのために、参照配列(これは、付加、置換、または欠失を含まない)と比較して、付加、置換、または欠失(すなわち、ギャップ)を含み得る。パーセンテージは、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両方の配列において存在する位置の数を決定して、マッチした位置の数を得て、そのマッチした位置の数を比較ウインドウにおける位置の総数で除算し、その結果に100をかけて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。
結合体化免疫グロブリンの生成
(Z)m−Gln−(L)n−(Y) (I)
(Y)−(L)n−Gln−(Z)m (II)
の1つに従い、ここで、Zは、カルボキシルベンジルオキシ(CBZ)基またはアミノ酸残基であり;Glnは、グルタミンアミノ酸残基であり;各Lは、独立して、1〜20個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの1個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そしてここで各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されてもよいか;または各Lは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり;mは、0〜5の整数であり;nは、0〜5の整数であり;そしてYは、機能的作用物質である。
(Z)m−Gln−(L)n−(X) (III)
(X)−(L)n−Gln−(Z)m (IV)
の1つに従い、ここでZは、カルボキシルベンジルオキシ(CBZ)基またはアミノ酸残基であり;Glnは、グルタミンアミノ酸残基であり;各Lは、独立して、1〜20個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの1個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そして各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されていてもよいか;または各Lは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり;mは、0〜5の整数であり;nは、0〜5の整数であり;そしてXは、反応性基である。
本明細書で開示されるのはまた、本明細書で開示される免疫グロブリンまたはその抗原結合部分のうちのいずれかを含む結合体化免疫グロブリンであり、ここでその操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、そしてアシルドナー基質を含む機能的作用物質に結合体化され、ここでアシルドナー基質は、グルタミン残基を含む。さらなる実施形態は、本明細書で開示される免疫グロブリンまたはその抗原結合部分のうちのいずれかを含む結合体化免疫グロブリンを含み、ここでその操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、そしてアシルドナー基質に結合体化され、ここでそのアシルドナー基質は、グルタミン残基および反応性基を含み、ここでその反応性基は、免疫グロブリンまたはその抗原結合部分へのアシルドナー基質の結合体化の後に、機能的作用物質と反応され得る。
本明細書で提供されるのはまた、医薬組成物である。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、本明細書で開示される免疫グロブリンのうちのいずれかを含み得る。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、本明細書で開示される結合体化免疫グロブリンのうちのいずれかを含み得る。一実施形態において、医薬組成物は、結合体化免疫グロブリンおよび薬学的に受容可能なキャリアを含む。
本明細書で開示される結合体化可能な免疫グロブリンまたはその抗原結合部分のうちのいずれかをコードする核酸分子もまた、本明細書で提供される。例として、一実施形態において、核酸分子は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む結合体化可能な免疫グロブリンをコードし、ここでそのコードされた結合体化可能な免疫グロブリンは、操作されたリジン残基を含み、ここでその操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基である。免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の操作されたリジン残基は、アシルドナー基質のグルタミン残基に結合体化され、それによって、結合体化免疫グロブリンを生成する。
Fab発現のためのHCフラグメントを、種々の3’コドンにおいて終結するヒンジを通じてHCリーダー配列をPCR増幅することによって作製した。そのPCRフラグメントを、In−Fusion HDクローニングキットを使用して、製造業者のプロトコル(CLONTECH)に従って、pcDNA3.1ベースの哺乳動物発現プラスミドへとクローニングした。
ExpiFectamineでトランスフェクトされる予定の細胞の各ミリリットルについて、333.3ng HCプラスミドおよび333.3ng LCプラスミドを、5〜10分間、50μL Opti−MEM(ThermoFisher Scientific, Waltham, MA)中で接触させた。同様に、2.67μL ExpiFectamineを、50μL Opti−MEMの中で接触させた。そのExpiFectamine溶液をDNA混合物に添加し、20〜30分間、室温においてインキュベートした。そのDNA:ExpiFectamine混合物を、細胞を回転させながらその細胞に添加し、37℃において、8% CO2で125rpmにおいて振盪しながらインキュベートした。翌日、細胞1mLあたり5μLのエンハンサー1および50μLのエンハンサー2をそのトランスフェクション(the transfection)に添加して、さらに7〜10日間インキュベーションを継続した。
安定してトランスフェクトした細胞株プールを、0.6〜1×106 細胞/mLでFreeStyle 293発現培地に播種した。細胞を、37℃、8% CO2において、125rpmで振盪しながらインキュベートした。培養物が1×106 細胞/mLの密度に達して2日後に、培養物に、最終濃度10g/L Select Soytone(BD Biosciences, San Jose, CA)、5mM 吉草酸(Sigma Aldrich, St. Louis, MO)、および1:100 CD Lipid Concentrate(ThermoFisher Scientific, Waltham, MA)を供給した。細胞生存性が50%未満(7〜10日間)であった場合、培養物を、Beckman JLA8.1000ローターで1時間、8000rpmにおいて遠心分離した。次いで、その上清を、0.2μm PESフィルタを通して濾過し、4℃または−20℃において、精製するまで貯蔵した。
MAbを、2つの方法のうちの1つを使用して精製した。10mL未満のmAbおよびFab上清に関しては、アフィニティークロマトグラフィーを、それぞれ、プロテインA樹脂または抗κ樹脂でのバッチ精製法を使用して行った。25mLより多いMAbおよびFab上清は、それぞれ、プレパックプロテインAまたは抗κカラムを使用して精製した。
Prosep−vA High Capacity Protein A樹脂(Millipore, Billerica, MA)をDPBSで平衡化し、100μLを、3〜6mLのサンプルに添加した。4℃において1時間から一晩インキュベートした後に、その樹脂を1mL DPBSで3回洗浄し、18,000×gで30秒間遠心分離した。そのサンプルを、400μL 0.1M グリシン、pH2.9の添加によって樹脂から溶離し、続いて、18,000×gにおいて30秒間遠心分離した。そのサンプルを、40μLの1M Tris、pH8.0で中和した。、0.5mL Amicon Ultra、10kカットオフフィルタ(Millipore, Billerica, MA)を使用して、サンプルを、18,000×gにおいて3〜5分間遠心分離することによって約100μLへと濃縮することによって、その緩衝剤を交換した。その濃縮したサンプルを、400μL DPBS中で希釈し、続いて遠心分離した。そのプロセスを合計で4回反復した。
プロテインAまたはHiTrap KappaSelectカラム(GE Healthcare, Little Chalfont, UK)を、10カラム容積(CV)の20mM リン酸ナトリウム、10mM EDTA、pH7.2で平衡化した。次いで、サンプルを載せ、続いて、結合していない物質を、10CVの平衡化緩衝剤で洗浄した。そのサンプルを、5CVの0.1M グリシン、pH2.9を使用して溶離した。mAbを含む画分をプールし、DPBS中、MWCO 20K Slide−A−Lyzer(ThermoFisher Scientific, Waltham, MA)を使用して透析した。
Z−Gln−GlyをBachemから購入し、Z−Gln−Gly−CAD−ビオチンをZEDIRAから購入した(図2)。
合成は、改変を加えたが、Pasternack(Pasternackら 1997)によって記載されるとおりであった(図3)。Z−Gln−Gly(328.8mg, 0.975mmol)およびペンタフルオロフェノール(Sigma, 183.3mg, 0.996mmol)を、10mL N,N’−ジメチルホルムアミド(DMF)中に溶解した。次いで、EDAC−HCl(Sigma, 201mg, 1.04mmol)を添加し、その反応物を、室温においてN2の下で2時間インキュベートした。100mLの冷ジエチルエーテルをその反応物に添加し、一晩、−80℃において沈殿させた。その粗製生成物を遠心分離によって集め、20mL 60℃ メタノールから再結晶化した。その最終生成物を、冷ジエチルエーテルですすぎ、N2の流れで乾燥させた。最終収量は、219.04mg(44.7%)であった。エレクトロスプレーイオン化−質量分析法(ESI−MS)(0.1% ギ酸中の50% アセトニトリルの中で直接注入) m/z 504.0 ([M+H], 86%), 526.0 ([M+Na], 100%), 542.0 ([M+K], 22%)。
Z−Gln−Gly−PFP(21.24mg, 4.22×10−5mol)およびアジドプロピルアミン(Click Chemistry Tools, DMF中の42.2μLの0.91M ストック溶液、3.84×10−5mol)を0.42mL 最終容積のDMF中に溶解した。反応物を、N2下で一晩、室温において撹拌した。生成物を、H2O中0.1% ギ酸/アセトニトリル中0.1% ギ酸の移動相を使用して、HPLCによって精製した。生成物を、真空中で乾燥させた。最終収量は、10.7mg(60.4%)であった。ESI−MS(勾配精製) m/z 420.2 ([M+H], 100%), 442.1 ([M+Na], 32%)。
Z−Gln−Gly−PFP(18.4mg, 3.66×10−5mol)およびN−[(1R,8S,9s)−ビシクロ[6.1.0]ノナ−4−イン−9−イルメチルオキシカルボニル]−1,8−ジアミノ−3,6−ジオキサオクタン(Sigma Aldrich)を、0.37mL最終容積のDMF中に溶解した。反応物を、N2下で一晩、室温において撹拌した。生成物を、H2O中0.1% ギ酸/アセトニトリル中0.1% ギ酸の移動相を使用するHPLCによって精製した。生成物を、真空中で乾燥させた。最終収量は、0.6mg(2%)であった。ESI−MS(勾配精製) m/z 688.2 ([M+H], 100%), 710.2 ([M+Na], 69%)。
Z−Gln−Gly−PFP(22.2mg, 4.37×10−5mol)を0.85mL DMF中に溶解し、1,2−エチレンジアミン(2.3×10−5L, 3.5×10−4mol)を添加し、混合した。反応物をN2下で一晩、室温において撹拌した。生成物を、H2O中0.1% ギ酸/アセトニトリル中0.1% ギ酸の移動相を使用するHPLCによって精製した。生成物を真空中で乾燥させた。Z−Gln−Gly−NH2の最終収量は、3.8mg(23%)であった。ESI−MS(勾配精製) m/z 380.1 ([M+H], 100%)。Z−Gln−Gly−NH2(3.8mg, 1.01×10−5mol)およびNHS−PEG2−AuF(10.3mg, 1.03×10−5mol)を、0.2mL DMF中に溶解した。トリエチルアミン(14μL, 1×10−4mol)を添加し、反応物をN2下で一晩、室温においてインキュベートした。その反応物の半分を、H2O中0.1% ギ酸/アセトニトリル中0.1% ギ酸の移動相を使用するHPLCによって精製した。生成物を真空中で乾燥させた。CBZ−Gln−Gly−PEG2−AuFの最終収量は、3.8mg(60%)であった。ESI−MS(勾配精製) m/z 634.0 ([M+H]2+,100%), 645.1([M+Na]2+,45%)。 1267.0 ([M+H], 16%)。
100μg/mL〜2.5mg/mLの濃度の範囲に及ぶMAbを、785μM Z−Gln−Gly−ビオチン(Zedira, Darmstadt, Germany)、Z−Gln−Gly−N3、Z−Gln−Gly−PEG2−BCN、またはZ−Gln−Gly−PEG2−AuFと、1U/mL 微生物のトランスグルタミナーゼ(Zedira, Darmstadt, Germany)とを、DPBS中で少なくとも16時間にわたって37℃において接触させた。
500ng/mL〜10μg/mLの濃度の範囲に及ぶMAbを、DPBS中の60μM Z−Gln−Gly−ビオチンおよび0.1U/mL mTGase(Zedira)とともに、少なくとも16時間、37℃においてインキュベートした。96ウェルプレートを、1μg/mL ヤギ抗ヒトIgG Fcγ mAb(Jackson ImmunoResesearch)で一晩、4℃においてコーティングした。そのプレートを洗浄した後、一晩のmTGase反応物を、50μL DPBS中で1:10希釈し、プレートに添加し、1時間、22℃においてインキュベートした。次いで、そのプレートを洗浄し、0.1μg/mLのストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)(Jackson ImmunoResesearch)を、そのウェルに添加した。そのプレートを再び洗浄し、ストレプトアビジン−HRP結合ビオチン化サンプルを、QuantaBlue基質(Thermo)を使用して製造業者のプロトコルに従って、相対蛍光単位(RFU)において定量した。
精製抗体を、DPBS中1mg/mLへと希釈した(1.0mg/mL未満であれば、サンプルを、元の濃度のままにしておいた)。ジメチルスルホキシド(DMSO)を含む反応物を、Zebaスピン脱塩カラムを使用して脱塩した。次いで、そのmAbを、PNGase F(NEB)を使用して脱グリコシル化するか、またはIdeS(Promega)によってFab’2およびFcフラグメントへと消化するかのいずれかであった。mAbを脱グリコシル化するために、G7緩衝剤(5または10μL)およびPNGase F(1または2μL)をそのmAb(50または100μL)に添加した。その反応物を、Discoverマイクロ波(CEM)で2サイクル、インキュベートした:1.)マイクロ波出力10W、37℃、10分間、およびその後、3〜5分間待機;2.)マイクロ波出力2W、37℃、10分間。その脱グリコシル化したサンプルのうちの一部を、ジチオスレイトール(DTT)を最終濃度20mMまで添加し、続いて、60℃において3分間インキュベートすることによって還元した。Fab’2およびFcフラグメントを生成するために、50U/μLのIdeSを0.5mg/mLのmAbへと添加し、37℃において0.5〜1時間インキュベートした。そのIdeSサンプルを、還元したかまたは還元しなかった。
サンプルを、逆相液体クロマトグラフィーを使用して分析した。1〜2mg/mLの濃度で100μLのADCを含むサンプルを20mM DTTで60℃において3分間還元した。そのサンプルを、SQDおよびPDA検出器を備えるWaters Alliance HPLCを使用して分析した。各サンプルを、Proteomix RP−1000カラム(5μ、4.6×150mm、Sepax)に65℃において注入した。LC変異体およびHC変異体に関しては、そのLCおよびHCの分離は、75%の移動相A(水中0.1% TFA)中での3.0分間の平衡化、および27分間の勾配(25−55% 移動相B[水中0.1% TFA])で、流速1mL/分で行った。
抗体内での露出したループおよびターンの中の天然のリジンの数を考慮すると、試験した任意の抗体の上に適切なアシルアクセプターが全く見出されないことは、予測外であった。これらの結果は、Mindtら, 2008(彼らは、抗体chCE7上の天然のリジン残基へ平均0.3分子の蛍光色素が結合体化したとして示した)によって報告されたものを含め、当該分野での以前の見解とは正反対である。Mindtはまた、低レベル(0.1分子/抗体)の、その同じ抗体chCE7へのアシルアクセプター基質のアミド基転移を真偽は別として報告した。しかし、多くの後の刊行物は、Mindtの知見を反復することはできなかった(Stropら, 2013; Jegerら, 2010;およびSiegmundら, 2015を参照のこと)。具体的には、Jegerは、「天然のchCE7またはRTXの改変は、基質のうちのいずれでも観察されなかった」と注記した(Jegerら, 2010を参照のこと)。従って、Mindtで開示された知見は、アッセイのバックグラウンド蛍光に起因するか、またはchCE7の可変領域に位置しているアシルアクセプターもしくはドナーに特異的であるかのいずれかの可能性があった。
略式の配列表
Claims (117)
- 結合体化免疫グロブリンを生成するための方法であって、該方法は、
免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、微生物のトランスグルタミナーゼおよびアシルドナー基質を含む機能的作用物質とを接触させるステップであって、
a)ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、
b)ここで該アシルドナー基質は、グルタミン残基を含み、そして
c)ここで該機能的作用物質は、治療剤または診断剤である、
ステップを包含し、
ここで該微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該操作されたリジン残基を、該機能的作用物質上の該アシルドナー基質の該グルタミン残基に結合体化し、それによって該結合体化免疫グロブリンを生成する、方法。 - 結合体化免疫グロブリンを生成するための方法であって、該方法は、
i)免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、微生物のトランスグルタミナーゼおよびアシルドナー基質とを接触させるステップであって、
a)ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、そして
b)ここで該アシルドナー基質は、グルタミン残基および反応性基を含み、ここで該微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該操作されたリジン残基を、該アシルドナー基質の該グルタミン残基に結合体化する、
ステップ、ならびに
ii)機能的作用物質を該アシルドナー基質の該反応性基に結合体化するステップであって、ここで該機能的作用物質は、治療剤または診断剤であり、それによって該結合体化免疫グロブリンを生成する、ステップ、
を包含する方法。 - 前記アシルドナー基質の前記反応性基は、クリックケミストリーによって前記機能的作用物質に結合体化される、請求項2に記載の方法。
- リジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、以下:
前記免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分の重鎖上のスレオニン135(T135K)、セリン136(S136K)、ロイシン193(L193K)、アスパラギン酸221(D221K)、スレオニン223(T223K)、ヒスチジン224(H224K)、スレオニン225(T225K)、メチオニン252(M252K)、アスパラギン297(N297K)、もしくはプロリン445(P445K)、
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のκ軽鎖上のロイシン201(L201K)もしくはセリン202(S202K)、または
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のλ軽鎖上のグルタミン酸213(E213K)、
からなる群より選択される、請求項1または請求項2に記載の方法。 - 前記重鎖は、そのC末端に448位において付加されたアミノ酸残基をさらに含み、ここで該アミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、請求項4に記載の方法。
- 前記C末端に448位において付加された前記アミノ酸残基は、ロイシンである、請求項5に記載の方法。
- 前記リジン残基挿入は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン191とセリン192との間、またはセリン192とロイシン193との間に挿入されたリジン残基である、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、抗原結合性フラグメント(Fab)であり、ここで、リジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン酸221(D221K)、スレオニン223(T223K)、ヒスチジン224(H224K)、スレオニン225(T225K)、プロリン228(P228K)、プロリン230(P230K)、およびグルタミン酸233(E233K)からなる群より選択される、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記Fabは、ヒンジ領域全体を含む、請求項8に記載の方法。
- 前記Fabは、短縮型ヒンジ領域を含む、請求項8に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第2の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第2の操作されたリジン残基は、第2のリジン残基挿入または第2のリジン残基に変異された第2の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで前記微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該第2の操作されたリジン残基を、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化する、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン136(S136K)であり、前記第2の操作されたリジン残基に変異された前記第2の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン202(S202K)である、請求項11に記載の方法。
- 前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のスレオニン135(T135K)であり、そして前記第2の操作されたリジン残基に変異された前記第2の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のロイシン201(L201K)である、請求項11に記載の方法。
- 前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のスレオニン135(T135K)であり、前記第2の操作されたリジン残基に変異された前記第2の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン202(S202K)である、請求項11に記載の方法。
- 前記重鎖は、そのC末端に448位において付加されたアミノ酸残基をさらに含み、ここで該アミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、請求項13または請求項14に記載の方法。
- 前記C末端に448位において付加された前記アミノ酸残基は、ロイシンである、請求項15に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第3の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第3の操作されたリジン残基は、第3のリジン残基挿入または第3のリジン残基に変異された第3の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで前記微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該第3の操作されたリジン残基を、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化する、請求項11に記載の方法。
- 前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン136(S136K)であり、前記第2の操作されたリジン残基に変異された前記第2の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン297(N297K)であり、そして前記第3の操作されたリジン残基に変異された前記第3の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン202(S202K)である、請求項17に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第4の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第4の操作されたリジン残基は、第4のリジン残基挿入またはリジン残基に変異された第4の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで前記微生物のトランスグルタミナーゼは、該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該第4の操作されたリジン残基を、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化する、請求項17に記載の方法。
- 前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン136(S136K)であり、前記第2の操作されたリジン残基に変異された前記第2の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン297(N297K)であり、前記第3の操作されたリジン残基に変異された前記第3の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン202(S202K)であり、前記第4の操作されたリジン残基に変異された前記第4の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のプロリン445(P445K)である、請求項19に記載の方法。
- 前記操作されたリジン残基の後ろにあるアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記操作されたリジン残基の前にあるアミノ酸残基は、酸性アミノ酸残基ではない、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記操作されたリジン残基の前にあるアミノ酸残基は、
非酸性アミノ酸残基挿入、または
非酸性アミノ酸残基に変異された天然酸性アミノ酸残基
である、請求項1または請求項2に記載の方法。 - 前記操作されたリジン残基の後ろにあるアミノ酸残基は、
アミノ酸残基挿入であって、ここで該アミノ酸残基挿入は、非酸性アミノ酸残基挿入および非プロリン残基挿入であるアミノ酸残基挿入、または
非酸性アミノ酸残基および非プロリン残基挿入に変異された、天然酸性アミノ酸残基または天然プロリン残基
である、請求項1または請求項2に記載の方法。 - 前記非酸性アミノ酸残基は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンである、請求項23に記載の方法。
- 前記非酸性アミノ酸残基挿入は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファン挿入である、請求項23または請求項24に記載の方法。
- 前記非酸性アミノ酸および非プロリン残基は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンである、請求項24に記載の方法。
- 前記天然酸性アミノ酸残基は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である、請求項23または請求項24に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、そのC末端に448位において付加された少なくとも1個のアミノ酸残基をさらに含む重鎖を含み、ここで該少なくとも1個のアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、請求項1または2のいずれか1項に記載の方法。
- 前記C末端に448位において付加された前記少なくとも1個のアミノ酸残基は、ロイシンである、請求項29に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、システイン214の後ろに1〜4個のさらなるアミノ酸の挿入を含む軽鎖を含み、ここで、前記リジン残基挿入は、該1〜4個のさらなるアミノ酸の後ろに挿入されたリジン残基であり、ここで、ロイシン残基は、該リジン残基の後ろに挿入されている、請求項1または請求項2のいずれか1項に記載の方法。
- システイン214の後ろの1〜4個のさらなるアミノ酸の前記挿入、該1〜4個のさらなるアミノ酸の後ろに挿入されている前記リジン残基、および該リジン残基の後ろに挿入されている前記ロイシン残基は、GKL、GGKL、GGSKL、およびGGSGKLからなる群より選択される配列を含む、請求項31に記載の方法。
- 前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、1つの式(I)または(II):
(Z)m−Gln−(L)n−(Y) (I)
(Y)−(L)n−Gln−(Z)m (II)
に従い、ここで
Zは、カルボキシルベンジルオキシ(CBZ)基またはアミノ酸残基であり;
Glnは、グルタミンアミノ酸残基であり;
各Lは、独立して、1〜20個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの1個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そしてここで各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されてもよいか;または各Lは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり;
mは、0〜5の整数であり;
nは、0〜5の整数であり;そして
Yは、機能的作用物質である、
請求項1に記載の方法。 - 前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式(I)に従い、ここでZは、CBZ基であり;各Lは、独立して、ポリエチレングリコール部分(PEG)(−O((CH2)2)−)、エチルアミン(−NH((CH2)2)−)またはプロピルアミン(−NH((CH2)3)−)であり;nは、0、1、2、3、4または5である、請求項33に記載の方法。
- 前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式(I)に従い、ここでZは、CBZ基であり、Lは、アミノ酸である、請求項33に記載の方法。
- Lは、Glyであり;mは、1であり;そしてnは、0である、請求項35に記載の方法。
- Lは、Glyであり;mは、1であり;そしてnは、1である、請求項35に記載の方法。
- 前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式(II)に従い、ここでZは、CBZ基であり;mは、1であり;nは、1、2または3であり;そして少なくとも1個のLは、Glyである、請求項33に記載の方法。
- 前記機能的作用物質Yは、オーリスタチンFである、請求項33に記載の方法。
- 前記アシルドナー基質は、1つの式(III)または式(IV):
(Z)m−Gln−(L)n−(X) (III)
(X)−(L)n−Gln−(Z)m (IV)
に従い、ここで
Zは、カルボキシルベンジルオキシ(CBZ)基またはアミノ酸残基であり;
Glnは、グルタミンアミノ酸残基であり;
各Lは、独立して、1〜20個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの1個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そして各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されていてもよいか;または各Lは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり;
mは、0〜5の整数であり;
nは、0〜5の整数であり;そして
Xは、反応性基である、
請求項2に記載の方法。 - 前記アシルドナー基質は、式(III)に従い、ここでZは、CBZ基であり;ここで各Lは、独立して、ポリエチレングリコール部分(PEG)(−O((CH2)2)−)、エチルアミン(−NH((CH2)2)−)またはプロピルアミン(−NH((CH2)3)−)であり;そしてnは、0、1、2、3、4、または5である、請求項40に記載の方法。
- 前記アシルドナー基質は、式(III)に従い、ここでZは、CBZ基であり、1個またはこれより多くのLは、アミノ酸である、請求項40に記載の方法。
- Lは、Glyであり;mは、1であり;そしてnは、1である、請求項42に記載の方法。
- mは、1であり;そしてnは、0である、請求項42に記載の方法。
- 前記アシルドナー基質は、式(IV)に従い、ここでZは、CBZ基であり;mは、1であり;nは、1、2または3であり;そして少なくとも1個のLは、Glyである、請求項40に記載の方法。
- Xは、(1R,8S,9s)−ビシクロ[6.1.0]ノナ−4−イン−9−イルメタノール(BCN)、
- 前記治療剤は、抗体またはその抗原結合部分、化学療法剤、薬物剤、放射性薬剤、細胞傷害性薬剤、抗生物質、低分子、核酸、またはポリペプチドである、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記診断剤は、発蛍光団、蛍光色素、放射性核種、または酵素である、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記微生物のトランスグルタミナーゼは、Streptomyces mobaraensis微生物のトランスグルタミナーゼである、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、IgG1免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、IgG2、IgG3、もしくはIgG4免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、IgA1、IgA2、もしくはIgM免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、IgDもしくはIgE免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、抗原結合性フラグメント(Fab)である、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ヒト免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分、またはヒト化免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分である、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、キメラ免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分、または非ヒト免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分である、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、2本の重鎖および2本の軽鎖を含む、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- 前記機能的作用物質 対 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の比は、1:1〜100:1または1:1〜200:1である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
- 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、機能的作用物質とを含む結合体化免疫グロブリンであって、
a)ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、
b)該機能的作用物質はアシルドナー基質を含み、ここで該アシルドナー基質は、グルタミン残基を含み、そして
c)該機能的作用物質は、治療剤または診断剤であり、
ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の該操作されたリジン残基は、該機能的作用物質の該アシルドナー基質の該グルタミン残基に結合体化されている、結合体化免疫グロブリン。 - 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分と、機能的作用物質とを含む結合体化免疫グロブリンであって、
a)ここで該免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、操作されたリジン残基を含み、ここで該操作されたリジン残基は、リジン残基挿入またはリジン残基に変異された天然アミノ酸残基であり、そして
b)該操作されたリジン残基はアシルドナー基質上のグルタミン残基に結合体化されており、ここで該アシルドナー基質は、さらに反応性基を含み、
c)該反応性基は機能的作用物質に結合体化されており、ここで該機能的作用物質は、治療剤または診断剤である、
結合体化免疫グロブリン。 - リジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、以下:
前記免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分の重鎖上のスレオニン135(T135K)、セリン136(S136K)、ロイシン193(L193K)、アスパラギン酸221(D221K)、スレオニン223(T223K)、ヒスチジン224(H224K)、スレオニン225(T225K)、メチオニン252(M252K)、アスパラギン297(N297K)、もしくはプロリン445(P445K)、
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のκ軽鎖上のロイシン201(L201K)もしくはセリン202(S202K)、または
該免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分のλ軽鎖上のグルタミン酸213(E213K)、
からなる群より選択される、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。 - 前記重鎖は、そのC末端に448位において付加されたアミノ酸残基をさらに含み、ここで該アミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、請求項61に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記C末端に448位において付加された少なくとも1つのアミノ酸残基は、ロイシンである、請求項62に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記リジン残基挿入は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン191とセリン192との間、またはセリン192とロイシン193との間に挿入されたリジン残基である、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、抗原結合性フラグメント(Fab)であり、ここで、リジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン酸221(D221K)、スレオニン223(T223K)、ヒスチジン224(H224K)、スレオニン225(T225K)、プロリン228(P228K)、プロリン230(P230K)、およびグルタミン酸233(E233K)からなる群より選択される、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記Fabは、ヒンジ領域全体を含む、請求項65に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記Fabは、短縮型ヒンジ領域を含む、請求項65に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第2の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第2の操作されたリジン残基は、第2のリジン残基挿入またはリジン残基に変異された第2の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで該第2の操作されたリジン残基は、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化されている、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン136(S136K)であり、前記第2の操作されたリジン残基に変異された前記第2の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン202(S202K)である、請求項68に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のスレオニン135(T135K)であり、そして前記第2の操作されたリジン残基に変異された前記第2の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のロイシン201(L201K)である、請求項68に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のスレオニン135(T135K)であり、前記第2の操作されたリジン残基に変異された前記第2の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン202(S202K)である、請求項68に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記重鎖は、そのC末端に448位において付加された少なくとも1つのアミノ酸残基をさらに含み、ここで該救案くとも1つのアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、請求項70または請求項71に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記C末端に448位において付加された前記少なくとも1つのアミノ酸残基は、ロイシンである、請求項72に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第3の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第3の操作されたリジン残基は、第3のリジン残基挿入またはリジン残基に変異された第3の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで該第3の操作されたリジン残基は、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化されている、請求項69に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン136(S136K)であり、前記第2の操作されたリジン残基に変異された前記第2の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン297(N297K)であり、そして前記第3の操作されたリジン残基に変異された前記第3の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン202(S202K)である、請求項74に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、第4の操作されたリジン残基をさらに含み、ここで該第4の操作されたリジン残基は、第4のリジン残基挿入またはリジン残基に変異された第4の天然アミノ酸残基であり、そして、ここで該第4の操作されたリジン残基は、前記アシルドナー基質の前記グルタミン残基に結合体化されている、請求項74に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記操作されたリジン残基に変異された前記天然アミノ酸残基は、前記免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のセリン136(S136K)であり、前記第2の操作されたリジン残基に変異された前記第2の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のアスパラギン297(N297K)であり、前記第3の操作されたリジン残基に変異された前記第3の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンのκ軽鎖またはその抗原結合部分上のセリン202(S202K)であり、前記第4の操作されたリジン残基に変異された前記第4の天然アミノ酸残基は、該免疫グロブリンの重鎖またはその抗原結合部分上のプロリン445(P445K)である、請求項76に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記操作されたリジン残基の後ろにあるアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記操作されたリジン残基の前にあるアミノ酸残基は、酸性アミノ酸残基ではない、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記操作されたリジン残基の前にあるアミノ酸残基は、
非酸性アミノ酸残基挿入、または
非酸性アミノ酸残基に変異された天然酸性アミノ酸残基
である、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。 - 前記操作されたリジン残基の後ろにあるアミノ酸残基は、
アミノ酸残基挿入であって、ここで該アミノ酸残基挿入は、非酸性アミノ酸残基挿入および非プロリン残基挿入であるアミノ酸残基挿入、または
非酸性アミノ酸残基および非プロリン残基挿入に変異された、天然酸性アミノ酸残基または天然プロリン残基
である、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。 - 前記非酸性アミノ酸残基は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンである、請求項80に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記非酸性アミノ酸残基挿入は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファン挿入である、請求項80に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記非酸性アミノ酸および非プロリン残基は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンである、請求項81に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記天然酸性アミノ酸残基は、アスパラギン酸またはグルタミン酸である、請求項80または請求項81に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、そのC末端に448位において付加された少なくとも1個のアミノ酸残基をさらに含む重鎖を含み、ここで該少なくとも1個のアミノ酸残基は、プロリン残基または酸性アミノ酸残基でない、請求項59または60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記C末端に448位において付加された前記少なくとも1個のアミノ酸残基は、ロイシンである、請求項86に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、システイン214の後ろに1〜4個のさらなるアミノ酸の挿入を含む軽鎖を含み、ここで、前記リジン残基挿入は、該1〜4個のさらなるアミノ酸の後ろに挿入されたリジン残基であり、ここで、ロイシン残基は、該リジン残基の後ろに挿入されている、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- システイン214の後ろの1〜4個のさらなるアミノ酸の前記挿入、該1〜4個のさらなるアミノ酸の後ろに挿入されている前記リジン残基、および該リジン残基の後ろに挿入されている前記ロイシン残基は、GKL、GGKL、GGSKL、およびGGSGKLからなる群より選択される配列を含む、請求項88に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、1つの式(I)または(II):
(Z)m−Gln−(L)n−(Y) (I)
(Y)−(L)n−Gln−(Z)m (II)
に従い、ここで
Zは、カルボキシルベンジルオキシ(CBZ)基またはアミノ酸残基であり;
Glnは、グルタミンアミノ酸残基であり;
各Lは、独立して、1〜20個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの1個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そしてここで各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されてもよいか;または各Lは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり;
mは、0〜5の整数であり;
nは、0〜5の整数であり;そして
Yは、機能的作用物質である、
請求項59に記載の結合体化免疫グロブリン。 - 前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式(I)に従い、ここでZは、CBZ基であり;各Lは、独立して、ポリエチレングリコール部分(PEG)(−O((CH2)2)−)、エチルアミン(−NH((CH2)2)−)またはプロピルアミン(−NH((CH2)3)−)であり;nは、0、1、2、3、4または5である、請求項90に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式(I)に従い、ここでZは、CBZ基であり、Lは、アミノ酸である、請求項90に記載の結合体化免疫グロブリン。
- Lは、Glyであり;mは、1であり;そしてnは、0である、請求項92に記載の結合体化免疫グロブリン。
- Lは、Glyであり;mは、1であり;そしてnは、1である、請求項92に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記アシルドナー基質を含む前記機能的作用物質は、式(II)に従い、ここでZは、CBZ基であり;mは、1であり;nは、1、2または3であり;そして少なくとも1個のLは、Glyである、請求項90に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記機能的作用物質Yは、オーリスタチンFである、請求項90に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記アシルドナー基質は、1つの式(III)または式(IV):
(Z)m−Gln−(L)n−(X) (III)
(X)−(L)n−Gln−(Z)m (IV)
に従い、ここで
Zは、カルボキシルベンジルオキシ(CBZ)基またはアミノ酸残基であり;
Glnは、グルタミンアミノ酸残基であり;
各Lは、独立して、1〜20個の炭素原子の直鎖状または分枝状のリンカーであり、ここで該炭素原子のうちの1個またはこれより多くは、必要に応じてかつ独立して、窒素、酸素または硫黄原子で置き換えられてもよく、そして各炭素および窒素原子は、必要に応じて置換されていてもよいか;または各Lは、必要に応じてかつ独立して、アミノ酸残基であり;
mは、0〜5の整数であり;
nは、0〜5の整数であり;そして
Xは、反応性基である、
請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。 - 前記アシルドナー基質は、式(III)に従い、ここでZは、CBZ基であり;ここで各Lは、独立して、ポリエチレングリコール部分(PEG)(−O((CH2)2)−)、エチルアミン(−NH((CH2)2)−)またはプロピルアミン(−NH((CH2)3)−)であり;そしてnは、0、1、2、3、4、または5である、請求項97に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記アシルドナー基質は、式(III)に従い、ここでZは、CBZ基であり、1個またはこれより多くのLは、アミノ酸である、請求項97に記載の結合体化免疫グロブリン。
- Lは、Glyであり;mは、1であり;そしてnは、1である、請求項99に記載の結合体化免疫グロブリン。
- mは、1であり;そしてnは、0である、請求項99に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記アシルドナー基質は、式(IV)に従い、ここでZは、CBZ基であり;mは、1であり;nは、1、2または3であり;そして少なくとも1個のLは、Glyである、請求項97に記載の結合体化免疫グロブリン。
- Xは、(1R,8S,9s)−ビシクロ[6.1.0]ノナ−4−イン−9−イルメタノール(BCN)、
- 前記治療剤は、抗体またはその抗原結合部分、化学療法剤、薬物剤、放射性薬剤、細胞傷害性薬剤、抗生物質、低分子、核酸、またはポリペプチドである、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記診断剤は、発蛍光団、蛍光色素、放射性核種、または酵素である、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、IgG1免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、IgG2、IgG3、もしくはIgG4免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、IgA1、IgA2、もしくはIgM免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、IgDもしくはIgE免疫グロブリンまたはその抗原結合部分である、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、抗原結合性フラグメント(Fab)である、請求項59または請求項60に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、ヒト免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分、またはヒト化免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分である、請求項59〜110のいずれか1項に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、キメラ免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分、または非ヒト免疫グロブリンもしくはその抗原結合部分である、請求項59〜110のいずれか1項に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分は、2本の重鎖および2本の軽鎖を含む、請求項59〜110のいずれか1項に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記機能的作用物質 対 免疫グロブリンまたはその抗原結合部分の比は、1:1〜100:1または1:1〜200:1である、請求項59〜110のいずれかに記載の結合体化免疫グロブリン。
- 前記機能的作用物質は、抗体またはその抗原結合部分であり、そしてここで前記免疫グロブリンまたはその抗原結合部分、および該機能的作用物質は、同じ抗原に結合するか、または異なる抗原に結合する、請求項58または請求項59に記載の結合体化免疫グロブリン。
- 請求項59〜115のいずれか1項に記載の結合体化免疫グロブリン、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、医薬組成物。
- 請求項1〜58のいずれか1項に記載の方法によって生成される、結合体化免疫グロブリン。
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Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Non-Patent Citations (1)
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BIOCONJUGATE CHEM., vol. 19, JPN6021028415, 2008, pages 271 - 278, ISSN: 0004554297 * |
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